JP2900580B2

JP2900580B2 - 活性酸素障害防御剤

Info

Publication number: JP2900580B2
Application number: JP2288486A
Authority: JP
Inventors: 英彦日比野; 育男森田
Original assignee: NIPPON YUSHI KK
Current assignee: NIPPON YUSHI KK
Priority date: 1990-10-29
Filing date: 1990-10-29
Publication date: 1999-06-02
Anticipated expiration: 2014-06-02
Also published as: JPH04164029A

Description

【発明の詳細な説明】（産業上の利用分野）本発明は、活性酸素による細胞障害に基づく疾病を予
防及び治療せしめる薬剤に関するものである。

（従来の技術）生体内には多数の活性酸素消去システムがあり、酸化
的なストレスから生体を保護している。それらの防御シ
ステムの乱れから生じた活性酸素が様々な疾患の発現に
関与していることが明らかにされた。特に近年、動脈硬
化の発症機序に活性酸素による血管内皮細胞の障害が深
く関与していることが注目されている。

活性酸素によって血管内皮細胞が障害を受けると基底
膜が露出し、血流中の血小板が活性化され凝集反応が起
こる。凝集した血小板からは血小板由来の血管平滑筋細
胞増殖因子が放出され、中膜に存在し血管の弛緩収縮の
役割を担っていた平滑筋細胞が内膜に移行し、内膜層で
平滑筋細胞が増殖し内膜肥厚が起こり動脈硬化が発症す
る。動脈硬化が発症すると、内皮細胞からは内皮細胞由
来の平滑弛緩因子やプロスタサイクリンが産生され、血
圧の調節、血流の調節が行われる。

上記の動脈硬化の発症を一例として活性酸素による細
胞障害は各種疾患の原因の一部とみなされ、現在までに
も生体内においてこれらの活性酸素を消去する薬剤の検
討が行われてきた。活性酸素の消去や過酸化脂質の分解
などの作用を有する抗酸化性化合物が活性酸素消去剤と
して多方面からのアプローチによって開発されてきた
（福沢健治：ラジカル消去剤，メビオ，5 90〜94,198
8）。細胞質のような水溶性画分で活性酸素を効果的に
消去するのに水溶性のビタミンＣなどが知られている
が、細胞膜のような疎水性領域で効果を発揮する脂溶性
物質としてα−トコフェロール誘導体、β−カロチン、
エストロゲン類などが知られている（二木鋭雄：生体内
酸化防止剤，37,893螺合897,1988）。また水溶液中で強
い消去活性を示すビタミンＣを疎水性領域で働かせるた
め、この脂溶化物も消去剤として検討されている（Kane
yoshi Katoら:Studies on scavengers of activeoxygen
species,J.Med.Chem.,31,793〜798,1988）。

（発明が解決しようとする課題）最近の研究では、疾患時の活性酸素の生成部位が細胞
内と細胞外にあることが判明した。前者は細胞内小器
官、特にミトコンドリアなどで電子伝達系から無秩序に
電子が漏れ出して活性酸素が細胞質に出現し細胞内を障
害する。この場合、ラジカル消去剤は細胞膜を通過して
消去活性を示さなくてはならない。しかし、現在までに
検討されて来たスーパーオキサイドディスムタームやカ
タラーゼは分子量が大きく組織内移行が否定的であるこ
とやこれらは酵素であるため内服しても無効で、注射し
てもそのままでは半減期が短く血中持続時間が短いなど
投与方法の問題があった。

また、細胞外からの活性酸素による細胞障害の一例と
して、血管内皮細胞の障害からの保護は血圧の調節ばか
りでなく動脈硬化を予防することにもなることから、血
管内皮細胞の障害を抑制する薬剤の開発が期待されてい
る。

前記α−トコフェロール誘導体、β−カロチン、エス
トロゲン類、脂溶化ビタミンＣなどの化合物はしばしば
免疫系に作用したり、血圧や脈拍数などの循環系に影響
を与えたりして毒性を示すので、消去活性を高めるため
ポテンシャルをあまり高くなるように誘導化すると、ま
た毒性を示すという問題点があった。これらの物質の多
くはインヴィトロレベルで充分な消去活性を示しても、
インヴィヴォレベルで全く治療効果を発揮しないことも
知られている。また、これらの生体内抗酸化剤の脂溶化
誘導体は赤血球の変形能に変化を与え溶血現象を起こし
易くする。

本発明の目的は、これらの問題点を解消し、活性酸素
による細胞障害に起因する疾病を治療し、あるいは予防
する薬剤を提供することである。

（課題を解決するための手段）本発明は、有効成分が９−シス−オクタデセン酸また
は９−トランス−オクタデセン酸及びこれらを主成分と
してなる活性酸素による細胞障害防御剤である。

一般的に生体内で細胞、例えば血管内皮細胞に障害を
与える物質としては過酸化脂質を含む活性酸素種が知ら
れている。本発明者らは、血管内皮細胞を培養したのち
活性化した白血球による内皮細胞障害を放射性クロミウ
ムの放出反応で調べる実験系を作り、各種脂肪酸類を薬
剤として用いて、血管内皮細胞傷害予防効果を調べたと
ころ、前記９−シス−オクタデセン酸または９−トラン
ス−オクタデセン酸に強い予防効果があることを見出し
本発明を完成した。

これらの脂肪酸は、天然物または合成物、いずれの起
源のものも使用することができ、一般に市販されている
高純度のものなら充分である。

本発明の有効成分を活性酸素障害防御剤として用いる
場合、本有効成分はそれ自体公知の薬理的に許容される
担体、賦形剤、希釈剤などと混合し、公知の方法に従っ
て、医薬組成物、例えば錠剤、カプセル剤、液剤、坐
剤、注射剤として経口的もしくは非経口的に投与するこ
とができる。

また、本発明の有効成分が油脂成分である点から、非
経口投与に次の様な剤型が挙げられる。注射や点滴で
は、水溶性懸濁液、リポソーム製剤やリピットマイクロ
スフェアー製剤等の油性製剤がある。局所適用剤型では
眼内への点眼剤や点眼軟膏があり、また、直腸への脂質
界面活性剤混合ミセルタイプの坐薬がある。

投与量は投与対象、投与経路、症状などによっても異
なるが、経口的に投与する場合、本有効物質として通常
１回量として約1mg/kg体重〜100mg/kg体重、好ましくは
約5mg/kg〜50mg/kg体重を１日１〜３回程度投与する。

また、非経口的に投与する場合、例えば坐剤としては
本有効物質約5mg/kg〜20mg/kg体重を１日１〜２回投与
する。油性製剤の注射剤としては本有効物質約0.1mg/kg
〜20mg/kg体重を１日１〜２回投与することが好まし
い。

また、本発明の有効成分はカルボキシル基が遊離状態
であるため、一般の中性脂質に比べて水溶性が強く界面
活性剤を使用することにより容易に安定な油性製剤に加
工出来る。

（実施例）ウシ血管内皮細胞培養方法ウシ頚動脈血管５〜10cmを摘出した後、抗生物質（ペ
ニシリン、ストレプトマイシンなど）を添加したPBS
（リン酸緩衝溶液）で軽く洗い、同様の抗生物質含有ME
M（イーグル培地、minimumessential medium）に浸し氷
冷して培養室に持ち帰った。血管はさらに抗生物質含有
MEM培地で数回洗浄した。その後、血管に付着していた
脂肪をきれいに取り去り、ハサミで分岐部を切り、その
分岐部を通る形で血管を縦に切り開いた。平らな固定面
の上に血管を内膜面を上にし、引っ張った形でピン固定
した。＃11のメスを用い、内膜面に軽く触れるようにし
て内皮細胞を剥離した。その際、メスを予め20％FBS
（胎児牛血清）含有MEM培地（抗生物質を含有してい
る）に湿らせて、メスの動きをよりスムースにすると共
に平滑筋細胞の侵入を防いだ。メスに付着した内皮細胞
を上記MEM培地10mlに分散させ、800rpmで10分間遠心分
離した。その後、沈渣に上記MEMを加え、ピペットで内
皮細胞が数十個集まった稲穂状になるまで分散し、プラ
スチックシャーレに播き培養した。

血管内皮細胞を用いた活性酸素防御実験法 24穴のマルチウエルに上記の方法で単離し培養したウ
シ頚動脈由来内皮細胞を集密にした。その中に各種被験
薬を５μg/ml添加し、２日間培養して内皮細胞に取り込
ませた。その後⁵¹Cr−クロム酸ナトリウムを１ウエル当
り２μCi加えて、さらに18時間培養し、細胞内に⁵¹Cr−
クロム酸ナトリウムを取り込ませた。その後、ハンクス
液で２回洗浄し、内皮細胞の10倍量の白血球（ヒト末梢
血よりフィコール（商品名、ファーマシア社製）で分離
した好中球）と12−Ｏ−テトラデカノイル−ホルボール
−13−アセテートを10ng/ml加えた。（この物質は白血
球膜に作用したNADPH依存性の五単糖リン酸回路を刺激
して活性酸素の産生を促進し、内皮細胞を傷害する。こ
の時、活性酸素により傷害を受けた細胞から放射能が放
出される。）５〜６時間後に培養液中に放出されてきた
放射能をγ−シンチレーション・カウンターで測定し、
被験薬取り込み状態での放出量とした。内皮細胞内に取
り込まれた⁵¹Crの総量は0.1％のトリトンＸ−100を加え
細胞膜を溶かすことによって、培養液に放出された放射
能を測定し、トリトンＸ−100添加時での放出量とし
た。

また、白血球及び12−Ｏ−テトラデカノイル−ホルボ
ール−13−アセテートを添加しない時の放射能量を無刺
激時放出量とした。

なお、⁵¹Crの放出量は、 Y:〔無刺激時放出量〕で計算した。

⁵¹Crの放出量により、活性酸素防御効果を求めること
ができる。

実施例１前記、血管内皮細胞を用いた活性酸素防御実験法にお
いて、被験薬として、９−シス−オクタデセン酸及び
９−トランスオクタデセン酸を用いて放射能放出量を
測定した。

結果を第１表に示した。

比較例１前記、血管内皮細胞実験において、被験薬として、９−シス−テトラデセン酸９−シス−ヘキサデセン酸９−シス−イコセン酸 9,12,15−all−シス−オクタデカトリエン酸 5,8,11,14−all−シス−エイコサテトラエン酸 4,7,10,13,16,19−all−シス−ドコサヘキサエン酸６−シス−オクタデセン酸 11−シス−オクタデセン酸 5,8,11,14,17−all−シス−イコサペンタエン酸を用いた。また、コントロールとして、被験薬を用い
ずに実験を行った。

結果を第１表に示した。

実施例２シス−オクタデセン酸の濃度依存性による傷害抑制効果
試験シス−オクタデセン酸の血管内皮細胞への取込量は0.
1,1,5及び10μg/mlで行った。結果を第２表に示した。

比較例２血管内皮細胞実験において、被験物質を加えずに培養
したのち、白血球添加時にアスコルビン酸パルミテー
ト、スーパーオキサイドジスムターゼ、マンニトールお
よびビタミンＥを内皮細胞に添加し、以降は前記の手順
に従って放射能を測定した。結果を第３表に示す。

ヒドロキシラジカルやスーパーオキサイドなどの活性
酸素を消去する従来の活性酸素消去剤は白血球由来の活
性酸素による細胞傷害を抑制する効果が認められなかっ
た。

実施例３下記の成分を用いて、通常手段により錠剤を製造し
た。１錠あたりの組成は下記の通りである。

成人１人あたり１日２〜６錠を毎食後投与する。

（発明の効果）本発明の有効成分は生体内成分であるため著しく毒性
が低く、生体内の生理的有効濃度で活性酸素障害抑制効
果が認められ、生体膜にスムースに取り込まれることか
ら組織移行性にも優れた活性酸素障害防御剤である。

Claims

(57)【特許請求の範囲】

【請求項１】有効成分が９−シス−オクタデセン酸また
は９−トランス−オクタデセン酸を主成分としてなる活
性酸素障害防御剤。