JP4989628B2 - グリコヘモグロビン濃度測定方法および濃度測定装置 - Google Patents

Description

本発明は、血液などの試料に含まれるグリコヘモグロビンの濃度を測定する方法に関する。

血液などの生体試料を用いて生体成分を分離分析する場合には、高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）を利用した高速液体クロマトグラフィ装置（ＨＰＬＣ装置）が広く用いられている（たとえば特許文献１参照）。

図１０に示したように、一般的なＨＰＬＣ装置９は、試料調製ユニット９０において生体成分を含んだ試料を調製した後にその試料を分析カラム９１に導入させ、生体成分を分析カラム９１の充填剤に吸着させるように構成されている。試料として全血を用いてグルコヘモグロビンを測定する場合には、分析カラム９１に対しては、全血から採取した赤血球を溶血させた後に、溶血液を希釈した状態の生体試料が導入される。その一方で、充填剤に吸着させた生体成分は、送液ポンプ９２によって溶離液ボトル９３から分析カラム９１に溶離液を供給することによって溶離させられる。分析カラム９１からの溶離液は、測光機構９４に導入され、この測光機構９４において溶離液の吸光度を連続的に測定することにより、生体成分の分析が行なわれる。

図１１に示したように、測光機構９４は、溶離液が測光セル９５の流路９６を流通する間に光源９７からの光を照射し、そのときの透過光を受光部９８において受光するものである。受光部９８において受光させる光の波長は、干渉フィルタ９９において選択される一方で、受光部９８からは受光量に応じた出力レベルの信号が出力される。

ＨＰＬＣ装置９ではさらに、吸光度の経時的変化であるクロマトグラムに基づいて、ヘモグロビン総量を演算するとともに、このヘモグロビン総量におけるグリコヘモグロビンが占める割合としてグリコヘモグロビン濃度が演算される。

しかしながら、溶離液への酸素などの気体の溶解量は、溶離液の温度によって異なるため、装置外部の温度（環境温度）が変動した場合、あるいは環境温度が異なる状態で生体成分の分析を行なった場合には、溶離液中の溶存気体の状態（溶解量）が異なったものとなる。そのため、溶離液中の溶存酸素濃度が環境温度の変動などに伴って変動した場合には、ヘモグロビン中のオキシヘモグロビンとデオキシヘモグロビンとの比率が変動する。また、分析カラム９１に導入される生体試料においても、ヘモグロビン中のオキシヘモグロビンとデオキシヘモグロビンとの比率にバラツキが生じ得る。

その一方で、分析カラム９１に導入する生体試料として、溶血液を希釈して酸素が比較的多い状態のものを使用することから、測光機構９４においては、オキシヘモグロビンの最大吸収波長である４１５ｎｍを測定波長として採用している。そのため、環境温度の変化が大きな環境下などででは、オキシヘモグロビンとデオキシヘモグロビンとの比率が異なったものとなるため、それらを同一の波長において測定する場合には正確な測定が困難となる。

特開平７−１２０４４７号公報

本発明は、オキシヘモグロビンとデオキシヘモグロビンとの比率が異なる場合であっても、クリコヘモグロビンの濃度を適切に測定できるようにすることを課題としている。

本発明の第１の側面においては、カラムクロマトグラフィを利用してグリコヘモグロビン濃度を測定する方法であって、測定波長を、４１７〜４２７ｎｍ、５２０〜５２６ｎｍ、または５８３〜５８９ｎｍに設定する、グリコヘモグロビン濃度測定方法が提供される。

好ましくは、測定波長は、４１７〜４２７ｎｍに設定される。さらに好ましくは、測定波長は、４１９〜４２５ｎｍに設定される。測定波長は、オキシヘモグロビンとデオキシヘモグロビンの分子吸光係数が一致または略一致する波長として知られている波長範囲である。

本発明は、血液中の赤血球から調製した試料を用いてグリコヘモグロビン濃度を測定する場合に適用することができる。

本発明の第２の側面においては、光源からの光を試料に照射し、そのときに試料から進行してくる光を受光部において受光する測光機構を備え、カラムクロマトグラフィを利用してグリコヘモグロビン濃度を測定するグリコヘモグロビン濃度測定装置であって、上記測光機構は、４１７〜４２７ｎｍ、５２０〜５２６ｎｍ、または５８３〜５８９ｎｍの光を、受光部において受光させることができるように構成されている、グリコヘモグロビン濃度測定装置が提供される。

測光機構は、たとえば４１７〜４２７ｎｍの光を上記受光部において受光させることができるように構成される。好ましくは、測光機構は、４１９〜４２５ｎｍの光を受光部において受光させることができるように構成される。

本発明のグリコヘモグロビン濃度測定装置はさらに、血液中の赤血球から試料を調製するための試料調製機構を備えていてもよい。

本発明のグリコヘモグロビン測定装置の一例であるＨＰＬＣ装置を示す概略構成図である。 図１に示したＨＰＬＣ装置における測光機構を説明するための断面図である。 オキシヘモグロビンおよびデオキシヘモグロビンの分子吸光係数の波長依存性を示すグラフである。 図1に示したＨＰＬＣ装置の要部を示すブロック図である。 図１に示したＨＰＬＣ装置の動作を説明するためのフローチャートである。 図１に示したＨＰＬＣ装置における演算回路での濃度演算処理を説明するためのフローチャートである。 図１に示したＨＰＬＣ装置において得られるクロマトグラムの一例である。 実施例１における環境温度とグリコヘモグロビン濃度と関係を示すグラフである。 実施例２における環境温度とグリコヘモグロビン濃度と関係を示すグラフである。 従来のグリコヘモグロビン測定装置の一例であるＨＰＬＣ装置を示す概略構成図である。 図１０に示したＨＰＬＣ装置における測光機構を説明するための断面図である。

符号の説明

１ グリコヘモグロビン濃度測定装置
３ 試料調整ユニット
５ 測光機構
５３Ｂ 受光素子（受光部）

以下においては、本発明について、図面を参照して具体的に説明する。

図１に示したＨＰＬＣ装置Ｘは、本発明のグリコヘモグロビン濃度測定装置の一例に相当するものであり、全血を用いてグリコヘモグロビン濃度を測定するように構成されたものである。このＨＰＬＣ装置Ｘは、複数の溶離液ボトル１０，１１，１２（図面上は３つ）、脱気装置２、試料調製ユニット３、分析ユニット４、測光機構５および演算回路６を備えている。

各溶離液ボトル１０，１１，１２は、後述する分析カラム４０に供給すべき溶離液を保持したものである。溶離液としては、たとえばｐＨや塩濃度の異なるバッファが使用される。

脱気装置２は、分析ユニット４（分析カラム４０）に溶離液を供給する前に、溶離液から溶存気体を除去するためのものであり、配管７０Ａ，７０Ｂ，７０Ｃを介して溶離液ボトル１０，１１，１２に、配管７１Ａ，７１Ｂ，７１Ｃを介して分析ユニット４のマニホールド４１に連結されている。

図１に示したように、試料調製ユニット３は、採血管１３から採取した血液試料１４の血球成分から、分析カラム４０に導入する試料を調製するためのものである。この試料調製ユニット３は、サンプリングノズル３０、調製液タンク３１および希釈槽３２を有している。

サンプリングノズル３０は、採血管１３の血液試料１４をはじめとする各種の液体を採取するためのものであり、液体の吸引・吐出が可能であるとともに、上下方向および水平方向に移動可能とされている。このサンプリングノズル３０の動作は、図外の制御手段によって制御されている。

調製液タンク３１は、血液試料１４をもとに、分析カラム４０に導入する導入用試料を調製するための調製液を保持したものである。この調製液タンク３１には、調製液として、赤血球の溶血させるための溶血剤、溶血液を希釈するための希釈液などが保持されている。

希釈槽３２は、血液試料１４中の赤血球を溶血させ、かつ溶血液を希釈して導入用試料を調製する場を提供するためのものである。この希釈槽３２は、後述する分析ユニット４におけるインジェクションバルブ４３に配管７２を介して接続されており、希釈槽３２において調製された導入用試料がインジェクションバルブ４３を介して分析カラム４０に導入できるように構成されている。

分析ユニット４は、分析カラム４０の充填剤に対する生体成分の吸着・溶離をコントロールし、各種の生体成分を測光機構５に供するためのものであり、図外の温調機構により温度コントロールされている。分析ユニット４における設定温度は、たとえば４０℃程度とされる。分析カラム４０は、試料中のヘモグロビンを選択的に吸着させるための充填剤を保持させたものである。充填剤としては、たとえばメタクリル酸エステル共重合体が使用される。

分析ユニット４は、分析カラム４０の他に、マニホールド４１、送液ポンプ４２、およびインジェクションバルブ４３を有している。

マニホールド４１は、複数の溶離液ボトル１０，１１，１２のうちの特定の溶離液ボトル１０，１１，１２から、インジェクションバルブ４３に選択的に溶離液を供給させるためのものである。このマニホールド４１は、配管７１Ａ，７１Ｂ，７１Ｃを介して脱気装置２に接続され、配管７３を介してインジェクションバルブ４３に接続されている。

送液ポンプ４２は、インジェクションバルブ４３を介して溶離液を分析カラム４０に移動させるための動力を付与するためのものであり、配管７３の途中に設けられている。送液ポンプ４２は、たとえば溶離液の流量が１．０〜２．０ｍｌ／ｍｉｎとなるように動作させられる。

インジェクションバルブ４３は、一定量の導入用試料を採取するとともに、その導入用試料を分析カラム４０に導入可能とするものであり、複数の導入ポートおよび排出ポート（図示略）を備えている。このインジェクションバルブ４３には、インジェクションループ４４が接続されている。このインジェクションループ４４は、一定量（たとえば数μＬ）の液体を保持可能なものであり、インジェクションバルブ４３を適宜切り替えることにより、インジェクションループ４４が希釈槽３２と連通して希釈槽３２からインジェクションループ４４に導入用試料が供給される状態、インジェクションループ４４が配管７４を介して分析カラム４０と連通してインジェクションループ４４から導入用試料が分析カラム４０に導入される状態、あるいはインジェクションループ４４に図外の洗浄槽から洗浄液が供給される状態を選択することができる。このようなインジェクションバルブ４３としては、たとえば六方バルブを使用することができる。

図２に示したように、測光機構５は、分析カラム４０からの溶離液に含まれるヘモグロビンを光学的に検出するためのものであり、測光セル５０、光源５１、ビームスプリッタ５２、測定用受光系５３および参照用受光系５４を有している。

測光セル５０は、測光エリアを規定するためのものである。この測光セル５０は、導入流路５０Ａ、測光流路５０Ｂおよび排出流路５０Ｃを有しており、これらの流路５０Ａ，５０Ｂ，５０Ｃが一連に連通している。導入流路５０Ａは、分析カラム４０（図１参照）からの溶離液を測光流路５０Ｂに導入するためのものであり、分析カラム４０に配管７５を介して接続されている。測光流路５０Ｂは、測光対象となる溶離液を流通させ、かつ溶離液を測光するための場を提供するものであり、直線状に形成されている。この測光流路５０Ｂは、両端が開放しているとともに、両端部が透明カバー５５により塞がれている。排出流路５０Ｃは、測光流路５０Ｂの溶離液を排出するためのものであり、配管７６を介して廃液槽１５に接続されている（図１参照）。

光源５１は、測光流路５０Ｂを流通する溶離液に光を照射するためのものである。この光源５１は、光軸Ｌが測光流路５０Ｂの中心を通過するように、測光流路５０Ｂの端面５０Ｂａ（透明カバー５５）に対面した状態で配置されている。光源５１としては、オキシヘモグロビンとデオキシヘモグロビンの分子吸光係数が一致または略一致する測定波長の光、および参照波長の光を出射可能なものが使用される。測定波長としては、たとえば４１７〜４２６ｎｍの波長範囲を挙げることができるが、測定波長は、５２０〜５２６ｎｍあるいは５８３〜５８９ｎｍであってもよい。参照波長としては、たとえば５００ｎｍを採用することができる。先の波長範囲の測定波長および参照波長の光を出射可能な光源５１としては、たとえばハロゲンランプを使用することができる。もちろん、光源５１としては、ハロゲンランプ以外のもの、たとえば１または複数のＬＥＤ素子を備えたものを使用することもできる。

ビームスプリッタ５２は、光源５１から出射された光のうち、測光流路５０Ｂを透過した光を分割して測定用受光系５３および参照用受光系５４に入射させるためのものであり、光軸Ｌ上において、４５度傾斜した状態で配置されている。ビームスプリッタ５２としては、ハーフミラーなどの公知の種々のものを使用することができる。

測定用受光系５３は、ビームスプリッタ５２を透過した光のうち、目的とする波長の光を選択的に受光するものであり、光軸Ｌ上に配置されている。この測定用受光系５３は、干渉フィルタ５３Ａと、この干渉フィルタ５３Ａを透過した光を受光するための受光素子５３Ｂと、を備えている。受光素子５３Ｂとしては、フォトダイオードを使用することができる。

干渉フィルタ５３Ａは、目的とする測定波長の光を選択的に透過させるものである。ここで、ＨＰＬＣ装置Ｘにおいては、測定波長が４１７〜４２６ｎｍ、好ましくは４１９〜４２３ｎｍに設定される。これは、以下の理由によるものである。第１に、図３に示したように、オキシヘモグロビンの分子吸光係数とデオキシヘモグロビンの分子吸光係数とは、波長が略４２１ｎｍのときに一致するため、測定波長を４２１ｎｍまたはそれに近い波長とすれば、分析カラム４０からの溶離液に含まれるヘモグロビンにおいて、オキシヘモグロビンとデオキシヘモグロビンとの比率、またはその変動の影響を受けることなく、ヘモグロビン濃度を測定することが可能となると考えられるからである。第２に、後述の実施例から明らかなように、測定波長が４２３ｎｍのときに環境温度の影響を一番受けにくいという結果が得られたため、測定波長を４２３ｎｍまたはそれに近い波長とすれば、環境温度の影響をさほど受けることなく、正確かつ安定性良くグリコヘモグロビン濃度の測定ができるものと考えられるからである。

測定波長としては、上述のようにオキシヘモグロビンの分子吸光係数とデオキシヘモグロビンの分子吸光係数とが一致または略一致する５２０〜５２６ｎｍあるいは５８３〜５８９ｎｍを採用できるため、その場合には、干渉フィルタ５３Ａとしては５２０〜５２６ｎｍあるいは５８３〜５８９ｎｍの波長範囲の光を選択的に透過せるものが使用される。

図２に示した参照用受光系５４は、分析カラム４０からの溶離液の濁度や散乱の影響を抑制するためのデータを取得するためのものであり、ビームスプリッタ５２において反射して光路が変えられた光のうち、参照波長である５００ｎｍの光を選択的に受光するものである。この測定用受光系７４は、５００ｎｍの光を選択的に透過させる干渉フィルタ５４Ａと、干渉フィルタ５４Ａを透過した光を受光するための受光素子５４Ｂと、を備えている。受光素子５４Ｂとしては、フォトダイオードを使用することができる。

図４に示したように、演算回路６は、制御部６０および演算部６１を備えている。

制御部６０は、各部の動作を制御するためのものである。より具体的には、制御部６０は、光源５１の点灯・消灯を制御し、干渉フィルタ５３Ａを制御して受光素子５３Ｂにおいて受光させる光の波長を選択し、あるいは演算部６１における濃度演算処理を制御する。

演算部６１は、受光素子５３Ｂ，５４Ｂでの受光結果に基づいて、全血中のグリコヘモグロビン濃度を演算するためのものである。この演算部６１は、演算に必要なプログラムを記憶したものであり、その動作は制御部６０によって制御される。

次に、ＨＰＬＣ装置Ｘの動作について、図１ないし図４に加えて、図５および図６に示したフローチャートを参照しつつ説明する。

図１および図５に示したように、ＨＰＬＣ装置Ｘにおいては、測定開始の指示が確認された場合には（Ｓ１）、分析カラム４０に対して溶離液を供給する（Ｓ２）。溶離液は、送液ポンプ４２の動力により、溶離液ボトル１０，１１，１２から脱気装置２、マニホールド４１を介してインジェクションバルブ４３に供給され、また複数の溶離液ボトル１０，１１，１２のうちのいずれの溶離液ボトル１０，１１，１２の溶離液を供給するかは、マニホールド４１を制御することによって選択される。インジェクションバルブ４３に供給された溶離液は、配管７４を介して分析カラム４０に供給される。

ＨＰＬＣ装置Ｘにおいてはさらに、分析カラム４０に導入すべき導入用試料を調製する（Ｓ３）。導入用試料の調製に当たっては、まず採血管１３から血液試料１４を採取する。採血管１３からの血液試料１４の採取は、サンプリングノズル３０を動作させることにより行なわれる。サンプリングノズル３０によって採取された血液試料１４は、サンプリングノズル３０を動作させることによって希釈槽３２に供給される。希釈槽３２にはさらに、調製液タンク３１から溶血剤および希釈液が順次供給され、サンプリングノズル３０を利用したピペッティング操作によって希釈槽３２内の液体を混合することによって導入用試料が調製される。

導入用試料は、分析カラム４０に導入される（Ｓ４）。分析カラム４０に対する導入用試料の導入は、インジェクションバルブ４３の切替操作を行うことにより、インジェクションループ４４に溶離液が流通させられることにより行なわれる。すなわち、インジェクションバルブ４４の導入用試料は、溶離液とともに分析カラム４０に導入される。分析カラム４０においては、導入用試料が導入されることにより、充填剤にグリコヘモグロビンが吸着する。充填剤にグリコヘモグロビンを吸着させた後においては、マニホールド４１によって、分析カラム４０に供給する溶離液の種類を適宜切り替え、充填剤に吸着したグリコヘモグロビンを溶離させる。

一方、導入用試料の導入開始から一定時間経過した場合には、インジェクションバルブ４３の切替操作を行うことにより、分析カラム４０に対して引き続き溶離液を供給するとともに、インジェクションループ４４の洗浄を行なう（Ｓ５）。一方、インジェクションループ４４の洗浄と同時的に、先に説明したのと同様にして、先とは異なる採血管１３の血液試料１４から導入用試料を調製し（Ｓ３）、インジェクションループ４４の洗浄後においては、再び導入用試料をインジェクションループ４４に導入する（Ｓ４）。このような導入用試料の調製（Ｓ３）、導入（Ｓ４）、洗浄（Ｓ５）は、インジェクションバルブ４３を適宜切り替えつつ、測定対象となる採血管１３（血液試料１４）の数に応じて繰り返し行なわれる。

分析カラム４０から排出されるグリコヘモグロビンを含む溶離液は、図２に示したように配管７６を介して測光機構５の測光セル５０に供給され、測光される（Ｓ６）。測光セル５０に対しては、配管７５および導入流路５０Ａを介して分析カラム４０からの溶離液が導入され、この溶離液は測光流路５０Ｂおよび排出流路５０Ｃを通過した後に、図２から分かるように配管７６を介して廃液槽１５に導かれる。

図２に示したように、測光機構５においては、分析カラム４０からの溶離液が測光流路５０Ｂを通過する際に、光源５１によって溶離液に対して連続的に光が照射される。その一方で、測光流路５０Ｂを透過した光は、ビームスプリッタ５２において分割された後、測定用受光系５３および参照用受光系５４において受光される。測定用受光系５３では、干渉フィルタ５３Ａを透過した光が受光素子５３Ｂにおいて選択的に受光される。一方、参照用受光系５４では、干渉フィルタ５４Ａを透過した参照波長である５００ｎｍの光が受光素子５４Ｂにおいて選択的に受光される。

受光素子５３Ｂ，５４Ｂでの受光結果は、演算回路６に出力され、この演算回路６においてグリコヘモグロビンの濃度が演算される（Ｓ７）。演算回路６における濃度演算処理は、図６に示したフローチャートの手順にしたがって行なわれる。

まず、ヘモグロビンに対応する吸光度を積算するとともに（Ｓ１０）、グリコヘモグロビンに対応する吸光度（図７においてクロスハッチィングで示した部分）を積算する（Ｓ１１）。

次いで、Ｓ１０における吸光度の積算値におけるＳ１１の積算値が占める割合を算出し、それをグリコヘモグロビン濃度とする（Ｓ１２）。

Ｓ１２における演算が終了した場合には、図５におけるＳ７に戻る（Ｓ１３）。すなわち、演算回路６での演算結果は、図外の表示パネルに表示され、また自動的あるいは使用者のボタン操作によってプリントアウトされる（Ｓ８）。

本実施の形態では、オキシヘモグロビンの分子吸光係数とデオキシヘモグロビンの分子吸光係数が一致または略一致する波長を測定波長としてグリコヘモグロビン濃度を演算している。オキシヘモグロビンおよびデオキシヘモグロビンの分子吸光係数が一致する波長は、オキシヘモグロビンとデオキシヘモグロビンとの比率に影響を受けることなく一定のものであり、そのような波長においてグリコヘモグロビン濃度を演算する場合には、オキシヘモグロビンとデオキシヘモグロビンとの比率に関係なく、安定した測定が可能となる。その結果、本実施の形態では、ＨＰＬＣ装置Ｘの外部の温度（環境温度）が変動する環境下や環境温度が異なる状態でグリコヘモグロビン濃度を測定する場合、あるいは分析カラムに導入する試料における酸素濃度のバラツキが生じる場合であっても、溶離液におけるオキシヘモグロビンとデオキシヘモグロビンとの比率に関係なく、安定したグリコヘモグロビン濃度の測定が可能となる。

本発明は、先に説明した実施の形態には限定されず、種々に変更可能である。たとえば、 先に説明した濃度演算処理においては、ヘモグロビン量が吸光度として取得されていたが、ヘモグロビン量は、必ずしも吸光度として取得する必要はなく、透過率として、あるいは単に受光量として取得してもよい。

また、測光機構５においては、受光素子５３Ｂに目的とする波長の光（たとえば４１７〜４２６ｎｍの波長範囲の光）を受光させるための構成は、干渉フィルタ５３Ａを用いる構成には限定されず、公知の他の手法を採用することもできる。

本発明はさらに、血液中のグリコヘモグロビン濃度を測定するためのＨＰＬＣ装置に限らず、血液以外の検体を用いる場合、あるいはＨＰＬＣ装置以外の液体クロマトグラフィ装置その他のグリコヘモグロビン濃度測定装置に対しても適用することができる。

本実施例においては、測定波長がグリコヘモグロビン測定値に与える影響について検討するとともに、環境温度と測定波長との関係について検討した。

グリコヘモグロビンの濃度は、環境温度を１０℃、２０℃および３０℃とした場合について、グリコヘモグロビン測定装置（「ＡＤＡＭＳ Ａ１ｃ ＨＡ−８１６０」；アークレイ株式会社製）において、受光素子としてフォトダイオードアレイ（「紫外可視多波長検出器 ＭＤ−９１０」；日本分光株式会社製）を採用したものを用いて行った。グリコヘモグロビン濃度は、４１５〜４３０ｎｍの波長範囲において、１ｎｍ毎にヘモグロビン総量におけるグリコヘモグロビン量が占める割合として演算した。

検体としては、健常人から採取した血液（健常人検体）および糖尿病患者から採取した血液（糖尿患者血液）を用いた。健常人検体を用いた場合のグリコヘモグロビンの測定結果については下記表１および図８Ａに、糖尿病患者検体を用いた場合のグリコヘモグロビンの測定結果については下記表２および図８Ｂに、それぞれ示した。

健常人検体については、表１および図８Ａから分かるように、測定波長が４２３ｎｍのときに環境温度に関係なく測定値が略一致した。また、測定波長が４１６〜４２７ｎｍの範囲では、測定波長がオキシヘモグロビンの最大吸収波長であり４１５ｎｍのときよりも環境温度の影響を受けず、測定値が安定していた。とくに、測定波長が４１９〜４２６ｎｍのときには、より一層、環境温度の影響を受けていなかった。

一方、糖尿病患者検体についても、表２および図８Ｂから分かるように、測定波長が４２３ｎｍのときに環境温度に関係なく測定値が略一致した。また、測定波長が４１７〜４２７ｎｍの範囲では、測定波長がオキシヘモグロビンの最大吸収波長であり４１５ｎｍのときよりも環境温度の影響を受けていなかった。とくに、測定波長が４１９〜４２５ｎｍのときには、より一層、環境温度の影響を受けていなかった。

本実施例の結果から、グリコヘモグロビン濃度を測定する場合には、測定波長として４１７〜４２７ｎｍとした場合、好ましくは４１９〜４２５ｎｍ、最も好ましくは４２３ｎｍに設定すれば、健常人検体であるか糖尿病患者検体であるかと問わず、環境温度の影響を受けにくく、正確かつ安定した測定を行なえることがわかる。

本実施例では、測定波長をオキシヘモグロビンの最大吸収波長である４１５ｎｍに設定した場合、および測定波長を実施例１において最も良い結果の得られた４２３ｎｍに設定した場合について、環境温度が測定値に与える影響について検討した。

グリコヘモグロビンの測定値は、実施例１の場合と同様にして、健常人検体および糖尿病患者検体のそれぞれについて測定した。測定波長を４１５ｎｍに設定した場合のグリコヘモグロビンの測定結果については下記表３および図９Ａに、測定波長を４２３ｎｍに設定した場合の測定結果については下記表４および図９Ｂに、それぞれ示した。

表３および図９Ａに示したように、測定波長をオキシヘモグロビンの最大吸収波長である４１５ｎｍに設定したグリコヘモグロビンを測定した場合には、環境温度が高くなるほど測定値が大きくなり、測定値が環境温度の影響を大きく受けていた。

これに対して、表４および図９Ｂに示したように、測定波長を４２３ｎｍに設定してグリコヘモグロビン濃度を演算した場合には、環境温度が１０〜３０℃の範囲で変化したとしても、測定値が環境温度の影響をさほど受けておらず、略一定値となった。とくに、より正確な測定が要求される糖尿病患者検体においては、環境温度に対する測定値の変動がほとんどなかった。このことから、測定波長を４２３ｎｍに設定してグリコヘモグロビン濃度を演算した場合には、環境温度（溶離液の溶存酸素濃度）や試料の溶存酸素濃度の影響を受けることなく、正確かつ安定したグリコヘモグロビン濃度の測定が可能であることが分かる。また、測定波長を４２３ｎｍに近い波長に設定した場合であっても、環境温度の影響をさほど受けることなく、正確かつ安定したグリコヘモグロビン濃度の測定が可能であると推測される。

以上より、４２３ｎｍに近い波長を選択することによりオキシヘモグロビンとデオキシヘモグロビンとの比率に関係なく、正確にグリコヘモグロビンの濃度を測定できることとが分かった。

Claims (8)

1. カラムクロマトグラフィを利用してグリコヘモグロビン濃度を測定する方法であって、
   測定波長を、４１７〜４２７ｎｍ、５２０〜５２６ｎｍ、または５８３〜５８９ｎｍに設定する、グリコヘモグロビン濃度測定方法。
2. 測定波長を、４１７〜４２７ｎｍに設定する、請求項１に記載のグリコヘモグロビン濃度測定方法。
3. 測定波長を４１９〜４２５ｎｍに設定する、請求項１に記載のグリコヘモグロビン濃度測定方法。
4. 血液中の赤血球から調製した試料を用いてグリコヘモグロビン濃度を測定する、請求項１〜請求項３のいずれか１項に記載のグリコヘモグロビン濃度測定方法。
5. 光源からの光を試料に照射し、そのときに試料から進行してくる光を受光部において受光する測光機構を備え、カラムクロマトグラフィを利用してグリコヘモグロビン濃度を測定するグリコヘモグロビン濃度測定装置であって、
   上記測光機構は、４１７〜４２７ｎｍ、５２０〜５２６ｎｍ、または５８３〜５８９ｎｍの光を、受光部において受光させることができるように構成されている、グリコヘモグロビン濃度測定装置。
6. 上記測光機構は、４１７〜４２７ｎｍの光を上記受光部において受光させることができるように構成されている、請求項５に記載のグリコヘモグロビン濃度測定装置。
7. 上記測光機構は、４１９〜４２５ｎｍの光を上記受光部において受光させることができるように構成されている、請求項５に記載のグリコヘモグロビン濃度測定装置。
8. 血液中の赤血球から試料を調製するための試料調製機構をさらに備えている、請求項５〜請求項７のいずれか１項に記載のグリコヘモグロビン濃度測定装置。

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