JP3177367B2 - 酸性保存食品中の好酸性芽胞形成細菌検出方法及び測定キット - Google Patents

酸性保存食品中の好酸性芽胞形成細菌検出方法及び測定キット

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寛之 加藤
康史 川合
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Description

【発明の詳細な説明】
【0001】
【産業上の利用分野】本発明は酸性保存食品中の好酸性
芽胞形成細菌(以下好酸性菌と呼ぶことがある)検出方
法及び検出キット、特に好酸性芽胞形成細菌が代謝によ
り産生する生成物より該好酸性芽胞形成細菌の存在を確
認する好酸性芽胞形成細菌検出方法及び検出キットに関
する。
【0002】
【従来の技術】果汁飲料等比較的酸性度の高い食品に
は、通常の微生物は成育しにくいと考えられており、従
来パストル殺菌(90℃程度の加熱殺菌)で充分とされ
てきた。しかしながら、これらの果汁飲料を充填した缶
飲料等からも変敗缶が見出されており、特に充填後しば
らくしてから変敗現象がみられる場合が多いため、その
検出方法の確立が望まれている。近年、このような酸性
飲料の変敗の原因が耐熱性好酸性菌にあることが報告さ
れている。
【0003】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、前記好
酸性菌の簡便な検出方法は未だ開発されておらず、一般
的な菌培養に基づくコロニー確認に依存しているのが現
状であった。一般の培養法によれば、検査担当者は微生
物操作に関する事柄についてある程度知識を有する必要
がある。さらに、平板培地上のコロニーを確認して、芽
胞形成を顕微鏡で確認するには4〜5日の日数を要し、
そのため、酸性保存食品を出荷前に長期にわたって保存
し、その間に当該ロット中の好酸性菌の存否を判断して
いる。そこで、従来4〜5日かかっている操作を1日で
も短くするよう短縮し、かつ、微生物操作に関する知識
や顕微鏡などの設備を必要としない効果的な判断方法が
求められている。本発明は前記従来技術の課題に鑑みな
されたものであり、その目的は酸性保存食品中の好酸性
芽胞形成細菌を簡便且つ短時間に見出すことのできる好
酸性芽胞形成細菌検出方法及び検出キットを提供するこ
とにある。
【0004】
【課題を解決するための手段】前記目的を達成するため
に本発明者らが鋭意検討を行なった結果、好酸性菌はそ
の培養中にバニリン等のアルデヒド類を特異的に変化さ
せることを見出し、本発明を完成するに至った。すなわ
ち、本出願の請求項1記載の酸性保存食品中の好酸性芽
胞形成細菌検出方法は、酸性保存食品を添加した酸性培
地にアルデヒドを添加し、培養生成物より好酸性芽胞形
成細菌によるアルデヒドからの生成物の存在を確認する
ことを特徴とする。また、本出願の請求項2記載の方法
は、前記アルデヒドがバニリンであり、アルデヒドから
の生成物であるグアヤコールを検出することを特徴とす
る。請求項3記載の方法は、グアヤコールの検出は官能
試験により行なわれることを特徴とする。請求項4記載
の好酸性芽胞形成細菌検出用キットは、容器中にアルデ
ヒドを含む酸性培地を有し、滅菌・密閉されたことを特
徴とする。請求項5記載のキットは、アルデヒドはバニ
リンであることを特徴とする。
【0005】
【作用】前述したように本発明者らは好酸性芽胞形成細
菌を簡便に見出すための検討を行なう過程において、好
酸性芽胞形成細菌がアルデヒド化合物をアルコール,フ
ェノール等に変化させることを発見した。特に、前記好
酸性芽胞形成細菌はバニリンをグアヤコールに変化さ
せ、しかも該グアヤコールは強い臭気を有するため、バ
ニリンを含む培地中に果汁等の被検試料を添加すること
により、コロニーの生成を確認するまでもなく、短時日
で被検試料中の好酸性芽胞形成細菌の存在を検知するこ
とができる。
【0006】
【実施例】以下、図面に基づき本発明の好適な実施例を
説明する。なお、本発明はこれらの実施例に限定される
ものではない。まず、本発明者らは果汁飲料缶が変敗し
た場合の異臭成分の同定を行なった。図1は、甘味料
(ハチミツ)が添加された果汁飲料の溶媒抽出成分のガ
スクロマトグラフィーによる分析例であり、同図(A)
は正常品、同図(B)は変敗品である。両図を比較する
と、正常品のピーク〜が変敗品においては殆ど消失
し、一方正常品には極めてわずかにしか認められないピ
ーク〜が著しく増加していることが明かとなった。
そこで本発明者らは、前記ピーク〜に相当する成分
及び〜に相当する成分の同定をGC−MSにより行
なった。
【0007】この結果、ピーク〜はそれぞれn
8,nC9,nC10のアルデヒド(ノルマルオクタナー
ル,ノルマルノナナール,ノルマルデカナール)であ
り、ピーク〜はnC8,nC9,nC10のアルコール
(ノルマルオクタノール,ノルマルノナノール,ノルマ
ルデカノール)であることが明かになった。次に、好酸
性菌が缶内条件下においてアルデヒドを該アルデヒドに
対応するアルコールに変化させるとの仮説に基づき、直
鎖のアルデヒドを添加した培地中に各種好酸性菌を接種
し、その変化を観察した。この結果を図2に示す。
【0008】同図において、(A)は好酸性菌接種前の
試料のガスクロマトグラフであり、ピークはnC5
ルデヒド(ノルマルペンタナール、ピークはnC6
ルデヒド(ノルマルヘキサナール)である。そして、こ
れに対し変敗果汁飲料より分離された好酸性菌A〜Dを
接種した場合には、それぞれアルデヒドのピーク、
が消失し、それぞれ対応したnC5アルコール(ノルマ
ルペンタノール)(ピーク)及びnC6アルコール
(ノルマルヘキサノール)(ピーク)が形成された
(同図(B)〜(E))。なお、前記アルデヒドを添加
しない場合には、たとえ菌Aを接種したとしてもアルコ
ールの生成は認められない(同図(F))。従って、好
酸性菌が前記直鎖アルデヒドをそれぞれ炭素数の対応す
る直鎖アルコールに変化させていることが理解できる。
【0009】そこで、本発明者らは更に検討を進め、ガ
スクロマトグラフィー等の分析機器を用いることなく、
好酸性菌の存在を確認することを試みた。この結果、好
酸性菌の作用によりバニリン→グアヤコール(化1)、
ベンズアルデヒド→ベンジルアルコール及び安息香酸
(化2)、m−メトキシベンズアルデヒド→m−メトキ
シベンジルアルコール(化3)、p−ヒドロキシベンズ
アルデヒド→フェノール(化4)の反応が生じることが
明かとされた。
【化1】
【化2】
【化3】
【化4】 この中で、グアヤコールは強い臭気を有しており、この
ため好酸性菌の存在を短時間の培養により官能的に検査
することが可能となる。
【0010】そこで、標準バニリンを添加した培地に前
記好酸性菌A〜Dを接種し、その変化を調べた。結果を
図3に示す。同図より明らかなように、バニリンのピー
クは、いずれの好酸性菌接種区においても殆ど消失
し、これに代ってグアヤコール(ピーク)が産生して
いることが理解される。従って、バニリンを培地中に添
加し、該培地に果汁飲料を添加することにより、好酸性
菌が存在していればグアヤコールが生成し、その臭気に
より好酸性菌の存在を確認できることが示唆される。そ
こで、市販オレンジジュースにバニリンを添加し、更に
前記好酸性菌A〜Dを接種し、菌の増減、臭気の変化、
バニリン及びグアヤコールの増減状況を調べた。結果を
図4に示す。
【0011】同図より明らかなように、10%果汁区で
は菌が減少し、更にバニリンも若干減少するが、グアヤ
コールは生成されず、臭気の変化は僅かであることが理
解される。一方、70%果汁区及び100%果汁区では
菌、臭気とも増加し、更にグアヤコールの生成も観察さ
れた。更に、市販アップルジュースに同様の試験を行な
ったところ、10%果汁区ではオレンジジュースと同じ
様な傾向を示したが、、70%果汁区では菌、臭気及び
グアヤコールの増加が著しい(図5参照)。ところが、
100%果汁区では、菌、臭気の変化は著しいものの、
グアヤコールの生成は殆ど観察されない。
【0012】従って、条件にもよるが単に果汁にバニリ
ンを添加したのみでは、好酸性菌の確認を確実に行なう
ことはできない場合もある。そこで本発明者らは下記の
様な培地を作成し、容器に滅菌充填して好酸性菌検出キ
ットとした。 (1)培地1 ジャガイモ抽出液 (シ゛ャカ゛イモ200gを水400mlで抽出した抽出液) 400ml グルコース 20g バニリン 5mg 精製水 600ml なお、上記培地1は3N−HClでpH4.0に調整し
た。 (2)培地2 ポテトデキストロースブロス(Difco社製) 24g バニリン 5mg 精製水 1l なお、上記培地2は3N−HClでpH4.0に調整し
た。 (3)培地3 モルツエキス 20g グルコース 20g ペプトン 1g バニリン 5mg 精製水 1l なお、上記培地3は3N−HClでpH4.0に調整し
た。
【0013】上記培地1〜3の適当量(10〜20ml)
を容器に密封し、該容器内に被検試料としての果汁を1
〜2ml添加した。そして、30℃で約48時間培養した
ところ、好酸性菌の含む果汁が添加されたものについて
はグアヤコール独特の臭気が認められた。しかし、好酸
性菌を含まないものについては、いずれもグアヤコール
臭は認められなかった。従って、この検出キットを用い
れば、前記アップルジュース100%区のように果汁に
バニリンを加えたのみではグアヤコールの生成が認めら
れない被検試料にあっても、倍地に添加する事によって
異臭の発生により好酸性菌の確認を行なうことができ
た。
【0014】
【発明の効果】以上説明したように本発明にかかる酸性
保存食品中の好酸性芽胞形成細菌検出方法及び測定キッ
トによれば、酸性保存食品を添加した培地中に保存食品
とアルデヒドを添加することで、好酸性芽胞形成細菌に
よる生成物を確認し、簡便に好酸性芽胞形成細菌の存在
の確認を行なうことができる。
【図面の簡単な説明】
【図1】果汁飲料の溶媒抽出成分のガスクロマトグラフ
ィーによる分析例であり、同図(A)は正常品、同図
(B)は変敗品である。
【図2】直鎖のアルデヒドを添加した培地中に各種好酸
性芽胞形成細菌を接種した場合の変化を示すガスクロマ
トグラフ図である。
【図3】標準バニリン溶液に各種好酸性芽胞形成細菌を
接種した場合の変化を示すガスクロマトグラフ図であ
る。
【図4】市販オレンジジュースにバニリンを添加し、更
に各種好酸性芽胞形成細菌を接種した場合の、菌の増
減、臭気の変化、バニリン及びグアヤコールの増減状況
を示す説明図である。
【図5】市販アップルジュースに図4と同様の試験を行
なった場合の説明図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.7,DB名) C12Q 1/00 - 1/24 BIOSIS(DIALOG)

Claims (5)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項1】 酸性保存食品を培地に添加し、培養を行
    なうことで該酸性保存食品中の菌を検出する方法におい
    て、 酸性培地にアルデヒドを添加し、培養生成物より好酸性
    芽胞形成細菌によるアルデヒドからの生成物の存在を確
    認することを特徴とする酸性保存食品中の好酸性芽胞形
    成細菌検出方法。
  2. 【請求項2】 請求項1記載の方法において、 前記アルデヒドはバニリンであり、アルデヒドからの生
    成物であるグアヤコールを検出することを特徴とする酸
    性保存飲料中の好酸性芽胞形成細菌検出方法。
  3. 【請求項3】 請求項2に記載の方法において、グアヤ
    コールの検出は官能試験により行なわれることを特徴と
    する酸性保存食品中の好酸性芽胞形成細菌検出方法。
  4. 【請求項4】 容器中にアルデヒドを含む酸性培地を有
    し、滅菌・密閉されたことを特徴とする好酸性芽胞形成
    細菌検出用キット。
  5. 【請求項5】 請求項4記載のキットにおいて、アルデ
    ヒドはバニリンであることを特徴とする好酸性芽胞形成
    細菌検出用キット。
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