JP2026073751A - 細胞回収方法及び細胞回収治具 - Google Patents

Abstract

【課題】細胞培養バッグから細胞を容易に回収することができる細胞回収方法及び細胞回収治具を提供する。
【解決手段】可撓性の容器本体と内容物の注入排出のための少なくとも１つのポートとを有する細胞培養バッグから、培養された細胞を回収する細胞回収方法及び細胞回収治具であって、ポートを鉛直方向の下方側に位置させて容器本体から内容物を排出するにあたり、内容物が収容された容器本体を、ポートのうち内容物の排出のためのポートが存在する第一室と、内容物の排出のためのポートが存在しない第二室とに、それぞれに内容物が配分された状態で仕切り、第一室に配分された内容物を内容物の排出のためのポートから排出した後に、第一室と第二室との仕切りを解除し、第二室に配分された内容物を第一室に移し替えて内容物の排出のためのポートから排出する。
【選択図】 図２

Description

本発明は、細胞回収方法及び細胞回収治具に関する。

近年、医薬品の生産や、遺伝子治療、再生医療、免疫療法などの分野において、細胞（組織、微生物、ウイルスなどを含む）を人工的な環境下で効率良く大量に培養・分化誘導することが求められている。そのような細胞培養においては、コンタミネーションのリスクを回避するため、細胞培養バッグが使用されることがある。細胞培養バッグは無菌的に閉鎖系であり、内容物が汚染された外気に晒される虞がない状態で培養を行うことができる。

例えば、特許文献１には、２枚の多層シートを重ね合わせ周縁をシールした袋状の培養容器が開示されている。

特開２００９－０２７９４４号公報

細胞培養バッグから細胞を回収するには、細胞培養バッグを傾けるなどして、細胞培養バッグに設けられたポートから重力により内容物を排出することが考えられる。しかしながら、ポートが鉛直方向の下方側に位置するように細胞培養バッグを傾けただけでは、細胞が細胞培養バッグ内に取り残されてしまうことがある。特に、多くの細胞培養バッグでは、内容物の排出に伴うバッグ内への空気の流入は遮断しており、そのために内容物の排出はし難くなる。細胞培養バッグ内に細胞が残存しないように排出するためには、内容物を排出する前や排出中に、細胞培養バッグ内に空気を注入して内容物が排出されやすい状態にすることが考えられる。また、残存した細胞を回収するために、培地等による洗い込みを行うことが考えられる。しかしながら、細胞培養の過程においてこのような作業を行うのは手間がかかるため好ましくない。細胞は、コンタミネーションを避けるために無菌的に取り扱われる必要があり、処理に用いる器具、細胞培養バッグ内に注入する培地や空気は無菌状態とすること、処理を行うにあたり細胞培養バッグをクリーンベンチ等の無菌下において作業をすることが必要になるためである。

本発明は、細胞培養バッグを用いて細胞培養を行う際に、細胞培養バッグから細胞を容易に回収することができる細胞回収方法及び細胞回収治具を提供することを目的としている。

本発明の一形態は、可撓性の容器本体と内容物の注入排出のための少なくとも1つのポートとを有する細胞培養バッグから、培養された細胞を回収する細胞回収方法であって、前記ポートを鉛直方向下方側に位置させて前記容器本体から内容物を排出するにあたり、内容物が収容された前記容器本体を、前記ポートのうち内容物の排出のためのポートが存在する第一室と前記内容物の排出のためのポートが存在しない第二室とに、それぞれに内容物が配分された状態で仕切り、前記第一室に配分された内容物を前記内容物の排出のためのポートから排出した後に、前記第一室と前記第二室との仕切りを解除し、前記第二室に配分された内容物を前記第一室に移し替えて前記内容物の排出のためのポートから排出する細胞回収方法である。

また、本発明の一形態は、可撓性の容器本体と内容物の注入排出のための少なくとも1つのポートとを有する細胞培養バッグから、培養された細胞を回収する細胞回収治具であって、前記容器本体に外側から当接して前記容器本体の内面同士を密接させて、前記容器本体を前記ポートのうち内容物の排出のためのポートが存在する第一室と前記内容物の排出のためのポートが存在しない第二室とに仕切る仕切り部材とを備えた細胞回収治具である。

本発明によれば、細胞培養バッグを用いて細胞培養を行う際に、細胞培養バッグから細胞を容易に回収することができる細胞回収方法及び細胞回収治具を提供することができる。

本発明の実施形態で使用する細胞培養バッグの一例の概略を示す説明図であり、（ａ）は平面図、（ｂ）は（ａ）のＡ－Ａ´線拡大図、（ｃ）は（ｂ）のＢ－Ｂ´線拡大断面図である。 本発明の実施形態の一例に係る細胞回収方法の概略を示す説明図である。 本発明の実施形態の別の一例に係る細胞回収方法の概略を示す説明図である。 本発明の実施形態の一例に係る細胞回収治具の概略を示す説明図である。 本発明の実施形態の一例に係る細胞回収治具の使用方法の概略を示す説明図である。 本発明の実施形態の別の一例に係る細胞回収治具の概略を示す説明図である。 本発明の実施形態の別の一例に係る細胞回収治具の使用方法の概略を示す説明図である。 本発明の実施形態で使用する細胞培養バッグの別の一例の概略を示す説明図である。

以下、本発明の好ましい実施形態について、図面を参照しつつ説明する。

［細胞培養バッグ］
まず、本実施形態に係る細胞回収方法及び細胞回収治具の説明に先立ち、図１を参照して、本実施形態で使用する細胞培養バッグ１０の一例について簡単に説明する。図１（ａ）は細胞培養バッグ１０の平面図であり、（ｂ）は（ａ）のＡ－Ａ´線拡大図であり、（ｃ）は（ｂ）のＢ－Ｂ´線拡大断面図であってその断面を模式的に示した説明図である。なお、図１（ｃ）の断面にあらわれる容器本体１１の肉厚は、誇張して描写されている。

本実施形態で使用する細胞培養バッグ１０は、可撓性の容器本体１１と、この容器本体１１に取り付けられた、内容物の注入排出のための少なくとも１つのポート１２とを備えている。図示する例では、細胞培養バッグ１０の容器本体１１の平面形状は、略長方形の形状である。容器本体１１の大きさは特に限定されないが、例えば、縦５０～５００ｍｍ、横５０～５００ｍｍとすることができる。図示する例では、容器本体１１の平面形状の角部の一つにポート１２が取り付けられている。

容器本体１１は、プラスチックフィルムを重ね合わせて周辺部をヒートシールして形成することができ、上面１１ａ及び下面１１ｂを含む。

下面１１ｂには、各々が細胞培養部となる複数の凹部１１ｃが形成されている。容器本体の底面に複数の凹部１１ｃを設けることにより、細胞培養バッグ１０内での細胞の移動を抑制し、細胞凝集塊（細胞凝集体、スフェロイドとも称される）を形成させることができる。細胞培養バッグ１０では、凹部１１ｃの底部に細胞が集まり易くするため、図１（ｃ）に示すように、凹部１１ｃは球冠状の形状を有している。
凹部１１ｃは、容器本体１１内における細胞の移動を抑止して、培養中の細胞が一つの凹部１１ｃに留まるようにするために、開口径（直径）Ｄが０．３～１０ｍｍ、深さｄが０．１ｍｍ以上であるのが好ましい。

上面１１ａは、図１（ｃ）に示すように、複数の凹部１１ｃ全体の上方を覆う実質的に平坦な天面部分１１ｄと、天面部分１１ｄの周囲に形成された側壁部分１１ｅとから構成された台地状に膨出した膨出形状を有する。これにより、二枚のプラスチックフィルムを重ねて周辺部をシールしただけの平パウチ状の容器と比較して、例えば下面１１ｂが接地面に接するように載置された状態で容器本体１１を培地で満たしたときに、下面１１ｂの周辺部が持ち上がる変形が抑制される。

容器本体１１は、ガス透過性を有するプラスチックフィルムで形成されることが好ましい。プラスチックフィルムのガス透過性は、ＪＩＳ Ｋ ７１２６のガス透過度試験方法に準拠して、試験温度３７℃で測定した酸素の透過度が、５０００ｍＬ／（ｍ^２・ｄａｙ・ａｔｍ）以上であるのが好ましい。
容器本体１１を形成するプラスチックフィルムに用いる材料としては、例えば、ポリエチレン、ポリプロピレン、エチレン－酢酸ビニル共重合体、ポリエステル、シリコーン系エラストマー、ポリスチレン系エラストマー、テトラフルオロエチレン－ヘキサフルオロプロピレン共重合体（ＦＥＰ）などの熱可塑性樹脂が挙げられる。これらは単層で用いても、同種又は異種の材料を積層して用いてもよいが、周辺部をヒートシールする際の熱融着性を考慮すると、シーラント層として機能する層を有しているのが好ましい。

ポート１２は、培地や細胞などが流通可能な管状の部材からなり、チューブ１３を連結することができる。ポート１２は、例えば、ポリエチレン、ポリプロピレン、塩化ビニル、ポリスチレン系エラストマー、ＦＥＰなどの熱可塑性樹脂で成形することができる。

［細胞回収方法］
本発明の細胞回収方法に関し、好ましい実施形態を説明する。以下に説明する実施形態の細胞回収方法は、細胞培養バッグ１０の容器本体１１内に収容されている内容物を、重力によりポート１２から排出させることによって、培養された細胞Ｃを回収するための方法である。なお、本発明において「細胞」とは、シングルセルのみを指すのではなく、細胞凝集塊を含むものとする。

重力により細胞培養バッグ１０から内容を排出させることができれば、ポンプ等を備えた大掛かりな装置を設置・操作する必要がないため、好ましい。
しかしながら、ポート１２が容器本体１１に対して鉛直方向の下方側に位置するように、例えば細胞培養バッグ１０を懸架するなどして、重力により容器本体１１内の内容物を排出しようとすると、容器本体１１内への空気の流入が遮断されている状態では、内容物が排出されきる前に、容器本体１１を形成するフィルムの内面同士が接触することにより容器本体１１の一部が閉塞して、内容物が容器本体１１内に残存してしまう虞がある。また、このようにして重力により容器本体１１内の内容物を排出しようとすると、沈降する細胞がフィルムの内壁に堆積してしまったり、内容物中に濃度分布が生じることから細胞よりも培地などの液体が先に細胞培養バッグ１０外へ排出されてしまうことがある。この場合、培地中の細胞の濃度は排出の終盤になるほど高まり、最終的に容器本体１１に残存する内容物の容量が少量であっても、大量の細胞が容器本体１１外へ排出されない虞がある。また、培地などの液体が先に細胞培養バッグ１０外へ排出されてしまうことに伴って、容器本体１１内面やポート１２周辺の凹凸形状に細胞がひっかかるなどして、細胞がうまく排出されずに細胞培養バッグ１０内部に取り残されてしまう虞がある。また、同様に、内容物の排出のためのポート１２に連結されたチューブ１３内にも、細胞が残存してしまう虞がある。

このような問題を解決するために、ポート１２から内容物の排出を行う前に容器本体１１内へ空気を注入して、内容物の排出に伴って容器本体１１の内面同士が接触することを回避することや、残存した内容物を洗い込みによって回収するように、再度容器本体１１内へ培地を注入することが考えられる。しかしながら、細胞は無菌的に取り扱われる必要がある。このような作業を行うには、細胞培養バッグ１０を、インキュベータ等に載置して培養した後に、内容物の排出に際して改めてクリーンベンチ等の無菌空間に移動させて作業を行うことや、作業に用いる器具、培地や空気を無菌状態とすることが必要になり、手間がかかるため好ましくない。

そこで、本実施形態の細胞回収方法では、ポートのうち内容物の排出のためのポート１２を容器本体１１に対して鉛直方向の下方側に位置させて、重力により容器本体１１から内容物を排出するにあたり、培地や細胞等の内容物が収容された可撓性の容器本体１１を、内容物の排出のためのポート１２が存在する第一室１５と内容物の排出のためのポート１２が存在しない第二室１６とに、それぞれに内容物が配分された状態で仕切り、第一室１５に配分された内容物を内容物の排出のためのポート１２から排出し、第一室１５に配分された内容物が概ね排出された後に、第一室１５と第二室１６との仕切りを解除し、第二室１６に配分された内容物を第一室１５に移し替えて内容物の排出のためのポート１２から排出するようにしている。
これにより、二段階で細胞培養バッグ１０内部に収容された内容物を排出させて、第一室１５の内容物の排出にあたり残存した細胞を、第二室１６の内容物の排出とともに洗い流すことができる。そのため、本実施形態によれば、内容物の排出にあたり空気や培地を容器本体１１内に注入するなどの工程を経ることなく、簡単な作業で、コンタミネーションのリスクを低減させつつ、細胞培養バッグ内における細胞の残存を減少させて、細胞を回収することが可能となる。

１．細胞回収方法の第一実施形態
以下に、図２を参照して本発明の第一実施形態に係る好ましい細胞回収方法について詳しく説明する。図２は、本実施形態の好ましい一例に係る細胞回収方法の概略を示す説明図である。
なお、図２は、細胞培養バッグ１０のポート１２の対角側の一端を保持するように懸架して、ポート１２を鉛直方向において細胞培養バッグ１０の最下方に位置させた状態をあらわしている。
以降では、図１に示す細胞培養バッグ１０を用いた場合を想定して説明を行う。以降の説明において、ポート１２は、内容物の注入及び排出を行うためのポートである。

本実施形態の細胞回収方法では、容器本体１１内の内容物を排出するに際して、先ず、例えばポート１２やポート１２に接続されたチューブ１３をクリップ１４で挟持するなどして、内容物が容器本体１１から排出されないようにした状態で、細胞培養バッグ１０に設けられたポート１２が容器本体１１に対して鉛直方向の下方側に位置するように細胞培養バッグ１０を傾斜させて、所定時間保持するのが好ましい（図２（ａ））。
これにより、容器本体１１内に収容されている細胞Ｃの多くを鉛直方向の下方側に沈降させることができる。

内容物の排出のためのポート１２を容器本体１１に対して鉛直方向の下方側に位置させた状態とするのは、図示するような細胞培養バッグ１０を懸架した態様に限定されるわけではない。例えば、細胞培養バッグ１０の容器本体１１の上面１１ａ又は下面１１ｂが下になるように水平の接地面に載置した状態から、細胞培養バッグ１０のポート１２の対角側の一端を持ち上げるなどして、容器本体１１を、接地面に対して傾斜角が３０°～８０°となるように傾斜させて、ポート１２が容器本体１１に対して鉛直方向の下方側に位置するようにしてもよい。

容器本体１１を第一室１５と第二室１６とに仕切る前に、内容物の排出のためのポート１２を容器本体１１に対して鉛直方向の下方側に位置させた状態で容器本体１１を保持する時間は、容器本体１１内に収容されている細胞を鉛直方向の下方側に沈降させることができれば、細胞の種類やサイズに応じて適宜設定することができる。例えば、細胞凝集塊は、細胞（シングルセル）と比較して、早く沈降する傾向にあり、例えば５分程度保持することで、容器本体１１内の鉛直方向の上方側の細胞凝集塊は概ね容器本体１１内の鉛直方向の下方側に沈降する。

次いで、内容物が収容された可撓性の容器本体１１を、ポート１２が存在する第一室１５とポートが存在しない第二室１６とに仕切る（図２（ｂ））。本実施形態では、容器本体１１を第一室１５と第二室１６とに仕切る際に、第一室１５及び第二室１６のそれぞれに内容物が配分された状態となるようにする。
これにより、容器本体１１の鉛直方向の上方側に位置する第二室１６において、その内部に配分された内容物には、細胞Ｃが殆ど存在しない状態とすることができる。

容器本体１１を仕切るには、仕切り部材４を容器本体１１に外側から当接させて、容器本体１１を形成するフィルムの内面同士を密接させることにより、第一室１５と第二室１６とが流体接続しない状態とすればよい。また、第一室１５及び第二室１６のそれぞれに内容物が配分された状態で仕切るには、容器本体１１の第一室１５に対応する範囲又は第二室１６に対応する範囲のいずれか一方に内容物が極端に偏っていない状態で、好ましくは容器本体１１の厚みが概ね一定とされた状態で容器本体１１を仕切ることで、容易に実施することができる。図示する例では、内容物の排出のためのポート１２が容器本体に対して鉛直方向の下方側に位置させた状態に懸架した状態で第一室１５と第二室１６とに仕切るようにしているが、これは例えば後述する細胞回収治具１００を用いることで実施することができる。ただし、内容物が収容された可撓性の容器本体１１を、第一室１５と第二室１６とに、それぞれに内容物が配分された状態で仕切ることができれば、その方法は限定されるものではない。例えば、容器本体１１を挟み込むことができるクリップを仕切り部材４として用いて、容器本体１１を外側からクリップで挟み込むなどして第一室１５と第二室１６に仕切るようにしてもよい。この場合、容器本体１１の少なくとも一部を平らな載置面に載置するか、容器本体１１の水平面に対する傾斜角を緩めるなどして容器本体１１の厚みが第一室１５又は第二室１６に極端に偏っていない状態で、容器本体１１をクリップで挟み込むように仕切ることで、容易に、第一室１５及び第二室１６のそれぞれに内容物が配分された状態で仕切ることができる。

次いで、容器本体１１を第一室１５と第二室１６とが仕切られたままの状態で、ポート１２やチューブ１３に装着されていたクリップ１４を外して、鉛直方向の下方側に位置するポート１２から、第一室１５に配分された内容物を重力により自然に排出させる（図２（ｃ））。この際、第一室１５内の内容物が排出されることで容器本体１１を形成するフィルム内面同士が接するようにして容器本体１１が閉塞されたり、細胞がフィルム内壁に堆積したり、培地が先に細胞培養バッグ１０外へ排出されてしまうなどして、第一室１５の内面やポート１２近傍、及びチューブ１３内には、細胞が残存してしまうことが想定される。

第一室１５に配分された内容物が、細胞培養バッグ１０の容器本体１１から概ね排出されたら、仕切り部材４を外して、容器本体１１における第一室１５と第二室１６との間の仕切りを解除する。これにより、第一室１５と第二室１６とを連通させ、第二室１６に配分されていた内容物を第一室１５に移し替えて、第一室１５側に位置するポート１２から排出する（図２（ｄ）、（ｅ））。

２．細胞回収方法の第二実施形態
以下に、図３を参照して本発明の第二実施形態に係る好ましい細胞回収方法について詳しく説明する。図３は、本実施形態の好ましい一例に係る細胞回収方法の概略を示す説明図である。

第一実施形態では、細胞培養バッグ１０のポート１２の対角側の一端を保持するように懸架するなどして、ポート１２が容器本体１１に対して鉛直方向の下方側に位置させた状態で、第一室１５と第二室１６とに仕切る方法を説明した。本実施形態では、第一室１５と第二室１６とに仕切る方法が第一実施形態とは異なる。

本実施形態の細胞回収方法では、容器本体１１内の内容物を排出するに際して、先ず、例えばポート１２やポート１２に接続されたチューブ１３を例えばクリップ１４で挟持するなどして、内容物が容器本体１１から排出されないようにした状態で、細胞培養バッグ１０に設けられたポート１２が容器本体１１の少なくとも一部に対して鉛直方向の下方側に位置するように細胞培養バッグ１０を傾斜させて、所定時間保持するのが好ましい。
図示する例では、容器本体１１をほぼ平らな載置面に載置（平置き）し（図３（ａ））、次いで、容器本体１１の内容物の排出のためのポート１２が接続されている側の一部分を載置面に載置したまま、細胞培養バッグ１０のポート１２の対角側の一端を保持するなどして、細胞培養バッグ１０に設けられたポート１２が容器本体１１の少なくとも一部に対して鉛直方向の下方側に位置するように、細胞培養バッグ１０の容器本体１１の一部を持ち上げ、この状態で所定時間保持している（図３（ｂ））。この場合、以降の工程で容器本体１１をポート１２が存在する第一室１５とポート１２が存在しない第二室１６とに仕切るにあたり、第二室１６に該当する領域の少なくとも一部が、容器本体１１を形成するフィルムの内面同士が接触した状態となるように容器本体１１の一部を持ち上げるのが好ましい。
これにより、容器本体１１内に収容されている細胞Ｃの多くを、内容物の排出のためのポート１２が接続されている側、図示する例では容器本体１１の載置面に載置されている側に、移動させることができる。ここでは、細胞Ｃだけでなく、容器本体１１に内容物として含まれる培地等の液体の大部分も、内容物の排出のためのポート１２が接続されている側に移動することになる。

内容物の排出のためのポート１２を容器本体１１の少なくとも一部に対して鉛直方向の下方側に位置させた状態とするのは、図示するような細胞培養バッグ１０の容器本体１１の一部を持ち上げる態様に限定されるわけではない。例えば、細胞回収方法の第一実施形態で説明したように、細胞培養バッグ１０を懸架してもよいし、細胞培養バッグ１０の容器本体１１の上面１１ａ又は下面１１ｂが下になるように水平の接地面に載置した状態から、細胞培養バッグ１０の内容物の排出のためのポート１２の対角側の一端を持ち上げるなどして、容器本体１１を、接地面に対して傾斜角が３０°～８０°となるように傾斜させて、内容物の排出のためのポート１２が容器本体１１に対して鉛直方向の下方側に位置するようにしてもよい。

容器本体１１を第一室１５と第二室１６とに仕切る前に、内容物の排出のためのポート１２を容器本体１１の少なくとも一部に対して鉛直方向の下方側に位置させた状態で容器本体１１を保持する時間は、容器本体１１内のポートが接続されている側（第一室１５側）へ移動させ、容器本体１１内のポートが接続されている側に移動した細胞を、容器本体１１が載置されている接地面側のフィルム（例えば容器本体１１の下面１１ｂを形成するフィルム）の内面上に沈降させることができれば、細胞の種類やサイズに応じて適宜設定することができる。例えば、図３に示すように容器本体１１を平置きし、ポート１２が接続されている側の一部分を載置面に載置したまま、細胞培養バッグ１０のポート１２の対角側の一端を保持するなどした場合は、数分程度保持することで、容器本体１１内の細胞凝集塊は概ね容器本体１１内のポートが接続されている側（第一室１５側）の接地面側のフィルムの内面上に沈降する。

次いで、容器本体１１を横断する長さの棒状の仕切り部材４を、水平面に載置した後、容器本体１１を仕切り部材４の上に、容器本体１１内のポートが接続されている側（第一室１５側）の接地面側のフィルムの内面上に沈降した細胞が浮かび上がらないようにゆっくりと下ろし、容器本体１１が仕切り部材４をまたぐように容器本体１１の全体を載置面に改めて載置する（図３（ｃ））。仕切り部材４は、以降の工程で容器本体１１をポート１２が存在する第一室１５とポート１２が存在しない第二室１６とに仕切る境界となる部分、好ましくは細胞が存在する領域と細胞が存在しない領域に、下方から当接するような配置で設置される。図示する例では、仕切り部材４を、容器本体１１の持ち上げられている部分と持ち上げられていない部分との境界に、下方から当接するように設置した後、容器本体１１の持ち上げられていた部分をゆっくりと下ろして容器本体１１の全体を改めて載置面に載置している。
本実施形態で好ましく用いられる仕切り部材４は、内部に内容物が収容された第一室１５の厚さよりも低く突出するような棒状部材である。例えば、容器本体１１内のポートが接続されている側（第一室１５側）に容器本体１１の内容物を移動させた状態の厚みが８～１０ｍｍである場合、仕切り部材４は、載置面から１～８ｍｍ突出するように設計することができる。
このような仕切り部材４を容器本体１１と載置面との間に配置することで、仕切り部材４が容器本体１１を下方から押し上げ、容器本体１１を形成するフィルムの下面が隆起するように撓んで、容器本体１１をポート１２が存在する第一室１５とポート１２が存在しない第二室１６とに分けることができる。このとき、本実施形態によれば、仕切り部材４は容器本体１１を下方から押し上げているだけで、容器本体１１の内部に内容物が含まれていることから、容器本体１１を形成するフィルムの内面同士は完全には密接されておらず、第一室１５と第二室１６とは少なくとも僅かには流体接続している状態となっている。

ここで、容器本体１１を載置面に改めて載置するにあたり、第二室１６に対して鉛直方向の下方側に位置した状態で所定時間保持されていた第一室１５側には、容器本体１１に収容されていた細胞だけでなく、多くの培地が含まれている。一方、容器本体１１を載置面に改めて載置するにあたり、第一室１５に対して鉛直方向の上方側に位置した状態で所定時間保持されていた第二室１６側には、細胞は殆ど含まれておらず、また、第一室１５と比較して少ない量の培地が存在することとなることが想定される。前述したように、容器本体１１を仕切り部材４が設置されている載置面に載置するだけでは、第一室１５と第二室１６とは少なくとも僅かには流体接続している状態となっており、第一室１５に内在する内容物のうち液状の培地が、容器本体１１の持ち上げられていた部分をゆっくりと下ろしていく際のフィルムの動きに追従しながら容器本体１１が全体としてほぼ同じ厚みに均されるまで又は第一室１５側の厚みが仕切り部材４の載置面からの突出高さを下回るまで、第二室１６に移動する。第一室１５に内在する内容物のうち細胞は、容器本体１１の底面側に沈降しており、大きな液の流れが生じない限り沈降しているフィルムの内面上から浮かび上がったり、動いたりはしない。そのため、持ち上げた容器本体１１を、例えば内容物に液の流れが生じないように５～１０秒程度かけて、ゆっくりと静かに下ろす事で、細胞を沈降しているフィルムの内面上に残したまま、第一室１５に内在していた液状の培地だけが第二室１６に移動していく。また、第一室１５と第二室１６との境界に、載置面から突出する仕切り部材４が、容器本体１１の下方から当接することによって、第一室１５に内在する内容物のうち細胞は、仕切り部材４により押し上げられている部分を乗り越えることができずに、より効果的に細胞が第一室１５にとどまらせることができる。
本実施形態では、このようにして、第二室１６の内部に配分された内容物に、培地が含まれ、細胞Ｃが殆ど存在しない状態とすることができる。

次いで、仕切り部材４の容器本体１１に対する配置をそのままに仕切り部材４を上方へ持ち上げる（図３（ｄ））。
これにより、容器本体１１は、仕切り部材４の部分で折れ曲がるようにして吊り上げられ、仕切り部材４によって下方から押し上げられるとともに、内部に含まれる内容物の自重により、仕切り部材４が当接する部分で容器本体１１を形成するフィルムの内面同士が密接する。本実施形態では、このようにして第一室１５と第二室１６とが概ね流体接続しない状態となるように仕切られる。容器本体１１の第一室１５及び第二室１６のそれぞれには、内容物が配分されている状態となっている。
容器本体１１の端部に取り付けられたポート１２は、概ね容器本体１１の第一室１５に対して鉛直方向の下方側に位置するようになると想定される。ただし、仕切り部材４の配置によっては、ポート１２が容器本体１１の第一室１５に対して鉛直方向の下方側に位置するように、仕切り部材４上で容器本体１１をスライドさせるなどして、第一室１５と第二室１６とが流体接続しない状態で配置を変更してもよい。

次いで、容器本体１１を第一室１５と第二室１６とが流体接続しない状態に仕切られたままの状態で、ポート１２やチューブ１３に装着されていたクリップ１４を外して、ポート１２から、第一室１５内の内容物を重力により自然に排出させる（図３（ｅ））。

第一室１５に配分された内容物が、細胞培養バッグ１０の容器本体１１から概ね排出されたら、容器本体１１の第二室１６が第一室１５に対して鉛直方向の上方に位置するように容器本体１１の第二室１６側の端部を持ち上げる。これにより、仕切り部材４による容器本体１１における第一室１５と第二室１６との間の仕切りを解除し、第一室１５と第二室１６とを連通させ、第二室１６に配分されていた内容物を第一室１５に移し替えて、第一室１５側に位置するポート１２から排出する（図３（ｆ）、（ｇ））。

本実施形態は、上記の点で第一実施形態と異なっているが、他の構成は第一実施形態と同様であるため、重複する説明は省略する。

以上説明したように、本発明の細胞回収方法によれば、可撓性の容器本体１１から培養された細胞を回収するにあたり、内容物の排出のためのポート１２が存在する第一室１５に配分された内容物の排出した際に、容器本体１１内面やポート１２近傍、及びチューブ１３内に細胞が残存してしまったとしても、第二室１６に配分された内容物によって洗い流すことができる。これにより、細胞培養バッグ内における残存細胞を減少させて、細胞を回収することが可能となる。特に、先の工程において、内容物の排出のためのポート１２が容器本体１１の少なくとも一部に対して鉛直方向の下方側に位置する状態で容器本体１１を所定時間保持した後に、容器本体１１を第一室１５と第二室１６とに仕切るようにすると、第二室１６に配分された内容物は細胞が殆ど含まれていない培地とすることができるため、第一室１５に配分された内容物の排出の際に容器本体１１の内面やポート１２近傍に残存していた細胞を洗い流す効果をより高めることができる。また、細胞培養バッグ１０を無菌の空間に移動させて作業を行ったり、改めて空気や培地を容器本体１１内に注入することがないため、手間がかからない。改めて空気や培地を容器本体１１内に注入することがないため、無菌的に閉鎖系である状態を保ったままであり、コンタミネーションのリスクを低減させることができる。

［細胞回収治具］
本発明の細胞回収治具に関し、好ましい実施形態を説明する。以下に説明する実施形態の細胞回収治具１００，２００は、前述した細胞回収方法に用いるのに好適な、可撓性の容器本体１１と内容物の注入排出のための少なくとも１つのポート１２とを有する細胞培養バッグ１０から、培養された細胞を含む内容物を回収するための治具である。
本発明の細胞回収治具１００，２００は、細胞培養バッグ１０の容器本体１１に外側から当接して容器本体１１の内面同士を密接させて、容器本体１１をポート１２のうち内容物の排出のためのポート１２が存在する第一室１５と内容物の排出のためのポート１２が存在しない第二室１６とに仕切る仕切り部材４を備えている。
これにより、ポートのうち内容物の排出のためのポート１２を通して、重力により容器本体１１から内容物を排出するにあたり、培地や細胞等の内容物が収容された可撓性の容器本体１１を、内容物の排出のためのポート１２が存在する第一室１５と内容物の排出のためのポート１２が存在しない第二室１６とに、それぞれに内容物が配分された状態で仕切り、第一室１５に配分された内容物を内容物の排出のためのポート１２から排出し、第一室１５に配分された内容物が概ね排出された後に、第一室１５と第二室１６との仕切りを解除し、第二室１６に配分された内容物を第一室１５に移し替えて内容物の排出のためのポート１２から排出することを可能としている。

１．細胞回収治具の第一実施形態
以下に、図４を参照して、前述した細胞回収方法、特に第一実施形態の好ましい一例として説明した態様に用いるのに好適な細胞回収治具１００について詳しく説明する。
図４は、本実施形態に係る細胞回収治具１００の概略を示す説明図であり、細胞回収治具１００と細胞培養バッグ１０との構成を示す分解斜視図としてあらわされている。

細胞回収治具１００は、細胞と培地とが収容された細胞培養バッグ１０を保持する治具であって、細胞培養バッグ１０の容器本体１１を挟持する第一の部材２及び第二の部材３と、細胞培養バッグ１０を挟持した状態で、容器本体１１に外側から当接して容器本体１１の内面同士を密接させて、容器本体１１を内容物の排出のためのポート１２が存在する第一室１５と内容物の排出のためのポート１２が存在しない第二室１６とに仕切る仕切り部材４とを備えている。
なお、図４においては、以下に説明する細胞培養バッグ１０、第一の部材２、第二の部材３、仕切り部材４の関係性を示すため、その他の部材については適宜省略して示している。

第一の部材２と第二の部材３とは、所定の間隔で互いに対向して配置され、これらの間に細胞培養バッグ１０の容器本体１１を挟持するように構成されている。

図示する例では、第一の部材２及び第二の部材３は、細胞培養バッグ１０の容器本体１１の上面１１ａ又は下面１１ｂの面積より大きい略長方形の平面形状を有する板状部材である。これらはそれぞれに細胞培養バッグ１０の容器本体１１の上面１１ａ又は下面１１ｂと接する接触面３ａ又は接触面２ａを有している。
第一の部材２及び／又は第二の部材３は、細胞培養バッグ１０の内部の状態などを確認できるように、一部又は全部が透明性を有していてもよい。その場合、当該部分は、例えば、透明度の高い合成樹脂やガラスで形成することができる。

第一の部材２と第二の部材３とは、内容物が収容されている細胞培養バッグ１０を挟持したときに、細胞培養バッグ１０が所定の厚みを有するような間隔で固定されるように設計されている。第一の部材２と第二の部材３との間の間隔は限定されるものではなく、細胞培養バッグ１０の厚みなどに応じて適宜設計することができる。

具体的には、第一の部材２及び第二の部材３は、例えば図示しないヒンジやラッチを用いて、互いに対してほぼ９０°に開くことができ、また、互いの接触面２ａ，３ａが所定の間隔をあけて向かい合った状態で実質的に平行となるように閉じて固定される構造とすることができる。
このような構造によれば、第一の部材２と第二の部材３とを互いに対して開いて、例えば第一の部材２側が下になるように接地面に載置した状態で、第一の部材２の接触面２ａに細胞培養バッグ１０の容器本体１１の下面１１ｂが接するように細胞培養バッグ１０を載置し、その後、第一の部材２と第二の部材３とを互いに対して閉じることにより、細胞培養バッグ１０を第一の部材２と第二の部材３との間に挟持することが可能となる。

本実施形態において、仕切り部材４は、第一の部材２又は第二の部材３の一部の範囲に開口する開口部４１と、開口部４１に着脱自在に形成された蓋部４２とから構成されている。図示する例では、仕切り部材４は第二の部材３に設けられている。

開口部４１は、第一の部材２又は第二の部材３の第二室１６に対応する範囲に形成される。
図示する例では、細胞培養バッグ１０の容器本体１１の平面形状は略長方形の形状であり、ポート１２は、容器本体１１の平面形状の四隅のうちの一つの角部に設けられている。このような細胞培養バッグ１０を保持する細胞回収治具１００としては、細胞回収治具１００の内部に保持された細胞培養バッグ１０のポート１２とは対角側に位置する容器本体１１の角部を含む一部の領域が第二室１６として仕切られるように、開口部４１を設計することができる。

蓋部４２は、第一の部材２又は第二の部材３に取り付けられているときは、開口部４１を閉鎖して第一の部材２又は第二の部材３の一部として接触面２ａ又は接触面３ａを形成する。この蓋部４２が第一の部材２又は第二の部材３から取り外されることによって、第一の部材２又は第二の部材３に開口部４１が形成される。

また、細胞回収治具１００は、保持した細胞培養バッグ１０のポート１２が容器本体１１に対して鉛直方向の下方側に位置するように保つ保持手段５を備えるのが好ましい。
図示する例では、細胞回収治具１００は、細胞培養バッグ１０のポート１２が配置される部位とは対角側の縁部に、細胞回収治具１００ごとフック等を用いて懸架するための懸架孔５１を有しており、この懸架孔５１を保持手段５としている。

このような懸架孔５１を備えた細胞回収治具１００を用いる場合、細胞培養バッグ１０において、細胞回収治具１００の懸架孔５１と対応する位置に、穿設された孔を備えていてもよい。このような孔を備えた細胞培養バッグ１０であると、細胞回収治具１００とその内部に保持された細胞培養バッグ１０とを共にフック等を用いて懸架することができ、これにより、細胞培養バッグ１０を傾斜させたときに、細胞回収治具１００の内部で細胞培養バッグ１０がずり下がるなどの虞がなく安定して保持することができる。
ただし、容器本体１１が細胞回収治具１００の第一の部材２と第二の部材３との間でずり下がるなどしないで保持することができるようになっていれば、細胞培養バッグ１０にこのような孔を備えていなくてもよい。例えば、容器本体１１の縁部を第一の部材２の周縁部と第二の部材３の周縁部との間に挟み込むようにして、容器本体１１が細胞回収治具１００の傾斜や懸架によってずり下がらないように固定する構造としてもよい。この場合、第一の部材２の周縁部と第二の部材３の周縁部とを互いに対して突出させて、互いの接触面２ａ，３ａが所定の間隔をあけて向かい合った状態で実質的に平行となるように閉じて固定された状態で、互いの周縁部同士が当接する構造とすればよい。

本実施形態に係る細胞回収治具１００の仕切り部材４により、細胞培養バッグ１０の容器本体１１を第一室１５と第二室１６とに仕切る仕切り方法について、図５を参照して説明する。図示する例では、仕切り部材４は第二の部材３に設けられており、ここでは、第二の部材３に仕切り部材４が設けられている態様を例にして説明する。第一の部材２に仕切り部材４が設けられている態様であっても、同様にして容器本体１１を仕切ることができるのは、いうまでもない。

まず、細胞培養バッグ１０のポート１２が細胞回収治具１００の懸架孔５１とは対角側に位置するように、内容物が収容された細胞培養バッグ１０の容器本体１１を第一の部材２と第二の部材３の間に挟み込む。細胞回収治具１００は、細胞培養バッグ１０を第一の部材２と第二の部材３の間に保持したまま、懸架孔５１を用いて懸架される（図５（ａ））。

次いで、第二の部材３の蓋部４２を取り外して、第二の部材３に開口部４１を形成する（図５（ｂ））。

次いで、細胞回収治具１００の第一の部材２と第二の部材３との間に保持された細胞培養バッグ１０の容器本体１１の一部の領域（第二室１６となる領域）を、開口部４１から細胞回収治具１００の外側へ引き出し、開口部４１を画定する下方側の一辺４１ａに沿って、容器本体１１を第二の部材３の外側へ折り曲げる（図５（ｃ））。

次いで、蓋部４２を、容器本体１１を形成する両フィルムを挟み込むようにして第二の部材３に装着し直す（図５（ｄ））。これにより、開口部４１の一辺４１ａと対応する蓋部４２の一辺４２ａとが、容器本体１１に外側から当接して容器本体１１の内面同士を密接させて、開口部４１から細胞回収治具１００の外部に出された部分を第二室１６として、容器本体１１を第一室１５と第二室１６に仕切ることができる。

仕切り部材４による仕切りを解除して、第一室１５と第二室１６とを連通させるには、容器本体１１を挟み込んでいた蓋部４２を取り外し、細胞回収治具１００の外側に引き出されていた容器本体１１の一部の領域を、細胞回収治具１００の第一の部材２と第二の部材３との間の空間に押し入れればよい。必要に応じて、容器本体１１を挟まないようにして、再び蓋部４２を第二の部材３に装着して、開口部４１を閉鎖してもよい。

本実施形態の細胞回収治具１００によれば、可撓性の容器本体１１と内容物の排出のためのポート１２とを有する細胞培養バッグ１０を保持し、内容物の排出のためのポート１２を鉛直方向の下方側に位置させた状態で容器本体１１から内容物を排出するにあたり、内容物が収容された容器本体１１を、内容物の排出のためのポート１２が存在する第一室１５と内容物の排出のためのポート１２が存在しない第二室１６とに、それぞれに内容物が配分された状態で仕切り、第一室１５に配分された内容物を内容物の排出のためのポート１２から排出した後に、第一室１５と第二室１６との仕切りを解除し、第二室１６に配分された内容物を第一室１５に移し替えて内容物の排出のためのポート１２から排出することを可能とする。また、可撓性の容器本体１１を有する細胞培養バッグ１０を第一の部材２と第二の部材３とによって挟持することで、細胞培養バッグ１０を懸架したり傾けたりしても、容器本体１１の厚みを概ね一定に保つことができる。これにより、細胞培養バッグ１０を傾斜させたときに、鉛直方向の下方側に内容物が偏って、容器本体１１を形成するフィルムの内面同士の一部が接触して閉塞してしまったり、フィルムが撓んでシワができてしまうことを回避する一助とすることができる。また、細胞培養バッグ１０の容器本体１１の厚みを一定とすることで、容器本体１１を第一室１５と第二室１６とに、それぞれに内容物が配分された状態で仕切る工程を容易とすることができる。また、細胞培養バッグ１０の容器本体１１の厚みを一定とすることで、容器本体１１を第一室１５と第二室１６とに、それぞれに内容物が配分された状態で仕切るにあたり、それぞれの容積を作業ごとにばらつきがないようにある程度一定とすることができる、又は、第一室１５と第二室１６の大まかな容積を容易に確定することが可能となる。

２．細胞回収治具の第二実施形態
以下に、図６を参照して、前述した細胞回収方法、特に第二実施形態の好ましい一例として説明した態様に用いるのに好適な細胞回収治具２００について詳しく説明する。
図６は、本実施形態に係る細胞回収治具２００の概略を示す説明図であり、図６（ａ）は細胞回収治具２００の或る使用状態をあらわした図であり、図６（ｂ）は細胞回収治具２００の別の或る使用状態をあらわした図である。

細胞回収治具２００は、細胞と培地とが収容された細胞培養バッグ１０を載置する治具であって、細胞培養バッグ１０の容器本体１１を載置するための載置板６と、載置板６を横断するように設置され、容器本体１１を下方から押し上げて内容物の排出のためのポート１２が存在する第一室１５と内容物の排出のためのポート１２が存在しない第二室１６とに仕切る仕切り部材４とを備えている。

図示する例では、載置板６は、細胞培養バッグ１０の容器本体１１の上面１１ａ又は下面１１ｂの面積より大きい略長方形の平面形状を有する板状部材である。載置板６は、細胞培養バッグ１０の容器本体１１の上面１１ａ又は下面１１ｂと接する接触面６ａを有している。

仕切り部材４は、棒状の部材であり、載置板６から１～８ｍｍ突出するように設けられるのが好ましい。

図示する例では、載置板６は、仕切り部材４を挟んで第一の載置部６１と第二の載置部６２から構成されている（図６（ａ））。第一の載置部６１及び第二の載置部６２は、容器本体１１の上面１１ａ又は下面１１ｂと接する接触面６１ａ，６２ａをそれぞれ有している。第二の載置部６２は、第一の載置部６１に対する傾斜角度を変えられるように、仕切り部材４を中心として回動可能に設けられている。第二の載置部６２は、図６（ｂ）に示すように、その接触面６２ａの反対面が第一の載置部６１の接触面６１ａの反対面に接触するまで、回動することができる構造とするのが好ましい。また、第二の載置部６２は、仕切り部材４を頂点とした第一の載置部６１と第二の載置部６２のなす角の角度が、接触面６１ａ，６２ａにより挟まれる領域が劣角となるように（すなわち図６（ｂ）に示す状態とは反対側に）、第二の載置部６２が仕切り部材４を中心として回動することができる構造であると、さらに好ましい。このような第二の載置部６２は、例えば、図示しないヒンジにより仕切り部材４に固定することができる。

容器本体１１を載置板６に載置した後、第二の載置部６２を仕切り部材４周りに回動させて、仕切り部材４を頂点とした第一の載置部６１と第二の載置部６２のなす角の角度が、接触面６１ａ，６２ａにより挟まれる領域が優角となるように、第二の載置部６２を第一の載置部６１に対して傾斜させた状態とする。これにより、載置板６上に載置した可撓性の容器本体１１は、仕切り部材４の部分で折れ曲がり、仕切り部材４によって下方から押し上げられるとともに、その内部に含まれる内容物の自重によって容器本体１１の両端部が引っ張られる。その結果、仕切り部材４が下方から当接する部分において、容器本体１１を形成するフィルムの内面同士が密接し、第一の載置部６１側と第二の載置部６２側とを、概ね流体接続しない状態となるように仕切ることが可能となる。

細胞回収治具２００は、仕切り部材４を支持して持ち上げるための保持手段５を備えるのが好ましい。
図示する例では、細胞回収治具２００は、仕切り部材４近傍の載置板６の縁部から延設された保持手段５を備えている。より具体的には、図示する保持手段５は、載置板６の第一の載置部６１及び第二の載置部６２を含む一辺において、第一の載置部６１の一部から仕切り部材４までの領域で載置板６の端部と連接しており、第二の載置部６２の領域においては、連接せずに第二の載置部６２の端部と平行となるように延設している。
このような保持手段５によれば、載置面に載置されている細胞回収治具２００の保持手段５を使用者が手指等で摘まみ上げることで、仕切り部材４を支持して持ち上げることができる。より具体的には、図示する保持手段５により細胞回収治具２００を持ち上げると、保持手段５と連接された第一の載置部６１は、保持手段５において第一の載置部６１とは反対側に位置する自由端部側が鉛直方向の上方側に持ち上げられるのに伴って、載置されていた水平面から立ち上がるように傾斜する。この際、第一の載置部６１に対して保持手段５の自由端部側に位置する仕切り部材４が、第一の載置部６１に対して鉛直方向の上方側に位置するように、保持手段５によって持ち上げられる。一方、第二の載置部６２は、仕切り部材４が鉛直方向の上方側に持ち上げられるのに伴って、仕切り部材４周りに回動して、仕切り部材４側が鉛直方向の上方側になるように徐々に傾斜していく。すなわち、仕切り部材４を頂点とした第一の載置部６１と第二の載置部６２のなす角の角度が、接触面６１ａ，６２ａにより挟まれる領域が優角となるように、第二の載置部６２が第一の載置部６１に対して徐々に傾斜していく。図示する例では、細胞回収治具２００が完全に載置面から離れた際には、第二の載置部６２は、鉛直方向に略平行になるまで、仕切り部材４周りに回動することができる。第一の載置部６１は、保持手段５が鉛直方向に略平行になるように保持されていると、鉛直方向に略平行の状態となる。

また、図示する保持手段５は、載置板６の端部から延びた先端側の自由端部に懸架孔５１を備えている。このような保持手段５の懸架孔５１を、フック等を用いて懸架することで、細胞回収治具２００を懸架することができる。

ただし、保持手段５は、仕切り部材４を支持して持ち上げることが可能であれば、図示する例に限定されるものではない。例えば、仕切り部材４の両端部に懸架孔を設け、それぞれの懸架孔を同時に紐で吊るす構造としてもよい。または、保持手段５は、仕切り部材４を所定の高さに持ち上げるように下から支える構造としてもよい。

また、細胞回収治具２００は、第一の載置部６１の接触面６１ａと第二の載置部６２の接触面６２ａとがほぼ面一となる状態で固定されるような固定手段７を備えるのが好ましい。
図示する例では、細胞回収治具２００は、保持手段５の自由端部側に、保持手段５と第二の載置部６２とを固定する固定手段７を備えている。保持手段５と第二の載置部６２とが固定手段７により固定されることにより、保持手段５に連接された第一の載置部６１と第二の載置部６２とがほぼ面一となる状態で固定することができる。

本実施形態に係る細胞回収治具２００を用いて、細胞培養バッグ１０の容器本体１１を第一室１５と第二室１６とに仕切る仕切り方法について、図７を参照して説明する。

先ず、細胞回収治具２００を水平面に載置し、第一の載置部６１と第二の載置部６２とがほぼ面一とされた状態で、載置板６の上に細胞培養バッグ１０を載置する（（図７（ａ））。ここでは、第一の載置部６１側に、細胞培養バッグ１０の内容物の排出のためのポート１２が設けられている部分が載置されている。

次いで、細胞回収治具２００はそのままの状態で、細胞培養バッグ１０のポート１２が設けられている側を細胞回収治具２００の載置板６（第一の載置部６１）に載置したまま、細胞培養バッグ１０のポート１２の対角側の一端を持ち上げる（（図７（ｂ））。これにより、ポート１２は、持ち上げられた容器本体１１の少なくとも一部に対して鉛直方向下方側に位置させることができる。または、仕切り部材４を頂点とした第一の載置部６１と第二の載置部６２のなす角の角度が、接触面６１ａ，６２ａにより挟まれる領域が劣角となるように、第二の載置部６２が仕切り部材４周りに回動可能である場合、第二の載置部６２を容器本体１１ごと持ち上げて傾斜させてもよい。すなわち、仕切り部材４を頂点とした第一の載置部６１と第二の載置部６２のなす角の角度を、接触面６１ａ，６２ａにより挟まれる領域がなす角度が９０°～１２０°となるように、第二の載置部６２を仕切り部材４周りに回動させて、第一の載置部６１に対して傾斜させる。これにより、第一の載置部６１に載置されたポート１２を、第二の載置部６２に載置された容器本体１１に対して鉛直方向下方側に位置させることができる。

次いで、所定時間経過後、持ち上げられていた細胞培養バッグ１０のポート１２の対角側の一端をゆっくりと降ろし、細胞培養バッグ１０全体を、改めて載置板６に載置する（（図７（ｃ））。または、持ち上げられていた第二の載置部６２をゆっくりと降ろし、細胞回収治具２００を、第一の載置部６１と第二の載置部６２とがほぼ面一となる状態に戻す。

次いで、容器本体１１のポート１２と対角側の少なくとも一部を第二の載置部６２に固定した後、保持手段５を用いて細胞回収治具２００を持ち上げる。容器本体１１を第二の載置部６２に固定する手段は、以降の工程で第二の載置部６２を第一の載置部６１に対して鉛直方向の上方側となるように傾斜させたときに容器本体１１がずり下がってこないように固定されていれば、特に限定されるものではない。例えば、クリップを用いて容器本体１１と第二の載置部６２を固定してもよい。細胞培養バッグ１０において、容器本体１１のポート１２と対角側の周辺部近傍に穿設された孔を備えている場合は、第二の載置部６２の対応する位置に孔を係止するための固定具（図示せず）を備えてもよい。固定具により細胞培養バッグ１０の孔を係止することで、細胞培養バッグ１０を傾斜させたときに、細胞回収治具１００内で細胞培養バッグ１０がずり下がるなどの虞がないように第二の載置部６２に固定することができる。
保持手段５を用いて細胞回収治具２００を持ち上げることにより、保持手段５によって仕切り部材４が、細胞回収治具２００が載置されていた水平面から離れるとともに、載置板６は、第一の載置部６１及び第二の載置部６２が、仕切り部材４側が鉛直方向の上方側になるように徐々に傾斜していく。（図７（ｄ））。
保持手段５の懸架孔５１をフック等により懸架するなどして、細胞回収治具２００が載置されていた水平面から完全に離れるまで持ち上げられると、第一の載置部６１及び第二の載置部６２は、鉛直方向に略平行の状態となる（（図７（ｅ））。これにより、載置板６に載置されていた容器本体１１を仕切り部材４が下方から当接して押し上げるとともに、容器本体１１の内部に含まれる内容物等の自重により、容器本体１１の内面同士を密接させて、容器本体１１を第一室１５と第二室１６に仕切ることができる。

仕切り部材４による仕切りを解除して、第一室１５と第二室１６とを連通させるには、第一の載置部６１が第二の載置部６２に対して鉛直方向の下方側に位置するとともに、第一の載置部６１と第二の載置部６２とが面一となるように、第二室１６が載置されている第二の載置部６２を仕切り部材４周りに回動させて持ち上げ、その状態で固定手段７を用いて固定させればよい（（図７（ｆ））。図示する細胞回収治具２００によれば、第二の載置部６２を固定手段７に固定されることで、第一の載置部６１が第二の載置部６２に対して鉛直方向の下方側に位置するとともに第一の載置部６１と第二の載置部６２とがほぼ面一となる状態で固定される。

本実施形態の細胞回収治具２００によれば、可撓性の容器本体１１と内容物の排出のためのポート１２とを有する細胞培養バッグ１０を載置し、内容物の排出のためのポート１２を鉛直方向の下方側に位置させた状態で容器本体１１から内容物を排出するにあたり、内容物が収容された容器本体１１を、内容物の排出のためのポート１２が存在する第一室１５と内容物の排出のためのポート１２が存在しない第二室１６とに、それぞれに内容物が配分された状態で仕切り、第一室１５に配分された内容物を内容物の排出のためのポート１２から排出した後に、第一室１５と第二室１６との仕切りを解除し、第二室１６に配分された内容物を第一室１５に移し替えて内容物の排出のためのポート１２から排出することを可能とする。また、内容物の排出のためのポート１２を、容器本体１１の少なくとも一部に対して鉛直方向の下方側に位置させた状態で容器本体１１を所定時間保持した後に、容器本体１１を第一室１５と第二室１６とに、それぞれに内容物が配分された状態で仕切るにあたり、第一室１５側に培地が偏って配分されてしまうことを好適に回避することができる。

以上、本発明について、好ましい実施形態を示して説明したが、本発明は、前述した実施形態にのみ限定されるものではなく、本発明の範囲で種々の変更実施が可能であることはいうまでもない。

例えば、前述の実施形態では、細胞培養バッグ１０の例として、細胞培養バッグ１０の容器本体１１の下面１１ｂに複数の凹部が形成されているものを挙げたが、本発明の細胞培養方法及び細胞回収治具に適用される細胞培養バッグは、これに限定されるものではない。例えば、細胞培養バッグ１０の下面１１ｂの形状は、上面１１ａと同様に平面状となっていてもよい。

また、前述の実施形態では、細胞培養バッグ１０の例として、容器本体１１の平面形状が略長方形の形状であるものを挙げたが、細胞培養バッグ１０の容器本体１１の平面形状は、これに限定されるものではない。例えば、容器本体１１の平面形状は、正方形状、六角形等の多角形状、楕円形状、又は円形状のような種々の形状とすることができる。内容物の排出のためのポート１２は、細胞培養バッグ１０を傾斜させたときに容器本体１１に対して鉛直方向の下方側に位置させやすいように、容器本体１１に設けられているのが好ましいが、ポート１２を設ける位置は、容器本体１１の平面形状によって適宜設計できるのはいうまでもない。

また、前述の実施形態では、細胞培養バッグ１０の例として、容器本体１１の平面形状が略長方形の形状であり、当該平面形状の角部の一つにポート１２が取り付けられているものを挙げたが、ポート１２の取り付け位置及び設けられる個数は、これに限定されるものではない。例えば、図８に示すように、容器本体１１の平面形状が略長方形の形状であり、当該平面形状において、同一の長辺に存する角部それぞれに、ポート１２が取り付けられていてもよい。設けられるポートが複数である場合は、複数のポートのうち内容物の排出のためのポートを、前述の実施形態で説明したポート１２と同様に扱うようにして、細胞回収を行えばよい。

また、前述の細胞回収治具の第一実施形態では、仕切り部材４として開口部４１と蓋部４２を備えた構成を挙げたが、容器本体１１を第一室１５と第二室１６とに仕切ることができる構造を有していれば、仕切り部材４の具体的な構成は限定されるものではない。
例えば、仕切り部材４は、第一の部材２又は第二の部材３の一方において、仕切りが設けられる部分に対応する領域に開口したスリットと、該スリットから細胞回収治具１００に保持された細胞培養バッグ１０側に向かって突出することが可能な仕切片とを備えるように構成されてもよい。このような構成によれば、仕切片をスリットから細胞培養バッグ１０側に向かって突出させることで、容器本体１１に外側から当接して、容器本体１１をスリットと対面する第二の部材３又は第一の部材２に押し付けて挟み込み、容器本体１１の内面同士を密接させて、容器本体１１を第一室１５と第二室１６とに仕切ることができる。

また、前述の細胞回収治具の第一実施形態では、保持手段５として懸架孔５１を挙げたが、保持手段５は、細胞培養バッグ１０を、内容物の排出のためのポート１２が容器本体１１に対して鉛直方向の下方側に位置するように保持することができれば、その具体的な構成は懸架孔５１に限定されるものではない。例えば、容器本体１１を、接地面に対して傾斜角が３０°～８０°となるように傾斜させて、内容物の排出のためのポート１２が容器本体１１に対して鉛直方向の下方側に位置するようにするには、容器本体１１を所定の傾斜角度で傾斜させた状態で支持するような傾斜板などの支持構造を、保持手段５として備えてもよい。このような保持手段を備える場合、細胞回収治具１００は、第一の部材２及び／又は第二の部材３に、細胞培養バッグ１０の周辺部近傍に穿設された孔を係止するための固定具を備えてもよい。固定具により細胞培養バッグ１０の孔を係止することで、細胞培養バッグ１０を傾斜させたときに、細胞回収治具１００内で細胞培養バッグ１０がずり下がるなどの虞がなく安定して保持することができるため好ましい。

１００，２００ 細胞回収治具
２ 第一の部材
３ 第二の部材
４ 仕切り部材
５ 保持手段
６ 載置板
１０ 細胞培養バッグ
１１ 容器本体
１２ ポート

Claims (9)

1. 可撓性の容器本体と内容物の注入排出のための少なくとも１つのポートとを有する細胞培養バッグから、培養された細胞を回収する細胞回収方法であって、
   前記ポートを鉛直方向の下方側に位置させて前記容器本体から内容物を排出するにあたり、内容物が収容された前記容器本体を、前記ポートのうち内容物の排出のためのポートが存在する第一室と前記内容物の排出のためのポートが存在しない第二室とに、それぞれに内容物が配分された状態で仕切り、
   前記第一室に配分された内容物を前記内容物の排出のためのポートから排出した後に、前記第一室と前記第二室との仕切りを解除し、
   前記第二室に配分された内容物を前記第一室に移し替えて前記内容物の排出のためのポートから排出する
   ことを特徴とする細胞回収方法。
2. 前記ポートを、前記容器本体の少なくとも一部に対して鉛直方向の下方側に位置させた状態で前記容器本体を所定時間保持した後に、前記容器本体を前記第一室と前記第二室とに仕切る、請求項１に記載の細胞回収方法。
3. 可撓性の容器本体と内容物の注入排出のための少なくとも１つのポートとを有する細胞培養バッグから、培養された細胞を回収する細胞回収治具であって、
   前記細胞培養バッグの前記容器本体に外側から当接して前記容器本体の内面同士を密接させて、前記容器本体を前記ポートのうち内容物の排出のためのポートが存在する第一室と前記内容物の排出のためのポートが存在しない第二室とに仕切る仕切り部材
   を備えたことを特徴とする細胞回収治具。
4. 所定の間隔で互いに対向して配置され、前記細胞培養バッグの前記容器本体を挟持する第一の部材及び第二の部材を備えた、請求項３に記載の細胞回収治具。
5. 前記細胞培養バッグを、前記内容物の排出のためのポートが前記容器本体に対して鉛直方向の下方側に位置するように保持する保持手段を備えた、請求項４に記載の細胞回収治具。
6. 前記仕切り部材は、前記第一の部材又は前記第二の部材において前記第二室に対応する範囲に開口する開口部と、前記開口部に着脱自在に形成された蓋部とを含む、請求項４又は５に記載の細胞回収治具。
7. 細胞培養バッグを載置する載置板を備え、
   前記仕切り部材は、前記載置板を横断するように設置され、前記容器本体を下方から押し上げて、前記第一室と前記第二室とに仕切るように構成された、請求項３に記載の細胞回収治具。
8. 前記載置板は、前記仕切り部材を挟んで第一の載置部と第二の載置部から構成され、前記第二の載置部は、前記仕切り部材を中心として回動可能に設けられた、請求項７に記載の細胞回収治具。
9. 前記仕切り部材を支持して持ち上げるための保持手段を備えた、請求項７又は８に記載の細胞回収治具。