JP2647452B2 - 蚕体液 - Google Patents

蚕体液

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JP2647452B2 JP63233639A JP23363988A JP2647452B2 JP 2647452 B2 JP2647452 B2 JP 2647452B2 JP 63233639 A JP63233639 A JP 63233639A JP 23363988 A JP23363988 A JP 23363988A JP 2647452 B2 JP2647452 B2 JP 2647452B2
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朝子 寺崎
秀樹 川合
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Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は昆虫細胞の増殖作用を有し、保存性の良好な
細胞培養添加物としての蚕体液に関するものである。
〔従来の技術〕
従来、昆虫細胞の培養液に添加する成長促進物質とし
ては牛胎児血清、ロブスター血清などが知られている
が、これらは昆虫由来の物質ではなく、また遺伝的にも
不均質なためにロットによる差異が大きく、試験研究等
に使用するには不適切な点が多かった。
一方、蚕は品種が良く保存されているので均質な体液
を得ることができ、またその体液は細胞の増殖を促すこ
とも知られていることから昆虫由来の培養添加物として
有望である。しかし、蚕体液は蚕より採取後直ちにフェ
ノール酸化酵素による酸化反応が始まり、褐変すると共
にドーパキノンなど細胞に有害な物質が作られる。酵素
による酸化反応を避けるため現在は蚕より少量ずつ体液
を採取した後すばやく加熱処理をし、次いで遠心分離を
行い、その上清を培養添加物として用いているが、この
方法では体液の採取直後に一定の条件の加熱を必要とす
るため、大量の処理は困難であり、また保存面において
は凍結保存のみに限られるなどの難点があった。
〔発明が解決しようとする問題点〕
本発明は、前記従来技術における問題点を解決し、蚕
体液の酸化反応を一時的または長期間にわたり抑えるこ
とにより保存性が良好で、しかも昆虫細胞の増殖作用を
有する細胞培養添加物としての蚕体液を得ることを目的
とする。
〔問題点を解決するための手段〕
このような状況下、本発明者らは蚕体液に抗酸化剤を
加え、その保存性と培養細胞に及ぼす影響について着目
して研究を行った結果、蚕体液に抗酸化剤を添加するこ
とにより、蚕体液の酸化反応を長時間にわたって阻止
し、しかも細胞の増殖作用も良好な結果となることを見
出し本発明を完成した。
本発明において、フェノール酸化酵素阻害剤として含
有させる抗酸化剤としてはL−アスコルビン酸、L−ア
スコルビン酸塩及びチオ硫酸塩などが挙げられ、これら
は単独でもまた2種以上混合して用いることができる。
本発明にかかる抗酸化剤を含有させた蚕体液は通常次
のようにして得る。すなわち、L−アスコルビン酸、L
−アスコルビン酸塩およびチオ硫酸塩などの抗酸化剤を
含む燐酸緩衝液を調製し、この調製液中に蚕の体液を採
取する。蚕の体液は蚕の腹足を切断などして採取する
が、その際蚕体液を受ける調製液は氷中で冷やしながら
採取するのが望ましい。
この時、抗酸化剤を含む燐酸緩衝液は、採取した蚕体
液を含む全体量の10%以下とするのが望ましく、また蚕
体液に含有させる抗酸化剤の濃度範囲としては、抗酸化
剤の濃度が高いほど体液の酸化反応が抑えられる時間が
長くなるが、一定濃度以上となると全く酸素反応は起こ
らなくなることから、蚕体液に対してL−アスコルビン
酸またはL−アスコルビン酸塩の場合1〜5%、チオ硫
酸塩の場合は0.05〜0.2%の範囲が望ましい。
本発明における抗酸化剤を含有する蚕体液はそのまま
凍結保存してもよく、また凍結乾燥法により乾燥して保
存することもできる。
また、本発明の蚕体液は使用の際解凍あるいは水で溶
解した後細胞培養添加物として使用すればよく、使用の
際はフェノール酸化酵素による酸化反応は抑えられ好適
である。
〔実施例〕
実施例1 75mMリン酸一水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウ
ム、PH7.2、2.75mM塩化ナトリウム含有の燐酸緩衝生理
食塩液にチオ硫酸ナトリウムが1%となるように添加
し、抗酸化剤含有のリン酸緩衝液を調製した。この調製
したリン酸緩衝液のうち28mlをシリンダーにとり、これ
を氷中にて冷却しつつ、このリン酸緩衝液中に蚕体液を
採取し、緩衝液を含む体液が280mlとなるまで採取し
た。なお、蚕体液はは5齢6日を経過した蚕(錦秋×鐘
和)560頭の腹足を切断して採取した。この蚕体液を直
ちに凍結乾燥機にて乾燥し、蚕体液粉末23.8gを得た。
体液採取より蚕体液粉末を得るまで約24時間を要した
が、その間褐変は起こらなかった。また、蚕体液粉末0.
1gを1mlの純水で溶解したが8時間以上褐変を抑えるこ
とができ、本発明による抗酸化剤を含有する蚕体液は、
凍結乾燥にて乾燥粉末にしてもフェノール酸化酵素によ
る褐変が抑えられることが明らかであった。
実施例2 実施例1と同様のリン酸緩衝液に第1表に示すように
抗酸化剤を添加して抗酸化剤を含有するリン酸緩衝液を
調製した。
次に、これら調製のリン酸緩衝液を氷中にて冷却しつ
つ、これらリン酸緩衝液中に5齢の蚕より体液をリン酸
緩衝液の割合が緩衝液を含む体液の10%になるまで採取
した。
これらの蚕体液を4℃で保存し、5時間後および15時
間後に色調の変化を観察した結果は第2表の通りであ
る。
抗酸化剤を含有しない対照区に比し、抗酸化剤を含有
する蚕体体はいずれも褐変が遅いか、あるいは褐変しな
いものであり、体液の酸化が抑制されていることが明ら
かであった。
次にBm株(蚕由来の培養細胞株)を用い、5%牛胎児
血清を含むグレース(Grace)の昆虫培地を基本にし
て、上記7区の15時間保存した蚕体液(チオ硫酸ナトリ
ウムを0.1%含有する蚕体液)を60℃で15分間加熱し、
遠心分離して沈澱を除いた上清を5%添加して細胞の増
殖を観察した。又、同じ7区の15時間保存した蚕体液を
凍結乾燥して粉末化し、その粉末に水を加えて同様に処
理した上清を5%添加して細胞の増殖を観察した。
なお、対照のため蚕体液を添加しないで5%牛胎児血
清のみを含むグレース(Grace)の昆虫培地で細胞の増
殖を試みたものを対照区とし、また比較のため5%牛胎
児血清を含むグレース(Grace)の昆虫培地を基本にし
て、L−アスコルビン酸、L−アスコルビン酸ナトリウ
ム、チオ硫酸ナトリウムを含有させないで蚕より採取し
た体液を採取直後にすばやく加熱処理をし、次いで遠心
分離を行い、その上清を5%添加して細胞の増殖を試み
たものを比較区とした。
その結果は第3表の通りであり,本発明の抗酸化剤を
含有する蚕体液はいずれも細胞増殖効果を有し,採取後
直ちに加熱した体液の比較区と同様な成績であった。ま
た、牛胎児血清のみのものは劣る成績であった。
〔発明の効果〕 本発明の抗酸化剤を含有する蚕体液は酸化反応が抑え
られ、培養添加物としての性質も損なわれないものであ
るので、蚕体液を大量に処理し、保存することが可能と
なるものである。また、凍結乾燥などの処理も可能であ
るので、蚕体液を流通させ産業上利用可能となるなどの
利点がある。
本発明者らの調査によれば、蚕体液に抗酸化剤を添加
することおよび抗酸化剤を添加された蚕体液が良好な細
胞増殖性を有することについては全く報告されておら
ず、本発明は先駆的な発明といえる。

Claims (1)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項1】フェノール酸化酵素阻害剤として、抗酸化
    剤であるL−アスコルビン酸、L−アスコルビン酸塩、
    チオ硫酸塩のうちから選ばれる1種またはこれらの混合
    物を含有させてなることを特徴とする蚕体液。
JP63233639A 1988-09-20 1988-09-20 蚕体液 Expired - Lifetime JP2647452B2 (ja)

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US5866317A (en) * 1997-04-28 1999-02-02 Japan As Represented By Director General Of National Institute Of Sericultural And Entomological Science Ministry Of Agriculture, Forestry&Fisheries Method for collecting hemolymph of insects
CN111771825B (zh) * 2020-07-10 2021-12-03 邳州市景鹏创业投资有限公司 一种农业用蚕蛹收集装置

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JPH0284173A (ja) 1990-03-26

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