JP4989830B2

JP4989830B2 - 脳によるグルタミン酸塩の放出に対して抑制効果を示す薬剤を製造するためのベータ−ナフトキノン誘導体の使用

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Publication number: JP4989830B2
Application number: JP2001510459A
Authority: JP
Inventors: モーリスイスラエル; ジョルディモルゴ; クリスチャンブロイ; セザールマッテ
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1999-07-21
Filing date: 2000-07-21
Publication date: 2012-08-01
Anticipated expiration: 2020-07-21
Also published as: JP2003504405A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、脳内でのグルタミン酸塩の放出に対して抑制効果を示す薬剤を製造するためのベータ−ナフトキノン誘導体およびその塩類の新規な使用に関する。
【０００２】
【従来技術および解決すべき課題】
グルタミン酸塩は、哺乳類の中枢神経系における主要な神経伝達物質である。
【０００３】
しかしながら、脳の細胞外の空間でのその過剰な蓄積は、ニューロンに有毒であり、このことは、その蓄積が、外傷性血管または他の由来の脳偶発症候の結果放出される過剰のグルタミン酸塩による有害な作用に関係するてんかん、筋委縮性側索硬化症、脊髄筋委縮症、ハンチントン舞踏病および種々の発作のような多数の神経病の原因の因子であるという考えをもたらしてきた。
【０００４】
血管保護薬剤(vasoprotective drug)として知られるある種のベータ−ナフトキノン化合物の発明者による研究により、これらの化合物が、意外なことにグルタミン酸塩の放出に対して抑制効果を有することが証明されてきた。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
従って、本発明は、脳によるグルタミン酸塩の放出に対して抑制効果を有する薬剤を製造するためのベータ−ナフトキノン誘導体の新規な使用であって、これらの誘導体が式（Ｉ）を有し、
【化４】

（式中、Ｒは−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ_２、−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ_３または−ＯＨ基を表わす）、式（ＩＩ）
【化５】

で示される、対応するグルクロン酸結合された誘導体、あるいは医薬として許容される酸とのこれらの付加塩である使用に向けられている。
【０００６】
最も詳細には、本発明は、それぞれ式（ＩＩＩ）および（ＩＶ）の、国際的一般名に従ってナフタゾン(naftazone)と呼ばれる１，２−ナフトキノン−２−セミカルバゾールに加えて、その対応するグルクロン酸結合された誘導体、１−（１−ヒドロキシ，２−ナフチル）セミカルバジド−１−β−Ｏ−グルコピラノシドウロン酸の使用に向けられている。
【０００７】
【化６】

【０００８】
これらの化合物の酸との付加塩は、鉱酸または有機酸により生成する塩を含む。
【０００９】
例として、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、更にギ酸、安息香酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、シュウ酸、アスパラギン酸およびアルカンスルホン酸が挙げられる。
【００１０】
本発明に従って使用される化合物の調製は、文献、例えばＢＳＭ９２４Ｍまたは特許ＦＲ２１０３５０４号に広く記載されてきた。
【００１１】
後述する実施例に記載する、これらの化合物の抑制性質により、これらの化合物が、過剰に放出されるグルタミン酸塩の有害な作用に関係する神経病および発作を治療することに特に適するようになる。
【００１２】
例えば、外傷性または他の血管由来の脳偶発症候の結果放出される過剰のグルタミン酸塩によるてんかん、筋委縮性側索硬化症、脊髄筋委縮症、ハンチントン舞踏病、有害な作用の治療が挙げられる。
【００１３】
これらの薬剤は、特に経口投与および注入できるチャンネルを経て投与される。有利には、これらの薬剤は、経口投与のために錠剤、糖被覆錠剤、硬質ゼラチンカプセル剤、カプセル剤、顆粒剤の形態、または注入できるチャンネルを経る投与のために溶液もしくは懸濁液の形態である。
【００１４】
用量は、治療する患者および病状に従って適合させられ、例えば１ｍｇ〜１００ｍｇ／日である。
【００１５】
本発明の他の特徴および利点を下記の実施例に挙げ、ここでは図１および２をそれぞれ参照する：
−図１は、化学発光の測定手法を例証するダイアグラムを表わし、
−図２は、ナフタゾン（図２Ａ）またはそのグルクロン酸結合された誘導体（図２Ｂ）の濃度に対するグルタミン酸塩の自発的な放出および誘発された放出を表わす。
【００１６】
【発明の実施の形態】
実施例１：ナフタゾンおよびそのグルクロン酸結合された誘導体によるグルタミン酸塩に対する抑制効果の検討
Ａ：正常ラットのＣＳＦ（脳脊髄液）中のグルタミン酸塩レベルに対する、ナフタゾンによる１５日間の連続処理の効果の検討
４〜８週齢の、体重２００〜２２０ｇのスプレーグ−ドーリー(Sprague-Dawley)ラットと両性のスイス−ウェブスターマウスとを使用する。
【００１７】
１２時間の明／暗周期を有する２３〜２４℃のよく換気された室内の籠に動物を保つ。
【００１８】
対照中の、またはナフタゾンによる処理後のＣＳＦグルタミン酸塩レベルを調べるために、雄性ラットを３つの群に分ける：
−群Ｉ（ｎ＝８）を対照として使用する。この群のラットに、口当たり(per os)１５日間、ナフタゾンを可溶化するために使用するものと同じ担体(carrier)、すなわち１％メチルセルロース（シグマ社）を与える、
−群ＩＩ（ｎ＝５）およびＩＩＩ（ｎ＝５）の動物に、口当たり１５日間、単一の丸薬として与えて、ｋｇ当たり、１日当たりそれぞれ１０ｍｇおよび１００ｍｇのナフタゾンを与える。
【００１９】
６％ペントバルビタール（ｉ．ｐ．）で麻酔をかけたラットのＣＳＦを、通常の方法に従って操作することにより集める。
【００２０】
次いで動物を断頭する。ＣＳＦ試料を１０℃、６０００ｇで１０分間遠心分離する。
【００２１】
上清を抽出し、血液析出物を含有する沈降物を除去する。
【００２２】
試料を２．５％トリクロロ酢酸中に保持し、−８０℃に保つ。
【００２３】
試料からトリクロロ酢酸を洗い流すためにエーテルを使用する。
【００２４】
ＣＳＦ中のグルタミン酸塩レベルを決定するために、図１のダイアグラムに記載された方法に従って化学発光の測定を行う。反応は、グルタミン酸塩脱水素酵素の作用下でのグルタミン酸塩の２−オキソグルタル酸塩への酸化に基づき、これはＮａＤＨ２を生じ、光細菌の化学発光反応を用いることにより評価される。
【００２５】
既知の体積の試料を、トリス緩衝液（１２０ｍＭ、ｐＨ７．２）中の２５０μｌのサッカロース（１２０ｍＭ）と、５０μｌのＮＡＤ、ＤＭＮ、ＮＡＤＨ−ＦＭＮ酸化還元酵素、ルシフェラーゼおよびＧＤＨの酵素混合物と、５μｌのｎ−デシルアルデヒドとを含有する反応媒質に添加することによりＣＳＦ試料を試験する。
【００２６】
Ｌ−グルタミン酸塩の酸化とＮＡＤＨの生産とに連続する発光反応により放射される光を、光電子倍増管装置により検出し、記録し、それを標準グルタミン酸塩により放射される光と比較することにより検定する。
【００２７】
不対の(unpaired)試料についてスチューデントのｔ検定を用いることにより、データの統計的解析を行う。値を平均値＋／−ＳＥＭで表し、ｎは動物または行った実験の数である。
【００２８】
データはｐ<０．０５において対照に対して有意差があると考えられる。
【００２９】
メチルセルロース担体を１５日間投与されてきた対照ラット（群Ｉ）は、２２．１＋／−６．３ｎｍｏｌ・ｍｌ^−１の平均値（ｎ＝８）を伴って、１６〜３４ｎｍｏｌ・ｍｌ^−１のＣＳＦグルタミン酸塩含有量を有する。
【００３０】
１０または１００ｍｇ／ｋｇのナフタゾン用量を用いる１５日間のラット（群ＩＩおよびＩＩＩ）の毎日の処理により、ラットの両方の群のＣＳＦグルタミン酸塩含有量がそれぞれ８．１＋／−１．８（ｎ＝５）および１０．８＋／−３．３ｍｌ^−１（ｎ＝５）であることが示される。
【００３１】
これらの結果により、両方のナフタゾン用量で処理したラットのＣＳＦ中のグルタミン酸塩含有量が、対照と比較して顕著に減少する（それぞれｐ＝０．００１およびｐ＝０．００４）ことが示される。
【００３２】
更に、ナフタゾンで処理したラットの両方の群の間に、ＣＳＦグルタミン酸塩含有量の顕著な違いが見られず、このことは、薬剤の効果が用量相関性でないことを示す。
【００３３】
Ｂ：マウスの脳のシナプトソームからのグルタミン酸塩の放出に対するナフタゾンおよびそのグルクロニド誘導体の効果の検討
苔状繊維のシナプトソームを調製するために、スイス−ウェブスターラットを断頭し、小脳を迅速に除去する。組織の小片（１〜２ｍｍ^３）を、下記のもの（ｍＭ）を含有する１００ｍｌの哺乳類塩類標準溶液中で洗浄する：ＮａＣｌ、１３６；ＫＣｌ、５．６；ＭｇＣｌ_２、１．２；ＣａＣｌ_２、２．２；グルコース、５．５；ＮａＨＣＯ_３、７．５；ＮａＨＰＯ_４／Ｎａ_２ＨＰＯ_４緩衝液、１．２。
【００３４】
酸素流をこれらに１０分間通じる。
【００３５】
片を解離するために、これらを１ｍｌのピペットを用いて逆方向の動きで吸い上げる。
【００３６】
得られるホモジネートを３ｍｌの哺乳類クレブス(Krebs’s)溶液中で希釈し、ナイロン（登録商標）組織（メッシュ５０μｍ）で濾過する。
【００３７】
濾液を集め、重力により３０〜４５分間沈降させる。
【００３８】
グルタミン酸塩の(glutamatergic)苔状繊維に由来するシナプトソームは、核フラクションについてのその大きなサイズのために沈降する。上清を捨て、沈降物を１ｍｌの標準溶液に再懸濁する。シナプトソームからのグルタミン酸塩の放出を、ＣＳＦ中でこれを評価するために使用される技術に従って検出する。
【００３９】
図２Ａおよび２Ｂは、グルタミン酸塩の自発的な放出（曲線―○―）および減極(depolarization)により誘発される放出（曲線―●―）に対するナフタゾン（濃度０．５〜５０μＭ）およびそのグルクロン酸結合された誘導体の効果をそれぞれ示す。
【００４０】
ＡおよびＢ中の各点は、三つ組で行われる３回の測定のＩＳＥＭ平均を示す。Ａにおいて、自発的に放出されたグルタミン酸塩は、試験される薬剤に１時間晒される間に連続的に測定され、対照と比較される。減極によるグルタミン酸塩の放出は、試験される薬剤に１時間晒した後に決定され、対照と比較される。
【００４１】
薬剤を、測定前に、シナプトソームアリコートを用いて１時間加温放置する。
【００４２】
高いＫ^＋含有量（３０ｍＭ）を有し、Ｃａ^２＋（５ｍＭ）を含有する媒質により誘発される減極に応答するグルタミン酸塩の放出は、検討した濃度値ではナフタゾンに顕著に影響されない。
【００４３】
しかしながら、図２Ａに示すように、ナフタゾンは、シナプトソームからのグルタミン酸塩の自発的な放出を減少させる。グルタミン酸塩の自発的な放出に対するナフタゾンの抑制効果は、使用される薬剤の最低の濃度（０．５μＭ）で既に観察される。この効果は２５μＭの濃度で最大である。
【００４４】
より高い濃度は、抑制効果を更に増大させないようである。
【００４５】
自発的な放出およびＫ^＋により引き起こされる放出に対する、グルクロン酸結合された誘導体の効果を評価するとき、薬剤が、使用される濃度の範囲でグルタミン酸塩の自発的な放出を減少させないことがわかる。
【００４６】
しかしながら、図２Ｂに示すように、グルクロン酸結合された誘導体は、用量に相関して、高いＫ^＋含有量（２０ｍＭ）を有し、Ｃａ^２＋（５ｍＭ）を含有する媒質により誘発される放出を減少させる。
【００４７】
最大の減少（約６０％）は、試験される薬剤の最高の濃度（３２μＭ）で観察される。
【００４８】
実施例２：医薬組成物の調製
従来技術に従って操作することにより、下記のものを含有する錠剤：
−ナフタゾン：１０ｍｇ
−１００ｍｇにするための賦形剤
または下記のものを含有する、注入できる溶質を製造する：
−ナフタゾン：５ｍｇ
−２ｍｌにするための滅菌水。
【図面の簡単な説明】
【図１】化学発光の測定手法を例証するダイアグラムである。
【図２】ナフタゾン（図２Ａ）またはそのグルクロン酸結合された誘導体（図２Ｂ）の濃度に対するグルタミン酸塩の自発的な放出および誘発された放出を表わすグラフである。

Claims

外傷性血管由来の脳偶発症候の結果放出される過剰のグルタミン酸塩によるてんかん、ハンチントン舞踏病、筋委縮性側索硬化症、脊髄筋委縮症、有害な作用を治療するための薬剤を製造するためのベータ−ナフトキノンからの誘導体化合物の使用であって、これらの化合物が式（Ｉ）を有し、

（式中、Ｒは−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ_２、−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ_３または−ＯＨ基を表わす）、
式（ＩＩ）

を有する対応する化合物である、グルクロン酸結合された誘導体、
あるいは医薬として許容される酸とのこれらの付加塩である使用。
式（ＩＩＩ）および（ＩＶ）

をそれぞれ有する１，２−ナフトキノン−２−セミカルバゾールまたはその対応するグルクロン酸結合された１−（１−ヒドロキシ，２−ナフチル）セミカルバジド−１−β−Ｏ−グルコピラノシドウロン酸を使用することを含む、請求項１記載の使用。
鉱酸または有機酸により生成する塩を使用することを含む、請求項１または２記載の使用。
薬剤が経口投与または注射で投与されることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項記載の使用。