JP4805960B2 - ヒト臍帯血由来の非制限体幹細胞（ｕｓｓｃ） - Google Patents
ヒト臍帯血由来の非制限体幹細胞（ｕｓｓｃ） Download PDFInfo
- Publication number
- JP4805960B2 JP4805960B2 JP2008016859A JP2008016859A JP4805960B2 JP 4805960 B2 JP4805960 B2 JP 4805960B2 JP 2008016859 A JP2008016859 A JP 2008016859A JP 2008016859 A JP2008016859 A JP 2008016859A JP 4805960 B2 JP4805960 B2 JP 4805960B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cells
- stem cells
- ussc
- usscs
- cell
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 title claims abstract description 29
- 210000001988 somatic stem cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 18
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims abstract description 14
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 8
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 4
- 230000003169 placental effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 14
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 14
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 14
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 claims description 6
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 claims description 6
- 108010013996 Fibromodulin Proteins 0.000 claims description 4
- 108090000320 Hyaluronan Synthases Proteins 0.000 claims description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 4
- 102100022749 Aminopeptidase N Human genes 0.000 claims description 3
- 102000017177 Fibromodulin Human genes 0.000 claims description 3
- 102000003918 Hyaluronan Synthases Human genes 0.000 claims description 3
- 102100025304 Integrin beta-1 Human genes 0.000 claims description 3
- 102100032912 CD44 antigen Human genes 0.000 claims description 2
- 108010049990 CD13 Antigens Proteins 0.000 claims 1
- 208000031229 Cardiomyopathies Diseases 0.000 claims 1
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 claims 1
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 claims 1
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 101000946889 Homo sapiens Monocyte differentiation antigen CD14 Proteins 0.000 claims 1
- 108010013214 Hyaluronan Receptors Proteins 0.000 claims 1
- 108010041014 Integrin alpha5 Proteins 0.000 claims 1
- 108010022222 Integrin beta1 Proteins 0.000 claims 1
- 102100035877 Monocyte differentiation antigen CD14 Human genes 0.000 claims 1
- 208000021908 Myocardial disease Diseases 0.000 claims 1
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 111
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 abstract description 45
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 abstract description 21
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 abstract description 15
- 230000006698 induction Effects 0.000 abstract description 12
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 abstract description 11
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 abstract description 8
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 abstract description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 5
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 abstract description 5
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 abstract description 3
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 abstract 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 abstract 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 30
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 22
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 22
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 18
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 18
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 16
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 15
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 14
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 14
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 14
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 10
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 10
- 108010034065 fibulin 2 Proteins 0.000 description 10
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 9
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 description 9
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 description 9
- RGCKGOZRHPZPFP-UHFFFAOYSA-N alizarin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C3=C(O)C(O)=CC=C3C(=O)C2=C1 RGCKGOZRHPZPFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000009816 chondrogenic differentiation Effects 0.000 description 9
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 description 9
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 9
- 102000000503 Collagen Type II Human genes 0.000 description 8
- 108010041390 Collagen Type II Proteins 0.000 description 8
- 102100031813 Fibulin-2 Human genes 0.000 description 8
- DHCLVCXQIBBOPH-UHFFFAOYSA-N beta-glycerol phosphate Natural products OCC(CO)OP(O)(O)=O DHCLVCXQIBBOPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000011164 ossification Effects 0.000 description 8
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 8
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 8
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 7
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 7
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 7
- 210000001178 neural stem cell Anatomy 0.000 description 7
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 7
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102100024785 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 description 6
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 description 6
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 description 6
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 description 6
- 102000008730 Nestin Human genes 0.000 description 6
- 108010088225 Nestin Proteins 0.000 description 6
- 108010067787 Proteoglycans Proteins 0.000 description 6
- 102000016611 Proteoglycans Human genes 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 230000002518 glial effect Effects 0.000 description 6
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 6
- 210000005055 nestin Anatomy 0.000 description 6
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 6
- 230000009818 osteogenic differentiation Effects 0.000 description 6
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 5
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 description 5
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 description 5
- 102000003505 Myosin Human genes 0.000 description 5
- 108060008487 Myosin Proteins 0.000 description 5
- 238000011579 SCID mouse model Methods 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 5
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 5
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 5
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 5
- 239000002771 cell marker Substances 0.000 description 5
- 230000002648 chondrogenic effect Effects 0.000 description 5
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 5
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 5
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 5
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 5
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 5
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 4
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000053171 Glial Fibrillary Acidic Human genes 0.000 description 4
- 101710193519 Glial fibrillary acidic protein Proteins 0.000 description 4
- 108010028750 Integrin-Binding Sialoprotein Proteins 0.000 description 4
- 102000016921 Integrin-Binding Sialoprotein Human genes 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 102000004067 Osteocalcin Human genes 0.000 description 4
- 108090000573 Osteocalcin Proteins 0.000 description 4
- 102100030485 Platelet-derived growth factor receptor alpha Human genes 0.000 description 4
- 101710148465 Platelet-derived growth factor receptor alpha Proteins 0.000 description 4
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 4
- 108091000117 Tyrosine 3-Monooxygenase Proteins 0.000 description 4
- 102000048218 Tyrosine 3-monooxygenases Human genes 0.000 description 4
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 4
- VYFYYTLLBUKUHU-UHFFFAOYSA-N dopamine Chemical compound NCCC1=CC=C(O)C(O)=C1 VYFYYTLLBUKUHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 4
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 4
- 210000005046 glial fibrillary acidic protein Anatomy 0.000 description 4
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 4
- 101710135378 pH 6 antigen Proteins 0.000 description 4
- LOUPRKONTZGTKE-LHHVKLHASA-N quinidine Chemical compound C([C@H]([C@H](C1)C=C)C2)C[N@@]1[C@H]2[C@@H](O)C1=CC=NC2=CC=C(OC)C=C21 LOUPRKONTZGTKE-LHHVKLHASA-N 0.000 description 4
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 4
- 108010081589 Becaplermin Proteins 0.000 description 3
- 102000002664 Core Binding Factor Alpha 2 Subunit Human genes 0.000 description 3
- 108010043471 Core Binding Factor Alpha 2 Subunit Proteins 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010013709 Leukocyte Common Antigens Proteins 0.000 description 3
- 102000017095 Leukocyte Common Antigens Human genes 0.000 description 3
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 description 3
- 102000015336 Nerve Growth Factor Human genes 0.000 description 3
- 102000004264 Osteopontin Human genes 0.000 description 3
- 108010081689 Osteopontin Proteins 0.000 description 3
- 102100033237 Pro-epidermal growth factor Human genes 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 230000009815 adipogenic differentiation Effects 0.000 description 3
- 230000022159 cartilage development Effects 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 210000001612 chondrocyte Anatomy 0.000 description 3
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 3
- 229960003692 gamma aminobutyric acid Drugs 0.000 description 3
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical compound NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 3
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 3
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 3
- 210000000651 myofibroblast Anatomy 0.000 description 3
- 210000005044 neurofilament Anatomy 0.000 description 3
- 230000024121 nodulation Effects 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 3
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 3
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 3
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 3
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 description 3
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GEBBCNXOYOVGQS-BNHYGAARSA-N 4-amino-1-[(2r,3r,4s,5s)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxyamino)oxolan-2-yl]pyrimidin-2-one Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](NO)O1 GEBBCNXOYOVGQS-BNHYGAARSA-N 0.000 description 2
- NMUSYJAQQFHJEW-KVTDHHQDSA-N 5-azacytidine Chemical compound O=C1N=C(N)N=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 NMUSYJAQQFHJEW-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- 102100032528 C-type lectin domain family 11 member A Human genes 0.000 description 2
- 101710167766 C-type lectin domain family 11 member A Proteins 0.000 description 2
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000005701 Calcium-Binding Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010045403 Calcium-Binding Proteins Proteins 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 102100032925 Chondroadherin Human genes 0.000 description 2
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 description 2
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 2
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 2
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 2
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 2
- 238000012752 Hepatectomy Methods 0.000 description 2
- 101100118545 Holotrichia diomphalia EGF-like gene Proteins 0.000 description 2
- 101000757160 Homo sapiens Aminopeptidase N Proteins 0.000 description 2
- 101000935043 Homo sapiens Integrin beta-1 Proteins 0.000 description 2
- 102000004218 Insulin-Like Growth Factor I Human genes 0.000 description 2
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 2
- 102100037852 Insulin-like growth factor I Human genes 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 102000008763 Neurofilament Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010088373 Neurofilament Proteins Proteins 0.000 description 2
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 2
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004874 Synaptophysin Human genes 0.000 description 2
- 108090001076 Synaptophysin Proteins 0.000 description 2
- 102000046299 Transforming Growth Factor beta1 Human genes 0.000 description 2
- 101800002279 Transforming growth factor beta-1 Proteins 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 210000002376 aorta thoracic Anatomy 0.000 description 2
- 229960002756 azacitidine Drugs 0.000 description 2
- GHRQXJHBXKYCLZ-UHFFFAOYSA-L beta-glycerolphosphate Chemical compound [Na+].[Na+].CC(CO)OOP([O-])([O-])=O GHRQXJHBXKYCLZ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 210000002960 bfu-e Anatomy 0.000 description 2
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 2
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 2
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 2
- 210000004271 bone marrow stromal cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 108010059427 chondroadherin Proteins 0.000 description 2
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 2
- LOUPRKONTZGTKE-UHFFFAOYSA-N cinchonine Natural products C1C(C(C2)C=C)CCN2C1C(O)C1=CC=NC2=CC=C(OC)C=C21 LOUPRKONTZGTKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940096422 collagen type i Drugs 0.000 description 2
- 230000005757 colony formation Effects 0.000 description 2
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 2
- 210000001608 connective tissue cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000004351 coronary vessel Anatomy 0.000 description 2
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 229960003638 dopamine Drugs 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 210000000630 fibrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 210000004024 hepatic stellate cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000003365 immunocytochemistry Methods 0.000 description 2
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 2
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003127 knee Anatomy 0.000 description 2
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000002826 magnetic-activated cell sorting Methods 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 2
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 2
- 230000004070 myogenic differentiation Effects 0.000 description 2
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000004031 neuronal differentiation Effects 0.000 description 2
- 210000000963 osteoblast Anatomy 0.000 description 2
- 230000002188 osteogenic effect Effects 0.000 description 2
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 229960002429 proline Drugs 0.000 description 2
- 229960001404 quinidine Drugs 0.000 description 2
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 2
- 150000004492 retinoid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- LMEWRZSPCQHBOB-UHFFFAOYSA-M silver;2-hydroxypropanoate Chemical compound [Ag+].CC(O)C([O-])=O LMEWRZSPCQHBOB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- 208000019553 vascular disease Diseases 0.000 description 2
- OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N (+/-)-DABA Natural products NCCC(N)C(O)=O OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- 101800000263 Acidic protein Proteins 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 210000002237 B-cell of pancreatic islet Anatomy 0.000 description 1
- 208000020084 Bone disease Diseases 0.000 description 1
- 101150082143 CD24 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000013925 CD34 antigen Human genes 0.000 description 1
- 108050003733 CD34 antigen Proteins 0.000 description 1
- 208000004434 Calcinosis Diseases 0.000 description 1
- 241000189662 Calla Species 0.000 description 1
- 206010007710 Cartilage injury Diseases 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N D-lysine Chemical compound NCCCC[C@@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 101100481404 Danio rerio tie1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100481408 Danio rerio tie2 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 108050001049 Extracellular proteins Proteins 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- 101000930822 Giardia intestinalis Dipeptidyl-peptidase 4 Proteins 0.000 description 1
- 102000009465 Growth Factor Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010009202 Growth Factor Receptors Proteins 0.000 description 1
- 206010019663 Hepatic failure Diseases 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000868273 Homo sapiens CD44 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101500025419 Homo sapiens Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- 101001029765 Homo sapiens Fibromodulin Proteins 0.000 description 1
- 101000994369 Homo sapiens Integrin alpha-5 Proteins 0.000 description 1
- 101000599852 Homo sapiens Intercellular adhesion molecule 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000884271 Homo sapiens Signal transducer CD24 Proteins 0.000 description 1
- 101000851007 Homo sapiens Vascular endothelial growth factor receptor 2 Proteins 0.000 description 1
- 101150088952 IGF1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 102100032817 Integrin alpha-5 Human genes 0.000 description 1
- 102100037877 Intercellular adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 1
- 102000008109 Mixed Function Oxygenases Human genes 0.000 description 1
- 108010074633 Mixed Function Oxygenases Proteins 0.000 description 1
- 101100481410 Mus musculus Tek gene Proteins 0.000 description 1
- 101100481406 Mus musculus Tie1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000003729 Neprilysin Human genes 0.000 description 1
- 108090000028 Neprilysin Proteins 0.000 description 1
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 1
- 208000025966 Neurological disease Diseases 0.000 description 1
- NPGIHFRTRXVWOY-UHFFFAOYSA-N Oil red O Chemical compound Cc1ccc(C)c(c1)N=Nc1cc(C)c(cc1C)N=Nc1c(O)ccc2ccccc12 NPGIHFRTRXVWOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000906034 Orthops Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 102100024616 Platelet endothelial cell adhesion molecule Human genes 0.000 description 1
- 102000001393 Platelet-Derived Growth Factor alpha Receptor Human genes 0.000 description 1
- 108010068588 Platelet-Derived Growth Factor alpha Receptor Proteins 0.000 description 1
- 102100040990 Platelet-derived growth factor subunit B Human genes 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010019674 Proto-Oncogene Proteins c-sis Proteins 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102100038081 Signal transducer CD24 Human genes 0.000 description 1
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- 102100033177 Vascular endothelial growth factor receptor 2 Human genes 0.000 description 1
- LEBBDRXHHNYZIA-LDUWYPJVSA-N [(2s,3r,4s,5r,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl] n-[(z)-1,3-dihydroxyoctadec-4-en-2-yl]carbamate Chemical compound CCCCCCCCCCCCC\C=C/C(O)C(CO)NC(=O)O[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O LEBBDRXHHNYZIA-LDUWYPJVSA-N 0.000 description 1
- 238000004115 adherent culture Methods 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000003367 anti-collagen effect Effects 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000033558 biomineral tissue development Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000009640 blood culture Methods 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 210000004413 cardiac myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 1
- 108091092328 cellular RNA Proteins 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000000925 erythroid effect Effects 0.000 description 1
- 238000001400 expression cloning Methods 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 1
- 230000003619 fibrillary effect Effects 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 230000000799 fusogenic effect Effects 0.000 description 1
- 101150022753 galc gene Proteins 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 description 1
- 239000006481 glucose medium Substances 0.000 description 1
- 210000004565 granule cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- 230000009067 heart development Effects 0.000 description 1
- 210000003709 heart valve Anatomy 0.000 description 1
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940116978 human epidermal growth factor Drugs 0.000 description 1
- 229940099552 hyaluronan Drugs 0.000 description 1
- KIUKXJAPPMFGSW-MNSSHETKSA-N hyaluronan Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)C1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H](C(O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-MNSSHETKSA-N 0.000 description 1
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 1
- 108010003425 hyaluronan-mediated motility receptor Proteins 0.000 description 1
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 238000013394 immunophenotyping Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 230000016507 interphase Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000003041 ligament Anatomy 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 208000007903 liver failure Diseases 0.000 description 1
- 231100000835 liver failure Toxicity 0.000 description 1
- 238000005461 lubrication Methods 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000004899 motility Effects 0.000 description 1
- 210000003643 myeloid progenitor cell Anatomy 0.000 description 1
- GVUGOAYIVIDWIO-UFWWTJHBSA-N nepidermin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(C)C)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 GVUGOAYIVIDWIO-UFWWTJHBSA-N 0.000 description 1
- 229940053128 nerve growth factor Drugs 0.000 description 1
- 210000001982 neural crest cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000007538 neurilemmoma Diseases 0.000 description 1
- 230000001272 neurogenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004967 non-hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 230000000399 orthopedic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001582 osteoblastic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 208000024691 pancreas disease Diseases 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 238000012753 partial hepatectomy Methods 0.000 description 1
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical compound [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 1
- 210000000578 peripheral nerve Anatomy 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- -1 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000001147 pulmonary artery Anatomy 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 210000004116 schwann cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 210000002363 skeletal muscle cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002460 smooth muscle Anatomy 0.000 description 1
- 210000000329 smooth muscle myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 210000003594 spinal ganglia Anatomy 0.000 description 1
- 238000009168 stem cell therapy Methods 0.000 description 1
- 238000009580 stem-cell therapy Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 229940037128 systemic glucocorticoids Drugs 0.000 description 1
- 210000002435 tendon Anatomy 0.000 description 1
- 210000003813 thumb Anatomy 0.000 description 1
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 210000003606 umbilical vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/48—Reproductive organs
- A61K35/54—Ovaries; Ova; Ovules; Embryos; Foetal cells; Germ cells
- A61K35/545—Embryonic stem cells; Pluripotent stem cells; Induced pluripotent stem cells; Uncharacterised stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/48—Reproductive organs
- A61K35/50—Placenta; Placental stem cells; Amniotic fluid; Amnion; Amniotic stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/48—Reproductive organs
- A61K35/51—Umbilical cord; Umbilical cord blood; Umbilical stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
- A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P41/00—Drugs used in surgical methods, e.g. surgery adjuvants for preventing adhesion or for vitreum substitution
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0607—Non-embryonic pluripotent stem cells, e.g. MASC
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Zoology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Immunology (AREA)
- Virology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Neurology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Pregnancy & Childbirth (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Surgery (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Psychology (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
Description
本発明は、体幹細胞(somatic stem cell)、複数の幹細胞、本発明の幹細胞を含む薬剤、ならびに、本発明の幹細胞の精製、単離、および珍しい分化の可能性(unique differentiation-potential)のための方法に関する。
幹細胞は、永続的に自己置換する(self-replacing)が、それらは、一般にゆっくり繰り返している。一般に、これら細胞は、分化される細胞の数を増加させるための限定された自己再生能力を有する、一時的な増幅細胞群を生じさせると考えられている。これまで、大人のヒトにおける幹細胞の位置を突き止めるための挑戦があり、そのため、多数の代理マーカー（例えば、造血系統(hematopoietic lineage)のためのコロニー形成試験）を使用する文献があった。
多数の米国特許、例えば、US 5,486,359; 5,591,625; 5,736,396; 5,811,094; 5,827,740; 5,837,539; 5,908,782; 5,908,784; 5,942,225; 5,965,436; 6,010,696; 6,022,540; 6,087,113; 5,858,390; 5,804,446; 5,846,796; 5,654,186; 6,054,121; 5,827,735; 5,906,934は、数種の前駆細胞、例えば、筋肉前駆細胞、結合組織細胞前駆体、または卵細胞、へ分化し得る間葉幹細胞（ＭＳＣ）を扱っている。筋肉前駆細胞は、心筋細胞、骨格筋細胞、ならびに平滑筋細胞へ更に分化しているのに対し、結合組織細胞前駆体は、骨、軟骨、ならびに脂肪へ分化し得る。卵細胞は、肝臓または膵臓の細胞へ分化し得る(グロンペ(Grompe)ら、2001)。
へその緒の臍帯血内の非造血性幹細胞の存在が、依然として議論されている(マヤニ(Mayani)ら、2000、マレシ(Mareschi)ら、2001)。ドイツ特許出願DE 198 03 267 A1は、骨芽細胞前駆体およびヒト臍帯血からの骨形成を記載した最初のものである。
しかし、従来技術のこれら間葉前駆細胞の使用は、器官または組織を生み出すために有用なツールになるためには、それらの開発は不十分なので(they are too far developed)、しばしば制限される。換言すれば、それらは、機能再生器官または組織を得るために、既にかなり拘束され(committed)、かつ特殊化されているようである。
そこで、本発明の目的は、間葉細胞、神経細胞、血液細胞、または内皮細胞のような、異なる前駆細胞へ分化し得る幹細胞を提供することである。
本発明の別の目的は、胚(embryonic)幹細胞の欠点を有さない幹細胞を提供することである。
新たに同定された幹細胞が、上記目的を解決し得ることがわかった。本発明の体幹細胞は、ヒトのへその緒の臍帯血、胎盤血、および／または、生まれたばかりの子供の血液から得られ、前記体幹細胞は、間葉幹もしくは前駆細胞、造血系統幹もしくは前駆細胞、神経幹もしくは前駆細胞または内皮幹もしくは肝臓前駆細胞とは異なっているが、それらへ分化することができる。これら細胞は、造血系統、間葉幹細胞ならびに神経幹細胞の前駆体を提示する。この珍しい多機能(multifunctional capacity)、および、体幹細胞または異なる分化プロトコルの下で拘束された細胞のいずれかのようなこれらの臍帯血（ＣＢ）由来の非制限体幹細胞(cord blood (CB) derived unrestricted somatic stem cells)（ＵＳＳＣ）を増やすための技術により、再生医療において幹細胞治療を生み出して実施するための、明確な特徴付け、標準化および利用が可能になる。
図１は、低密度で平板培養された初期ＵＳＳＣ培養細胞の顕微鏡写真を示す。
図２は、融合性ＵＳＳＣ培養物の顕微鏡写真を示す。
図３は、インビトロ培養の間のＣＤ４５抗原に関するＦＡＣＳ分析を示す。
図４は、ＳＳＥＡ４胚マーカーに関するＦＡＣＳ分析を示す。
図５は、ＨＬＡ−クラスＩ（Ａ，Ｂ，Ｃ）、ＨＬＡ ＤＲおよびＣＤ１４に関するＦＡＣＳ分析を示す。
図６は、ＣＤ３４表面マーカーに関するＦＡＣＳ運動性(kinetic)を示す。
図７は、ニューロン誘発後のＵＳＳＣ細胞の顕微鏡写真を示す。
図８は、本発明のUSSC類が、抗ネスチン免疫染色を行う神経幹細胞マーカーネスチンを発現することを示す。
図９は、ニューロン系統の細胞を生み出すＵＳＳＣ類を示す。
図１０は、神経膠系統の細胞を生み出すＵＳＳＣ類を示す。
図１１は、骨形成誘発後およびアリザリンレッドによる染色後（Ｂ）の鉱化された小節形成を示す。
図１２は、ＵＳＳＣ由来のペレット培養物のアルシアンブルー(Alcian Blue)染色を示す。
図１３は、軟骨形成(chondrogenic)分化後のＵＳＳＣ培養物のコラーゲンタイプＩＩ染色（緑）を示す。
図１４は、オイルレッド染色によって示されるＵＳＳＣ培養物の脂肪形成(adipogenic)分化を示す。
図１５は、筋形成分化前後のＵＳＳＣ培養物の顕微鏡写真を示す。
図１６は、アザシチジン処理後のゆっくり作用する(low-acting)ミオシンに関する免疫細胞化学を示す。
図１７は、ＵＳＳＣ誘導体の卵細胞表現型を示す。
図１８は、SCIDマウスの肝臓柔組織への注入後のＵＳＳＣ培養物の生存および統合(integration)を示す。
本発明の体幹細胞は、実施例１に記載するように、濃度勾配単離、粘着細胞の培養、および成長因子を適用する継代培養を含む数種の方法によって単離および精製され得る。融合性細胞層が設けられた後、本発明の細胞を得るための単離工程が、形態(線維芽球様細胞(fibroblastoid)の形態)、ならびに、ＣＤ１３（陽性）、ＣＤ１４（陰性）、ＣＤ４５（陰性）、およびＣＤ２９（陽性；実施例２参照）表面抗原に対する抗体を使用する表現型分析によって普通に制御される。
本発明の体幹細胞は、ＣＤ４５のような造血系統に対して特異的なマーカーと陰性に反応しており、そのため、胎盤の臍帯血からも単離され得る造血幹細胞とは異なっている。ＣＤ１４は、ＵＳＳＣ類において検出され得ない別の表面抗原である。更に、本発明の幹細胞は、ＣＤ１３、ＣＤ２９、ＣＤ４４およびＣＤ４９ｅのような、細胞表面に存在する一連の抗原を特徴とする。ＵＳＳＣ調製物は、表皮成長因子レセプター (EGF-R)、小板(platelet)由来成長因子レセプターアルファ(PDGF-RA)、およびインシュリン成長因子レセプター(IGF-R)のような、所定のレセプター分子に対するｍＲＮＡ転写物の存在を、更に特徴とする。これらの細胞はまた、ＲＴ−ＰＣＲによって検出される、YB1(Ｙ−ボックス転移因子１)、Runx1(小動物(runt)関連転移因子１)およびAML1C(急性骨髄性白血病1転移因子)のような転移因子を典型的に発現している。しかし、ＵＳＳＣ調製物は、軟骨形成転移因子Ｃａｒｔ−１に対する転写物ならびに神経フィラメント、シナプトフィジン(synaptophysin)、チロシンヒドロキシラーゼ(TH)および神経膠繊維性酸性蛋白質(glial fibrillary acidic protein)(GFAP)のような神経マーカーに対して、典型的には陰性である。
ＵＳＳＣ調製物のＲＮＡ発現物および骨髄由来ＭＳＣ類(カプラン(Caplan)、1991)は、定量的アフィメトリックスジーンチップ（商標）マイクロアレイ(quantitative Affymetrix GeneChipTM microarrays)を用いることによって直接比較された。フィブリン(Fibulin)−２遺伝子（遺伝子バンク番号Ｘ８２４９４）の転写物は、高発現レベルでＵＳＳＣ類において検出されたが、ＭＳＣ類では検出されなかった。フィブリン−２生成は、線維母細胞において以前は行われていた（パン(Pan)ら、１９９３）。様々なヒト組織からのｍＲＮＡのノーザンブロット分析により、心臓、胎盤、および卵巣組織中には４．５−ｋｂ転写物が豊富であることが明らかになる(ツァン(Zhang)ら、1994)。ポリクローナル抗体を使用して、妊娠４−１０週のヒト胎児において、光学顕微鏡レベルで蛋白質が局在化された。フィブリン−２は、ニューロピテリウム(neuropithelium)、脊髄神経節(spinal ganglia)、および末梢神経内で主に検出された(ミオスゲ(Miosge)ら、1996)。
ラット動物モデルでは、ラットの肝臓筋線維母細胞(myofibroblast)（ｒＭＦ）は、フィブリン−２内に一緒に局在化している(colocalized)。これらの細胞は、門脈場(portal field)、中心静脈の壁に、そして、ほんの時たま柔組織に位置していた。線維症の初期段階では、ｒＭＦは、進行中の(developing)傷内で検出された。線維症の進行した段階では、ｒＭＦは、傷内に位置する細胞の大部分を占めていた(ニッテル(Knittel)ら、1999)。別の動物モデルでは、マウスのフィブリン−２蛋白質は、胚(embryonic)心臓発達中の心内膜床マトリックスにおける上皮−間葉形質転換中に発現される。フィブリン−２はまた、神経堤細胞および心外膜細胞にそれぞれ由来する、発達中の大動脈弓型血管（arch vessels）の平滑筋前駆細胞および冠状動脈内皮細胞によって合成される(ツダ(Tsuda)ら、2001)。
ヒアルロナンシンターゼ遺伝子（Ｄ８４４２４）、フィブロモジュリン(Fibromodulin)遺伝子(U05291)の転写物、および転写物１ＮＦＬＳ（Ｗ０３８４６）は、ＵＳＳＣ類では検出されなかったが、ＭＳＣ類では高レベルで検出された。ノーザンブロット分析は、ヒアルロナンシンターゼが、ヒト組織において偏在的に発現されることを示した(イタノ(Itano)およびキマタ(Kimata)、1996)。この酵素、ヒアルロナンの生成物は、空間の充填 (space filling)、関節の潤滑、および、それを通って細胞が移動し得るマトリックスの提供、を含む、様々な機能を果たす(ホール(Hall)ら、１９９５)。フィブロモジュリンは、小細胞間プロテオグリカンの群のメンバーである。蛋白質は、広範な組織分布を示し、関節の軟骨、腱、および靭帯において最も多量に観察される(スツトロビクス(Sztrolovics)ら、1994)。転写物１ＮＦＬＳは、ヒト胎児の肝臓からクローニングされた。
ＣＤ２４遺伝子（Ｌ３３３９３０）は、ＭＳＣ類中での発現レベルと比べて非常に低レベルで、ＵＳＳＣ類において発現される。ＣＤ２４は、多くのＢ−系統細胞中で、および、成熟顆粒球において、発現される(ファン・デル・スコート(Van der Schoot)ら、1989)。
ＭＳＣ類と比べた場合、本発明の体細胞は、それらがそこから単離される組織供給源に基づいて、はっきり識別され得る。更に、ＵＳＳＣ類は、ヒトの白血球抗原クラスＩ（ＨＬＡ−クラスＩ）の発現がないことを特徴とする。本発明の体幹細胞とは対照的に、骨髄および筋組織から単離された、先に記載されたＭＳＣ類は、きわめて高レベルのＨＬＡ−クラスＩ抗原を、それらの細胞表面において発現する。本発明の細胞は、段階に特異的な初期抗原４(stage specific early antigen 4)（ＳＳＥＡ４）も発現する（図４参照）。
典型的には、本発明の体幹細胞は、線維芽球様細胞形状を示し、かつ、粘着状態で増殖する。
本発明の好ましい態様において、本発明の体幹細胞（ＵＳＳＣ）は、他の体幹細胞、例えば、好ましくは、ＡＣ１３３およびＣＤ３４を発現する造血系統、の前駆体、間葉前駆体幹細胞、ニューロン前駆体幹細胞、またはそれらの組み合わせ、を提示する、複数または混合物中に存在する。この態様は、他の異なる体幹細胞へ分化する能力、または、本発明の好ましい態様のような、そのような体幹細胞の存在に基づいて、高い再生の可能性を含むため、有利である。好ましくは、間葉前駆体幹細胞またはニューロン前駆体幹細胞は、本発明の幹細胞からの分化によって生成される。
本発明によれば、本発明の体幹細胞ならびに本発明による体幹細胞の複数または混合物を含む薬剤（再生治療用）が提供される。その薬剤は、医学的および薬理的に許容され得るキャリアー物質または補助物質を更に含み得る。本発明はまた、遺伝子治療、器官置換、製剤の試験、血管のインビトロ成長、血管、骨、肝臓、膵臓、および神経の疾患の治療において、ＵＳＳＣまたは本発明の幹細胞の複数もしくは混合物を使用する方法に関する。
例えば、本発明のＵＳＳＣ類は、必要な部位に、例えば、バイオマテリアルとともに、またはバイオマテリアルなしで、局所的に適用され得る。
疾患の種類によって、ＵＳＳＣ類の局所および／または全身投与が適している。ＵＳＳＣ類は、直接適用され得るか、または薬学的に許容され得るキャリアーもしくはアジュバントと共に適用され得る。疾患の治療を促進する更なる物質を添加することが有利であり得る。例えば、整形外科的適用では、骨生成を向上させる物質が、ＵＳＳＣ類と共に適用され得る。
基本的に、ＵＳＳＣ類を適用する場合は、ＭＳＣ類の適用のために知られている方法が、同様に(in analogous manner)適用され得る。更に、幹細胞の適用は、例えば、B. E.ストラウアー(Strauer)ら、M.“Intrakoronare, humane autologe Stammzelltransplantation zur Myokardregeneration nach Herzinfarkt”、Dtsch med Wochenschr 2001; 126:932-938; クアルト(Quarto) R.ら、“自己由来骨髄基質細胞の使用による大きな骨損傷の修復(Repair of Large Bone Defects with the Use of Autologous Bone Marrow Stromal Cells)”、N Engl J Med 2001; 344:385-386; バカンティ(Vacanti) C. A.、“簡単な報告：組織工学的な骨による剥離した節骨の置換(Brief Report:Replacement of an Avulsed Phalanx with Tissue-Engineered Bone)” N Engl J Med 2001; 344:1511-1514、５月１７日、2001; ヘンツ(Hentz) V. R.、“親指の再構築のための組織工学(Tissue Engineering for Reconstruction of the Thumb)”、N Engl J Med 2001; 344:1547-1548; ブリットバーグ(Brittberg) M.、“自己由来軟骨細胞移植によるひざの重症軟骨損傷の治療(Treatment of Deep Cartilage Defects in the Knee with Autologous Chondrocyte Transplantation)”、N Engl J Med 1994; 331:889-895, １０月６日、1994; フリード(Freed) C. R.、“重症パーキンソン病のための胚ドーパミンニューロンの移植(Transplantation of Embryonic Dopamine Neurons for Severe Parkinson's Disease)”,N Engl J Med 2001; 344:710-719; シン’オカ(Shin'oka) T.、“組織工学的肺動脈の移植(Transplantation of a Tissue-Engineered Pulmonary Artery)”、N Engl J Med 2001; 344:532-533. シャピロ(Shapiro) A.M. J.、グルココルチコイドを含まない免疫抑制投薬計画を使用するタイプ１の糖尿病を有する７人の患者における島の移植(Islet Transplantation in Seven Patients with Type 1 Diabetes Mellitus Using a Glucocorticoid-Free Immunosuppressive Regimen) N Engl J Med 2000; 343:230-238、に記載されている。これらの参考文献は、開示として援用される。
本発明の幹細胞を、更に、より詳細に説明する。
本発明の幹細胞は、トリプシンＥＤＴＡ−処理および適当な培養条件下（実施例１）での再播種後に得られる、線維芽球様細胞形状および２つまたは３つの核小体（図１参照）を有する粘着細胞であり、長く伸びた形態の融合体(confluence)に迅速に広がる（図２）。図１は、初期ＵＳＳＣ培養物の顕微鏡写真を示す。低密度で平板培養された細胞は、ＵＳＳＣ類の線維芽球様細胞形態を示す。これらの細胞は、１４培養継代より長期にわたって容易に成長させることができる。図２は、融合性ＵＳＳＣ培養物の顕微鏡写真を示す。ほとんどの融合性細胞ＵＳＳＣ層は、細胞の平行配置を示す。
本発明の幹細胞は、トリプシンＥＤＴＡ−処理および適当な培養条件下（実施例１）での再播種後に得られる、線維芽球様細胞形状および２つまたは３つの核小体（図１参照）を有する粘着細胞であり、長く伸びた形態の融合体(confluence)に迅速に広がる（図２）。図１は、初期ＵＳＳＣ培養物の顕微鏡写真を示す。低密度で平板培養された細胞は、ＵＳＳＣ類の線維芽球様細胞形態を示す。これらの細胞は、１４培養継代より長期にわたって容易に成長させることができる。図２は、融合性ＵＳＳＣ培養物の顕微鏡写真を示す。ほとんどの融合性細胞ＵＳＳＣ層は、細胞の平行配置を示す。
その後の継代において、初期粘着細胞層の表面マーカー表現型ならびにそのすべての誘導体は、ＣＤ４５マーカーに対して陰性のままである。図３は、インビトロ培養の間のＣＤ４５抗原に関するＦＡＣＳ分析を示す。ＣＤ４５、造血細胞に特徴的なマーカー抗原、は、以後の継代からのＵＳＳＣ類では、ほとんど検出することができない（図３、４８、５４、８２日）。
方法Ａを使用するインビトロ培養後(実施例１)、ＵＳＳＣ調製物は、段階に特異的な初期抗原４（ＳＳＥＡ４）に対して陽性になり、この胚マーカーの均質発現を示す。図４は、ＳＳＥＡ４胚マーカーに関するＦＡＣＳ分析を示す。方法Ａ（実施例１）によって増加された細胞は、段階に特異的な初期抗原４（ＳＳＥＡ４）の発現を強く示す。同時に、ＵＳＳＣ培養物は、ＨＬＡ−クラスＩ表面抗原発現に対して陰性である。（図５Ａ）、ＨＬＡ−ＤＲ抗原発現（図５Ｂ）ならびにＣＤ１４陰性（図５Ｃ）。図５は、ＨＬＡ−クラスＩ（Ａ、Ｂ、Ｃ）、ＨＬＡ ＤＲおよびＣＤ１４に関するＦＡＣＳ分析を示す。インビトロでの発現後の本発明のＵＳＳＣ培養物は、ＨＬＡ−クラスＩ抗原に対して陰性である（パネルＡ）。これらの細胞は、抗原提示細胞（ＨＬＡ−ＤＲ）および単球（ＣＤ１４）に特徴的な、ＨＬＡ−ＤＲ（パネルＢ）およびＣＤ１４（パネルＣ）表面抗原に対しても陰性である。
図６は、ＣＤ３４表面マーカーに関するＦＡＣＳ運動性を示す。ＵＳＳＣ類は、１０継代にわたってＨ５１００／ＰＥＩにおいて成長した。この培養期間中、ＣＤ３４抗原発現の顕著な増加が観察された。造血幹細胞マーカーＣＤ３４に関して、図６により、継代３において、５４日目まで、ＣＤ３４陽性細胞が何ら検出され得ないことが明らかになる。それに対して、第７継代において、８２日目に、新規ＣＤ３４陽性小集団が現れている。一方、そのようなＣＤ３４または／およびＦＩＫ１陽性前駆体が、造血分化に特異的な、サイトカインで調整された(cytokine conditioned)培地によって培養された場合、赤血球前駆体および白血球前駆体のための、典型的な混合または造血コロニー（ＣＦＵ−ＧＭおよびＢＦＵ−Ｅ）が、ＣＤ４５+造血前駆細胞に匹敵するほど発達した（実施例９）。
一方、ＣＤ１４のために使い果たされた(depleted)臍帯血単核細胞を、高グルコース含有培地において培養すると、それらは、神経幹細胞の典型的な特徴を示す。図７は、ニューロン誘発後のＵＳＳＣ細胞の顕微鏡写真を示す。高グルコースのダルベッコ改質イーグル培地（Dulbecco's modified eagle medium）（ＤＭＥＭ）中で培養された本発明のＵＳＳＣ類は、星状膠状形態を示す。図７は、培養の１３日後に得られた、神経膠形態を示す、そのような培養細胞の例を示す（実施例６）。ＰＥＩによって増加された後、ＵＳＳＣ類は、神経幹細胞マーカーネスチンを発現する。最初の観察により、ネスチン染色が、レチノイド酸（ＲＡ）、塩基性線維母細胞成長因子ｂＦＧＦ、および神経成長因子β（ＮＧＦ−β）のような神経誘発剤(neural inducing agents)によって刺激された後はあまり現されない(less pronounced)ことが示される(マッカイ(McKay)、１９９７)。
詳細には、図８は、神経幹細胞マーカーネスチンを発現する、本発明のＵＳＳＣ類を示す。（Ａ）ＵＳＳＣ類は、Ｈ５１００／ＰＥＩ培地中で７日間インキュベートされ、そして、標準抗ネスチン免疫組織化学に付された。（Ｂ）細胞は、Ｈ５１００／ＰＥＩ中で７日間インキュベートされた後、ＲＡ、ｂＦＧＦ、およびＮＧＦによって、Ｈ５１００中で９日間誘発された。但し、（Ａ）の条件下で成長した細胞と比べて、ネスチン染色は低減される。
これらの細胞の更なる分析により、γ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ、図９Ｂ）、チロシンヒドロキシラーゼ（図９Ｂ）、シナプトフィジン（図９Ｄ）、神経フィラメント（図９Ｆ）のような神経細胞、または、ガラクトセレブロシド（ＧａｌＣ、図１０Ｂ）のような典型的な神経膠抗原に特徴的な蛋白質、および神経膠酸性蛋白質（ＧＦＡＰ、図１０Ｄ）の発現も明らかになる。図９は、ニューロン系統の細胞を生み出す、本発明のＵＳＳＣ類を示す。本発明のＵＳＳＣ類を、Ｈ５１００／ＰＥＩ中で７日間成長させ、そして、ＲＡ、ｂＦＧＦ、およびＮＧＦを含むＨ５１００上に２７日間保持させた。標準固定プロトコル後、ニューロン特異的抗体を適用した。（Ａ、Ｃ、Ｄ）段階を対比する(Phase-contrast)写真、（Ｂ、Ｄ、Ｆ）Ａ、Ｃ、Ｄと同じ調製物の蛍光写真。ＤＮＡ染色剤ＤＡＰＩ（青）は、細胞の核を染色するために使用される。（Ｂ）抗ＧＡＢＡ（赤）および抗チロシンヒドロキシラーゼ（ＴＨ、緑）を使用する二重免疫蛍光写真。（Ｄ）抗シナプトフィジン染色（緑）。（Ｆ）ニューロン特異的抗神経フィラメント染色を示す（赤）。神経フィラメントの異なるサブタイプに対する抗体のカクテルを使用した。図１０は、神経膠系統の細胞を生み出す、本発明のＵＳＳＣ類を示す。細胞を、図９に示したものと同じ細胞培養条件に付した。ＤＡＰＩは青である。（Ａ、Ｃ）段階を対比する写真の提示。（Ｂ）抗ＧａｌＣ免疫染色（赤）に付された、（Ａ）で見られるものと同じ細胞。（Ｄ）抗神経膠微小細胞酸性蛋白質(anti-glial fibrillary acid protein)（ＧＦＡＰ、赤）によって染色された（Ｃ）と同じ細胞。
しかし、仮に、上記の一般的な幹細胞が、いずれかの発現継代から採取されてＤＡＧ（デキサメタゾン、アスコルビン酸、β−グリセロールホスフェート）含有培養条件またはフィブロネクチン含有培地において誘発されるならば、骨形成系統における(along the osteogenic lineage)分化が誘発される（実施例３）。表２に示すように、骨に特異的なマーカー遺伝子（アルカリホスファターゼ、オステオカルシン、コラーゲンタイプＩ）は、容易に誘発されてＲＴ−ＰＣＲによって検出され得る。
骨形成分化の３つのマーカー遺伝子すべてが、ＤＡＧ誘発の７日目で、ｍＲＮＡ発現の増加を示す。β−アクチンは、ポジティブコントロールとして役立つ。
図１１は、骨形成誘発後およびアリザリンレッドによる染色後（Ｂ）の鉱化された小節形成を示す。ほぼ融合性のＵＳＳＣ層の骨形成分化が、培養培地Ｈ５１００へのデキサメタゾン、アスコルビン酸、β−グリセロールホスフェートの添加によって誘発された。刺激の１０日目に、特徴的な骨小節が現れる（１１Ａ）。これらの小節の鉱物沈殿が、アリザリンレッド染色によって示され得る（１１Ｂ）。これらの骨形成誘発条件下で、本発明の細胞では、アリザリンレッドによって染色され得る（図１１Ｂ）、異なる小節中の鉱化された骨の蓄積によって示されるような（図１１Ａ）、完全な骨形成分化が起こる。または、細胞培養物中のヒドロキシアパタイトの蓄積が、フォン・コッサ(von Kossa)染色によって６日後に検出され得る。
これらの結果から、臍帯血が、これまで検出されなかった、多量に増加され得る非常に初期の幹細胞を含むことは明らかである。また、図１１Ａに既に示したように、この細胞は、誘発されてＭＳＣ類へ分化し、そしてそこから骨芽細胞へ分化し得る。ＤＡＧによる完全な誘発後、アリザリンレッド染色による、図１１Ｂに示すような、鉱化骨小節への更なる分化が得られ得る。
本発明の細胞の多様性(versatily)は、デキサメタゾン、プロリン、ピルビン酸ナトリウム、ＩＴＳ＋プレミックス(Premix)、およびＴＧＦ−β１を含む、高グルコースのＤＭＥＭ中での培養後、軟骨形成分化によって示されるように、更に重要である(ジョーンストーン(Johnstone)ら、1998)。これらの分化実験の０日目および１４日目に、細胞を採取し、ＲＴ−ＰＣＲによって分析した（表３、実施例４）。
軟骨形成刺激の１４日目に、軟骨形成中の(on going chondrogenesis)３つの特徴的なマーカー遺伝子が発現される。
これらの研究の結果は、軟骨形成刺激の１４日後に、Ｃａｒｔ−１、特異的軟骨形成転移因子の上方制御(upregulation)を明らかに示す。更に、２つの典型的な軟骨細胞外蛋白質（コラーゲンタイプＩＩおよびコンドロアドヘリン）に対するｍＲＮＡ転写物も、上方制御された。更に、本発明の細胞は、アルシアンブルー染色によって示されるように、軟骨細胞(chondrocytic)分化に典型的な細胞外プロテオグリカン分子を明らかに生成した。図１２は、ＵＳＳＣ由来ペレット培養物のアルシアンブルー染色を示す。ＵＳＳＣ類を、沈降培養(sedimentation culture)下で、軟骨形成分化培地中で成長させた。誘発培地中で６日後、軟骨形成分化の特徴的なマーカーとしての多量のプロテオグリカン（ＰＧ）を、アルシアンブルー染色によって検出することはできない（パネルＡ）。それに対して、ＰＧ類は、青色／緑色によって示されるように、容易に検出され得る（パネルＢ）。
更に、軟骨特異的コラーゲンタイプＩＩの存在を、蛋白質レベルで示すことができた。図１３：軟骨形成分化後のＵＳＳＣ培養物のコラーゲンタイプＩＩ染色（緑）。
ＵＳＳＣ類を、軟骨形成分化培地中で培養した。１４日目の細胞外マトリックス蛋白質コラーゲンタイプＩＩの発現を、抗コラーゲンタイプＩＩ第一抗体およびＦＩＴＣ抗マウス第二抗体を使用して、蛍光顕微鏡によって示した（図１３Ｂ）。
ここで、非制限幹細胞の更なる多様性を、ＰＥＩプロトコルの下での、より高濃度のデキサメタゾンによる、そのような先に増加させた培養物の脂肪細胞への分化によって示す(実施例５)。
図１４は、オイルレッド（シグマ(Sigma)）によって特異的に染色され得る脂肪細胞を示す。脂肪細胞は、多量の細胞内小嚢およびオイルレッドによる特異的赤色染色を特徴とする。
更に、１０μＭの５’−アザシチジンおよび次に１００ｎｇ／ｍｌのｂＦＧＦを含むＨ５１００中で２４時間培養した場合、ＵＳＳＣ類は、筋肉分化の確固たる証拠を示す。細胞の形態の変化は、ゆっくり作用するミオシンの発現と同時に起こる(図１５および１６)。
また、典型的な卵細胞の出現および増殖は、ＰＥＩによって誘発されたＵＳＳＣ類が、図６に示された（実施例８）、ＣＤ３４+小集団からサブクローニングされる場合、後の継代において定期的に観察される（図１７）。これらの細胞は、酵素ジペプチジルペプチダーゼＩＶを様々な程度で(to variable degrees)発現し、このことは、そのような卵細胞が、肝臓の細胞へ更に分化し得ることを意味する。
インビトロで増加したＵＳＳＣは、５０％の部分的な肝切除を伴うＳＣＩＤマウスの再生肝臓内ならびに肝切除されていない肝臓内への注入後に生存し、そして存続するのに対し、臍帯血由来の単核細胞は、２５倍多い数の細胞が移植されるとしても検出され得ない。図１８は、ＳＣＩＤマウスの肝臓柔組織内への注入後のＵＳＳＣ培養物の生存および統合を示す。図１８Ａ：移植７日後の赤色蛍光は、本発明のヒトＰＫＨ２６−ラベルＵＳＳＣ類の生存およびマウス肝臓組織への統合を示す（肝切除なし）。それに対し、臍帯血由来の単核細胞（ＭＮＣ類）の移植後、ヒトＭＮＣ類の統合を示す赤色蛍光は検出され得なかった。図１８Ｂ：Ａに対応するマウス肝臓組織の凍結切除：統合されたヒトＵＳＳＣ類を含むマウス肝臓組織の透過光顕微鏡写真。
肝臓および膵臓β島細胞のための前駆体は同じであるので、そのようなＣＢ由来卵細胞も、それらを、糖尿病の患者または肝不全の患者における細胞治療のための有用なツールにする、インシュリン生成β−島細胞へ分化され得る。
これらの明らかな臨床的適用の他に、いずれかの良好に特徴付けされ、そして標準化条件下で増やされた幹細胞成分およびそれらの子孫(progeny)を、新たに開発された薬剤の作用ならびに分子および細胞効果を観察して規定することにより、所定の動物に基づく実験の代わりにもするために使用することができる。
従って、ここで記載した、これらの良好に特徴付けされた幹細胞およびヒトの臍帯血培養物から得られた分化された細胞は、薬学およびバイオマテリアル産業のための価値あるテスト試薬として使用される。
適当な培養条件下において、ＵＳＳＣ調製物は、異なる造血系統の多数のコロニーを形成し、これらの細胞が、造血を生じさせ得るという証拠を示した。
適当な培養条件下において、ＵＳＳＣ調製物は、異なる造血系統の多数のコロニーを形成し、これらの細胞が、造血を生じさせ得るという証拠を示した。
所定の濃度のＶＥＧＦ、Ｆｌｔ ３Ｌ、ＳＣＧＦ（幹細胞成長因子）を含む、適当に調整された培養培地の下で、および、メチルセルロース中で、そのような細胞は、ＦＬＫ１＋およびＡＣ１３３＋、Ｔｉｅ１およびＴｉｅ２マーカーに対しても陽性の細胞を含む混合コロニーを形成する。更なる分化において、ＡＣ１３３ネガティブ、ＣＤ３１+、ＣＤ５４+、ＶＷＦ+、ＶＥ−カテリン(Ｃａｔｈｅｒｉｎ)+を含む、内皮細胞に特徴的なマーカープロファイルが発達した。
血管疾患の治療のための自己由来および同種異系血管のインビトロ成長のための、そのような内皮細胞の明らかな有用性を、ここに記載する。
同時に、これらのインビトロ生成され、そして均質に増やされた前駆体およびそれれらの分化された細胞のすべては−クローンレベルで−細胞生物学および細胞または分子によって媒介される治療に基づくその後のすべての医学的適用における、特異的遺伝子およびそれらの生成物の役割の規定のためのきわめて重要なツールとして役立つ。
医学的に適用され得る再生細胞型の生成のために、多数の粘着して成長する(adherently growing)本発明のＵＳＳＣ類およびより多くの分化された間葉幹細胞を生み出すためには、この珍しい細胞型は、少数だけで十分である。
この知識の１つのまったく新しい見解は、そのような前駆体が、２つ以上のはっきりと分化している細胞型へ、非対照的に進化し得る点である。これにより、インビトロでも生じる、機能的に方向付けられた(functionally oriented)細胞再生における、共存成分制御の新たな生物学的原則が明らかになる。
本発明の結論は、幹細胞に基づく治療法は、この原則に従って設計されなければならず、そして、１つのクローン細胞型のみからなるものではいけないということである。本発明を、以下の非限定的な実施例において更に説明する。
臍帯血の回収（ＣＢ）
母親にインフォームドコンセントを行って、産科において臍帯血の回収を行った。まだ子宮中での胎盤による赤ん坊の輸送後に、へその緒を、二重に締めて、へそから７−１０ｃｍ離れたところで横に切開した(transsected)。へその緒の消毒後、臍静脈に穴を開けて、抗凝血剤として、サイトレートホスフェートデキストロース（ＣＰＤ）を含む回収バッグ内へ、ＣＢを回収した。
母親にインフォームドコンセントを行って、産科において臍帯血の回収を行った。まだ子宮中での胎盤による赤ん坊の輸送後に、へその緒を、二重に締めて、へそから７−１０ｃｍ離れたところで横に切開した(transsected)。へその緒の消毒後、臍静脈に穴を開けて、抗凝血剤として、サイトレートホスフェートデキストロース（ＣＰＤ）を含む回収バッグ内へ、ＣＢを回収した。
臍帯血からの単核細胞の単離
へその緒の臍帯血を、フィコール(Ficoll)溶液上へ注意深く載せた（密度１．０７７ｇ／ｃｍ3）。濃度勾配遠心分離を行った（４５０ｇ、室温、２５分）。中間期の単核細胞（ＭＮＣ）を回収し、ｐＨ７，３のリン酸塩バッファー生理食塩水（ＰＢＳ）中で２回洗浄した。
へその緒の臍帯血を、フィコール(Ficoll)溶液上へ注意深く載せた（密度１．０７７ｇ／ｃｍ3）。濃度勾配遠心分離を行った（４５０ｇ、室温、２５分）。中間期の単核細胞（ＭＮＣ）を回収し、ｐＨ７，３のリン酸塩バッファー生理食塩水（ＰＢＳ）中で２回洗浄した。
線維芽球様細胞形態の粘着層の生成
単核細胞を、Ｔ２５培養フラスコ（ヌンクロン(Nunclon)）中で、約５×１０3細胞／ｃｍ2の密度で平板培養した[Ａ．）、Ｂ．）、Ｃ．）]。４つの異なる培養法を使用して、粘着幹細胞の成長を開始させた：
Ａ．）１０-7Ｍのデキサメタゾンを含むミエロコルト(Myelocult)H5100培地(ステムセルテクノロジーズ(StemCell Technologies)、バンクーバー／カナダ)中で、ＣＢ由来のＭＮＣ類を最初に培養した。
Ｂ．）１０-7Ｍのデキサメタゾンを含むメセンコルト(Mesencult)(ステムセルテクノロジーズ(StemCell Technologies)、バンクーバー／カナダ)中で、ＣＢ由来のＭＮＣ類を最初に培養した。
Ｃ．）１０-7Ｍのデキサメタゾンを含む３０％のＦＣＳを含む低グルコースのＤＭＥＭ(バイオ−ホワイタッカー(Bio-Whittaker))中で、Ｂ由来のＭＮＣ類を最初に培養した。
Ｄ．）デキサメタゾンなしで、５０ｍｌの培養フラスコ（ヌンクロン(Nunclon)）内の１０ｍｌのミエロコルト(Myelocult)Ｈ５１００培地(ステムセルテクノロジーズ(StemCell Technologies)、バンクーバー、カナダ)中で、５×１０6／ｍｌの密度で、ＣＢ由来のＭＮＣ類を平板培養した。
単核細胞を、Ｔ２５培養フラスコ（ヌンクロン(Nunclon)）中で、約５×１０3細胞／ｃｍ2の密度で平板培養した[Ａ．）、Ｂ．）、Ｃ．）]。４つの異なる培養法を使用して、粘着幹細胞の成長を開始させた：
Ａ．）１０-7Ｍのデキサメタゾンを含むミエロコルト(Myelocult)H5100培地(ステムセルテクノロジーズ(StemCell Technologies)、バンクーバー／カナダ)中で、ＣＢ由来のＭＮＣ類を最初に培養した。
Ｂ．）１０-7Ｍのデキサメタゾンを含むメセンコルト(Mesencult)(ステムセルテクノロジーズ(StemCell Technologies)、バンクーバー／カナダ)中で、ＣＢ由来のＭＮＣ類を最初に培養した。
Ｃ．）１０-7Ｍのデキサメタゾンを含む３０％のＦＣＳを含む低グルコースのＤＭＥＭ(バイオ−ホワイタッカー(Bio-Whittaker))中で、Ｂ由来のＭＮＣ類を最初に培養した。
Ｄ．）デキサメタゾンなしで、５０ｍｌの培養フラスコ（ヌンクロン(Nunclon)）内の１０ｍｌのミエロコルト(Myelocult)Ｈ５１００培地(ステムセルテクノロジーズ(StemCell Technologies)、バンクーバー、カナダ)中で、５×１０6／ｍｌの密度で、ＣＢ由来のＭＮＣ類を平板培養した。
すべての培養物を、完全な湿潤雰囲気中で、５％ＣＯ2中、３７℃でインキュベートし、非粘着細胞を含む完全培地を除去して１０ｍｌの新鮮な培地を添加することにより、週に１回供給した。いくつかの時点の後に、粘着性の紡錘状細胞を、０．０５％のトリプシンおよび０．５３ｍＭのＥＤＴＡによる２分間の処理によって除去し、５０％の血清含有培地によってすすぎ洗いし、遠心分離によって７８０ｇ回収し、そして、フローサイトメトリーまたはＲＴ−ＰＣＲによって分析した。２〜３週後、線維芽球様細胞形態の粘着細胞が、全細胞培養物の約３０％に現れる。
本発明のＵＳＳＣ類の増加のための培養条件
本発明のＵＳＳＣ類を、１０ｎｇ／ｍｌのＩＧＦ Ｉ（インシュリン状成長因子−Ｉ）、１０ｎｇ／ｍｌのＰＤＧＦ−ＢＢ（小板由来の成長因子−ＢＢ）、および１０ｎｇ／ｍｌのｒｈ−ヒトＥＧＦ（組み換え型ヒト表皮成長因子）を含むＨ５１００培地（ＰＥＩ培地）中で、１×１０4〜１×１０5細胞／ｍｌの密度で増加させることができる（増加方法Ａ）。代わりに、ＵＳＳＣ調製物を、初期成長培地Ａ、Ｂ、およびＣ中で増加させることができる。
本発明のＵＳＳＣ類を、１０ｎｇ／ｍｌのＩＧＦ Ｉ（インシュリン状成長因子−Ｉ）、１０ｎｇ／ｍｌのＰＤＧＦ−ＢＢ（小板由来の成長因子−ＢＢ）、および１０ｎｇ／ｍｌのｒｈ−ヒトＥＧＦ（組み換え型ヒト表皮成長因子）を含むＨ５１００培地（ＰＥＩ培地）中で、１×１０4〜１×１０5細胞／ｍｌの密度で増加させることができる（増加方法Ａ）。代わりに、ＵＳＳＣ調製物を、初期成長培地Ａ、Ｂ、およびＣ中で増加させることができる。
細胞蛍光計(cytofluorometry)による細胞の免疫表現型のタイピング(immonophenotyping)
ＵＳＳＣ類の免疫表現型を決定するために、ＦＩＴＣ結合抗ＣＤ４５（ベクトン・ディケンソン(Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ)、コールター(Ｃｏｕｌｔｅｒ)）、ＰＥ結合抗ＣＤ１４（ファーミンゲン(ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ)、コールター(Ｃｏｕｌｔｅｒ)）、ヤギＦ（ａｂ｀）2抗マウスＩｇＧ＋ＩｇＭ（Ｈ＋Ｌ）−ＦＩＴＣによってラベルされた抗ＳＳＥＡ−４（ＭＣ−８１３−７０）（コールター(Ｃｏｕｌｔｅｒ)）、抗ＣＤ１０−ＰＥ（ＣＡＬＬＡ、ファーミンゲン(ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ)）、ヤギＦ（ａｂ｀）2抗マウスＩｇＧ＋ＩｇＭ （Ｈ＋Ｌ）−ＦＩＴＣによってラベルされた抗ＨＬＡ−クラスＩ（コールター(Ｃｏｕｌｔｅｒ)）、抗ＣＤ１３−ＰＥ（ベクトン・ディケンソン(Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ)、コールター(Ｃｏｕｌｔｅｒ)）；抗ＣＤ２９（コールター(Ｃｏｕｌｔｅｒ)）、抗ＣＤ４４（コールター(Ｃｏｕｌｔｅｒ)）、抗ＣＤ４９ｅ（コールター(Ｃｏｕｌｔｅｒ)）、抗ＣＤ９０（コールター(Ｃｏｕｌｔｅｒ)）、抗ＨＬＡ−クラスＩＩ−ＦＩＴＣ（コールター(Ｃｏｕｌｔｅｒ)）によって、細胞を染色した。ＥＰＩＣＳ ＸＬ（コールター(Ｃｏｕｌｔｅｒ)）またはＦＡＣＳ分析器（ベクトン・ディケンソン(Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ)を用いて、細胞を分析した。
ＵＳＳＣ類の免疫表現型を決定するために、ＦＩＴＣ結合抗ＣＤ４５（ベクトン・ディケンソン(Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ)、コールター(Ｃｏｕｌｔｅｒ)）、ＰＥ結合抗ＣＤ１４（ファーミンゲン(ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ)、コールター(Ｃｏｕｌｔｅｒ)）、ヤギＦ（ａｂ｀）2抗マウスＩｇＧ＋ＩｇＭ（Ｈ＋Ｌ）−ＦＩＴＣによってラベルされた抗ＳＳＥＡ−４（ＭＣ−８１３−７０）（コールター(Ｃｏｕｌｔｅｒ)）、抗ＣＤ１０−ＰＥ（ＣＡＬＬＡ、ファーミンゲン(ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ)）、ヤギＦ（ａｂ｀）2抗マウスＩｇＧ＋ＩｇＭ （Ｈ＋Ｌ）−ＦＩＴＣによってラベルされた抗ＨＬＡ−クラスＩ（コールター(Ｃｏｕｌｔｅｒ)）、抗ＣＤ１３−ＰＥ（ベクトン・ディケンソン(Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ)、コールター(Ｃｏｕｌｔｅｒ)）；抗ＣＤ２９（コールター(Ｃｏｕｌｔｅｒ)）、抗ＣＤ４４（コールター(Ｃｏｕｌｔｅｒ)）、抗ＣＤ４９ｅ（コールター(Ｃｏｕｌｔｅｒ)）、抗ＣＤ９０（コールター(Ｃｏｕｌｔｅｒ)）、抗ＨＬＡ−クラスＩＩ−ＦＩＴＣ（コールター(Ｃｏｕｌｔｅｒ)）によって、細胞を染色した。ＥＰＩＣＳ ＸＬ（コールター(Ｃｏｕｌｔｅｒ)）またはＦＡＣＳ分析器（ベクトン・ディケンソン(Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ)を用いて、細胞を分析した。
ＵＳＳＣ類の骨形成分化の可能性の立証
実施例１に記載したように得られたＵＳＳＣ類を、それらが７０％の融合度(confluency)に達するまで、標準培地中で培養した。１０-7Ｍのデキサメタゾン、５０μｇ／ｍｌのアスコルビン酸、および１０ｍＭのβ−グリセロホスフェートを添加することによって、これらの細胞の骨形成分化を誘発した(ブルーダー(Bruder)ら、1994、ジャイスワル(Jaiswal)ら、1997)。刺激の１０日目に、細胞は、カルシウムホスフェート沈殿を示し、それにより、骨小節が得られた。鉱化した骨小節を、アリザリンレッドによる染色によって、以下のように検出した：培養物中の粘着細胞を、ｐＨ７．３のＰＢＳによって２回洗浄し、室温で１時間、５ｍｌの０．１％アリザリンレッド溶液によって、次いで、０．１％の酢酸および無水得エタノールならびにＰＢＳによって染色した。
実施例１に記載したように得られたＵＳＳＣ類を、それらが７０％の融合度(confluency)に達するまで、標準培地中で培養した。１０-7Ｍのデキサメタゾン、５０μｇ／ｍｌのアスコルビン酸、および１０ｍＭのβ−グリセロホスフェートを添加することによって、これらの細胞の骨形成分化を誘発した(ブルーダー(Bruder)ら、1994、ジャイスワル(Jaiswal)ら、1997)。刺激の１０日目に、細胞は、カルシウムホスフェート沈殿を示し、それにより、骨小節が得られた。鉱化した骨小節を、アリザリンレッドによる染色によって、以下のように検出した：培養物中の粘着細胞を、ｐＨ７．３のＰＢＳによって２回洗浄し、室温で１時間、５ｍｌの０．１％アリザリンレッド溶液によって、次いで、０．１％の酢酸および無水得エタノールならびにＰＢＳによって染色した。
カルシウムのアリザリンレッドおよびフォン・コッサ染色は、これらの細胞の鉱化の可能性を示す（スタンフォード(Stanford)ら、1995、ルングバイ(Rungby)ら、1993）。骨に特異的な分化マーカーオステオカルシン(OC)、オステオポンチン(osteopontin)(OP)、骨に特異的なアルカリホスファターゼ(AP)、骨シアロ蛋白質 (BSP)、小板由来成長因子レセプターアルファ(PDGF-Ra)、表皮成長因子レセプター(EGFR)、およびコラーゲンタイプＩを用いて、ＲＴ−ＰＣＲによっても、骨形成分化が示された。
ＵＳＳＣ類の軟骨形成分化の可能性の立証
軟骨形成分化のために、２×１０5個の粘着幹細胞を、１５ｍｌのポリプロピレンチューブ中の沈降培養物中に置いた。デキサメタゾン、プロリン、ピルビン酸ナトリウム、ITS+プレミックス、およびＴＧＦ−β１を含む高グルコースのＤＭＥＭを、細胞培養培地として使用した（ジョーンストーン(Johnstone)ら、1998、ヨー(Yoo)ら、1998）。７、１４、および２１日目に、Ｃａｒｔ−１、コラーゲンタイプＩＩおよびコンドロアドヘリンをコードする軟骨に特異的な遺伝子産物について、ＲＴ−ＰＣＲによって細胞画分を分析した。また、ＵＳＳＣ類を、沈降培養物中で使用した。２週間後に、デワックス(Dewax)セクションを、室温で１５分間、４％パラホルムアルデヒドによって固定し、エタノール中で洗浄した。セクションを、１％アルシアンブルー／３％酢酸、ｐＨ２，５によって５分間染色し、蒸留水中で洗浄した。それらは、アルシアンブルー染色によって示されるように、特異的なプロテオグリカンの陽性染色を明らかに示す（チャオ(Chao)ら、1993）。１４日の軟骨形成誘発期の後に、細胞を、標準プロトコルに従って固定し、蛍光顕微鏡によって分析したところ(ロゼンバウム(Rosenbaum)ら、1998)、コラーゲンタイプＩＩに特異的な細胞外マトリックスの存在が示された（図１３Ｂ）。
軟骨形成分化のために、２×１０5個の粘着幹細胞を、１５ｍｌのポリプロピレンチューブ中の沈降培養物中に置いた。デキサメタゾン、プロリン、ピルビン酸ナトリウム、ITS+プレミックス、およびＴＧＦ−β１を含む高グルコースのＤＭＥＭを、細胞培養培地として使用した（ジョーンストーン(Johnstone)ら、1998、ヨー(Yoo)ら、1998）。７、１４、および２１日目に、Ｃａｒｔ−１、コラーゲンタイプＩＩおよびコンドロアドヘリンをコードする軟骨に特異的な遺伝子産物について、ＲＴ−ＰＣＲによって細胞画分を分析した。また、ＵＳＳＣ類を、沈降培養物中で使用した。２週間後に、デワックス(Dewax)セクションを、室温で１５分間、４％パラホルムアルデヒドによって固定し、エタノール中で洗浄した。セクションを、１％アルシアンブルー／３％酢酸、ｐＨ２，５によって５分間染色し、蒸留水中で洗浄した。それらは、アルシアンブルー染色によって示されるように、特異的なプロテオグリカンの陽性染色を明らかに示す（チャオ(Chao)ら、1993）。１４日の軟骨形成誘発期の後に、細胞を、標準プロトコルに従って固定し、蛍光顕微鏡によって分析したところ(ロゼンバウム(Rosenbaum)ら、1998)、コラーゲンタイプＩＩに特異的な細胞外マトリックスの存在が示された（図１３Ｂ）。
ＵＳＳＣ類の脂肪形成分化の可能性の立証
１０-6Ｍのデキサメタゾン、５０μｇ／ｍｌのアスコルビン酸、および１０ｍＭのβ−グリセロホスフェートを含むＨ５１００中で、ＵＳＳＣを培養したところ、オイルレッド染色によって示されるように、脂肪細胞へのＵＳＳＣ類の部分的な分化が得られた(ラミレズ−ザカリアス(Ramirez-Zacarias)ら、1992)。
１０-6Ｍのデキサメタゾン、５０μｇ／ｍｌのアスコルビン酸、および１０ｍＭのβ−グリセロホスフェートを含むＨ５１００中で、ＵＳＳＣを培養したところ、オイルレッド染色によって示されるように、脂肪細胞へのＵＳＳＣ類の部分的な分化が得られた(ラミレズ−ザカリアス(Ramirez-Zacarias)ら、1992)。
ＵＳＳＣ類の神経形成(neurogenic)分化の可能性の立証
神経膠細胞のための細胞単離および培養条件
製造者(ミルテニイ・バイオテク(Miltenyi Biotec)、バーギシュ・グラドバッハ(Bergisch Gladbach))の指示に従って、ＶＳ＋分離カラムを使用して、ＣＤ１４／磁気活性化細胞選別(magnetic Activated Cell Sorting)（ＭＡＣＳ）によって、ＣＤ１４＋細胞のために、記載したように得られた単核臍帯血細胞を使い果たした。ＣＤ１４に使い果たされた単核細胞を、Ｔ２５培養フラスコ(ヌンクロン(Nunclon))内の１０ｍｌの高グルコース培地(４５００Ｇ／Ｌのグルコースを含むダルベッコ(Dulbecco´s)MEM)中で、２×１０6／ｍｌの密度で培養し、完全湿潤雰囲気中で、５％ＣＯ2中、３７℃でインキュベートした。１０−１５日後に、培養物中で、神経膠状細胞が検出された。
神経膠細胞のための細胞単離および培養条件
製造者(ミルテニイ・バイオテク(Miltenyi Biotec)、バーギシュ・グラドバッハ(Bergisch Gladbach))の指示に従って、ＶＳ＋分離カラムを使用して、ＣＤ１４／磁気活性化細胞選別(magnetic Activated Cell Sorting)（ＭＡＣＳ）によって、ＣＤ１４＋細胞のために、記載したように得られた単核臍帯血細胞を使い果たした。ＣＤ１４に使い果たされた単核細胞を、Ｔ２５培養フラスコ(ヌンクロン(Nunclon))内の１０ｍｌの高グルコース培地(４５００Ｇ／Ｌのグルコースを含むダルベッコ(Dulbecco´s)MEM)中で、２×１０6／ｍｌの密度で培養し、完全湿潤雰囲気中で、５％ＣＯ2中、３７℃でインキュベートした。１０−１５日後に、培養物中で、神経膠状細胞が検出された。
神経細胞への分化
Ａ）Ｈ５１００のみの中で、または４０ｐｇ／ｍｌのＰＤＧＦＢ、１０ｐｇ／ｍｌのＥＧＦ、１０ｐｇ／ｍｌのＩＧＦ−Ｉの存在下のいずれかで、細胞を７日間増やした。細胞をトリプシン化し、ポリＤ−リジン（ＰＤＬ）およびラミニン(laminin)(PDL/lam)によって被覆されたカバースリップ上の２４ウェル培養皿において、約３，５×１０3細胞／ｃｍ2の密度で平板培養した。次いで、オールトランスレチノイド酸（１０-5Ｍ）、ｂＦＧＦ（２０ｎｇ／ｍｌ）、およびＮＧＦ−β（５０ｎｇ／ｍｌ）のような誘発剤を変化することにより、ニューロン分化を開始した。
Ａ）Ｈ５１００のみの中で、または４０ｐｇ／ｍｌのＰＤＧＦＢ、１０ｐｇ／ｍｌのＥＧＦ、１０ｐｇ／ｍｌのＩＧＦ−Ｉの存在下のいずれかで、細胞を７日間増やした。細胞をトリプシン化し、ポリＤ−リジン（ＰＤＬ）およびラミニン(laminin)(PDL/lam)によって被覆されたカバースリップ上の２４ウェル培養皿において、約３，５×１０3細胞／ｃｍ2の密度で平板培養した。次いで、オールトランスレチノイド酸（１０-5Ｍ）、ｂＦＧＦ（２０ｎｇ／ｍｌ）、およびＮＧＦ−β（５０ｎｇ／ｍｌ）のような誘発剤を変化することにより、ニューロン分化を開始した。
蛍光顕微鏡
誘発期間（２７日）後、細胞を、標準プロトコルに従って固定して、神経特異的抗原に対する抗体によって染色した。蛍光および透過光顕微鏡を用いて、標本を分析した。
誘発期間（２７日）後、細胞を、標準プロトコルに従って固定して、神経特異的抗原に対する抗体によって染色した。蛍光および透過光顕微鏡を用いて、標本を分析した。
ミオサイト(myocytic)系統における分化の可能性の立証
１０ｎｇ／ｍｌ ＰＤＧＦＢＢ、１０ｎｇ／ｍｌ ＥＧＦ、１０ｎｇ／ｍｌ ＩＧＦを補充したＨ５１００培地（ステムセル・テクノロジー(StemCell Technology)）において、３７℃、５％ＣＯ2で、１×１０4個のＵＳＳＣ類を、それらの融合度が７０％に達するまで培養した。その後、細胞を、１０μＭの５’−アザシチジン（シグマ(Sigma)）と共に２４時間インキュベートし、ＰＢＳによって２回洗浄し、そして、１００ｎｇ／ｍｌのｂＦＧＦ（シグマ(Sigma)）を補充したＨ５１００培地中で培養した。分化培地において１週間後、細胞の形態が変化した（図１５）。１０日後、細胞を、トリプシン化し、免疫染色のために、フィブロネクチンによって被覆したガラスチャンバースライドへ移した。
１０ｎｇ／ｍｌ ＰＤＧＦＢＢ、１０ｎｇ／ｍｌ ＥＧＦ、１０ｎｇ／ｍｌ ＩＧＦを補充したＨ５１００培地（ステムセル・テクノロジー(StemCell Technology)）において、３７℃、５％ＣＯ2で、１×１０4個のＵＳＳＣ類を、それらの融合度が７０％に達するまで培養した。その後、細胞を、１０μＭの５’−アザシチジン（シグマ(Sigma)）と共に２４時間インキュベートし、ＰＢＳによって２回洗浄し、そして、１００ｎｇ／ｍｌのｂＦＧＦ（シグマ(Sigma)）を補充したＨ５１００培地中で培養した。分化培地において１週間後、細胞の形態が変化した（図１５）。１０日後、細胞を、トリプシン化し、免疫染色のために、フィブロネクチンによって被覆したガラスチャンバースライドへ移した。
免疫組織化学
細胞を、５％ホルムアルデヒド／ＰＢＳによって１５分間固定し、ｐＨ７．３のＰＢＳ中で２回洗浄した。標準プロトコルを使用して、抗骨格(anti-skeletal)ミオシン(遅い)特異的第一抗体(クローンＮＯＱ７．５．４Ｄ、１：４００）(緑で示す)と共に、そして、抗ＣＤ１３第一抗体（赤で示す）またはモノクローナル抗骨格ミオシン第一抗体（クローンＭＹ−３２、１：４０００）と共に、細胞をインキュベートした。上記培養条件下で培養されたＵＳＳＣ類について、染色は陽性であった（図１６）。
細胞を、５％ホルムアルデヒド／ＰＢＳによって１５分間固定し、ｐＨ７．３のＰＢＳ中で２回洗浄した。標準プロトコルを使用して、抗骨格(anti-skeletal)ミオシン(遅い)特異的第一抗体(クローンＮＯＱ７．５．４Ｄ、１：４００）(緑で示す)と共に、そして、抗ＣＤ１３第一抗体（赤で示す）またはモノクローナル抗骨格ミオシン第一抗体（クローンＭＹ−３２、１：４０００）と共に、細胞をインキュベートした。上記培養条件下で培養されたＵＳＳＣ類について、染色は陽性であった（図１６）。
ヒトのＵＳＳＣ細胞ならびに臍帯血由来の単核細胞（ＭＮＣ）を、PKH26 レッド・フルオレセント・セル・リンカー・キット(RED Fluorescent Cell Linker Kit)(シグマ(Sigma)、PKH26-GL)によってラベルした。２×１０5個のＵＳＳＣ類および５×１０6個のＭＮＣ類を、５０％の肝切除あり、およびなしのＳＣＩＤマウスの肝臓柔組織内へ注入した。移植の７日後、肝切除された動物について、完全な肝臓再生が達成された。赤色ラベルされたヒト細胞の存在について、肝臓組織の凍結断片を、蛍光顕微鏡によって分析した（図１８）。
ＵＳＳＣの造血系統への分化の可能性の立証
長期間（継代５〜８）、適当な増加培地(expansion medium)中で成長する３つの異なるＵＳＳＣ類の調製物(３０％のＦＣＳを含むＤＭＥ培地中のUSSCKCB55、デキサメタゾンを含むＨ５１００培地中のUSSCKCB12、デキサメタゾンを含むメセンカルト(MesenCult)培地中のUSSCKCB13、およびＰＥＩを含むＨ５１００培地中のUSSCGK12)を、造血特異培養培地（メトカルト（Methocult）4434）中で２４ウェルプレートにおいて、２５０μｌ（２×１０4−２×１０5細胞）の細胞懸濁液中へ３回(in triplicate)接種した。５０個を超える細胞のコロニーを数えて、確立された規準に従って、顆粒細胞／マクロファージ（ＣＦＵ−ＧＭ）、初期赤血球（ＢＦＵ−Ｅ）前駆細胞または多能性(CFU-GEMM)前駆細胞由来のように分類した。分化条件下で、異なる培養物中のコロニー形成が、観察の１週間から始まり、３週間まで続くことが明らかになった。ＵＳＳＣ調製物が、異なる系統の多数のコロニーに進化し、これにより、これらの細胞が、造血を引き起こし得ることが証明された。
長期間（継代５〜８）、適当な増加培地(expansion medium)中で成長する３つの異なるＵＳＳＣ類の調製物(３０％のＦＣＳを含むＤＭＥ培地中のUSSCKCB55、デキサメタゾンを含むＨ５１００培地中のUSSCKCB12、デキサメタゾンを含むメセンカルト(MesenCult)培地中のUSSCKCB13、およびＰＥＩを含むＨ５１００培地中のUSSCGK12)を、造血特異培養培地（メトカルト（Methocult）4434）中で２４ウェルプレートにおいて、２５０μｌ（２×１０4−２×１０5細胞）の細胞懸濁液中へ３回(in triplicate)接種した。５０個を超える細胞のコロニーを数えて、確立された規準に従って、顆粒細胞／マクロファージ（ＣＦＵ−ＧＭ）、初期赤血球（ＢＦＵ−Ｅ）前駆細胞または多能性(CFU-GEMM)前駆細胞由来のように分類した。分化条件下で、異なる培養物中のコロニー形成が、観察の１週間から始まり、３週間まで続くことが明らかになった。ＵＳＳＣ調製物が、異なる系統の多数のコロニーに進化し、これにより、これらの細胞が、造血を引き起こし得ることが証明された。
非制限体幹細胞およびそれらの連続分化産物の分析のための分子的方法
オステオカルシン、オステオポンチン、骨シアロ蛋白質、アルカリホスファターゼ、ＰＤＧＦＲαおよびＥＧＦレセプターからの特異的ｃＤＮＡ配列の増幅のためのＰＣＲプライマーを、それらを、それらのそれぞれ生み出されるＤＮＡフラグメントの大きさで区別し得るために、異なる各エクソンから選択した。
オステオカルシン、オステオポンチン、骨シアロ蛋白質、アルカリホスファターゼ、ＰＤＧＦＲαおよびＥＧＦレセプターからの特異的ｃＤＮＡ配列の増幅のためのＰＣＲプライマーを、それらを、それらのそれぞれ生み出されるＤＮＡフラグメントの大きさで区別し得るために、異なる各エクソンから選択した。
ｐＣＲＬ１ベクター（インビトロゲン(Invitrogen)／米国）へのクローニングおよび大腸菌株TOP １０Fへの連続した形質転換により、各特異的ｃDNAクローンを得て、自動シーケンサー（アプライド・バイオシステムズ(Applied Biosystems)）におけるサイクルシーケンシングによって特徴付けした。
２段階の工程で、RT-PCR反応を行った。１時間、５０℃で、２０μｌ容量の１０ＵのＡＭＶ逆転写酵素（プロメガ(Promega)、マンハイム(Mannheim)）、１．５ｐｍｏｌの３’−遺伝子特異的プライマー、１ｍＭのｄＮＴＰ類、および補充されたバッファー（プロメガ(Promega)、マンハイム(Mannheim)）によって、細胞の全ＲＮＡ２００ｎｇを最初に逆転写した。１ＵのＨｏｔＳｔａｒＴａｑ ＤＮＡポリメラーゼ、バッファーおよびＱ−溶液（キアゲン(Qiagen)、ヒルデン（Hilden））、１．５ｍMのｄＮＴＰ類、ならびに２０ｐｍｏｌの３’−および５’−遺伝子特異的プライマーを含む２μｌのｃＤＮＡを用いて、ＰＣＲ反応を行った。９５℃での１５分間の開始段階、９４℃で３０秒、５６℃で３０秒、６８℃で１分の３７サイクル、および６８℃での５分間の最終重合段階によって、ＰＣＲ反応を行った。
参考文献
ブルーダー(Bruder) S.、フィンク(Fink) DJ.、およびカプラン(Caplan) AI (1994)。骨形成、骨修復、および骨格再生治療における間葉幹細胞(Mesenchymal stem cells in bone formation, bone repair, and skeletal regeneration therapy)。J. Cell. Biochem. 56: 284。
カプラン(Caplan), AI.、間葉幹細胞(Mesenchymal stem cells)。(1991) J. Orthop. Res. 9: 641-50。
グロンペ(Grompe), Mおよびファインゴールド(Finegold) M.J. 肝臓幹細胞(Liver Stem Cells)/ p. 455 - 497、ステムセルバイオロジー(Stem Cell Biology)より、コールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー・プレス(Cold Spring Harbor Laboratory Press)、2001。
グロンペ(Grompe)、M.およびファインゴールド(Finegold) MJ. 肝臓幹細胞(Liver stem cells) p. 455-497、ステムセルバイオロジー(Stem Cell Biology)より、コールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー・プレス(Cold Spring Harbor Laboratory Press)、2001。
ホール(Hall), C. L.; ヤン(Yang), B.; ヤン(Yang), X.; ツァン(Zhang), S.; ターレイ(Turley), M.; サムエル(Samuel), S.; ランゲ(Lange), L. A.; ワン(Wang), C.; クルペン(Curpen), G. D.; サバニ(Savani), R. C.; グリーンバーグ(Greenberg), A. H.; ターレイ(Turley), E. A. :
ヒアルロナンレセプターＲＨＡＭＭの過剰発現物は形質転換していて、Ｈ−ｒａｓ形質転換にも必要とされる(Overexpression of the hyaluronan receptor RHAMM is transforming and is also required for H-ras transformation)、セル(Cell) 82: 19-26, 1995。
イタノ(Itano), N.; キマタ(Kimata), K。ＨＡＳ蛋白質、真核生物ヒアルロナンシンターゼの発現クローニングおよび分子的特徴付け(Expression cloning and molecular characterization of HAS protein, a eukaryotic hyaluronan synthase)。J. Biol. Chem. 271: 9875-9878, 1996
ジャイスワル(Jaiswal) N、ハイネスワース(Haynesworth) SE、カプラン(Caplan) AI、ブルーダー(Bruder) SP。精製され、培養により増やされたヒト間葉幹細胞のインビトロでの骨形成分化(Osteogenic differentiation of purified, culture-expanded human mesenchymal stem cells in vitro)。J Cell Biochem. 1997 Feb;64(2):295-312。
ジョーンストーン(Johnstone) B、ヘリング(Hering) TM、カプラン(Caplan) AI、ゴールドバーグ(Goldberg) VM、ヨー(Yoo) JU。骨髄由来間葉前駆細胞のインビトロ軟骨形成(In vitro chondrogenesis of bone marrow-derived mesenchymal progenitor cells)。Exp Cell Res. 1998 Jan 10;238(1):265-72.
ニッテル(Knittel) T、コボルド(Kobold) D、ピスカグリア(Piscaglia) F、サイレ(Saile) B、ノイバウアー(Neubauer) K、メーデ(Mehde) M、ティンプル(Timpl) R、ラマドリ(Ramadori) G。正常なラット肝臓および病気のラット肝臓における肝臓筋線維母細胞および肝臓星状細胞の局在化：肝臓組織修復における（筋）線維母細胞小集団中の異なる役割(Localization of liver myofibroblasts and hepatic stellate cells in normal and diseased rat livers: distinct roles of (myo-)fibroblast subpopulations in hepatic tissue repair)。Histochem Cell Biol 1999 Nov;112(5):387-401
クリジク(Kritzik) M.R.およびサルベトニック(Sarvetnick) N。膵臓幹細胞(Pancreatic Stem Cells)、p. 499-513、ステムセルバイオロジー(Stem Cell Biology)より、コールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー・プレス(Cold Spring Harbor Laboratory Press)、2001。
マレスチ(Mareschi) K、ビアシン(Biasin) E、ピアシベロ(Piacibello) W、 アグリエッタ(Aglietta) M、マドン(Madon) E、ファジオリ(Fagioli) F。ヘマトロジカ(Haematologica) 2001 Oct;86(10):1099-100。ヒト間葉幹細胞の単離：骨髄対へその緒の臍帯血(Isolation of human mesenchymal stem cells: bone marrow versus umbilical cord blood)。
パン(Pan), T.-C.; ササキ(Sasaki), T.;ツァン(Zhang), R.-Z.; ファッスラー(Fassler), R.; ティンプル(Timpl), R.; チュー(Chu), M.-L. : 多数のＥＧＦ状繰り返しおよびカルシウム結合のためのコンセンサスモチーフによるフィブリン−２、新規細胞外マトリックス蛋白質の構造および発現(Structure and expression of fibulin-2, a novel extracellular matrix protein with multiple EGF-like repeats and consensus motifs for calcium binding)。J. Cell Biol. 123: 1269-1277, 1993。
ラミレズ−ザカリアス(Ramirez-Zacarias) JL、カストロームノズレド(Castro-Munozledo) F、クリ−ハルクヒ(Kuri-Harcuch) W。ヒストケミストリー(Histochemistry) 1992 Jul;97(6):493-7。オイルレッドＯによる細胞質内脂質の染色による脂肪転換物およびトリグリセリドの定量(Quantitation of adipose conversion and triglycerides by staining intracytoplasmic lipids with Oil red O)。
ロゼンバウム(Rosenbaum), C.、クルウエ(Kluwe), L.、マウトナー(Mautner), VF.、フリードリッヒ(Friedrich), R.E.、ミューラー(Mueller), HW.、 ハネマン(Hanemann), CO(1998):ＮＦ２シュワノマスから単離されたシュワン細胞の強化された増殖およびカリウム電気伝導性は、キニジンによって低減され得る(Enhanced proliferation and potassium conductance of Schwann cells isolated from NF2 schwannomas can be reduced by quinidine)。 Neurobiol Dis 5, 55-64。
ルングバイ(Rungby) J、カッセム(Kassem) M、エリクセン(Eriksen) EF、 ダンシャー(Danscher) G。Histochem J. 1993 Jun;25(6):446-51。カルシウム沈殿に対するフォン・カッサ反応：乳酸銀染色は、感度を増し、バックグラウンドを低減する(The von Kossa reaction for calcium deposits: silver lactate staining increases sensitivity and reduces background)。
スタンフォード(Stanford) CM、ヤコブソン(Jacobson) PA、エーネス(Eanes) ED、レンブク(Lembke) LA、ミドゥラ(Midura) RJ。J Biol Chem 1995 Apr 21;270(16):9420-8。骨芽細胞系中で迅速に形成されるアパティティックミネラル(Rapidly forming apatitic mineral in an osteoblastic cell line)(UMR 106-01 BSP)。
シャピロ(Shapiro) A.M. J.、ラケイ(Lakey) J. R.T.、リャン(Ryan) E. A.、 コルブット(Korbutt) G. S.、トス(Toth) E.、ワーノック(Warnock) G. L.、ナイテマン(Kneteman) N. M.、ラジョッテ(Rajotte) R. V。N Engl J Med 2000 Jul 27; (343):230-238。グルココルチコイドを含まない免疫抑制投薬計画を使用するタイプ１の糖尿病を有する７人の患者における島の移植(Islet Transplantation in Seven Patients with Type 1 Diabetes Mellitus Using a Glucocorticoid-Free Immunosuppressive Regimen)。
ツトロロビクス(Sztrolovics), R.; チェン(Chen), X.-N.; グローバー(Grover), J.; ラフレイ(Roughley), P. J.; コレンバーグ(Korenberg), J. R.:
ヒトのフィブロモジュリン遺伝子(FMOD)の染色体１ｑ３２への局在化およびｃＤＮＡ配列の完成(Localization of the human fibromodulin gene (FMOD) to chromosome 1q32 and completion of the cDNA sequence)。ゲノミクス(Genomics) 23: 715-717, 1994。
ツダ(Tsuda) T、ワン(Wang) H、ティンプル(Timpl) R、チュー(Chu) ML。フィブリン−２発現は、発達中の心臓弁中の形質転換された間葉細胞をマークする(Fibulin-2 expression marks transformed mesenchymal cells in developing cardiac valves, aortic arch vessels, and coronary vessels)。 Dev Dyn 2001 Sep;222(1):89-100
ファン・デル・スコート(Van der Schoot), C. E.; ヒュイジンガ(Huizinga), T. W. J.; ガッド(Gadd), S. K.; マジュディク(Majdic), O.; ウィジマンズ(Wijmans), R.; クナップ(Knapp), W.; フォン・デム・ボーン(Von dem Borne), A. E. G. : 顆粒細胞における３つの新規ＰＩ−結合蛋白質の同定(Identification of three novel PI-linked proteins on granulocytes)。In: クナッペ(Knapp), W.; ドルケン(Dorken), B.; ギルクス(Gilks), W. R.; リーバー(Rieber), E. P.; シュミット(Schmidt), R. E.; スタイン(Stein), H.; フォン・デム・ボーン(Von dem Borne), A. E. G. K. : 白血球タイピング(Leukocyte Typing) IV: 白血球分化抗原(White Cell Differentiation Antigens)。オクスフォード(Oxford): オクスフォード・ユニバーシティ・プレス(Oxford Univ. Press)(発行) 1989. Pp. 887-891
ヨー(Yoo) JU、バーテル(Barthel) TS、ニシムラ(Nishimura) K、ソルチャガ(Solchaga) L、カプラン(Caplan) AI、ゴールドバーグ(Goldberg) VM、ジョーンストーン(Johnstone) B。ヒトの骨髄由来の間葉前駆細胞の軟骨形成の可能性(The chondrogenic potential of human bone-marrow-derived mesenchymal progenitor cells)。J Bone Joint Surg Am. 1998 Dec;80(12):1745-57。
ツァン(Zhang), R.-Z.; パン(Pan), T.-C.; ツァン(Zhang), Z.-Y.; マッティ(Mattei), M.-G.; ティンプル(Timpl), R.; チュー(Chu), M.-L. :フィブリン−２(FBLN2): ヒトｃＤＮＡ配列、ｍＲＮＡ発現、ならびにヒトおよびマウスの染色体における遺伝子のマッピング(human cDNA sequence, mRNA expression, and mapping of the gene on human and mouse chromosomes)。ゲノミクス(Genomics) 22: 425-430, 1994。
ブルーダー(Bruder) S.、フィンク(Fink) DJ.、およびカプラン(Caplan) AI (1994)。骨形成、骨修復、および骨格再生治療における間葉幹細胞(Mesenchymal stem cells in bone formation, bone repair, and skeletal regeneration therapy)。J. Cell. Biochem. 56: 284。
カプラン(Caplan), AI.、間葉幹細胞(Mesenchymal stem cells)。(1991) J. Orthop. Res. 9: 641-50。
グロンペ(Grompe), Mおよびファインゴールド(Finegold) M.J. 肝臓幹細胞(Liver Stem Cells)/ p. 455 - 497、ステムセルバイオロジー(Stem Cell Biology)より、コールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー・プレス(Cold Spring Harbor Laboratory Press)、2001。
グロンペ(Grompe)、M.およびファインゴールド(Finegold) MJ. 肝臓幹細胞(Liver stem cells) p. 455-497、ステムセルバイオロジー(Stem Cell Biology)より、コールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー・プレス(Cold Spring Harbor Laboratory Press)、2001。
ホール(Hall), C. L.; ヤン(Yang), B.; ヤン(Yang), X.; ツァン(Zhang), S.; ターレイ(Turley), M.; サムエル(Samuel), S.; ランゲ(Lange), L. A.; ワン(Wang), C.; クルペン(Curpen), G. D.; サバニ(Savani), R. C.; グリーンバーグ(Greenberg), A. H.; ターレイ(Turley), E. A. :
ヒアルロナンレセプターＲＨＡＭＭの過剰発現物は形質転換していて、Ｈ−ｒａｓ形質転換にも必要とされる(Overexpression of the hyaluronan receptor RHAMM is transforming and is also required for H-ras transformation)、セル(Cell) 82: 19-26, 1995。
イタノ(Itano), N.; キマタ(Kimata), K。ＨＡＳ蛋白質、真核生物ヒアルロナンシンターゼの発現クローニングおよび分子的特徴付け(Expression cloning and molecular characterization of HAS protein, a eukaryotic hyaluronan synthase)。J. Biol. Chem. 271: 9875-9878, 1996
ジャイスワル(Jaiswal) N、ハイネスワース(Haynesworth) SE、カプラン(Caplan) AI、ブルーダー(Bruder) SP。精製され、培養により増やされたヒト間葉幹細胞のインビトロでの骨形成分化(Osteogenic differentiation of purified, culture-expanded human mesenchymal stem cells in vitro)。J Cell Biochem. 1997 Feb;64(2):295-312。
ジョーンストーン(Johnstone) B、ヘリング(Hering) TM、カプラン(Caplan) AI、ゴールドバーグ(Goldberg) VM、ヨー(Yoo) JU。骨髄由来間葉前駆細胞のインビトロ軟骨形成(In vitro chondrogenesis of bone marrow-derived mesenchymal progenitor cells)。Exp Cell Res. 1998 Jan 10;238(1):265-72.
ニッテル(Knittel) T、コボルド(Kobold) D、ピスカグリア(Piscaglia) F、サイレ(Saile) B、ノイバウアー(Neubauer) K、メーデ(Mehde) M、ティンプル(Timpl) R、ラマドリ(Ramadori) G。正常なラット肝臓および病気のラット肝臓における肝臓筋線維母細胞および肝臓星状細胞の局在化：肝臓組織修復における（筋）線維母細胞小集団中の異なる役割(Localization of liver myofibroblasts and hepatic stellate cells in normal and diseased rat livers: distinct roles of (myo-)fibroblast subpopulations in hepatic tissue repair)。Histochem Cell Biol 1999 Nov;112(5):387-401
クリジク(Kritzik) M.R.およびサルベトニック(Sarvetnick) N。膵臓幹細胞(Pancreatic Stem Cells)、p. 499-513、ステムセルバイオロジー(Stem Cell Biology)より、コールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー・プレス(Cold Spring Harbor Laboratory Press)、2001。
マレスチ(Mareschi) K、ビアシン(Biasin) E、ピアシベロ(Piacibello) W、 アグリエッタ(Aglietta) M、マドン(Madon) E、ファジオリ(Fagioli) F。ヘマトロジカ(Haematologica) 2001 Oct;86(10):1099-100。ヒト間葉幹細胞の単離：骨髄対へその緒の臍帯血(Isolation of human mesenchymal stem cells: bone marrow versus umbilical cord blood)。
パン(Pan), T.-C.; ササキ(Sasaki), T.;ツァン(Zhang), R.-Z.; ファッスラー(Fassler), R.; ティンプル(Timpl), R.; チュー(Chu), M.-L. : 多数のＥＧＦ状繰り返しおよびカルシウム結合のためのコンセンサスモチーフによるフィブリン−２、新規細胞外マトリックス蛋白質の構造および発現(Structure and expression of fibulin-2, a novel extracellular matrix protein with multiple EGF-like repeats and consensus motifs for calcium binding)。J. Cell Biol. 123: 1269-1277, 1993。
ラミレズ−ザカリアス(Ramirez-Zacarias) JL、カストロームノズレド(Castro-Munozledo) F、クリ−ハルクヒ(Kuri-Harcuch) W。ヒストケミストリー(Histochemistry) 1992 Jul;97(6):493-7。オイルレッドＯによる細胞質内脂質の染色による脂肪転換物およびトリグリセリドの定量(Quantitation of adipose conversion and triglycerides by staining intracytoplasmic lipids with Oil red O)。
ロゼンバウム(Rosenbaum), C.、クルウエ(Kluwe), L.、マウトナー(Mautner), VF.、フリードリッヒ(Friedrich), R.E.、ミューラー(Mueller), HW.、 ハネマン(Hanemann), CO(1998):ＮＦ２シュワノマスから単離されたシュワン細胞の強化された増殖およびカリウム電気伝導性は、キニジンによって低減され得る(Enhanced proliferation and potassium conductance of Schwann cells isolated from NF2 schwannomas can be reduced by quinidine)。 Neurobiol Dis 5, 55-64。
ルングバイ(Rungby) J、カッセム(Kassem) M、エリクセン(Eriksen) EF、 ダンシャー(Danscher) G。Histochem J. 1993 Jun;25(6):446-51。カルシウム沈殿に対するフォン・カッサ反応：乳酸銀染色は、感度を増し、バックグラウンドを低減する(The von Kossa reaction for calcium deposits: silver lactate staining increases sensitivity and reduces background)。
スタンフォード(Stanford) CM、ヤコブソン(Jacobson) PA、エーネス(Eanes) ED、レンブク(Lembke) LA、ミドゥラ(Midura) RJ。J Biol Chem 1995 Apr 21;270(16):9420-8。骨芽細胞系中で迅速に形成されるアパティティックミネラル(Rapidly forming apatitic mineral in an osteoblastic cell line)(UMR 106-01 BSP)。
シャピロ(Shapiro) A.M. J.、ラケイ(Lakey) J. R.T.、リャン(Ryan) E. A.、 コルブット(Korbutt) G. S.、トス(Toth) E.、ワーノック(Warnock) G. L.、ナイテマン(Kneteman) N. M.、ラジョッテ(Rajotte) R. V。N Engl J Med 2000 Jul 27; (343):230-238。グルココルチコイドを含まない免疫抑制投薬計画を使用するタイプ１の糖尿病を有する７人の患者における島の移植(Islet Transplantation in Seven Patients with Type 1 Diabetes Mellitus Using a Glucocorticoid-Free Immunosuppressive Regimen)。
ツトロロビクス(Sztrolovics), R.; チェン(Chen), X.-N.; グローバー(Grover), J.; ラフレイ(Roughley), P. J.; コレンバーグ(Korenberg), J. R.:
ヒトのフィブロモジュリン遺伝子(FMOD)の染色体１ｑ３２への局在化およびｃＤＮＡ配列の完成(Localization of the human fibromodulin gene (FMOD) to chromosome 1q32 and completion of the cDNA sequence)。ゲノミクス(Genomics) 23: 715-717, 1994。
ツダ(Tsuda) T、ワン(Wang) H、ティンプル(Timpl) R、チュー(Chu) ML。フィブリン−２発現は、発達中の心臓弁中の形質転換された間葉細胞をマークする(Fibulin-2 expression marks transformed mesenchymal cells in developing cardiac valves, aortic arch vessels, and coronary vessels)。 Dev Dyn 2001 Sep;222(1):89-100
ファン・デル・スコート(Van der Schoot), C. E.; ヒュイジンガ(Huizinga), T. W. J.; ガッド(Gadd), S. K.; マジュディク(Majdic), O.; ウィジマンズ(Wijmans), R.; クナップ(Knapp), W.; フォン・デム・ボーン(Von dem Borne), A. E. G. : 顆粒細胞における３つの新規ＰＩ−結合蛋白質の同定(Identification of three novel PI-linked proteins on granulocytes)。In: クナッペ(Knapp), W.; ドルケン(Dorken), B.; ギルクス(Gilks), W. R.; リーバー(Rieber), E. P.; シュミット(Schmidt), R. E.; スタイン(Stein), H.; フォン・デム・ボーン(Von dem Borne), A. E. G. K. : 白血球タイピング(Leukocyte Typing) IV: 白血球分化抗原(White Cell Differentiation Antigens)。オクスフォード(Oxford): オクスフォード・ユニバーシティ・プレス(Oxford Univ. Press)(発行) 1989. Pp. 887-891
ヨー(Yoo) JU、バーテル(Barthel) TS、ニシムラ(Nishimura) K、ソルチャガ(Solchaga) L、カプラン(Caplan) AI、ゴールドバーグ(Goldberg) VM、ジョーンストーン(Johnstone) B。ヒトの骨髄由来の間葉前駆細胞の軟骨形成の可能性(The chondrogenic potential of human bone-marrow-derived mesenchymal progenitor cells)。J Bone Joint Surg Am. 1998 Dec;80(12):1745-57。
ツァン(Zhang), R.-Z.; パン(Pan), T.-C.; ツァン(Zhang), Z.-Y.; マッティ(Mattei), M.-G.; ティンプル(Timpl), R.; チュー(Chu), M.-L. :フィブリン−２(FBLN2): ヒトｃＤＮＡ配列、ｍＲＮＡ発現、ならびにヒトおよびマウスの染色体における遺伝子のマッピング(human cDNA sequence, mRNA expression, and mapping of the gene on human and mouse chromosomes)。ゲノミクス(Genomics) 22: 425-430, 1994。
略語
ＤＡＧ デキサメタゾン、アスコルビン酸、およびβ−グリセロホスフェートを含む骨形成分化培地
ＨＬＡ ヒト白血球抗原
ＭＳＣ 間葉幹細胞
ＰＥＩ ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＥＧＦおよびＩＧＦを含む培地
ＳＳＥＡ４ 段階に特異的な初期抗原４
ＵＳＳＣ 非制限体幹細胞
ＰＧ プロテオグリカン
ＤＡＧ デキサメタゾン、アスコルビン酸、およびβ−グリセロホスフェートを含む骨形成分化培地
ＨＬＡ ヒト白血球抗原
ＭＳＣ 間葉幹細胞
ＰＥＩ ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＥＧＦおよびＩＧＦを含む培地
ＳＳＥＡ４ 段階に特異的な初期抗原４
ＵＳＳＣ 非制限体幹細胞
ＰＧ プロテオグリカン
Claims (3)
- 心筋疾患の治療における使用のための薬剤であって、下記（ｉ）〜（ｉｖ）の性質を有する非制限体幹細胞（ＵＳＳＣｓ）を含む前記薬剤。
（ｉ）ＣＤ４５およびＣＤ１４表面抗原に対して陰性であり；
（ｉｉ）ＣＤ１３、ＣＤ２９、ＣＤ４４およびＣＤ４９ｅ抗原に対して陽性であり；
（ｉｉｉ）ＹＢ１、ＡＭＬ−１、ＲＵＮＸ−１、およびフィブリン−２を発現し；および
（ｉｖ）ヒアルロナンシンターゼ、フィブロモジュリン、および１ＮＦＬＳを発現しない。 - 前記薬剤が前記非制限体幹細胞をインビトロで分化せしめた子孫をさらに含む請求項１の薬剤。
- 非制限体幹細胞が、へその緒の臍帯血または胎盤血から単離されたものである請求項１または２項に記載の薬剤。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US24516800P | 2000-11-03 | 2000-11-03 | |
| US60/245,168 | 2000-11-03 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2002539497A Division JP4799804B2 (ja) | 2000-11-03 | 2001-11-03 | ヒト臍帯血由来の非制限体幹細胞（ｕｓｓｃ） |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2008179642A JP2008179642A (ja) | 2008-08-07 |
| JP4805960B2 true JP4805960B2 (ja) | 2011-11-02 |
Family
ID=22925565
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2002539497A Expired - Lifetime JP4799804B2 (ja) | 2000-11-03 | 2001-11-03 | ヒト臍帯血由来の非制限体幹細胞（ｕｓｓｃ） |
| JP2008016859A Expired - Lifetime JP4805960B2 (ja) | 2000-11-03 | 2008-01-28 | ヒト臍帯血由来の非制限体幹細胞（ｕｓｓｃ） |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2002539497A Expired - Lifetime JP4799804B2 (ja) | 2000-11-03 | 2001-11-03 | ヒト臍帯血由来の非制限体幹細胞（ｕｓｓｃ） |
Country Status (24)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US7560280B2 (ja) |
| EP (1) | EP1404815B1 (ja) |
| JP (2) | JP4799804B2 (ja) |
| CN (1) | CN100480375C (ja) |
| AT (1) | ATE340255T1 (ja) |
| AU (2) | AU2953302A (ja) |
| BG (1) | BG107770A (ja) |
| CA (1) | CA2426987C (ja) |
| CY (1) | CY1106287T1 (ja) |
| CZ (1) | CZ20031165A3 (ja) |
| DE (1) | DE60123293T2 (ja) |
| DK (1) | DK1404815T3 (ja) |
| EA (1) | EA008619B1 (ja) |
| EE (1) | EE200300205A (ja) |
| ES (1) | ES2272563T3 (ja) |
| HU (1) | HUP0301600A3 (ja) |
| IL (2) | IL155608A0 (ja) |
| MX (1) | MXPA03003844A (ja) |
| NO (1) | NO20031999L (ja) |
| PL (1) | PL362293A1 (ja) |
| PT (1) | PT1404815E (ja) |
| SK (1) | SK5242003A3 (ja) |
| UA (1) | UA81390C2 (ja) |
| WO (1) | WO2002036751A2 (ja) |
Families Citing this family (103)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU766826B2 (en) * | 1998-07-30 | 2003-10-23 | Government of The United States of America, as represented by The Secretary Department of Health & Human Services, The National Institutes of Health, The | Thymosin beta4 promotes wound repair |
| US7927587B2 (en) * | 1999-08-05 | 2011-04-19 | Regents Of The University Of Minnesota | MAPC administration for the treatment of lysosomal storage disorders |
| US8609412B2 (en) * | 1999-08-05 | 2013-12-17 | Regents Of The University Of Minnesota | Mapc generation of lung tissue |
| US8252280B1 (en) | 1999-08-05 | 2012-08-28 | Regents Of The University Of Minnesota | MAPC generation of muscle |
| US10638734B2 (en) | 2004-01-05 | 2020-05-05 | Abt Holding Company | Multipotent adult stem cells, sources thereof, methods of obtaining and maintaining same, methods of differentiation thereof, methods of use thereof and cells derived thereof |
| CA2381292C (en) * | 1999-08-05 | 2016-05-24 | Mcl Llc | Multipotent adult stem cells and methods for isolation |
| US7015037B1 (en) | 1999-08-05 | 2006-03-21 | Regents Of The University Of Minnesota | Multiponent adult stem cells and methods for isolation |
| US8075881B2 (en) | 1999-08-05 | 2011-12-13 | Regents Of The University Of Minnesota | Use of multipotent adult stem cells in treatment of myocardial infarction and congestive heart failure |
| EP1491093B1 (en) | 2001-02-14 | 2013-07-31 | ABT Holding Company | Multipotent adult stem cells, sources thereof, methods of obtaining and maintaining same, methods of differentiation thereof, methods of use thereof and cells derived thereof |
| WO2003020215A2 (en) * | 2001-08-29 | 2003-03-13 | Regenerx Biopharmaceuticals, Inc. | Methods of treating mycocardial event related coditions with thymosin beta 4 |
| DE10144326B4 (de) * | 2001-09-10 | 2005-09-22 | Siemens Ag | Verfahren und System zur Überwachung eines Reifenluftdrucks |
| DE10158680B4 (de) * | 2001-11-30 | 2004-04-08 | Universitätsklinikum Hamburg-Eppendorf | Verfahren zur ex vivo-Expansion und -Differenzierung von multipotenten Stammzellen |
| CA2473749C (en) * | 2002-01-23 | 2012-05-22 | University Of Utah Research Foundation | Pure populations of astrocyte restricted precursor cells and methods for isolation and use thereof |
| ES2287447T3 (es) * | 2002-02-19 | 2007-12-16 | Medipost, Co., Ltd. | Metodos de aislamiento y expansion del cultivo de celulas troncales/madre mesenquimatosas a partir de sangre del cordon umbilical, y metodo de diferenciacion de celulas troncales/madre mesenquimatosas derivadas de sangre del cordon umbilical en diversos tejidos mesenquimatosos. |
| KR101042448B1 (ko) | 2002-11-26 | 2011-06-16 | 안트로제네시스 코포레이션 | 세포요법제, 세포요법제 단위 및 이를 이용한 치료방법 |
| WO2004050859A2 (en) | 2002-11-27 | 2004-06-17 | Regents Of The University Of Minnesota | Homologous recombination in multipotent adult progenitor cells |
| CA2547899C (en) * | 2002-12-05 | 2014-04-15 | Case Western Reserve University | Cell-based therapies for ischemia |
| US7470538B2 (en) * | 2002-12-05 | 2008-12-30 | Case Western Reserve University | Cell-based therapies for ischemia |
| JP3762975B2 (ja) * | 2003-03-18 | 2006-04-05 | 学校法人慶應義塾 | 単球由来多能性細胞ｍｏｍｃ |
| US20040203142A1 (en) * | 2003-04-14 | 2004-10-14 | Reliance Life Sciences Pvt. Ltd. | Growth of neural precursor cells using umbilical cord blood serum and a process for the preparation thereof for therapeutic purposes |
| US8790637B2 (en) | 2003-06-27 | 2014-07-29 | DePuy Synthes Products, LLC | Repair and regeneration of ocular tissue using postpartum-derived cells |
| ES2564044T3 (es) | 2003-06-27 | 2016-03-17 | DePuy Synthes Products, Inc. | Células posparto derivadas de tejido del cordón umbilical y métodos de preparación y uso de las mismas |
| AU2003304250A1 (en) | 2003-06-27 | 2005-01-13 | Universite Laval | Method of isolating cells from umbilical cord |
| ATE494777T1 (de) * | 2003-10-09 | 2011-01-15 | Core Dynamics Ltd | Verfahren zum tiefgefrieren, auftauen und transplantieren von lebensfähigem knorpel |
| JP2007513188A (ja) | 2003-12-04 | 2007-05-24 | リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ ミネソタ | リソソーム蓄積症の処置のための組成物および方法 |
| JP2007520462A (ja) * | 2003-12-19 | 2007-07-26 | バイアセル インコーポレーティッド | ヒト臍帯血由来多能性細胞の疾患の処置のための使用方法 |
| GB0329449D0 (en) * | 2003-12-19 | 2004-01-28 | Omnicyte Ltd | Stem cells |
| EP1544290A1 (en) * | 2003-12-19 | 2005-06-22 | Yu-Show Fu | A cell system for generating somatic cells |
| JP4777908B2 (ja) * | 2004-02-02 | 2011-09-21 | コア・ダイナミクス・リミテッド | 生物学的材料ならびに生物学的材料の保存のための方法および溶液 |
| EP1711214A1 (en) * | 2004-02-02 | 2006-10-18 | Interface Multigrad Technology (IMT) Ltd. | Device for directional cooling of biological matter |
| CA2556018A1 (en) * | 2004-02-11 | 2005-09-09 | Aldagen, Inc. | Stem cell populations and methods of use |
| CN101080486B (zh) * | 2004-04-23 | 2012-05-16 | 佰欧益股份有限公司 | 多谱系祖细胞 |
| US7622108B2 (en) | 2004-04-23 | 2009-11-24 | Bioe, Inc. | Multi-lineage progenitor cells |
| US20070298015A1 (en) * | 2004-04-28 | 2007-12-27 | Viacell, Inc. | Treatment of Muscular Dystrophy with Mobilized Peripheral Blood Pluripotent Cells |
| WO2005113749A2 (en) * | 2004-05-14 | 2005-12-01 | Becton, Dickinson And Company | Stem cell populations and methods of use |
| ATE460947T1 (de) * | 2004-06-07 | 2010-04-15 | Core Dynamics Ltd | Verfahren zur sterilisation von biologischen präparaten |
| US8037696B2 (en) * | 2004-08-12 | 2011-10-18 | Core Dynamics Limited | Method and apparatus for freezing or thawing of a biological material |
| US9056093B2 (en) | 2005-01-07 | 2015-06-16 | Wake Forest University Health Sciences | Regeneration of pancreatic islets by amniotic fluid stem cell therapy |
| EP1859028B1 (en) * | 2005-02-10 | 2015-12-02 | Regents Of The University Of Minnesota | Vascular endothelial cells |
| EP1850661A2 (en) * | 2005-02-22 | 2007-11-07 | Interface Multigrad Technology (IMT) Ltd. | Preserved viable cartilage, method for its preservation, and system and devices used therefor |
| CN101575590B (zh) * | 2005-02-28 | 2012-05-23 | 中国医学科学院血液学研究所泰达生命科学技术研究中心 | 人脐带间充质干细胞的制备方法 |
| US20100034793A1 (en) * | 2005-04-19 | 2010-02-11 | The John Hopkins University | Method of using stroma cells from cord blood to expand and engraft nucleated cells from cord blood |
| US20080317740A1 (en) * | 2005-05-05 | 2008-12-25 | Bruce Blazar | Use of Nk Cell Inhibition to Facilitate Persistence of Engrafted Mhc-I-Negative Cells |
| WO2006121454A2 (en) * | 2005-05-05 | 2006-11-16 | Regents Of The University Of Minnesota | Use of mapc or progeny therefrom to populate lymphohematopoietic tissues |
| JP2008545703A (ja) * | 2005-05-27 | 2008-12-18 | バイアセル インコーポレーティッド | 幹細胞を用いた虚血の処置 |
| US20080194024A1 (en) * | 2005-07-29 | 2008-08-14 | Mays Robert W | Culture of Non-Embryonic Cells at High Cell Density |
| US8198085B2 (en) * | 2005-08-03 | 2012-06-12 | Core Dynamics Limited | Somatic cells for use in cell therapy |
| DE602005017812D1 (de) * | 2005-08-26 | 2009-12-31 | Seoul Nat Univ Ind Foundation | Multipotente blutstammzellen aus der nabelschnur und zellbehandlungsmittel damit zur behandlung der ischämischen krankheit |
| EP1941032A2 (en) | 2005-10-14 | 2008-07-09 | Regents Of The University Of Minnesota | Differentiation of non-embryonic stem cells to cells having a pancreatic phenotype |
| CN101374946B (zh) | 2005-12-16 | 2017-07-18 | 伊西康公司 | 用于在组织相容性不匹配的移植中抑制有害的免疫反应的组合物和方法 |
| US9125906B2 (en) | 2005-12-28 | 2015-09-08 | DePuy Synthes Products, Inc. | Treatment of peripheral vascular disease using umbilical cord tissue-derived cells |
| ES2708933T3 (es) | 2005-12-29 | 2019-04-12 | Celularity Inc | Poblaciones de células madre placentarias |
| CA2646491A1 (en) | 2006-04-17 | 2007-10-25 | Bioe, Inc. | Differentiation of multi-lineage progenitor cells to respiratory epithelial cells |
| US7875453B2 (en) * | 2006-06-14 | 2011-01-25 | Bioe Llc | Differentiation of multi-lineage progenitor cells to hepatocytes |
| ES2524443T3 (es) * | 2006-11-13 | 2014-12-09 | DePuy Synthes Products, LLC | Expansión in vitro de células postparto usando microportadores |
| WO2008085229A2 (en) * | 2006-11-15 | 2008-07-17 | Arteriocyte Inc. | Cell-based therapies for treating liver disease |
| WO2008063675A2 (en) * | 2006-11-24 | 2008-05-29 | Regents Of The University Of Minnesota | Endodermal progenitor cells |
| US9387226B2 (en) | 2006-11-30 | 2016-07-12 | Medipost Co., Ltd | Neural cell proliferation induced through the culture of neural cells with umbilical cord blood-derived mesenchymal stem cells |
| EP2192908A4 (en) * | 2007-07-25 | 2010-09-01 | Bioe Inc | DIFFERENTIATION OF PRECURSOR CELLS OF MULTIPLE ABSTRACTS AGAINST CHONDROCYTES |
| AU2008319284A1 (en) * | 2007-10-31 | 2009-05-07 | Cryo-Cell International, Inc. | Methods for co-culturing cord blood derived cells with menstrual stem cells |
| US20120156134A1 (en) | 2007-12-20 | 2012-06-21 | Shayne Squires | Compositions and methods for detecting or eliminating senescent cells to diagnose or treat disease |
| WO2009092092A1 (en) | 2008-01-18 | 2009-07-23 | Regents Of The University Of Minnesota | Stem cell aggregates and methods for making and using |
| US20090202978A1 (en) * | 2008-02-13 | 2009-08-13 | Ginadi Shaham | Method and apparatus for freezing of a biological material |
| US20090233993A1 (en) * | 2008-03-06 | 2009-09-17 | Burnham Institute For Medical Research | Compositions and methods for inhibiting gsk3 activity and uses thereof |
| CN101543644B (zh) * | 2008-03-27 | 2012-07-25 | 中国人民解放军总医院 | 无支架工程软骨组织的构建方法及其产品 |
| US20090291494A1 (en) * | 2008-05-21 | 2009-11-26 | Bioe, Inc. | Differentiation of Multi-Lineage Progenitor Cells to Pancreatic Cells |
| HRP20130812T1 (en) | 2008-08-22 | 2013-09-30 | Anthrogenesis Corporation | Methods and compositions for treatment of bone defects with placental cell populations |
| US8822647B2 (en) | 2008-08-26 | 2014-09-02 | City Of Hope | Method and compositions using a chimeric antigen receptor for enhanced anti-tumor effector functioning of T cells |
| GB0818725D0 (en) | 2008-10-13 | 2008-11-19 | Habib Nagy A | Pharmaceutical composition |
| EP2182055A1 (en) | 2008-10-14 | 2010-05-05 | Heinrich-Heine-Universität Düsseldorf | Human cord blood derived unrestricted somatic stem cells (USSC) |
| US9057051B2 (en) | 2008-10-31 | 2015-06-16 | Katholieke Universiteit Leuven | Optimized methods for differentiation of cells into cells with hepatocyte progenitor phenotypes, cells produced by the methods, and methods of using the cells |
| KR20100054711A (ko) | 2008-11-14 | 2010-05-25 | 메디포스트(주) | 간엽 줄기세포 또는 이의 배양액을 포함하는 신경질환의 예방 또는 치료용 조성물 |
| US10179900B2 (en) | 2008-12-19 | 2019-01-15 | DePuy Synthes Products, Inc. | Conditioned media and methods of making a conditioned media |
| EP2456853B1 (en) | 2009-07-21 | 2020-10-28 | ABT Holding Company | Use of stem cells to reduce leukocyte extravasation |
| US20110020292A1 (en) * | 2009-07-21 | 2011-01-27 | Abt Holding Company | Use of Stem Cells to Reduce Leukocyte Extravasation |
| US9081008B2 (en) | 2009-12-04 | 2015-07-14 | James Sherley | Detecting and counting tissue—specific stem cells and uses thereof |
| WO2011069091A1 (en) | 2009-12-04 | 2011-06-09 | Boston Biomedical Research Institute, Inc. | Method for cloning pluripotent stem cells |
| SG183497A1 (en) | 2010-02-25 | 2012-09-27 | Abt Holding Co | Modulation of macrophage activation |
| WO2011106476A1 (en) * | 2010-02-25 | 2011-09-01 | Abt Holding Company | Modulation of microglia activation |
| US20110206647A1 (en) * | 2010-02-25 | 2011-08-25 | Abt Holding Company | Modulation of Angiogenesis |
| MX2012011543A (es) | 2010-04-08 | 2013-05-06 | Anthrogenesis Corp | Tratamiento de sarcoidosis empleando celulas madre placentarias. |
| DK2568991T6 (en) | 2010-05-12 | 2019-03-18 | Abt Holding Co | MODULATION OF SPLENOCYTES IN CELL THERAPY |
| WO2011158125A2 (en) | 2010-06-17 | 2011-12-22 | Katholieke Universiteit Leuven | Methods for differentiating cells into hepatic stellate cells and hepatic sinusoidal endothelial cells, cells produced by the methods, and methods for using the cells |
| CN103168236B (zh) | 2010-08-23 | 2016-01-20 | 哈佛大学管理委员会 | 用于膜电位测定的光遗传学探针 |
| SG10201914007YA (en) | 2010-08-24 | 2020-03-30 | Univ Minnesota | Non-static suspension culture of cell aggregates |
| US8895291B2 (en) | 2010-10-08 | 2014-11-25 | Terumo Bct, Inc. | Methods and systems of growing and harvesting cells in a hollow fiber bioreactor system with control conditions |
| AU2011352036A1 (en) | 2010-12-31 | 2013-07-18 | Anthrogenesis Corporation | Enhancement of placental stem cell potency using modulatory RNA molecules |
| EP2697360A1 (en) * | 2011-04-11 | 2014-02-19 | Jaffar Ali Bin M. Abdullah | Protein-free culture media products |
| CN102776150A (zh) * | 2011-05-13 | 2012-11-14 | 上海交通大学医学院附属第九人民医院 | 一种诱导脐带间充质干细胞分化为内皮细胞的方法 |
| CN104220081A (zh) | 2011-06-01 | 2014-12-17 | 人类起源公司 | 利用胎盘干细胞治疗疼痛 |
| WO2012168295A1 (en) | 2011-06-06 | 2012-12-13 | ReGenesys BVBA | Expansion of stem cells in hollow fiber bioreactors |
| GB201119335D0 (en) | 2011-11-09 | 2011-12-21 | Univ Leuven Kath | Hepatitis virus infectable stem cells |
| PT2983680T (pt) | 2013-04-12 | 2020-10-29 | Abt Holding Co | Melhoria de órgãos para transplante |
| ES2753323T3 (es) | 2013-04-30 | 2020-04-08 | Univ Leuven Kath | Terapia celular para síndromes mielodisplásicos |
| JP6612227B2 (ja) | 2013-11-16 | 2019-11-27 | テルモ ビーシーティー、インコーポレーテッド | バイオリアクターにおける細胞増殖 |
| EP2952578A1 (de) | 2014-06-03 | 2015-12-09 | Peter Wernet | Epigenetische Reprogrammierung von fötalen Stammzellen |
| EP3587446A1 (en) | 2014-09-19 | 2020-01-01 | City of Hope | Costimulatory chimeric antigen receptor t cells targeting il13 r alpha 2 |
| TW201613622A (en) * | 2014-10-14 | 2016-04-16 | Bionet Corp | Composition for skincare and pharmaceutical composition and preparation method thereof |
| US10967006B2 (en) | 2016-01-21 | 2021-04-06 | Abt Holding Company | Stem cells for wound healing |
| CN106377547B (zh) * | 2016-09-30 | 2019-05-31 | 孔五一 | 脐带血再生粒子的提取方法及其用途 |
| WO2021226373A2 (en) | 2020-05-08 | 2021-11-11 | Gallant Pet, Inc. | Uterine-derived regenerative cell compositions and uses thereof |
| CN113637633B (zh) * | 2021-08-16 | 2023-11-03 | 浙江大学 | 一种促进间充质干细胞向成骨细胞分化的方法 |
| US20240400622A1 (en) | 2021-09-23 | 2024-12-05 | President And Fellows Of Harvard College | Genetically encoded voltage indicators and uses thereof |
Family Cites Families (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3639949A1 (de) * | 1986-11-22 | 1988-06-09 | Diagen Inst Molekularbio | Verfahren zur trennung von langkettigen nukleinsaeuren |
| US5192553A (en) * | 1987-11-12 | 1993-03-09 | Biocyte Corporation | Isolation and preservation of fetal and neonatal hematopoietic stem and progenitor cells of the blood and methods of therapeutic use |
| US5486359A (en) * | 1990-11-16 | 1996-01-23 | Osiris Therapeutics, Inc. | Human mesenchymal stem cells |
| US5851832A (en) * | 1991-07-08 | 1998-12-22 | Neurospheres, Ltd. | In vitro growth and proliferation of multipotent neural stem cells and their progeny |
| US5672346A (en) * | 1992-07-27 | 1997-09-30 | Indiana University Foundation | Human stem cell compositions and methods |
| US6482231B1 (en) * | 1995-11-20 | 2002-11-19 | Giovanni Abatangelo | Biological material for the repair of connective tissue defects comprising mesenchymal stem cells and hyaluronic acid derivative |
| US5842477A (en) * | 1996-02-21 | 1998-12-01 | Advanced Tissue Sciences, Inc. | Method for repairing cartilage |
| WO1997039104A1 (en) * | 1996-04-17 | 1997-10-23 | Osiris Therapeutics, Inc. | Cryopreservation and extensive subculturing of human mesenchymal stem cells |
| US5843633A (en) * | 1996-04-26 | 1998-12-01 | Amcell Corporation | Characterization of a human hematopoietic progenitor cell antigen |
| JPH10295369A (ja) | 1997-02-26 | 1998-11-10 | Japan Tobacco Inc | 造血幹細胞の製造方法 |
| JPH10306027A (ja) | 1997-03-07 | 1998-11-17 | Otsuka Pharmaceut Co Ltd | 免疫寛容誘導剤 |
| ATE307195T1 (de) * | 1997-07-14 | 2005-11-15 | Osiris Therapeutics Inc | Herzmuskelregenerierung unter verwendung mesenchymaler stammzellen |
| DE19833476B4 (de) | 1998-07-24 | 2005-08-25 | Huss, Ralf, Dr. | Genetisch modifizierte CD34-Negative, adhärent wachsende hämatopoetische Stammzellen und deren Verwendung in der Gentherapie |
| JP2003521474A (ja) | 1999-04-27 | 2003-07-15 | レイトン バイオサイエンス インコーポレイテッド | 慢性発作のための細胞療法 |
| US20020142457A1 (en) * | 1999-12-28 | 2002-10-03 | Akihiro Umezawa | Cell having the potentiality of differentiation into cardiomyocytes |
| ES2287447T3 (es) * | 2002-02-19 | 2007-12-16 | Medipost, Co., Ltd. | Metodos de aislamiento y expansion del cultivo de celulas troncales/madre mesenquimatosas a partir de sangre del cordon umbilical, y metodo de diferenciacion de celulas troncales/madre mesenquimatosas derivadas de sangre del cordon umbilical en diversos tejidos mesenquimatosos. |
| US20040197310A1 (en) * | 2003-02-12 | 2004-10-07 | Sanberg Paul R. | Compositions and methods for using umbilical cord progenitor cells in the treatment of myocardial infarction |
-
2001
- 2001-11-02 US US09/985,335 patent/US7560280B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-11-03 AU AU2953302A patent/AU2953302A/xx active Pending
- 2001-11-03 DE DE60123293T patent/DE60123293T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-11-03 UA UA2003044039A patent/UA81390C2/xx unknown
- 2001-11-03 HU HU0301600A patent/HUP0301600A3/hu unknown
- 2001-11-03 ES ES01990388T patent/ES2272563T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-11-03 EE EEP200300205A patent/EE200300205A/xx unknown
- 2001-11-03 CA CA2426987A patent/CA2426987C/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-11-03 CN CNB018217028A patent/CN100480375C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2001-11-03 MX MXPA03003844A patent/MXPA03003844A/es active IP Right Grant
- 2001-11-03 PT PT01990388T patent/PT1404815E/pt unknown
- 2001-11-03 PL PL36229301A patent/PL362293A1/xx unknown
- 2001-11-03 JP JP2002539497A patent/JP4799804B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2001-11-03 EA EA200300536A patent/EA008619B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2001-11-03 CZ CZ20031165A patent/CZ20031165A3/cs unknown
- 2001-11-03 WO PCT/EP2001/012768 patent/WO2002036751A2/en not_active Ceased
- 2001-11-03 SK SK524-2003A patent/SK5242003A3/sk not_active Application Discontinuation
- 2001-11-03 DK DK01990388T patent/DK1404815T3/da active
- 2001-11-03 EP EP01990388A patent/EP1404815B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-11-03 IL IL15560801A patent/IL155608A0/xx unknown
- 2001-11-03 AT AT01990388T patent/ATE340255T1/de active
- 2001-11-03 AU AU2002229533A patent/AU2002229533B2/en not_active Expired
-
2003
- 2003-04-28 IL IL155608A patent/IL155608A/en not_active IP Right Cessation
- 2003-04-30 BG BG107770A patent/BG107770A/bg unknown
- 2003-05-02 NO NO20031999A patent/NO20031999L/no not_active Application Discontinuation
-
2004
- 2004-01-15 US US10/758,644 patent/US7556801B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2006
- 2006-12-11 CY CY20061101781T patent/CY1106287T1/el unknown
-
2008
- 2008-01-28 JP JP2008016859A patent/JP4805960B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
2009
- 2009-04-02 US US12/417,294 patent/US20090238803A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP4799804B2 (ja) | ヒト臍帯血由来の非制限体幹細胞（ｕｓｓｃ） | |
| AU2002229533A1 (en) | Human cord blood derived unrestricted somatic stem cells (ussc) | |
| Lodie et al. | Systematic analysis of reportedly distinct populations of multipotent bone marrow-derived stem cells reveals a lack of distinction | |
| EP3107995B1 (en) | Biophysically sorted osteoprogenitors from culture expanded bone marrow derived mesenchymal stromal cells (mscs) | |
| ES2328460T3 (es) | Poblaciones de celulas progenitoras, expansion de las mismas y crecimiento de tipos de celulas no hematopoyeticas y tejidos provenientes de las mismas. | |
| US20070243172A1 (en) | Multipotent stem cells derived from placenta tissue and cellular therapeutic agents comprising the same | |
| US20100267107A1 (en) | Methods for isolating very small embryonic-like (vsel) stem cells | |
| US20120021482A1 (en) | Methods for isolating very small embryonic-like (vsel) stem cells | |
| US20110189136A1 (en) | Uses and isolation of very small embryonic-like (vsel) stem cells | |
| Cetrulo et al. | Perinatal stem cells | |
| Calavul et al. | The role of stem cell in plastic reconstructive and aesthetic surgery | |
| Lewis | Development of a three-dimensional haematopoietic stem cell-permissive bone marrow niche model using magnetic levitation | |
| Sim et al. | Differential Potential of Stem Cells Following Their Origin-Subacromial Bursa, Bone Marrow, Umbilical Cord Blood-. | |
| Bakhsh | Characterization and functional analysis of adipose-derived stromal vascular fraction in osteogenesis imperfecta pediatric patients | |
| HK1071771B (en) | Human cord blood derived unrestricted somatic stem cells (ussc) | |
| Kanthi | Simulation of the bone marrow microenvironment | |
| DIFFERENTIATE et al. | Final accepted version | |
| Lindroos | Characterization and optimization of in vitro culture conditions of adult stem cells for clinical cell therapy | |
| Foroni | Resident angiogenic mesenchymal stem cells from multiorgan donor thoracic aortas | |
| Gomes | Differentiation of Human Mesenchymal Stem/Stromal Cells into Myogenic Cells for Urethral Sphincter Muscle Engineering | |
| Valente | Vascular wall stem cells. Selection and conditioning of progenitors useful for cell therapy. A pathological case study | |
| Malagola | Isolation and characterization of mesenchymal stromal cells from the canine liver |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20101214 |
|
| A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20110311 |
|
| A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20110316 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20110614 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20110726 |
|
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20110811 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 4805960 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20140819 Year of fee payment: 3 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |