JP3473623B2 - うっ血性心不全を治療するための、成長ホルモンとインスリン様成長因子との組み合わせ - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 発明の背景 1.発明の分野 本発明は、アンジオテンシン変換酵素（ACE）阻害剤
の存在下または不存在下、成長ホルモンおよびインスリ
ン様成長因子Ｉを用いて、うっ血性心不全に罹っている
患者を治療する分野に関する。

2.関連技術の説明 インビトロにおける研究は、ラットでのGH分泌腫の移
植による成長ホルモン（GH）の慢性分泌過多が、低いAT
Pアーゼ活性V3アイソフォーム（isoform）へのイソミオ
シンパターンの著しいシフトにもかかわらず、分離され
た心臓の乳頭筋の無負荷短縮速度に影響を及ぼすことな
く、等尺力（isometric force）の増加をもたらすこと
を示している。これらの結果が、GHが、心筋をより無駄
なく機能される心筋収縮パターンを誘発し得ることを示
唆する。Timsit,J.ら、J.Clin.Invest.86:507−515（19
90）;Timsit,J.ら、Acta.Paediatr.Suppl.383:32−34
（1992）。収縮性能の増加は、最大張力とカルシウムに
対する筋原線維の感受性との両方の増加を含め、収縮器
官の特性における特異的変化が原因であることが示され
た。Mayoux,E.ら、Circulation Research 72（１）:57
−64（1993）。しかし、慢性GH分泌過多を患っている麻
酔されたラットでのインビボにおける血流力学研究は、
心臓の性能に関する指数の増加または減少のいずれかを
伴なって、相反する結果を与えている。Penney,D.G.
ら、Cardiovascular Research 19:270−277（1985）;Ru
bin,S.A.ら、J.Mol.Cell Cardiol.22:429−438（199
0）。これらの２つのインビボにおける研究間の不一致
は、血流力学に関する麻酔の作用と多分関係がある。さ
らに、臨床研究は、GHの投与が、健康な人間での心筋収
縮および心拍出量を増加させることを実証している。Th
uesen,L.ら、Dan.Med.Bull.35（２）:193−196（198
8）。GHを用いての治療は、GHが欠損している成人での
心臓の性能の有意な増加および自動運動（exercise）能
力の改善を引き起こす。Jorgensen,J.ら、The Lancet
i:1221−1225（1989）;Cuneo,R.ら、J.Appl.Physiol. 70:695−700（1991）;Christiansen,J.S.ら、Acta.Paed
iatr.Suppl.383:40−42（1992）;Amato,G.ら、J.Clin.E
ndocrinol.Metab.77:1671−1676（1994）;Caidahl,K.
ら、Clin.Endocrinol.40:393−400（1994）。先の研究
は、２週間のGH処置が、うっ血性心不全に罹っている意
識のあるラットでの、心室の収縮性を増加させることに
より、また末梢血管抵抗を減少させることにより、心機
能を改善することを示している。Yang,R.ら、Clinical
Research 42（２）:325A（1994）。

インスリン様成長因子（IGF−Ｉ）は、培養において
筋細胞でのアクチン合成を促進すること（Florini,J.
R.、Muscle and Nerve 10:577−598［1987］）、またイ
ンビトロにおいて新生児ラットの心細胞の収縮性を増加
させることが示されている。Vetter,U.ら、Basic Res.C
ardiol.83:647−654（1988）。IGF−Ｉの急性静脈内投
与（注入またはボーラス注射）は、健康な子羊での一回
拍出量および心拍出量の増加を生ずる。Gluckmanら、PC
T WO92/11865（1992）。ドキソルビシンで心筋症を誘発
させたラットでは、IGF−Ｉを３週間用いての慢性治療
が、心拍出量および一回拍出量を増加させた。Ambler,
G.R.ら、Cardiovascular Research 27:1368−1373（199
3）。

グルコースの循環レベルに対するGHの作用は、IGF−
Ｉの作用とは正反対である。GHの投与は、ヒトでは、グ
ルコース不耐症を引き起し得るか、血糖レベルを増加さ
せて、高血糖症を生じ得る。Sherwin,R.S.ら、Diabetol
ogia 24:155−156（1983）;Metcalfe,P.ら、Diabetolog
ia 20:123−128（1981）。対照的に、IGF−Ｉの皮下投
与または静脈内投与は、ヒトでは、血中グルコースを低
下させて、低血糖症を誘発し得る。Guler,H.P.ら、N.En
gl.J.Med.317:137−140（1987）;Takano,K.ら、Endocri
nol.Japan.37（２）:309−317（1990）;Froesch,E.R.
ら、Trends Endocrinol.Metab.1:254−260（1990）。さ
らに、臨床研究は、GH処置とIGF−Ｉ処置との組み合わ
せは、実質的には、GH単独またはIGF−Ｉ単独のいずれ
かより同化を促進することを実証している。その組み合
わせはまた、健康な被験者では、GH単独により引き起こ
される高血糖症を予防し、またIGF−Ｉ単独により誘発
される低血糖症をも減衰させる。Kupfer,S.R.ら、J.Cli
n.Invest.91:391−396（1993）;Clemmons,D.R.ら、J.Cl
in.Endocrinol.Metab.75:234−238（1992）。

心不全は、約300万人のアメリカ人を冒している。新
たな心不全の患者は、毎年約400,000に達する。うっ血
性心不全は、左心室機能不全、自動運動耐性の減少、生
活の質の悪化、および平均寿命の著しい短縮により特徴
付けられる症候群である。左心室の収縮性の減少は、そ
の結果起こる全身性の動脈血管収縮および静脈血管収縮
に伴って、心拍出量の減少をもたらす。一回拍出量のさ
らなる減少という悪循環を促進した後、血管抵抗の上昇
を増加させる、この血管収縮は、レニン−アンジオテン
シン系により幾分媒介されるらしい。この系の重要な成
分、血管収縮薬、アンジオテンシンIIはまた、アルドス
テロン分泌を刺激し、多分、交感神経作動を高めて、バ
ソプレッシン分泌を増加させるという作用をも有する。
Cohn,J.N.ら、N.England J.Med.325（５）:303−310（1
991）;Captopril Multicenter Research Group、J.A.C.
C.2（４）:755−763（1983）。カプトプリルのようなア
ンジオテンシン変換酵素（ACE）阻害剤は、うっ血性心
不全に罹っている患者に対する標準的な療法となってい
る。これらの薬物は、うっ血性心不全に罹っている患者
では、血流力学プロフィールおよび自動運動耐性を改善
し、また罹患率および死亡率の範囲を減少させる。Kram
er,B.L.ら、Circulation 67（４）:807−816（1983）;C
aptopril Multicenter Research Group、J.A.C.C.2
（４）:755−763（1983）;The CONSENSUS Trial Study
Group、N.Engl.J.Med.316（23）:1429−1435（1987）;T
he SOLVD Investigators、N.Engl.J.Med.325（５）:293
−302（1991）。しかし、効能が証明されたにもかかわ
らず、ACE阻害剤に対する反応は限定されている。機能
的能力および自動運動時間の改善は極く僅かであり、ま
た死亡率は、減少されたとはいえ、依然として高いまま
である。The CONSENSUS Trial Study Group、N.Engl.J.
Med.316（23）:1429−1435（1987）;The SOLVD Investi
gators、N.Engl.J.Med.325（５）:293−302（1991）;Co
hn,J.N.ら、N.Engl.J.Med.325（５）:303−310（199
1）;The Captopril−Digoxin Multicenter Research Gr
oup、JAMA 259（４）:539−544（1988）。GHおよびIGF
−Ｉは各々、心臓の性能を改善することが別々に示され
ている。しかし、今のところ、カプトプリルの存在下ま
たは不存在下、心不全でのGHとIGF−Ｉとの組み合わせ
の効果は評価されていない。

従って、本発明の目的は、うっ血性心不全に罹ってい
る患者に対する治療方法であって、該患者に、ACE阻害
剤に加えてGHおよびIGF−Ｉを投与することからなる方
法を提供することである。カプトプリルは単独で、例え
ば、末梢血管抵抗を減少させることにより心機能を改善
することは周知である。カプトプリルはGHおよびIGF−
Ｉと一緒に、心臓の性能に関してカプトプリル単独で引
き起こすよりも優れた改善を引き起こす。

本発明の別の目的は、うっ血性心不全に罹っている患
者に対する治療方法であって、ACE阻害剤の不存在下、G
HとIGF−Ｉとの組み合わせの有効量を用いて、該患者を
処置することからなる方法を提供することである。GHと
IGF−Ｉとを組み合わせての投与は、心室の収縮性の増
加および末梢血管抵抗の減少により心臓の性能の改善を
生ずる。

うっ血性心不全に罹っている患者に対する心臓の性能
の改善は、ACE阻害剤を用いて治療している患者では、G
HとIGF−Ｉとの組み合わせを治療レジメに加えることに
より達成される。これらの患者での心臓の性能の改善は
また、治療の最初から、GH/IGF−ＩおよびACE阻害剤の
投与によっても達成される。

発明の要約 本発明は、うっ血性心不全の治療方法であって、ACE
阻害剤を伴っての、またはACE阻害剤を伴わずしての、G
HおよびIGF−Ｉ（GH/IGF−Ｉ）の有効量の投与により特
徴付けられる方法を提供することにより、これらの目的
を達成する。

一態様において、本発明は、うっ血性心不全を示して
いる哺乳動物を治療する方法であって、該哺乳動物に、
GHとIGF−Ｉとの組み合わせ、およびACE阻害剤の有効量
を投与することからなる方法を提供する。GHおよびIGF
−Ｉの投与は、ACE阻害剤を用いて処置した後に開始す
るのがよい。

別の態様において、本発明は、うっ血性心不全を示し
ている哺乳動物を治療する方法であって、該哺乳動物
に、ACE阻害剤の不存在下、GHとIGF−Ｉとの組み合わせ
の有効量を投与することからなる方法を提供する。

図面の簡単な説明 第1a図は、水で処置したラットおよびカプトプリルで
処置したラットでの体重（BW）に関する、成長ホルモン
並びにインスリン様成長因子（GH/IGF−Ｉ）の作用（線
影を付けた棒グラフ）およびGH/IGF−Ｉに対する担体ビ
ヒクル単独の作用（空白の棒グラフ）を示す。＊＊Ｐ＜
0.01、各々のビヒクルのグループと比較した。

第1b図は、水で処置したラットおよびカプトプリルで
処置したラットでの体重に対する左心室重量の割合（LV
W/BW）に関する、GH/IGF−Ｉの作用（線影を付けた棒グ
ラフ）およびビヒクル単独の作用（空白の棒グラフ）を
示す。＃Ｐ＜0.05、＃＃Ｐ＜0.01、各々の水のグループ
と比較した。

第2a図は、水で処置したラットおよびカプトプリルで
処置したラットでのGHの血清レベルに関する、GH/IGF−
Ｉの作用（線影を付けた棒グラフ）およびビヒクル単独
の作用（空白の棒グラフ）を示す。＊＊Ｐ＜0.01、各々
のビヒクルのグループと比較した。

第2b図は、水で処置したラットおよびカプトプリルで
処置したラットでのIGF−Ｉの血清レベルに関する、GH/
IGF−Ｉの作用（線影を付けた棒グラフ）およびビヒク
ル単独の作用（空白の棒グラフ）を示す。＊＊Ｐ＜0.0
1、各々のビヒクルのグループと比較した。

第３図は、水で処置したラットおよびカプトプリルで
処置したラットでの梗塞の大きさに関する、GH/IGF−Ｉ
の作用（線影を付けた棒グラフ）およびビヒクル単独の
作用（空白の棒グラフ）を示す。

第4a図は、水で処置したラットおよびカプトプリルで
処置したラットでの収縮期動脈血圧（SAP）に関する、G
H/IGF−Ｉの作用（線影を付けた棒グラフ）およびビヒ
クル単独の作用（空白の棒グラフ）を示す。＃＃Ｐ＜0.
01、各々の水のグループと比較した。

第4b図は、水で処置したラットおよびカプトプリルで
処置したラットでの平均動脈血圧（MAP）に関する、GH/
IGF−Ｉの作用（線影を付けた棒グラフ）およびビヒク
ル単独の作用（空白の棒グラフ）を示す。＊＊Ｐ＜0.0
1、各々のビヒクルのグループと比較した。＃＃Ｐ＜0.0
1、各々の水のグループと比較した。

第4c図は、水で処置したラットおよびカプトプリルで
処置したラットでの心拍数（HR）に関する、GH/IGF−Ｉ
の作用（線影を付けた棒グラフ）およびビヒクル単独の
作用（空白の棒グラフ）を示す。

第5a図は、水で処置したラットおよびカプトプリルで
処置したラットでの左心室最大dP/dtに関する、GH/IGF
−Ｉの作用（線影を付けた棒グラフ）およびビヒクル単
独の作用（空白の棒グラフ）を示す。＊Ｐ＜0.05、＊＊
Ｐ＜0.01、各々のビヒクルのグループと比較した。

第5b図は、水で処置したラットおよびカプトプリルで
処置したラットでの左心室拡張終期血圧（LVEDP）に関
する、GH/IGF−Ｉの作用（線影を付けた棒グラフ）およ
びビヒクル単独の作用（空白の棒グラフ）を示す。＊Ｐ
＜0.05、各々のビヒクルのグループと比較した。＃Ｐ＜
0.05、各々の水のグループと比較した。^P＜0.01、対照
（水＋ビヒクル）のグループと比較した。

第6a図は、水で処置したラットおよびカプトプリルで
処置したラットでの心指数（CI）に関する、GH/IGF−Ｉ
の作用（線影を付けた棒グラフ）およびビヒクル単独の
作用（空白の棒グラフ）を示す。＊＊Ｐ＜0.01、各々の
ビヒクルのグループと比較した。＃Ｐ＜0.05、各々の水
のグループと比較した。

第6b図は、水で処置したラットおよびカプトプリルで
処置したラットでの一回拍出量指数（SVI）に関する、G
H/IGF−Ｉの作用（線影を付けた棒グラフ）およびビヒ
クル単独の作用（空白の棒グラフ）を示す。＊0.05、＊
＊Ｐ＜0.01、各々のビヒクルのグループと比較した。＃
＃Ｐ＜0.01、各々の水のグループと比較した。

第6c図は、水で処置したラットおよびカプトプリルで
処置したラットでの全身血管抵抗（SVR）に関する、GH/
IGF−Ｉの作用（線影を付けた棒グラフ）およびビヒク
ル単独の作用（空白の棒グラフ）を示す。＊＊Ｐ＜0.0
1、各々のビヒクルのグループと比較した。＃＃Ｐ＜0.0
1、各々の水のグループと比較した。^P＜0.01、対照
（水＋ビヒクル）のグループと比較した。

発明の詳細な説明 a.定義 一般に、以下の用語または語句または略語は、説明、
実施例、および請求の範囲で使用される場合、指示され
た定義を有する。

本明細書中で使用する「BW」は、体重を示す。

本明細書中で使用する「CO」は、心拍出量を示す。

本明細書中で使用する「CI」は、心指数を示す。心指
数は、心拍出量を体重で割ったもの（CO/BW）として測
定することができる。

本明細書中で使用する「HR」は、心拍数を示す。

本明細書中で使用する「LVEDP」は、左心室拡張終期
血圧を示す。

本明細書中で使用する「LVW」は、左心室重量を示
す。

本明細書中で使用する「MAP」は、平均動脈血圧を示
す。

本明細書中で使用する「SAP」は、収縮期動脈血圧を
示す。

本明細書中で使用する「SV」は、一回拍出量を示す。
一回拍出量は、CO/HRとして測定することができる。

本明細書中で使用する「SVI」は、一回拍出量指数を
示す。一回拍出量指数は、SV/BWとして測定することが
できる。

本明細書中で使用する「SVR」は、全身血管抵抗を示
す。SVRは、MAP/CIとして測定することができる。

本明細書中で使用する「うっ血性心不全」は、左心室
機能不全、自動運動耐性の減少、生活の質の悪化、およ
び平均余命の著しい短縮により特徴付けられる症候群を
示す。左心室の収縮性の減少は、その結果起こる全身性
の動脈血管収縮および静脈血管収縮に伴って、心拍出量
の減少をもたらす。レニン−アンジオテンシン系により
幾分媒介されるらしい、この血管収縮は、一回拍出量の
さらなる減少という悪循環を促進した後、血管抵抗の上
昇を増加させる。

本明細書中で使用する「治療」は、うっ血性心不全を
患っている患者での心筋収縮および心臓の性能の増加の
誘発、さらにはうっ血性心不全の予防を示す。GHとIGF
−Ｉとの組み合わせをACE阻害剤と共に使用すると、心
筋収縮および心臓の性能の増加レベルが、ACE阻害剤の
単独使用から得られるレベル以上に増加される。

本明細書中で使用する「梗塞」は、不十分な血液供給
から起こる壊死の領域を示す。「心筋梗塞」は、不十分
な冠状血液供給から起こる心筋壊死を示す。

本明細書中で使用する「哺乳動物」は、ヒト、家畜並
びに飼育場の動物、およびイヌ、ウマ、ネコ、雌ウシ等
といったような、動物園、競技、またはペットの動物を
含め、哺乳動物として分類される動物を示す。好ましく
は、本明細書中の哺乳動物はヒトである。

本明細書中で使用する「ACE阻害剤」は、アンジオテ
ンシンＩのアンジオテンシンIIへの変換を防ぐ、アンジ
オテンシン変換酵素阻害薬物を示す。ACE阻害剤は、全
身血管抵抗を減少させて、循環うっ血を軽減することに
より、うっ血性心不全に有利であり得る。ACE阻害剤に
は、これらに制限されるものではないが、商標アキュプ
リル（Accupril） （キナプリル）、アルタース（Alta
ce） （ラミプリル）、カポテン（Capoten） （カプ
トプリル）、ロテンシン（Lotensin） （ベナゼプリ
ル）、モノプリル（Monopril） （ホシノプリル）、プ
リニビル（Prinivil） （リシノプリル）、バソテック
（Vasotec） （エナラプリル）、およびゼストリル（Z
estril） （リシノプリル）と名付けられたものが含ま
れる。ACE阻害剤の一例は、商標カポテン という名で
販売されているものである。一般的には、カプトプリル
と呼ばれ、このACE阻害剤は、化学的には、１−［（2
S）−３−メルカプト−２−メチルプロピオニル］−Ｌ
−プロリンと名付けられている。

本明細書中で使用する「成長ホルモン」または「GH」
は、天然配列または変異体型の成長ホルモン、および天
然、合成、または組み換え体であるとを問わず、あらゆ
る起源から得られる成長ホルモンを示す。例には、ヒト
天然配列を有する天然GHまたは組み換えGHであるヒト成
長ホルモン（hGH）（ソマトトロピンまたはソマトロピ
ン）、およびソマトレム、ソマトトロピン、並びにソマ
トロピンを含め、組み換えDNA技術によって産生され
る、あらゆるGHまたは変異体を指す組み換え成長ホルモ
ン（rGH）が含まれる。組み換えヒト天然配列であり、
そのＮ末端にメチオニンを有する、または有していない
成熟GHがヒトへの使用に好ましい。例えば、1988年７月
５日に発行された米国特許番号第4,755,465号およびGoe
ddelら、Nature 282:544（1979）に記載されている方法
により、大腸菌（Escherichia coli）で産生されるメチ
オニルヒト成長ホルモン（met−hGH）がさらに好まし
い。Genentech社より商標プロトロピン（Protropin）
という名で販売されているMet−hGHは、Ｎ末端のメチオ
ニン残基の存在を除き、天然ポリペプチドと同じであ
る。この加えられたアミノ酸は、細菌タンパク合成プロ
セスの結果である。Genentech社より商標ニュートロピ
ン（Nutropin） という名で入手することができる組み
換えhGHもまた好ましい。この後者のhGHは、このメチオ
ニン残基を欠き、天然ホルモンのものと同じアミノ酸配
列を有する。Grayら、Biotechnology 2:161（1984）を
参照。メチオニルhGHとhGHとは両方とも、等しい効力お
よび薬物動態学値を有する。Mooreら、Endocrinology 1
22:2920−2926（1988）。別の適当なhGH候補は、1987年
６月２日に発行された米国特許番号第4,670,393号に記
載されているような、純粋な体細胞原性活性を有し、ま
た乳汁産生活性を有していない、胎盤型のGHであるhGH
変異体である。1990年５月３日に公開されたWO90/04788
および1992年６月11日に公開されたWO92/09690に記載さ
れているようなGH変異体もまた含まれる。

本明細書中で使用する「IGF−Ｉ」は、ウシ、ヒツ
ジ、ブタ、ウマ、鳥類、また好ましくはヒトを含め、あ
らゆる種から得られる、天然配列または変異体型のイン
スリン様成長因子、および天然、合成、または組み換え
体であるとを問わず、あらゆる起源から得られるインス
リン様成長因子を示す。IGF−Ｉは、ヒト血清から分離
され、また組み換えにより産生されている。例えば、欧
州特許第123,228号および同第128,733号を参照。

本発明では、ブタを治療するにはブタのIGF−Ｉ、ヒ
ツジを治療するにはヒツジのIGF−Ｉ、ウシを治療する
にはウシのIGF−Ｉ等といったような、治療すべき特定
の種から得られる、その型のIGF−Ｉが動物への使用に
好ましい。本発明では、ヒト天然配列の、成熟IGF−
Ｉ、さらに好ましくは、例えば、1987年８月５日に公開
された欧州特許第230,869号;1984年12月19日に公開され
た欧州特許第128,733号；または1988年10月26日に公開
された欧州特許第288,451号に記載されている方法によ
り製造される、Ｎ末端メチオニンを有していない成熟IG
F−Ｉがヒトへの使用に好ましい。さらに好ましくは、
この天然配列のIGF−Ｉは組み換えにより製造され、ま
た臨床研究には、Genentech社、南サンフランシスコ、
カリフォルニアから入手することができる。

好ましいIGF−Ｉ変異体は、1991年12月31日に発行さ
れた米国特許第5,077,276号、1987年２月26日に公開さ
れたPCT WO87/01038、および1989年６月29日に公開され
たPCT WO89/05822に記載されているものであり、すなわ
ち、それらでは、少なくとも、グルタミン酸残基が成熟
分子のＮ末端から３位に存在しないか、またはそのＮ末
端でアミノ酸が５つまで欠失している。最も好ましい変
異体は、欠失したＮ末端から最初の３つのアミノ酸を有
する（脳IGF、tIGF−Ｉ、des（１−３）−IGF−Ｉ、ま
たはdes−IGF−Ｉと様々に呼ばれている）。

b.本発明を行うための方法 非経口、鼻腔内、経口を含め、あらゆる適当な技術に
より、または経皮吸収により、IGF−Ｉと組み合わせたG
Hを哺乳動物に直接投与する。それらは、同じ経路によ
り投与する必要がなく、また局所的に、または全身的に
投与することができる。各々の物質に関する具体的な投
与経路は、例えば、hGHまたはIGF−Ｉを単独で用いて
の、認められる副作用もしくは予期される副作用、また
は同化を促進する作用の減衰を含め、患者の医療歴に左
右されるであろう。非経口投与の例には、皮下、筋肉
内、静脈内、動脈内、および腹腔内投与が含まれる。皮
下および静脈内の注射または注入が好ましい。

有効量であるよう、GHおよびIGF−Ｉを投与する。GH
は、特定時間（例えば、１日１回）に特定用量の注射形
態でといったように、非連続的に投与するのがよく、こ
こでは、注射した時点で血漿GH濃度の上昇が起こった
後、次の注射の時間までに血漿GH濃度の降下が起こるで
あろう。別の非連続的投与法は、初期バーストのような
活性成分の不連続放出を与え、次いで、遅滞を与えた
後、活性成分を放出することが利用できる、多くの埋込
み装置の使用から得られ、例えば、米国特許番号第4,76
7,628号、第２欄、19〜37行。

しかし、さらに好ましくは、血中での継続的存在がGH
の投与期間中ずっと維持されるよう、GHを投与する。こ
のことは、最も好ましくは、例えば、浸透ミニポンプと
いったようなミニポンプでの連続注入によって成し遂げ
られる。あるいはまた、GHの多数回にわたる注射（すな
わち、１日１回以上、例えば、１日２回または３回）の
使用により適切に成し遂げられる。

投与する場合、GHをポリマーに複合させるか、または
結合させて、その循環半減期を増加させることができ
る。この目的に有用なポリエチレンポリオールおよびポ
リオキシエチレンポリオールの例には、ポリオキシエチ
レングリセロール、ポリエチレングリコール、ポリオキ
シエチレンソルビトール、ポリオキシエチレングルコー
ス等が含まれる。ポリオキシエチレングリセロールのグ
リセロール骨格は、例えば、動物およびヒトにおける、
モノグリセリド、ジグリセリドおよびトリグリセリドで
見受けられる骨格と同じである。

ポリマーは、あらゆる特定の分子量を有する必要はな
いが、分子量が約3,500〜100,000、さらに好ましくは5,
000〜40,000であるのが好ましい。好ましくは、PEGホモ
ポリマーは置換されていないが、また一端がアルキル基
で置換されていてもよい。好ましくは、そのアルキル基
は、C₁−C₄アルキル基であって、最も好ましくは、メチ
ル基である。最も好ましくは、そのポリマーは、PEGの
非置換ホモポリマー、PEGのモノメチル置換ホモポリマ
ー（mPEG）、またはポリオキシエチレングリセロール
（POG）であって、約5,000〜40,000の分子量を有する。

GHは、主として反応条件、ポリマーの分子量等に依存
して、GHの１つまたはそれ以上のアミノ酸残基でポリマ
ー上の末端反応基に共有結合する。本明細書中、反応基
を有するポリマーは、活性化ポリマーと呼ばれている。
反応基は、GH上の遊離アミノ基または他の反応基と選択
的に反応する。しかし、最適な結果を得るために選択さ
れる反応基の種類および量、さらにはまた使用されるポ
リマーの種類は、反応基がGH上のあまりに多くの、特に
活性な基と反応するのを避けるために、使用される個々
のGHに依存するであろうことが分かるであろう。このこ
とを完全に避けるのが不可能であり得るので、通例、タ
ンパク質濃度に依存して、タンパク質１モルにつき活性
化ポリマーを約0.1〜1,000モル、好ましくは２〜200モ
ル使用することが推奨される。タンパク質１モルについ
ての活性化ポリマーの最終量は、最適な活性を維持する
ためのバランスであるが、可能なら、タンパク質の循環
半減期を同時に最適化する。

残基は、１つまたは２つのシステインまたはＮ末端ア
ミノ酸基といったような、タンパク質上のあらゆる反応
性アミノ酸であり得るが、好ましくは、反応性アミノ酸
は、その遊離ε−アミノ基によって活性化ポリマーの反
応基に結合するリジンであるか、またはアミド結合によ
ってポリマーに結合するグルタミン酸またはアスパラギ
ン酸である。

共有結合修飾反応は、GH上の反応基がリジン基である
ならば、生物学的に活性な物質を、好ましくは約pH5〜
９、さらに好ましくは７〜９で、不活性なポリマーと反
応させるために一般的に利用される、いずれかの適当な
方法により行われる。通例、その方法は、（少なくとも
１つの末端ヒドロキシル基を有する）活性化ポリマーを
製造すること、このポリマーから活性な基質を製造する
こと、またその後、GHを活性な基質と反応させて製剤に
適当なGHを製造することを含む。先の修飾反応は、１つ
またはそれ以上の工程を含み得る幾つかの方法により行
うことができる。活性化ポリマーを一工程反応で製造す
るために使用することができる修飾物質の例には、シア
ヌル酸クロリド（2,4,6−トリクロロ−Ｓ−トリアジ
ン）およびシアヌル酸フルオリドが含まれる。

一態様において、その修飾反応は二工程で行われ、こ
こでは、まず最初に、ポリマーを、無水コハク酸または
無水グルタル酸といったような酸無水物と反応させて、
カルボン酸を形成した後、そのカルボン酸を、カルボン
酸と反応することができる化合物と反応させて、GHと反
応することができる反応性のエステル基を有する活性化
ポリマーを形成する。そのような化合物の例には、Ｎ−
ヒドロキシスクシンイミド、４−ヒドロキシ−３−ニト
ロベンゼンスルホン酸等が含まれ、また好ましくは、Ｎ
−ヒドロキシスクシンイミドまたは４−ヒドロキシ−３
−ニトロベンゼンスルホン酸を使用する。例えば、モノ
メチル置換PEGを、高温、好ましくは約100〜110℃で４
時間、無水グルタル酸と反応させるのがよい。このよう
にして製造したモノメチルPEG−グルタル酸を、ジシク
ロヘキシルカルボジイミドまたはイソプロピルカルボジ
イミドといったようなカルボジイミド試薬の存在下、Ｎ
−ヒドロキシスクシンイミドと反応させて、活性化ポリ
マー、メトキシポリエチレングリコリル−Ｎ−スクシン
イミジルグルタレートを製造した後、これをGHと反応さ
せることができる。この方法は、Abuchowskiら、Cancer
Biochem.Biophys.7:175−186（1984）に詳細に記載さ
れている。別の例では、モノメチル置換PEGを無水グル
タル酸と反応させた後、ジシクロヘキシルカルボジイミ
ドの存在下、４−ヒドロキシ−３−ニトロベンゼンスル
ホン酸（HNSA）と反応させて、活性化ポリマーを製造す
ることができる。HNSAは、Bhatnagarら、Peptides:Synt
hesis−Structure−Function、Proceedings of the Sev
enth American Peptide Symposium、Richら（編）（Pie
rce Chemical Co.、Rockford、IL、1981）、97−100
頁、および「Novel Agent for Coupling Synthetic Pep
tides to Carriers and Its Applications」と題され
た、Niteckiら、High−Technology Route to Virus Vac
cines（American Society for Microbiology:Washingto
n,D.C.、1986）により記載されている。

PEGに結合させたGHの具体的な製造方法には、PEG−GH
に関する米国特許番号第4,179,337号、およびGHに可逆
的に、しかし共有結合により結合させたPEGを開示して
いる米国特許番号第4,935,465号に記載されている方法
が含まれる。PEG−GHを製造するための他の具体的な方
法には、以下のことが含まれる。

メトキシポリエチレングリコールアルデヒド（Me−PE
Gアルデヒド）を用いての還元的アルキル化によるPEG化
および精製は、PBS（pH7.0）中の2mg/ml GHに、5mM Me
−PEGアルデヒド−5000（分子量5,000ダルトン）および
20mM NaCNBH₃を加えて、室温で３時間穏やかに混合する
ことにより成し遂げられる。次いで、エタノールアミン
を50mMとなるまで加えて、残りの未反応のMe−PEGを還
元的にアミド化（amidate）する。その混合物を陰イオ
ン交換カラム、FPLC Mono Qで分離する。過剰の未反応
のMe−PEGはそのカラムに結合しないので、その混合物
から分離することができる。見掛け分子量が、未反応の
GHの20Kに対して、還元（reduced）SDS−PAGEで30Kおよ
び40Kである、２つの主要なPEG化GH画分を得る。GH−GH
BP複合体を同じ方法でPEG化して、ゲル濾過により150K
の誘導体を得る。

Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルPEG（NHS−PEG）を
用いてのPEG化および精製は、GHの全リジン濃度の５倍
モル過剰のNHS−PEGを、50mMホウ酸ナトリウム緩衝液
（pH8.5）またはPBS（pH7）中にGHを2mg/ml含む溶液に
加えて、室温で１時間混合することにより成し遂げられ
る。生成物をSuperose 12サイジングカラムおよび／ま
たはFPLCのMono Qで分離する。PEG化GHは、ゲル濾過に
より測定すると、反応のpHにより、pH8.5で行う反応の
場合は約300KからpH7.0の場合は40Kまで大きさが変化す
る。GH−GHBP複合体もまた、同じ方法でPEG化され、ゲ
ル濾過から、得られる分子量は400〜600Kdである。

PEG−マレイミドを用いてのGHのシステイン変異体のP
EG化は、部位特異的変異誘発によってGHの単一システイ
ン変異体を製造し、それをE.coli 16C9菌株（deoCタン
パク質を産生しないW3110 ΔtonA phoA ΔE15 Δ（argF
−lac）169−deoC2）から分泌させて、それを陰イオン
交換カラムで精製することにより成し遂げられる。

菌株CGSC＃6092（第6092番、E.coli Genetic Stock C
enter、New Haven、Conn.から入手でき、またMarkら、M
olec.Gen.Genet.155:145−152（1977）に記載されてい
る、遺伝子型trxA1 recA1 ilvE720::tn5 metE70 deoC2
lacZ53 rha5 malB45 rpsL151である）に由来するdeoC2
対立遺伝子を7C1と呼ばれている菌株に伝達することに
より、菌株16C9を遺伝学的に構築した。

P1（J.Miller、Experiments in Molecular Genetics
［Cold Spring Harbor、N.Y.:Cold Spring Harbor Labo
ratory、1972］）、およびトランスポゾン遺伝学（Klec
knerら、J.Mol.Biol.116:125−159［1977］）から誘導
されたファージP1Kcを用いての形質導入を伴う技術を用
いて、菌株7C1［遺伝子型W3110 ΔtonA phoA ΔE15 Δ
（argF−lac）169を有する］を幾つかの工程で構築し
た。Ｆ−、λ−（野生型はＦ＋、λ＋である）のK12菌
株であるE.coli K12 W3110（Bachmann、Bact.Rev.36:52
5−557［1972］）を出発宿主として使用した。

まず最初に、Tn10トランスポゾンをtonA遺伝子に挿入
した後、不正確に切除することにより、tonA遺伝子（fh
uA）（Kadnerら、J.Bact.143:256−264［1980］;Bachma
nn、Microbiol.Rev.47:180−230［1983］）を欠失させ
た。

この方法の第一工程では、E.coli W3110を、λ::Tn10
を用いてトランスデュースし、E.coli W3110のTn10ホッ
ププール（hop pool）を生成した（Klecknerら、J.Mol.
Biol.、上記）。

Ｌブロス中、E.coli W3110::Tn10ホッププールを細胞
密度が約１×10⁹/mlとなるまで37℃で培養した。合計0.
5mlの培養物を遠心分離して、ペレットを7.0×10⁹pfuを
含むλphi80溶菌液（lysate）0.2ml中に再び懸濁させ
た。ファージを37℃で30分間吸着させた。次いで、懸濁
液を、テトラサイクリン（15μg/ml）を補ったEMBプレ
ート上に塗抹した。37℃で一晩インキュベートした後、
コロニーをＬブロス3ml中にプールし、37℃で一晩培養
し、２回洗浄して、Ｌブロス中に再び懸濁させた。この
培養物でバクテリオファージP1kc溶菌液を作製した（Mi
ller,J.H.、Experments in Molecular Biology、上記、
304頁）。

このP1kc溶菌液により、E.coli AT982（第4546番、E.
coli Genetic Stock Center、New Haven、Conn）をテト
ラサイクリン耐性に形質転換させた。形質導入体を、テ
トラサイクリン（15μg/ml）および40μg/mlジアミノピ
メリン酸（dap）を補ったＬブロスプレート上で選択し
た。その結果得られた形質導入体をdap遺伝子（dap⁺、t
et^R）テトラサイクリン耐性および再生に関してスクリ
ーンした後、dap⁺、tet^R形質導入体をλphi80耐性に関
して試験した。

次いで、幾つかのdap⁺、tet^R、λphi80耐性菌株でP1k
c溶菌液を作製した。その溶菌液を使用して、E.coli W3
110をテトラサイクリン耐性にトランスデュースした。
その形質導入体をλphi80耐性に関してスクリーンし、
選択した。

テトラサイクリン感受性分離株をW3110 tonA::Tn10−
λphi80R形質導入体から選択した。MaloyおよびNunn、
J.Bacteriol.、145:1110（1981）。これらの分離株を単
一コロニー精製後のλphi80耐性およびテトラサイクリ
ン感受性に関して調べた。

DNAを幾つかのテトラサイクリン感受性λphi80耐性変
異体から分離して、Sst IIを用いて消化させた。放射能
標識してSst IIで消化させたλ::Tn10DNAをプローブと
して用い、Sst IIで消化したDNAをサザンブロット法に
より特性決定して、Tn10が切除されているかどうかを測
定した。Davisら、Advanced Bacterial Genetics（Cold
Spring Harbor Laboratory、New York、1980）。テト
ラサイクリン感受性分離株のうち１つは、λ::Tn10に由
来するDNAと親のW3110 tonA::Tn10λphi80Rに由来するD
NAとの間でのハイブリダイゼーションと比べて、Tn10ハ
イブリダイゼーションバンドのうち２つを失っているこ
とが示された。３つ目のハイブリダイゼーションバンド
は、移動度が変化し、Tn10の不正確な切除により引き起
こされる欠失が起こったことを示した。

不正確なTn10切除を有する菌株に由来する外膜調製物
のSDS−ゲル電気泳動は、TonAタンパク質であると推測
されたバンドが、野生型のTonAタンパク質と比べて、電
気泳動移動度が変化したことを明らかにした。その結果
得られたタンパク質は、λphi80ファージ受容体タンパ
ク質としては機能しなかった。Tn10の不正確な切除を受
けた第２の独立の菌株は、SDSゲル上にTonAタンパク質
を示さなかった。

これらの菌株はいずれも、テトラサイクリン耐性への
復帰（reversion）またはλphi80感受性への復帰を示さ
ず、tonA遺伝子の部分的な欠失または完全な欠失と共
に、Tn10トランスポゾンの全部または一部の不正確な切
除が存在することを示した。従って、TonAタンパク質
（分子量78,000）は外膜から取り除かれ、W3110 tonA菌
株を幾つかのバクテリオファージに耐性とした。

次いで、プロリン正合成遺伝子に挿入されたカナマイ
シン耐性トランスポゾン（proC::Tn5）への遺伝的結合
により、２つ以上の欠失変異体、phoA Δ E15（Sarthy
ら、J.Bact.145:288−292［1981］）およびΔ（argF−l
ac）169（Schwiezerら、Mol.Gen.Genet.192:293−294
［1983］）をW3110 tonAに同時に移入した。

トランスポゾンを、グルコース最少寒天プレート上で
自然原栄養菌（pro⁺）復帰変異体を選択することにより
取り除いた。phoA変異体の導入は、0.2mMリン酸塩およ
び20mg/L 5−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルリン
酸塩を含むグルコース最少寒天プレート上に白色のコロ
ニーを形成する形質導入体として認められた。同様に、
Δ（argF−lac）169変異体は、酵素β−ガラクトシダー
ゼの欠失を引き起こして、MacConkey−１％ラクトース
寒天プレート上に白色のコロニーを形成する細胞とな
る。その結果は、菌株7C1であった。

最後に、ファージP1kcを用いての多工程の形質導入方
法により、アルドラーゼを除去するdeoC変異体（Bachma
nn、上記）を7C1に導入した。まず最初に、以下のよう
にして、トレオニン栄養要求性を7C1に導入し、deoC遺
伝子の領域におけるトランスデュースされた染色体セグ
メントの陽性選択のための方法を得た。

P1kcをトレオニン栄養要求体上で培養した。そのよう
な栄養要求体は、Clare N.BergおよびDouglas E.Berg、
Microbiology−1981、「Bacterial Transposons」、107
−116頁（Amer.Soc.for Microbiology、Washington、D
C、1981）に記載されている。

その結果得られた溶菌液を使用して、菌株7C1をテト
ラサイクリン耐性にトランスデュースし、25μg/mlテト
ラサイクリンを含むLBプレート上で形質導入体を選択し
た。14A9と呼ばれる、その結果得られた菌株（phoAΔ、
phoAΔE15、Δ（argF−lac）169 thr::tn10）は、高頻
度で原栄養性に自然に復帰したので、フザリン酸プレー
ト（J.Bact.145:1110［1981］）を使用して、菌株16C4
と呼ばれる、安全なテトラサイクリン感受性トレオニン
栄養要求体を選択した。

P1kcを上記のCGSC＃6092株で培養した。

その結果得られた溶菌液を使用して、菌株16C4を原栄
養性にトランスデュースし、グルコース最少寒天プレー
ト上で増殖物を選択した。菌株2D4から高頻度でトラン
スデュースする溶菌液を得るには、P1kcファージを、こ
の宿主での増殖を２回循環させなければならなかった。
菌株16C4の５つの原栄養性形質導入体を分離し、精製し
て、チミジン最少寒天プレート上での増殖に関して試験
した。これら５つの分離株のうち４つは、チミジンで培
養することができなかので、deoCタンパク質の合成を排
除するdeoC2変異体を得た。これら４つの分離株のうち
１つが蓄えられて（save）、菌株16C9（ΔtonA、phoA、
ΔE15、Δ（argF−lac）169、deoC2）と呼ばれた。

0.1Mリン酸ナトリウム（pH7.5）中、モノメトキシPEG
アミンをスルホ−MBsと室温で一時間反応させることに
より、PEG−マレイミドを作製して、緩衝液をリン酸塩
緩衝液（pH6.2）に交換した。次に、GHを過剰の遊離シ
ステインと１時間混合して、最終混合物を、Me−PEGア
ルデヒドでPEG化されたGHとして、Mono Qカラムで分離
した。

エステル結合は、化学的に、また生理学的に不安定で
あるので、エステル官能基を含まない結合反応のPEG試
薬を使用するのが好ましい。例えば、PEG−モノメチル
エーテルをホスゲンと反応させて、PEG−クロロホルメ
ートを得ることにより、カルバメート結合を作製するこ
とができる。次いで、この試薬をNHSエステルと同じ方
法で使用して、リジン側鎖アミンを官能基化することが
できるであろう。別の例では、アミノ−PEG−モノメチ
ルエーテルをホスゲンと反応させることにより、尿素結
合を作製する。これは、リジンアミンと反応するであろ
うPEG−イソシアネートを生成するであろう。

PEG試薬中に開裂可能なエステルを含んでいないPEG−
GHを作製する好ましい方法を、以下に記載する:Bckma
nnら、Macromol.Chem.182:1379−1384（1981）により報
告されているように、ナフタレンナトリウムで滴定して
アルコキシドを生成させた後、酢酸ブロモエチルで処理
してエチルエステルを形成させ、次いで、水酸化ナトリ
ウムおよび水で処理することによって対応するカルボン
酸に加水分解することにより、メトキシポリ（エチレン
グリコール）をカルボン酸に転換する。次いで、酢酸エ
チル中、その結果得られたカルボン酸をジシクロヘキシ
ルカルボジイミドおよびNHSと反応させることにより、
その結果得られたカルボン酸を、GHのアシル化に適当な
PEG−Ｎ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステルに
転換する。

次いで、ホウ酸ナトリウム緩衝液（pH8.5）中、GHに
関して30倍モル過剰用い、その結果得られたNHS−PEG試
薬を12mg/ml GHと室温で１時間反応させて、トリス緩衝
液中のＱセファロースカラムに適用して、塩グラジエン
トで溶離する。次いで、それを、0.3Mクエン酸ナトリウ
ム緩衝液（pH7.8）で平衡化した別のカラム（フェニルT
oyopearl）に適用する。次いで、PEG化GHを逆塩グラジ
エントで溶離し、プールして、G25脱塩カラムを用い、
緩衝液をマンニトール、グリシン、およびリン酸ナトリ
ウム緩衝液（pH7.4）に交換して、適当な製剤化されたP
EG7−GHを得る。

PEG化GH分子およびGH−GHBR複合体は、SDS−PAGE、ゲ
ル濾過、NMR、トリプシン（tryptic）マッピング、液体
クロマトグラフィー−質量分光測定、およびインビトロ
における生物学的アッセイにより特徴付けることができ
る。まず最初に、PEG化の程度をSDS−PAGEおよびゲル濾
過により適当に示した後、NMRにより分析し、これは、P
EGのメチレン水素に関して特異的な共鳴ピークを有す
る。各々の分子上のPEG基の数は、NMRスペクトルまたは
質量分析から計算することができる。10％ SDS中でのポ
リアクリルアミドゲル電気泳動を、溶離緩衝液としての
10mMトリス−HCl（pH8.0）、100mM NaCl中で適当に行
う。どの残基がPEG化されているかを実証するには、ト
リプシンマッピングを行うことができる。従って、100m
M酢酸ナトリウム、10mMトリス−HCl、1mM塩化カルシウ
ム（pH8.3）中、100対１（mg基準）のタンパク質／酵素
比でトリプシンを用いて、PEG化GHを37℃で４時間消化
させて、pH＜４まで酸性にして、消化を停止させた後、
HPLC Nucleosil C−18（4.6mm×150mm、５μ、100A）で
分離する。そのクロマトグラムを、PEG化されていない
出発物質のクロマトグラムと比較する。次いで、各々の
ピークを質量分析により分析して、ピークにおけるフラ
グメントの大きさを確かめることができる。PEG基を有
するフラグメントは、通常、注入後、HPLCカラムに保持
されず、またクロマトグラフから消失する。そのような
クロマトグラフからの消失は、少なくとも１つのリジン
残基を含むであろう、ある特定のフラグメントに関する
PEG化の指標である。次いで、従来の方法により、PEG化
GHを、それがGHBPに結合する能力に関してアッセイする
ことができる。

利用される様々なPEG化法は、サイズ排除クロマトグ
ラフィーにより、35K、51K、250K、および300Kの見掛け
分子量を有する、様々な種類のPEG化された野生型GHを
産生し、これらは、それらの天然の流体力学量に近くな
ければならない。これらは各々、PEG1−GH、PEG2−GH、
PEG3−GH、およびPEG7−GHと名付けられた。トリプシン
マッピングの効果から、PEG1−GHとPEG2−GHとの両方
が、Ｎ末端に９つのアミノ酸からなる、クロマトグラム
から欠け、またPEG化されているかもしれないフラグメ
ントを有しており、これらは、液体クロマトグラフのフ
ロースルーにおいて見い出される、大きな分子種の質量
分析により確認することができる。SDS−PAGEに関する
分子量から、PEG1−GHは、Ｎ末端アミンに１つのPEGを
有するかもしれず、PEG2−GHは、Ｎ末端アミンに２つの
PEG分子を有し、第三級アミドを形成するかもしれな
い。PEG3−GHは、NMRの結果に基づき、１分子につき５
つのPEG基を有し、またトリプシンマップに基づき、少
なくとも５つのペプチドフラグメントが欠けており、そ
れらがPEG化されていることが示唆された。PEG7−GH分
子は、質量分析に基づき、１分子につき６〜７つのPEG
基を有すると考えられる。

GHにPEG基を加えるための部位、またそのような結合
に好ましい残基である部位は、Ｎ末端メチオニンまたは
フェニルアラニン、リジン38、リジン41、リジン70、リ
ジン140、リジン145、リジン158、およびリジン168であ
る。PEG化されないと思われる２つのリジンは、リジン1
15およびリジン172であった。

GHはまた、持続性放出システムによっても適当に投与
される。本発明で有用な持続性放出組成物の例には、形
作られた物品形態の半透明ポリマーマトリックス、例え
ば、フィルム、またはマイクロカプセルが含まれる。持
続性放出マトリックスには、ポリアクチド（米国特許番
号第3,773,919号、欧州特許第58,481号）、Ｌ−グルタ
ミン酸とγ−エチル−Ｌ−グルタメートとのコポリマー
（Sidmanら、Biopolymers 22:547−556［1983］）、ポ
リ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）（Langer
ら、J.Biomed.Mater.Res.15:167−277［1981］、および
Langer、Chem.Tech.12:98−105［1982］）、エチレンビ
ニルアセテート（Langerら、J.Biomed.Mater.Res.15:16
7−277［1981］）もしくはポリ−Ｄ−（−）−３−ヒド
ロキシ酪酸（欧州特許第133,988号）、またはPLGAミク
ロスフェアが含まれる。持続性放出GH組成物にはまた、
リポソームでエントラップされた（entrapped）GHも含
まれる。GHを含むリポソームは、本質的には既知の方法
により調製される：ドイツ特許第3,218,121号;Epstein
ら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82:3688−3692（1985）;H
wangら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4030−4034（198
0）；欧州特許第52,322号；欧州特許第36,676号；欧州
特許第88,046号；欧州特許第143,949号；欧州特許第14
2,641号；日本特許出願第83−118008号；米国特許番号
第4,485,045号および同第4,544,545号；および欧州特許
第102,324号。普通、リポソームは、脂質含量が約30mol
％コレステロールより多い、小さい（約200〜800オング
ストローム）単層板型のものであり、選択された割合
は、最適な治療のために調節される。加えて、1989年８
月15日に発行された米国特許番号第4,857,505号に記載
されているように、生物学的に活性な持続性放出製剤を
活性化ポリサッカライドに共有結合したGHの付加物から
作製することができる。加えて、米国特許番号第4,837,
381号は、脂肪またはワックスまたはそれらの混合物の
ミクロスフェア組成物、および遅延放出のためのGHを記
載している。

IGF−Ｉは、注射（一回または多数回、例えば、１日
に１〜４回）または注入を含め、いずれの方法によって
も投与することができる。GHと一緒の場合には、GHに関
して先に記載したように、血中での継続的存在が治療期
間中ずっと保たれるよう、IGF−Ｉを製剤化することが
できる。従って、それをポリマーに共有結合させるか、
または上記のような持続性放出製剤にするのがよい。

加えて、IGF−Ｉを、いずれかの１つまたはそれ以上
の結合タンパク質、例えば、現在知られている結合タン
パク質、すなわち、IGFBP−１、IGFBP−２、IGFBP−
３、IGFBP−４、IGFBP−５、またはIGFBP−６と共に適
当に投与する。IGF−Ｉをまた、投与のために、受容体
または抗体または抗体フラグメントに結合させてもよ
い。本明細書中、IGF−Ｉに好ましい結合タンパク質はI
GFBP−３であり、これは、1993年11月２日に発行された
米国特許番号第5,258,287号、およびMartin並びにBaxte
r、J.Biol.Chem.261:8754−8760（1986）に記載されて
いる。このグリコシル化IGFBP−３タンパク質は、ヒト
血漿中に見い出される120−150Kdの糖タンパク質複合体
の非還元SDS−PAGEゲル上の約53Kdの酸安定成分であ
り、内因性IGFの大部分を運んで、またGHにより調節も
される。

IGF結合タンパク質をIGF−Ｉと共に投与することは、
1993年２月16日に発行された米国特許番号第5,187,151
号に記載されている方法より成し遂げられ得る。簡単に
言えば、IGF−ＩおよびIGFBPを約0.5:1〜約3:1、好まし
くは約1:1のモル比で皮下ボーラス注射により有効量で
投与する。

好ましくは、IGF−ＩとGHとの両方の投与は、例え
ば、静脈内方法または皮下方法を利用する連続注入によ
る。さらに好ましくは、その投与は、IGF−ＩとGHとの
両方に関して皮下である。

GHとIGF−Ｉとの組み合わせによるうっ血性心不全の
治療では、GHとIGF−Ｉとの組成物を製剤化し、用量と
して、良好な医療実施にかなった方法で投与するであろ
う。これに関連して考慮すべき因子には、処置すべき個
々の哺乳動物、個々の患者の臨床病態（特に、GHまたは
IGF−Ｉを単独で用いての治療に関する副作用）、IGF−
ＩとGHとの組成物の送達部位、投与方法、投与計画、及
び医者に知られている他の因子が含まれる。従って、本
明細書中での目的のための各々の成分の「有効量」は、
そのような考慮すべき事項により決定され、またうっ血
性心不全の患者における心臓の性能を改善して、同様に
重要な他の病態を回復させる量である。

一般的な案として、１用量につき非経口投与されるIG
F−ＩおよびGHの各々の全医薬的有効量は、約１μg/kg/
日〜10mg/kg/日（患者の体重）の範囲であろうが、上述
のように、このことは、相当な治療判断を必要とするで
あろう。治療の種類（その治療が慢性であるか、急性で
あるか）および患者の年齢（すなわち、初老、中年、も
しくは若い成人に投与するか、または子供に投与する
か）が用量に影響を及ぼすであろうと同様に、副作用の
存在が用量に影響を及ぼすであろう。急性処置に適する
患者の例には熱傷患者が含まれ、この患者は、約２〜４
週間処置するのがよい。慢性処置に適する患者の例には
初老が含まれ、この患者には、一般的には、若い患者よ
り薬物を少なく与える。４カ月が半慢性用量であろう。
急性処置のための用量は、一般的には、より広い範囲で
あって、慢性処置のための用量より高い上限を有する。

一般的規則として、IGF−ＩおよびGHの各々の好まし
い用量は、少なくとも約0.01mg/kg/日、またさらに好ま
しくは、ヒトに対し、各々のホルモンに関して約0.01〜
1mg/kg/日である。一層さらに好ましくは、各々のホル
モンの用量は、約0.01mg/kg/日〜0.25mg/kg/日である。
GHに関して具体的には、最も好ましい用量を約10〜100
μg/kg/日の範囲で１日１回与え、この用量は、最初の
低い用量から傾斜的に上げていくのがよい。GHの初期用
量が高すぎると、浮腫を引き起こし得る。IGF−Ｉに関
して具体的には、最も好ましい用量を約50−200μg/kg/
日（全日用量）、好ましくは約50−150μg/kg/日の範囲
で１日２回与える（BID）。連続的に投与するなら、IGF
−ＩおよびGHを各々、一般的には、例えば、ミニポンプ
を用いて、１日に１〜４回の注射により、または連続皮
下注入により、約１μg/kg/時間〜約50μg/kg/時間の用
量割合で投与する。静脈内バッグ溶液をまた使用するこ
ともできる。適当な用量を選択する際に重要な因子は、
例えば、心臓の性能の改善、症状の軽減、自動運動耐性
の増加、および／または生存の長期化により測定され
て、得られた結果である。

IGF−ＩとGHの両方の用量を考える医者は、これらの
ホルモンを用いての治療に関する既知の副作用を考慮に
入れなくてはならないことに注意する。hGHに関する副
作用には、ナトリウム貯留および細胞外容量の拡大（Ik
kosら、Acta Endocrinol.32:341−361（1959）;Biglier
iら、J.Clin.Endocrinol.Metab.21:361−370（196
1））、さらにはまた高インスリン症および高血糖症が
含まれる。IGF−Ｉの主要で明らかな副作用は、高血糖
症である。Gulerら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86:2868
−2872（1989）。それどころか、IGF−ＩとGHとの組み
合わせは、両方の物質の望ましくない副作用の減少をも
たらし得（例えば、IGF−Ｉに関する高血糖症およびGH
に関する高インスリン症）、またその分泌がIGF−Ｉに
より抑制されるGHの血液レベルの回復をもたらし得る。

非経口投与の場合、一態様において、IGF−ＩおよびG
Hを、通例、単位投薬量の注射可能形態（溶液、懸濁
液、またはエマルション）で、医薬的に許容され得る担
体、すなわち、使用する投薬量および濃度でレシピエン
トに対して無毒であって、製剤の他の成分と適合する担
体と共に、所望の純度で各々を混合することにより製剤
化する。例えば、製剤には、好ましくは、ポリペプチド
に対して有害であることが知られている酸化剤および他
の成分は含まれない。

通例、IGF−ＩおよびGHを各々、液状担体または微細
に粉砕された固形担体またはそれら両方と均等かつ十分
に接触させることにより、製剤を調製する。次いで、も
し必要ならば、生成物を所望の製剤に形作る。好ましく
は、その担体は、非経口担体であり、さらに好ましく
は、レシピエントの血液と等張の溶液である。そのよう
な担体ビヒクルの例には、水、生理食塩水、リンゲル溶
液、およびデキストロース溶液が含まれる。本明細書中
では、不揮発性油およびオレイン酸エチルといったよう
な非水性ビヒクル、さらにはまた、リポソームもまた有
用である。

担体は、適当には、等張性および化学安定性を高める
物質のような添加剤を少量含む。そのような物質は、使
用する投薬量および濃度でレシピエントに対して無毒で
あり、またリン酸塩、クエン酸塩、コハク酸塩、酢酸、
および他の有機酸またはそれらの塩といったような緩衝
液；アスコルビン酸のような抗酸化剤；低分子量（約10
残基未満）のポリペプチド、例えば、ポリアルギニンま
たはトリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、または
免疫グロブリンといったようなタンパク質；ポリビニル
ピロリドンのような疎水性ポリマー；グリシン、グルタ
ミン酸、アスパラギン酸、またはアルギニンといったよ
うなアミノ酸；セルロースもしくはその誘導体、グルコ
ース、マンノース、またはデキストリンを含め、単糖
類、二糖類、および他の炭水化物;EDTAのようなキレー
ト化剤；マンニトールまたはソルビトールといったよう
な糖アルコール；ナトリウムのような対イオン、および
／またはポリソルベート、ポロキサマー、またはPEGと
いったような非イオン性界面活性剤が含まれる。

IGF−ＩおよびGHは各々、一般的には、そのようなビ
ヒクル中、約0.1mg/mlから100mg/ml、好ましくは１〜10
mg/mlの濃度、約4.5〜８のpHで個々に製剤化される。完
全な長さのIGF−Ｉは、通例、約６以下のpHで安定であ
り;des（１−３）−IGF−Ｉは、約3.2〜５で安定であ
り;hGHは、例えば、7.4〜7.8のより高いpHで安定であ
る。前述の賦形剤、担体、または安定剤の幾つかの使用
がIGF−ＩまたはGH塩の形成を起こすことが分かるであ
ろう。

加えて、IGF−ＩおよびGH、好ましくは完全な長さのI
GF−Ｉを一緒に適当な担体ビヒクル中で製剤化して、医
薬組成物を形成することができる。一態様において、製
剤に使用される緩衝液は、組成物を混合して直ぐ使用す
るか、または後の使用のために保存するかどうかにより
左右されるであろう。混合した後直ぐに使用するなら、
完全な長さのIGF−ＩとGHとの混合物を、マンニトー
ル、グリシン、およびリン酸塩（pH7.4）中で製剤化す
ることができる。この混合物を保存すべきなら、クエン
酸塩のような、pHが約６の緩衝液中、0.1％ポリソルベ
ート20またはポロキサマー188といったような、このpH
でGHの溶解度を増加させる界面活性剤と共に製剤化す
る。最終調製物は、安定な液体または凍結乾燥固体であ
るのがよい。

治療投与に使用されるべきIGF−ＩおよびGHは、無菌
であるのが好ましい。無菌性は、無菌濾過膜（例えば、
0.2ミクロン膜）を通して濾過することにより容易に成
し遂げられる。IGF−ＩとGHとの治療組成物は、通例、
無菌アクセスポート、例えば、静脈内溶液バッグを有す
る容器、または皮下注射針により刺すことができる栓を
有するバイアルに入れられる。

IGF−ＩおよびGHは、普通、器具または多用量容器、
例えば、封管アンプルまたはバイアル中、水溶液とし
て、または再構築用の凍結乾燥製剤として保存されるで
あろう。凍結乾燥製剤の例として、10mlのバイアルを、
無菌濾過された１％（w/v）水性IGF−ＩおよびGH溶液5m
lで満たして、その結果得られた混合物を凍結乾燥す
る。静菌注射用水を用いて、凍結乾燥したIGF−Ｉおよ
びGHを再構成することにより、注入溶液を調製する。

投与すべき有効量のACE阻害剤は、もし使用するな
ら、医者または獣医の随意であろう。投薬量の投与およ
び調節を行って、うっ血性心不全の最適な処置を得、ま
た理想的には、利尿薬またはジギタリスの使用、および
低血圧症並びに腎障害といったような病態を考慮に入れ
る。その用量は、さらに、使用する阻害剤の種類および
処置する特定の患者といったような因子により左右され
るであろう。一般的には、使用する量は、ACE阻害剤をG
HおよびIGF−Ｉなしで投与する場合に使用される量と同
じ用量であろう。

従って、例えば、エナラプリルの試験用量は5mgであ
り、次いで、患者がそれに耐性を示すにつれて、これを
日に一度、１日に10〜20mgまで傾斜的に上げていく。別
の例として、最初に、カプトプリルを6.25mgの試験用量
でヒトの患者に経口投与した後、患者がそれに耐性を示
すにつれて、その用量を１日２回（BID）または１日３
回（TID）25mgまで段階的に上げていって、BIDまたはTI
Dで50mgまで滴定することができる。血圧の減少が低血
圧症の兆しを伴うかどうかを測定することにより、耐性
レベルを見積もる。もし示されたなら、その用量をBID
またはTIDで100mgまで増加させることができる。カプト
プリルを、ヒドロクロロチアジドと組み合わせての活性
成分として、また結腸に到達するまでカプトプリルを保
護する腸内放出または遅延放出コーティングを有するpH
安定化コアとして投与するために製造する。カプトプリ
ルは、錠剤またはカプセルの形態で投与するのに有効で
ある。カプトプリルおよび他のACE阻害剤と関係する投
薬量、投与、指示および反対指示に関する論議は、Phys
icians Desk Reference、Medical Economics Data Prod
uction Co.、Montvale、NJ.2314−2320（1994）に見い
出すことができる。

本発明は、以下の実施例を参照することによって、よ
り完全に理解されるであろう。しかし、その実施例は、
本発明の範囲を制限するものとして構成されるべきでは
ない。文献および特許引用は全て、本明細書中に明白に
包含される。

実施例１ カプトプリルを用いて前処置および同時処置するか、ま
たは処置することなしに、うっ血性心不全を治療するた
めのGH/IGF−Ｉの使用 序論 この研究の目的は、カプトプリルまたは水のいずれか
を用いて前処置および同時処置するか、または処置する
ことなしに、うっ血性心不全に罹っているラットでのヒ
トGH/IGF−Ｉの心臓への作用を評価することであった。

方法 手術前の少なくとも一週間、雄のSprague−Dawley（S
D）ラット（Charles River Breeding Laboratories,In
c.、８週齢）を設備に順応させた。ラットにペレット化
したラットの食物および水を自由に摂取させて、明るさ
および温度を調節した部屋に収容した。

冠状動脈結紮 以前に記載されているように、心筋梗塞を左冠状動脈
結紮により引き起こした。Geenen,D.L.ら、J.Appl.Phys
iol.63:92−96（1987）;Buttrick,P.ら、Am.J.Physiol.
260:H473−H479（1991）。それらのラットをペントバル
ビタールナトリウム（60mg/kg、ip）で麻酔し、気管切
開により挿管して、人工呼吸器（Harvard Apparatus Mo
del 683）により通気した。左側を開胸した後、７−０
の絹の縫合糸を用いて、左冠状動脈をその起始から約2m
m結紮した。ラットは全て、American Heart Associatio
nにより1984年11月11日に採用された「Position of the
American Heart Association on Research Animal Us
e」に従って取り扱った。４〜６週間結紮すると、心筋
梗塞は、ラットにおいてうっ血性心不全を起こした。

心電図 手術一週間後、光メトファン（metofane）麻酔下に心
電図を得て、梗塞の発生を証明した。胸部誘導を渡る異
常Ｑ波の深度および存続により、結紮したラットを部分
群に分けた。Buttrick,P.ら、Am.J.Physiol.260:H473−
H479（1991）;Kloner,R.A.ら、Am.Heart J.106（５）:1
009−1013（1983）。ECG研究結果は、梗塞の大きさに関
する全体評価を与え、また成長因子およびビヒクルで処
置した結紮したラットでは、大きな梗塞および小さな梗
塞が別々に分布していないことを確証した。処置してい
る間、体重（BW）を週に２回測定した。

GHおよびIGF−Ｉの投与 手術二週間後、ラットをカプトプリル（飲用水中、2g
/L）または水の処置レジメに３ヶ月間置いた。カプトプ
リルまたは水での処置を開始してから３カ月後、ビヒク
ルまたは組換えヒトGH（Genentech,Inc.製のNutropin
登録商標;2mg/kg/日１日１回、皮下注射）と組換えヒト
IGF−Ｉ（50mM酢酸ナトリウム緩衝液中、10mg/ml、2.5m
g/mlフェノール、5.84mg/ml NaCl、および9mg/mlベンジ
ルアルコール、pH5.4;2mg/kg/日、オスモティックポン
プにより皮下注入）との組み合わせを各々のグループの
ラットの処置に加えた。この方法で処置を14日間続け
た。GHおよびIGF−Ｉをビヒクルとしての（注射用）水
で投与した。処置している間、体重（BW）を週に２回測
定した。

カテーテル法 GH/IGF−Ｉまたはビヒクルを用いての処置から13日
後、ラットをペントバルビタールナトリウム（50mg/k
g、腹腔内）で麻酔した。動脈圧および心拍数を測定す
るために、ヘパリン−生理食塩水溶液（50U/ml）を満た
したカテーテル（PE−50と融合させたPE−10）を、右大
腿動脈を通して腹部大動脈に埋込んだ。左心室圧および
dP/dtを測定するために、第２のカテーテルを、右頸動
脈を通して左心室に埋込んだ。熱希釈法により心拍出量
を測定するために、第３のカテーテルを、生理食塩水注
入用に、右頸静脈を通して右心房に埋込んで、サーミス
タカテーテル（Lyons Medical Instrument Co.、Sylma
r、CA）を大動脈弓に挿入した。それらのカテーテル
を、皮下にくぐらせたステンレス鋼針金の助けを借りて
頸の後で肱置した後、固定した。カテーテルを埋込んだ
後、ラットを全て個々に収容した。

血流力学測定 カテーテル法を行った一日後、血流力学測定を、意識
があって抑制されていないラットで行った。心拍出量を
測定するために、マイクロコンピューターシステム（Ly
ons Medical Instrument Co.）を用いて、サーミスタカ
テーテルを処理し、また平均動脈圧（MAP）、収縮期動
脈圧（SAP）、心拍数（HR）、左心室拡張終期血圧（LVE
DP）および左心室最大dP/dtを測定するために、他の３
つのカテーテルをGrass 7型ポリグラフ（Grass Instrum
ents、Quincy、MA、USA）に連結したCP−10型圧力変換
器（Century Technology Company、Inglewood、CA、US
A）に接続した。心拍出量を測定するために、室温の等
張生理食塩水（0.1ml）を頸静脈カテーテルによりボー
ラスとして注射した。熱希釈曲線をVR−16サイマルトレ
ース（simultrace）記録計（Honeywell Co.、NY）によ
りモニターして、心拍出量（CO）をデジタル式マイクロ
コンピューターにより得た。COから、一回拍出量（S
V）、心指数（CI）、一回拍出量指数（SVI）、および全
身血管抵抗（SVR）を計算することができる。

これらの血流力学パラメーターを測定した後、血液1m
lを動脈カテーテルにより集めた。GHおよびIGF−Ｉを測
定するために、血清を分離して、−70℃で保存した。

実験の最後に、ラットをペントバルビタールナトリウ
ム（60mg/kg）で麻酔して、心臓をKCl（1M）の動脈内注
射で拡張期に停止させた。心臓を摘出して、心房および
大きい管を心室から切り取った。その心室の重さを量っ
て、10％緩衝化ホルマリンに固定した。

梗塞の大きさの測定 壁のない（free wall）右心室を左心室から切開し
た。その左心室を尖から底まで４つの横径スライスに切
断した。５μｍの切片を切断し、封入して、マッソン三
色染色で染色した。梗塞を起こした左心室および梗塞を
起こしていない左心室の心内膜周径および心外膜周径を
面積計Digital Image Analyzerで測定した。４つのスラ
イス全ての梗塞を起こした周径および全左心室周径を合
計して、全周径に対する梗塞を起こした周径のパーセン
トとして表した。次いで、これら２つの割合を平均し
て、梗塞の大きさのパーセントとして表した。

ホルモンアッセイ 血清ヒトGHを感受性ELISAにより測定した。Celniker,
A.、J.Clin.Endocrinol.Metab.68:469−476（1989）;Gr
eenen,D.L.ら、J.Appl.Physiol.63:92−96（1987）。こ
のアッセイは、ラットGHを検出しない。酸−エタノール
抽出した後、標準としてヒトIGF−Ｉ（研究試薬としてG
enentech,Inc.から入手できる）、およびウサギ抗IGF−
Ｉポリクローナル抗血清を用いて、全血清IGF−Ｉをラ
ジオイムノアッセイにより測定した（Furlanetto R.W.
ら、J.Clin.Invest.60:648−657［1977］;Zapf J.ら、
J.Clin.Invest.68:1321−1330［1981］）。許容範囲は
1.25〜40ng/mlであったが、アッセイ内およびアッセイ
間変動は各々、５〜９％および６〜15％であった。

統計分析 結果を平均±SEMとして表す。分散の二元分析および
一元分析（ANOVA）を行って、グループ間のパラメータ
ーの差を評価した。次いで、Newman−Keuls法を用い
て、有意差を後（post）hoc分析にかけた。Ｐ＜0.05を
有意とみなした。

結果 BWの増加は、カプトプリルで処置したラットまたは対
照ラットにおいてより、GH/IGF−Ｉで処置したラットま
たはカプトプリル＋GH/IGF−Ｉで処置したラットにおい
て有意に大きかった。カプトプリル単独では、BW増加は
変わらなかった。（第1a図）。GH/IGF−Ｉでは、水で処
置したラットでのBWに対する左心室重量の割合（LVW/B
W）は有意に変わらなかった。BWに対する左心室重量の
割合（LVW/BW）は、カプトプリルで処置したグループま
たはカプトプリル＋GH/IGF−Ｉで処置したグループにお
いて有意に減少した（第1b図）。

GH/IGF−Ｉ処置は、水で処置したラットおよびカプト
プリルで処置したラットにおけるヒトGHおよびヒトIGF
−Ｉの血清レベルを有意に増加させた（第2a図および第
2b図）。GHおよびIGF−Ｉの血清レベルの増加は、水で
処置したラットとカプトプリルで処置したラットとの間
で違わなかった。

梗塞の大きさは、４つの実験グループにおいて違わな
かった（第３図）。

GH/IGF−Ｉは、水で処置したラットにおいて、SAPを
減少させて、MAPを有意に減少させる傾向にあった（第4
a図および第4b図）。SAPおよびMAPは、対照グループま
たはGH/IGF−Ｉグループと比べて、カプトプリルで処置
したラットまたはカプトプリル＋GH/IGF−Ｉで処置した
ラットにおいて有意に減少した。カプトプリルまたはGH
/IGF−Ｉではいずれも、HRは有意に変わらなかった（第
4c図）。

GH/IGF−Ｉ処置は、水で処置したラットとカプトプリ
ルで処置したラットの両方において、左心室最大dP/dt
の有意な増加を引き起こした（第5a図）。カプトプリル
単独処置では、dP/dtは変わらなかった。LVEDPは、対照
グループと比べて、３つの処置したグループ全てにおい
て有意に減少した（第5b図）。

カプトプリルまたはGH/IGF−Ｉはいずれも、CIおよび
SVIを増加させた（第6a図および第6b図）。CIおよびSVI
の増加は、カプトプリルで処置したグループにおいてよ
り、カプトプリル＋GH/IGF−Ｉで処置したグループにお
いて有意に大きかった。SVRは、対照グループと比べ
て、３つの処置したグループにおいて有意に減少した
（第6c図）。

要約 GHとIGF−Ｉとの組み合わせを用いてのうっ血性心不
全の治療は、カプトプリルの存在下および不存在下の両
方において、左心室最大dP/dtの有意な増加を起こし
た。この作用は、カプトプリル単独では見い出されなか
った。

カプトプリルを単独で用いての慢性処置は、動脈圧、
左心室拡張終期血圧および末梢血管抵抗の減少を引き起
こした。これらの変化は、試験動物における心拍出量お
よび一回拍出量の増加を起こした。これらは、心不全に
罹っているヒトおよび動物において明白な、ACE阻害に
関する周知の利点であった。

カプトプリルを用いての初期治療後、うっ血性心不全
に罹っている哺乳動物の処置レジメに加えられたGHおよ
びIGF−Ｉは、慢性ACE阻害の作用に関する背景以上に明
らかな、心筋の収縮性および心臓の性能の増加の作用を
誘発した。さらに、LVW/BWにより測定される、心肥大を
減少させる際のカプトプリルの有利な作用は、カプトプ
リル、GH、およびIGF−Ｉで処置したグループにおいて
保たれる。データは、GHおよびIGF−Ｉと組み合わせた
カプトプリルが、うっ血性心不全における心臓の性能を
改善することを示唆する。

これらの結果は、カプトプリルまたは他のACE阻害剤
を用いての治療期間後、うっ血性心不全に罹っている患
者には、GHおよびIGF−Ｉを処置レジメに加えるのが有
利であろうことを示唆する。これらの結果はまた、患者
には、ACE阻害剤の不存在下ですら、GHとIGF−Ｉとの組
み合わせが有利であろうことをも示唆する。ACE阻害剤
の不存在下、GHとIGF−Ｉとの組み合わせが有利である
患者は、ACE阻害剤を禁忌とする患者およびACE阻害剤の
副作用に耐えることができない患者である。

実験例２ うっ血性心不全に関して提唱される臨床治療 A.関与 GHの１日１回用量およびIGF−Ｉの１日２回用量でのG
HおよびIGF−Ｉの患者自己投与を熟考する。各々の薬物
の最初の用量は、同じ日に投与し、またGHに関して10〜
100μg/kg/日およびIGF−Ｉに関して40〜120μg/kg/日
（１日２回与える）である。これらの範囲は、副作用お
よび効き目によって調節されるであろう。

患者は、以下のいずれかの理由で考慮から除外され
る： −（手術可能または不可能な）不正確な、主要な弁の心
臓病、（禁断が試みられていないなら、アルコールを含
め）特定の処置可能な病因、または手術可能な冠状動脈
疾患から起こる心不全。

−３カ月未満の拡張された心筋症。

−胸痛または閉塞性末梢血管疾患により制限された自動
運動。

−FEV₁＜60％が予測される慢性閉塞性肺疾患。

−糖尿病または損なわれたグルコース耐性。

−毛根管症候群歴または試験で陽性のティネル徴候に関
する病歴。

−症候群性変形性関節症。

−活性悪性疾患。

B.結果 この組み合わせた処置に関して予期される結果には、
以下のことが含まれる：健康感の改善、自動運動耐性の
増加、筋力並びにやせた体質量の増加、全身血管抵抗の
減少、心臓の性能の向上、および代償性心筋肥大の向
上。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (31)優先権主張番号 ０８／３３３，９０９ (32)優先日 平成６年11月３日(1994．11．3) (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (72)発明者 パオニ，ニコラス・エフ アメリカ合衆国94002カリフォルニア州 ベルモント、テラス・ドライブ1756番 (72)発明者 ヤン，レンフイ アメリカ合衆国94066カリフォルニア州 サン・ブルノ、シー・クリフ・ウェイ 2045番 (56)参考文献 国際公開92／011865（ＷＯ，Ａ１) Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，Ｖｏｌ. 86，Ｎｏ．４ Ｓｕｐｐｌ．Ｉ，ｐ．Ｉ −668（1992) (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) A61K 38/27 A61K 38/30 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＣＡ（ＳＴＮ) ＭＥＤＬＩＮＥ（ＳＴＮ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)

Claims (15)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】GHを欠損している成体ではないうっ血性心
   不全を示す哺乳動物を治療するための医薬において、GH
   とIGF−Ｉとの組み合わせを有効量含んでなる医薬。
2. 【請求項２】GHがヒトGHであって、IGF−ＩがヒトIGF−
   Ｉである、請求項１に記載の医薬。
3. 【請求項３】哺乳動物がヒトである、請求項１または２
   に記載の医薬。
4. 【請求項４】GHおよびIGF−Ｉの各々の有効量が約0.01
   〜約1mg/kg/日である、請求項１ないし３のいずれか１
   項に記載の医薬。
5. 【請求項５】うっ血性心不全が急性または慢性虚血から
   起こる、請求項１ないし４のいずれか１項に記載の医
   薬。
6. 【請求項６】うっ血性心不全が心筋梗塞から起こる、請
   求項１ないし４のいずれか１項に記載の医薬。
7. 【請求項７】ACE阻害剤をさらに含んでなる、請求項１
   ないし６のいずれか１項に記載の医薬。
8. 【請求項８】ACE阻害剤を用いて治療されている哺乳動
   物に投与される、請求項１ないし６のいずれか１項に記
   載の医薬。
9. 【請求項９】処置の最初からACE阻害剤と一緒に哺乳動
   物に投与される、請求項１ないし６のいずれかに記載の
   医薬。
10. 【請求項１０】ACE阻害剤がカプトプリルである、請求
    項７ないし９のいずれか１項に記載の医薬。
11. 【請求項１１】GHを欠損している成体ではないうっ血性
    心不全を示す哺乳動物を治療するための医薬製品におい
    て、同時にまたは分離してまたは順次に投与される薬剤
    としてGHとIGF−Ｉを含んでなる医薬製品。
12. 【請求項１２】GHおよびIGF−Ｉの各々の有効量が約0.0
    1〜約1mg/kg/日である、請求項11に記載の医薬製品。
13. 【請求項１３】GHもしくはIGF−Ｉまたはその両方が皮
    下または静脈内経路により投与される、請求項11または
    12に記載の医薬製品。
14. 【請求項１４】GHが１日１回投与され、IGF−Ｉが１日
    ２回投与される、請求項11ないし13のいずれか１項に記
    載の医薬製品。
15. 【請求項１５】GHおよびIGF−Ｉと同時にまたは分離し
    てまたは順次に投与される薬剤としてACE阻害剤をさら
    に含む、請求項11ないし14のいずれか１項に記載の医薬
    製品。