JP2721005B2 - 混合生ワクチン - Google Patents
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Description
【発明の詳細な説明】 本発明は伝染性気管支炎ウイルスを含有する混合生ワ
クチンに関する。
クチンに関する。
伝染性気管支炎ウイルス（IBV）は、鳥類、特に家禽
に感染力を有するコロナウイルスの一種である。本ウイ
ルスに感染すると、気管ラ音、咳、くしゃみ、鼻水が特
徴の急性呼吸器疾患を引き起こす。伝染性気管支炎（i.
b.）は羅患ニワトリの間にかなりの死亡率を生じる恐れ
があり、さらにニワトリの腎臓を損傷する恐れがある。
産卵鶏と繁殖雌鶏では、その感染により、生殖路損傷に
よる卵生産低下が起こる恐れがある。多くの場合、産卵
低下には下痢を起こす腸炎が伴う。
に感染力を有するコロナウイルスの一種である。本ウイ
ルスに感染すると、気管ラ音、咳、くしゃみ、鼻水が特
徴の急性呼吸器疾患を引き起こす。伝染性気管支炎（i.
b.）は羅患ニワトリの間にかなりの死亡率を生じる恐れ
があり、さらにニワトリの腎臓を損傷する恐れがある。
産卵鶏と繁殖雌鶏では、その感染により、生殖路損傷に
よる卵生産低下が起こる恐れがある。多くの場合、産卵
低下には下痢を起こす腸炎が伴う。
ワクチン接種によりIBV感染に対して家禽を防護でき
る。さらに、できるだけ若い時期に防護するのが望まし
い。これらの若鶏は、ニューカッスル病ウイルス（ND
V）、伝染性嚢包症ウイルス（IBDV）、マレク病ウイル
ス（MDV）、その他の鳥類ヘルペスウイルス、鶏痘ウイ
ルス（FPV）、鳥類脳脊髄炎ウイルス（AEV）、細網内皮
症ウイルス（REV）、鳥類アデノウイルス、鳥類レオウ
イルスのような他のウイルスによる感染をも蒙り易い。
もちろん、IBV感染に対してだけでなく、上記ウイルス
のようなその他のウイルスによる感染に対しても若鳥を
防護するのが望ましい。
る。さらに、できるだけ若い時期に防護するのが望まし
い。これらの若鶏は、ニューカッスル病ウイルス（ND
V）、伝染性嚢包症ウイルス（IBDV）、マレク病ウイル
ス（MDV）、その他の鳥類ヘルペスウイルス、鶏痘ウイ
ルス（FPV）、鳥類脳脊髄炎ウイルス（AEV）、細網内皮
症ウイルス（REV）、鳥類アデノウイルス、鳥類レオウ
イルスのような他のウイルスによる感染をも蒙り易い。
もちろん、IBV感染に対してだけでなく、上記ウイルス
のようなその他のウイルスによる感染に対しても若鳥を
防護するのが望ましい。
このために、若鳥には、IBVから得た免疫原と他のウ
イルスの少なくとも１種から得た免疫原との併用より成
るワクチンを接種している。これらのワクチンには生ウ
イルスまたは不活性化ウイルスが含有されるが、原則的
には生ワクチンが好ましい。これらの混合生ワクチンに
関するよく知られた問題は、１つ以上の構成成分の効力
を低減させる抗原成分相互間の作用である。この問題は
IBV/NDV併用に関して、例えばRaggiとLee（1964）鳥類
疾患８,471−480;HansonとAlberts（Am.J.Vet.Res.1959
年３月,352−356）;ThorntonとMuskett（The Veterina
ry Record,1975年５月、467−468）などにより報告さ
れており、またWinterfieldが相反する結果を発表して
いる（Poultry Science 1984,63,182−184）。
イルスの少なくとも１種から得た免疫原との併用より成
るワクチンを接種している。これらのワクチンには生ウ
イルスまたは不活性化ウイルスが含有されるが、原則的
には生ワクチンが好ましい。これらの混合生ワクチンに
関するよく知られた問題は、１つ以上の構成成分の効力
を低減させる抗原成分相互間の作用である。この問題は
IBV/NDV併用に関して、例えばRaggiとLee（1964）鳥類
疾患８,471−480;HansonとAlberts（Am.J.Vet.Res.1959
年３月,352−356）;ThorntonとMuskett（The Veterina
ry Record,1975年５月、467−468）などにより報告さ
れており、またWinterfieldが相反する結果を発表して
いる（Poultry Science 1984,63,182−184）。
上記の公知混合生ワクチンの欠点を、本発明による新
ワクチンを用いて克服できることが知見された。この混
合生ワクチンは、ニワトリ赤血球を自発的に凝集する特
性を示す少なくとも１種類の伝染性気管支炎生ウイルス
と、少なくとも１種類の他の家禽感染性ウイルスとより
成ることを特徴とする。ニワトリ赤血球を自発的に凝集
する特性を持つIBV′ｓが欧州特許第0.086.025号明細書
による優秀な予防接種特性を有することは公知である。
また、混合不活性化ワクチンにおけるこれらの特別なIB
V′ｓの使用は、前記欧州特許明細書に開示されてい
る。しかしながら、これらの自発的凝集性IBV′ｓが同
様に家禽感染性の他のウイルスとともに混合生ワクチン
の形での使用に特によく適していることは、本発明まで
は認識されていなかった。
ワクチンを用いて克服できることが知見された。この混
合生ワクチンは、ニワトリ赤血球を自発的に凝集する特
性を示す少なくとも１種類の伝染性気管支炎生ウイルス
と、少なくとも１種類の他の家禽感染性ウイルスとより
成ることを特徴とする。ニワトリ赤血球を自発的に凝集
する特性を持つIBV′ｓが欧州特許第0.086.025号明細書
による優秀な予防接種特性を有することは公知である。
また、混合不活性化ワクチンにおけるこれらの特別なIB
V′ｓの使用は、前記欧州特許明細書に開示されてい
る。しかしながら、これらの自発的凝集性IBV′ｓが同
様に家禽感染性の他のウイルスとともに混合生ワクチン
の形での使用に特によく適していることは、本発明まで
は認識されていなかった。
本発明によれば、そのワクチンは、IBVとは異なる少
なくとも１種類の他の家禽感染性ウイルスより成る。
なくとも１種類の他の家禽感染性ウイルスより成る。
上記にいういわゆるその他のウイルスとしては、例え
ばNDV、IBDV、MDV、他の鳥類のヘルペスウイルス、FP
V、鳥類アデノウイルス、鳥類レオウイルスなどから選
択され得る。
ばNDV、IBDV、MDV、他の鳥類のヘルペスウイルス、FP
V、鳥類アデノウイルス、鳥類レオウイルスなどから選
択され得る。
本発明による使用に特によく適合するIBV株は、Ma5株
（米国ロックヴィル市のATCCに寄託番号VR2199で1987年
12月15日に寄託された活動種）、ならびにD274,D1466,D
580,246G,249G株（それぞれＩ−216,I−217,I−218,I−
125,I−214の寄託番号でパリのパスツール研究所のthe
Collection Nationale de Cultures de Micro−organis
mesで保管）である。Ma5株と、246G株はマサチューセッ
ツ血清型に属し、D580株はコネチカット型に属するが、
残りの上記IBV株はそれぞれ他の異なる血清型に属す
る。
（米国ロックヴィル市のATCCに寄託番号VR2199で1987年
12月15日に寄託された活動種）、ならびにD274,D1466,D
580,246G,249G株（それぞれＩ−216,I−217,I−218,I−
125,I−214の寄託番号でパリのパスツール研究所のthe
Collection Nationale de Cultures de Micro−organis
mesで保管）である。Ma5株と、246G株はマサチューセッ
ツ血清型に属し、D580株はコネチカット型に属するが、
残りの上記IBV株はそれぞれ他の異なる血清型に属す
る。
本発明によるワクチン製造に用いるウイルスは、鳥類
ウイルスの培養に適したあらゆる培地中で成育可能であ
る。胚含有SPFニワトリ卵中もしくは、好ましくは鳥類
組織からの細胞培養上が、これらのウイルスの成育に特
に適している。
ウイルスの培養に適したあらゆる培地中で成育可能であ
る。胚含有SPFニワトリ卵中もしくは、好ましくは鳥類
組織からの細胞培養上が、これらのウイルスの成育に特
に適している。
かくして、増殖ウイルスを望ましい割合で合わせるこ
とができ、その結果得た混合物を単一の鳥かあるいは多
数の鳥のワクチン接種に適した量に分けることができ
る。
とができ、その結果得た混合物を単一の鳥かあるいは多
数の鳥のワクチン接種に適した量に分けることができ
る。
懸濁液の形でその生ワクチンを調整することもある
し、凍結乾燥することもある。
し、凍結乾燥することもある。
凍結乾燥ワクチンにおいては、１種類以上の安定剤を
添加するのが好ましい。適当な安定剤としては、例えば
SPGA（Bovarnickが報告（1950）J.Bacteriology 59;50
9）、炭水化物（ソルビトール，マンニトール，デンプ
ン，ショ糖，デキストラン，グルコースなど）、タンパ
ク質（アルブミンまたはカゼイン）、あるいはその変性
産物、タンパク質含有物（ウシ血清あるいはスキムミル
クなど）、緩衝剤（アルカリ金属リン酸塩など）が挙げ
られる。
添加するのが好ましい。適当な安定剤としては、例えば
SPGA（Bovarnickが報告（1950）J.Bacteriology 59;50
9）、炭水化物（ソルビトール，マンニトール，デンプ
ン，ショ糖，デキストラン，グルコースなど）、タンパ
ク質（アルブミンまたはカゼイン）、あるいはその変性
産物、タンパク質含有物（ウシ血清あるいはスキムミル
クなど）、緩衝剤（アルカリ金属リン酸塩など）が挙げ
られる。
随意に、アジュバント活性を有する１つ以上の化合物
を添加することもある。適当なアジュバントとしては、
例えば水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、また
は酸化アルミニウム、鉱油（Bayol Ｆ,Marcol 52
など）、サポニンなどが挙げられる。
を添加することもある。適当なアジュバントとしては、
例えば水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、また
は酸化アルミニウム、鉱油（Bayol Ｆ,Marcol 52
など）、サポニンなどが挙げられる。
随意に、そのウイルスを弱毒化できる。ウイルスを胚
含有卵もしくは細胞培養（好ましくはニワトリ胚腎細
胞）に適応させ、例えば10−200倍の培養に通すことに
よってこの弱毒化を行う。
含有卵もしくは細胞培養（好ましくはニワトリ胚腎細
胞）に適応させ、例えば10−200倍の培養に通すことに
よってこの弱毒化を行う。
本発明の生ワクチンは、例えば筋肉、皮下あるいは卵
内注射により、点眼、点鼻、飲料水中またはスプレー方
式で、好ましくは生後１日目から産卵時点（約18週目）
までの範囲の若齢で投与し得る。
内注射により、点眼、点鼻、飲料水中またはスプレー方
式で、好ましくは生後１日目から産卵時点（約18週目）
までの範囲の若齢で投与し得る。
孵化後１日目のニワトリへ投与するには、上記Ma5株
もしくはそれに由来しニワトリ赤血球の自発性凝集も示
す株を含有するワクチンを有利に使用することができ
る。
もしくはそれに由来しニワトリ赤血球の自発性凝集も示
す株を含有するワクチンを有利に使用することができ
る。
生ワクチンに関して、それぞれのウイルス株の用量は
１羽あたり3log EID50−7log EID50、好ましくは約4log
EID50−5log EID50の範囲で用いられ得る。
１羽あたり3log EID50−7log EID50、好ましくは約4log
EID50−5log EID50の範囲で用いられ得る。
実施例Ｉ NDV/IBV2種混合生ワクチンと各ウイルスの個別ワクチン
との比較 実験計画：孵化１日目SPEニワトリを８群に分け、負圧
隔離器に入れた。
との比較 実験計画：孵化１日目SPEニワトリを８群に分け、負圧
隔離器に入れた。
Ｉ群には、点眼によりMa5株（HA+株）104EID50/羽を
接種した。
接種した。
II群には、点眼によりIBV−Mildvac−Ｍ（Intervet A
merica Inc.社製の生後１日目ブロイラ鶏用市販ワクチ
ン;HA-株）104EID50/羽を接種した。
merica Inc.社製の生後１日目ブロイラ鶏用市販ワクチ
ン;HA-株）104EID50/羽を接種した。
III群には、点眼により最小量105.8EID50/羽のNDV−B
1株（Intervet America Inc.社製のHitchner型NDV株の
市販ワクチン）を接種した。
1株（Intervet America Inc.社製のHitchner型NDV株の
市販ワクチン）を接種した。
IV群とＶ群には、点眼によりIBV−Mildvac−Ｍ株とND
V−B1株とを併用して（単一接種の場合と同用量で）接
種した。
V−B1株とを併用して（単一接種の場合と同用量で）接
種した。
VI群とVII群には、点眼によりMa5株とNDV−B1株を併
用して（単一接種の場合と同用量で）接種した。
用して（単一接種の場合と同用量で）接種した。
VIII群には、点眼により陰性尿嚢液を接種し、対照と
した。
した。
USDA−IBV−M41試験株（I,II,IV,VI群とVIII群の一
部）もしくはUSDA−NDV試験株（III,V,VII群とVIII群の
一部）を用いて接種後の21検体で試験を実施した。
部）もしくはUSDA−NDV試験株（III,V,VII群とVIII群の
一部）を用いて接種後の21検体で試験を実施した。
USDA−IBV−M41試験株による試験を施した鳥からは、
試験後４日目に臨床症候を記録した；次にその鳥を屠殺
し、ウイルス回復を試み且つ臨床的動きを観察するため
に、気管を集めた。USDA−NDV試験株で試験した鳥の方
は、試験後10日間、死亡率および臨床徴候を観察した。
試験後４日目に臨床症候を記録した；次にその鳥を屠殺
し、ウイルス回復を試み且つ臨床的動きを観察するため
に、気管を集めた。USDA−NDV試験株で試験した鳥の方
は、試験後10日間、死亡率および臨床徴候を観察した。
結 果： 表１には、試験後４日目のウイルス回復、繊毛静止、
臨床徴候により測定した場合のUSDA−IBV−M41試験に対
するパーセンタイル防護が示されている。
臨床徴候により測定した場合のUSDA−IBV−M41試験に対
するパーセンタイル防護が示されている。
Ma5株（HA+）株は、NDV株と併用の場合、Ｍ−41試験
株による試験に対してMildvac−Ｍ（HA-）株よりも良好
な防護を示す。NDV試験を施した群間には防護に際して
有意差は認められなかった。全症例において防護は申し
分なかった。：全群の90％以上のヒヨコが防護された。
株による試験に対してMildvac−Ｍ（HA-）株よりも良好
な防護を示す。NDV試験を施した群間には防護に際して
有意差は認められなかった。全症例において防護は申し
分なかった。：全群の90％以上のヒヨコが防護された。
実施例II 孵化１日目の市販ブロイラ鶏を５群に分け、隔離器に
入れた。
入れた。
２群にはH120/クローン30併用接種し（１群はざっと
スプレーし、他方は点眼による）、他の２群には、Ma5/
クローン30を併用接種（１群にはざっとスプレーし、他
方は点眼）した。残りの１群は未接種対照としてそのま
まにした。
スプレーし、他方は点眼による）、他の２群には、Ma5/
クローン30を併用接種（１群にはざっとスプレーし、他
方は点眼）した。残りの１群は未接種対照としてそのま
まにした。
クローン30はNDVワクチンで、Intervet社から市販さ
れている。
れている。
接種後４日目と８日目に、１群当たり６羽を取り出
し、臨床徴候を記録して、その気管を繊毛静止検査で調
べた。
し、臨床徴候を記録して、その気管を繊毛静止検査で調
べた。
接種後４週間目に、点眼接種した鳥にM41−試験株に
より試験を施した（106EID50/羽、点眼）。M41試験後４
日目に臨床徴候を記録し、繊毛鬱血検査用に気管を採取
した。
より試験を施した（106EID50/羽、点眼）。M41試験後４
日目に臨床徴候を記録し、繊毛鬱血検査用に気管を採取
した。
スプレー接種鳥に接種後５週目にNDV試験を施し（NDV
−Herts試験株、107EID50/羽、；筋注）、12日間毎日、
臨床症候と死亡率を記録した。
−Herts試験株、107EID50/羽、；筋注）、12日間毎日、
臨床症候と死亡率を記録した。
結果：表2,3,4および５は上記実験結果を示している。
自発性血球凝集性IB株（Ma5）と併用すると、M41−試験
株とNDV−試験株とによる試験に対して、自発的にニワ
トリ赤血球を凝集しないIB株（H120）との併用よりも良
好な防護が示された。
自発性血球凝集性IB株（Ma5）と併用すると、M41−試験
株とNDV−試験株とによる試験に対して、自発的にニワ
トリ赤血球を凝集しないIB株（H120）との併用よりも良
好な防護が示された。
実施例III 251日目SPFニワトリ（SPAFAS）を各50羽含有の４群
に分けて負圧隔離器に入れた。次いで、以下の株を用い
て鳥に接種した： I 群:Ma5;104EID50/動物（点眼）;HA+株。
に分けて負圧隔離器に入れた。次いで、以下の株を用い
て鳥に接種した： I 群:Ma5;104EID50/動物（点眼）;HA+株。
II 群:Mildvac−Ｍ（塊状;B48株、Intervet America
Inc.社から市販）;104EID50/動物（点眼）;HA-株。
Inc.社から市販）;104EID50/動物（点眼）;HA-株。
III群:IB−vac−Ｍ（塊状;Connaught株、Intervet Am
erica Inc.社より市販）;104EID50/動物（点眼）;HA
-株。
erica Inc.社より市販）;104EID50/動物（点眼）;HA
-株。
IV 群：陰性尿嚢液;0.1ml/動物（点眼）。
接種後５週目に、全群にM41試験株による試験を施し
た。試験後５日目に、１群当たり10羽から臨床症候を記
録し、次いでその鳥を屠殺して気管を摘出し、ウイルス
を再単離し且つ繊毛活性を観察した。試験後７日目に、
全群の残りの鳥を剖検した。
た。試験後５日目に、１群当たり10羽から臨床症候を記
録し、次いでその鳥を屠殺して気管を摘出し、ウイルス
を再単離し且つ繊毛活性を観察した。試験後７日目に、
全群の残りの鳥を剖検した。
結 果 結論：自発的血球凝集を示すMa5株は、試験に対して、
同一血清型に属するものと比較した場合、２種のHA-株
よりも良好な保護を生じる。さらに、本実施例に示され
ない実験では、Ma5株が他のIBV株との併用ワクチンの形
でも顕著な特性を有することが認められた。
同一血清型に属するものと比較した場合、２種のHA-株
よりも良好な保護を生じる。さらに、本実施例に示され
ない実験では、Ma5株が他のIBV株との併用ワクチンの形
でも顕著な特性を有することが認められた。
実施例IV ILT−ワクチンと併用投与した場合の、自発的血球凝
集性IBV−マサチューセッツ株（Ma5）と非血球凝集性IB
V−マサチューセッツ株（H120）の免疫原性を比較する
ために本実験を実施した。
集性IBV−マサチューセッツ株（Ma5）と非血球凝集性IB
V−マサチューセッツ株（H120）の免疫原性を比較する
ために本実験を実施した。
材料と方法： ワクチン 実験には以下のワクチン株を用いた： （１）IBV−Ma5 本ワクチンをリン酸トリプトース ブロスで1:100に
希釈し、その0.1mlを各鳥に点眼投与した（滴定量:Ma5
株104.6EID50/羽）。
希釈し、その0.1mlを各鳥に点眼投与した（滴定量:Ma5
株104.6EID50/羽）。
（２）IBV−H120 本ワクチンをリン酸トリプトース ブロスで1:100に
希釈し、その0.1mlを各鳥に点眼投与した（滴定量:H120
株105.1EID50/羽）。
希釈し、その0.1mlを各鳥に点眼投与した（滴定量:H120
株105.1EID50/羽）。
（３）ILT−ワクチン 本ワクチンをメーカーの指示に従って希釈し、１鳥用
量を鳥に点眼投与した。
量を鳥に点眼投与した。
実験計画： 孵化後４週間目のSPE鶏を３群に分け、負圧隔離器に
入れた。
入れた。
１群には１鳥用量のMa5ワクチンと１鳥用量のILT−ワ
クチンを点眼接種した。第３群は対照としてそのままに
しておいた。接種後４週間目に、IBV−M41試験株を用い
て鳥に接種した（M41−第８継代接種（Weybridge株）;1
04.8EID50/羽；点眼）。
クチンを点眼接種した。第３群は対照としてそのままに
しておいた。接種後４週間目に、IBV−M41試験株を用い
て鳥に接種した（M41−第８継代接種（Weybridge株）;1
04.8EID50/羽；点眼）。
試験後４日目に、鳥を屠殺し、その気管を採取して、
繊毛活性を調べ且つウイルス回復を試みた。
繊毛活性を調べ且つウイルス回復を試みた。
結 果： 表１に示されている通り、Ma5−ILT接種群の鳥の100
％、H120−ILT接種群の鳥の64％が、繊毛静止検査で測
定した場合、M41−試験株での試験に対して保護され
た。
％、H120−ILT接種群の鳥の64％が、繊毛静止検査で測
定した場合、M41−試験株での試験に対して保護され
た。
Ma5−ILT併用接種鳥の36％から、H120−ILT併用接種
鳥の全鳥から試験ウイルスが回復された。
鳥の全鳥から試験ウイルスが回復された。
結 論： 自発的血球凝集性IBV−株Wa5をILT−ワクチンと併用
して得る防護は、非血球凝集性IBV−株（H120と同様）
をILT−ワクチンと併用して得る保護を上回っている。
して得る防護は、非血球凝集性IBV−株（H120と同様）
をILT−ワクチンと併用して得る保護を上回っている。
フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 39/245 Ａ６１Ｋ 39/245 39/255 39/255
Claims (6)
- 【請求項１】ウイルス感染症に対して家禽を免疫化する
ための混合生ワクチンで、ニワトリ赤血球を自発的に凝
集する特性を示す少なくとも１種類の伝染性気管支炎生
ウイルスと、家禽感染症の少なくとも１種類の他のウイ
ルスより成るワクチン。 - 【請求項２】上記の少なくとも１種類の他の家禽感染症
ウイルスが、ニューカッスル病ウイルス、伝染性嚢包症
ウイルス、産卵低下（エッグ・ドロップ）症候群ウイル
ス、マレク病ウイルス、ニワトリの伝染性脳脊髄炎ウイ
ルス、細網内皮症ウイルス、鳥類ヘルペスウイルス、白
血症ウイルス、鳥類アデノウイルス、鳥類レオウイルス
より成る群から選択されることを特徴とする特許請求の
範囲第１項記載のワクチン。 - 【請求項３】米国メリーランド州ロックヴィル市のATCC
に寄託番号VR2199で寄託されている菌株もしくはそれに
由来する自発性赤血球凝集性菌株に属する伝染性気管支
炎ウイルスより成る特許請求の範囲第１項記載のワクチ
ン。 - 【請求項４】米国メリーランド州ロックヴィル市のATCC
に寄託番号VR2199で寄託されている菌株もしくはそれに
由来する菌株に属する伝染性気管支炎ウイルスとニュー
カッスル病ウイルスより成る特許請求の範囲第１項記載
のワクチン。 - 【請求項５】鳥類ウイルス性疾患に対して家禽を免疫化
する方法で、特許請求の範囲第１項記載の混合生ワクチ
ンを投与することより成る方法。 - 【請求項６】ウイルス感染症に対して家禽を免疫化する
ための混合生ワクチンの製造方法で、少なくとも一方の
ウイルスが自発的にニワトリ赤血球を凝集する伝染性気
管支炎ウイルスである少なくとも２種類の異なる鳥類ウ
イルスを合わせることより成る製造方法。
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