JP2026511237A - 単離されたトランスポザーゼ及びその使用 - Google Patents

単離されたトランスポザーゼ及びその使用

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Abstract

本出願は、分子生物学の分野に関し、具体的には、単離されたトランスポザーゼ及びその使用に関する。本出願は、更に具体的には、トランスポザーゼをコードする核酸及び核酸構築物、核酸セット及び核酸セット構築物、並びにトランスポザーゼを含む組成物、組換えベクター、組換え宿主細胞及びキットに関する。本出願は、更に具体的には、宿主細胞のゲノムに外因性核酸断片を導入する方法、宿主細胞のゲノムを編集する方法、及びゲノム中に外因性核酸断片を含む宿主細胞を得る方法に関する。本出願は、更に具体的には、宿主細胞のゲノムに外因性核酸断片遺伝子を導入するための、又は遺伝子治療、細胞治療、ゲノム研究、若しくは幹細胞誘導及び誘導後分化のための薬物若しくは製剤を調製するための、トランスポザーゼ、核酸及び核酸構築物、核酸セット及び核酸セット構築物、組成物、組換えベクター、又は組換え宿主細胞の使用に関する。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、2023年3月27日に中国国家知識産権局(China National Intellectual Property Administration)に出願された中国特許出願第2023103046203号の優先権を主張し、その全内容は、あらゆる目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
技術分野
本出願は、分子生物学の分野に関し、具体的には、単離されたトランスポザーゼ及びその使用に関する。本出願は更に具体的には、トランスポザーゼをコードする核酸及び核酸構築物、核酸セット及び核酸セット構築物、並びにトランスポザーゼを含む組成物、組換えベクター、組換え宿主細胞及びキットに関する。本出願は更に具体的には、宿主細胞のゲノムに外因性核酸断片を導入する方法、宿主細胞のゲノムを編集する方法、及びゲノム中に外因性核酸断片を含む宿主細胞を得る方法に関する。本出願は更に具体的には、宿主細胞のゲノムに外因性核酸断片遺伝子を導入するための、又は遺伝子治療、細胞治療、ゲノム研究、若しくは幹細胞誘導及び誘導後分化のための薬物若しくは製剤を調製するための、トランスポザーゼ、核酸及び核酸構築物、核酸セット及び核酸セット構築物、組成物、組換えベクター、又は組換え宿主細胞の使用に関する。
トランスポゾンは、ゲノム内又はゲノム間でそれ自体の配列又はそれ自体の配列の完全なコピーを転移するためにゲノムに挿入又はゲノムから切除することができるDNA配列である。トランスポゾンは2つの主要なカテゴリーに分類され、本明細書では主にII型トランスポゾン(DNAトランスポゾン)と呼ばれ、両端の末端逆位反復配列(TIR)及びトランスポザーゼをコードする遺伝子からなる。トランスポゾンは、DNAが染色体から切断され、ゲノムの他の部分に直接挿入される「カットアンドペースト」転移機構を有する。
トランスポザーゼは、DNA切断及びライゲーションを媒介する触媒ドメインを含む、DNAトランスポゾン配列によって発現される配列特異的DNA結合タンパク質である。トランスポザーゼは、トランスポゾンの両端でTIRを認識して結合し、バルジ複合体を形成し、次いでDNAトランスポゾンを元の部位から除去し、それを新しい部位に組み込むことができる。トランスポゾンの転移活性は、主にトランスポザーゼの発現レベル及び活性に依存する。したがって、高いトランスポザーゼ活性を有するDNAトランスポゾンは、トランスポゾン機能ベースの遺伝子編集ツールの開発のための主要な要件である。
遺伝子の挿入及び大きな断片の組込みは、遺伝子治療、動植物の分子育種、産業用微生物の操作等の分野で重要な応用価値がある。現在、業界では、大きな断片遺伝子の挿入及び組込みのための効果的なツール及びシステムが不足している。近年、科学界は、大きな断片遺伝子を挿入して組み込むことができるいくつかのツール及び方法を開発しているが、これらの方法には依然としていくつかの問題がある。例えば、細胞免疫療法及び遺伝病の遺伝子療法では、遺伝子配列を組み込むためにレンチウイルス又はレトロウイルスが最も一般的に使用されており、これに基づいて、腫瘍及び遺伝病の治療のためのいくつかの治療製品がある(Aiuti,A.,Roncarolo,M.G. and Naldini,L.(2017)Gene therapy for ADA-SCID,the first marketing approval of an ex vivo gene therapy in Europe:paving the road for the next generation of advanced therapy medicinal products.EMBO Mol.Med.9,737-740;Aiuti,A.et al.(2009)Gene therapy for immunodeficiency due to adenosine deaminase deficiency.N.Engl.J.Med.360,447-458)。しかしながら、ウイルスを使用して大きな断片遺伝子を組み込むことには、いくつかの潜在的な適用上の制限がある。第1に、ゲノムにおけるウイルス組込みのランダム性が癌のリスクをもたらし、第2に、ウイルスが保有することができる外因性遺伝子のサイズも制限されており、これは治療用の大きな断片遺伝子の導入を助長せず、第3に、ウイルスの免疫原性は、外因性治療遺伝子の長期発現及び再投与に影響を及ぼし得、第4に、ウイルスの産生は、生細胞の助けを借りて完了する必要があり、これにより、そのような製品の品質管理及び下流処理がより複雑且つより高価になり、工業化の点でいくつかの欠点を有する。したがって、非ウイルス性の大きな断片の組み込みは、ウイルスの組み込みによって引き起こされる様々な欠点を回避し、遺伝子治療における貴重なツールとなり得る。
非ウイルス遺伝子組み込みツールとして、DNAトランスポゾンは、宿主ゲノムへの組み込み及び外因性遺伝子の大きな断片の安定な発現を達成することができるだけでなく、免疫原性等の悪影響を回避することもでき、したがっていくつかのトランスポゾンが遺伝子治療に使用されている。トランスポゾンは、原核生物から真核生物までの様々な分野に広く存在することが証明されているが、進化の間、ゲノム安定性を維持するために、多数のトランスポゾン断片はサイレントに不活性になる。現在、Sleeping Beauty(SB)、PiggyBac(PB)及びTol2等のいくつかの非常に活性で価値のあるトランスポゾンツールが遺伝子治療研究で使用されている。したがって、より高活性なトランスポゾンツールの掘削並びにそれらの機能の検証及び検出により、遺伝子治療戦略の開発のためのより優れた柔軟な選択が提供され得る。
このセクションに記載された方法は、必ずしも以前に着想又は採用された方法ではないことに留意されたい。特に明記されていない限り、このセクションに記載されている方法のいずれも、それらがこのセクションに含まれているという理由だけで先行技術であると見なされるべきではない。同様に、このセクションで言及された問題は、特に明示的に示されていない限り、いかなる先行技術においても普遍的に認識されると見なされるべきではない。
これに基づいて、より高度でより効果的な非ウイルス遺伝子組み込みツールを求めるために、本出願は、単離されたトランスポザーゼを提供し、以下の(i)から選択されるトランスポザーゼ配列又は(ii)~(iv)においてトランスポザーゼ活性を有する上記トランスポザーゼのバリアント配列を有するトランスポザーゼを提供する。(i)配列番号1~146のいずれか1つに示される少なくとも1つのアミノ酸配列;(ii)配列番号1~146のいずれか1つに示されるアミノ酸配列に対して1、2、3、4、5、6、7、8、9又は10個のアミノ酸の欠失、置換、挿入又は変異を行うことによって得られる配列の少なくとも1つ;(iii)配列番号1~146のいずれか1つに示されるアミノ酸配列と少なくとも70%、80%、90%、95%又は99%の同一性を有するアミノ酸配列の少なくとも1つ;(iv)配列番号1~146のいずれか1つに示されるアミノ酸配列を他の配列と更に融合することによって得られる配列の少なくとも1つを含む。本出願で提供されるトランスポザーゼは、現在広く使用されているSleeping Beauty(SB)及びPiggyBac(PB)と比較して同等又は更に高い転移活性を有し、遺伝子組み込みツールの開発のためのより多くの又はより良い選択肢を提供する。
本出願の一実施形態によれば、単離されたトランスポザーゼが提供され得、トランスポザーゼは、以下の式に示されるアミノ酸配列を含み、
DE(XK(XG(XK(X
式中、a、b、c及びdはアミノ酸の数であり、Dはアスパラギン酸であり、Eはグルタミン酸であり、Kはリジンであり、Gはグリシンであり、(X)は任意のアミノ酸であり、aは17、18又は19であり、(X)は任意のアミノ酸であり、bは3、4又は5であり、(X)は任意のアミノ酸であり、cは1であり、かつに(X)は任意のアミノ酸であり、dは17、18又は19である。
本出願の一実施形態によれば、単離されたトランスポザーゼが提供され得、トランスポザーゼは、以下の式に示されるアミノ酸配列を含み、
P(XY(X
式中、e及びfはアミノ酸の数であり、Pはプロリンであり、Yはチロシンであり、Dはアスパラギン酸であり、(X)は任意のアミノ酸であり、eは5であり、かつに(X)は任意のアミノ酸であり、fは7である。
本出願の一実施形態によれば、単離されたトランスポザーゼが提供され得、トランスポザーゼは、以下の式に示されるアミノ酸配列を含み、
C(XC(XC(X
式中、g、h及びiはアミノ酸の数であり、Cはシステインであり、(X)は任意のアミノ酸であり、gは2、3又は4であり、(X)は、任意のアミノ酸であり、hは、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27又は28であり、かつに(X)は任意のアミノ酸であり、iは2である。
本出願の一実施形態によれば、以下のアミノ酸配列(1)~(3)の少なくとも2つを含む単離されたトランスポザーゼが提供され得、
(1)DE(XK(XG(XK(XG;
(2)P(XY(XD;又は
(3)C(XC(XC(X
式中、a、b、c、d、e、f、g、h及びiはアミノ酸の数であり、Dはアスパラギン酸であり、Eはグルタミン酸であり、Kはリジンであり、Gはグリシンであり、Pはプロリンであり、Yはチロシンであり、Dはアスパラギン酸であり、Cはシステインであり、(X)は任意のアミノ酸であり、aは17、18又は19であり、(X)は任意のアミノ酸であり、bは3、4又は5であり、(X)は任意のアミノ酸であり、cは1であり、(X)は任意のアミノ酸であり、dは17、18又は19であり、(X)は任意のアミノ酸であり、eは5であり、(X)は任意のアミノ酸であり、fは7であり、(X)は任意のアミノ酸であり、gは2、3又は4であり、(X)は、任意のアミノ酸であり、hは、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27又は28であり、(X)は任意のアミノ酸であり、かつにiは2である。
本出願の一実施形態によれば、以下のアミノ酸配列(1)~(3)を含む単離されたトランスポザーゼが提供され得、
(1)DE(XK(XG(XK(XG;
(2)P(XY(XD;及び
(3)C(XC(XC(X
式中、a、b、c、d、e、f、g、h及びiはアミノ酸の数であり、Dはアスパラギン酸であり、Eはグルタミン酸であり、Kはリジンであり、Gはグリシンであり、Pはプロリンであり、Yはチロシンであり、Dはアスパラギン酸であり、Cはシステインであり、(X)は任意のアミノ酸であり、aは17、18又は19であり、(X)は任意のアミノ酸であり、bは3、4又は5であり、(X)は任意のアミノ酸であり、cは1であり、(X)は任意のアミノ酸であり、dは17、18又は19であり、(X)は任意のアミノ酸であり、eは5であり、(X)は任意のアミノ酸であり、fは7であり、(X)は任意のアミノ酸であり、gは2、3又は4であり、(X)は、任意のアミノ酸であり、hは、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27又は28であり、(X)は任意のアミノ酸であり、iは2である。
本出願の一実施形態によれば、本出願に記載のトランスポザーゼをコードする核酸が提供され得る。
本出願の一実施形態によれば、本出願による核酸を含み、プロモータを更に含む核酸構築物が提供され得る。
本出願の一実施形態によれば、5’認識配列を含む核酸セットが提供され得、5’認識配列は、配列番号147~292に示されるヌクレオチド配列の少なくとも1つを含む。
本出願の一実施形態によれば、3’認識配列を含む核酸セットが提供され得、3’認識配列は、配列番号293~438に示されるヌクレオチド配列の少なくとも1つを含む。
本出願の一実施形態によれば、5’認識配列及び3’認識配列を含む核酸セットが提供され得、5’認識配列は、配列番号147~292のいずれか1つに示されるヌクレオチド配列又はそのバリアントを含み、3’認識配列は、配列番号293~438のいずれか1つに示されるヌクレオチド配列又はそのバリアントを含み、核酸セットは、特定のトランスポザーゼによって認識され得る。
本出願の一実施形態によれば、本出願に記載の核酸セットを含み、外因性核酸断片を更に含む核酸セット構築物が提供され得る。
本出願の一実施形態によれば、組成物が提供され得、組成物は、PiggyBacファミリートランスポザーゼ若しくはその機能的断片、又はPiggyBacファミリートランスポザーゼ若しくはその機能的断片をコードする核酸であって、トランスポザーゼ又はその機能的断片が、外因性核酸断片の細胞のゲノムへの挿入を触媒する機能を有する、PiggyBacファミリートランスポザーゼ若しくはその機能的断片、又はPiggyBacファミリートランスポザーゼ若しくはその機能的断片をコードする核酸;及び特定のトランスポザーゼ又はその機能的断片によって認識され得る核酸セットを含む。
本出願の実施形態によれば、本出願に記載のトランスポザーゼをコードする核酸、本出願に記載の核酸、本出願に記載の核酸構築物、本出願に記載の核酸セット、本出願に記載の核酸セット構築物又は本出願に記載の組成物を含む組換えベクターが提供され得る。
本出願の実施形態によれば、本出願に記載のトランスポザーゼ、本出願に記載のトランスポザーゼをコードする核酸、本出願に記載の核酸、本出願に記載の核酸構築物、本出願に記載の核酸セット、本出願に記載の核酸セット構築物、本出願に記載の組成物又は本出願に記載の組換えベクターを含む組換え宿主細胞が提供され得る。
本出願の一実施形態によれば、外因性核酸断片を宿主細胞のゲノムに導入するための方法であって、本出願に記載のトランスポザーゼ、本出願に記載のトランスポザーゼをコードする核酸、本出願に記載の核酸、本出願に記載の核酸構築物、本出願に記載の核酸セット、本出願に記載の核酸セット構築物、本出願に記載の組成物又は本出願に記載の組換えベクターを宿主細胞に送達することを含む、方法が提供され得る。
本出願の一実施形態によれば、宿主細胞のゲノムを編集するための方法であって、本出願に記載のトランスポザーゼ、本出願に記載のトランスポザーゼをコードする核酸、本出願に記載の核酸、本出願に記載の核酸構築物、本出願に記載の核酸セット、本出願に記載の核酸セット構築物、本出願に記載の組成物又は本出願に記載の組換えベクターを宿主細胞に送達することを含む、方法が提供され得る。
本出願の一実施形態によれば、ゲノム中に外因性核酸断片を含有する宿主細胞を得るための方法であって、本出願に記載のトランスポザーゼ、本出願に記載のトランスポザーゼをコードする核酸、本出願に記載の核酸、本出願に記載の核酸構築物、本出願に記載の核酸セット、本出願に記載の核酸セット構築物、本出願に記載の組成物又は本出願に記載の組換えベクターを宿主細胞に送達することを含む、方法が提供され得る。
本出願の一実施形態によれば、外因性核酸断片を宿主細胞のゲノムに導入するための、本出願に記載のトランスポザーゼ、本出願に記載のトランスポザーゼをコードする核酸、本出願に記載の核酸、本出願に記載の核酸構築物、本出願に記載の核酸セット、本出願に記載の核酸セット構築物、本出願に記載の組成物、本出願に記載の組換えベクター、又は本出願に記載の組換え宿主細胞の使用が提供され得る。
本出願の一実施形態によれば、遺伝子治療、細胞治療、ゲノム研究、又は幹細胞誘導及び誘導後分化のための薬剤又は製剤を調製するための、本出願に記載のトランスポザーゼ、本出願に記載のトランスポザーゼをコードする核酸、本出願に記載の核酸、本出願に記載の核酸構築物、本出願に記載の核酸セット、本出願に記載の核酸セット構築物、本出願に記載の組成物、本出願に記載の組換えベクター、又は本出願に記載の組換え宿主細胞の使用が提供され得る。
本出願の実施形態によれば、本出願に記載のトランスポザーゼ、本出願に記載のトランスポザーゼをコードする核酸、本出願に記載の核酸、本出願に記載の核酸構築物、本出願に記載の核酸セット、本出願に記載の核酸セット構築物、本出願に記載の組成物、本出願に記載の組換えベクター又は本出願に記載の組換え宿主細胞を含むキットが提供され得る。
このセクションに記載された内容は、本出願の例の重大な又は重要な特徴を特定することを意図するものではなく、本出願の範囲を限定するために使用されるものではないことを理解されたい。本出願の他の特徴は、以下の説明によって容易に理解されるであろう。
添付の図面は、実施形態を例示的に示し、本明細書の一部を形成し、本明細書の記述と共に実施形態の例示的な実装形態を説明するために使用される。示されている実施形態は、単に例示を目的とするものであり、特許請求の範囲を限定するものではない。添付の図面を通して、同じ参照番号は同様の要素を示すが、必ずしも同じではない。
実施例1のトランスポゾン活性検出システムにおける2つのプラスミドベクターの概略図を示す。プラスミド1はトランスポザーゼ(Tn)を発現するプラスミドであり、プラスミド2はトランスポゾンドナープラスミドである。 実施例2の293T細胞における、PB01_B9、PB01_B10、PB01_B11、PB01_B12、PB01_C3、PB01_C4、PB01_C7、PB01_C8、PB01_C9、PB01_C12、PB01_D1、PB01_D3、PB01_D4、PB02_A2、PB02_A4、PB02_A9、PB02_A12、PB02_B2、PB02_B8、PB02_B9、PB02_C6、PB02_C11、PB02_D3、PB02_D12、PB02_E1、PB02_E4、PB02_E5、PB02_E6、PB02_E7、PB02_E8、PB02_E9、PB02_E10、PB02_E12、PB02_F5、PB02_F11、PB03_A1、PB03_A2、PB03_A3、PB03_A4、PB03_A5、PB03_A6、PB03_A8、PB03_A9、PB03_A10、PB03_A11、PB03_A12、PB03_B2、PB03_B3、PB03_B4、PB03_B5、PB03_B6、PB03_B8、PB03_B10、PB03_B11、PB03_B12、PB03_C1、PB03_C2、PB03_C3、PB03_C4、PB03_C5、PB03_C7、PB03_C8、PB03_C9、PB03_C10、PB03_C11、PB03_D3、PB03_D4、PB03_D5、PB03_D7、PB03_D8、PB03_D9、PB03_D10、PB03_E1、PB03_E6、PB03_E7、PB03_E8、PB03_E9、PB03_E10、PB03_E11、PB03_F1、PB03_F2、PB03_F3、PB03_F4、PB03_F5、PB03_F6、PB03_F7、PB03_F8、PB03_F9、PB03_F11、PB03_F12、PB03_G1、PB03_G2、PB03_G3、PB03_G4、PB03_G6、PB03_G7、PB03_G8、PB03_G9、PB03_G10、PB03_G11、PB03_G12、PB04_A1、PB04_A3、PB04_A5、PB04_A7、PB04_A10、PB04_A11、PB04_A12、PB04_B5、PB04_B7、PB04_B9、PB04_B10、PB04_B12、PB04_C3、PB04_C5、PB04_C8、PB04_C9、PB04_C11、PB04_D1、PB04_D2、PB04_D3、PB04_D4、PB04_D6、PB04_D9、PB04_E3、PB04_E7、PB04_E8、PB04_E9、PB04_E10、PB04_E12、PB04_F1、PB04_F3、PB04_F7、PB04_F8、PB04_F10、PB04_F11、PB04_F12、PB04_G1、PB04_G4、PB04_G7、PB04_G8、PB04_G10、PB04_G12、PB04_D7、PB04_D11、PB04_F2、SB100X、及びPiggyBacの相対的転移効率結果を示す。Tn+はトランスポザーゼプラスミド及びドナープラスミドの共トランスフェクションを表し、Tn-はドナープラスミドのみのトランスフェクションを表す。 図2の部分拡大図である。 実施例3における、PB01_B9、PB01_B10、PB01_B11、PB01_B12、PB01_C3、PB01_C4、PB01_C7、PB01_C8、PB01_C9、PB01_C12、PB01_D1、PB01_D3、PB01_D4、PB02_A2、PB02_A4、PB02_A9、PB02_A12、PB02_B2、PB02_B8、PB02_B9、PB02_C6、PB02_C11、PB02_D3、PB02_D12、PB02_E1、PB02_E4、PB02_E5、PB02_E6、PB02_E7、PB02_E8、PB02_E9、PB02_E10、PB02_E12、PB02_F5、PB02_F11、PB03_A1、PB03_A4、PB03_A5、PB03_A10、PB03_B3、PB03_B12、PB03_C1、PB03_C7、PB03_C11、PB03_D10、PB03_E6、PB03_F1、PB03_F5、PB03_F6、PB03_F7、PB03_F12、PB03_G3、PB03_G4、PB03_G8、PB04_A1、PB04_A3、PB04_A5、PB04_A7、PB04_A10、PB04_A11、PB04_A12、PB04_B5、PB04_B7、PB04_B9、PB04_B10、PB04_B12、PB04_C3、PB04_C5、PB04_C8、PB04_C9、PB04_C11、PB04_D1、PB04_D2、PB04_D3、PB04_D4、PB04_D7、PB04_D9、PB04_D11、PB04_E3、PB04_E7、PB04_E8、PB04_E9、PB04_E10、PB04_E12、PB04_F1、PB04_F2、PB04_F3、PB04_F7、PB04_F10、PB04_F11、PB04_F12、PB04_G1、PB04_G4、PB04_G7、PB04_G8、PB04_G10、及びPB04_G12のクローニングスクリーニング結果を示す。Tn+はトランスポザーゼプラスミド及びドナープラスミドの共トランスフェクションを表し、Tn-はドナープラスミドのみのトランスフェクションを表す。 実施例3における、PB01_B9、PB01_B10、PB01_B11、PB01_B12、PB01_C3、PB01_C4、PB01_C7、PB01_C8、PB01_C9、PB01_C12、PB01_D1、PB01_D3、PB01_D4、PB02_A2、PB02_A4、PB02_A9、PB02_A12、PB02_B2、PB02_B8、PB02_B9、PB02_C6、PB02_C11、PB02_D3、PB02_D12、PB02_E1、PB02_E4、PB02_E5、PB02_E6、PB02_E7、PB02_E8、PB02_E9、PB02_E10、PB02_E12、PB02_F5、PB02_F11、PB03_A1、PB03_A4、PB03_A5、PB03_A10、PB03_B3、PB03_B12、PB03_C1、PB03_C7、PB03_C11、PB03_D10、PB03_E6、PB03_F1、PB03_F5、PB03_F6、PB03_F7、PB03_F12、PB03_G3、PB03_G4、PB03_G8、PB04_A1、PB04_A3、PB04_A5、PB04_A7、PB04_A10、PB04_A11、PB04_A12、PB04_B5、PB04_B7、PB04_B9、PB04_B10、PB04_B12、PB04_C3、PB04_C5、PB04_C8、PB04_C9、PB04_C11、PB04_D1、PB04_D2、PB04_D3、PB04_D4、PB04_D7、PB04_D9、PB04_D11、PB04_E3、PB04_E7、PB04_E8、PB04_E9、PB04_E10、PB04_E12、PB04_F1、PB04_F2、PB04_F3、PB04_F7、PB04_F10、PB04_F11、PB04_F12、PB04_G1、PB04_G4、PB04_G7、PB04_G8、PB04_G10、及びPB04_G12の転移活性検出結果を示す。 図7の部分拡大図である。 実施例2のタンパク質配列に基づくPB01_B9、PB01_B10、PB01_B11、PB01_B12、PB01_C3、PB01_C4、PB01_C7、PB01_C8、PB01_C9、PB01_C12、PB01_D1、PB01_D3、PB01_D4、PB02_A2、PB02_A4、PB02_A9、PB02_A12、PB02_B2、PB02_B8、PB02_B9、PB02_C6、PB02_C11、PB02_D3、PB02_D12、PB02_E1、PB02_E4、PB02_E5、PB02_E6、PB02_E7、PB02_E8、PB02_E9、PB02_E10、PB02_E12、PB02_F5、PB02_F11、PB03_A1、PB03_A2、PB03_A3、PB03_A4、PB03_A5、PB03_A6、PB03_A8、PB03_A9、PB03_A10、PB03_A11、PB03_A12、PB03_B2、PB03_B3、PB03_B4、PB03_B5、PB03_B6、PB03_B8、PB03_B10、PB03_B11、PB03_B12、PB03_C1、PB03_C2、PB03_C3、PB03_C4、PB03_C5、PB03_C7、PB03_C8、PB03_C9、PB03_C10、PB03_C11、PB03_D3、PB03_D4、PB03_D5、PB03_D7、PB03_D8、PB03_D9、PB03_D10、PB03_E1、PB03_E6、PB03_E7、PB03_E8、PB03_E9、PB03_E10、PB03_E11、PB03_F1、PB03_F2、PB03_F3、PB03_F4、PB03_F5、PB03_F6、PB03_F7、PB03_F8、PB03_F9、PB03_F11、PB03_F12、PB03_G1、PB03_G2、PB03_G3、PB03_G4、PB03_G6、PB03_G7、PB03_G8、PB03_G9、PB03_G10、PB03_G11、PB03_G12、PB04_A1、PB04_A3、PB04_A5、PB04_A7、PB04_A10、PB04_A11、PB04_A12、PB04_B5、PB04_B7、PB04_B9、PB04_B10、PB04_B12、PB04_C3、PB04_C5、PB04_C8、PB04_C9、PB04_C11、PB04_D1、PB04_D2、PB04_D3、PB04_D4、PB04_D6、PB04_D9、PB04_E3、PB04_E7、PB04_E8、PB04_E9、PB04_E10、PB04_E12、PB04_F1、PB04_F3、PB04_F7、PB04_F8、PB04_F10、PB04_F11、PB04_F12、PB04_G1、PB04_G4、PB04_G7、PB04_G8、PB04_G10、PB04_G12、PB04_D7、PB04_D11、PB04_F2、及びPiggyBacの進化的分岐図を示す。 実施例2における、PB01_B9、PB01_B10、PB01_B11、PB01_B12、PB01_C3、PB01_C4、PB01_C7、PB01_C8、PB01_C9、PB01_C12、PB01_D1、PB01_D3、PB01_D4、PB02_A2、PB02_A4、PB02_A9、PB02_A12、PB02_B2、PB02_B8、PB02_B9、PB02_C6、PB02_C11、PB02_D3、PB02_D12、PB02_E1、PB02_E4、PB02_E5、PB02_E6、PB02_E7、PB02_E8、PB02_E9、PB02_E10、PB02_E12、PB02_F5、PB02_F11、PB03_A1、PB03_A2、PB03_A3、PB03_A4、PB03_A5、PB03_A6、PB03_A8、PB03_A9、PB03_A10、PB03_A11、PB03_A12、PB03_B2、PB03_B3、PB03_B4、PB03_B5、PB03_B6、PB03_B8、PB03_B10、PB03_B11、PB03_B12、PB03_C1、PB03_C2、PB03_C3、PB03_C4、PB03_C5、PB03_C7、PB03_C8、PB03_C9、PB03_C10、PB03_C11、PB03_D3、PB03_D4、PB03_D5、PB03_D7、PB03_D8、PB03_D9、PB03_D10、PB03_E1、PB03_E6、PB03_E7、PB03_E8、PB03_E9、PB03_E10、PB03_E11、PB03_F1、PB03_F2、PB03_F3、PB03_F4、PB03_F5、PB03_F6、PB03_F7、PB03_F8、PB03_F9、PB03_F11、PB03_F12、PB03_G1、PB03_G2、PB03_G3、PB03_G4、PB03_G6、PB03_G7、PB03_G8、PB03_G9、PB03_G10、PB03_G11、PB03_G12、PB04_A1、PB04_A3、PB04_A5、PB04_A7、PB04_A10、PB04_A11、PB04_A12、PB04_B5、PB04_B7、PB04_B9、PB04_B10、PB04_B12、PB04_C3、PB04_C5、PB04_C8、PB04_C9、PB04_C11、PB04_D1、PB04_D2、PB04_D3、PB04_D4、PB04_D6、PB04_D9、PB04_E3、PB04_E7、PB04_E8、PB04_E9、PB04_E10、PB04_E12、PB04_F1、PB04_F3、PB04_F7、PB04_F8、PB04_F10、PB04_F11、PB04_F12、PB04_G1、PB04_G4、PB04_G7、PB04_G8、PB04_G10、PB04_G12、PB04_D7、PB04_D11、PB04_F2、及びPiggyBacのタンパク質配列類似性の結果を示す。 図11の部分拡大図である。
特に指示がない限り、又は文脈と矛盾しない限り、本明細書で使用される用語又は表現は、本開示の全内容と併せて、及び当業者によって理解されるように読まれるべきである。本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、特に定義されない限り、当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。
本出願において、「核酸」及び「ポリヌクレオチド」という用語は互換的に使用され、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、それらの組み合わせ、及びそれらの類似体を含む、任意の長さのヌクレオチドの重合形態を指す。
本出願において、「ポリペプチド」及び「ペプチド」という用語は互換的に使用され、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指す。したがって、ポリペプチド、オリゴペプチド、タンパク質、抗体及び酵素は全て、ポリペプチドの定義に含まれる。
本出願に記載されるように、配列の「断片」は、配列の一部を指す。例えば、核酸配列の断片は、核酸配列の一部を指し、アミノ酸配列の断片は、アミノ酸配列の一部を指す。
本出願に記載されるように、配列の「バリアント」は、それぞれ参照ポリヌクレオチド又はポリペプチドとは異なるが、本質的な特性を保持するポリヌクレオチド又はポリペプチドである。ポリヌクレオチドの典型的なバリアントは、別の参照ポリヌクレオチドとは核酸配列が異なり、核酸配列の違いは、参照ポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドのアミノ酸配列を変更してもしなくてもよい。ポリペプチドの典型的なバリアントは、別の参照ポリペプチドとはアミノ酸配列が異なる。一般に、相違は、参照ポリペプチド及びバリアントの配列が一般に非常に類似しており、多くの領域で同一であるように制限される。バリアントポリペプチド及び参照ポリペプチドは、任意の組み合わせにおける1つ以上の置換、付加、欠失によってアミノ酸配列が異なり得る。置換又は挿入されたアミノ酸残基は、遺伝暗号によってコードされる残基であってもなくてもよい。ポリヌクレオチド又はポリペプチドのバリアントは、対立遺伝子バリアント等の天然に存在し得るか、又は未知の天然に存在するバリアントであり得る。天然に存在しないポリヌクレオチド及びポリペプチドバリアントは、突然変異誘発技術、直接合成、及び当業者に公知の他の組換え方法によって作製することができる。
アミノ酸は、通常、それらの側鎖の特性によって分類される。例えば、側鎖は、アミノ酸を弱酸(例えば、アミノ酸D及びE)又は弱塩基(例えば、アミノ酸K、R及びH)にし得、側鎖が極性である場合、アミノ酸は親水性になり(例えば、アミノ酸L及びI)、又は側鎖が非極性である場合、アミノ酸は疎水性になる(例えば、アミノ酸S及びC)。
本出願で使用される「ファミリー」という用語は、複製及び変異によって同じ祖先によって産生される高い構造類似性を有する核酸又はタンパク質の群を指し、通常、関連する又は同じ機能を有する。「スーパーファミリー」とは、複製及び変異によって同じ祖先によって産生されたほぼ同じ構造を有する核酸又はタンパク質の群を指し、これらは異なるファミリーに属し、通常は異なる機能を有する。
本出願で使用される「トランスポザーゼ」という用語は、第1の核酸(トランスポザーゼ認識配列及び外因性核酸を含むベクター)からのトランスポゾン(外因性核酸及びその両側にトランスポザーゼ認識配列を含む)の切除及び第2の核酸、すなわち標的部位(例えば、細胞内の標的部位重複(TSD)配列を含むゲノムDNA又は染色体外DNA)への組込みを触媒するポリペプチドを指す。いくつかの実施形態では、トランスポザーゼは、少なくとも1つの末端逆位反復配列(TIR)に結合する。
本出願で使用される「認識配列」という用語は、転移性要素の両端に位置し、転移性第1の核酸配列に隣接する核酸配列を指し、第1の核酸配列の5’末端に位置する認識配列は5’認識配列と呼ばれ、第1の核酸配列の3’末端に位置する認識配列は3’認識配列と呼ばれる。いくつかの実施形態では、認識配列は、トランスポザーゼに結合することができる少なくとも1つの末端逆方向反復配列を含む。
本出願で使用される「核酸構築物」という用語は、本明細書では一本鎖又は二本鎖核酸分子として定義され、好ましくは人工的に構築された核酸分子を指す。任意に、核酸構築物は、適合性条件下で適切な宿主細胞におけるコード配列の発現を指示することができる1つ以上の作動可能に連結された調節配列を更に含む。「発現」という用語は、転写、転写後修飾、翻訳、翻訳後修飾及び分泌を含むがこれらに限定されない、タンパク質又はポリペプチドの産生に関与する任意の工程を含むと理解される。「調節配列」という用語は、本出願のポリペプチド/タンパク質の発現に必要又は有利な全ての成分を含む。各調節配列は、タンパク質又はポリペプチドをコードする核酸配列に天然に存在してもよく、又は外因性であってもよい。これらの調節配列には、リーダー配列、ポリアデニル化[ポリ(A)]シグナル配列、プロペプチド配列、プロモータ、シグナル配列及び転写ターミネーターが含まれるが、これらに限定されない。最低でも、調節配列は、転写及び翻訳のためのプロモータ並びに開始シグナル及び終結シグナルを含むべきである。リンカーを有する調節配列は、タンパク質又はポリペプチドをコードする核酸配列のコード領域に調節配列を連結するための特定の制限部位への導入を目的として提供することができる。
本出願で使用される「プロモータ」という用語は、コード配列の転写を制御することができるポリヌクレオチド配列を指す。プロモータ配列は、RNAポリメラーゼが転写を認識し、結合し、開始することを可能にするのに十分な特異的配列を含む。更に、プロモータ配列は、本出願で提供される核酸構築物又は核酸セット構築物中のRNAポリメラーゼの認識、結合及び転写開始活性を任意に調節する配列を含み得る。プロモータは、プロモータと同じ核酸分子上に位置する遺伝子又はプロモータとは異なる核酸分子上に位置する遺伝子の転写に影響を及ぼし得る。
本出願で使用される「外因性核酸断片」という用語は、任意の目的の遺伝子又は転移可能な任意の遺伝子若しくはその断片を含む。いくつかの非限定的な実施形態では、外因性核酸断片は、末端反復とは異なる起源のものであり、例えば、末端逆位反復とは異なる生物から単離された核酸配列であり、すなわち、外因性核酸断片は、末端逆位反復に対して外因性である。いくつかの非限定的な実施形態では、外因性核酸断片は、宿主細胞とは異なる起源のものであり、例えば、宿主細胞とは異なる生物から単離された核酸配列であり、すなわち、外因性核酸断片は宿主細胞に対して外因性である。
本出願で使用される「宿主細胞」という用語には、動物細胞、植物細胞、藻類細胞、真菌細胞、酵母細胞、又は細菌細胞が含まれるが、これらに限定されない。この用語は、外因性核酸断片が導入された元の細胞の子孫を含む。例示的な宿主細胞には、ヒト胎児腎細胞HEK293Tが含まれる。天然、偶発的又は意図的な突然変異のために、単一の親細胞の子孫は、形態学的に又はゲノム若しくは全DNA相補体に関して元の親と必ずしも同一ではない場合があることが理解される。
本出願で使用される「ベクター」という用語は、それに連結された別の核酸分子を輸送することができる核酸分子を指す。ベクターの例としては、プラスミド、ウイルス、細菌、ファージ及び挿入可能なDNA断片が挙げられるが、これらに限定されない。「プラスミド」という用語は、外因性核酸断片を受容し、原核細胞又は真核細胞で複製することができる環状二本鎖DNAを指す。
トランスポザーゼ
本出願は、単離されたトランスポザーゼを提供し、トランスポザーゼは、以下の(i)から選択されるトランスポザーゼ配列又は(ii)~(iv)においてトランスポザーゼ活性を有する上記トランスポザーゼのバリアント配列を有する:(i)配列番号1~146のいずれか1つに示される少なくとも1つのアミノ酸配列;(ii)配列番号1~146のいずれか1つに示されるアミノ酸配列に対して1、2、3、4、5、6、7、8、9又は10個のアミノ酸の欠失、置換、挿入又は変異を行うことによって得られる配列の少なくとも1つ;(iii)配列番号1~146のいずれか1つに示されるアミノ酸配列と少なくとも70%、80%、90%、95%又は99%の同一性を有するアミノ酸配列の少なくとも1つ;(iv)配列番号1~146のいずれか1つに示されるアミノ酸配列を他の配列と更に融合することによって得られる配列の少なくとも1つ。
本出願の一実施形態によれば、単離されたトランスポザーゼが提供され得、トランスポザーゼは、以下の式に示されるアミノ酸配列を含み、
DE(XK(XG(XK(X
式中、a、b、c及びdはアミノ酸の数であり、Dはアスパラギン酸であり、Eはグルタミン酸であり、Kはリジンであり、Gはグリシンであり、(X)は任意のアミノ酸であり、aは17、18又は19であり、(X)は任意のアミノ酸であり、bは3、4又は5であり、(X)は任意のアミノ酸であり、cは1であり、(X)は任意のアミノ酸であり、dは17、18又は19である。
本出願の一実施形態によれば、単離されたトランスポザーゼが提供され得、トランスポザーゼは、以下の式に示されるアミノ酸配列を含み、
P(XY(X
式中、e及びfはアミノ酸の数であり、Pはプロリンであり、Yはチロシンであり、Dはアスパラギン酸であり、(X)は任意のアミノ酸であり、eは5であり、(X)は任意のアミノ酸であり、fは7である。
本出願の一実施形態によれば、単離されたトランスポザーゼが提供され得、トランスポザーゼは、以下の式に示されるアミノ酸配列を含み、
C(XC(XC(X
式中、g、h及びiはアミノ酸の数であり、Cはシステインであり、(X)は任意のアミノ酸であり、gは2、3又は4であり、(X)は、任意のアミノ酸であり、hは、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27又は28であり、かつに(X)は任意のアミノ酸であり、iは2である。
本出願の一実施形態によれば、以下のアミノ酸配列(1)~(3)の少なくとも2つを含む単離されたトランスポザーゼが提供され得、
(1)DE(XK(XG(XK(XG;
(2)P(XY(XD;又は
(3)C(XC(XC(X
式中、a、b、c、d、e、f、g、h及びiはアミノ酸の数であり、Dはアスパラギン酸であり、Eはグルタミン酸であり、Kはリジンであり、Gはグリシンであり、Pはプロリンであり、Yはチロシンであり、Dはアスパラギン酸であり、Cはシステインであり、(X)は任意のアミノ酸であり、aは17、18又は19であり、(X)は任意のアミノ酸であり、bは3、4又は5であり、(X)は任意のアミノ酸であり、cは1であり、(X)は任意のアミノ酸であり、dは17、18又は19であり、(X)は任意のアミノ酸であり、eは5であり、(X)は任意のアミノ酸であり、fは7であり、(X)は任意のアミノ酸であり、gは2、3又は4であり、(X)は、任意のアミノ酸であり、hは、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27又は28であり、(X)は任意のアミノ酸であり、かつにiは2である。
本出願の一実施形態によれば、以下のアミノ酸配列(1)~(3)を含む単離されたトランスポザーゼが提供され得、
(1)DE(XK(XG(XK(XG;
(2)P(XY(XD;及び
(3)C(XC(XC(X
式中、a、b、c、d、e、f、g、h及びiはアミノ酸の数であり、Dはアスパラギン酸であり、Eはグルタミン酸であり、Kはリジンであり、Gはグリシンであり、Pはプロリンであり、Yはチロシンであり、Dはアスパラギン酸であり、Cはシステインであり、(X)は任意のアミノ酸であり、aは17、18又は19であり、(X)は任意のアミノ酸であり、bは3、4又は5であり、(X)は任意のアミノ酸であり、cは1であり、(X)は任意のアミノ酸であり、dは17、18又は19であり、(X)は任意のアミノ酸であり、eは5であり、(X)は任意のアミノ酸であり、fは7であり、(X)は任意のアミノ酸であり、gは2、3又は4であり、(X)は、任意のアミノ酸であり、hは、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27又は28であり、(X)は任意のアミノ酸であり、iは2である。
いくつかの実施形態では、トランスポザーゼはPiggyBacファミリーに属する。
いくつかの実施形態では、トランスポザーゼの種源には、節足動物(Arthropoda)、扁形動物(Platyhelminthes)、刺胞動物(Cnidaria)、軟体動物(Mollusca)、環形動物(Annelida)、又は脊索動物(Chordata)が含まれる。いくつかの実施形態では、トランスポザーゼの種源には、昆虫類(Insecta)、条鰭類(Actinopteri)、両生類(Amphibia)、有棒状体類(Rhabditophora)、双殻類(Bivalvia)、ヒドロ虫類(Hydrozoa)、ホヤ類(Ascidiacea)、花虫綱(Anthozoa)、又は環帯類(Clitellata)を含む。いくつかの実施形態では、トランスポザーゼの種源は、アエデス・アエギプチ(Aedes aegypti)、アエリア・アクミナータ(Aelia acuminata)、アグリプヌス・ムリヌス(Agrypnus murinus)、アントノマス・グランディス(Anthonomus grandis)、アポデラス・コリリ(Apoderus coryli)、アポロフィラ・ルエネブルゲンシス(Aporophyla lueneburgensis)、アテトミア・セントラゴ(Atethmia centrago)、ブラストバシス・アデュステラ(Blastobasis adustella)、ボンビクス・モリ(Bombyx mori)、マラモトロファ・パデュデラ(Calamotropha paludella)、カトカラ・フラキシーニ(Catocala fraxini)、クリソテウキア・クルメラ(Chrysoteuchia culmella)、シオナ・サヴィニ(Ciona savignyi)、コプトテルメス・フォルモサナス(Coptotermes formosanus)、コレマセラ・マルギナタ(Coremacera marginata)、クラッソストレア・ギガス(Crassostrea gigas)、クラッソストレア・ビルギニカ(Crassostrea virginica)、クリプトテルメ・セクンドゥス(Cryptotermes secundus)、ディブロティカ・ビルギフェラ・ビルギフェラ(Diabrotica virgifera virgifera)、ヅロソフィラ・ビペクチナタ(Drosophila bipectinata)、ドロソフィラ・エレガンス(Drosophila elegans)、キイロショウジョウバエ、エウバシリッサ・レジーナ(Eubasilissa regina)、エウスキストゥス・ヒーロース(Euschistus heros)、ゴニオクテナ・キンクエプンクタタ(Gonioctena quinquepunctata)、ギモソマ・ロツンダタム(Gymnosoma rotundatum)、ヘリコニウス・メルポメン(Heliconius melpomene)、ヘルメチア・イルセンス(Hermetia illucens)、ヘスペロフィラクス・マグヌス(Hesperophylax magnus)、ホマロディスカ・ビトリペニス(Homalodisca vitripennis)、ヒドラ・バルガリス(Hydra vulgaris)、ハイレス・ベスペルティリオ(Hyles vespertilio)、IPSニチドス(IPS nitidus)、IPSタイポグラフス(IPS typographus)、イスチュヌラ・エレガンス(Ischnura elegans)、ランプリゲラ・ユナナ(Lamprigera yunnana)、ラシオマタ・メガラ(Lasiommata megera)、リモニウス・カリフォルニクス(Limonius californicus)、ロクスタ・ミグラトリア(Locusta migratoria)、マカリナ・ノタタ(Macaria notata)、マラチウス・ビプスツラタス(Malachius bipustulatus)、マメストラ・ブラシカエ(Mamestra brassicae)、マラスマルカ・ルナエダクティラ(Marasmarcha lunaedactyla)、マロナス・ボルボニクス(Marronus borbonicus)、マラノタエニア・ボエセマニ(Melanotaenia boesemani)、ミチムナ・イムプラ(Mythimna impura)、ネマトステラ・ベクテニス(Nematostella vectensis)、オクロプルラ・プレクタ(Ochropleura plecta)、オキパス・オレンス(Ocypus olens)、オリウス・インシディオサス(Orius insidiosus)、オリジアス・シネンシス(Oryzias sinensis)、パキリンクス・スルフレオマキュラツス(Pachyrhynchus sulphureomaculatus)、パルナシウス・アポロ(Parnassius apollo)、ペリプラネタ・アメリカナ(Periplaneta americana)、ピエリス・ナピ(Pieris napi)、ピソード・ストロビ(Pissodes strobi)、プラチクネミス・ペニペス(Platycnemis pennipes)、シストセルカ・アメリカナ(Schistocerca americana)、シストセルカ・ピセイフロンス(Schistocerca piceifrons)、シュミドテア・メディテラネア(Schmidtea mediterranea)、セサミア・ノナグリオイデス(Sesamia nonagrioides)、セシア・アピホルミス(Sesia apiformis)、ストフィラス・オリゼ(Sitophilus oryzae)、ソレノプシス・インビクタ(Solenopsis invicta)、テレオグリラス・オシピタリス(Teleogryllus occipitalis)、チメマ・シェパルディ(Timema shepardi)、チメマ・タホエ(Timema tahoe)、ベンディエメネラ・ビアティカ(Vandiemenella viatica)、イェプソロファ・セクエラ(Ypsolopha sequella)、又はゾホバス・アトラタス(Zophobas atratus)を含む。
本出願の一実施形態によれば、本出願に記載のトランスポザーゼをコードする核酸が提供され得る。
本出願の一実施形態によれば、本出願に記載のトランスポザーゼをコードする核酸を含む核酸構築物が提供され得る。いくつかの実施形態では、核酸構築物は、プロモータを更に含む。プロモータは、任意の適切なプロモータ配列、すなわち核酸配列を発現する宿主細胞によって認識され得る核酸配列であり得る。プロモータ配列は、タンパク質又はポリペプチドの発現を媒介する転写調節配列を含む。プロモータは、選択された宿主細胞において転写活性を有する任意の核酸配列(変異型、切断型及びヘテロ接合型プロモータを含む)であり得、宿主細胞に相同又は異種の細胞外若しくは細胞内タンパク質又はポリペプチドをコードする遺伝子に由来し得る。いくつかの実施形態では、プロモータは、CMV、EF1a、SV40、PGK、UbC、ヒトベータアクチン、CAG、TRE、UAS、Ac5、GFAP、ポリヘドリンプロモータ、TBG、ALB、ApoEHCR-hAAT、CaMKIIa、GAL1、TEF1、GDS、ADH1、CaMV35S、Ubi、H1、U6、T7、T7lac、Sp6、araBAD、trp、lac、Ptac又はpLを含む。
いくつかの実施形態では、核酸構築物は、ポリ(A)配列を更に含む。当技術分野で周知のポリ(A)テーリングシグナル配列、並びにポリ(A)テーリングシグナルの種々の切断型を本出願で使用することができる。
いくつかの実施形態では、核酸構築物は、任意の転写終結配列、すなわち、転写を終結させるために宿主細胞によって認識される配列を更に含む。終結配列は、タンパク質又はポリペプチドをコードする核酸配列の3’末端に作動可能に連結されている。選択された宿主細胞において機能的である任意のターミネーターを本発明において使用することができる。
任意に、核酸構築物は、適切なリーダー配列、すなわち宿主細胞における翻訳に重要なmRNA中の非翻訳領域を更に含み得る。リーダー配列は、ポリペプチドをコードする核酸配列の5’末端に作動可能に連結されている。選択された宿主細胞において機能的である任意のリーダー配列を本発明において使用することができる。
任意に、核酸構築物は、ポリペプチドのアミノ末端に位置するアミノ酸配列をコードするプロペプチドコード領域を更に含み得る。得られたポリペプチドは、チモーゲン又はプロポリペプチドと呼ばれる。プロポリペプチドは通常不活性であり、プロポリペプチドからのプロペプチドの触媒的又は自己触媒的切断によって成熟活性ポリペプチドに変換することができる。
任意に、核酸構築物は、宿主細胞の増殖条件に従ってポリペプチドの発現を調節することができる調節配列を更に含み得る。調節配列の例は、調節化合物の存在下を含む化学的又は物理的刺激に応答して遺伝子発現をオン又はオフにする系である。調節配列の他の例は、遺伝子増幅を可能にするものである。これらの例では、タンパク質又はポリペプチドをコードする核酸配列は、調節配列に作動可能に連結されるべきである。
核酸構築物
本出願の一実施形態によれば、5’認識配列を含む核酸セットが提供され得、5’認識配列は、配列番号147~292に示されるヌクレオチド配列の少なくとも1つを含む。
本出願の一実施形態によれば、3’認識配列を含む核酸セットが提供され得、3’認識配列は、配列番号293~438に示されるヌクレオチド配列の少なくとも1つを含む。
本出願の一実施形態によれば、5’認識配列及び3’認識配列を含む核酸セットが提供され得、5’認識配列は、配列番号147~292のいずれか1つに示されるヌクレオチド配列又はそのバリアントを含み、3’認識配列は、配列番号293~438のいずれか1つに示されるヌクレオチド配列又はそのバリアントを含み、核酸セットは、特定のトランスポザーゼによって認識され得る。
いくつかの実施形態では、5’認識配列又は3’認識配列は、長さが1~800nt、1~600nt、1~400nt、1~200nt、1~100nt、5~50nt、5~25nt、又は10~20ntのうちの少なくとも1つの末端逆位反復を含む。
本出願の一実施形態によれば、本出願に記載の核酸セットを含み、外因性核酸断片を更に含む核酸セット構築物が提供され得る。いくつかの実施形態では、外因性核酸断片は、ポリクローナル挿入部位を介して核酸セット構築物に作動可能に挿入され、同じであっても異なっていてもよい1つ以上の外因性核酸断片が存在し得、プロモータを挿入して外因性核酸断片の発現を制御することもできる。いくつかの実施形態では、外因性核酸断片は、目的の任意の遺伝子又は転移可能な任意の遺伝子、例えば天然の機能性タンパク質の遺伝子、人工キメラ遺伝子又は非コードRNAの遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、非コードRNAの遺伝子は、rRNA、tRNA、低分子干渉RNA(siRNA)、核内低分子RNA(snRNA)、核小体低分子RNA(snoRNA)、及びマイクロRNA(miRNA)等の既知の機能を有する様々なRNA及び未知の機能を有するRNAを含む。いくつかの実施形態では、天然の機能性タンパク質の遺伝子は、蛍光系レポーター遺伝子、ルシフェラーゼ遺伝子及び耐性遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、人工キメラ遺伝子は、キメラ抗原受容体の遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、蛍光系レポーター遺伝子は、緑色蛍光タンパク質、赤色蛍光タンパク質、青色蛍光タンパク質又は黄色蛍光タンパク質をコードする遺伝子の少なくとも1つから選択される。いくつかの実施形態では、ルシフェラーゼ遺伝子は、ホタルルシフェラーゼ及び海腎臓ルシフェラーゼをコードする遺伝子のうちの少なくとも1つから選択される。いくつかの実施形態では、耐性遺伝子は、ピューロマイシン耐性、G418耐性、カナマイシン耐性、テトラサイクリン耐性、及びブレオマイシン耐性をコードする遺伝子の少なくとも1つから選択される。
いくつかの実施形態では、プロモータを核酸セット構築物に挿入して、外因性核酸断片の発現を制御することもできる。プロモータは、任意の適切なプロモータ配列、すなわち外因性核酸断片を発現する宿主細胞によって認識され得る核酸配列であり得る。プロモータ配列は、タンパク質又はポリペプチドの発現を媒介する転写調節配列を含む。プロモータは、選択された宿主細胞において転写活性を有する任意の核酸配列(変異型、切断型及びヘテロ接合型プロモータを含む)であり得、宿主細胞に相同又は異種の細胞外若しくは細胞内タンパク質又はポリペプチドをコードする遺伝子に由来し得る。いくつかの実施形態では、プロモータは、CMV、EF1a、SV40、PGK、UbC、ヒトベータアクチン、CAG、TRE、UAS、Ac5、GFAP、ポリヘドリンプロモータ、TBG、ALB、ApoEHCR-hAAT、CaMKIIa、GAL1、TEF1、GDS、ADH1、CaMV35S、Ubi、H1、U6、T7、T7lac、Sp6、araBAD、trp、lac、Ptac又はpLを含む。
いくつかの実施形態では、核酸セット構築物は、外因性核酸断片の発現を制御するための任意の転写終結配列(すなわち、転写を終結させるために宿主細胞によって認識される配列)を更に含む。選択された宿主細胞において機能的である任意のターミネーターを本発明において使用することができる。
任意に、核酸セット構築物は、外因性核酸断片の発現を制御するための適切なリーダー配列(すなわち、宿主細胞における翻訳に重要なmRNA中の非翻訳領域)を更に含み得る。リーダー配列は、ポリペプチドをコードする核酸配列の5’末端に作動可能に連結されている。選択された宿主細胞において機能的である任意のリーダー配列を本発明において使用することができる。
任意に、核酸セット構築物は、外因性核酸断片の発現を制御するためのプロペプチドコード領域を更に含み得、プロペプチドコード領域は、ポリペプチドのアミノ末端に位置するアミノ酸配列をコードする。得られたポリペプチドは、チモーゲン又はプロポリペプチドと呼ばれる。プロポリペプチドは通常不活性であり、プロポリペプチドからのプロペプチドの触媒的又は自己触媒的切断によって成熟活性ポリペプチドに変換することができる。
任意に、核酸セット構築物は、宿主細胞の増殖条件に従って外因性核酸断片の発現を調節することができる調節配列を更に含み得る。調節配列の例は、調節化合物の存在下を含む化学的又は物理的刺激に応答して遺伝子発現をオン又はオフにする系である。調節配列の他の例は、遺伝子増幅を可能にするものである。これらの場合、外因性核酸断片は、調節配列に作動可能に連結されるべきである。
転移組成
本出願の一実施形態によれば、組成物が提供され得、組成物は、PiggyBacファミリートランスポザーゼ若しくはその機能的断片、又はPiggyBacファミリートランスポザーゼ若しくはその機能的断片をコードする核酸であって、トランスポザーゼ又はその機能的断片が、外因性核酸断片の細胞のゲノムへの挿入を触媒する機能を有する、PiggyBacファミリートランスポザーゼ若しくはその機能的断片;並びに特定のトランスポザーゼ又はその機能的断片によって認識され得る、核酸セットを含む。
いくつかの実施形態では、組成物は、以下の群(1)~(147)の少なくとも1つから選択され、及び以下の群(1)~(146)のいずれか1つは、トランスポザーゼ関連配列及び核酸セットを含み、
(1)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号1に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号147に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号293に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(2)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号2に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号148に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号294に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(3)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号3に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号149に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号295に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(4)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号4に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号150に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号296に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(5)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号5に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号151に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号297に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(6)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号6に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号152に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号298に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(7)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号7に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号153に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号299に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(8)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号8に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号154に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号300に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(9)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号9に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号155に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号301に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(10)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号10に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号156に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号302に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(11)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号11に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号157に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号303に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(12)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号12に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号158に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号304に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(13)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号13に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号159に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号305に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(14)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号14に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号160に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号306に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(15)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号15に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号161に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号307に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(16)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号16に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号162に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号308に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(17)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号17に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号163に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号309に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(18)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号18に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号164に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号310に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(19)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号19に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号165に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号311に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(20)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号20に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号166に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号312に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(21)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号21に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号167に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号313に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(22)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号22に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号168に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号314に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(23)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号23に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号169に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号315に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(24)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号24に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号170に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号316に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(25)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号25に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号171に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号317に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(26)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号26に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号172に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号318に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(27)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号27に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号173に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号319に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(28)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号28に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号174に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号320に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(29)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号29に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号175に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号321に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(30)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号30に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号176に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号322に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(31)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号31に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号177に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号323に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(32)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号32に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号178に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号324に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(33)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号33に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号179に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号325に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(34)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号34に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号180に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号326に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(35)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号35に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号181に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号327に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(36)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号36に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号182に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号328に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(37)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号37に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号183に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号329に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(38)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号38に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号184に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号330に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(39)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号39に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号185に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号331に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(40)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号40に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号186に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号332に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(41)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号41に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号187に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号333に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(42)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号42に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号188に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号334に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(43)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号43に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号189に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号335に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(44)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号44に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号190に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号336に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(45)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号45に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号191に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号337に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(46)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号46に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号192に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号338に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(47)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号47に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号193に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号339に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(48)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号48に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号194に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号340に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(49)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号49に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号195に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号341に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(50)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号50に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号196に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号342に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(51)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号51に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号197に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号343に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(52)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号52に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号198に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号344に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(53)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号53に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号199に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号345に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(54)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号54に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号200に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号346に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(55)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号55に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号201に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号347に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(56)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号56に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号202に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号348に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(57)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号57に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号203に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号349に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(58)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号58に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号204に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号350に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(59)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号59に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号205に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号351に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(60)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号60に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号206に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号352に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(61)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号61に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号207に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号353に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(62)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号62に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号208に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号354に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(63)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号63に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号209に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号355に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(64)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号64に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号210に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号356に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(65)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号65に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号211に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号357に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(66)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号66に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号212に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号358に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(67)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号67に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号213に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号359に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(68)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号68に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号214に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号360に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(69)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号69に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号215に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号361に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(70)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号70に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号216に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号362に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(71)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号71に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号217に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号363に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(72)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号72に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号218に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号364に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(73)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号73に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号219に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号365に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(74)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号74に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号220に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号366に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(75)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号75に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号221に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号367に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(76)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号76に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号222に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号368に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(77)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号77に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号223に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号369に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(78)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号78に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号224に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号370に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(79)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号79に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号225に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号371に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(80)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号80に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号226に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号372に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(81)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号81に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号227に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号373に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(82)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号82に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号228に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号374に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(83)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号83に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号229に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号375に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(84)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号84に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号230に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号376に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(85)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号85に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号231に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号377に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(86)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号86に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号232に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号378に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(87)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号87に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号233に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号379に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(88)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号88に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号234に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号380に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(89)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号89に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号235に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号381に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(90)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号90に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号236に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号382に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(91)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号91に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号237に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号383に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(92)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号92に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号238に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号384に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(93)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号93に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号239に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号385に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(94)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号94に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号240に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号386に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(95)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号95に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号241に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号387に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(96)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号96に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号242に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号388に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(97)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号97に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号243に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号389に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(98)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号98に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号244に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号390に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(99)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号99に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号245に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号391に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(100)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号100に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号246に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号392に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(101)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号101に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号247に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号393に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(102)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号102に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号248に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号394に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(103)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号103に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号249に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号395に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(104)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号104に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号250に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号396に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(105)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号105に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号251に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号397に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(106)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号106に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号252に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号398に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(107)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号107に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号253に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号399に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(108)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号108に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号254に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号400に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(109)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号109に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号255に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号401に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(110)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号110に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号256に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号402に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(111)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号111に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号257に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号403に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(112)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号112に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号258に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号404に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(113)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号113に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号259に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号405に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(114)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号114に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号260に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号406に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(115)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号115に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号261に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号407に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(116)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号116に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号262に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号408に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(117)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号117に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号263に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号409に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(118)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号118に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号264に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号410に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(119)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号119に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号265に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号411に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(120)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号120に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号266に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号412に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(121)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号121に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号267に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号413に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(122)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号122に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号268に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号414に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(123)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号123に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号269に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号415に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(124)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号124に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号270に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号416に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(125)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号125に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号271に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号417に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(126)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号126に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号272に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号418に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(127)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号127に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号273に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号419に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(128)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号128に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号274に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号420に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(129)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号129に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号275に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号421に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(130)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号130に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号276に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号422に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(131)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号131に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号277に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号423に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(132)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号132に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号278に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号424に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(133)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号133に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号279に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号425に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(134)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号134に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号280に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号426に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(135)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号135に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号281に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号427に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(136)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号136に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号282に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号428に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(137)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号137に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号283に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号429に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(138)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号138に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号284に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号430に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(139)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号139に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号285に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号431に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(140)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号140に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号286に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号432に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(141)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号141に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号287に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号433に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(142)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号142に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号288に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号434に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(143)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号143に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号289に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号435に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(144)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号144に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号290に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号436に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(145)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号145に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号291に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号437に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(146)トランスポザーゼ関連配列が、配列番号146に示される配列を含むアミノ酸配列又はアミノ酸配列をコードする核酸であり、核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、5’認識配列は、配列番号292に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、3’認識配列は、配列番号438に示される配列を含むヌクレオチド配列である、又は
(147)上記群(1)~(146)のいずれか1つのバリアント
であり、
トランスポザーゼ関連配列は、各群のトランスポザーゼのバリアントのアミノ酸配列又はバリアントをコードする核酸配列であり、バリアントは、以下の(i)~(iii):
(i)各群のトランスポザーゼのアミノ酸配列に対して1、2、3、4、5、6、7、8、9又は10アミノ酸の欠失、置換、挿入又は変異を行うことによって得られる配列の少なくとも1つ;
(ii)配列番号1~146のいずれか1つに示されるアミノ酸配列と少なくとも70%、80%、90%、95%又は99%の同一性を有するアミノ酸配列の少なくとも1つ;及び
(iii)配列番号1~146のいずれか1つに示されるアミノ酸配列を他の配列と更に融合することによって得られる配列の少なくとも1つ
から選択されるトランスポザーゼ活性を有する上記トランスポザーゼのバリアント配列を有する。
いくつかの実施形態では、アミノ酸配列をコードする核酸は、プロモータを更に含む。プロモータは、任意の適切なプロモータ配列、すなわち核酸配列を発現する宿主細胞によって認識され得る核酸配列であり得る。プロモータ配列は、タンパク質又はポリペプチドの発現を媒介する転写調節配列を含む。プロモータは、選択された宿主細胞において転写活性を有する任意の核酸配列(変異型、切断型及びヘテロ接合型プロモータを含む)であり得、宿主細胞に相同又は異種の細胞外若しくは細胞内タンパク質又はポリペプチドをコードする遺伝子に由来し得る。いくつかの実施形態では、プロモータは、CMV、EF1a、SV40、PGK、UbC、ヒトベータアクチン、CAG、TRE、UAS、Ac5、GFAP、ポリヘドリンプロモータ、TBG、ALB、ApoEHCR-hAAT、CaMKIIa、GAL1、TEF1、GDS、ADH1、CaMV35S、Ubi、H1、U6、T7、T7lac、Sp6、araBAD、trp、lac、Ptac又はpLを含む。いくつかの実施形態では、アミノ酸配列をコードする核酸は、ポリ(A)配列を更に含む。当技術分野で周知のポリ(A)テーリングシグナル配列、並びにポリ(A)テーリングシグナルの種々の切断型を本出願で使用することができる。
いくつかの実施形態では、核酸セットは、外因性核酸断片を更に含む。いくつかの実施形態では、外因性核酸断片は、ポリクローナル挿入部位を介して核酸セットに作動可能に挿入され、同じであっても異なっていてもよい1つ以上の外因性核酸断片が存在し得、プロモータを挿入して外因性核酸断片の発現を制御することもできる。いくつかの実施形態では、外因性核酸断片は、目的の任意の遺伝子又は転移可能な任意の遺伝子、例えば天然の機能性タンパク質の遺伝子、人工キメラ遺伝子又は非コードRNAの遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、非コードRNAの遺伝子は、rRNA、tRNA、低分子干渉RNA(siRNA)、核内低分子RNA(snRNA)、核小体低分子RNA(snoRNA)、及びマイクロRNA(miRNA)等の既知の機能を有する様々なRNA及び未知の機能を有するRNAを含む。いくつかの実施形態では、天然の機能性タンパク質の遺伝子は、蛍光系レポーター遺伝子、ルシフェラーゼ遺伝子及び耐性遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、人工キメラ遺伝子は、キメラ抗原受容体の遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、蛍光ベースのレポーター遺伝子は、緑色蛍光タンパク質、赤色蛍光タンパク質、青色蛍光タンパク質、又は黄色蛍光タンパク質をコードする遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、ルシフェラーゼ遺伝子は、ホタルルシフェラーゼ又は海腎ルシフェラーゼをコードする遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、耐性遺伝子は、ピューロマイシン耐性、G418耐性、カナマイシン耐性、テトラサイクリン耐性又はブレオマイシン耐性をコードする遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、プロモータを核酸セットに挿入して、外因性核酸断片の発現を制御することもできる。プロモータは、任意の適切なプロモータ配列、すなわち外因性核酸断片を発現する宿主細胞によって認識され得る核酸配列であり得る。プロモータ配列は、タンパク質又はポリペプチドの発現を媒介する転写調節配列を含む。プロモータは、選択された宿主細胞において転写活性を有する任意の核酸配列(変異型、切断型及びヘテロ接合型プロモータを含む)であり得、宿主細胞に相同又は異種の細胞外若しくは細胞内タンパク質又はポリペプチドをコードする遺伝子に由来し得る。いくつかの実施形態では、プロモータは、CMV、EF1a、SV40、PGK、UbC、ヒトベータアクチン、CAG、TRE、UAS、Ac5、GFAP、ポリヘドリンプロモータ、TBG、ALB、ApoEHCR-hAAT、CaMKIIa、GAL1、TEF1、GDS、ADH1、CaMV35S、Ubi、H1、U6、T7、T7lac、Sp6、araBAD、trp、lac、Ptac又はpLを含む。
いくつかの実施形態では、アミノ酸配列及び/又は核酸セットをコードする核酸は、外因性核酸断片の発現を制御する任意の転写終結配列、すなわち転写を終結させるために宿主細胞によって認識される配列を更に含む。選択された宿主細胞において機能的である任意のターミネーターを本発明において使用することができる。
いくつかの実施形態では、アミノ酸配列及び/又は核酸セットをコードする核酸は、任意の転写終結配列、すなわち転写を終結させるために宿主細胞によって認識される配列を更に含む。終結配列は、タンパク質又はポリペプチドをコードする核酸配列の3’末端に作動可能に連結されている。選択された宿主細胞において機能的である任意のターミネーターを本発明において使用することができる。
任意に、アミノ酸配列及び/又は核酸セットをコードする核酸は、適切なリーダー配列、すなわち宿主細胞における翻訳に重要なmRNA中の非翻訳領域を更に含み得る。リーダー配列は、ポリペプチドをコードする核酸配列の5’末端に作動可能に連結されている。選択された宿主細胞において機能的である任意のリーダー配列を本発明において使用することができる。
任意に、アミノ酸配列及び/又は核酸セットをコードする核酸は、ポリペプチドのアミノ末端に位置するアミノ酸配列をコードするプロペプチドコード領域を更に含み得る。得られたポリペプチドは、チモーゲン又はプロポリペプチドと呼ばれる。プロポリペプチドは通常不活性であり、プロポリペプチドからのプロペプチドの触媒的又は自己触媒的切断によって成熟活性ポリペプチドに変換することができる。
任意に、アミノ酸配列及び/又は核酸セットをコードする核酸は、宿主細胞の増殖条件に従ってポリペプチドの発現を調節することができる調節配列を更に含み得る。調節配列の例は、調節化合物の存在下を含む化学的又は物理的刺激に応答して遺伝子発現をオン又はオフにする系である。調節配列の他の例は、遺伝子増幅を可能にするものである。これらの例では、タンパク質又はポリペプチドをコードする核酸配列は、調節配列に作動可能に連結されるべきである。
組換えベクター、組換え宿主細胞及びキット
本出願の実施形態によれば、本出願に記載のトランスポザーゼをコードする核酸、本出願に記載の核酸、本出願に記載の核酸構築物、本出願に記載の核酸セット、本出願に記載の核酸セット構築物又は本出願に記載の組成物を含む組換えベクターが提供され得る。組換えベクターは、任意の適切なベクターであり得る。いくつかの実施形態では、組換えベクターには、組換えクローニングベクター、組換え真核生物発現プラスミド、又は組換えウイルスベクターが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、組換え真核生物発現プラスミドは、pcDNA3.1、pCMV、pUC18、pUC19、pUC57、pBAD、pET、pENTR、pGenlenti又はpAAVを含む。いくつかの実施形態では、組換えウイルスベクターは、組換えアデノウイルスベクター、組換えアデノ随伴ウイルスベクター、組換えレトロウイルスベクター、組換え単純ヘルペスウイルスベクター、又は組換えワクシニアウイルスベクターを含む。本発明の組換えベクターは、当該分野で周知の方法を用いて構築することができる。例えば、使用される骨格ベクターに含まれる制限部位に応じて、本発明の核酸構築物の両端に適切な制限部位を付加し、次いで、骨格ベクターにロードすることができる。
本出願の実施形態によれば、本出願に記載のトランスポザーゼ、本出願に記載のトランスポザーゼをコードする核酸、本出願に記載の核酸、本出願に記載の核酸構築物、本出願に記載の核酸セット、本出願に記載の核酸セット構築物、本出願に記載の組成物又は本出願に記載の組換えベクターを含む組換え宿主細胞が提供され得る。組換え宿主細胞は、トランスポザーゼが使用され得る任意の宿主細胞であり得る。いくつかの実施形態では、組換え宿主細胞には、動物細胞、植物細胞、藻類細胞、真菌細胞、酵母細胞又は細菌細胞が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、動物細胞は哺乳動物細胞を含む。いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞は、初代細胞(例えば、間葉系幹細胞、内皮細胞、上皮細胞、線維芽細胞、ケラチノサイト、メラノサイト、平滑筋細胞及び免疫細胞)、不死化細胞株(例えば、HEK293、NIH-3T3、RAW-264.7、STO、VERO、CT26、hTERT不死化ヒト内皮/上皮/線維芽細胞/ケラチノサイト/管/細胞株)、癌細胞株(例えば、Hela、HepG2/3、HL-60、HT-1080、HT-29、A549、SW620、HCT-15、HCT116、MDA-MB-231、MCF7、SK-OV-3、PANC-1、AsPc-1、THP-1、Huh7、KG-1、RAJI、HB-CB、Jurkat、K562、CRL5826、CHO、MDCK及びRenca)、胚性幹細胞株(例えば、H1、H9、WIBR2、WIBR3、G-Olig2、ESF158、RW.4、R1及びD3)及びその分化細胞、又は人工多能性幹細胞株及びその分化細胞を含む。
本出願の実施形態によれば、本出願に記載のトランスポザーゼ、本出願に記載のトランスポザーゼをコードする核酸、本出願に記載の核酸、本出願に記載の核酸構築物、本出願に記載の核酸セット、本出願に記載の核酸セット構築物、本出願に記載の組成物、本出願に記載の組換えベクター又は本出願に記載の組換え宿主細胞を含むキットが提供され得る。
方法及び使用
本出願で提供される大断片遺伝子挿入及び組込みのためのトランスポザーゼに基づくツール及び方法は、遺伝子及び細胞療法、動物及び植物における分子育種、並びに工業的微生物工学等の多くの分野に適用することができる。特に細胞療法の分野では、本出願によって提供される転移システムは、細胞免疫療法(CAR-T、CAR-NK、CAR-M等)におけるCAR配列の統合に適用することができ、遺伝子治療の分野では、本出願によって提供される転移システムを使用して、健康な遺伝子を細胞のゲノムに挿入又は組み込み、それによって遺伝子突然変異又は遺伝子欠陥によって引き起こされる疾患の治療を容易にすることができ、分子育種の観点からは、本出願によって提供される転移システムは、イネ、トウモロコシ及びコムギ等の多くの作物を育種するためのツールとして使用することができ、動物及び植物の育種過程を標的化された様式で加速することもでき、また、工業的な微生物工学の観点から、遺伝子発現におけるプラスミドの不安定性や容易な喪失等の欠点により、本出願によって提供される転移系は、微生物の染色体に遺伝子を安定的に組み込むことができる。
本出願の一実施形態によれば、外因性核酸断片を宿主細胞のゲノムに導入するための方法であって、方法は、本出願に記載のトランスポザーゼ、本出願に記載のトランスポザーゼをコードする核酸、本出願に記載の核酸、本出願に記載の核酸構築物、本出願に記載の核酸セット、本出願に記載の核酸セット構築物、本出願に記載の組成物又は本出願に記載の組換えベクターを宿主細胞に送達することを含む、方法が提供され得る。
本出願の一実施形態によれば、宿主細胞のゲノムを編集するための方法であって、方法は、本出願に記載のトランスポザーゼ、本出願に記載のトランスポザーゼをコードする核酸、本出願に記載の核酸、本出願に記載の核酸構築物、本出願に記載の核酸セット、本出願に記載の核酸セット構築物、本出願に記載の組成物又は本出願に記載の組換えベクターを宿主細胞に送達することを含む、方法が提供され得る。
本出願の一実施形態によれば、ゲノム中に外因性核酸断片を含有する宿主細胞を得るための方法であって、本出願に記載のトランスポザーゼ、本出願に記載のトランスポザーゼをコードする核酸、本出願に記載の核酸、本出願に記載の核酸構築物、本出願に記載の核酸セット、本出願に記載の核酸セット構築物、本出願に記載の組成物又は本出願に記載の組換えベクターを宿主細胞に送達することを含む、方法が提供され得る。
宿主細胞への送達方法は、任意の適切な方法であり得る。いくつかの実施形態では、送達方法は、カチオン性リポソーム送達、リポイドナノ粒子送達、カチオン性ポリマー送達、小胞-エキソソーム送達、金ナノ粒子送達、ポリペプチド及びタンパク質送達、レトロウイルス送達、レンチウイルス送達、アデノウイルス送達、アデノ随伴ウイルス送達、エレクトロポレーション、アグロバクテリウム感染又は遺伝子銃を含むが、これらに限定されない。細胞トランスフェクション及び培養の方法は、当技術分野における日常的な方法であり、適切なトランスフェクション及び培養方法は、異なる細胞型に従って選択することができる。
宿主細胞は、トランスポザーゼが使用され得る任意の宿主細胞であり得る。いくつかの実施形態では、宿主細胞には、動物細胞、植物細胞、藻類細胞、真菌細胞、酵母細胞又は細菌細胞が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、動物細胞は哺乳動物細胞を含む。いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞は、初代細胞(例えば、間葉系幹細胞、内皮細胞、上皮細胞、線維芽細胞、ケラチノサイト、メラノサイト、平滑筋細胞及び免疫細胞)、不死化細胞株(例えば、HEK293、NIH-3T3、RAW-264.7、STO、VERO、CT26、hTERT不死化ヒト内皮/上皮/線維芽細胞/ケラチノサイト/管/細胞株)、癌細胞株(例えば、Hela、HepG2/3、HL-60、HT-1080、HT-29、A549、SW620、HCT-15、HCT116、MDA-MB-231、MCF7、SK-OV-3、PANC-1、AsPc-1、THP-1、Huh7、KG-1、RAJI、HB-CB、Jurkat、K562、CRL5826、CHO、MDCK及びRenca)、胚性幹細胞株(例えば、H1、H9、WIBR2、WIBR3、G-Olig2、ESF158、RW.4、R1及びD3)及びその分化細胞、又は人工多能性幹細胞株及びその分化細胞を含む。
本出願の一実施形態によれば、外因性核酸断片を宿主細胞のゲノムに導入するための、本出願に記載のトランスポザーゼ、本出願に記載のトランスポザーゼをコードする核酸、本出願に記載の核酸、本出願に記載の核酸構築物、本出願に記載の核酸セット、本出願に記載の核酸セット構築物、本出願に記載の組成物、本出願に記載の組換えベクター、又は本出願に記載の組換え宿主細胞の使用が提供され得る。宿主細胞は、トランスポザーゼが使用され得る任意の宿主細胞であり得る。いくつかの実施形態では、宿主細胞には、動物細胞、植物細胞、藻類細胞、真菌細胞、酵母細胞又は細菌細胞が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、動物細胞は哺乳動物細胞を含む。いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞は、初代細胞(例えば、間葉系幹細胞、内皮細胞、上皮細胞、線維芽細胞、ケラチノサイト、メラノサイト、平滑筋細胞及び免疫細胞)、不死化細胞株(例えば、HEK293、NIH-3T3、RAW-264.7、STO、VERO、CT26、hTERT不死化ヒト内皮/上皮/線維芽細胞/ケラチノサイト/管/細胞株)、癌細胞株(例えば、Hela、HepG2/3、HL-60、HT-1080、HT-29、A549、SW620、HCT-15、HCT116、MDA-MB-231、MCF7、SK-OV-3、PANC-1、AsPc-1、THP-1、Huh7、KG-1、RAJI、HB-CB、Jurkat、K562、CRL5826、CHO、MDCK及びRenca)、胚性幹細胞株(例えば、H1、H9、WIBR2、WIBR3、G-Olig2、ESF158、RW.4、R1及びD3)及びその分化細胞、又は人工多能性幹細胞株及びその分化細胞を含む。
本出願の一実施形態によれば、遺伝子治療、細胞治療、ゲノム研究、又は幹細胞誘導及び誘導後分化のための薬剤又は製剤を調製するための、本出願に記載のトランスポザーゼ、本出願に記載のトランスポザーゼをコードする核酸、本出願に記載の核酸、本出願に記載の核酸構築物、本出願に記載の核酸セット、本出願に記載の核酸セット構築物、本出願に記載の組成物、本出願に記載の組換えベクター、又は本出願に記載の組換え宿主細胞の使用が提供され得る。
本出願の上記の様々な実施形態及び選好は、(互いに本質的に矛盾しない限り)互いに組み合わせることができ、本出願の使用に適しており、そのような組み合わせによって形成された様々な実施形態は、本出願の一部と見なされる。
本出願の例示的な実施形態は、添付の図面と併せて以下に説明され、理解を容易にするために本出願の例の様々な詳細が含まれる。それらは例示的なものにすぎず、本出願の保護範囲を限定することを意図するものではないと考えられるべきであることを理解されたい。本出願の保護範囲は、特許請求の範囲によってのみ定義される。したがって、当業者は、本出願の範囲から逸脱することなく、本明細書に記載された例に対して様々な変更及び修正を行うことができることを認識すべきである。同様に、明確さ及び簡潔さのために、以下の説明では周知の機能及び構造の説明を省略する。
特に明記しない限り、以下の実施例で使用される試薬及び機器は、市販されている従来の製品である。特に明記しない限り、実験は、従来の条件下又は製造業者が推奨する条件下で行われる。
実施例1:トランスポゾン活性検出システムの構築
候補トランスポゾンの活性を検証するために、抗生物質スクリーニングマーカーと組み合わせた蛍光ベースのレポーター遺伝子の検出系のセットを確立した。システムは、図1に示すように、2つのプラスミドベクターを使用して検証を行った:プラスミド1は、真核細胞において転写を開始することができる構成的プロモータCMV(配列番号499に示す配列)、候補トランスポザーゼの配列(表1に示す)、及び転写を終結させるポリ(A)配列(PA、配列番号500に示す配列)を含む、トランスポザーゼ(Tn)を発現するプラスミドであり、プラスミド2は、GFP遺伝子(配列番号501に示す配列)、ピューロマイシン耐性スクリーニング遺伝子(PuroR、配列番号502に示す配列)、プロモータPGK(配列番号503に示す配列)、P2A(配列番号504に示す配列)及びPoly(A)エレメント(配列番号500に示す配列)を含むトランスポゾンドナープラスミドであり、トランスポザーゼによって特異的に認識され得るトランスポゾン配列(図1のLTF及びRTF、表1に示す配列)がこれらの配列の両端に挿入されていた。
両方のプラスミドをHEK293T細胞に共トランスフェクトした場合、プラスミド1からのトランスポザーゼ遺伝子の転写を開始してトランスポザーゼタンパク質を発現させ、次いでトランスポザーゼタンパク質を認識してプラスミド2上のトランスポゾン認識配列に結合させ、トランスポゾン認識配列、GFP遺伝子及びピューロマイシン耐性遺伝子を含む全ての配列をプラスミドベクターから切断して細胞のゲノムに組み込んだ。一定濃度のピューロマイシンを含む培地で細胞を連続培養した場合、ゲノム中にピューロマイシン耐性遺伝子を含むため、転移事象が生じた細胞のみが生存した。候補トランスポザーゼの転移活性レベルは、生存細胞の数又はモノクローナル細胞を形成するそれらの能力によって反映された。
DNA合成及びプラスミド構築のための方法:
プラスミド1の構築:トランスポザーゼのアミノ酸配列に対応するDNA配列をBeijing Tsingke Biotech Co.,Ltd.及びGENERAL Biosystems(Anhui)Co.,Ltd.によって合成し、5’末端のEcoRI部位及び3’末端のNotI部位を介してCMVプロモータエレメントを含むプラスミドベクターpICOZにクローニングして、CMVプロモータの制御下で真核細胞においてトランスポザーゼ遺伝子を転写し、続いて機能性タンパク質に翻訳した。
プラスミド2の構築:トランスポゾン配列(末端逆位反復配列を含む)はトランスポザーゼのオープンリーディングフレームの両側に位置し、左側のトランスポゾン断片(LTF)は、5’末端の標的部位重複(TSD)配列からトランスポザーゼ開始コドンの前の配列までの全てのDNA配列を含み、右側のトランスポゾン断片(RTF)は、トランスポザーゼ停止コドンの後の最初の塩基から3’末端のTSD配列までの全てのDNA配列を含む。原則として、トランスポザーゼによって認識される両側の末端反復は、両側のトランスポゾン配列にそれぞれ含まれる。LTF及びRTF断片をBGI Tech Solutions(Beijing Liuhe)Co.,Ltd.によって合成し、LTFがPGKプロモータの上流に位置し、RTFがポリ(A)の下流に位置するように、PGKプロモータ、ピューロマイシン耐性遺伝子(PuroR)、P2A、緑色蛍光タンパク質遺伝子(GFP)及びポリ(A)等の要素を含むpMVプラスミドベクターにそれぞれクローニングした。
プラスミド1はプラスミド2に1つずつ対応する。
実施例2:転移活性のハイスループットスクリーニング
2.1 細胞処理(0日目):
ホタルルシフェラーゼ遺伝子を安定に発現するHEK293T細胞(市販品)をハイスループットスクリーニングアッセイのために樹立した。対数増殖期まで培養した場合は、0.25%Trypsin(Thermo)で消化して単一細胞に分散し、PDL(Sigma)でプレコートした96ウェル細胞培養プレートに細胞濃度1.0×10細胞/ウェルで添加し、37℃、5%CO条件下で終夜培養した。
2.2 細胞トランスフェクション(1日目):
各トランスポゾン系に対応する2つのプラスミドを、プラスミド1を20ng、プラスミド2を10ngの用量で混合した後、トランスフェクション試薬Lipofectamine 2000(Thermo)とトランスフェクション用プラスミドの質量(μg):トランスフェクション試薬(μL)の体積1:2で混合し、室温で15分間放置してトランスフェクション複合体を形成させた。トランスフェクション複合体を細胞培養プレートに移し、細胞と共にインキュベートし、スクリーニングする各試料について2つの並行試験を実施した。
2.3 細胞スクリーニング(3日目)
トランスフェクションの48時間後、培養培地を、2μg/mLピューロマイシン(Invivogen)、10%ウシ胎児血清及び1%ペニシリン/ストレプトマイシン(Thermo)を含有するDMEM(Thermo)スクリーニング培地に交換し、37℃、5%COで4日間培養した。次いで、細胞を0.25%トリプシンで単一細胞に消化し、1:5の比で希釈し、PDLで予めコーティングした別の96ウェル培養プレートに移し、2μg/mLピューロマイシン、10%ウシ胎児血清及び1%ペニシリン/ストレプトマイシンを含有するDMEMスクリーニング培地中、37℃で4日間培養した。
2.4 細胞生存率の検出(11日目)
2.4.1 検出試薬の調製: Steady-Glo(登録商標)Luciferase Assay System(Promega)をPBSと体積比1:5で混合した。検出試薬は50μL/ウェルの用量で調製し、5mLの検出試薬を96ウェルプレート用に調製した。
2.4.2 ピューロマイシンによって8日間スクリーニングした細胞をインキュベーターから取り出した。培地を除去した後、検出試薬を50μL/ウェルの用量で添加した。暗所で室温で5分間インキュベートした後、発光検出機能を有する多機能マイクロプレートリーダーを検出に使用した。ピューロマイシンスクリーニング後に生存した細胞が多いほど、検出された発光シグナルが強くなり、試料のより高い転移活性を示した。
2.5 統計結果
ハイスループットスクリーニング中、陽性及び陰性対照を各プレートに設定した。各孔のマイクロプレートリーダーによって検出された発光信号の読み取り値に応じて、陽性対照(SB100X)の平均読み取り値に対する各試料の読み取り値の倍率変化が計算される。次いで、各試料のこのように計算された倍率変化を不活性トランスポザーゼ(PB03_D1)の計算された倍率変化で除算し、図2及び表2に示すように全てのトランスポザーゼの相対的転移活性を得た。
実施例3:転移活性アッセイ
3.1 細胞処理(0日目):
HEK293T細胞(市販品)を対数増殖期まで培養した後、0.25%トリプシン(Thermo)で消化し、単一細胞に分散させ、PDL(Sigma)でプレコートした24ウェル細胞培養プレートに細胞濃度1.2×10細胞/ウェルで添加し、37℃、5%CO条件下で終夜培養した。
3.2 細胞トランスフェクション(1日目):
各トランスポゾン系に対応する2つのプラスミドを、プラスミド1を200ng、プラスミド2を100ngの用量で混合した後、トランスフェクション試薬Lipofectamine 2000(Thermo)とトランスフェクション用プラスミドの質量(μg):トランスフェクション試薬(μL)の体積1:2で混合し、室温で15分間放置してトランスフェクション複合体を形成させた。トランスフェクション複合体を細胞培養プレートに移し、細胞と共にインキュベートし、スクリーニングする各試料について2つの並行試験を実施した。
3.3 細胞スクリーニング(3日目)
トランスフェクションの48時間後、細胞を消化し、0.25%トリプシンで単一細胞に分散させ、細胞を、2μg/mLピューロマイシン(Invivogen)、10%ウシ胎児血清及び1%ペニシリン/ストレプトマイシン(Thermo)を含有し、1:2000に希釈した、DMEM(Thermo)スクリーニング培地に添加し、更なる培養のために6ウェル培養プレートに移した。ピューロマイシン耐性培地で10日間連続スクリーニング培養した後、クローンを計数し、トランスポザーゼの転移活性を計算した。
3.4 細胞染色(13日目)
ピューロマイシンでスクリーニングし、6ウェルプレートで培養した細胞をPBSで洗浄し、次いで、4%パラホルムアルデヒドで室温で15分間固定した。廃液を捨て、0.2%メチレンブルー染色液を細胞に加えた。細胞を室温で1時間染色した。染色した細胞クローンをPBSで洗浄し、イメージングシステム(BioRad)で撮影した。各ウェル中の細胞クローンの数を計数した。HEK293T細胞における本出願のトランスポザーゼのクローニング及びスクリーニング結果は、図6に示す通りであった。ピューロマイシン耐性スクリーニング後の生存細胞クローンの染色結果は図に示す通りであり、転移事象が首尾よく起こったことを示した。各試料について、Tn+はトランスポザーゼプラスミドとドナープラスミドの同時トランスフェクションを表し、Tn-は陰性対照としてドナープラスミドのみのトランスフェクションを表す。
3.5 統計結果
転移活性の統計結果は、図7及び表3に示す通りであった。Tn+はトランスポザーゼプラスミド及びドナープラスミドの共トランスフェクションを表し、Tn-はドナープラスミドのみのトランスフェクションを表す。図中のy軸は、計算による転移活性の割合を示し、具体的な計算式は以下の通りであった。転移効率(%)=1ウェル当たりの細胞クローン数/(1ウェル当たりの播種細胞数×トランスフェクション効率(GFP陽性細胞%))×100%。
上記の全ての実施例の実行中、2つのトランスポゾンSB100X及びPiggyBacを、本出願のトランスポザーゼの転移活性を評価するための陽性対照として使用した。これらの2つのトランスポゾンは、最近特許を取得した市販のDNAトランスポゾンであり、Ma’te’s et al.(Molecular evolution of a novel hyperactive Sleeping Beauty transposase enables robust stable gene transfer in vertebrates,Nature Genetics,2009 41(6):753-761)及びCary,L.C.et al.(Transposon mutagenesis of baculoviruses:analysis of Trichoplusia ni transposon IFP2 insertions within the FP-locus of nuclear polyhedrosis viruses,Virology,1989,172(1):156-169)によって報告された配列を参照して、実施例1と同じ方法を使用して合成し、対応するプラスミドベクターにクローニングした。
本出願のトランスポザーゼの転移活性の統計結果は、図2及び図7に示す通りであった。以上の結果から、本出願の146個のトランスポザーゼ(PB01_B9、PB01_B10、PB01_B11、PB01_B12、PB01_C3、PB01_C4、PB01_C7、PB01_C8、PB01_C9、PB01_C12、PB01_D1、PB01_D3、PB01_D4、PB02_A2、PB02_A4、PB02_A9、PB02_A12、PB02_B2、PB02_B8、PB02_B9、PB02_C6、PB02_C11、PB02_D3、PB02_D12、PB02_E1、PB02_E4、PB02_E5、PB02_E6、PB02_E7、PB02_E8、PB02_E9、PB02_E10、PB02_E12、PB02_F5、PB02_F11、PB03_A1、PB03_A2、PB03_A3、PB03_A4、PB03_A5、PB03_A6、PB03_A8、PB03_A9、PB03_A10、PB03_A11、PB03_A12、PB03_B2、PB03_B3、PB03_B4、PB03_B5、PB03_B6、PB03_B8、PB03_B10、PB03_B11、PB03_B12、PB03_C1、PB03_C2、PB03_C3、PB03_C4、PB03_C5、PB03_C7、PB03_C8、PB03_C9、PB03_C10、PB03_C11、PB03_D3、PB03_D4、PB03_D5、PB03_D7、PB03_D8、PB03_D9、PB03_D10、PB03_E1、PB03_E6、PB03_E7、PB03_E8、PB03_E9、PB03_E10、PB03_E11、PB03_F1、PB03_F2、PB03_F3、PB03_F4、PB03_F5、PB03_F6、PB03_F7、PB03_F8、PB03_F9、PB03_F11、PB03_F12、PB03_G1、PB03_G2、PB03_G3、PB03_G4、PB03_G6、PB03_G7、PB03_G8、PB03_G9、PB03_G10、PB03_G11、PB03_G12、PB04_A1、PB04_A3、PB04_A5、PB04_A7、PB04_A10、PB04_A11、PB04_A12、PB04_B5、PB04_B7、PB04_B9、PB04_B10、PB04_B12、PB04_C3、PB04_C5、PB04_C8、PB04_C9、PB04_C11、PB04_D1、PB04_D2、PB04_D3、PB04_D4、PB04_D6、PB04_D9、PB04_E3、PB04_E7、PB04_E8、PB04_E9、PB04_E10、PB04_E12、PB04_F1、PB04_F3、PB04_F7、PB04_F8、PB04_F10、PB04_F11、PB04_F12、PB04_G1、PB04_G4、PB04_G7、PB04_G8、PB04_G10、PB04_G12、PB04_D7、PB04_D11、及びPB04_F2)は、良好な転移活性を有することが示された。
一方、不活性又は低転移活性を有する多数のトランスポザーゼもスクリーニングプロセス中に見出された(例えば、本出願の表1のPB01_A5、PB01_A7、PB01_B1、PB01_B3、PB01_B6、PB01_B8、PB01_E3、PB01_E9、PB01_F3、PB01_F12、PB02_B1、PB02_B4、PB02_B11、PB02_B12、PB02_C12、PB02_D8、PB02_E2、PB02_F2、PB02_F4、PB03_D1)。不活性又は低転移活性を有するこれらのトランスポザーゼと比較して、本出願の146個のトランスポザーゼの転移活性は著しく高く(PB01_B9、PB01_B10、PB01_B11、PB01_B12、PB01_C3、PB01_C4、PB01_C7、PB01_C8、PB01_C9、PB01_C12、PB01_D1、PB01_D3、PB01_D4、PB02_A2、PB02_A4、PB02_A9、PB02_A12、PB02_B2、PB02_B8、PB02_B9、PB02_C6、PB02_C11、PB02_D3、PB02_D12、PB02_E1、PB02_E4、PB02_E5、PB02_E6、PB02_E7、PB02_E8、PB02_E9、PB02_E10、PB02_E12、PB02_F5、PB02_F11、PB03_A1、PB03_A2、PB03_A3、PB03_A4、PB03_A5、PB03_A6、PB03_A8、PB03_A9、PB03_A10、PB03_A11、PB03_A12、PB03_B2、PB03_B3、PB03_B4、PB03_B5、PB03_B6、PB03_B8、PB03_B10、PB03_B11、PB03_B12、PB03_C1、PB03_C2、PB03_C3、PB03_C4、PB03_C5、PB03_C7、PB03_C8、PB03_C9、PB03_C10、PB03_C11、PB03_D3、PB03_D4、PB03_D5、PB03_D7、PB03_D8、PB03_D9、PB03_D10、PB03_E1、PB03_E6、PB03_E7、PB03_E8、PB03_E9、PB03_E10、PB03_E11、PB03_F1、PB03_F2、PB03_F3、PB03_F4、PB03_F5、PB03_F6、PB03_F7、PB03_F8、PB03_F9、PB03_F11、PB03_F12、PB03_G1、PB03_G2、PB03_G3、PB03_G4、PB03_G6、PB03_G7、PB03_G8、PB03_G9、PB03_G10、PB03_G11、PB03_G12、PB04_A1、PB04_A3、PB04_A5、PB04_A7、PB04_A10、PB04_A11、PB04_A12、PB04_B5、PB04_B7、PB04_B9、PB04_B10、PB04_B12、PB04_C3、PB04_C5、PB04_C8、PB04_C9、PB04_C11、PB04_D1、PB04_D2、PB04_D3、PB04_D4、PB04_D6、PB04_D9、PB04_E3、PB04_E7、PB04_E8、PB04_E9、PB04_E10、PB04_E12、PB04_F1、PB04_F3、PB04_F7、PB04_F8、PB04_F10、PB04_F11、PB04_F12、PB04_G1、PB04_G4、PB04_G7、PB04_G8、PB04_G10、PB04_G12、PB04_D7、PB04_D11、及びPB04_F2)、それらのほとんどはSB100X及びPiggyBacのそれに匹敵するかそれよりも良好であった。
更に、図10は、タンパク質配列に基づく本出願におけるPiggyBacスーパーファミリーのトランスポゾンの進化的分岐図を示した。図11は、本出願におけるPiggyBacスーパーファミリーのトランスポゾン間のタンパク質配列類似性(%)を示した。結果は、これらのトランスポゾンがスーパーファミリーの異なる分岐をカバーし、PiggyBacも含まれることを示した。
上記は本出願の好ましい例にすぎず、本出願を限定することを意図するものではないことを述べるべきである。当業者にとって、本出願に対して様々な修正及び変更を行うことができる。特定の実施形態を説明したが、出願人又は当業者にとって、上記の実施形態の置換、修正、変更、改良、及び実質的な等価物は存在し得るか、又は現時点では予測することができない。したがって、提出された添付の特許請求の範囲及び修正され得る特許請求の範囲は、そのような全ての置換、修正、変更、改良、及び実質的な均等物を網羅することを意図している。技術が進化するにつれて、本明細書に記載された多くの要素が、本出願の後に現れる同等の要素で置き換えられ得ることが重要である。
上記は本出願の好ましい例にすぎず、本出願を限定することを意図するものではないことを述べるべきである。当業者にとって、本出願に対して様々な修正及び変更を行うことができる。特定の実施形態を説明したが、出願人又は当業者にとって、上記の実施形態の置換、修正、変更、改良、及び実質的な等価物は存在し得るか、又は現時点では予測することができない。したがって、提出された添付の特許請求の範囲及び修正され得る特許請求の範囲は、そのような全ての置換、修正、変更、改良、及び実質的な均等物を網羅することを意図している。技術が進化するにつれて、本明細書に記載された多くの要素が、本出願の後に現れる同等の要素で置き換えられ得ることが重要である。
以下に、出願当初の特許請求の範囲に記載された発明を付記する。
[1] 単離されたトランスポザーゼであって、前記トランスポザーゼが、以下の(i)又は(ii)~(iv)においてトランスポザーゼ活性を有する前記トランスポザーゼのバリアント配列を有する、単離されたトランスポザーゼから選択されるトランスポザーゼ配列:
(i)配列番号1~146のいずれか1つに示される少なくとも1つのアミノ酸配列;
(ii)配列番号1~146のいずれか1つに示されるアミノ酸配列に対して1、2、3、4、5、6、7、8、9又は10個のアミノ酸の欠失、置換、挿入又は変異を行うことによって得られる配列の少なくとも1つ;
(iii)配列番号1~146のいずれか1つに示されるアミノ酸配列と少なくとも70%、80%、90%、95%又は99%の同一性を有するアミノ酸配列の少なくとも1つ;及び
(iv)配列番号1~146のいずれか1つに示されるアミノ酸配列を他の配列と更に融合することによって得られる配列の少なくとも1つ。
[2] 単離されたトランスポザーゼであって、前記トランスポザーゼが、以下の式:
DE(X K(X G(X K(X
に示されるアミノ酸配列を含み、式中
a、b、c及びdはアミノ酸の数であり、
Dはアスパラギン酸であり、
Eはグルタミン酸であり、
Kはリジンであり、
Gはグリシンであり、
(X )は任意のアミノ酸であり、aは17、18又は19であり、
(X )は任意のアミノ酸であり、bは3、4又は5であり、
(X )は任意のアミノ酸であり、cは1であり、かつに
(X )は任意のアミノ酸であり、dは17、18又は19である、
単離されたトランスポザーゼ。
[3] 単離されたトランスポザーゼであって、前記トランスポザーゼが、以下の式:
P(X Y(X
に示されるアミノ酸配列を含み、式中
e及びfはアミノ酸の数であり、
Pはプロリンであり、
Yはチロシンであり、
Dはアスパラギン酸であり、
(X )は任意のアミノ酸であり、eは5であり、かつに
(X )は任意のアミノ酸であり、fは7である、
単離されたトランスポザーゼ。
[4] 単離されたトランスポザーゼであって、前記トランスポザーゼが、以下の式:
C(X C(X C(X
に示されるアミノ酸配列を含み、式中
g、h及びiはアミノ酸の数であり、
Cはシステインであり、
(X )は任意のアミノ酸であり、gは2、3又は4であり、
(X )は、任意のアミノ酸であり、hは、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27又は28であり、かつに
(X )は任意のアミノ酸であり、iは2である、
単離されたトランスポザーゼ。
[5] 単離されたトランスポザーゼであって、前記トランスポザーゼが、以下のアミノ酸配列(1)~(3):
(1)DE(X K(X G(X K(X G;
(2)P(X Y(X D;又は
(3)C(X C(X C(X C;
の少なくとも2つを含み、式中
a、b、c、d、e、f、g、h及びiはアミノ酸の数であり、
Dはアスパラギン酸であり、Eはグルタミン酸であり、Kはリジンであり、Gはグリシンであり、Pはプロリンであり、Yはチロシンであり、Dはアスパラギン酸であり、Cはシステインであり、
(X )は任意のアミノ酸であり、aは17、18又は19であり、
(X )は任意のアミノ酸であり、bは3、4又は5であり、
(X )は任意のアミノ酸であり、cは1であり、
(X )は任意のアミノ酸であり、dは17、18又は19であり、
(X )は任意のアミノ酸であり、eは5であり、
(X )は任意のアミノ酸であり、fは7であり、
(X )は任意のアミノ酸であり、gは2、3又は4であり、
(X )は、任意のアミノ酸であり、hは、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27又は28であり、
(X )は任意のアミノ酸であり、かつにiは2である、
単離されたトランスポザーゼ。
[6] 単離されたトランスポザーゼであって、前記トランスポザーゼが、以下のアミノ酸配列(1)~(3):
(1)DE(X K(X G(X K(X G;
(2)P(X Y(X D;及び
(3)C(X C(X C(X C;
を含み、式中、
a、b、c、d、e、f、g、h及びiはアミノ酸の数であり、
Dはアスパラギン酸であり、Eはグルタミン酸であり、Kはリジンであり、Gはグリシンであり、Pはプロリンであり、Yはチロシンであり、Dはアスパラギン酸であり、Cはシステインであり、
(X )は任意のアミノ酸であり、aは17、18又は19であり、
(X )は任意のアミノ酸であり、bは3、4又は5であり、
(X )は任意のアミノ酸であり、cは1であり、
(X )は任意のアミノ酸であり、dは17、18又は19であり、
(X )は任意のアミノ酸であり、eは5であり、
(X )は任意のアミノ酸であり、fは7であり、
(X )は任意のアミノ酸であり、gは2、3又は4であり、
(X )は、任意のアミノ酸であり、hは、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27又は28であり、
(X )は任意のアミノ酸であり、iは2である、
単離されたトランスポザーゼ。
[7] 前記トランスポザーゼがPiggyBacファミリーに属する、[1]~[6]のいずれか1つに記載のトランスポザーゼ。
[8] 前記トランスポザーゼの種源が、節足動物(Arthropoda)、扁形動物(Platyhelminthes)、刺胞動物(Cnidaria)、軟体動物(Mollusca)、環形動物(Annelida)、又は脊索動物(Chordata)を含む、[1]~[7]のいずれか1つに記載のトランスポザーゼ。
[9] 前記トランスポザーゼの種源が、昆虫類(Incecta)、条鰭類(Actinopteri)、両生類(Amphibia)、有棒状体類(Rhabditophora)、双殻類(Bivalvia)、ヒドロ虫類(Hydrozoa)、ホヤ類(Ascidiacea)、花虫綱(Anthozoa)、又は環帯類(Clitellata)を含む、[8]に記載のトランスポザーゼ。
[10] 前記トランスポザーゼの種源が、アエデス・アエギプチ(Aedes aegypti)、アエリア・アクミナータ(Aelia acuminata)、アグリプヌス・ムリヌス(Agrypnus murinus)、アントノマス・グランディス(Anthonomus grandis)、アポデラス・コリリ(Apoderus coryli)、アポロフィラ・ルエネブルゲンシス(Aporophyla lueneburgensis)、アテトミア・セントラゴ(Atethmia centrago)、ブラストバシス・アデュステラ(Blastobasis adustella)、ボンビクス・モリ(Bombyx mori)、カラモトロファ・パルデラ(Calamotropha paludella)、カトカラ・フラキシーニ(Catocala fraxini)、クリソテウキア・クルメラ(Chrysoteuchia culmella)、シオナ・サヴィニ(Ciona savignyi)、コプトテルメス・フォルモサナス(Coptotermes formosanus)、コレマセラ・マルギナタ(Coremacera marginata)、クラッソストレア・ギガス(Crassostrea gigas)、クラッソストレア・ビルギニカ(Crassostrea virginica)、クリプトテルメ・セクンドゥス(Cryptotermes secundus)、ディブロティカ・ビルギフェラ・ビルギフェラ(Diabrotica virgifera virgifera)、ドロソフィラ・ビペクチナタ(Drosophila bipectinata)、ドロソフィラ・エレガンス(Drosophila elegans)、エウバシリッサ・レジーナ(Eubasilissa regina)、エウスキストゥス・ヒーロース(Euschistus heros)、ゴニオクテナ・キンクエプンクタタ(Gonioctena quinquepunctata)、ギモソマ・ロツンダタム(Gymnosoma rotundatum)、ヘリコニウス・メルポメン(Heliconius melpomene)、ヘルメチア・イルセンス(Hermetia illucens)、ヘスペロフィラクス・マグヌス(Hesperophylax magnus)、ホマロディスカ・ビトリペニス(Homalodisca vitripennis)、ヒドラ・バルガリス(Hydra vulgaris)、ハイレス・ベスペルティリオ(Hyles vespertilio)、IPSニチドス(IPS nitidus)、IPSタイポグラフス(IPS typographus)、イスチュヌラ・エレガンス(Ischnura elegans)、ランプリゲラ・ユナナ(Lamprigera yunnana)、ラシオマタ・メガラ(Lasiommata megera)、リモニウス・カリフォルニクス(Limonius californicus)、ロクスタ・ミグラトリア(Locusta migratoria)、マカリナ・ノタタ(Macaria notata)、マラチウス・ビプスツラタス(Malachius bipustulatus)、マメストラ・ブラシカエ(Mamestra brassicae)、マラスマルカ・ルナエダクティラ(Marasmarcha lunaedactyla)、マロナス・ボルボニクス(Marronus borbonicus)、マラノタエニア・ボエセマニ(Melanotaenia boesemani)、ミチムナ・イムプラ(Mythimna impura)、ネマトステラ・ベクテニス(Nematostella vectensis)、オクロプルラ・プレクタ(Ochropleura plecta)、オキパス・オレンス(Ocypus olens)、オリウス・インシディオサス(Orius insidiosus)、オリジアス・シネンシス(Oryzias sinensis)、パキリンクス・スルフレオマキュラツス(Pachyrhynchus sulphureomaculatus)、パルナシウス・アポロ(Parnassius apollo)、ペリプラネタ・アメリカナ(Periplaneta americana)、フィラエヌス・スプマリウス(Philaenus spumarius)、フィロンサス・コグナトゥス(Philonthus cognatus)、ピエリス・ナピ(Pieris napi)、ピソード・ストロビ(Pissodes strobi)、プラチクネミス・ペニペス(Platycnemis pennipes)、シストセルカ・アメリカナ(Schistocerca americana)、シストセルカ・ピセイフロンス(Schistocerca piceifrons)、シュミドテア・メディテラネア(Schmidtea mediterranea)、セサミア・ノナグリオイデス(Sesamia nonagrioides)、セシア・アピホルミス(Sesia apiformis)、ストフィラス・オリゼ(Sitophilus oryzae)、ソレノプシス・インビクタ(Solenopsis invicta)、テレオグリラス・オシピタリス(Teleogryllus occipitalis)、チメマ・シェパルディ(Timema shepardi)、チメマ・タホエ(Timema tahoe)、ベンディエメネラ・ビアティカ(Vandiemenella viatica)、イェプソロファ・セクエラ(Ypsolopha sequella)、又はゾホバス・アトラタス(Zophobas atratus)を含む、[9]に記載のトランスポザーゼ。
[11] [1]~[10]のいずれか1つに記載のトランスポザーゼをコードする核酸。
[12] [11]に記載の核酸を含む核酸構築物。
[13] 前記核酸構築物が、プロモータを更に含む、[12]に記載の核酸構築物。
[14] 前記プロモータが、CMV、EF1a、SV40、PGK、UbC、ヒトベータアクチン、CAG、TRE、UAS、Ac5、GFAP、ポリヘドリンプロモータ、TBG、ALB、ApoEHCR-hAAT、CaMKIIa、GAL1、TEF1、GDS、ADH1、CaMV35S、Ubi、H1、U6、T7、T7lac、Sp6、araBAD、trp、lac、Ptac又はpLを含む、[13]に記載の核酸構築物。
[15] 前記核酸構築物が、ポリ(A)配列を更に含む、[13]に記載の核酸構築物。
[16] 5’認識配列を含む、核酸セットであって、前記5’認識配列が、配列番号147~292に示されるヌクレオチド配列の少なくとも1つを含む、核酸セット。
[17] 3’認識配列を含む、核酸セットであって、前記3’認識配列が、配列番号293~438に示されるヌクレオチド配列の少なくとも1つを含む、核酸セット。
[18] 5’認識配列及び3’認識配列を含む、核酸セットであって、前記5’認識配列が、配列番号147~292のいずれか1つに示されるヌクレオチド配列又はそのバリアントを含み、前記3’認識配列が、配列番号293~438のいずれか1つに示されるヌクレオチド配列又はそのバリアントを含み、前記核酸セットが、特定のトランスポザーゼによって認識され得る、核酸セット。
[19] 前記5’認識配列又は前記3’認識配列が、長さが1~800nt、1~600nt、1~400nt、1~200nt、1~100nt、5~50nt、5~25nt、又は10~20ntの少なくとも1つの末端逆位反復配列を含む、[16]~[18]のいずれか1つに記載の核酸セット。
[20] [16]~[19]のいずれか1つに記載の核酸セットを含み、外因性核酸断片を更に含む、核酸セット構築物。
[21] 前記外因性核酸断片が、ポリクローナル挿入部位を介して前記核酸セット構築物に作動可能に挿入され、同じであるか又は異なり得る1つ以上の外因性核酸断片が存在し得、また、プロモータを挿入して外因性核酸断片の発現を制御することができる、[20]に記載の核酸セット構築物。
[22] 前記外因性核酸断片が、目的の任意の遺伝子又は転移可能な任意の遺伝子、例えば天然の機能性タンパク質の遺伝子、人工キメラ遺伝子又は非コードRNAの遺伝子を含む、[21]に記載の核酸セット構築物。
[23] 前記天然の機能性タンパク質の遺伝子が、蛍光系レポーター遺伝子、ルシフェラーゼ遺伝子及び耐性遺伝子を含む、[22]に記載の核酸セット構築物。
[24] 前記蛍光系レポーター遺伝子が、緑色蛍光タンパク質、赤色蛍光タンパク質、青色蛍光タンパク質又は黄色蛍光タンパク質をコードする遺伝子の少なくとも1つから選択される、[23]に記載の核酸セット構築物。
[25] 前記ルシフェラーゼ遺伝子が、ホタルルシフェラーゼ又は海腎ルシフェラーゼをコードする遺伝子の少なくとも1つから選択される、[23]に記載の核酸セット構築物。
[26] 前記耐性遺伝子が、ピューロマイシン耐性、G418耐性、カナマイシン耐性、テトラサイクリン耐性又はブレオマイシン耐性をコードする遺伝子の少なくとも1つから選択される、[23]に記載の核酸セット構築物。
[27] 前記人工キメラ遺伝子が、キメラ抗原受容体の遺伝子を含む、[22]に記載の核酸セット構築物。
[28] 前記プロモータが、CMV、EF1a、SV40、PGK、UbC、ヒトベータアクチン、CAG、TRE、UAS、Ac5、GFAP、ポリヘドリンプロモータ、TBG、ALB、ApoEHCR-hAAT、CaMKIIa、GAL1、TEF1、GDS、ADH1、CaMV35S、Ubi、H1、U6、T7、T7lac、Sp6、araBAD、trp、lac、Ptac又はpLを含む、[21]に記載の核酸セット構築物。
[29] 組成物であって、前記組成物が、
PiggyBacファミリートランスポザーゼ若しくはその機能的断片、又は前記PiggyBacファミリートランスポザーゼ若しくはその機能的断片をコードする核酸であって、前記トランスポザーゼ又はその機能的断片が、外因性核酸断片の細胞の前記ゲノムへの挿入を触媒する機能を有する、PiggyBacファミリートランスポザーゼ若しくはその機能的断片、又は前記PiggyBacファミリートランスポザーゼ若しくはその機能的断片をコードする核酸;及び
特定のトランスポザーゼ又はその機能的断片によって認識され得る核酸セット
を含む、組成物。
[30] 前記組成物が、以下の群(1)~(147)の少なくとも1つから選択され、及び以下の群(1)~(146)のいずれか1つが、トランスポザーゼ関連配列及び核酸セットを含み、
(1)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号1に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号147に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号293に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(2)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号2に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号148に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号294に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(3)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号3に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号149に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号295に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(4)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号4に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号150に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号296に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(5)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号5に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号151に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号297に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(6)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号6に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号152に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号298に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(7)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号7に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号153に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号299に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(8)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号8に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号154に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号300に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(9)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号9に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号155に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号301に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(10)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号10に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号156に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号302に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(11)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号11に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号157に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号303に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(12)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号12に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号158に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号304に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(13)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号13に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号159に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号305に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(14)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号14に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号160に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号306に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(15)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号15に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号161に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号307に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(16)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号16に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号162に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号308に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(17)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号17に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号163に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号309に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(18)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号18に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号164に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号310に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(19)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号19に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号165に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号311に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(20)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号20に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号166に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号312に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(21)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号21に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号167に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号313に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(22)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号22に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号168に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号314に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(23)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号23に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号169に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号315に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(24)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号24に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号170に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号316に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(25)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号25に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号171に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号317に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(26)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号26に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号172に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号318に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(27)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号27に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号173に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号319に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(28)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号28に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号174に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号320に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(29)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号29に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号175に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号321に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(30)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号30に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号176に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号322に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(31)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号31に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号177に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号323に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(32)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号32に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号178に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号324に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(33)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号33に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号179に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号325に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(34)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号34に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号180に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号326に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(35)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号35に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号181に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号327に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(36)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号36に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号182に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号328に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(37)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号37に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号183に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号329に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(38)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号38に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号184に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号330に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(39)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号39に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号185に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号331に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(40)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号40に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号186に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号332に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(41)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号41に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号187に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号333に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(42)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号42に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号188に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号334に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(43)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号43に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号189に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号335に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(44)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号44に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号190に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号336に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(45)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号45に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号191に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号337に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(46)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号46に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号192に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号338に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(47)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号47に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号193に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号339に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(48)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号48に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号194に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号340に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(49)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号49に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号195に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号341に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(50)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号50に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号196に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号342に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(51)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号51に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号197に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号343に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(52)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号52に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号198に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号344に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(53)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号53に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号199に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号345に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(54)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号54に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号200に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号346に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(55)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号55に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号201に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号347に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(56)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号56に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号202に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号348に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(57)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号57に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号203に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号349に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(58)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号58に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号204に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号350に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(59)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号59に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号205に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号351に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(60)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号60に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号206に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号352に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(61)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号61に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号207に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号353に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(62)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号62に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号208に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号354に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(63)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号63に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号209に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号355に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(64)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号64に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号210に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号356に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(65)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号65に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号211に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号357に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(66)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号66に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号212に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号358に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(67)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号67に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号213に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号359に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(68)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号68に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号214に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号360に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(69)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号69に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号215に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号361に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(70)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号70に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号216に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号362に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(71)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号71に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号217に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号363に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(72)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号72に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号218に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号364に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(73)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号73に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号219に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号365に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(74)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号74に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号220に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号366に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(75)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号75に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号221に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号367に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(76)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号76に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号222に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号368に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(77)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号77に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号223に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号369に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(78)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号78に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号224に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号370に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(79)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号79に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号225に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号371に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(80)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号80に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号226に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号372に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(81)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号81に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号227に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号373に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(82)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号82に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号228に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号374に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(83)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号83に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号229に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号375に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(84)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号84に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号230に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号376に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(85)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号85に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号231に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号377に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(86)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号86に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号232に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号378に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(87)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号87に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号233に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号379に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(88)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号88に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号234に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号380に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(89)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号89に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号235に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号381に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(90)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号90に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号236に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号382に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(91)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号91に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号237に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号383に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(92)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号92に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号238に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号384に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(93)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号93に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号239に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号385に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(94)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号94に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号240に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号386に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(95)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号95に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号241に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号387に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(96)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号96に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号242に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号388に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(97)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号97に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号243に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号389に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(98)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号98に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号244に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号390に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(99)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号99に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号245に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号391に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(100)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号100に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号246に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号392に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(101)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号101に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号247に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号393に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(102)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号102に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号248に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号394に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(103)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号103に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号249に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号395に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(104)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号104に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号250に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号396に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(105)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号105に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号251に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号397に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(106)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号106に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号252に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号398に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(107)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号107に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号253に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号399に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(108)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号108に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号254に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号400に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(109)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号109に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号255に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号401に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(110)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号110に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号256に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号402に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(111)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号111に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号257に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号403に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(112)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号112に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号258に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号404に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(113)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号113に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号259に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号405に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(114)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号114に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号260に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号406に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(115)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号115に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号261に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号407に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(116)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号116に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号262に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号408に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(117)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号117に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号263に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号409に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(118)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号118に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号264に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号410に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(119)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号119に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号265に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号411に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(120)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号120に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号266に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号412に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(121)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号121に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号267に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号413に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(122)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号122に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号268に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号414に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(123)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号123に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号269に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号415に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(124)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号124に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号270に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号416に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(125)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号125に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号271に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号417に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(126)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号126に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号272に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号418に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(127)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号127に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号273に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号419に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(128)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号128に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号274に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号420に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(129)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号129に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号275に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号421に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(130)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号130に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号276に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号422に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(131)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号131に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号277に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号423に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(132)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号132に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号278に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号424に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(133)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号133に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号279に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号425に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(134)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号134に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号280に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号426に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(135)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号135に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号281に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号427に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(136)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号136に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号282に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号428に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(137)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号137に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号283に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号429に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(138)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号138に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号284に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号430に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(139)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号139に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号285に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号431に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(140)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号140に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号286に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号432に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(141)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号141に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号287に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号433に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(142)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号142に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号288に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号434に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(143)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号143に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号289に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号435に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(144)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号144に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号290に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号436に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(145)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号145に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号291に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号437に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
(146)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号146に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号292に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号438に示される配列を含むヌクレオチド配列である、又は
(147)前記群(1)~(146)のいずれか1つのバリアント
であり、
前記トランスポザーゼ関連配列は、各群の前記トランスポザーゼのバリアントのアミノ酸配列又は前記バリアントをコードする核酸配列であり、前記バリアントは、以下の(i)~(iii):
(i)各群の前記トランスポザーゼのアミノ酸配列に対して1、2、3、4、5、6、7、8、9又は10アミノ酸の欠失、置換、挿入又は変異を行うことによって得られる配列の少なくとも1つ;
(ii)配列番号1~146のいずれか1つに示されるアミノ酸配列と少なくとも70%、80%、90%、95%又は99%の同一性を有するアミノ酸配列の少なくとも1つ;及び
(iii)配列番号1~146のいずれか1つに示されるアミノ酸配列を他の配列と更に融合することによって得られる配列の少なくとも1つ
から選択されるトランスポザーゼ活性を有する前記トランスポザーゼのバリアント配列を有する、[29]に記載の組成物。
[31] 前記核酸セットがプロモータを更に含む、[29]又は[30]に記載の組成物。
[32] 前記プロモータが、CMV、EF1a、SV40、PGK、UbC、ヒトベータアクチン、CAG、TRE、UAS、Ac5、GFAP、ポリヘドリンプロモータ、TBG、ALB、ApoEHCR-hAAT、CaMKIIa、GAL1、TEF1、GDS、ADH1、CaMV35S、Ubi、H1、U6、T7、T7lac、Sp6、araBAD、trp、lac、Ptac又はpLを含む、[31]に記載の組成物。
[33] 前記核酸セットがポリ(A)配列を更に含む、[29]又は[30]に記載の組成物。
[34] 前記核酸セットが外因性核酸断片を更に含む、[29]~[33]のいずれか1つに記載の組成物。
[35] 前記外因性核酸断片が、ポリクローナル挿入部位を介して前記核酸セットに作動可能に挿入され、前記同じであっても異なっていてもよい1つ以上の外因性核酸断片が存在し得、プロモータを挿入して前記外因性核酸断片の発現を制御することもできる、[34]に記載の組成物。
[36] 前記外因性核酸断片が、目的の任意の遺伝子又は転移可能な任意の遺伝子、例えば天然の機能性タンパク質の遺伝子、人工キメラ遺伝子又は非コードRNAの遺伝子を含む、[35]に記載の組成物。
[37] 前記天然の機能性タンパク質の遺伝子が、蛍光系レポーター遺伝子、ルシフェラーゼ遺伝子又は耐性遺伝子を含む、[36]に記載の組成物。
[38] 前記蛍光ベースのレポーター遺伝子が、緑色蛍光タンパク質、赤色蛍光タンパク質、青色蛍光タンパク質、又は黄色蛍光タンパク質をコードする遺伝子を含む、[37]に記載の組成物。
[39] 前記ルシフェラーゼ遺伝子が、ホタルルシフェラーゼ又は海腎ルシフェラーゼをコードする遺伝子を含む、[37]に記載の組成物。
[40] 前記耐性遺伝子が、ピューロマイシン耐性、G418耐性、カナマイシン耐性、テトラサイクリン耐性又はブレオマイシン耐性をコードする遺伝子を含む、[37]に記載の組成物。
[41] 前記人工キメラ遺伝子が、キメラ抗原受容体の遺伝子を含む、[36]に記載の組成物。
[42] 前記プロモータが、CMV、EF1a、SV40、PGK、UbC、ヒトベータアクチン、CAG、TRE、UAS、Ac5、GFAP、ポリヘドリンプロモータ、TBG、ALB、ApoEHCR-hAAT、CaMKIIa、GAL1、TEF1、GDS、ADH1、CaMV35S、Ubi、H1、U6、T7、T7lac、Sp6、araBAD、trp、lac、Ptac又はpLを含む、[35]に記載の組成物。
[43] [1]~[10]のいずれか1つに記載のトランスポザーゼをコードする核酸、[11]に記載の核酸、[12]~[15]のいずれか1つに記載の核酸構築物、[16]~[19]のいずれか1つに記載の核酸セット、[20]~[28]のいずれか1つに記載の核酸セット構築物又は[29]~[42]のいずれか1つに記載の組成物を含む、組換えベクター。
[44] 前記組み換えベクターが、組換えクローニングベクター、組換え真核生物発現プラスミド又は組換えウイルスベクターを含む、[43]に記載の組換えベクター。
[45] 前記組換え真核生物発現プラスミドが、pcDNA3.1、pCMV、pUC18、pUC19、pUC57、pBAD、pET、pENTR、pGenlenti又はpAAVを含む、[44]に記載の組換えベクター。
[46] 前記組換えウイルスベクターが、組換えアデノウイルスベクター、組換えアデノ随伴ウイルスベクター、組換えレトロウイルスベクター、組換え単純ヘルペスウイルスベクター、又は組換えワクシニアウイルスベクターを含む、[44]に記載の組換えベクター。
[47] [1]~[10]のいずれか1つに記載のトランスポザーゼ、[1]~[10]のいずれか1つに記載のトランスポザーゼをコードする核酸、[11]に記載の核酸、[12]~[15]のいずれか1つに記載の核酸構築物、[16]~[19]のいずれか1つに記載の核酸セット、[20]~[28]のいずれか1つに記載の核酸セット構築物、[29]~[42]のいずれか1つに記載の組成物、又は[43]~[46]のいずれか1つに記載の組換えベクターを含む、組換え宿主細胞。
[48] 前記組み換え宿主細胞が、動物細胞、植物細胞、藻類細胞、真菌細胞、酵母細胞又は細菌細胞を含む、[47]に記載の組換え宿主細胞。
[49] 前記動物細胞が哺乳動物細胞を含む、[48]に記載の組換え宿主細胞。
[50] 前記哺乳動物細胞が、初代細胞(例えば、間葉系幹細胞、内皮細胞、上皮細胞、線維芽細胞、ケラチノサイト、メラノサイト、平滑筋細胞及び免疫細胞)、不死化細胞株(例えば、HEK293、NIH-3T3、RAW-264.7、STO、VERO、CT26、hTERT不死化ヒト内皮/上皮/線維芽細胞/ケラチノサイト/管/細胞株)、癌細胞株(例えば、Hela、HepG2/3、HL-60、HT-1080、HT-29、A549、SW620、HCT-15、HCT116、MDA-MB-231、MCF7、SK-OV-3、PANC-1、AsPc-1、THP-1、Huh7、KG-1、RAJI、HB-CB、Jurkat、K562、CRL5826、CHO、MDCK及びRenca)、胚性幹細胞株(例えば、H1、H9、WIBR2、WIBR3、G-Olig2、ESF158、RW.4、R1及びD3)及びその分化細胞、又は人工多能性幹細胞株及びその分化細胞を含む、[49]に記載の組換え宿主細胞。
[51] 外因性核酸断片を宿主細胞の前記ゲノムに導入する方法であって、[1]~[10]のいずれか1つに記載のトランスポザーゼ、[1]~[10]のいずれか1つに記載のトランスポザーゼをコードする核酸、[11]に記載の核酸、[12]~[15]のいずれか1つに記載の核酸構築物、[16]~[19]のいずれか1つに記載の核酸セット、[20]~[28]のいずれか1つに記載の核酸セット構築物、[29]~[42]のいずれか1つに記載の組成物、又は[43]~[46]のいずれか1つに記載の組換えベクターを宿主細胞に送達することを含む、外因性核酸断片を宿主細胞のゲノムに導入する方法。
[52] 宿主細胞の前記ゲノムを編集するための方法であって、[1]~[10]のいずれか1つに記載のトランスポザーゼ、[1]~[10]のいずれか1つに記載のトランスポザーゼをコードする核酸、[11]に記載の核酸、[12]~[15]のいずれか1つに記載の核酸構築物、[16]~[19]のいずれか1つに記載の核酸セット、[20]~[28]のいずれか1つに記載の核酸セット構築物、[29]~[42]のいずれか1つに記載の組成物、又は[43]~[46]のいずれか1つに記載の組換えベクターを宿主細胞に送達することを含む、宿主細胞のゲノムを編集するための方法。
[53] 前記ゲノム中に外因性核酸断片を含有する宿主細胞を得るための方法であって、[1]~[10]のいずれか1つに記載のトランスポザーゼ、[1]~[10]のいずれか1つに記載のトランスポザーゼをコードする核酸、[11]に記載の核酸、[12]~[15]のいずれか1つに記載の核酸構築物、[16]~[19]のいずれか1つに記載の核酸セット、[20]~[28]のいずれか1つに記載の核酸セット構築物、[29]~[42]のいずれか1つに記載の組成物、又は[43]~[46]のいずれか1つに記載の組換えベクターを宿主細胞に送達することを含む、ゲノム中に外因性核酸断片を含有する宿主細胞を得るための方法。
[54] 前記送達方法が、カチオン性リポソーム送達、リポイドナノ粒子送達、カチオン性ポリマー送達、小胞-エキソソーム送達、金ナノ粒子送達、ポリペプチド及びタンパク質送達、レトロウイルス送達、レンチウイルス送達、アデノウイルス送達、アデノ随伴ウイルス送達、エレクトロポレーション、アグロバクテリウム感染又は遺伝子銃を含む、[51]~[53]のいずれか1つに記載の方法。
[55] 前記宿主細胞が、動物細胞、植物細胞、藻類細胞、真菌細胞、酵母細胞又は細菌細胞を含む、[51]~[53]のいずれか1つに記載の方法。
[56] 前記動物細胞が哺乳動物細胞を含む、[55]に記載の方法。
[57] 前記哺乳動物細胞が、初代細胞(例えば、間葉系幹細胞、内皮細胞、上皮細胞、線維芽細胞、ケラチノサイト、メラノサイト、平滑筋細胞及び免疫細胞)、不死化細胞株(例えば、HEK293、NIH-3T3、RAW-264.7、STO、VERO、CT26、hTERT不死化ヒト内皮/上皮/線維芽細胞/ケラチノサイト/管/細胞株)、癌細胞株(例えば、Hela、HepG2/3、HL-60、HT-1080、HT-29、A549、SW620、HCT-15、HCT116、MDA-MB-231、MCF7、SK-OV-3、PANC-1、AsPc-1、THP-1、Huh7、KG-1、RAJI、HB-CB、Jurkat、K562、CRL5826、CHO、MDCK及びRenca)、胚性幹細胞株(例えば、H1、H9、WIBR2、WIBR3、G-Olig2、ESF158、RW.4、R1及びD3)及びその分化細胞、又は人工多能性幹細胞株及びその分化細胞を含む、[56]に記載の方法。
[58] 宿主細胞の前記ゲノムに外因性核酸断片を導入するための、[1]~[10]のいずれか1つに記載のトランスポザーゼ、[1]~[10]のいずれか1つに記載のトランスポザーゼをコードする核酸、[11]に記載の核酸、[12]~[15]のいずれか1つに記載の核酸構築物、[16]~[19]のいずれか1つに記載の核酸セット、[20]~[28]のいずれか1つに記載の核酸セット構築物、[29]~[42]のいずれか1つに記載の組成物、[43]~[46]のいずれか1つに記載の組換えベクター、又は[47]~[50]のいずれか1つに記載の組換え宿主細胞の使用。
[59] 前記宿主細胞が、動物細胞、植物細胞、藻類細胞、真菌細胞、酵母細胞又は細菌細胞を含む、[58]に記載の使用。
[60] 前記動物細胞が哺乳動物細胞を含む、[59]に記載の使用。
[61] 前記哺乳動物細胞が、初代細胞(例えば、間葉系幹細胞、内皮細胞、上皮細胞、線維芽細胞、ケラチノサイト、メラノサイト、平滑筋細胞及び免疫細胞)、不死化細胞株(例えば、HEK293、NIH-3T3、RAW-264.7、STO、VERO、CT26、hTERT不死化ヒト内皮/上皮/線維芽細胞/ケラチノサイト/管/細胞株)、癌細胞株(例えば、Hela、HepG2/3、HL-60、HT-1080、HT-29、A549、SW620、HCT-15、HCT116、MDA-MB-231、MCF7、SK-OV-3、PANC-1、AsPc-1、THP-1、Huh7、KG-1、RAJI、HB-CB、Jurkat、K562、CRL5826、CHO、MDCK及びRenca)、胚性幹細胞株(例えば、H1、H9、WIBR2、WIBR3、G-Olig2、ESF158、RW.4、R1及びD3)及びその分化細胞、又は人工多能性幹細胞株及びその分化細胞を含む、[60]に記載の使用。
[62] 遺伝子療法、細胞療法、ゲノム研究、又は幹細胞誘導及び誘導後分化のための薬物又は調製物を調製するための、[1]~[10]のいずれか1つに記載のトランスポザーゼ、[1]~[10]のいずれか1つに記載のトランスポザーゼをコードする核酸、[11]に記載の核酸、[12]~[15]のいずれか1つに記載の核酸構築物、[16]~[19]のいずれか1つに記載の核酸セット、[20]~[28]のいずれか1つに記載の核酸セット構築物、[29]~[42]のいずれか1つに記載の組成物、[43]~[46]のいずれか1つに記載の組換えベクター、又は[47]~[50]のいずれか1つに記載の組換え宿主細胞の使用。
[63] [1]~[10]のいずれか1つに記載のトランスポザーゼ、[1]~[10]のいずれか1つに記載のトランスポザーゼをコードする核酸、[11]に記載の核酸、[12]~[15]のいずれか1つに記載の核酸構築物、[16]~[19]のいずれか1つに記載の核酸セット、[20]~[28]のいずれか1つに記載の核酸セット構築物、[29]~[42]のいずれか1つに記載の組成物、[43]~[46]のいずれか1つに記載の組換えベクター、又は[47]~[50]のいずれか1つに記載の組換え宿主細胞を含むキット。

Claims (63)

  1. 単離されたトランスポザーゼであって、前記トランスポザーゼが、以下の(i)又は(ii)~(iv)においてトランスポザーゼ活性を有する前記トランスポザーゼのバリアント配列を有する、単離されたトランスポザーゼから選択されるトランスポザーゼ配列:
    (i)配列番号1~146のいずれか1つに示される少なくとも1つのアミノ酸配列;
    (ii)配列番号1~146のいずれか1つに示されるアミノ酸配列に対して1、2、3、4、5、6、7、8、9又は10個のアミノ酸の欠失、置換、挿入又は変異を行うことによって得られる配列の少なくとも1つ;
    (iii)配列番号1~146のいずれか1つに示されるアミノ酸配列と少なくとも70%、80%、90%、95%又は99%の同一性を有するアミノ酸配列の少なくとも1つ;及び
    (iv)配列番号1~146のいずれか1つに示されるアミノ酸配列を他の配列と更に融合することによって得られる配列の少なくとも1つ。
  2. 単離されたトランスポザーゼであって、前記トランスポザーゼが、以下の式:
    DE(XK(XG(XK(X
    に示されるアミノ酸配列を含み、式中
    a、b、c及びdはアミノ酸の数であり、
    Dはアスパラギン酸であり、
    Eはグルタミン酸であり、
    Kはリジンであり、
    Gはグリシンであり、
    (X)は任意のアミノ酸であり、aは17、18又は19であり、
    (X)は任意のアミノ酸であり、bは3、4又は5であり、
    (X)は任意のアミノ酸であり、cは1であり、かつに
    (X)は任意のアミノ酸であり、dは17、18又は19である、
    単離されたトランスポザーゼ。
  3. 単離されたトランスポザーゼであって、前記トランスポザーゼが、以下の式:
    P(XY(X
    に示されるアミノ酸配列を含み、式中
    e及びfはアミノ酸の数であり、
    Pはプロリンであり、
    Yはチロシンであり、
    Dはアスパラギン酸であり、
    (X)は任意のアミノ酸であり、eは5であり、かつに
    (X)は任意のアミノ酸であり、fは7である、
    単離されたトランスポザーゼ。
  4. 単離されたトランスポザーゼであって、前記トランスポザーゼが、以下の式:
    C(XC(XC(X
    に示されるアミノ酸配列を含み、式中
    g、h及びiはアミノ酸の数であり、
    Cはシステインであり、
    (X)は任意のアミノ酸であり、gは2、3又は4であり、
    (X)は、任意のアミノ酸であり、hは、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27又は28であり、かつに
    (X)は任意のアミノ酸であり、iは2である、
    単離されたトランスポザーゼ。
  5. 単離されたトランスポザーゼであって、前記トランスポザーゼが、以下のアミノ酸配列(1)~(3):
    (1)DE(XK(XG(XK(XG;
    (2)P(XY(XD;又は
    (3)C(XC(XC(XC;
    の少なくとも2つを含み、式中
    a、b、c、d、e、f、g、h及びiはアミノ酸の数であり、
    Dはアスパラギン酸であり、Eはグルタミン酸であり、Kはリジンであり、Gはグリシンであり、Pはプロリンであり、Yはチロシンであり、Dはアスパラギン酸であり、Cはシステインであり、
    (X)は任意のアミノ酸であり、aは17、18又は19であり、
    (X)は任意のアミノ酸であり、bは3、4又は5であり、
    (X)は任意のアミノ酸であり、cは1であり、
    (X)は任意のアミノ酸であり、dは17、18又は19であり、
    (X)は任意のアミノ酸であり、eは5であり、
    (X)は任意のアミノ酸であり、fは7であり、
    (X)は任意のアミノ酸であり、gは2、3又は4であり、
    (X)は、任意のアミノ酸であり、hは、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27又は28であり、
    (X)は任意のアミノ酸であり、かつにiは2である、
    単離されたトランスポザーゼ。
  6. 単離されたトランスポザーゼであって、前記トランスポザーゼが、以下のアミノ酸配列(1)~(3):
    (1)DE(XK(XG(XK(XG;
    (2)P(XY(XD;及び
    (3)C(XC(XC(XC;
    を含み、式中、
    a、b、c、d、e、f、g、h及びiはアミノ酸の数であり、
    Dはアスパラギン酸であり、Eはグルタミン酸であり、Kはリジンであり、Gはグリシンであり、Pはプロリンであり、Yはチロシンであり、Dはアスパラギン酸であり、Cはシステインであり、
    (X)は任意のアミノ酸であり、aは17、18又は19であり、
    (X)は任意のアミノ酸であり、bは3、4又は5であり、
    (X)は任意のアミノ酸であり、cは1であり、
    (X)は任意のアミノ酸であり、dは17、18又は19であり、
    (X)は任意のアミノ酸であり、eは5であり、
    (X)は任意のアミノ酸であり、fは7であり、
    (X)は任意のアミノ酸であり、gは2、3又は4であり、
    (X)は、任意のアミノ酸であり、hは、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27又は28であり、
    (X)は任意のアミノ酸であり、iは2である、
    単離されたトランスポザーゼ。
  7. 前記トランスポザーゼがPiggyBacファミリーに属する、請求項1~6のいずれか一項に記載のトランスポザーゼ。
  8. 前記トランスポザーゼの種源が、節足動物(Arthropoda)、扁形動物(Platyhelminthes)、刺胞動物(Cnidaria)、軟体動物(Mollusca)、環形動物(Annelida)、又は脊索動物(Chordata)を含む、請求項1~7のいずれか一項に記載のトランスポザーゼ。
  9. 前記トランスポザーゼの種源が、昆虫類(Incecta)、条鰭類(Actinopteri)、両生類(Amphibia)、有棒状体類(Rhabditophora)、双殻類(Bivalvia)、ヒドロ虫類(Hydrozoa)、ホヤ類(Ascidiacea)、花虫綱(Anthozoa)、又は環帯類(Clitellata)を含む、請求項8に記載のトランスポザーゼ。
  10. 前記トランスポザーゼの種源が、アエデス・アエギプチ(Aedes aegypti)、アエリア・アクミナータ(Aelia acuminata)、アグリプヌス・ムリヌス(Agrypnus murinus)、アントノマス・グランディス(Anthonomus grandis)、アポデラス・コリリ(Apoderus coryli)、アポロフィラ・ルエネブルゲンシス(Aporophyla lueneburgensis)、アテトミア・セントラゴ(Atethmia centrago)、ブラストバシス・アデュステラ(Blastobasis adustella)、ボンビクス・モリ(Bombyx mori)、カラモトロファ・パルデラ(Calamotropha paludella)、カトカラ・フラキシーニ(Catocala fraxini)、クリソテウキア・クルメラ(Chrysoteuchia culmella)、シオナ・サヴィニ(Ciona savignyi)、コプトテルメス・フォルモサナス(Coptotermes formosanus)、コレマセラ・マルギナタ(Coremacera marginata)、クラッソストレア・ギガス(Crassostrea gigas)、クラッソストレア・ビルギニカ(Crassostrea virginica)、クリプトテルメ・セクンドゥス(Cryptotermes secundus)、ディブロティカ・ビルギフェラ・ビルギフェラ(Diabrotica virgifera virgifera)、ドロソフィラ・ビペクチナタ(Drosophila bipectinata)、ドロソフィラ・エレガンス(Drosophila elegans)、エウバシリッサ・レジーナ(Eubasilissa regina)、エウスキストゥス・ヒーロース(Euschistus heros)、ゴニオクテナ・キンクエプンクタタ(Gonioctena quinquepunctata)、ギモソマ・ロツンダタム(Gymnosoma rotundatum)、ヘリコニウス・メルポメン(Heliconius melpomene)、ヘルメチア・イルセンス(Hermetia illucens)、ヘスペロフィラクス・マグヌス(Hesperophylax magnus)、ホマロディスカ・ビトリペニス(Homalodisca vitripennis)、ヒドラ・バルガリス(Hydra vulgaris)、ハイレス・ベスペルティリオ(Hyles vespertilio)、IPSニチドス(IPS nitidus)、IPSタイポグラフス(IPS typographus)、イスチュヌラ・エレガンス(Ischnura elegans)、ランプリゲラ・ユナナ(Lamprigera yunnana)、ラシオマタ・メガラ(Lasiommata megera)、リモニウス・カリフォルニクス(Limonius californicus)、ロクスタ・ミグラトリア(Locusta migratoria)、マカリナ・ノタタ(Macaria notata)、マラチウス・ビプスツラタス(Malachius bipustulatus)、マメストラ・ブラシカエ(Mamestra brassicae)、マラスマルカ・ルナエダクティラ(Marasmarcha lunaedactyla)、マロナス・ボルボニクス(Marronus borbonicus)、マラノタエニア・ボエセマニ(Melanotaenia boesemani)、ミチムナ・イムプラ(Mythimna impura)、ネマトステラ・ベクテニス(Nematostella vectensis)、オクロプルラ・プレクタ(Ochropleura plecta)、オキパス・オレンス(Ocypus olens)、オリウス・インシディオサス(Orius insidiosus)、オリジアス・シネンシス(Oryzias sinensis)、パキリンクス・スルフレオマキュラツス(Pachyrhynchus sulphureomaculatus)、パルナシウス・アポロ(Parnassius apollo)、ペリプラネタ・アメリカナ(Periplaneta americana)、フィラエヌス・スプマリウス(Philaenus spumarius)、フィロンサス・コグナトゥス(Philonthus cognatus)、ピエリス・ナピ(Pieris napi)、ピソード・ストロビ(Pissodes strobi)、プラチクネミス・ペニペス(Platycnemis pennipes)、シストセルカ・アメリカナ(Schistocerca americana)、シストセルカ・ピセイフロンス(Schistocerca piceifrons)、シュミドテア・メディテラネア(Schmidtea mediterranea)、セサミア・ノナグリオイデス(Sesamia nonagrioides)、セシア・アピホルミス(Sesia apiformis)、ストフィラス・オリゼ(Sitophilus oryzae)、ソレノプシス・インビクタ(Solenopsis invicta)、テレオグリラス・オシピタリス(Teleogryllus occipitalis)、チメマ・シェパルディ(Timema shepardi)、チメマ・タホエ(Timema tahoe)、ベンディエメネラ・ビアティカ(Vandiemenella viatica)、イェプソロファ・セクエラ(Ypsolopha sequella)、又はゾホバス・アトラタス(Zophobas atratus)を含む、請求項9に記載のトランスポザーゼ。
  11. 請求項1~10のいずれか一項に記載のトランスポザーゼをコードする核酸。
  12. 請求項11に記載の核酸を含む核酸構築物。
  13. 前記核酸構築物が、プロモータを更に含む、請求項12に記載の核酸構築物。
  14. 前記プロモータが、CMV、EF1a、SV40、PGK、UbC、ヒトベータアクチン、CAG、TRE、UAS、Ac5、GFAP、ポリヘドリンプロモータ、TBG、ALB、ApoEHCR-hAAT、CaMKIIa、GAL1、TEF1、GDS、ADH1、CaMV35S、Ubi、H1、U6、T7、T7lac、Sp6、araBAD、trp、lac、Ptac又はpLを含む、請求項13に記載の核酸構築物。
  15. 前記核酸構築物が、ポリ(A)配列を更に含む、請求項13に記載の核酸構築物。
  16. 5’認識配列を含む、核酸セットであって、前記5’認識配列が、配列番号147~292に示されるヌクレオチド配列の少なくとも1つを含む、核酸セット。
  17. 3’認識配列を含む、核酸セットであって、前記3’認識配列が、配列番号293~438に示されるヌクレオチド配列の少なくとも1つを含む、核酸セット。
  18. 5’認識配列及び3’認識配列を含む、核酸セットであって、前記5’認識配列が、配列番号147~292のいずれか1つに示されるヌクレオチド配列又はそのバリアントを含み、前記3’認識配列が、配列番号293~438のいずれか1つに示されるヌクレオチド配列又はそのバリアントを含み、前記核酸セットが、特定のトランスポザーゼによって認識され得る、核酸セット。
  19. 前記5’認識配列又は前記3’認識配列が、長さが1~800nt、1~600nt、1~400nt、1~200nt、1~100nt、5~50nt、5~25nt、又は10~20ntの少なくとも1つの末端逆位反復配列を含む、請求項16~18のいずれか一項に記載の核酸セット。
  20. 請求項16~19のいずれか一項に記載の核酸セットを含み、外因性核酸断片を更に含む、核酸セット構築物。
  21. 前記外因性核酸断片が、ポリクローナル挿入部位を介して前記核酸セット構築物に作動可能に挿入され、同じであるか又は異なり得る1つ以上の外因性核酸断片が存在し得、また、プロモータを挿入して外因性核酸断片の発現を制御することができる、請求項20に記載の核酸セット構築物。
  22. 前記外因性核酸断片が、目的の任意の遺伝子又は転移可能な任意の遺伝子、例えば天然の機能性タンパク質の遺伝子、人工キメラ遺伝子又は非コードRNAの遺伝子を含む、請求項21に記載の核酸セット構築物。
  23. 前記天然の機能性タンパク質の遺伝子が、蛍光系レポーター遺伝子、ルシフェラーゼ遺伝子及び耐性遺伝子を含む、請求項22に記載の核酸セット構築物。
  24. 前記蛍光系レポーター遺伝子が、緑色蛍光タンパク質、赤色蛍光タンパク質、青色蛍光タンパク質又は黄色蛍光タンパク質をコードする遺伝子の少なくとも1つから選択される、請求項23に記載の核酸セット構築物。
  25. 前記ルシフェラーゼ遺伝子が、ホタルルシフェラーゼ又は海腎ルシフェラーゼをコードする遺伝子の少なくとも1つから選択される、請求項23に記載の核酸セット構築物。
  26. 前記耐性遺伝子が、ピューロマイシン耐性、G418耐性、カナマイシン耐性、テトラサイクリン耐性又はブレオマイシン耐性をコードする遺伝子の少なくとも1つから選択される、請求項23に記載の核酸セット構築物。
  27. 前記人工キメラ遺伝子が、キメラ抗原受容体の遺伝子を含む、請求項22に記載の核酸セット構築物。
  28. 前記プロモータが、CMV、EF1a、SV40、PGK、UbC、ヒトベータアクチン、CAG、TRE、UAS、Ac5、GFAP、ポリヘドリンプロモータ、TBG、ALB、ApoEHCR-hAAT、CaMKIIa、GAL1、TEF1、GDS、ADH1、CaMV35S、Ubi、H1、U6、T7、T7lac、Sp6、araBAD、trp、lac、Ptac又はpLを含む、請求項21に記載の核酸セット構築物。
  29. 組成物であって、前記組成物が、
    PiggyBacファミリートランスポザーゼ若しくはその機能的断片、又は前記PiggyBacファミリートランスポザーゼ若しくはその機能的断片をコードする核酸であって、前記トランスポザーゼ又はその機能的断片が、外因性核酸断片の細胞の前記ゲノムへの挿入を触媒する機能を有する、PiggyBacファミリートランスポザーゼ若しくはその機能的断片、又は前記PiggyBacファミリートランスポザーゼ若しくはその機能的断片をコードする核酸;及び
    特定のトランスポザーゼ又はその機能的断片によって認識され得る核酸セット
    を含む、組成物。
  30. 前記組成物が、以下の群(1)~(147)の少なくとも1つから選択され、及び以下の群(1)~(146)のいずれか1つが、トランスポザーゼ関連配列及び核酸セットを含み、
    (1)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号1に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号147に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号293に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (2)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号2に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号148に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号294に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (3)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号3に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号149に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号295に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (4)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号4に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号150に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号296に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (5)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号5に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号151に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号297に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (6)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号6に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号152に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号298に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (7)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号7に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号153に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号299に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (8)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号8に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号154に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号300に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (9)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号9に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号155に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号301に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (10)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号10に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号156に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号302に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (11)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号11に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号157に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号303に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (12)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号12に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号158に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号304に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (13)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号13に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号159に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号305に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (14)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号14に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号160に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号306に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (15)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号15に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号161に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号307に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (16)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号16に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号162に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号308に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (17)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号17に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号163に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号309に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (18)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号18に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号164に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号310に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (19)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号19に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号165に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号311に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (20)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号20に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号166に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号312に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (21)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号21に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号167に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号313に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (22)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号22に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号168に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号314に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (23)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号23に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号169に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号315に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (24)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号24に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号170に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号316に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (25)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号25に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号171に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号317に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (26)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号26に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号172に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号318に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (27)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号27に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号173に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号319に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (28)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号28に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号174に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号320に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (29)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号29に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号175に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号321に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (30)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号30に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号176に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号322に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (31)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号31に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号177に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号323に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (32)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号32に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号178に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号324に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (33)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号33に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号179に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号325に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (34)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号34に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号180に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号326に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (35)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号35に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号181に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号327に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (36)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号36に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号182に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号328に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (37)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号37に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号183に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号329に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (38)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号38に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号184に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号330に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (39)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号39に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号185に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号331に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (40)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号40に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号186に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号332に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (41)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号41に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号187に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号333に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (42)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号42に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号188に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号334に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (43)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号43に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号189に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号335に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (44)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号44に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号190に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号336に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (45)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号45に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号191に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号337に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (46)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号46に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号192に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号338に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (47)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号47に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号193に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号339に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (48)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号48に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号194に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号340に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (49)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号49に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号195に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号341に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (50)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号50に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号196に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号342に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (51)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号51に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号197に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号343に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (52)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号52に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号198に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号344に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (53)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号53に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号199に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号345に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (54)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号54に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号200に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号346に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (55)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号55に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号201に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号347に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (56)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号56に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号202に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号348に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (57)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号57に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号203に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号349に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (58)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号58に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号204に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号350に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (59)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号59に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号205に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号351に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (60)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号60に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号206に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号352に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (61)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号61に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号207に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号353に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (62)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号62に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号208に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号354に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (63)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号63に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号209に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号355に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (64)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号64に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号210に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号356に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (65)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号65に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号211に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号357に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (66)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号66に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号212に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号358に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (67)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号67に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号213に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号359に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (68)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号68に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号214に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号360に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (69)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号69に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号215に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号361に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (70)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号70に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号216に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号362に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (71)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号71に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号217に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号363に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (72)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号72に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号218に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号364に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (73)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号73に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号219に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号365に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (74)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号74に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号220に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号366に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (75)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号75に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号221に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号367に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (76)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号76に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号222に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号368に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (77)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号77に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号223に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号369に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (78)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号78に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号224に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号370に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (79)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号79に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号225に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号371に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (80)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号80に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号226に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号372に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (81)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号81に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号227に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号373に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (82)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号82に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号228に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号374に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (83)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号83に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号229に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号375に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (84)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号84に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号230に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号376に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (85)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号85に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号231に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号377に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (86)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号86に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号232に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号378に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (87)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号87に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号233に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号379に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (88)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号88に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号234に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号380に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (89)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号89に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号235に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号381に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (90)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号90に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号236に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号382に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (91)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号91に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号237に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号383に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (92)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号92に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号238に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号384に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (93)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号93に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号239に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号385に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (94)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号94に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号240に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号386に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (95)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号95に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号241に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号387に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (96)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号96に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号242に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号388に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (97)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号97に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号243に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号389に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (98)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号98に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号244に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号390に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (99)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号99に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号245に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号391に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (100)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号100に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号246に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号392に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (101)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号101に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号247に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号393に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (102)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号102に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号248に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号394に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (103)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号103に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号249に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号395に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (104)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号104に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号250に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号396に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (105)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号105に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号251に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号397に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (106)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号106に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号252に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号398に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (107)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号107に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号253に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号399に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (108)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号108に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号254に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号400に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (109)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号109に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号255に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号401に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (110)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号110に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号256に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号402に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (111)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号111に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号257に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号403に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (112)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号112に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号258に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号404に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (113)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号113に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号259に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号405に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (114)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号114に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号260に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号406に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (115)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号115に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号261に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号407に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (116)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号116に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号262に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号408に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (117)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号117に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号263に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号409に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (118)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号118に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号264に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号410に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (119)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号119に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号265に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号411に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (120)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号120に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号266に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号412に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (121)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号121に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号267に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号413に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (122)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号122に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号268に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号414に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (123)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号123に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号269に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号415に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (124)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号124に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号270に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号416に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (125)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号125に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号271に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号417に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (126)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号126に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号272に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号418に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (127)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号127に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号273に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号419に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (128)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号128に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号274に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号420に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (129)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号129に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号275に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号421に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (130)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号130に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号276に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号422に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (131)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号131に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号277に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号423に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (132)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号132に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号278に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号424に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (133)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号133に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号279に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号425に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (134)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号134に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号280に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号426に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (135)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号135に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号281に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号427に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (136)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号136に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号282に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号428に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (137)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号137に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号283に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号429に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (138)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号138に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号284に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号430に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (139)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号139に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号285に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号431に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (140)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号140に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号286に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号432に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (141)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号141に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号287に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号433に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (142)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号142に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号288に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号434に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (143)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号143に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号289に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号435に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (144)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号144に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号290に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号436に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (145)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号145に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号291に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号437に示される配列を含むヌクレオチド配列である、
    (146)前記トランスポザーゼ関連配列が、配列番号146に示される配列を含むアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列をコードする核酸であり、前記核酸セットは、5’認識配列及び3’認識配列を含み、前記5’認識配列は、配列番号292に示される配列を含むヌクレオチド配列であり、前記3’認識配列は、配列番号438に示される配列を含むヌクレオチド配列である、又は
    (147)前記群(1)~(146)のいずれか1つのバリアント
    であり、
    前記トランスポザーゼ関連配列は、各群の前記トランスポザーゼのバリアントのアミノ酸配列又は前記バリアントをコードする核酸配列であり、前記バリアントは、以下の(i)~(iii):
    (i)各群の前記トランスポザーゼのアミノ酸配列に対して1、2、3、4、5、6、7、8、9又は10アミノ酸の欠失、置換、挿入又は変異を行うことによって得られる配列の少なくとも1つ;
    (ii)配列番号1~146のいずれか1つに示されるアミノ酸配列と少なくとも70%、80%、90%、95%又は99%の同一性を有するアミノ酸配列の少なくとも1つ;及び
    (iii)配列番号1~146のいずれか1つに示されるアミノ酸配列を他の配列と更に融合することによって得られる配列の少なくとも1つ
    から選択されるトランスポザーゼ活性を有する前記トランスポザーゼのバリアント配列を有する、請求項29に記載の組成物。
  31. 前記核酸セットがプロモータを更に含む、請求項29又は30に記載の組成物。
  32. 前記プロモータが、CMV、EF1a、SV40、PGK、UbC、ヒトベータアクチン、CAG、TRE、UAS、Ac5、GFAP、ポリヘドリンプロモータ、TBG、ALB、ApoEHCR-hAAT、CaMKIIa、GAL1、TEF1、GDS、ADH1、CaMV35S、Ubi、H1、U6、T7、T7lac、Sp6、araBAD、trp、lac、Ptac又はpLを含む、請求項31に記載の組成物。
  33. 前記核酸セットがポリ(A)配列を更に含む、請求項29又は30に記載の組成物。
  34. 前記核酸セットが外因性核酸断片を更に含む、請求項29~33のいずれか一項に記載の組成物。
  35. 前記外因性核酸断片が、ポリクローナル挿入部位を介して前記核酸セットに作動可能に挿入され、前記同じであっても異なっていてもよい1つ以上の外因性核酸断片が存在し得、プロモータを挿入して前記外因性核酸断片の発現を制御することもできる、請求項34に記載の組成物。
  36. 前記外因性核酸断片が、目的の任意の遺伝子又は転移可能な任意の遺伝子、例えば天然の機能性タンパク質の遺伝子、人工キメラ遺伝子又は非コードRNAの遺伝子を含む、請求項35に記載の組成物。
  37. 前記天然の機能性タンパク質の遺伝子が、蛍光系レポーター遺伝子、ルシフェラーゼ遺伝子又は耐性遺伝子を含む、請求項36に記載の組成物。
  38. 前記蛍光ベースのレポーター遺伝子が、緑色蛍光タンパク質、赤色蛍光タンパク質、青色蛍光タンパク質、又は黄色蛍光タンパク質をコードする遺伝子を含む、請求項37に記載の組成物。
  39. 前記ルシフェラーゼ遺伝子が、ホタルルシフェラーゼ又は海腎ルシフェラーゼをコードする遺伝子を含む、請求項37に記載の組成物。
  40. 前記耐性遺伝子が、ピューロマイシン耐性、G418耐性、カナマイシン耐性、テトラサイクリン耐性又はブレオマイシン耐性をコードする遺伝子を含む、請求項37に記載の組成物。
  41. 前記人工キメラ遺伝子が、キメラ抗原受容体の遺伝子を含む、請求項36に記載の組成物。
  42. 前記プロモータが、CMV、EF1a、SV40、PGK、UbC、ヒトベータアクチン、CAG、TRE、UAS、Ac5、GFAP、ポリヘドリンプロモータ、TBG、ALB、ApoEHCR-hAAT、CaMKIIa、GAL1、TEF1、GDS、ADH1、CaMV35S、Ubi、H1、U6、T7、T7lac、Sp6、araBAD、trp、lac、Ptac又はpLを含む、請求項35に記載の組成物。
  43. 請求項1~10のいずれか一項に記載のトランスポザーゼをコードする核酸、請求項11に記載の核酸、請求項12~15のいずれか一項に記載の核酸構築物、請求項16~19のいずれか一項に記載の核酸セット、請求項20~28のいずれか一項に記載の核酸セット構築物又は請求項29~42のいずれか一項に記載の組成物を含む、組換えベクター。
  44. 前記組み換えベクターが、組換えクローニングベクター、組換え真核生物発現プラスミド又は組換えウイルスベクターを含む、請求項43に記載の組換えベクター。
  45. 前記組換え真核生物発現プラスミドが、pcDNA3.1、pCMV、pUC18、pUC19、pUC57、pBAD、pET、pENTR、pGenlenti又はpAAVを含む、請求項44に記載の組換えベクター。
  46. 前記組換えウイルスベクターが、組換えアデノウイルスベクター、組換えアデノ随伴ウイルスベクター、組換えレトロウイルスベクター、組換え単純ヘルペスウイルスベクター、又は組換えワクシニアウイルスベクターを含む、請求項44に記載の組換えベクター。
  47. 請求項1~10のいずれか一項に記載のトランスポザーゼ、請求項1~10のいずれか一項に記載のトランスポザーゼをコードする核酸、請求項11に記載の核酸、請求項12~15のいずれか一項に記載の核酸構築物、請求項16~19のいずれか一項に記載の核酸セット、請求項20~28のいずれか一項に記載の核酸セット構築物、請求項29~42のいずれか一項に記載の組成物、又は請求項43~46のいずれか一項に記載の組換えベクターを含む、組換え宿主細胞。
  48. 前記組み換え宿主細胞が、動物細胞、植物細胞、藻類細胞、真菌細胞、酵母細胞又は細菌細胞を含む、請求項47に記載の組換え宿主細胞。
  49. 前記動物細胞が哺乳動物細胞を含む、請求項48に記載の組換え宿主細胞。
  50. 前記哺乳動物細胞が、初代細胞(例えば、間葉系幹細胞、内皮細胞、上皮細胞、線維芽細胞、ケラチノサイト、メラノサイト、平滑筋細胞及び免疫細胞)、不死化細胞株(例えば、HEK293、NIH-3T3、RAW-264.7、STO、VERO、CT26、hTERT不死化ヒト内皮/上皮/線維芽細胞/ケラチノサイト/管/細胞株)、癌細胞株(例えば、Hela、HepG2/3、HL-60、HT-1080、HT-29、A549、SW620、HCT-15、HCT116、MDA-MB-231、MCF7、SK-OV-3、PANC-1、AsPc-1、THP-1、Huh7、KG-1、RAJI、HB-CB、Jurkat、K562、CRL5826、CHO、MDCK及びRenca)、胚性幹細胞株(例えば、H1、H9、WIBR2、WIBR3、G-Olig2、ESF158、RW.4、R1及びD3)及びその分化細胞、又は人工多能性幹細胞株及びその分化細胞を含む、請求項49に記載の組換え宿主細胞。
  51. 外因性核酸断片を宿主細胞の前記ゲノムに導入する方法であって、請求項1~10のいずれか一項に記載のトランスポザーゼ、請求項1~10のいずれか一項に記載のトランスポザーゼをコードする核酸、請求項11に記載の核酸、請求項12~15のいずれか一項に記載の核酸構築物、請求項16~19のいずれか一項に記載の核酸セット、請求項20~28のいずれか一項に記載の核酸セット構築物、請求項29~42のいずれか一項に記載の組成物、又は請求項43~46のいずれか一項に記載の組換えベクターを宿主細胞に送達することを含む、外因性核酸断片を宿主細胞のゲノムに導入する方法。
  52. 宿主細胞の前記ゲノムを編集するための方法であって、請求項1~10のいずれか一項に記載のトランスポザーゼ、請求項1~10のいずれか一項に記載のトランスポザーゼをコードする核酸、請求項11に記載の核酸、請求項12~15のいずれか一項に記載の核酸構築物、請求項16~19のいずれか一項に記載の核酸セット、請求項20~28のいずれか一項に記載の核酸セット構築物、請求項29~42のいずれか一項に記載の組成物、又は請求項43~46のいずれか一項に記載の組換えベクターを宿主細胞に送達することを含む、宿主細胞のゲノムを編集するための方法。
  53. 前記ゲノム中に外因性核酸断片を含有する宿主細胞を得るための方法であって、請求項1~10のいずれか一項に記載のトランスポザーゼ、請求項1~10のいずれか一項に記載のトランスポザーゼをコードする核酸、請求項11に記載の核酸、請求項12~15のいずれか一項に記載の核酸構築物、請求項16~19のいずれか一項に記載の核酸セット、請求項20~28のいずれか一項に記載の核酸セット構築物、請求項29~42のいずれか一項に記載の組成物、又は請求項43~46のいずれか一項に記載の組換えベクターを宿主細胞に送達することを含む、ゲノム中に外因性核酸断片を含有する宿主細胞を得るための方法。
  54. 前記送達方法が、カチオン性リポソーム送達、リポイドナノ粒子送達、カチオン性ポリマー送達、小胞-エキソソーム送達、金ナノ粒子送達、ポリペプチド及びタンパク質送達、レトロウイルス送達、レンチウイルス送達、アデノウイルス送達、アデノ随伴ウイルス送達、エレクトロポレーション、アグロバクテリウム感染又は遺伝子銃を含む、請求項51~53のいずれか一項に記載の方法。
  55. 前記宿主細胞が、動物細胞、植物細胞、藻類細胞、真菌細胞、酵母細胞又は細菌細胞を含む、請求項51~53のいずれか一項に記載の方法。
  56. 前記動物細胞が哺乳動物細胞を含む、請求項55に記載の方法。
  57. 前記哺乳動物細胞が、初代細胞(例えば、間葉系幹細胞、内皮細胞、上皮細胞、線維芽細胞、ケラチノサイト、メラノサイト、平滑筋細胞及び免疫細胞)、不死化細胞株(例えば、HEK293、NIH-3T3、RAW-264.7、STO、VERO、CT26、hTERT不死化ヒト内皮/上皮/線維芽細胞/ケラチノサイト/管/細胞株)、癌細胞株(例えば、Hela、HepG2/3、HL-60、HT-1080、HT-29、A549、SW620、HCT-15、HCT116、MDA-MB-231、MCF7、SK-OV-3、PANC-1、AsPc-1、THP-1、Huh7、KG-1、RAJI、HB-CB、Jurkat、K562、CRL5826、CHO、MDCK及びRenca)、胚性幹細胞株(例えば、H1、H9、WIBR2、WIBR3、G-Olig2、ESF158、RW.4、R1及びD3)及びその分化細胞、又は人工多能性幹細胞株及びその分化細胞を含む、請求項56に記載の方法。
  58. 宿主細胞の前記ゲノムに外因性核酸断片を導入するための、請求項1~10のいずれか一項に記載のトランスポザーゼ、請求項1~10のいずれか一項に記載のトランスポザーゼをコードする核酸、請求項11に記載の核酸、請求項12~15のいずれか一項に記載の核酸構築物、請求項16~19のいずれか一項に記載の核酸セット、請求項20~28のいずれか一項に記載の核酸セット構築物、請求項29~42のいずれか一項に記載の組成物、請求項43~46のいずれか一項に記載の組換えベクター、又は請求項47~50のいずれか一項に記載の組換え宿主細胞の使用。
  59. 前記宿主細胞が、動物細胞、植物細胞、藻類細胞、真菌細胞、酵母細胞又は細菌細胞を含む、請求項58に記載の使用。
  60. 前記動物細胞が哺乳動物細胞を含む、請求項59に記載の使用。
  61. 前記哺乳動物細胞が、初代細胞(例えば、間葉系幹細胞、内皮細胞、上皮細胞、線維芽細胞、ケラチノサイト、メラノサイト、平滑筋細胞及び免疫細胞)、不死化細胞株(例えば、HEK293、NIH-3T3、RAW-264.7、STO、VERO、CT26、hTERT不死化ヒト内皮/上皮/線維芽細胞/ケラチノサイト/管/細胞株)、癌細胞株(例えば、Hela、HepG2/3、HL-60、HT-1080、HT-29、A549、SW620、HCT-15、HCT116、MDA-MB-231、MCF7、SK-OV-3、PANC-1、AsPc-1、THP-1、Huh7、KG-1、RAJI、HB-CB、Jurkat、K562、CRL5826、CHO、MDCK及びRenca)、胚性幹細胞株(例えば、H1、H9、WIBR2、WIBR3、G-Olig2、ESF158、RW.4、R1及びD3)及びその分化細胞、又は人工多能性幹細胞株及びその分化細胞を含む、請求項60に記載の使用。
  62. 遺伝子療法、細胞療法、ゲノム研究、又は幹細胞誘導及び誘導後分化のための薬物又は調製物を調製するための、請求項1~10のいずれか一項に記載のトランスポザーゼ、請求項1~10のいずれか一項に記載のトランスポザーゼをコードする核酸、請求項11に記載の核酸、請求項12~15のいずれか一項に記載の核酸構築物、請求項16~19のいずれか一項に記載の核酸セット、請求項20~28のいずれか一項に記載の核酸セット構築物、請求項29~42のいずれか一項に記載の組成物、請求項43~46のいずれか一項に記載の組換えベクター、又は請求項47~50のいずれか一項に記載の組換え宿主細胞の使用。
  63. 請求項1~10のいずれか一項に記載のトランスポザーゼ、請求項1~10のいずれか一項に記載のトランスポザーゼをコードする核酸、請求項11に記載の核酸、請求項12~15のいずれか一項に記載の核酸構築物、請求項16~19のいずれか一項に記載の核酸セット、請求項20~28のいずれか一項に記載の核酸セット構築物、請求項29~42のいずれか一項に記載の組成物、請求項43~46のいずれか一項に記載の組換えベクター、又は請求項47~50のいずれか一項に記載の組換え宿主細胞を含むキット。
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