JP5117092B2

JP5117092B2 - 保湿剤、抗老化剤、美白剤、抗酸化剤、痩身剤、トリートメント剤、アルギナーゼ活性促進剤及び皮膚外用剤

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Publication number: JP5117092B2
Application number: JP2007101941A
Authority: JP
Inventors: 宏子菊池; 龍二中内; 浩子吉田; 健太郎八木
Original assignee: Noevir Co Ltd
Current assignee: Noevir Co Ltd
Priority date: 2007-04-09
Filing date: 2007-04-09
Publication date: 2013-01-09
Anticipated expiration: 2027-04-09
Also published as: JP2008255078A; WO2008129720A1

Description

本発明は、天然由来成分を有効成分とする保湿剤、抗老化剤、美白剤、抗酸化剤、痩身剤、トリートメント剤、アルギナーゼ活性促進剤及び皮膚外用剤に関する。さらに詳しくは、ガガイモ科（Ａｓｃｌｅｐｉａｄａｃｅａｅ）カモメヅル属（Ｃｙｎａｎｃｈｕｍ）植物またはその抽出物を含有する保湿剤、抗老化剤、美白剤、抗酸化剤、痩身剤、トリートメント剤、アルギナーゼ活性促進剤及び皮膚外用剤に関する。

加齢、疾患、ストレス、紫外線などによるシワ、シミ、皮膚の弾力低下といった皮膚症状の要因として、乾燥、細胞機能機能低下、紫外線によるメラニン産生や色素沈着、真皮マトリックス成分の減少や変性、紫外線等による細胞の酸化障害などが挙げられる。このような皮膚症状を防止・改善するために、様々な有効成分の検索及び配合検討がなされてきた。特に天然由来成分は、様々な薬理作用や美容効果を有することが知られ、これまでにも数多くの植物や菌類などの抽出物の皮膚外用剤への応用が検討されてきた。

例えば、保湿効果と安全性に優れた保湿剤としてキク科ハマグルマ属植物の抽出物（特許文献１参照）、アブラナ科レピディウム属植物の抽出物（特許文献２参照）が知られている。皮膚の老化防止、改善作用を有する皮膚外用剤を得るために、真皮線維芽細胞の賦活あるいは増殖促進作用を有する成分としてポンカンのエッセンス（特許文献３参照）、ツリガネニンジン属植物の抽出物（特許文献４参照）、クロレラ抽出物（特許文献５参照）、ビワ抽出物（特許文献６参照）が開示されている。美白剤としては、白鶴霊芝の抽出物（特許文献７参照）、抗酸化剤としてはサルオガセ科サルオガセ属植物の抽出物（特許文献８参照）、生体内の脂肪蓄積を抑制する成分として哺乳動物の乳由来リン脂質（特許文献９参照）、褐藻の酵素分解物（特許文献１０参照）、アルギナーゼ活性促進剤として木通抽出物（特許文献１１参照）、桔梗抽出物（特許文献１２参照）、麦門冬抽出物（特許文献１３参照）、アンズ果実（特許文献１４参照）が知られている。

特開２００２−２０２６２号公報特開２００５−２８１２７１号公報特開２００１−１３１０４５号公報特開２０００−１７８１９８号公報特開平１１−３３５２９３号公報特公平５−１７２０６号公報特開２００３−８９６３０号公報特開平１０−１８２４１３号公報特開２００１−２７５６１４号公報特開平７−２７８００５号公報特開平１０−７５８１号公報特開２００２−２９９８３号公報特開２００３−２７７２８５号公報特開２００６−１４３６０８号公報

このように、これまでに様々な天然由来成分が応用されている。しかし、天然由来成分の中には、未だその効果が知られていないものも数多く存在し、優れた保湿作用、抗老化作用、美白作用、抗酸化作用、痩身作用、トリートメント作用、アルギナーゼ活性促進作用などを有する有効成分の開発が期待されていた。

本発明者らは、天然由来の種々の成分について検討を行った結果、従来はその効果が知られていなかったガガイモ科（Ａｓｃｌｅｐｉａｄａｃｅａｅ）カモメヅル属（Ｃｙｎａｎｃｈｕｍ）植物またはその抽出物に優れた保湿作用、抗老化作用、美白作用、抗酸化作用、痩身作用、トリートメント作用、アルギナーゼ活性促進作用が存在することを見出し、さらに検討を重ねて本発明を完成させるに至った。

すなわち、本発明は、ガガイモ科（Ａｓｃｌｅｐｉａｄａｃｅａｅ）カモメヅル属（Ｃｙｎａｎｃｈｕｍ）植物より選ばれる１種または２種以上の植物またはその抽出物を有効成分とする保湿剤、抗老化剤、美白剤、抗酸化剤、痩身剤、トリートメント剤またはアルギナーゼ活性促進剤に関する。

別の発明はガガイモ科（Ａｓｃｌｅｐｉａｄａｃｅａｅ）カモメヅル属（Ｃｙｎａｎｃｈｕｍ）植物より選ばれる１種または２種以上の植物またはその抽出物を含有することを特徴とする皮膚外用剤に関する。

本発明によれば、ガガイモ科（Ａｓｃｌｅｐｉａｄａｃｅａｅ）カモメヅル属（Ｃｙｎａｎｃｈｕｍ）植物より選ばれる１種または２種以上の植物またはその抽出物を有効成分とすることにより、優れた効果を有する保湿剤、抗老化剤、美白剤、抗酸化剤、痩身剤、トリートメント剤およびアルギナーゼ活性促進剤を提供することができる。

これらの保湿剤、抗老化剤、美白剤、抗酸化剤、痩身剤、トリートメント剤、アルギナーゼ活性促進剤を化粧料、外用医薬品等の皮膚外用剤に配合することにより、シワ、タルミ、皮膚の弾力低下、シミ、くすみいった種々の皮膚症状の発現防止や改善に優れた効果を発揮する、様々な組成物を提供することができる。

ガガイモ科（Ａｓｃｌｅｐｉａｄａｃｅａｅ）カモメヅル属（Ｃｙｎａｎｃｈｕｍ）植物としては、フナバラソウ（ＣｙｎａｎｃｈｕｍａｔｒａｔｕｍＢｕｎｇｅ；Ｖｉｎｃｅｔｏｘｉｃｕｍｈｉｒｕｎｄｉａｒｉａ）、イケマ（Ｃｙｎａｎｃｈｕｍｃａｕｄａｔｕｍ（Ｍｉｑ．）Ｍａｘｉｍ．）、ビャクビ（ＣｙｎａｎｃｈｕｍｖｅｒｓｉｃｏＢｕｎｇｅ）、スズサイコ（Ｃｙｎａｎｃｈｕｍｐａｎｉｃｕｌａｔｕｍ（Ｂｕｎｇｅ）Ｋｉｔａｇａｗａ）、コイケマ（Ｃｙｎａｎｃｈｕｍｗｉｌｆｏｒｄｉｉ（Ｍａｘｉｍ．）Ｈｅｍｓｌ．）が知られている。

これらの植物は、単独で用いられるほか、２種以上を組み合わせて使用することもできる。

本発明は、ガガイモ科カモメヅル属植物であれば特に限定されないが、入手が比較的容易などの理由から、適当なものとして、イケマ（Ｃｙｎａｎｃｈｕｍｃａｕｄａｔｕｍ（Ｍｉｑ．）Ｍａｘｉｍ．）が挙げられる。

これらガガイモ科カモメヅル属植物を使用する際は、その使用部位には特に制限はなく、根、茎、幹、葉、花などの任意の部分を使用することができる。複数の部位を組み合わせて使用してもよい。

それらはそのまま粉砕して使用することもできるが、それらの部位からの抽出物を用いることが好ましい。

抽出には、ガガイモ科カモメヅル属植物のいずれの部位を用いても構わないが、簡便に利用するには、全草、根、葉、花などを用いるとよい。その際、複数の部位を用いて抽出物を得るようにしてもよい。また、異なる溶媒を用いて抽出された抽出物を２種以上混合して用いてもよい。

抽出の際は、植物を生のまま用いてもよいが、抽出効率を考えると、細切、乾燥、粉砕等の処理を行った後に抽出を行うことが好ましい。

抽出は、任意の抽出溶媒に所定時間浸漬して行うことができる。抽出溶媒は、必要に応じて加熱してもよい。あるいは、超臨界流体や亜臨界流体を用いた抽出方法でも行うことができる。抽出効率を上げるため、撹拌したり抽出溶媒中でホモジナイズしたりしてもよい。抽出温度としては、５℃程度から抽出溶媒の沸点以下の温度とするのが適切である。抽出時間は、抽出溶媒の種類や抽出温度によっても異なるが、１時間〜１４日間程度とするのが適切である。

抽出溶媒としては、水の他、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール等の低級アルコール；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、グリセリン等の多価アルコール；エチルエーテル、プロピルエーテル等のエーテル類；酢酸ブチル、酢酸エチル等のエステル類；アセトン、エチルメチルケトン等のケトン類などの溶媒を用いることができる。これらは、単独で用いられるほか、任意の２種以上を組み合わせて用いてもよい。生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等を用いてもよい。さらに、水や二酸化炭素、エチレン、プロピレン、エタノール、メタノール、アンモニアなどの１種又は２種以上の超臨界液体や亜臨界液体を用いてもよい。

ガガイモ科カモメヅル属植物の上記溶媒による抽出物は、そのままでも使用することができるが、一定期間そのまま放置して熟成させて用いてもよいし、濃縮、乾固した物を水や極性溶媒に再度溶解して使用することもできる。或いは、これらの生理作用を損なわない範囲で、脱色、脱臭、脱塩等の精製処理や、カラムクロマトグラフィー等による分画処理を行った後に用いてもよい。ガガイモ科カモメヅル属植物の前記抽出物やその処理物及び分画物は、各処理及び分画後に凍結乾燥し、用時に溶媒に溶解して用いることもできる。また、リポソーム等のベシクルやマイクロカプセル等に内包させて用いることもできる。

ガガイモ科カモメヅル属植物またはその抽出物は、優れた保湿作用、抗老化作用、美白作用、抗酸化作用、痩身作用、トリートメント作用、アルギナーゼ活性促進作用を有し、保湿剤、抗老化剤、美白剤、抗酸化剤、痩身剤、トリートメント剤、アルギナーゼ活性促進剤として利用することができる。

これらの各剤は、ガガイモ科カモメヅル属植物またはその抽出物を有効成分として含む限り、その形態およびその他成分の配合の有無等については、何ら制限されない。形態については、液状、ペースト状、ゲル状、固体状、粉末状等の任意の形態を、その用途等に応じて選択でき、その形態とするために必要なビヒクル（賦形剤）、溶剤、その他の一般的な添加剤（酸化防止剤、着色剤、分散剤等）を任意に含むことができる。

ガガイモ科カモメヅル属植物またはその抽出物を有効成分とする保湿剤は、皮膚や毛髪等に優れた保湿効果を与えることができる。

ガガイモ科カモメヅル属植物またはその抽出物を有効成分とする抗老化剤は、優れたヒト真皮線維芽細胞の細胞賦活効果、コラーゲン産生促進作用を有し、老化症状の防止・改善に優れた効果を発揮する。

ガガイモ科カモメヅル属植物またはその抽出物を有効成分とする美白剤は、優れたヒト表皮メラニン細胞のチロシナーゼ活性阻害効果を有し、色素沈着、シミ、そばかす等を予防および改善して、優れた美白作用を発揮する。

ガガイモ科カモメヅル属植物またはその抽出物を有効成分とする抗酸化剤は、優れたラジカル消去効果およびスーパーオキサイドアニオン消去効果を有し、優れた抗酸化作用を発揮する。

ガガイモ科カモメヅル属植物またはその抽出物を有効成分とする痩身剤は、優れたヒト前駆脂肪細胞の中性脂肪蓄積抑制効果を有し、優れた痩身作用を発揮する。

ガガイモ科カモメヅル属植物またはその抽出物を有効成分とするトリートメント剤は、肌荒れ、小じわ、くすみといった皮膚症状の改善に優れた効果を発揮し、肌のキメを整え、肌の透明感を高めることができる。

ガガイモ科カモメヅル属植物またはその抽出物を有効成分とするアルギナーゼ活性促進剤は、優れたヒト表皮角化細胞のアルギナーゼ活性促進効果を有し、優れたアルギナーゼ活性促進作用を発揮する。

ガガイモ科カモメヅル属植物またはその抽出物を、化粧品、外用医薬品、医薬部外品等の皮膚外用剤に配合することにより、シワ、タルミ、シミ、くすみ、乾燥、小じわ等の様々な皮膚症状の防止・改善に優れた効果を発揮する皮膚外用剤を得ることができる。したがって、たとえば、保湿用皮膚外用剤、老化防止用皮膚外用剤、痩身用皮膚外用剤または美白用皮膚外用剤として好ましく使用することができる。

ガガイモ科カモメヅル属植物またはその抽出物の皮膚外用剤中の配合量は、皮膚外用剤の種類や目的等によって調整することができるが、効果や安定性などの点から、皮膚外用剤全量に対して、固形分換算で、０．０００１〜１０．０質量％が好ましく、より好ましくは、０．００１〜５．０質量％であり、さらに好ましくは０．０１〜５質量％であり、一層好ましくは０．１〜５質量％である。

皮膚外用剤の剤型は任意であり、例えば、ローション、乳液、ゲル、クリーム、軟膏剤、粉末、顆粒、パック剤、貼布剤、パップ剤、エアゾール剤等、種々の剤型で提供することができる。

皮膚外用剤には、ガガイモ科カモメヅル属植物またはその抽出物の他に、その用途と必要に応じて、医薬品、医薬部外品、皮膚化粧料、毛髪用化粧料及び洗浄料等に通常配合される任意の成分、例えば水、油性成分、保湿剤、粉体、色素、乳化剤、可溶化剤、ゲル化剤、洗浄剤、紫外線吸収剤、抗炎症剤、増粘剤、ｐＨ調整剤、キレート剤、薬剤（薬効成分）、香料、樹脂、防腐剤、アルコール類等を適宜配合することができる。さらに、本発明の効果を損なわない範囲において、他の保湿剤、抗老化剤、美白剤、抗酸化剤、痩身剤、トリートメント剤、アルギナーゼ活性促進剤あるいはガガイモ科カモメヅル属植物以外の植物またはその抽出物との併用も可能である。

以下にガガイモ科（Ａｓｃｌｅｐｉａｄａｃｅａｅ）カモメヅル属（Ｃｙｎａｎｃｈｕｍ）植物抽出物の調製例、各作用を評価するための試験、皮膚外用剤としての処方例、使用試験についてさらに詳細に説明するが、本発明の技術的範囲はこれによってなんら限定されるものではない。

［調製方法１］
イケマ（Ｃｙｎａｎｃｈｕｍｃａｕｄａｔｕｍ（Ｍｉｑ．）Ｍａｘｉｍ．）の葉の乾燥粉砕物１ｋｇに５０質量％エタノール水溶液を２０リットル加え、室温で７日間浸漬した。抽出液をろ過して回収し、溶媒を除去した後、ガガイモ科カモメヅル属植物抽出物３０ｇを得た。

［調製方法２］
イケマの葉の乾燥粉砕物１ｋｇに水を２０リットル加え、９０℃にて６時間還流して抽出した。抽出液をろ過して回収し、溶媒を除去した後、ガガイモ科カモメヅル属植物抽出物２０ｇを得た。

［調製方法３］
イケマ全草の乾燥粉砕物１ｋｇにメタノール２０リットル加え、室温で７日間浸漬した。抽出液をろ過して回収し、溶媒を除去した後、ガガイモ科カモメヅル属植物抽出物５０ｇを得た。

［調製方法４］
超臨界抽出装置にイケマ全草の乾燥粉砕物１００ｇを投入し、４０℃において１５Ｍｐａの大気圧下で二酸化炭素の超臨界流体を用いて抽出した。抽出物を回収し、ガガイモ科カモメヅル属植物抽出物１０ｇを得た。

＜抗老化作用（細胞賦活作用）の評価１＞
ガガイモ科カモメヅル属植物抽出物の細胞賦活作用の評価を、以下に示す方法により行った。試料として、調製方法２により製造したガガイモ科カモメヅル属植物抽出物を用いた。

クラボウ社（倉敷紡績株式会社）製正常ヒト真皮線維芽細胞を、１ウェル当たり２．０×１０^４個となるように９６穴マイクロプレート播種した。播種培地には、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）に１質量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したものを用いた。２４時間培養後、表２に示す各濃度となるように試料（抽出物）を添加した１質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地に交換し、さらに４８時間培養した。上清を除いた後、３−（４，５−ジメチル−２−チアゾリル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）を４００μｇ／ｍＬ含有する培地に交換して約２時間培養した。その後、テトラゾリウム環の開環により生じるフォルマザンを２−プロパノールにて抽出し、マイクロプレートリーダーにて５５０ｎｍの吸光度を測定した。同時に、濁度として６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両測定値の差により細胞賦活作用を評価した。評価では、試料を含む培地の他に、コントロールとして１質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地を用いた。

評価結果を、コントロールにおける細胞賦活作用を１００とした場合の相対値として表１に示す。

表１より明らかなように、ガガイモ科カモメヅル属植物抽出物を添加した培地では、有意な細胞賦活効果が認められた。このことから、ガガイモ科カモメヅル属植物抽出物は、優れた細胞賦活作用を有することが明らかとなった。
＜抗老化作用（コラーゲン産生促進作用）の評価２＞
ガガイモ科カモメヅル属植物抽出物のコラーゲン産生促進作用の評価を、以下に示す方法により行った。試料として、調製方法２により製造したガガイモ科カモメヅル属植物抽出物を用いた。

クラボウ社（倉敷紡績株式会社）製正常ヒト真皮線維芽細胞を、１ウェル当たり２．０×１０^４個となるように９６穴マイクロプレート播種した。播種培地には、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）に５質量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したものを用いた。２４時間培養後、表７に示す各濃度となるように試料（抽出物）を添加した０．５質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地に交換し、さらに２４時間培養した。培養上清中に分泌されたタイプＩコラーゲンの定量にはＥＬＩＳＡ法を用い、最後は標識されたペルオキシダーゼに対し２，２−アジノビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸）ジアンモニウム塩（ＡＢＴＳ）及び過酸化水素を添加し反応させた後、マイクロプレートリーダーにて４０５ｎｍの吸光度を測定した。ＰＩＥＲＣＥ社製ＢＣＡＰｒｏｔｅｉｎＡｓｓａｙＫｉｔにてタンパク量を測定し、単位タンパク量当りのタイプＩコラーゲン産生量を求めた。

評価結果を、試料無添加のコントロールにおける単位タンパク量当りのタイプＩコラーゲン産生量を１００とした時の相対値にて、表２に示す。

表２より明らかなように、ガガイモ科カモメヅル属植物抽出物を添加した培地では、有意なコラーゲン産生促進効果が認められた。このことから、ガガイモ科カモメヅル属植物抽出物は、優れたコラーゲン産生促進作用を有することが明らかとなった。

以上のことから、ガガイモ科カモメヅル属植物抽出物は、優れた抗老化作用を有することが明らかとなった。

＜美白作用（チロシナーゼ活性阻害作用）の評価＞
ガガイモ科カモメヅル属植物抽出物のチロシナーゼ活性阻害作用の評価を、以下に示す方法により行った。試料として、調製方法１により製造したガガイモ科カモメヅル属植物抽出物を用いた。

クラボウ社製正常ヒト表皮メラニン細胞を、１ウェル当たり３．０×１０^４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地には、クラボウ社製Ｍｅｄｉｕｍ１５４Ｓを用いた。２４時間後、Ｍｅｄｉｕｍ１５４Ｓによって表３に示す各濃度に調整した試料添加培地に交換し、さらに４８時間培養した。次に、１質量％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ含有リン酸緩衝液７５μＬに交換して細胞を完全に溶解させ、内５０μＬを粗酵素液として使用した。粗酵素液に、基質となる０．０５質量％Ｌ−ドーパ含有リン酸緩衝液５０μＬを加え、３７℃で２時間静置した。マイクロプレートリーダーにより、基質添加直後と反応終了時の４０５ｎｍの吸光度を測定し、生成されたドーパメラニン量を、式（１）に各測定値を導入して求めた。

式（１）：生成されたドーパメラニン量＝｛（反応後４０５ｎｍ値−反応前４０５ｎｍ値）｝−２．１６６／５．２３８
また、ＰＩＥＲＣＥ社製ＢＣＡＰｒｏｔｅｉｎＡｓｓａｙＫｉｔにより各ウェルのタンパク量を測定し、単位タンパク量当たりのドーパメラニン生成量を求めた。

測定結果を、試料無添加の培地を用いたコントロールの値とともに表３に示す。

表３より明らかなように、ガガイモ科カモメヅル属植物抽出物を添加した培地を用いた場合には、メラニン産生量の低下が認められた。このことより、ガガイモ科カモメヅル属植物抽出物は、優れたチロシナーゼ活性阻害作用を有することがわかった。

以上のことから、ガガイモ科カモメヅル属植物抽出物は、優れた美白作用を有することが明らかとなった。

＜抗酸化作用（ラジカル消去作用）の評価１＞
ガガイモ科カモメヅル属植物抽出物の抗酸化作用の評価を、以下に示す方法により行った。試料として、調製方法２により製造したガガイモ科カモメヅル属植物抽出物を用いた。

各試料を、５０質量％エタノールを用いて濃度調整して試料溶液とし、表５に示す濃度となるように９６穴マイクロプレートに１００μＬずつ添加した。そこへ、０．２ｍＭの１，１−ジフェニル−２−ピクリルヒドラジカル（ＤＰＰＨ）エタノール溶液を１００μＬずつ添加し、良く混合後、室温、暗所にて２４時間静置した。その後、ＤＰＰＨラジカルに由来する５１６ｎｍの吸光度を測定した。試料を添加しなかった場合のコントロールの吸光度を（Ａ）、試料を添加した場合の吸光度を（Ｂ）としたとき、ＤＰＰＨラジカルの消去率を式（２）に導入して求めた。測定結果を表４に示す。

式（２）：ラジカル消去率＝｛１−（Ｂ）／（Ａ）｝×１００（％）

表４より明らかなように、ガガイモ科カモメヅル属植物抽出物には優れたＤＰＰＨラジカルの消去効果が認められた。このことより、ガガイモ科カモメヅル属植物抽出物は、優れたラジカルの消去作用を有することがわかった。

＜抗酸化作用（スーパーオキサイドアニオン消去作用）の評価２＞
ガガイモ科カモメヅル属植物抽出物のスーパーオキサイドアニオン消去作用の評価を、以下に示す方法により行った。試料として、調製方法２により製造したガガイモ科カモメヅル属植物抽出物を用いた。

０．２５ｍＭＷＳＴ−１及び１ｍＭＨｙｐｏｘａｎｔｈｉｎｅを含むＨａｎｋｓ（＋）溶液７５μＬに、表６に示す濃度となるようにＨａｎｋｓ（＋）溶液で希釈した試料２５μＬを添加し、ＸａｎｔｈｉｎｅＯｘｉｄａｓｅ２５μＬ（０．００７５Ｕｎｉｔｓ）を加え、３７℃で１５分間反応後、４５０ｎｍの吸光度を測定した。試料が無添加のコントロールの吸光度を（Ａ）、試料を添加したときの吸光度を（Ｂ）としたとき、式（３）の値をスーパーオキサイドアニオン消去率とした。評価結果を表５に示した。

式（３）：消去率＝｛１−（Ｂ）／（Ａ）｝×１００（％）

表５より明らかなように、ガガイモ科カモメヅル属植物抽出物には優れたスーパーオキサイドアニオンの消去効果が認められた。このことより、ガガイモ科カモメヅル属植物抽出物は、優れたスーパーオキサイドアニオンの消去作用を有することがわかった。

以上のことから、ガガイモ科カモメヅル属植物抽出物は、優れた抗酸化作用を有することが明らかとなった。

＜痩身作用（中性脂肪蓄積抑制作用）の評価＞
ガガイモ科カモメヅル属植物抽出物の脂肪細胞における中性脂肪蓄積抑制作用の評価を、以下に示す方法により行った。試料として、調製方法１により製造したガガイモ科カモメヅル属植物抽出物を用いた。

皮下脂肪由来正常ヒト前駆脂肪細胞Ｃｒｙｏ・ＨＰＲＡＤ−ＳＱ（三光純薬株式会社）を、１ウェル当り１．０×１０⁴ 個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地には、ＰＧＭ培地（１０質量％ウシ胎児血清（ＦＢＳ），２ｍＭＬ−Ｇｌｕｔａｍｉｎｅ，１００ｕｎｉｔｓ／ｍＬＰｅｎｉｃｉｌｌｉｎｅ，１００μｇ／ｍＬＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎｅ含有）を用いた。細胞が飽和状態になる直前に表４に示す濃度の試料を添加したＰＧＭ分化用培地（１０μｇ／ｍＬインシュリン，１μＭＤｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ，２００μＭＩｎｄｏｍｅｔｈａｃｉｎ，５００μＭＩｓｏｂｕｔｙｌ−ｍｅｔｈｙｌｘａｎｔｈｉｎｅ含有）に交換し、脂肪細胞への分化誘導を行った。分化誘導開始後、コントロール群が成熟して細胞内に多数の脂肪滴が蓄積されるまで、１０日〜１４日間培養した。細胞を回収後、１０％中性緩衝ホルムアルデヒド液を用いて細胞を固定した。ＰＢＳにて洗浄の後、０．５ｗ／ｖ％オイルレッドＯ溶液を添加し、３７℃で２時間インキュベートした。ＰＢＳにて洗浄の後、メタノールを添加し、色素を抽出した。抽出後、マイクロプレートリーダーより、５５０ｎｍの吸光度を測定した。同時に、濁度として６５０ｎｍの吸光度を測定し、両測定値の差を用いて中性脂肪蓄積量を測定した。

測定結果を、試料無添加の培地を用いたコントロールにおける、中性脂肪蓄積量を１００とした相対値により、表６に示す。

表６より明らかなように、ガガイモ科カモメヅル属植物抽出物を添加した培地では、有意な中性脂肪蓄積抑制効果が認められた。このことから、ガガイモ科カモメヅル属植物抽出物は、優れた中性脂肪蓄積抑制作用を有することが明らかとなった。

以上のことから、ガガイモ科カモメヅル属植物抽出物は、優れた痩身作用を有することが明らかとなった。

＜アルギナーゼ活性促進作用の評価＞
ガガイモ科カモメヅル属植物抽出物のアルギナーゼ活性促進作用の評価を、以下に示す方法により行った。試料として、調製方法１により製造したガガイモ科カモメヅル属植物抽出物を用いた。

ヒト表皮角化細胞ＨａＣａＴを１ウェル当り２．０×１０^４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地には５質量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したダルベッコ改変イーグル培地を用いた。２４時間培養後、表１示す各濃度となるように試料（抽出物）を添加した１．２ｍＭＣａＣｌ_２を含む５質量％ＦＢＳ添加分化誘導培地に交換し、さらに９日間培養した。培地交換は３日に１回のペースで行った。培養上清中に分泌された尿素の定量には、尿素窒素Ｂ−テストワコー（和光純薬）を用いた。アルギナーゼはアルギニンを加水分解し、オルニチン、尿素を生成する。尿素はウレアーゼによってアンモニアに分解され、アンモニアはペンタシアノニトロリル鉄（ＩＩＩ）酸ナトリウムニ水和物存在下でサリチル酸、次亜塩素酸と反応しインドフェノールとなる。アルカリ性条件下、マイクロプレートリーダーでインドフェノールに由来する５７０ｎｍの吸光度を測定し、尿素濃度を求め、アルギナーゼ活性の定量を行った。ＰＩＥＲＣＥ社製ＢＣＡＰｒｏｔｅｉｎＡｓｓａｙＫｉｔにてタンパク量を測定し、単位タンパク量当りのアルギナーゼ活性を求めた。

評価結果を、試料無添加のコントロールにおける単位タンパク量当りのアルギナーゼ活性を１００とした時の相対値として、表７に示す。

表７より明らかなように、ガガイモ科カモメヅル属植物抽出物を添加した培地では、有意なアルギナーゼ活性促進効果が認められた。このことから、ガガイモ科カモメヅル属植物抽出物は、優れたアルギナーゼ活性促進作用を有することが明らかとなった。

続いて、上記各調製方法で得られたガガイモ科カモメヅル属植物抽出物を配合した皮膚外用剤の処方例を示す。

［実施例１］乳液
（１）スクワラン１０．０（質量％）
（２）メチルフェニルポリシロキサン４．０
（３）水素添加パーム核油０．５
（４）水素添加大豆リン脂質０．１
（５）モノステアリン酸ポリオキシエチレン
ソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．）１．３
（６）モノステアリン酸ソルビタン１．０
（７）グリセリン４．０
（８）パラオキシ安息香酸メチル０．１
（９）カルボキシビニルポリマー０．１５
（１０）精製水１００とする残部
（１１）アルギニン（１質量％水溶液）２０．０
（１２）ガガイモ科カモメヅル属植物抽出物［調製方法１］５．０
製法：（１）〜（６）の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方（７）〜（１０）の水相成分を８０℃にて加熱溶解する。これに前記油相成分を攪拌しながら加え、ホモジナイザーにより均一に乳化する。乳化終了後、冷却を開始し、（１１）と（１２）を順次加え、均一に混合する。

［実施例２］化粧水
（１）エタノール１５．０（質量％）
（２）ポリオキシエチレン（４０Ｅ．Ｏ．）硬化ヒマシ油０．３
（３）香料０．１
（４）精製水１００とする残部
（５）クエン酸０．０２
（６）クエン酸ナトリウム０．１
（７）グリセリン１．０
（８）ヒドロキシエチルセルロース０．１
（９）ガガイモ科カモメヅル属植物抽出物［調製方法３］１．０
製法：（１）に（２）及び（３）を溶解する。溶解後、（４）〜（８）を順次添加した後、十分に攪拌し、（９）を加え、均一に混合する。

［実施例３］クリーム
（１）スクワラン１０．０（質量％）
（２）ステアリン酸２．０
（３）水素添加パーム核油０．５
（４）水素添加大豆リン脂質０．１
（５）セタノール３．６
（６）親油型モノステアリン酸グリセリン２．０
（７）グリセリン１０．０
（８）パラオキシ安息香酸メチル０．１
（９）アルギニン（２０質量％水溶液）１５．０
（１０）精製水１００とする残部
（１１）カルボキシビニルポリマー（１質量％水溶液）１５．０
（１２）ガガイモ科カモメヅル属植物抽出物［調製方法１］５．０
製法：（１）〜（６）の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方（７）〜（１０）の水相成分を８０℃にて加熱溶解する。これに前記油相成分を攪拌しながら加え、ホモジナイザーにより均一に乳化する。乳化終了後、（１１）を加え、冷却を開始し、４０℃にて（１２）を加え、均一に混合する。

［実施例４］美容液
（１）精製水１００とする残部(質量％)
（２）グリセリン１０．０
（３）ショ糖脂肪酸エステル１．３
（４）カルボキシビニルポリマー（１質量％水溶液）１７．５
（５）アルギン酸ナトリウム(１質量％水溶液) １５．０
（６）モノラウリン酸ポリグリセリル１．０
（７）マカデミアナッツ油脂肪酸フィトステリル３．０
（８）Ｎ−ラウロイル−Ｌ−グルタミン酸
ジ（フィトステリル−２−オクチルドデシル）２．０
（９）硬化パーム油２．０
（１０）スクワラン（オリーブ由来）１．０
（１１）ベヘニルアルコール０．７５
（１２）ミツロウ１．０
（１３）ホホバ油１．０
（１４）１，３−ブチレングリコール１０．０
（１５）Ｌ−アルギニン（１０重量％水溶液）２．０
（１６）ガガイモ科カモメヅル属植物抽出物［調製方法２］３．０
製法：（１）〜（６）の水相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。一方、（７）〜（１４）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。次いで、上記水相成分に油相成分を添加して予備乳化を行った後、ホモミキサーにて均一に乳化する。乳化終了後に冷却を開始し、５０℃にて（１５）を加える。さらに４０℃まで冷却し、（１６）を加え、均一に混合する。

［実施例５］水性ジェル
（１）カルボキシビニルポリマー０．５（質量％）
（２）精製水１００とする残部
（３）水酸化ナトリウム（１０質量％水溶液）０．５
（４）エタノール１０．０
（５）パラオキシ安息香酸メチル０．１
（６）香料０．１
（７）ガガイモ科カモメヅル属植物抽出物［調製方法２］０．５
（８）ポリオキシエチレン（６０Ｅ．Ｏ．）硬化ヒマシ油１．０
製法：（１）を（２）に加え、均一に攪拌した後、（３）を加える。均一に攪拌した後、（４）に予め溶解した（５）を加える。均一に攪拌した後、予め混合しておいた（６）〜（８）を加え、均一に攪拌混合する。

［実施例６］クレンジング料
（１）スクワラン８１．０（質量％）
（２）イソステアリン酸ポリオキシエチレングリセリル１５．０
（３）精製水１００とする残部
（４）ガガイモ科カモメヅル属植物抽出物［調製方法３］４．０
製法：（１）と（２）を均一に溶解する。これに、（３）と（４）を順次加え、均一に混合する。

［実施例７］洗顔フォーム
（１）ステアリン酸１６．０（質量％）
（２）ミリスチン酸１６．０
（３）親油型モノステアリン酸グリセリン２．０
（４）グリセリン２５．０
（５）水酸化ナトリウム７．５
（６）ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン１．０
（７）精製水１００とする残部
（８）ガガイモ科カモメヅル属植物抽出物［調製方法３］０．１
製法：（１）〜（４）の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方（５）〜（７）の水相成分を８０℃にて加熱溶解し、油相成分と均一に混合撹拌する。冷却を開始し、４０℃にて（８）を加え、均一に混合する。

［実施例８］メイクアップベースクリーム
（１）スクワラン１０．２(質量％)
（２）セタノール２．０
（３）グリセリントリ−２−エチルヘキサン酸エステル２．５
（４）親油型モノステアリン酸グリセリル１．０
（５）プロピレングリコール１１．０
（６）ショ糖脂肪酸エステル１．３
（７）精製水１００とする残部
（８）酸化チタン１．０
（９）ベンガラ０．１
（１０）黄酸化鉄０．４
（１１）香料０．１
（１２）ガガイモ科カモメヅル属植物抽出物［調製方法２］３．０
製法：（１）〜（４）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。一方、（５）〜（７）の水相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解し、これに（８）〜（１０）の顔料を加え、ホモミキサーにて均一に分散させる。この水相成分に前記油相成分を加え、ホモミキサーにて乳化する。乳化終了後に冷却を開始し、４０℃にて（１１）と（１２）の成分を加え、均一に混合する。

［実施例９］乳液状ファンデーション
（１）メチルポリシロキサン２．０(質量％)
（２）スクワラン５．０
（３）ミリスチン酸オクチルドデシル５．０
（４）セタノール１．０
（５）ポリオキシエチレン(２０Ｅ．Ｏ．)
ソルビタンモノステアリン酸エステル１．３
（６）モノステアリン酸ソルビタン０．７
（７）１，３−ブチレングリコール８．０
（８）キサンタンガム０．１
（９）パラオキシ安息香酸メチル０．１
（１０）精製水１００とする残部
（１１）酸化チタン９．０
（１２）タルク７．４
（１３）ベンガラ０．５
（１４）黄酸化鉄１．１
（１５）黒酸化鉄０．１
（１６）香料０．１
（１７）ガガイモ科カモメヅル属植物抽出物［調製方法１］０．５
製法：（１）〜（６）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。一方、（７）〜（１０）の水相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解し、これに（１１）〜（１５）の顔料を加え、ホモミキサーにて均一に分散する。油相成分を加え、乳化を行う。乳化終了後に冷却を開始し、４０℃にて（１６）と（１７）の成分を順次加え、均一に混合する。

［実施例１０］油中水型エモリエントクリーム
（１）流動パラフィン３４．０(質量％)
（２）マイクロクリスタリンワックス２．０
（３）ワセリン５．０
（４）ジグリセリンオレイン酸エステル５．０
（５）塩化ナトリウム１．３
（６）塩化カリウム０．１
（７）プロピレングリコール３．０
（８）１，３−ブチレングリコール５．０
（９）パラオキシ安息香酸メチル０．１
（１０）ガガイモ科カモメヅル属植物抽出物［調製方法１］３．０
（１１）精製水１００とする残部
（１２）香料０．１
製法：（５）と（６）を（１１）の一部に溶解して５０℃とし、５０℃に加熱した（４）に撹拌しながら徐々に加える。これを混合した後、７０℃にて加熱溶解した（１）〜（３）に均一に分散する。これに（７）〜（１０）を（１１）の残部に７０℃にて加熱溶解したものを撹拌しながら加え、ホモミキサーにて乳化する。乳化終了後に冷却を開始し、４０℃にて（１２）を加え、均一に混合する。

［実施例１１］パック
（１）精製水１００とする残部(質量％)
（２）ポリビニルアルコール１２．０
（３）エタノール１７．０
（４）グリセリン９．０
（５）ポリエチレングリコール（平均分子量１０００）２．０
（６）ガガイモ科カモメヅル属植物抽出物［調製方法２］１．０
（７）香料０．１
製法：（２）と（３）を混合し、８０℃に加温した後、８０℃に加温した（１）に溶解する。均一に溶解した後、（４）と（５）を加え、攪拌しながら冷却を開始する。４０℃まで冷却し、（６）と（７）を加え、均一に混合する。

［実施例１２］入浴剤
（１）香料０．３(質量％)
（２）ガガイモ科カモメヅル属植物抽出物［調製方法３］３．０
（３）炭酸水素ナトリウム５０．０
（４）硫酸ナトリウム４６．７
製法：（１）〜（４）を均一に混合する。

［実施例１３］ヘアーワックス
（１）ステアリン酸３．０(質量％)
（２）マイクロクリスタリンワックス２．０
（３）セチルアルコール３．０
（４）高重合メチルポリシロキサン２．０
（５）メチルポリシロキサン５．０
（６）ポリ（オキシエチレン・オキシプロピレン）
メチルポリシロキサン共重合体１．０
（７）パラオキシ安息香酸メチル０．１
（８）１，３−ブチレングリコール７．５
（９）アルギニン０．７
（１０）精製水１００とする残部
（１１）ガガイモ科カモメヅル属植物抽出物［調製方法３］２．０
（１２）香料０．１
製法：（１）〜（６）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解後する。一方、（７）〜（１０）の水相成分を７５℃にて加熱溶解し、前記油相成分を加え、ホモミキサーにて乳化する。乳化終了後に冷却を開始し、４０℃にて（１１）と（１２）の成分を加え、均一に混合する。

［実施例１４］ヘアートニック
（１）エタノール５０．０(質量％)
（２）精製水１００とする残部
（３）ガガイモ科カモメヅル属植物抽出物［調製方法１］３．０
（４）香料０．１
製法：（１）〜（４）の成分を混合、均一化する。

＜保湿作用の評価＞
実施例１、３の皮膚外用剤を用いた使用試験を行い、ガガイモ科カモメヅル属植物抽出物の保湿性について評価した。その際、実施例１において配合したガガイモ科カモメヅル属植物抽出物を、５０％質量エタノール水溶液に代えたものを比較例１、実施例３において配合したガガイモ科カモメヅル属植物抽出物を、５０％質量エタノール水溶液に代えたものを比較例２として、同様に使用試験を行った。

男女パネラー１５名を一群として各試料をブラインドにてそれぞれ１か月間使用させ、「感じる」、「どちらともいえない」、「感じない」の三段階で評価した。表８に、各評価を得たパネラー数を示す。

表８より、ガガイモ科カモメヅル属植物抽出物を配合した実施例使用群においては、８０％以上のパネラーに明確な保湿性が感じられることがわかった。このことから、ガガイモ科カモメヅル属植物抽出物は、優れた保湿作用を有することが明らかとなった。

＜トリートメント作用の評価）＞
実施例１、３及び比較例１、２の皮膚外用剤を用いた使用試験を行い、肌荒れ、肌のキメ、肌の透明感について、それらの症状の改善効果を評価した。

各試料について、肌荒れ、肌のキメ、肌の透明感について悩みを持つ２０〜５０才代の男女パネラー２０名を一群とし、ブラインドにてそれぞれ１か月間使用させ、使用前後の皮膚状態の変化を観察して評価した。皮膚状態の指標として、肌荒れ、肌のキメ、肌の透明感について、「改善」、「やや改善」、「変化なし」の三段階で評価した。肌荒れと肌の透明感は目視にて評価し、肌のキメはマイクロスコープを用いて観察した。表９に各評価を得たパネラー数を示す。

表９より、肌荒れ、肌のキメ、肌の透明感について、ガガイモ科カモメヅル属植物抽出物を含有しない比較例１、２使用群においては、半数以上のパネラーに改善が認められなかったが、ガガイモ科カモメヅル属植物抽出物を配合した実施例使用群おいては、７０％以上のパネラーに明確な改善が認められた。このことから、ガガイモ科カモメヅル属植物抽出物は、肌荒れ、肌のキメ、肌の透明感において皮膚症状の改善に優れた効果を有することがわかった。

以上のことから、ガガイモ科カモメヅル属植物抽出物は優れたトリートメント作用を有することが明らかとなった。

Claims

イケマ葉抽出物を有効成分とする保湿剤。
イケマ葉抽出物を有効成分とする痩身剤。
イケマ葉抽出物を有効成分とするアルギナーゼ活性促進剤。