JP5685231B2 - ジアザベンゾ［デ］アントラセン−３−オン化合物、及び、ｐａｒｐの阻害方法 - Google Patents

Description

本発明は、ポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ（「ＰＡＲＰ」）を阻害するジアザベンゾ［デ］アントラセン−３−オン化合物、これらの化合物を含む組成物、並びに、本明細書中に記載の症状の影響を治療、予防及び／又は緩和するためのこれらのＰＡＲＰ阻害剤の使用方法に関する。

ＰＡＲＰ（ＥＣ２．４．２．３０）は、ＰＡＲＳ（ポリ（ＡＤＰ−リボース）合成酵素）又はＡＤＰＲＴ（ＮＡＤ：タンパク質（ＡＤＰ−リボシル）トランスフェラーゼ（重合性））としても知られ、１１６ｋＤａの主要な核タンパク質である。これは主に、ほとんど全ての真核生物に存在する。この酵素によりポリ（ＡＤＰ−リボース）が合成され、これは、ＮＡＤ由来の２００個を超えるＡＤＰ−リボース単位から構成され得る分岐鎖ポリマーである。ポリ（ＡＤＰ−リボース）のタンパク質受容体は、ＤＮＡの一体性維持に直接的又は間接的に関与している。これには、ヒストン、トポイソメラーゼ、ＤＮＡ及びＲＮＡポリメラーゼ、ＤＮＡリガーゼ並びにＣａ^２＋及びＭｇ^＋依存性エンドヌクレアーゼが含まれる。

ＰＡＲＰタンパク質は、多くの組織に、最も顕著には免疫系、心臓、脳及び胚株細胞内に高レベルで発現する。正常な生理学的条件下では、ＰＡＲＰ活性は非常に小さい。しかし、ＤＮＡの損傷によって、ＰＡＲＰは５００倍にまで急激に活性化される。ＰＡＲＰに起因する多くの機能の中でも、主な役割は、ＡＤＰ−リボシル化によるＤＮＡ修復の促進及び多数のＤＮＡ修復タンパク質の調整である。ＰＡＲＰが活性化されると、ＮＡＤレベルが著しく減少する。多くの内因性及び外因性因子がＤＮＡを損傷させてかつＰＡＲＰを活性化させるということが報告されているが、例えばショック、卒中及び炎症において、報告されているｉｎｖｉｖｏでの種々の疾患症状に関与する主な原因は、酸化窒素（ＮＯ）と過酸化物との組み合わせによって形成される過酸化亜硝酸であると考えられる。

また、３−アミノベンズアミドなどのＰＡＲＰ阻害剤は、通常は例えば過酸化水素又はγ線に応答して、ＤＮＡ修復に影響を与えることも知られている（非特許文献１）。特に、Ｃｒｉｓｔｏｖａｏらは、過酸化水素で処理された白血球内においてＤＮＡ鎖のＰＡＲＰ依存性回復が停止することを観察した。

核酵素ポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ−１（ＰＡＲＰ−１）は、塩基除去修復及び他の細胞プロセスの促進において重要な役割を果たしている。ＰＡＲＰ−１は分子ＤＮＡニックのセンサとして作用し、一重鎖ＤＮＡの切断を検出しかつ適切な修復酵素を集めるということが提唱されている。ＰＡＲＰ−１は、酵素のアミノ末端ＤＮＡ結合ドメイン中の２つのジンクフィンガーを介してＤＮＡ鎖切断部分に結合し、その活性はＤＮＡ結合に依存する。この酵素は、基質ＮＡＤ＋から、ＰＡＲＰ−１自身も含む受容体タンパク質へのＡＤＰ−リボースの移動を触媒するホモダイマーとして作用している。これによって多量の負電荷を帯びたＰＡＲポリマーが形成され、ＤＮＡ鎖及びクロマチンタンパク質の静電的反発が生じて、これにより、損傷した鎖に塩基除去修復複合体が接近してＤＮＡが修復される。鎖切断によって最初に活性化された後はＰＡＲＰ−１はＤＮＡから遊離し、ポリマーはＰＡＲグリコヒドロラーゼにより分解されて、ＰＡＲＰ−１酵素は次のＤＮＡ結合及び活性化において使用することができる（非特許文献２）。

ＰＡＲＰ阻害剤は、放射線増感された低酸素腫瘍細胞において共力剤又は増強剤として有効であることが報告されている。またＰＡＲＰ阻害剤は、放射線療法後の致死性ＤＮＡ損傷からの腫瘍細胞の回復の阻害において、おそらくはそのＤＮＡ修復阻害能に起因して、共力剤として有効であることが報告されている（特許文献１〜３）。

ガン治療に用いるための、及び、虚血や内毒素ストレス後における細胞損傷の抑制に用いるための、化学増強剤でもあり放射線増強剤でもあるＰＡＲＰ阻害剤の開発には、大きな関心が集まっている。特に、強力なＰＡＲＰ−１阻害剤を用いた臨床前研究ではテモゾロマイド細胞傷害性の増強が観察されるが、これは塩基除去修復の阻害及びその後の細胞傷害（Ｎ^７−メチルグアニン及びＮ^３−メチルアデニンの不完全なプロセシングによる）を反映する。現在、一連の臨床前データによって、テモゾロマイドの細胞傷害性は、ＰＡＲＰ阻害剤をｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｉｎ ｖｉｖｏのいずれかで共投与することにより増強されるということが示されている（非特許文献２）。

ＤＮＡメチル化剤であるテモゾロマイドによってＤＮＡ損傷が誘発されるが、この損傷は、Ｏ^６−アルキルグアニンアルキルトランスフェラーゼ（ＡＴａｓｅ）及びポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ−１（ＰＡＲＰ−１）依存性塩基除去修復により修復される。テモゾロマイドは、神経膠腫及び悪性黒色腫の治療において用いられる、経口投与用の単官能性ＤＮＡアルキル化剤である。テモゾロマイドは速やかに吸収され、自発的に分解して、活性モノメチルトリアゼンである５−（３−メチル−１−トリアゼノ）イミダゾール−４−カルボキサミドを形成する。モノメチルトリアゼンからはいくつかのＤＮＡメチル化産物が形成されるが、主な種は、Ｎ^７−メチルグアニン（７０％）、Ｎ^３−メチルアデニン（９％）及びＯ^６−メチルグアニン（５％）である。Ｏ^６−アルキルグアニンアルキルトランスフェラーゼによって修復されない場合、Ｏ^６−メチルグアニンは、ＤＮＡ複製の際にチミンとの誤対合により細胞傷害性を有する。この誤対合は、ミスマッチ修復タンパク質及び除去されたチミンによって、娘鎖上で認識される。しかし、メチル付加物のＡｔａｓｅが媒介する除去によって親鎖中の元のＯ^６−メチルグアニンヌクレオチドが修復されなければ、チミンは再び挿入され得る。チミン除去が繰り返されることにより無駄に時間が経過することによって、かつ、未修復のＯ^６−メチルグアニンヌクレオチドが結合することによって、鎖が切断された状態が持続し、ミスマッチ修復系のＭｕｔＳ分岐によってＧ２−Ｍ細胞周期停止及びアポトーシスの開始についてのシグナルが送られる。テモゾロマイドによって形成される多量のＮ^７−メチルグアニン及びＮ^３−メチルアデニンヌクレオチドアルキル化産物は、塩基除去修復によって迅速に修復される（非特許文献２）。

ＰＡＲＰ阻害剤による化学増感は、テモゾロマイドの場合に制限されない。概して細胞傷害性薬剤は、又は、放射線は、ＰＡＲＰ−１の活性化を誘発する可能性があり、ＰＡＲＰ−１の阻害剤は、化学療法及び放射線照射によるＤＮＡ損傷及び細胞傷害効果を増強する可能性があることが示されている（非特許文献３）。ＤＮＡ損傷剤に応答するＰＡＲＰ−１媒介ＤＮＡ修復によって、腫瘍における薬剤耐性のメカニズムが示され、上記酵素が阻害されると、イオン化放射線の活性及びいくつかの細胞傷害性抗腫瘍剤（テモゾロマイド及びトポテカンを含む）が増強されることが示されている。Ｓｕｔｏらは、特許文献４で、イオン化放射線又は化学療法薬剤が腫瘍細胞に及ぼす致死性効果を増強する際に用いられるいくつかのイソキノリン類を開示している。非特許文献４において、腫瘍細胞をアルキル化剤で併用治療した場合の、ＰＡＲＰ活性の阻害、腫瘍細胞の増殖低下及び顕著な共力剤的効果が開示されている。このことから、ＰＡＲＰ−１は、ＤＮＡを損傷させるガン治療を促進するための非常に重要な治療標的である。

多数の公知のＰＡＲＰ阻害剤が、非特許文献５及び６中に記載されている。しかし、上述した方法において、これらのＰＡＲＰ阻害剤を使用すると望ましくない副作用が同時に起こるため、これらのＰＡＲＰ阻害剤の有効な使用は制限されている。非特許文献７を参照。

上記に加えて、ＰＡＲＰ阻害剤は、以下の国際特許出願に開示されかつ記載されている：特許文献５〜１５。従来技術についての包括的な概説は、Ｌｉ及びＺｈａｎｇにより非特許文献８に報告されている。

腫瘍細胞をイオン化放射線に対して放射線増感させることによるか又は腫瘍細胞を化学療法薬剤の細胞傷害性効果に対して化学増感させることによるかのいずれかによって細胞傷害性剤の致死性を増強するというＰＡＲＰ阻害剤の能力は、とりわけ、特許文献１６〜１８；非特許文献２及び９〜１３；Ｇｒｉｆｆｉｎ Ｒ．Ｊ．らによる特許文献１９；及び、Ｈｅｌｌｅｄａｙ Ｔらによる特許文献１４に報告されている。

末梢神経障害の誘発は、化学治療薬剤による治療が制限される一般的な要因である（非特許文献１４）。化学療法により誘発される神経障害は、多くの従来の化学療法（例、タキソール、ビンクリスチン、シスプラチン）及び新たな化学療法（例、ベルケイド、エポチロン）を用いた場合に生じる副作用である。結果として、用いた物質に応じて、純感覚性かつ痛みを伴う神経障害（シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチンの使用）又は自律神経系の関与を伴う又は伴わない混合型の感覚運動神経障害（ビンクリスチン、タキソール、スラミンの使用）が生じ得る。神経毒性は、用いる薬剤の総蓄積用量及び種類に依存する。単一の薬剤を適用した後でも神経障害が起こる場合もある。症候から完全に回復しない場合もあり、機能を再開するのに長期間の再生が必要とされる。今日まで、化学療法により誘発される神経障害を確実に予防又は治療することができる薬品は存在しない。

副作用が非常に小さく、かつ、イオン化放射線及び／又は化学療法薬剤が腫瘍細胞に及ぼす致死効果を増強する効果的かつ強力なＰＡＲＰ阻害剤が依然として必要とされている。

米国特許第５，０３２，６１７号 米国特許第５，２１５，７３８号 米国特許第５，０４１，６５３号 米国特許第５，１７７，０７５号 国際特許ＷＯ００／４２０４０ 国際特許ＷＯ００／３９０７０ 国際特許ＷＯ００／３９１０４ 国際特許ＷＯ９９／１１６２３ 国際特許ＷＯ９９／１１６２８ 国際特許ＷＯ９９／１１６２２ 国際特許ＷＯ９９／５９９７５ 国際特許ＷＯ９９／１１６４４ 国際特許ＷＯ９９／１１９４５ 国際特許ＷＯ９９／１１６４９ 国際特許ＷＯ９９／５９９７３ 米国特許出願公開第２００２／００２８８１５号 米国特許出願公開第２００３／０１３４８４３号 米国特許出願公開第２００４／００６７９４９号 国際特許ＷＯ９８／３３８０２ 国際特許ＷＯ２００５／０１２３０５

Ｃｒｉｓｔｏｖａｏら，"Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ａ Ｐｏｌｙ（ＡＤＰ−Ｒｉｂｏｓｅ） Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｎ ＤＮＡ Ｂｒｅａｋａｇｅ ａｎｄ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ Ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ Ｈｙｄｒｏｇｅｎ Ｐｅｒｏｘｉｄｅ ａｎｄ γ−Ｒａｄｉａｔｉｏｎ，"Ｔｅｒａｔｏ．，Ｃａｒｃｉｎｏ．，ａｎｄ Ｍｕｔａ．， １６：２１９−２７（１９９６） Ｐｌｕｍｍｅｒ ＥＲら，１１（９）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．３４０２（２００５） Ｋｏｃｋら，４５ Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４９６１（２００２） Ｗｅｌｔｉｎら，"Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ６（５Ｈ）−Ｐｈｅｎａｎｔｈｒｉｄｉｎｏｎｅ， ａｎ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ Ｐｏｌｙ（ＡＤＰ−ｒｉｂｏｓｅ） Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ，ｏｎ Ｃｕｌｔｕｒｅｄ Ｔｕｍｏｒ Ｃｅｌｌｓ"， Ｏｎｃｏｌ．Ｒｅｓ．，６：９，３９９−４０３（１９９４） Ｂａｎａｓｉｋら，"Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ Ｐｏｌｙ（ＡＤＰ−Ｒｉｂｏｓｅ） Ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ ａｎｄ Ｍｏｎｏ（ＡＤＰ−Ｒｉｂｏｓｙｌ）−Ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ"， Ｊ．Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．，２６７：３，１５６９−７５（１９９２） Ｂａｎａｓｉｋら，"Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ａｎｄ Ａｃｔｉｖａｔｏｒｓ ｏｆ ＡＤＰ−Ｒｉｂｏｓｙｌａｔｉｏｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ"，Ｍｏｌｅｃ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１３８，１８５−９７（１９９４） Ｍｉｌａｍら，"Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ Ｐｏｌｙ（Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ Ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ−Ｒｉｂｏｓｅ）Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ； Ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ Ｏｔｈｅｒ Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ Ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ，"Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２３，５８９−９１（１９８４） Ｌｉ ａｎｄ Ｚｈａｎｇ， Ｄｒｕｇｓ ２００１，４（７）： ８０４−８１２（ＰｈａｒｍａＰｒｅｓｓ Ｌｔｄ ＩＳＳＮ １３６９−７０５６） Ｗｈｉｔｅ ＡＷら，１４ Ｂｉｏｏｒｇ．＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ Ｌｅｔｔｓ．２４３３（２００４） Ｃａｎｏｎ Ｋｏｃｈ ＳＳら，４５ Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４９６１（２００２） Ｓｋａｌｉｔｓｋｙ ＤＪら，４６ Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２１０（２００３） Ｆａｒｍｅｒ Ｈら，４３４ Ｎａｔｕｒｅ ９１７（１４ Ａｐｒｉｌ ２００５） Ｔｉｋｈｅ ＪＧら，４７ Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．５４６７ （２００４） Ｑｕａｓｔｈｏｆｆ ａｎｄ Ｈａｒｔｕｎｇ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，２４９，９−１７（２００２）

（発明の要旨）
本発明は、ポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ（「ＰＡＲＰ」）を阻害するジアザベンゾ［デ］アントラセン−３−オン化合物、これらの化合物を含む組成物、並びに、本明細書中に記載の症状の影響を治療、予防及び／又は緩和するためのこれらのＰＡＲＰ阻害剤の使用方法を提供する。

また、本発明は、
以下のグループＩの化合物から選択されるジアザベンゾ［デ］アントラセン−３−オン化合物：

：並びに、その医薬品に許容される塩、水和物、エステル、溶媒和物及びこれらの混合物
を提供する。

また、本発明は、（ｉ）治療上有効量のグループＩの化合物及び（ｉｉ）医薬品に許容される担体を含む医薬組成物にも関する。

本発明は、ポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）のｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏでのポリメラーゼ活性を阻害する化合物、並びに：開示された化合物を含む組成物を提供する。

本発明は、溶液、細胞、組織、器官又は器官系で、ポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）のｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏでのポリメラーゼ活性を阻害、制限及び／又は制御する方法を提供する。一実施形態において、本発明は、ヒトなどの哺乳類において、局所的又は全身的でのいずれかでＰＡＲＰ活性を制限又は阻害する方法を提供する。

本発明は、ＰＡＲＰ産生の増加により悪化するか又はＰＡＲＰ産生の増加に関与する疾患、症候群及び／又は症状の治療及び／又は予防方法を提供する。これらの方法は、本発明の化合物を、上記治療又は予防を必要とするヒトの細胞、組織、器官又は器官系に適用又は投与することを含む。

他の実施形態において、本発明の化合物及び組成物は、ヒトなどの動物において壊死又はアポトーシス、大脳虚血及び灌流損傷又は神経変性疾患による細胞の損傷又は細胞死を治療又は予防するのに用いることができる。

他の実施形態において、本発明の化合物及び組成物は、細胞の寿命及び増殖能力を拡張するのに用いることができる、これに関連する疾患を治療又は予防するのに用いることができる。

他の実施形態において、本発明は、ガンの影響を治療若しくは予防若しくは緩和する方法、並びに／又は、腫瘍細胞若しくは低酸素腫瘍細胞を放射線増感させて腫瘍細胞の放射線療法に対する感受性を高めることによって、放射線療法後の非常に致死性の高いＤＮＡ損傷から腫瘍細胞が回復するのを妨げる方法に用いることができる。この実施形態の方法は、腫瘍細胞を特異的かつ優先的に放射線増感することによって、腫瘍細胞の放射線療法に対する感受性を非腫瘍細胞よりも高めることに関する。

また、本発明は、イオン化放射線及び／又は化学療法薬剤の腫瘍細胞への細胞傷害性効果を増強することにより、ガンの影響を治療、予防及び／又は緩和するためのグループＩのジアザベンゾ［デ］アントラセン−３−オン化合物を提供する。

一実施形態において、本発明は、
ガン及び／又は腫瘍を治療するための化学増感方法であって、
腫瘍又はガン細胞を、グループＩの細胞傷害性効果を有するジアザベンゾ［デ］アントラセン−３−オン化合物と接触させること、及び、腫瘍又はガン細胞を、さらに抗ガン剤と接触させることを含む
ことを特徴とする方法
を提供する。

本発明は、
哺乳類、特にヒトにおいてガンを治療するための化学増感方法であって、
哺乳類に、グループＩから選択されるジアザベンゾ［デ］アントラセン−３−オン化合物を投与することを含む
ことを特徴とする方法
を提供する。

本発明の一実施形態において、本発明の化学増感方法に用いられる化合物は以下である。

他の実施形態において、本発明は、第１の用量の少なくとも１つのグループＩの化合物が、それを必要とする患者に単回で又は繰り返して投与され、有効量の化学増感を提供できる時間の経過後、引き続いて、第２の用量の少なくとも１つの化学療法薬剤が、上記患者に単回又は繰り返して投与される、化学増感方法を提供する。

他の実施形態において、本発明は、医薬品に許容される遊離塩基、塩、水和物、エステル、溶媒和物、プロドラッグ、代謝物、立体異性体及びこれらの混合物からなる群より選択される形態の化学増感ジアザベンゾ［デ］アントラセン−３−オン誘導体を含む医薬調製物を提供する。他の実施形態によれば、医薬調製物は、医薬品に許容される担体、及び、必要に応じて化学療法薬剤をさらに含む。そのような化学療法薬剤の例を以下に記載するが、これらに限定されない。

本発明の他の実施形態によれば、化学増感化合物及び化学療法薬剤は、実質的に同時に投与される。

本発明の他の実施形態によれば、化学療法薬剤は、テモゾロマイド、アドリアマイシン、カンプトテシン、カルボプラチン、シスプラチン、ダウノルビシン、ドセタキセル、ドキソルビシン、インターフェロン（α，β，γ）、インターロイキン２、イリノテカン、パクリタキセル、タキソイド、ダクチノマイシン、ダノルビシン（ｄａｎｏｒｕｂｉｃｉｎ）、４’−デオキシドキソルビシン、ブレオマイシン、ピルカマイシン（ｐｉｌｃａｍｙｃｉｎ）、マイトマイシン、ネオマイシン及びゲンタマイシン、エトポシド、４−ＯＨシクロフォスファミド、白金配位錯体、トポテカン、その治療上有効なアナログ及び誘導体、並びに、これらの混合物からなる群より選択される。好ましい態様によれば、化学療法薬剤はテモゾロマイドである。

一実施形態によれば、本発明は、グループＩから選択される化学増感有効量の少なくとも１つのジアザベンゾ［デ］アントラセン−３−オン化合物を含む医薬組成物を提供する。他の態様において、医薬組成物は以下を含む。

本発明の化合物は、副作用が非常に小さく、かつ、イオン化放射線及び／又は化学療法薬剤が腫瘍細胞に及ぼす致死効果を増強する効果的かつ強力なＰＡＲＰ阻害剤としての効果を奏する。

経口用化合物４ｉ＋ＴＭＺによる、脳内に黒色腫を有するマウスの生存率の増大 Ｂ６Ｄ２Ｆ１マウスにおけるＢ１６皮下黒色腫に対する化合物４ｉ＋ＴＭＺの効果

（発明の詳細な説明）
定義
本発明は、動物又は哺乳類において本明細書中に記載のいずれかの疾患又は障害を治療するための医薬の製造における本発明の化合物の使用に関する。

本明細書中で用いる「アルキル」は、指定された数の炭素原子を含む分岐鎖又は非分岐鎖の飽和炭化水素鎖を意味する。例えば、Ｃ_１−Ｃ_６直鎖又は分岐鎖アルキル炭化水素鎖は、１〜６個の炭素原子を含み、特に示さない限り、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシルなどの置換基が挙げられるが、これらに限定されない。

「アルケニル」は、指定された数の炭素原子を含む分岐鎖又は非分岐鎖の不飽和炭化水素鎖を意味する。例えば、Ｃ_２−Ｃ_６直鎖又は分岐鎖アルケニル炭化水素鎖は、少なくとも１つの二重結合を有する２〜６個の炭素原子を有し、特に示さない限り、例えば、エテニル、プロペニル、イソプロペニル、ブテニル、イソブテニル、ｔｅｒｔ−ブテニル、ｎ−ペンテニル、ｎ−ヘキセニルなどの置換基が挙げられるが、これらに限定されない。

「アルコキシ」は、基−ＯＲ（式中、Ｒは、本明細書中で定義するアルキルである）を意味する。また、Ｒは、１〜６個の炭素原子を含む分岐鎖又は非分岐鎖飽和炭化水素鎖であってもよい。

本明細書中で接頭語として用いる「シクロ」は、閉環により特徴付けられる構造をいう。

「ハロ」は、特に示さない限り、少なくとも１つのフルオロ、クロロ、ブロモ又はヨード部位を示す。

「アミノ」化合物は、アミン（ＮＨ_２）及び置換されたアミノを含む。

「Ａｒ」、「アリール」又は「ヘテロアリール」は、置換された又は未置換の、特に環状又は縮合環式環である部位を意味し、単環式、二環式又は三環式の炭素環式又はヘテロ環式環が挙げられ、上記環は、１〜５個の位置が未置換であるか又は次のもので置換されている：ハロ、ハロアルキル、ヒドロキシル、ニトロ、トリフルオロメチル、Ｃ_１−Ｃ_６直鎖又は分岐鎖アルキル、Ｃ_２−Ｃ_６直鎖又は分岐鎖アルケニル、Ｃ_１−Ｃ_６アルコキシ、Ｃ_２−Ｃ_６アルケニルオキシ、フェノキシ、ベンジルオキシ、アミノ、チオカルボニル、エステル、チオエステル、シアノ、イミノ、アルキルアミノ、アミノアルキル、スルフヒドリル、チオアルキル及びスルホニル：ここで、環の大きさはそれぞれ５〜８員である：ヘテロ環式環は、Ｏ、Ｎ又はＳからなる群より選択される１〜４個のヘテロ原子を含む：芳香族又は第三級アルキルアミンは、必要に応じて、対応するＮ−オキシドに酸化される。ヘテロアリールは、他の環に結合していても、上記環のヘテロ原子及び／又は炭素原子を介して置換されていてもよい。アリール又はヘテロアリール部位には、フェニル、ベンジル、ナフチル、ピロリル、ピロリジニル、ピリジニル、ピリミジニル、プリニル、キノリル、イソキノリル、フリル、チオフェニル、イミダゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、ピラゾリル及びチエニルが挙げられるが、これらに限定されない。

「フェニル」には、必要に応じて以下からなる群より選択される置換基でモノ置換又は複数置換された全ての可能な異性体フェニル基を含む：アミノ、トリフルオロメチル、Ｃ_１−Ｃ_６直鎖又は分岐鎖アルキル、Ｃ_２−Ｃ_６直鎖又は分岐鎖アルケニル、カルボニル、チオカルボニル、エステル、チオエステル、アルコキシ、アルケノキシ、シアノ、ニトロ、イミノ、アルキルアミノ、アミノアルキル、スルフヒドリル、チオアルキル、スルホニル、ヒドロキシ、ハロ、ハロアルキル、ＮＲ_２（式中、Ｒ_２は、水素、（Ｃ_１−Ｃ_６）直鎖又は分岐鎖アルキル、（Ｃ_３−Ｃ_６）直鎖又は分岐鎖アルケニル又はアルキニル、及び、（Ｃ_１−Ｃ_４）架橋アルキル（上記架橋アルキルは、ＮＲ_１の窒素から出発して、上記アルキル又はアルケニル鎖の炭素原子のうち１つで終結するヘテロ環式環を形成し、ここで、上記ヘテロ環式環は、必要に応じてＡｒ基に縮合する）からなる群より選択される）。

必要に応じて少なくとも１つのヘテロ原子を含むシクロアルキルには、Ｃ_５又はＣ_６環などの飽和Ｃ_３−Ｃ_８環が挙げられ、ここで、Ｏ、Ｎ、Ｓから選択される１〜４個のヘテロ原子が上記環の炭素原子を必要に応じて置換していてもよい。必要に応じて少なくとも１つのヘテロ原子を含むシクロアルキルは、上記のように、少なくとも１つの５員又は６員のアリール又はヘテロアリールで置換されても、あるいは、これに縮合していてもよい。ヘテロ原子を含むその他のシクロアルキルには、ピロリジニル、イミダゾリジニル、ピラゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、モルホリノ及びチオモルホリノが挙げられる。

用語「神経変性疾患」には、アルツハイマー病、パーキンソン病及びハンチントン病が挙げられるが、これらに限定されない。

用語「神経性傷害」は、神経組織に対する任意の損傷及びそれから生じる任意の障害又は死を意味する。神経性傷害の原因は、代謝性、毒性、神経毒性、医原性、熱的又は化学的なものがあり、虚血、低酸素症、脳血管傷害、外傷、手術、圧力、脳圧排（ｍａｓｓ ｅｆｆｅｃｔ）、出血、放射線、血管攣縮、神経変性疾患、感染、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ミエリン化／脱ミエリン化プロセス、痙攣、認知障害、グルタミン酸異常及びそのいずれかの副作用が挙げられるが、これらに限定されない。

用語「神経保護性」は、神経性傷害を低減、停止又は緩和する効果、及び、神経性傷害に罹患した神経組織を保護、蘇生又は復活させる効果を意味する。

用語「神経変性の予防」は、神経変性疾患の予防、及び、神経変性疾患に既に罹患した又はその症候を有する患者におけるさらなる神経変性の予防を含む。

用語「治療」は、以下を意味する：
（ｉ）疾患、障害及び／又は症状に罹っているかもしれないが、未だ罹患していると診断されていない動物において疾患、障害又は症状が起こるのを予防すること；
（ｉｉ）疾患、障害又は症状を阻害する、すなわち、その進行を止めること；及び
（ｉｉｉ）疾患、障害又は症状を緩和する、すなわち、疾患、障害及び／又は症状の後退を生じさせること。

用語「虚血損傷及び灌流損傷及び神経変性疾患から生じる神経系組織の損傷」には、血管卒中並びに全身及び局所的虚血において見られる神経毒性による損傷などの損傷が挙げられる。

用語「虚血」は、動脈血流入の閉塞による局在化した組織貧血に関する。全身虚血は、脳全体への血流が一定の期間にわたって停止する条件下で起こり、心停止から生じ得るものなどである。局所虚血は、脳の一部が、その正常な血液供給が欠乏している条件下で起こり、大脳血管の血栓塞栓性閉塞、外傷性の頭部損傷、浮腫及び脳腫瘍から生じ得る。

用語「心血管疾患」は、心筋梗塞、狭心症、血管又は心筋虚血、及び、当業者に知られているであろう関連症状に関し、心臓又は脈管構造の不全又は組織損傷が挙げられ、特に、ＰＡＲＰ活性化に関する組織損傷が挙げられるが、これに限定されない。

本明細書中で用いる用語「放射線増感剤」は、治療上有効な量で動物に投与して、電磁放射線に放射線増感させる細胞の感度を増大させるような、かつ／又は、電磁放射線で治療可能な疾患の治療を促進するような、低分子量分子などの分子であると定義される。電磁放射線で治療可能な疾患には、新生物疾患、良性及び悪性腫瘍、並びにガン細胞が挙げられる。本明細書中に列挙されていない他の疾患の電磁放射線治療もまた、本発明で意図される。本明細書中で用いる用語「電磁放射線」及び「放射線」には、１０^−２０〜１０^０メートルの波長を有する放射線が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の好ましい実施形態は、γ線（１０^−２０〜１０^−１３ｍ）、Ｘ線（１０^−１１〜１０^−９ｍ）、紫外線（１０ｎｍ〜４００ｎｍ）、可視光線（４００ｎｍ〜７００ｎｍ）、赤外線（７００ｎｍ〜１．０ｍｍ）又はマイクロ波放射線（１ｍｍ〜３０ｃｍ）の電磁放射線を用いる。

本明細書中で用いる用語「化学増感剤」は、化学療法薬剤の抗腫瘍活性を増強する本発明の化合物の能力を意味する。そのような化学増感は、例えば、所定用量の化学療法薬剤の腫瘍増殖遅延若しくは停止効果を増大させる際に、又は、用量を減らしても抗腫瘍効力を維持できることによって化学療法薬剤の副作用特性を改善する際に、有用である。

（本発明の医薬用途）
本発明は、核酵素ポリ（アデノシン５’−ジホスホ−リボース）ポリメラーゼ［「ポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ」又は「ＰＡＲＰ」、ＡＤＰＲＴ（ＮＡＤ：タンパク質（ＡＤＰ−リボシルトランスフェラーゼ（重合性）））、ｐＡＤＰＲＴ（ポリ（ＡＤＰ−リボース）トランスフェラーゼ）及びＰＡＲＳ（ポリ（ＡＤＰ−リボース）合成酵素）とも呼ばれる］を阻害するための化合物、方法及び医薬組成物を提供する。さらに、本発明は、壊死又はアポトーシスに起因する細胞の損傷又は死；例えば、大脳虚血性卒中、頭部外傷又は脊椎損傷などの、虚血損傷及び再灌流損傷から生じる神経系組織の損傷；例えば、パーキンソン病又はアルツハイマー病及び多発性硬化症などの、神経学的障害及び神経変性疾患を予防及び／又は治療するための：血管卒中を予防又は治療するための：例えば、心筋梗塞などの心血管障害を治療又は予防するための：例えば、加齢性筋退化、ＡＩＤＳ及び他の免疫老化疾患、関節炎、アテローム性動脈硬化、毛細血管拡張性運動失調症、悪液質、ガン、複製老化に関与する骨格筋の変性疾患、糖尿病（真性糖尿病など）、炎症性腸障害（大腸炎及びクローン病など）、急性膵炎、粘膜炎、出血性ショック、内臓動脈閉塞ショック、多臓器不全（腎臓、肝臓、腎臓、肺、網膜、膵臓及び／又は骨格筋系のいずれかを含むものなど）、急性自己免疫甲状腺炎、筋ジストロフィー、骨関節炎、骨粗鬆症、慢性及び急性疼痛（神経障害性疼痛など）、腎不全、網膜虚血、敗血性ショック（内毒素性ショックなど）、局所的及び／又は遠隔内皮細胞不全（内部依存性弛緩応答及び接着分子の上方調節により認識されるものなど）、炎症及び皮膚加齢などの他の症状及び／又は障害を治療するための：例えば、酸化剤、炎症誘発性媒介物及び／又はサイトカインの産生における一般的な媒介物として、並びに、白血球の浸潤、カルシウムイオンの過負荷、リン脂質の過酸化、一酸化窒素代謝の損傷及び／又はＡＴＰ産生の低減における一般的な媒介物として、細胞の寿命及び増殖能力を拡張するための；老化細胞の遺伝子発現を変えるための：あるいは、低酸素腫瘍細胞を放射線増感させるための、本発明のＰＡＲＰ阻害剤の使用方法を提供する。

本発明の化合物は、壊死又はアポトーシスに起因する細胞の損傷又は死から生じる組織損傷を治療又は予防することができ；局所虚血、心筋梗塞及び灌流損傷に続くものを含む神経系又は心血管組織損傷を緩和することができ；ＰＡＲＰ活性により引き起こされるか又は悪化する種々の疾患及び症状を治療することができ；細胞の寿命又は増殖能力を拡張又は増大させることができ；老化細胞の遺伝子発現を変えることができ；かつ、細胞を放射線増感させることができる。一般に、ＰＡＲＰ活性の阻害は、細胞をエネルギー欠乏から保護し、神経系細胞の場合にはニューロンを不可逆的損傷から保護して、これによって神経を保護する。理論上、ＰＡＲＰの活性化は、フリーラジカル及びＮＯの産生だけでなく、おそらくまだ発見されていない他の細胞傷害（ｅｘｃｉｔｏｔｏｘｉｃ）メカニズムにおいて主要な役割を果たしている可能性があると考えられている。

上記理由により、本発明は、さらに、治療上有効量の上記化合物を、ＰＡＲＰ活性を阻害するのに十分な量で投与して、壊死又はアポトーシスに起因する細胞の損傷又は死を治療又は予防するための、ＮＭＤＡ傷害により媒介されない神経活性に影響を与えるための、ＮＭＤＡ傷害により媒介される神経活性に影響を与えるための、虚血損傷及び灌流損傷、神経学的障害及び神経変性疾患から生じる神経系組織の損傷を治療するための；血管卒中を予防又は治療するための；心血管障害を治療又は予防するための；加齢性筋退化、ＡＩＤＳ及び他の免疫老化疾患、関節炎、アテローム性動脈硬化、毛細血管拡張性運動失調症、悪液質、ガン、複製老化に関与する骨格筋の変性疾患、糖尿病、頭部外傷、免疫老化、炎症性腸障害（大腸炎及びクローン病など）、筋ジストロフィー、骨関節炎、骨粗鬆症、慢性及び／又は急性疼痛（神経障害性疼痛など）、腎不全、網膜虚血、敗血性ショック（内毒素性ショックなど）及び皮膚加齢などの他の症状及び／又は障害を治療するための；細胞の寿命及び増殖能力を拡張するための；老化細胞の遺伝子発現を変えるための；あるいは、低酸素腫瘍細胞を放射線増感させるための、方法に関する。また、本発明は、動物における疾患及び症状の治療であって、上記動物に、治療上有効量の上記で特定した化合物を投与することを含む治療に関する。

本発明は、動物において神経学的障害を治療、予防又は阻害する方法であって、上記動物に、治療上有効量の上記で特定した化合物を投与することを含む、方法に関する。他の実施形態において、神経学的障害は、肉体的損傷又は疾患状態により引き起こされる末梢神経障害、外傷による脳損傷、脊椎への肉体的損傷、脳損傷に関連する脳卒中、局所虚血、全身虚血、灌流損傷、脱髄性疾患及び神経変性に関する神経学的障害からなる群より選択される。他の実施形態は、灌流損傷が血管卒中である場合である。さらに他の実施形態は、末梢神経障害がギラン・バレー症候群により引き起こされる場合である。さらなる他の実施形態は、脱髄性疾患及び神経学的障害が神経変性に関する場合である。他の実施形態は、灌流損傷が血管卒中である場合である。さらに他の好ましい実施形態は、脱髄性疾患が多発性硬化症である場合である。他の実施形態は、神経変性に関連する神経学的障害が、アルツハイマー病、パーキンソン病及び筋萎縮性側索硬化症からなる群より選択される場合である。

他の実施形態は、動物に有効量の本発明の化合物を投与することにより、上記動物においてＰＡＲＰ活性化に関連する狭心症、心筋梗塞、心血管虚血及び心血管組織損傷などの心血管疾患を治療、予防又は阻害する方法である。

また、本発明は、動物において神経学的障害を治療、予防又は阻害するために、壊死又はアポトーシスに起因する細胞の損傷又は死から生じる組織損傷を治療、予防又は阻害するための、ＰＡＲＰ活性を阻害するための本発明の化合物の使用を意図する。

他の実施形態において、神経学的障害は、肉体的損傷又は疾患状態により引き起こされる末梢神経障害、外傷による脳損傷、脊椎への肉体的損傷、脳損傷に関連する脳卒中、局所虚血、全身虚血、灌流損傷、脱髄性疾患及び神経変性に関する神経学的障害からなる群より選択される。

他の実施形態は、灌流損傷が血管卒中である場合である。さらに他の実施形態は、末梢神経障害がギラン・バレー症候群により引き起こされる場合である。さらに他の実施形態は、脱髄性疾患が多発性硬化症である場合である。他の実施形態は、神経変性に関連する神経学的障害が、アルツハイマー病、パーキンソン病及び筋萎縮性側索硬化症からなる群より選択される場合である。

また、本発明は、本明細書中に記載の動物において疾患及び障害のいずれかを治療するための医薬の製造における、本発明の化合物の使用を意図する。

他の実施形態において、疾患又は障害は、神経学的障害である。

他の実施形態において、神経学的障害は、肉体的損傷又は疾患状態により引き起こされる末梢神経障害、外傷による脳損傷、脊椎への肉体的損傷、脳損傷に関連する脳卒中、局所虚血、全身虚血、灌流損傷、脱髄性疾患及び神経変性に関する神経学的障害からなる群より選択される。他の実施形態は、灌流損傷が血管卒中である場合である。他の実施形態は、末梢神経障害がギラン・バレー症候群により引き起こされる場合である。

さらに他の実施形態は、脱髄性疾患が多発性硬化症である場合である。他の実施形態は、神経変性に関連する神経学的障害が、アルツハイマー病、パーキンソン病及び筋萎縮性側索硬化症からなる群より選択される場合である。

本発明の他の実施形態において、急性網膜虚血又は急性血管卒中と診断されたヒトは、すぐに、断続的又は連続的な静脈内投与により、本発明の化合物を、単回用量で又は一組の分割用量の化合物として非経口的に投与される。この最初の治療の後、ヒトが示す神経学的症候に応じて、ヒトは、必要に応じて、同じ又は異なる本発明の化合物を、別の非経口投与用の形態で服用してもよい。本発明の化合物は、化合物を含む生体適合性の生分解性ポリマーマトリックスデリバリー系の埋め込みにより、又は、脳の梗塞領域に化合物を直接投与するための硬膜下ポンプにより、断続的又は連続的投与によって投与することができる。

他の実施形態において、本発明は、例えば酸化剤の産生の一般的な媒介物として、炎症誘発性の媒介物及び／若しくはサイトカインとして、かつ／又は、白血球浸潤、カルシウムイオン過負荷、リン脂質過酸化、酸化窒素代謝の低下及び／若しくはＡＴＰ産生の減少の一般的な媒介物として本発明の化合物を使用する際に、細胞の寿命及び増殖能力を拡張する方法を提供する。

さらに、本発明の方法は、ガンを治療するのに、及び、腫瘍細胞を放射線増感させるのに用いることができる。用語「ガン」は、広く解釈される。本発明の化合物は、「抗ガン剤」であってよく、上記用語は、「抗腫瘍細胞増殖剤」及び「抗新生物剤」もまた包含する。例えば、本発明の方法は、ＡＣＴＨ産生腫瘍、急性リンパ球性白血病、急性非リンパ球性白血病、副腎皮質ガン、膀胱ガン、脳ガン、乳ガン、子宮頚部ガン、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄球性白血病、直腸結腸ガン、皮膚Ｔ−細胞リンパ腫、子宮内膜ガン、食道ガン、ユーイング肉腫、胆嚢ガン、毛様細胞白血病、頭頚部ガン、ホジキンリンパ腫、カポジ肉腫、腎臓ガン、肝臓ガン、肺ガン（小細胞及び／又は非小細胞）、悪性腹膜滲出、悪性胸膜滲出、黒色腫、中皮腫、多発性骨髄腫、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、骨肉腫、卵巣ガン、卵巣（胚細胞）ガン、前立腺ガン、膵臓ガン、陰茎ガン、網膜芽細胞腫、皮膚ガン、軟組織肉腫、扁平上皮細胞ガン腫、胃ガン、精巣ガン、甲状腺ガン、栄養膜新生物、子宮ガン、膣ガン、外陰部ガン及びウィルムス腫瘍などのガンにおける、ガンの治療、及び、腫瘍細胞の放射線増感において有用である。

また、本発明の方法は、有効量のテモゾロマイド及び本発明の化合物を用いる哺乳類のガンの治療であり得る。ガンは、黒色腫、リンパ腫及び多形神経膠芽腫であってよい。

放射線増感剤は、電磁放射線の傷害性効果に対するガン細胞の感度を増大させることが知られている。放射線増感剤の作用様式のいくつかのメカニズムが文献中に提唱されており、以下のものが挙げられる：低酸素細胞放射線増感剤（例、２−ニトロイミダゾール化合物、及びベンゾトリアジンジオキシド化合物）が、低酸素組織の再酸化を促進する及び／又は有害な酸素ラジカルの発生を触媒する；非低酸素細胞の放射線増感剤（例、ハロゲン化ピリミジン類）は、ＤＮＡ塩基のアナログであってよく、ガン細胞のＤＮＡに優先的に取り込まれて、放射線により誘発されるＤＮＡ分子の切断を促進する及び／又は正常なＤＮＡ修復メカニズムを阻止する；並びに、考えられる種々の他の作用メカニズムについて、疾患の治療における放射線増感剤であるとして仮定されている。

多くのガン治療プロトコルは、現在、Ｘ線の電磁放射線照射により活性化される放射線増感剤を用いる。Ｘ線により活性化される放射線増感剤の例には以下のものが挙げられるが、これらに限定されない：メトロニダゾール、ミソニダゾール（ｍｉｓｏｎｉｄａｚｏｌｅ）、デスメチルミソニダゾール（ｄｅｓｍｅｔｈｙｌｍｉｓｏｎｉｄａｚｏｌｅ）、ピモニダゾール（ｐｉｍｏｎｉｄａｚｏｌｅ）、エタニダゾール（ｅｔａｎｉｄａｚｏｌｅ）、ニモラゾール（ｎｉｍｏｒａｚｏｌｅ）、マイトマイシンＣ、ＲＳＵ １０６９、ＳＲ ４２３３、ＥＯ９、ＲＢ ６１４５、ニコチンアミド、５−ブロモデオキシウリジン（ＢＵｄＲ）、５−ヨードデオキシウリジン（ＩＵｄＲ）、ブロモデオキシシチジン、フルオロデオキシウリジン（ＦｕｄＲ）、ヒドロキシウレア、シスプラチン、並びに、その治療上有効なアナログ及び誘導体。

ガンの光学力学治療（ＰＤＴ）は、増感剤の放射線活性化剤などの可視光を用いる。光学力学的放射線増感剤の例には以下が挙げられるが、これらに限定されない：ヘマトポルフィリン誘導体、フォトフリン、ベンゾポルフィリン誘導体、ＮＰｅ６、スズエチオポルフィリン（ｔｉｎ ｅｔｉｏｐｏｒｐｈｙｒｉｎ）ＳｎＥＴ２、フェオボルビド（ｐｈｅｏｂｏｒｂｉｄｅ）−ａ、バクテリオクロロフィル−ａ、ナフタロシアニン、フタロシアニン、亜鉛フタロシアニン、並びに、その治療上有効なアナログ及び誘導体。

放射線増感剤は、治療上有効量の１つ又はそれ以上の以下の他の化合物（これらに限定されない）と組み合わせて投与することができる：放射線増感剤の標的細胞への取り込みを促進する化合物；治療薬、栄養及び／又は酸素の標的細胞への流入を制御する化合物；さらに放射線が存在する場合又は存在しない場合に腫瘍に作用する化学療法薬剤；あるいは、ガン又は他の疾患を治療するための他の治療上有効な化合物。放射線増感剤と組み合わせて用いることができる治療剤の例には以下が挙げられるが、これらに限定されない：５−フルオロウラシル、ロイコボリン、５’−アミノ−５’デオキシチミジン、酸素、カーボジェン（ｃａｒｂｏｇｅｎ）、赤血球輸血、パーフルオロカーボン（例、フルオゾル−ＤＡ（Ｆｌｕｏｓｏｌ−ＤＡ））、２，３−ＤＰＧ、ＢＷ１２Ｃ、カルシウムチャネル阻害剤、ペントキシフィリン、抗脈管新生化合物、ヒドララジン及びＬＢＳＯ。放射線増感剤と組み合わせて用いることができる化学療法薬剤の例には以下が挙げられるが、これらに限定されない：アドリアマイシン、カンプトテシン、カルボプラチン、シスプラチン、ダウノルビシン、ドセタキセル、ドキソルビシン、インターフェロン（α，β，γ）、インターロイキン２、イリノテカン、パクリタキセル、トポテカン、並びに、その治療上有効なアナログ及び誘導体。

本発明は、化学療法により誘発される末梢神経障害の治療手段を提供する。本発明の１つの態様によれば、本発明の化合物は、少なくとも１つの化学療法薬剤の投与の前に又はそれと同時に投与されて、神経障害の症候の進行を予防するか、又は、上記症候の重篤性を緩和する。さらなる態様によれば、本発明の化合物は、少なくとも１つの化学療法薬剤の投与後に投与されて、患者の神経障害の症候を治療するか、又は上記症候の重篤性を緩和する。他の態様において、本発明は、哺乳類において腫瘍細胞の増殖を抑制、遅延又は停止させる方法であって、化学療法薬剤の投与を含み、さらに、グループＩの化合物を、上記化学療法薬剤の抗腫瘍活性を増強するのに十分な量で投与することを含む、方法を提供する。

他の実施形態において、本発明の化合物は、ＰＡＲＰ阻害剤として作用し、他の化学療法薬剤の細胞傷害性効果を化学的に増強することにより、ガンを治療又は予防する。

本発明は、腫瘍細胞へのイオン化放射線の細胞傷害性効果を増強することにより、ガンの影響を治療、予防及び／又は緩和するためのグループＩの化合物、その誘導体、並びに、これらの化合物を含む組成物を提供する。

他の実施形態において、本発明は、化学療法薬剤の腫瘍細胞への細胞傷害性効果を増強することによりガンの影響を治療、予防及び／又は緩和するための、本願明細書に記載の化合物、その誘導体、及び、これらの化合物を含む組成物を提供する。

他の実施形態において、本発明の方法は、ガンを治療するのに、及び、腫瘍細胞を化学増感させるのに用いることができる。本明細書中で用いる用語「ガン」は、広く定義される。本発明の化合物は、「抗ガン剤」の効果を増強することができ、上記用語はまた、「抗腫瘍細胞増殖剤」、「化学療法薬剤」、「細胞増殖抑制剤」、「細胞傷害性剤」及び「抗新生物剤」も包含する。

一実施形態において、本発明の方法は、ＡＣＴＨ産生腫瘍、急性リンパ球性白血病、急性非リンパ球性白血病、副腎皮質ガン、膀胱ガン、脳ガン、乳ガン、子宮頚部ガン、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄球性白血病、直腸結腸ガン、皮膚Ｔ−細胞リンパ腫、子宮内膜ガン、食道ガン、ユーイング肉腫、胆嚢ガン、毛様細胞白血病、頭頚部ガン、ホジキンリンパ腫、カポジ肉腫、腎臓ガン、肝臓ガン、肺ガン（小細胞及び／又は非小細胞）、悪性腹膜滲出、悪性胸膜滲出、黒色腫、中皮腫、多発性骨髄腫、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、骨肉腫、卵巣ガン、卵巣（胚細胞）ガン、前立腺ガン、膵臓ガン、陰茎ガン、網膜芽細胞腫、皮膚ガン、軟組織肉腫、扁平上皮細胞ガン腫、胃ガン、精巣ガン、甲状腺ガン、栄養膜新生物、子宮ガン、膣ガン、外陰部ガン及びウィルムス腫瘍などのガンにおける、ガンの治療、及び、腫瘍細胞の放射線増感又は化学増感に有用である。

本発明は、腫瘍及び／又はガン細胞の治療のための化学増感方法であって、上記ガン細胞をグループＩのジアザベンゾ［デ］アントラセン−３−オン化合物と接触させること、及び、上記ガン細胞を抗ガン剤にさらに接触させることを含む、方法を提供する。

本発明の特定の実施形態には、グループＩに示すジアザベンゾ［デ］アントラセン−３−オン化合物、並びに、その中性及び／又は塩の形態、並びに、適切な場合にはそのエナンチオマー及びラセミ体混合物が挙げられる。

本発明の化合物は１つ又はそれ以上の不斉中心を有していてもよく、従って、立体異性体混合物（ラセミ体及び非ラセミ体）として、あるいは個別のエナンチオマー又はジアステレオマーとして製造することができる。個別の立体異性体は、光学活性な出発物質を用いることによって、又は、合成のいくつかの適切な段階で中間体のラセミ体若しくは非ラセミ体混合物を分割することによって、又は、グループＩの化合物を分割することによって、得ることができる。個別の立体異性体並びに立体異性体の混合物（ラセミ体及び非ラセミ体）は、本発明の範囲に含まれることが理解される。

本発明の化合物は、遊離塩基の形態で、医薬品に許容される塩、医薬品に許容される水和物、医薬品に許容されるエステル、医薬品に許容される溶媒和物、医薬品に許容されるプロドラッグ、医薬品に許容される代謝物の形態で、かつ、医薬品に許容される立体異性体の形態で有用である。これらの形態は全て本発明の範囲内である。

「医薬品に許容される塩」、「水和物」、「エステル」又は「溶媒和物」は、所望の薬理学的活性を有するが生物学的な意味やそれ以外の意味で望ましくない、本発明の化合物の塩、水和物、エステル又は溶媒和物を意味する。有機酸は、塩、水和物、エステル又は溶媒和物、例えば、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、重硫酸塩、スルファミン酸塩、硫酸塩、ナフチル酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、ショウノウ酸塩、ショウノウスルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシルスルホン酸塩、エタンスルホン酸、フマル酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、シュウ酸塩、トシル酸塩及びウンデカン酸塩などを製造するのに用いることができる。無機塩は、塩、水和物、エステル又は溶媒和物、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩及びチオシアン酸塩などの製造に用いることができる。

適切な塩基塩、水和物、エステル又は溶媒和物の例には、アンモニアの水酸化物、炭酸塩及び重炭酸塩、ナトリウム塩、リチウム塩及びカリウム塩などのアルカリ金属塩、カルシウム塩及びマグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩、アルミニウム塩及び亜鉛塩が挙げられる。

また、塩、水和物、エステル又は溶媒和物は、有機塩基によっても形成することができる。本発明の化合物の医薬品に許容される塩基付加塩、水和物、エステル又は溶媒和物の形成に適切な有機塩基には、非毒性でかつ塩、水和物、エステル又は溶媒和物を形成するのに十分に強いものが挙げられる。例えば、そのような有機塩基の分類には、モノ−、ジ−及びトリアルキルアミン、例えば、メチルアミン、ジメチルアミン、トリエチルアミン及びジシクロヘキシルアミン；モノ−、ジ−又はトリヒドロキシアルキルアミン、例えば、モノ−、ジ−及びトリエタノールアミン；アミノ酸、例えば、アルギニン及びリジン；グアニジン；Ｎ−メチル−グルコサミン；Ｎ−メチル−グルカミン；Ｌ−グルタミン；Ｎ−メチル−ピペラジン；モルホリン；エチレンジアミン；Ｎ−ベンジル−フェネチルアミン；（トリヒドロキシメチル）アミノエタンなどを挙げることができる。例えば，“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔ”Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ，６６：１，１−１９（１９７７）を参照されたい。従って、塩基性窒素含有基は、以下に挙げられる剤で４級化することができる：塩化、臭化及びヨウ化メチル、塩化、臭化及びヨウ化エチル、塩化、臭化及びヨウ化プロピル、並びに、塩化、臭化及びヨウ化ブチルなどの低級アルキルハロゲン化物；硫酸ジメチル、ジエチル、ブチル及びジアミルなどの硫酸ジアルキル；塩化、臭化及びヨウ化デシル、塩化、臭化及びヨウ化ラウリル、塩化、臭化及びヨウ化ミリスチル、並びに、塩化、臭化及びヨウ化ステアリルなどの長鎖ハロゲン化物；並びに、ベンジル及びフェネチルブロミドなどのアラルキルハロゲン化物。

塩基性化合物の酸付加塩、水和物、エステル又は溶媒和物は、本発明の化合物の遊離塩基を水溶液又はアルコール水溶液に溶解するか、あるいは、適切な酸又は塩基を含む他の適切な溶媒に溶解し、溶液を蒸発させて塩を単離することにより製造することができる。あるいは、本発明の化合物の遊離塩基を酸と反応させることができ、また、酸基を有する本発明の化合物を塩基と反応させることができ、その結果、反応物が有機溶媒中に得られ、この場合、塩が直接分離するか、又は、溶液を濃縮することによって塩を得ることができる。

「医薬品に許容されるプロドラッグ」は、生体内で変換された後でその薬理学的効果を発揮するような、本発明の化合物の誘導体を意味する。プロドラッグは、化学的安定性の改善、患者受容性及びコンプライアンスの改善、バイオアベイラビリティーの改善、作用期間の延長、器官選択性の改善、処方の改善（例、水溶性の増大）及び／又は副作用（例、毒性）の低減を目的として処方される。プロドラッグは、Ｂｕｒｇｅｒｓ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄ，Ｖｏｌ．１，ｐｐ．１７２−１７８，９４９−９８２（１９９５）に記載のような上記分野で公知の方法を用いて、本発明の化合物から容易に製造することができる。例えば、本発明の化合物は、１つ又はそれ以上のヒドロキシ基又はカルボキシ基をエステルに転化することにより、プロドラッグに変換することができる。

「医薬品に許容される代謝物」は、代謝性変換を受ける薬剤を意味する。体内に入った後、大半の薬剤は、これらの物理的特性及び生物的効果を変化させ得る化学反応の基質である。化合物の極性に概して影響を与えるこれらの代謝性変換は、薬物が体内で分散して体内から排泄される経路を変える。しかし、治療上の効果のために薬物の代謝が必要とされる場合もある。例えば、抗代謝物クラスの抗ガン剤は、ガン細胞に輸送された後で活性型に転化される必要がある。多くの薬剤は何らかの代謝性変換を受けるため、薬物代謝に関与する生化学的反応は多数かつ広範囲にわたる。薬物代謝の主要な部位は肝臓であるが、他の組織が関与する場合もある。

本発明の医薬組成物
また、本発明は、（ｉ）治療上有効量のジアザベンゾ［デ］アントラセン−３−オン誘導体の化合物、及び、（ｉｉ）医薬品に許容される担体を含む医薬組成物に関する。

本発明の化合物の好ましい使用及び投与の実施形態に関する上記論述は、本発明の医薬組成物にも適用される。

本明細書中で用いる用語「医薬品に許容される担体」には、任意の担体、希釈剤、賦形剤、懸濁剤、滑剤、アジュバント、ビヒクル、デリバリーシステム、乳化剤、崩壊剤、吸着剤、保存剤、界面活性剤、着色料、香料又は甘味料が挙げられる。

これらの目的のため、本発明の組成物は、経口的に、非経口的に、吸入スプレー、吸収、吸着により、局所的に、経直腸的に、経鼻的に、経頬的に、経膣的に、脳室内に、医薬品に許容される従来の非毒性担体を含む投与調製物中におけるインプラントレザバーによって、又は、任意の他の簡便な投与形態により、投与することができる。本明細書中で用いる用語、非経口的には、皮下、静脈内、筋肉内、腹膜内、くも膜下腔内、脳室内、胸骨内及び頭蓋内注射又は灌流技術が挙げられる。

非経口的に投与される場合、組成物は、単回投与の無菌の注射可能な形態（溶液、懸濁液又はエマルション）であり、これは、好ましくは、患者の血液と医薬品に許容される担体と等張性である。このような無菌の注射可能な形態の例には、無菌の注射可能な水性又は油性の懸濁液が挙げられる。これらの懸濁液は、上記分野で公知の技術に従って、適切な分散剤又は湿潤剤及び懸濁剤を用いて処方することができる。また、無菌の注射可能な形態は、非毒性の非経口的に受容され得る希釈剤又は溶液中の無菌の注射可能な溶液又は懸濁液、例えば、１，３−ブタンジオール溶液である。許容されるビヒクル及び溶液としては、水、生理食塩水、リンガー液、デキストロース溶液、等張性の塩化ナトリウム溶液及びハンクス溶液を用いることができる。さらに、無菌の不揮発性油が、溶液又は懸濁媒体として通常使用される。この目的のために、任意の無刺激性の不揮発性油を用いることができ、合成モノ又はジグリセリド、コーン油、綿実油、ピーナツ油及びゴマ油が挙げられる。オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル及びオレイン酸などの脂肪酸、並びに、オリーブ油及びヒマシ油、特にこれらのポリオキシエチル化体を含むグリセリド誘導体は、注射可能薬剤の製造に有用である。また、これらの油性溶液又は懸濁液は、長鎖アルコール希釈剤又は分散剤を含んでいてよい。

無菌の生理食塩水は担体として好ましく、化合物は、予期可能なあらゆる用途のための溶液とするのに十分に水溶性である場合が多い。担体は、溶解度、等張性及び化学的安定性を増強する物質、例えば、抗酸化剤、緩衝剤及び保存剤などの添加剤を少量含んでいてもよい。

経鼻又は経頬投与に適切な調製物（自己推進性の粉体払い出し用調製物）は、約０．１％〜約５％ｗ／ｗの、例えば１％ｗ／ｗの活性成分を含んでいてもよい。従って、本発明のヒト用医薬用途の調製物は、活性成分を、医薬品に許容される担体と、必要に応じて他の治療上の成分と共に含む。

経口的に投与される場合、組成物は、通常、上記分野で公知の従来の装置及び技術を用いて、錠剤、カシェ剤、散剤、顆粒、ビーズ、チュアブル錠剤、カプセル、液体、水性懸濁液又は溶液などの単回投与形態又は類似の投与形態に処方されるであろう。このような調製物は、代表的には、固体、半固体又は液体の担体を含む。担体としては、例えば、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アラビアゴム、リン酸カルシウム、鉱油、カカオバター、カカオ油、アルギン酸塩、トラガカント、ゼラチン、シロップ、メチルセルロース、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、ヒドロキシ安息香酸メチル、ヒドロキシ安息香酸プロピル、タルク、ステアリン酸マグネシウムなどが挙げられる。

本発明の組成物は、好ましくは、グループＩの化合物の単回又は分割用量を含むカプセル又は錠剤として投与される。好ましくは、組成物は、単回又は複数回投与用の無菌の溶液、懸濁液又はエマルションとして投与される。錠剤は、ラクトース及びコーンスターチなどの担体、並びに／又は、ステアリン酸マグネシウムなどの滑剤を含んでいてもよい。カプセルは、ラクトース及び乾燥コーンスターチを含む希釈剤を含んでもよい。

錠剤は、活性成分を、必要に応じて１つ又はそれ以上の補助成分と共に圧縮又は成形することにより製造することができる。圧縮錠剤は、適切な機械中で、活性成分を、散剤又は顆粒などの自由に流動する形態で圧縮し、必要に応じて、結合剤、滑剤、不活性な希釈剤、界面活性剤又は分散剤と共に混合することにより製造できる。成形錠剤は、適切な機械で、粉末活性成分と、不活性な液状希釈剤で湿らせた適切な担体との混合物を成形することにより製造することができる。

また、本発明の化合物は、坐剤の形態で経直腸的に投与することができる。これらの組成物は、室温では固体であるが直腸温では液体であり、直腸で融解して薬剤を放出できる適切な非刺激性の賦形剤と共に混合することによって製造することができる。このような材料には、カカオバター、ミツロウ及びポリエチレングリコールが挙げられる。

また、本発明の組成物及び方法は、制御放出技術を適用することができる。このため、例えば、本発明の化合物を、一定期間で制御放出させる目的で疎水性ポリマーマトリックスに配合してもよい。次いで、本発明の組成物は、頻繁に投与しなおす必要なく、長期間にわたってＰＡＲＰ阻害剤の有効濃度を提供するために、固体インプラント、又は、外用パッチに成形することができる。このような制御放出フィルムは上記分野で周知である。特に好ましいものは、経皮デリバリーシステムである。本発明に用いることができる、この目的に一般的に用いられる他の例証されるポリマーには、外用又は内服で用いることができる非分解性エチレン−酢酸ビニルコポリマー、分解性乳酸−グリコール酸コポリマーが挙げることができる。ポリ（ヒドロキシエチルメタクリレート）又はポリ（ビニルアルコール）などの特定のヒドロゲルもまた有用であり得るが、上記したような他のポリマー放出システムより放出サイクルが短い。

好ましい実施形態において、担体は、適当な時間放出特性及び放出動力学を有する固体生分解性ポリマー又は生分解性ポリマーの混合物である。また、本発明の組成物は、本発明の化合物の有効な濃度を、頻繁に投与しなおす必要なく長期間にわたって提供するのに適切な固体インプラントに成形することができる。本発明の組成物は、当業者に公知の任意の適切な様式で生分解性ポリマー又はポリマー混合物に配合することができ、生分解性ポリマーと共に均一なマトリックスを形成することができるか、又は、所定の方法でポリマー中に封入することができるか、又は、固体インプラントに成形することができる。

一実施形態において、生分解性ポリマー又はポリマー混合物を使用して、本発明の医薬組成物を含む軟質の「デポー剤」を形成することができ、これは、流動性の液体として例えば注射により投与できるが、注射部位の周辺の局所で医薬組成物を維持することができるほど十分な粘性を保つ。このように形成されたデポー剤の分解時間は、選択したポリマー及びその分子量に依存して、数日から数年の間で変動し得る。ポリマー組成物を注射可能な形態で用いることにより、切開する必要がなくなる場合がある。いずれにしても、可撓性又は流動性のデリバリー用「デポー剤」は、周囲組織に外傷をほとんどつけずに、体内での空間の形状に適合するであろう。本発明の医薬組成物は治療上有効な量で用いられ、この量は、所望の放出特性、増感効果を発揮するために要する医薬組成物の濃度、及び、治療のために医薬組成物を放出するべき期間の長さに依存するであろう。

本発明の化合物は、組成物中において治療上効果的な量で用いられる。組成物は、滅菌することができ、並びに／又は、保存剤、安定化剤、ウェル化剤若しくは乳化剤、溶液促進剤、浸透圧を調整するための塩及び／若しくは緩衝剤などのアジュバントを含んでいてよい。さらに、これらはまた、本明細書中に記載の特定の化学療法薬剤などの他の治療上有益な物質を含んでいてよいが、これらに限定されない。組成物は、従来の混合、顆粒化又はコーティング方法に従って製造され、約０．１〜７５重量％，好ましくは１〜５０重量％の本発明の化合物を含む。

中枢神経系標的として有効な治療であるためには、本発明の化合物は、末梢から投与された場合に血液−脳関門を容易に通過すべきである。血液−脳関門を通過できない化合物は、脳室経路又は脳への投与に適切な他のデリバリーシステムにより、効果的に投与することができる。

医薬用途には、治療上の効果を達成するために必要な活性成分の量は、特定の化合物、投与の経路、治療される哺乳類及び治療される特定の障害又は疾患により変動するであろう。本明細書中の上記に記載の症状のいずれかに罹患した又はおそらく罹患しているであろう哺乳類についての本発明の化合物又はその薬理学的に許容される塩の適切な全身用量は、活性成分化合物の約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇであり、最も好ましい用量は約１〜約１０ｍｇ／ｋｇである。

しかし、任意の特定の患者についての特定の用量レベルは、用いる特定の化合物の活性、年齢、体重、全身の健康状態、性別、食事、投与時間、排泄速度、薬剤の組み合わせ、及び、治療される特定の疾患の重篤性、及び、投与形態を含む種々の因子に依存するであろうことが理解される。

通常の技術を有する医師又は獣医師は、治療薬が投与される症状の治療の予防又は治療用の化合物の有効量を、容易に決定しかつ処方するであろうことが理解される。例えば、その作業中において、医師又は獣医師は、適切であると考えられる場合には、静脈内ボーラスを用い、続いて、静脈内灌流を実施することができる、及び、非経口的又は経口的に繰り返し投与することができる。活性成分は単独で投与することもできるが、活性成分を調製物として提供することが好ましい。

本発明の組成物を含む投与形態を製造する場合、化合物は、ゼラチン、α化デンプンなどの結合剤；例えば、水素添加植物油、ステアリン酸などの滑剤；ラクトース、マンノース及びスクロースなどの希釈剤；カルボキシメチルセルロース及びナトリウムデンプングリコレートなどの崩壊剤；ポビドン、ポリビニルアルコールなどの懸濁剤；二酸化ケイ素などの吸収剤；メチルパラベン、プロピルパラベン及び安息香酸ナトリウムなどの保存剤；ラウリルスルホン酸ナトリウム、ポリソルベート８０などの界面活性剤；Ｆ．Ｄ．＆Ｃ．染料及びレーキなどの着色料；着香料；及び甘味料などの従来の賦形剤と混合することもできる。

本発明は、本明細書中に記載の動物におけるいずれかの疾患又は障害を治療するための医薬の製造における、グループＩの化合物の使用に関する。一実施形態において、本発明の化合物は、ガンを治療するのに使用される。好ましい実施形態において、本発明の化合物は、イオン化放射線の細胞傷害性効果を増強するのに用いられる。上記実施形態において、本発明の化合物は、放射線増感剤として作用する。別の好ましい実施形態において、本発明の化合物は、化学療法薬剤の細胞傷害性効果を増強するのに用いられる。上記実施形態において、本発明の化合物は、化学増感剤として作用する。

ＤＮＡを損傷するよう作用する医薬品に許容される化学療法薬剤はいずれも、本発明の化学療法薬剤として適切である。特に、本発明は、化学治療上有効量の少なくとも１つの以下の化学療法薬剤の使用を意図するが、これに限定されない：テモゾロマイド、アドリアマイシン、カンプトテシン、カルボプラチン、シスプラチン、ダウノルビシン、ドセタキセル、ドキソルビシン、インターフェロン（α，β，γ）、インターロイキン２、イリノテカン、パクリタキセル、トポテカン、その治療上有効なアナログ及び誘導体、並びに、これらの混合物。好ましい態様によれば、化学療法薬剤はテモゾロマイドである。

本明細書中に含まれる開示は、本発明の化合物及び組成物が、腫瘍及び／又はガン細胞の化学療法薬剤に対する放射線増感及び／又は化学増感などにより、ガンを治療及び／又は予防するのに有用であることを示す。

本発明のジアザベンゾ［デ］アントラセン−３−オン化合物は、米国第６０／６４４，５８４号（その全体は、全ての目的のために参照として援用される）に開示された出発物質及び方法を用いて合成することができる。

本発明の方法及び医薬組成物に用いるＰＡＲＰ阻害剤のうちのいくつかは、刊行物に図示された一般的な合成経路および例示を用いて、有機化学の標準的な技術により、容易に製造することができる。例えば、Ｗｕら， “Ｔｈｅ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ＧＰＩ １８０７８， ａ Ｎｏｖｅｌ Ｗａｔｅｒ Ｓｏｌｕｂｌｅ Ｐｏｌｙ（ＡＤＰ−Ｒｉｂｏｓｅ） Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｉｎ Ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ Ｉｓｃｈｅｍｉａ−Ｒｅｐｒｅｆｕｓｉｏｎ Ｉｎｊｕｒｙ， Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ，“ＦＡＳＥＢ， Ａｐｒｉｌ １１−１５ （２００３）； Ｗｕら，“Ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ａｎｔｉ−Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ＧＰＩ １５４２７， ａ Ｎｏｖｅｌ Ｗａｔｅｒ Ｓｏｌｕｂｌｅ Ｐｏｌｙ（ＡＤＰ−Ｒｉｂｏｓｅ） Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ： Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｗｉｔｈ ＧＰＩ ６１５０， Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ，” ＦＡＳＥＢ， Ａｐｒｉｌ １１−１５ （２００３）； Ｋａｌｉｓｈら， “Ｄｅｓｉｇｎ， Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ＳＡＲ ｏｆ ＰＡＲＰ−１ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ， ＩＳＭＣ Ｍｅｅｔｉｎｇ， Ｂａｒｃｅｌｏｎａ，”Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ ４， ２００２； Ｘｕら，“Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｎｏｖｅｌ Ｐｏｔｅｎｔ Ｐｏｌｙ（ＡＤＰ−Ｒｉｂｏｓｅ） Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ （ＰＡＲＰ） Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ， ２２４^ｔｈ ＡＣＳ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ，” Ｂｏｓｔｏｎ， Ａｕｇｕｓｔ １８−２３ （２００２）； Ｗｉｌｌｉａｍｓら， “Ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ＧＰＩ １５４２７／Ｃ ａｎｄ ＧＰＩ １６５３９／Ｃ， Ｐｏｔｅｎｔ Ｗａｔｅｒ−Ｓｏｌｕｂｌｅ ＰＡＲＰ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ， Ｒｅｄｕｃｅｓ Ｉｎｆａｒｃｔ Ｖｏｌｕｍｅ Ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ Ｐｅｒｍａｎｅｎｔ ａｎｄ Ｔｒａｎｓｉｅｎｔ Ｆｏｃａｌ Ｃｅｒｅｂｒａｌ Ｉｓｃｈｅｍｉａ， Ｓｏｃｅｉｔｙ ｆｏｒ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，” Ｏｒｌａｎｄｏ ＦＬ， Ｏｃｔｏｂｅｒ （２００２）； Ｔｅｎｔｏｒｉ Ｌ，ら，“Ｓｙｓｔｅｍｉｃ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＰＡＲＰ−１ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＧＰＩ １５４２７ ｉｎｃｒｅａｓｅｓ ｔｈｅ ａｎｔｉ−ｔｕｍｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｔｅｍｏｚｏｌｏｍｉｄｅ ａｇａｉｎｓｔ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｍｅｌａｎｏｍａ，” Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｍｏｎｉｔｏｒ， Ｖｏｌ． ９， ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ １， ３４ （２００３）； Ｔｅｎｔｏｒｉら， “Ｐｏｌｙ（ＡＤＰ−Ｒｉｂｏｓｅ） Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｔｏ Ｉｎｃｒｅａｓｅ Ｔｅｍｏｚｏｌｏｍｉｄｅ Ｅｆｆｉｃａｃｙ Ａｇａｉｎｓｔ Ｍｅｌａｎｏｍａ， Ｇｌｉｏｍａ ａｎｄ Ｌｙｍｐｈｏｍａ ａｔ ｔｈｅ ＣＮＳ Ｓｉｔｅ，” ＡＡＣＲ ｐｏｓｔｅｒ， Ａｐｒｉｌ （２００３）； Ｓｕｔｏら， “Ｄｉｈｙｄｒｏｉｓｏ−ｑｕｉｎｏｌｉｎｏｎｅｓ： Ｔｈｅ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ａ Ｎｅｗ Ｓｅｒｉｅｓ ｏｆ Ｐｏｔｅｎｔ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ Ｐｏｌｙ（ＡＤＰ−ｒｉｂｏｓｅ） Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ，” Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓ．， ６：１０７−１７ （１９９１）；並びに、米国特許第６，３４８，４７５号、同第６，５４５，０１１号、米国再発行特許第３６，３９７号、米国特許第６，３８０，２１１号、同第６，２３５，７４８号、同第６，１２１，２７８号、同第６，１９７，７８５号、同第６，３８０，１９３号、同第６，３４６，５３６号、同第６，５１４，９８３号、同第６，３０６，８８９号、同第６，３８７，９０２号、同第６，２０１，０２０号及び同第６，２９１，４２５号並びに米国特許出願第１０／８５３，７１４号（上記特許、特許出願及び刊行物の全ての内容は、これらが本明細書中に全文が記載されているのと同様に、本明細書中で援用される）を参照されたい。

本発明の化合物は、以下のスキーム１に例示される従来の様式で製造することができる。出発誘導体は、化学文献で公知であり、当業者に公知のプロセスで入手可能である。

一般的手順Ａ：７−ブロモメチル−９−オキソキサンテン−ｌ−カルボン酸メチルエステルの製造

Ｎ−ブロモスクシンイミド、臭素及び臭化錯体、例えば臭化ピリジニウムを含むブロモ化剤を用いることによって、７−メチル−９−オキソキサンテン−１−カルボン酸メチルエステル（１）を７−ブロモメチル−９−オキソキサンテン−ｌ−カルボン酸メチルエステル（２）に転化することができる。適切な溶液には、塩素化炭化水素、極性非プロトン性溶液及び種々のエーテルが挙げられるが、これらに限定されない。温度は、一般的に０〜１００℃の間であり、５０〜７０℃の範囲が好ましい。

実施例１：
過酸化ベンゾイル（１０ｇ、０．０４１ｍｏｌ）を含む還流四塩化炭素（１０Ｌ）中に化合物５（４００ｇ、１．４９ｍｏｌ）を含む溶液を撹拌している中に、ＮＢＳ（２９２ｇ、１．６４ｍｏｌ）を、数回に分けて４５分間かけて添加した。得られた混合物を１２時間還流し、次に一晩かけて室温まで冷却した。沈殿したものをろ過し、得られた固形物を水（１．２Ｌ）で十分に洗浄し、乾燥させ、３２２ｇの化合物６を白色固体で得た（６２％）。

実施例２：
四塩化炭素（４００ｍＬ）中に化合物１（１．９７ｇ、７．３ｍｍｏｌ、１．００ｅｑ）を含む溶液に、Ｎ−ブロモコハク酸イミド（１．４４ｇ、８．１ｍｍｏｌ、１．１０ｅｑ）及び過酸化ベンゾイル（４５ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ、触媒）の触媒量を添加した。反応混合物を加熱、６時間還流し、次に、室温まで冷却した。得られた白色沈殿物を真空ろ過により単離した。残った溶媒は除去し、ろ過固形物は酢酸エチル及びヘキサンで２度再結晶化し、白色固体２（１．１５ｇ，４５％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）８．２７（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），７．７２−７．８０（ｍ，２Ｈ），７．５７（ｄｄ，Ｊ＝８．５及び１．１Ｈｚ，１Ｈ），７．４８（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），７．３３（ｄｄ，Ｊ＝７．０及び１．１Ｈｚ，１Ｈ），４．５７（ｓ，２Ｈ），４．００（ｓ，３Ｈ）．１３Ｃ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）３１．９７，５３．０６，１１８．６３，１１８．７１，１１９．６３，１２１．５６，１２２．８１，１２６．８３，１３４．１５，１３４．１８，１３４．５０，１３５．９５，１５５．３１，１５５．８７，１６９．７２，１７５．４８．

一般的手順Ｂ：置換９−オキソキサンテン−１−カルボン酸メチルエステルの調製
化合物２中の第一臭化物（ｐｒｉｍａｒｙ ｂｒｏｍｉｄｅ）は、第一級及び第二級アミンを含む求核剤によって容易に置換され、これは炭酸カリウムなどの非反応性塩基種の存在下で好ましく実施される。これらの変換にはジメチルホルムアミドやアセトニトリルなどの極性及び非プロトン性のものが最適であるが、その他の溶媒中でも上記反応を実施することができる。温度範囲は０〜１００℃であってよく、５０〜８０℃が好ましいであろう。

実施例１：
化合物２（３．４７ｇ，１０．０ｍｍｏｌ，１．００ｅｑ）のジメチルホルムアミド（１００ｍＬ）溶液に、炭酸カリウム（１３．８２ｇ，１００．０ｍｍｏｌ，１０．００ｅｑ）及び第二級アミン（１０ｍｍｏｌ，１ｅｑ）を添加する。反応混合物を７０℃で６時間加熱し、次に室温まで冷却する。反応混合物に水（１００ｍＬ）を加え、続いて酢酸エチル（２００ｍＬ）を加える。有機層を回収し、水で洗浄し、続いて塩水で洗浄し、次に硫酸ナトリウム又は硫酸マグネシウムで乾燥させる。溶媒を真空において除去し、残渣を、溶離液として酢酸エチル及びヘキサンを使用してカラムクロマトグラフィーで精製し、生成物３を５０〜９０％の収率で得る。

実施例２：
化合物２（１．５３ｇ，４．４ｍｍｏｌ，１．００ｅｑ）のアセトニトリル（５０ｍＬ）溶液に、炭酸カリウム（１．２ｇ，８．７ｍｍｏｌ，２．００ｅｑ）及び１−メチルピペラジン（０．５１ｍＬ，４．６ｍｍｏｌ，１．０５ｅｑ）を添加した。次に反応混合物を加熱し一晩還流した。室温まで冷却した後、固体をろ過にて除去し、有機層は蒸発させて、油状残渣を得た。この物質を酢酸エチル（１５０ｍｌ）に溶解し、１Ｎ ＨＣｌ（１５０ｍｌ）で抽出した。有機層は廃棄し、水層のｐＨを６Ｎ水酸化ナトリウムで９より大きくなるよう調整した。次に、生成物を酢酸エチル（１００ｍｌ）で２回に分けて抽出し、次いでこれらを合わせて、水及び塩水で連続して洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。全ての溶媒を真空において除去し、白色固体の３ａを得た（０．９５ｇ，５９％）。
３ａの^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：８．１８（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），７．７１−７．７５（ｍ，２Ｈ），７．５６（ｄｄ，Ｊ＝８．５及び１．１Ｈｚ，１Ｈ），７．４５（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），７．３２（ｄｄ，Ｊ＝７．０及び１．１Ｈｚ，１Ｈ），４．０４（ｓ，３Ｈ），３．５８（ｓ，２Ｈ），２．４５（ｂｒ，８Ｈ），２．２７（ｓ，３Ｈ）．

一般的手順Ｃ：
１０−アミノメチル−２Ｈ−７−オキサ−１，２−ジアザ−ベンゾ［デ］アントラセン−３−オン誘導体の調製
ベンゾピラノ［４，３，２−デ］フタラジン環を形成する化合物３におけるケトン及びメチルエステルの環化反応はヒドラジンを使用して実施することができ、１０−アミノメチル−２Ｈ−７−オキサ−１，２−ジアザ−ベンゾ［デ］アントラセン−３−オン誘導体４を高収率で得る。溶媒としてはエタノールが好ましいが、反応は本溶媒に限定されない。温度は０〜１２０℃の範囲であってよく、７０〜９０℃が最も望ましい。

実施例１：
化合物３（５ｍｍｏｌ）の無水エタノール（１０ｍｌ）溶液に、無水ヒドラジンのエタノール（１ｍｌ）溶液を室温で滴下する。滴下終了後、溶液を加熱し、一晩還流する。一度室温まで冷却し、氷冷水（１００ｍＬ）を加え、白色固体を沈殿させる。固体を真空ろ過で回収し、水及びエタノールで連続して洗浄し、真空において乾燥させ、白色固体４（収率４０〜８５％）を得る。

実施例２：
７−（１，４−ジオキサ−８−アザ−スピロ［４．５］デカ−８−イルメチル）−９−オキソ−９Η−キサンテン−１−カルボン酸メチルエステル、３ｎ（１．６ｇ，３．９１ｍｍｏｌ，１ｅｑ）のメタノール（５５ｍｌ）溶液を８０℃まで加熱し、撹拌して全物質を溶解させた。これに、ヒドラジン一水和物（２０ｍｌ，過剰量）を１０分かけて滴下した。反応混合物を加熱し還流を一晩行い、重い白色沈殿物を形成させた。この溶液を室温まで冷却し、生成物を真空ろ過で単離した。少量の水、エタノール及びペンタンで連続して洗浄し、真空において乾燥して４ｎを高収率で得た（１．４ｇ，９２％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６，３００ＭＨｚ）：１．６２（ｔ，Ｊ＝５．０，４Ｈ），２．４０−２．５０（ｍ，４Ｈ），３．５５（ｓ，２Ｈ），３．８５（ｓ，４Ｈ），７．３４（ｄ，Ｊ＝９．４Ｈｚ，１Ｈ），７．４７（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．６７−７．７０（ｍ，１Ｈ），７．８６−７．９２（ｍ，２Ｈ），７．９８（ｓ，１Ｈ），１２．６２（ｓ，１Ｈ）．

化合物４ａ：１０−（４−イソプロピル−ピペラジン−１−イルメチル）−２Ｈ−７−オキサ−１，２−ジアザ−ベンゾ［デ］アントラセン−３−オン

一般的手順Ｂ及びＣに従って、化合物２及び１−プロピル−ピペラジンから調製した。エタノールで結晶化させることにより生成物を精製し、白色固体４ａを得た。
ＭＳ（ＥＳ＋）：３７７．^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，３００ＭＨｚ）：０．９０−１．００（ｍ，６Ｈ），２．２５−２．５０（ｍ，８Ｈ），２．５５−２．６０（ｍ，１Ｈ），３．３４（ｓ，２Ｈ），７．３５（ｄ，１Ｈ），７．４６（ｄ，１Ｈ），７．６８（ｄｄ，１Ｈ），７．８０−７．９５（ｍ，２Ｈ），７．９５−８．０５（ｍ，１Ｈ），１２．６３（ｓ，１Ｈ）．Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ．ｆｏｒ Ｃ_２２Ｈ_２４Ｎ_４Ｏ_２：Ｃ，７０．１９；Ｈ，６．４３；Ｎ，１４．８８．Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，７０．０９；Ｈ，６．５１；Ｎ，１４．７７．

化合物４ｂ：１０−［４−（２−メトキシ−エチル）−ピペラジン−１−イルメチル］−２Ｈ−７−オキサ−１，２−ジアゾ−ベンゾ［デ］アントラセン−３−オン

一般的手順Ｂ及びＣに従って、化合物２及び１−（２−メトキシエチル）ピペラジンから調製した。エタノールで結晶化させることにより生成物を精製し、白色固体４ｂを得た。
ＭＳ（ＥＳ＋）：３９３．^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６，３００ＭＨｚ）：２．３０−２．４９（ｍ，１０Ｈ），３．２２（ｓ，３Ｈ），３．３０−３．４５（ｍ，２Ｈ），３．５０（ｍ，２Ｈ），７．３０−７．３５（ｍ，１Ｈ），７．４０−７．４８（ｍ，１Ｈ），７．６５−７．７０（ｍ，１Ｈ），７．８５−７．９５（ｍ，２Ｈ），７．９５−８．０５（ｍ，１Ｈ），１２．６３（ｓ，１Ｈ）．Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ．ｆｏｒＣ_２２Ｈ_２４Ｎ_４Ｏ_３：Ｃ，６７．３３；Ｈ，６．１６；Ｎ，１４．２８．Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，６７．３５；Ｈ，６．１６；Ｎ，１４．４５．

化合物４ｃ：１０−（４−ピリミジン−２−イル−ピペラジン−１−イルメチル）−２Ｈ−７−オキサ−１，２−ジアザ−ベンゾ［デ］アントラセン−３−オン

一般的手順Ｂ及びＣに従って、化合物２及び１−（２−ピリミジル）ピペラジンから調製した。エタノールで結晶化させることにより生成物を精製し、白色固体４ｃを得た。
ＭＳ（ＥＳ＋）：４１３．^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６，３００ＭＨｚ）：３．２８−３．３４（ｍ，４Ｈ），３．６０（ｓ，２Ｈ），３．７０−３．７８（ｍ，４Ｈ），６．６０−６．６２（ｍ，１Ｈ），７．３８−７．４０（ｍ，１Ｈ），７．５０−７．６０（ｍ，１Ｈ），７．７０−７．７４（ｍ，１Ｈ），７．８０−７．９５（ｍ，２Ｈ），８．０５−８．１０（ｍ，１Ｈ），８．３０−８．４０（ｍ，２Ｈ），１２．６４（ｓ，１Ｈ）．Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ．ｆｏｒ Ｃ_２３Ｈ_２０Ｎ_６Ｏ_２：Ｃ，６６．９８；Ｈ，４．８９；Ｎ，２０．３８．Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，６７．０３；Ｈ，４．８８；Ｎ，２０．１５．

化合物４ｄ：１０−（３−オキソ−ピペラジン−１−イルメチル）−２Ｈ−７−オキサ−１，２−ジアザ−ベンゾ［デ］アントラセン−３−オン

一般的手順Ｂ及びＣに従って、化合物２及びピペラジン−２−オンから調製した。エタノールで結晶化させることにより生成物を精製し、白色固体４ｄを得た。
ＭＳ（ＥＳ＋）：３４９；^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６，３００ＭＨｚ）：２．５８−２．６２（ｍ，２Ｈ），２．９４（ｓ，２Ｈ），３．１６−３．２０（ｍ，２Ｈ），３．６３（ｓ，２Ｈ），７．３０−７．３５（ｍ，１Ｈ），７．４０−７．４８（ｍ，１Ｈ），７．６５−７．７０（ｍ，１Ｈ），７．８５−７．９５（ｍ，２Ｈ），７．９５−８．０５（ｍ，１Ｈ）．

化合物４ｅ：１０−［４−（２−ピロリジン−１−イル−エチル）−ピペラジン−１−イルメチル］−２Ｈ−７−オキサ−１，２，ジアザ−ベンゾ［デ］アントラセン−３−オン

一般的手順Ｂ及びＣに従って、化合物２及び１−（２−ピロリジン−１−イル−エチル）−ピペラジンから調製した。エタノールで結晶化させることにより生成物を精製し、白色固体４ｅを得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６，３００ＭＨｚ）：１．６４（ｍ，４Ｈ），２．３０−２．５５（ｍ，１６Ｈ），３．５２（ｓ，２Ｈ），７．３０−７．４０（ｍ，１Ｈ），７．４５−７．５０（ｍ，１Ｈ），７．７０−７．７５（ｍ，１Ｈ），７．８０−７．９０（ｍ，２Ｈ），８．００−８．０５（ｍ，１Ｈ）．Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ．ｆｏｒ Ｃ_２５Ｈ_２９Ｎ_５Ｏ_２−（０．７Ｈ_２Ｏ）：Ｃ，６７．６１；Ｈ，６．９０；Ｎ，１５．７７；Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，６７．２５；Ｈ，６．８１；Ｎ，１５．６７．

化合物４ｆ：１０−［４−（３−ジメチルアミノ−プロピル）−ピペラジン−１−イルメチル］−２Ｈ−７−オキサ−１，２−ジアザ−ベンゾ［デ］アントラセン−３−オン

一般的手順Ｂ及びＣに従って、化合物２及びジメチル−（３−ピペラジン−１−イル−プロピル）−アミンから調製した。エタノールで結晶化させることにより生成物を精製し、白色固体４ｆを得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６，３００ＭＨｚ）：１．４５−１．５５（ｍ，２Ｈ），２．０９（ｓ，６Ｈ），２．１０−２．４０（ｍ，１２Ｈ），３．５２（ｓ，２Ｈ），７．３０−７．４０（９ｍ，１Ｈ），７．４０−７．５０（ｍ，１Ｈ），７．７０−７．７５（ｍ，１Ｈ），７．８０−７．９５（ｍ，２Ｈ），８．０１（ｓ，１Ｈ）．

化合物４ｇ：１０−｛［（２−ジメチルアミノ−エチル）−エチル−アミノ］−メチル｝−２Ｈ−７−オキサ−１，２−ジアザ−ベンゾ［デ］アントラセン−３−オン

一般的手順Ｂ及びＣに従って、化合物２及びＮ，Ｎ−ジメチル−Ｎ’−エチル−エタン−１，２−ジアミンから調製した。エタノールで結晶化させることにより生成物を精製し、白色固体４ｇを得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６，３００ＭＨｚ）：０．９０（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，６Ｈ），１．００（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），２．４１（ｄｄ，Ｊ＝１４．３及び７．２Ｈｚ，４Ｈ），２．４５−２．５５（ｍ，６Ｈ），３．６２（ｓ，２Ｈ），７．３５（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），７．４９（ｄｄ，Ｊ＝８．３及び２．３Ｈｚ，１Ｈ），７．６９（ｄｄ，Ｊ＝７．１及び２．４Ｈｚ，１Ｈ），７．８６−７．９３（ｍ，２Ｈ），８．０３（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ）

化合物４ｈ：１０−｛［（２−ジエチルアミノ−エチル）−メチル−アミノ］−メチル｝−２Ｈ−７−オキサ−１，２−ジアザ−ベンゾ［デ］アントラセン−３−オン

一般的手順Ｂ及びＣに従って、化合物２及びＮ，Ｎ−ジエチル−Ｎ’−メチル−エタン−１，２−ジアミンから調製した。エタノールで結晶化させることにより生成物を精製し、白色固体４ｈを得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６，３００ＭＨｚ）：１２．６３（ｓ，１Ｈ），８．００（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），７．９１−７．８０（ｍ，２Ｈ），７．７０（ｄｄ，Ｊ＝７．１及び２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４９（ｄｄ，Ｊ＝８．６及び２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３６（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），３．５５（ｓ，２Ｈ），３．８８（ｍ，４Ｈ），２．４７（ｑ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，４Ｈ），２．１７（ｓ，３Ｈ），０．９３（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，６Ｈ）．Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ．ｆｏｒ Ｃ_２２Ｈ_２６Ｎ_４Ｏ_２：Ｃ，６９．８２；Ｈ，６．９２；Ｎ，１４．８０；Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，６９．５６；Ｈ，６．９５；Ｎ，１４．６０．

化合物４ｉ：１０−（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イルメチル）−２Ｈ−７−オキサ−１，２−ジアザ−ベンゾ［デ］アントラセン−３−オン

一般的手順Ｂ及びＣに従って、化合物２及びピペリジン−４−オールから調製した。エタノールで結晶化させることにより生成物を精製し、白色固体４ｉを得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６，３００ＭＨｚ）：１２．６０（ｓ，１Ｈ），７．９６（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），７．９１−７．８４（ｍ，２Ｈ），７．６６（ｄｄ，Ｊ＝６．９及び２．３Ｈｚ，１Ｈ），７．４３（ｄｄ，Ｊ＝８．６及び２．１Ｈｚ，１Ｈ），７．３２（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），４．５４（ｄ，Ｊ＝４．２Ｈｚ，１Ｈ），３．４８（ｓ，２Ｈ），３．４６（ｍ，１Ｈ），２．６５（ｍ，２Ｈ），２．０５（ｍ，２Ｈ），１．６８（ｍ，２Ｈ），１．４０（ｍ，２Ｈ）．Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ．ｆｏｒ Ｃ_２０Ｈ_１９Ｎ_３Ｏ_３：Ｃ，６８．７５；Ｈ，５．４８；Ｎ，１２．０３；Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，６８．６６；Ｈ，５．４８；Ｎ，１２．１３．

化合物４ｊ：１０−｛［エチル−（２−ヒドロキシ−エチル）−アミノ］−メチル｝−２Ｈ−７−オキサ−１，２−ジアザ−ベンゾ［デ］アントラセン−３−オン

一般的手順Ｂ及びＣに従って、化合物２及び２−エチルアミノ−エタノールから調製した。エタノールで結晶化させることにより生成物を精製し、白色固体４ｊを得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６，３００ＭＨｚ）：１．００（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ），２．４５−２．５５（ｍ，４Ｈ），３．４９（ｄｄ，Ｊ＝１２．０及び５．５Ｈｚ，２Ｈ），３．６４（ｓ，２Ｈ），４．３９（ｔ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ），７．３５（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｄｄ，Ｊ＝８．８及び６．５Ｈｚ，１Ｈ），７．６９（ｄｄ，Ｊ＝６．５及び４．３Ｈｚ，１Ｈ），７．８６−７．９１（ｍ，２Ｈ），８．０２（ｄ，Ｊ＝２．０，１Ｈ）．

化合物４ｋ：１０−［（ジイソプロピルアミノ）−メチル］−２Ｈ−７−オキサ−１，２−ジアザ−ベンゾ［デ］アントラセン−３−オン

一般的手順Ｂ及びＣに従って、化合物２及びジイソプロピルアミンから調製した。エタノールで結晶化させることにより生成物を精製し、白色固体４ｋを得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６，３００ＭＨｚ）：１．０１（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，１２Ｈ），２．９３−３．０４（ｍ，２Ｈ），３．６６（ｓ，２Ｈ），７．３４（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．５１（ｄｄ，Ｊ＝９．２及び１．９Ｈｚ，１Ｈ），７．６９（ｄｄ，Ｊ＝６．５及び２．７Ｈｚ，１Ｈ），７．８６−７．９１（ｍ，２Ｈ），８．０９（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ）．

化合物４ｌ：１０−（３−ヒドロキシ−ピロリジン−１−イルメチル）−２Ｈ−７−オキサ−１，２−ジアザ−ベンゾ［デ］アントラセン−３−オン

一般的手順Ｂ及びＣに従って、化合物２及ピロリジン−３−オールから調製した。エタノールで結晶化させることにより生成物を精製し、白色固体４ｌを得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６，３００ＭＨｚ）：１．５０−１．６０（ｍ，１Ｈ），１．９５−２．０５（ｍ，１Ｈ），２．３１−２．３５（ｍ，１Ｈ），２．５５−２．６５（ｍ，１Ｈ），２．６８−２．７４（ｍ，１Ｈ），３．６２（ｄ，Ｊ＝４．２Ｈｚ，２Ｈ），４．１８−４．２５（ｍ，１Ｈ），４．７２（ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，１Ｈ），７．３５（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），７．４６−７．４９（ｍ，１Ｈ），７．７０（ｄｄ，Ｊ＝６．９及び２．２Ｈｚ，１Ｈ），７．８７−７．９１（ｍ，２Ｈ），８．００（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ）．Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ．ｆｏｒ Ｃ_１９Ｈ_１７Ｎ_３Ｏ_３：Ｃ，６８．０５；Ｈ，５．１１；Ｎ，１２．５３；Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，６７．８０；Ｈ，５．１１；Ｎ，１２．４９．

化合物４ｍ：１０−［４−（２−ヒドロキシ−エチル）−ピペリジン−１−イルメチル］−２Ｈ−７−オキサ−１，２−ジアザ−ベンゾ［デ］アントラセン−３−オン

一般的手順Ｂ及びＣに従って、化合物２及び２−ピペリジン−４−イル−エタノールから調製した。エタノールで結晶化させることにより生成物を精製し、白色固体４ｍを得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６，３００ＭＨｚ）：１．１２−１．１７（ｍ，２Ｈ），１．３４−１．３８（ｍ，３Ｈ），１．６１（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，１Ｈ），１．９２（ｔ，Ｊ＝１１Ｈｚ，２Ｈ），２．８０（ｄ，Ｊ＝１０．６Ｈｚ，２Ｈ），３．４２−３．４８（ｍ，４Ｈ），４．３４（ｔ，Ｊ＝５．２，１Ｈ），７．３３（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．４３−７．４６（ｍ，１Ｈ），７．６８（ｄｄ，Ｊ＝６．９及び２．５Ｈｚ，１Ｈ），７．８６−７．９８（ｍ，３Ｈ）．Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ．ｆｏｒ Ｃ_２２Ｈ_２３Ｎ_３Ｏ_３：Ｃ，７０．０１；Ｈ，６．１４；Ｎ，１１．１３；Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，６９．８２；Ｈ，６．１２；Ｎ，１１．０８．

化合物４ｎ：１０−（１，４−ジオキサ−８−アザ−スピロ［４．５］デカ−８−イルメチル）−２Ｈ−７−オキサ−１，２−ジアザ−ベンゾ［デ］アントラセン−３−オン

一般的手順Ｂ及びＣに従って、化合物２及び１，４−ジオキサ−８−アザ−スピロ［４．５］デカンから調製した。エタノールで結晶化させることにより生成物を精製し、白色固体４ｎを得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６，３００ＭＨｚ）：１．６２（ｔ，Ｊ＝５．０，４Ｈ），２．４０−２．５０（ｍ，４Ｈ），３．５５（ｓ，２Ｈ），３．８５（ｓ，４Ｈ），７．３４（ｄ，Ｊ＝９．４Ｈｚ，１Ｈ），７．４７（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．６７−７．７０（ｍ，１Ｈ），７．８６−７．９２（ｍ，２Ｈ），７．９８（ｓ，１Ｈ），１２．６２（ｓ，１Ｈ）．Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ．ｆｏｒ Ｃ_２２Ｈ_２１Ｎ_３Ｏ_４：Ｃ，６７．４１；Ｈ，５．４３；Ｎ，１０．９８；Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，６７．１５；Ｈ，５．３０；Ｎ，１１．０３．

化合物４ｏ：１０−（３−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イルメチル）−２Ｈ−７−オキサ−１，２−ジアザ−ベンゾ［デ］アントラセン−３−オン

一般的手順Ｂ及びＣに従って、化合物２及びピペリジン−３−オールから調製した。エタノールで結晶化させることにより生成物を精製し、白色固体４ｏを得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６，３００ＭＨｚ）：１．００−１．１２（ｍ，１Ｈ），１．３０−１．５０（ｍ，１Ｈ），１．５２−１．９５（ｍ，４Ｈ），２．６６−２．８３（ｍ，２Ｈ），３．４５−３．６０（ｍ，３Ｈ），４．６０（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３４−７．４８（ｍ，２Ｈ），７．６８−７．７０（ｄｄ，Ｊ＝６．８及び２．２Ｈｚ，１Ｈ），７．８７−８．００（ｍ，３Ｈ）．Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ．ｆｏｒ Ｃ_２０Ｈ_１９Ｎ_３Ｏ_３：Ｃ，６８．７５；Ｈ，５．４８；Ｎ，１２．０３；Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，６８．８５；Ｈ，５．４８；Ｎ，１２．１０．

化合物４ｐ：１０−（３−ヒドロキシ−アゼチジン−１−イルメチル）−２Ｈ−７−オキサ−１，２−ジアザ−ベンゾ［デ］アントラセン−３−オン

一般的手順Ｂ及びＣに従って、化合物２及びアゼチジン−３−オールから調製した。エタノールで結晶化させることにより生成物を精製し、白色固体４ｐを得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６，３００ＭＨｚ）：２．７９（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），３．５１（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ），３．６１（ｓ，２Ｈ），４．２３（ｄｄ，Ｊ＝１２．９及び６．３Ｈｚ，１Ｈ），５．３３（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，１Ｈ），７．３３（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．７１−７．４４（ｍ，１Ｈ），７．６８（ｄｄ，Ｊ＝６．８，２．６，１Ｈ），７．８６−７．９６（ｍ，３Ｈ），１２．６２（ｂｓ，１Ｈ）．Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ．ｆｏｒ Ｃ_１８Ｈ_１５Ｎ_３Ｏ_３−（０．５Ｈ_２Ｏ）：Ｃ，６５．４５；Ｈ，４．８８；Ｎ，１２．７２；Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，６５．０６；Ｈ，４．６０；Ｎ，１３．０３．

化合物４ｑ：１０−［（２−モルフォリン−４−イル−エチルアミノ）−メチル］−２Ｈ−７−オキサ−１，２−ジアザ−ベンゾ［デ］アントラセン−３−オン

一般的手順Ｂ及びＣに従って、化合物２及び２−モルフォリン−４−イル−エチルアミンから調製した。エタノールで結晶化させることにより生成物を精製し、白色固体４ｑを得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６，３００ＭＨｚ）：２．１６（ｂｓ，１Ｈ），２．３４（ｂｓ，４Ｈ），２．４０（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ），２．６０（ｔ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，２Ｈ），３．５６（ｔ，Ｊ＝４．６Ｈｚ，４Ｈ），３．７６（ｓ，２Ｈ），７．３３（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．４８（ｄｄ，Ｊ＝８．３及び１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．６８（ｄｄ，Ｊ＝６．６及び２．３，１Ｈ），７．８８−７．９３（ｍ，２Ｈ），８．０１（ｄ，Ｊ＝１．５，１Ｈ），１２．６３（ｂｓ，１Ｈ）．Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ．ｆｏｒ Ｃ_２１Ｈ_２２Ｎ_４Ｏ_３−（０．７５Ｈ_２Ｏ）：Ｃ，６４．３５；Ｈ，６．０４；Ｎ，１４．２９；Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，６４．３５；Ｈ，５．９１；Ｎ，１４．２６．

化合物４ｒ：１０−［（４−ヒドロキシ−シクロヘキシルアミノ）−メチル］−２Ｈ−７−オキサ−１，２−ジアザ−ベンゾ［デ］アントラセン−３−オン

一般的手順Ｂ及びＣに従って、化合物２及びｔｒａｎｓ−４−アミノ−シクロヘキサノールから調製した。エタノールで結晶化させることにより生成物を精製し、白色固体４ｒを得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６，３００ＭＨｚ）：１．０３−１．１６（ｍ，４Ｈ），１．７５−１．９０（ｍ，４Ｈ），２．３０−２．４０（ｍ，１Ｈ），３．７５（ｓ，２Ｈ），４．４８（ｄ，Ｊ＝３．４，１Ｈ），７．３１（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．４８（ｄｄ，Ｊ＝８．５及び２．１Ｈｚ，１Ｈ），７．６７（ｄｄ，Ｊ＝６．８及び２．４Ｈｚ，１Ｈ，）７．８５−７．９２（ｍ，２Ｈ），８．０２（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ）．Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ．ｆｏｒ Ｃ_２１Ｈ_２１Ｎ_３Ｏ_３−（０．５Ｈ_２Ｏ）・（０．０５Ｎ_２Ｈ_４）：Ｃ，６７．４４；Ｈ，５．９８；Ｎ，１１．６１；Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，６７．５６；Ｈ，５．７４；Ｎ，１１．６８．

化合物４ｓ：１０−（４−オキソ−ピペリジン−１−イルメチル）−２Ｈ−７−オキサ−１，２−ジアザ−ベンゾ［デ］アントラセン−３−オン

化合物４ｎ（１００ｍｇ，０．２４ｍｍｏｌ）を酢酸（３ｍｌ）中で撹拌し、そこへ濃塩酸（０．６ｍｌ，過剰量）を室温において添加した。反応物を９０℃で１時間加熱し、次に室温まで冷却した。生成物を１Ｎ ＮａＯＨでｐＨ１１〜１２に塩基性化した後、酢酸エチルで抽出し単離した。有機分は硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空において濃縮して白色固体４ｓを得た（６０ｍｇ，７１％）。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６，３００ＭＨｚ）：２．３７（ｔ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，４Ｈ），２．７３（ｔ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，４Ｈ），３．６９（ｓ，２Ｈ），７．３８（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），７．５３（ｄｄ，Ｊ＝９．０及び６．１Ｈｚ），７．７０（ｄｄ，Ｊ＝７．１及び４．７Ｈｚ，１Ｈ），７．８６−７．９４（ｍ，２Ｈ），８．０６（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ）．

本発明の化合物の製造の他の様式、変形又は順序は、当業者に容易に明らかとなろう。

本発明の化合物は、遊離塩基の形態で、可能であれば塩基塩の形態で、及び、付加塩の形態で、並びに、遊離酸の形態で有用であろう。これら全ての形態は本発明の範囲内である。実用上は、塩形態の使用は塩基形態の使用と同等である。本発明の範囲内の医薬品に許容される塩は、塩酸及び硫酸などの無機酸；並びに、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸などの有機酸から誘導されるもの（例えば、塩酸塩、スルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩がそれぞれ挙げられる）、又は、適切な有機及び無機塩基などの塩基から誘導されるものが挙げられる。本発明の化合物との医薬品に許容される塩基付加塩の例には、非毒性でありかつそのような塩を形成するのに十分に強い有機塩基が挙げられる。これらの有機塩基及びその使用は、当業者に容易に理解される。単に例として挙げるものであるが、このような有機塩基には、メチルアミン、ジエチルアミン及びトリエチルアミンなどのモノ、ジ及びトリアルキルアミン類；モノ、ジ及びトリエタノールアミンなどのモノ、ジ又はトリヒドロキシアルキルアミン類；アルギニン及びリジンなどのアミノ酸類；グアニジン；Ｎ−メチルグルコサミン；Ｎ−メチルグルカミン；Ｌ−グルタミン；Ｎ−メチルピペラジン；モルホリン；エチレンジアミン；Ｎ−ベンジルフェネチルアミン；トリス（ヒドロキシメチル）アミノエタン；などが挙げられる。

塩基性化合物の酸付加塩は以下のように製造することができる：本発明の化合物の遊離塩基を、水溶液若しくはアルコール水溶液又は適切な酸若しくは塩基を含む他の適切な溶液に溶解し、溶液を蒸発させることにより塩を単離するか、あるいは、反応物が有機溶液中に存在するように、本発明の化合物の遊離塩基を酸と反応させることによって、また、酸基を有する本発明の化合物を塩基と反応させることによって、塩を直接分離するか又は溶液の濃縮により得ることができる。

本発明の化合物は、薬理学的活性を示すので、医薬として有用である。さらに、上記化合物は、中枢神経系及び心血管系活性を示す。

（ＰＡＲＰアッセイ）
１．ＩＣ_５０
ＰＡＲＰ阻害剤化合物のＩＣ_５０を決定する簡便な方法は、Ｔｒｅｖｉｇａｎ（メリーランド州ゲーサーズバーグ）の精製組み換えヒトＰＡＲＰを用いるＰＡＲＰアッセイであり、以下のとおりである：ＰＡＲＰ酵素アッセイを、氷上で、１００ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、１ｍＭのＭｇＣｌ_２、２８ｍＭのＫＣｌ、２８ｍＭのＮａＣｌ、０．１ｍｇ／ｍｌのＤＮａｓｅＩ活性化ニシン精子ＤＮＡ（Ｓｉｇｍａ，ミズーリ州）、３．０マイクロモル［３Ｈ］ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（４７０ｍｃｉ／ミリモル）、７マイクログラム／ｍｌのＰＡＲＰ酵素及び試験する種々の濃度の化合物からなる１００マイクロリットルの容積で開始する。反応を、２５℃で混合物をインキュベートすることにより開始する。１５分間インキュベートした後、氷冷２０％（ｗ／ｖ）トリクロロ酢酸５００マイクロリットルを添加することにより反応を終結させる。生成した沈殿をグラスファイバーフィルター（Ｐａｃｋａｒｄ Ｕｎｉｆｉｌｔｅｒ−ＧＦ／Ｂ）上に移し、エタノールで３回洗浄する。フィルターを乾燥した後、シンチレーション計数により放射線活性を測定する。

本発明の化合物は、この阻害アッセイにおいてＩＣ_５０が数ｎＭ〜２０μＭの範囲という強力な酵素活性を有することが見出された。

上記ＰＡＲＰアッセイを用い、以下の化合物についておおよそのＩＣ_５０値を得た。

２．ｍＲＮＡ老化細胞における変化した遺伝子発現の測定
遺伝子発現変化はヒト繊維芽細胞ＢＪ細胞を用いて測定することができ、上記細胞を細胞集団倍加数（Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ Ｄｏｕｂｌｉｎｇ）（ＰＤＬ）９４で通常の増殖培地上に播種し、次いで、低血漿培地に変えて、Ｌｉｎｓｋｅｎｓら，Ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２３，３２４４−３２５１（１９９５）に記載の生理学的条件を反映させる。０．５％仔ウシ血清を添加したＤＭＥＭ／１９９培地を用いる。細胞を１３日間にわたって毎日処理する。ＰＡＲＰ阻害剤の投与に使用する溶液を用いて、又は、これを用いずに、コントロール細胞を処理する。未処理の老化コントロール細胞及び若いコントロール細胞を、比較のために試験する。処理した細胞及びコントロール細胞からＰＣＴ公開第９６／１３６１０号に記載の技術に従ってＲＮＡを調製し、ノーザンブロッティングを実施する。老化関連遺伝子に特異的なプローブを分析し、処理し、コントロール細胞を比較する。結果の分析において、遺伝子発現の最低レベルを任意に１に設定して、比較用のための基準とする。皮膚における加齢性変化に特に関連する３つの遺伝子は、コラーゲン、コラゲナーゼ及びエラスチンである。ＷｅｓｔＡｒｃｈ．Ｄｅｒｍ．１３０，８７−９５（１９９４）。ＰＡＲＰ阻害剤で処理した細胞のエラスチン発現は、コントロール細胞と比較して顕著に増加するものと予測される。エラスチン発現は、若い細胞において老化細胞よりも顕著に高いはずであるため、ＰＡＲＰ阻害剤での処理によって老化細胞でのエラスチン発現レベルは非常に若い細胞における同レベルと同等まで変化するはずである。同様に、ＰＡＲＰ阻害剤での処理により、コラゲナーゼ及びコラーゲン発現において有益な効果がみられるはずである。

３．老化細胞におけるタンパク質の変化した遺伝子発現の測定
遺伝子発現変化は、ＰＤＬが９５〜１００のＢＪ細胞を約１０５個用い、上記細胞を１５ｃｍディッシュに平板培養することによって測定できる。増殖培地は、１０％仔ウシ血清を添加したＤＭＥＭ／１９９である。細胞をＰＡＲＰ阻害剤（１００μｇ／１ｍＬの培地）で毎日２４時間処理する。ＷＯ９９／１１６４５を参照されたい。細胞をリン酸バッファー（ＰＢＳ）で洗浄し、次いで、４％パラホルムアルデヒドで５分間透過可能にした後、ＰＢＳで洗浄し、１００％冷メタノールで１０分間処理する。メタノールを除去し、細胞をＰＢＳで洗浄した後、１０％血清で処理して、非特異的な抗体結合をブロックする。約１ｍＬの適切な市販抗体溶液（１：５００希釈、Ｖｅｃｔｏｒ）を細胞に添加し、混合物を１時間インキュベートする。細胞をＰＢＳで３回洗浄する。二次抗体であるビオチン化ヤギ抗マウスＩｇＧ（１ｍＬ）を、アルカリホスファターゼ結合ストレプトアビジンを含む溶液１ｍＬ及び１ｍＬのＮＢＴ剤（Ｖｅｃｔｏｒ）と共に添加する。細胞を洗浄し、遺伝子発現の変化を比色法により観察する。ＰＡＲＰ阻害剤で処理した老化細胞において、老化に特異的な４つの遺伝子−コラーゲンＩ、コラーゲンＩＩＩ、コラゲナーゼ及びインターフェロンγを観察した結果、インターフェロンγ発現の低下が示され、他の３つの遺伝子の発現レベルには変化がみられなかったが、このことは、ＰＡＲＰ阻害剤が、老化に特異的な遺伝子の発現を変化させることができるということを示す。

４．細胞の増殖能力及び寿命の拡張又は増加
細胞の増殖能力及び寿命を拡張するための本方法の有効性を示すため、ヒト繊維芽細胞細胞株（細胞集団倍加数（ＰＤＬ）が２３であるＷｌ３８、又は、ＰＤＬが７１であるＢＪ細胞のいずれか）を解凍し、Ｔ７５フラスコに平板培養し、通常の培地（１０％仔ウシ血清を添加したＤＭＥＭ／Ｍ１９９）中で約１週間増殖させることによって（このとき細胞はコンフルエントである）、培養物を細分用に準備する。細分に際して、培地を吸引し、細胞をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄し、次いでトリプシン化する。Ｃｏｕｌｔｅｒカウンターを用いて細胞を計数し、１０％仔ウシ血清及び種々の量（０．１０μＭ及びＩｍＭ：ＤＭＥＭ／Ｍ１９９培地中の１００倍（ＩＯＯＸ）原液より）のＰＡＲＰ阻害剤を添加したＤＭＥＭ／１９９培地を入れた６ウェル組織培養プレート中で、１ｃｍ^２当たり細胞１０^５個の密度で平板培養する。この方法を、細胞が細分を停止するように見えるまで７日毎に繰り返す。未処理の（コントロール）細胞は、培地中約４０日後に老化に達し、細分を停止する。

（テモゾロマイドの投与）
実施例１：化合物４ｉ及びテモゾロマイドの経口投与は、ＣＮＳ部位に悪性腫瘍を有するマウスの生存を増大させる。

頭蓋内移植の手順は、ＴｅｎｔｏｒｉＬら， “Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｓｉｎｇｌｅ ｏｒ ｓｐｌｉｔ ｅｘｐｏｓｕｒｅ ｏｆ ｌｅｕｋｅｍｉｃ ｃｅｌｌｓ ｔｏ ｔｅｍｏｚｏｌｏｍｉｄｅ， ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｗｉｔｈ ｐｏｌｙ（ＡＤＰ−ｒｉｂｏｓｅ） ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｎ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ， ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ ａｂｅｒｒａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｂａｓｅ ｅｘｃｉｓｉｏｎ ｒｅｐａｉｒ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ，” Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ， ４７， ３６１−９ （２００１）に記載のように実施する。マウス黒色腫Ｂ１６細胞（１０^４個）を、雄Ｂ６Ｄ２Ｆ１（Ｃ５７ＢＬ／６×ＤＢＡ／２）マウスに頭蓋内（ｉｃ）注射した。治療のタイミングを決定するため、脳での腫瘍増殖の組織学的評価を、腫瘍の曝露後１〜５日に行った。

カリウムを含まない７０ｍＭ ＰＢＳに化合物４ｉを溶解し、テモゾロマイド（ＴＭＺ）投与の１時間前に経口投与した。ＴＭＺをジメチルスルホキシド（４０ｍｇ／ｍｌ）中に溶解し、生理食塩水（５ｍｇ／ｍｌ）で希釈し、１００ｍｇ／Ｋｇの用量で５日にわたって腹腔内投与した。化合物４ｉを用いて経口栄養補給により、１０ｍｇ／ｋｇ／日又は４０ｍｇ／ｋｇ／日の用量で、１日１回５日間にわたってマウスを処置した。生存中央値（ｍｅｄｉａｎ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｔｉｍｅｓ）（ＭＳＴ）を決定し、寿命（ＩＬＳ）の増加の割合を、（［処置したマウスのＭＳＴ（日）／コントロールマウスのＭＳＴ（日）］−ｌ）×１００として算出した。処置の効力を、処置群とコントロール群との間の生存曲線の比較により評価した。

Ｂ１６黒色腫を有するマウスでは、結果は、化合物４ｉ及びＴＭＺの組み合わせで処置した群の平均生存時間が、ＴＭＺを単一の剤として服用した動物で観察された平均生存時間よりも顕著に高かったことを示した（図Ｉ及び表ＩＩ）。

表ＩＩ．脳内にＢ１６黒色腫を有するマウスの生存率

実施例２：化合物４ｉの投与による、皮下黒色腫ガンモデルにおけるテモゾロマイド効果の増強

ＴＭＺ±化合物４ｉによる処置の効力を、マウスにおいて皮下（ｓ．ｃ．）増殖黒色腫についても評価した。この目的のため、Ｂ１６細胞（２．５×１０^５個）を動物の脇腹に皮下接種した。腫瘍をノギスで測定し、容積を、式：［（幅）^２×長さ］／２に従って算出した。曝露の６日後、腫瘍結節の容積が１００〜１５０ｍｍ^３に達したときに、薬剤処置を開始した。化合物４ｉ（４０ｍｇ／ｋｇ経口）を、テモゾロマイド（１００ｍｇ／ｋｇ腹腔内）の２０分前に、１日１回５日間にわたって投与した。黒色腫増殖を、腫瘍結節を３日毎に３週間にわたって測定することによって観察した。

化合物４ｉ及びＴＭＺによる併用治療によって、Ｂ１６黒色腫の増殖が顕著に減少した（Ｐ＜０．０１、９日〜２３日、ＴＭＺ単独に対して）（図ＩＩ）。

実施例３：ラットにおいてシスプラチンで誘発される神経障害における、交感神経透過速度（ＳＮＣＶ）

本発明の化合物の神経保護効果を、ラットにおいてシスプラチンで誘発される神経障害モデルで示した。神経透過速度の変化は、化学毒性物質が誘発する末梢神経障害の高感度な測定であることがよく実証されている。化合物４ｉは、シスプラチンでの慢性的な治療により誘発される神経透過速度の欠損を低減することが示された。

この実験において、雌Ｗｉｓｔａｒ Ｈａｎｎｏｖｅｒラットに、神経障害を誘発する用量のシスプラチン（２ｍｇ／ｋｇ腹腔内；週２回を４週間）を、化合物４ｉ（毎日４０ｍｇ／ｋｇ、経口）と共に及び化合物４ｉなしで投与した。ラットにおいて、ベースライン（シスプラチン投与前）及び処置後の尾部神経での交感神経透過速度（ＳＮＣＶ）の変化を観察した。さらに、後根神経節及び坐骨神経標本の後根神経節神経上における形態計測分析（体細胞、核及び核小体の大きさ）を、病理解剖学的に評価した。

処置期間の最初と最後に、各動物の尾部において、Ｃａｖａｌｅｔｔｉら， “Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ ｏｎ ｃｉｓｐｌａｔｉｎ ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ｉｎ ｒａｔｓ，” Ｉｎｔ． Ｊ． Ｒａｄｉａｔｉｏｎ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ， ２９， ７７１−７７６ （１９９４） ａｎｄ Ｔｒｅｄｉｃｉら， “Ｌｏｗ−Ｄｏｓｅ Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ， ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ｏｆ ｃｉｓｐｌａｔｉｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ ｉｎ ｒａｔｓ，” Ｎｅｕｒｏ ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ， １５， ７０１−７０４ （１９９４）に既に記載されているように、ＳＮＣＶ測定を測定した。尾神経における逆方向性のＳＮＣＶを、記録用環状電極を尾の遠位に配置することにより評価し、ここで、刺激環状電極は、記録点から５ｃｍ及び１０ｃｍ離して配置した。神経刺激後の２箇所で記録された電位の反応時間を決定し（ピークからピーク）、これに従って神経透過速度を計算した。

犠牲にした動物から得た各群に由来するラットの左側Ｌ５後根神経節（ＤＲＧ）を、既に報告されたプロトコル［Ｃａｖａｌｅｔｔｉら；Ｔｒｅｄｉｃｉら］に従って処理し、樹脂に埋め込み、光学顕微鏡及び電子顕微鏡での観察並びに形態計測に用いた。厚み１μｍの半薄切片で、画像分析ソフトウェア（Ｉｍａｇｅ Ｊ，ＮＩＨ）を用いて、ＤＲＧニューロンの細胞体、核及び核小体の断面積の形態測定を行った。

神経透過速度の相違及び実験中に後根神経節神経で得られた形態計測データの相違を、分散分析（ＡＮＯＶＡ）及びＴｕｋｅｙ−Ｋｒａｍｅｒ後検定（有意性レベルをｐ＜０．０５に設定）を用いて、統計学的に評価した。

化合物４ｉの共投与によって、慢性的なシスプラチン治療による尾神経透過速度の損傷における統計学的に顕著な減少が誘発されるということが見出された（表３及び４）。

表３：実験終了後におけるＳＮＣＶ（ｍ／秒）

ＣＤＤＰ＝シスプラチン

表４：統計学的分析（一方向ＡＮＯＶＡ）

ＤＲＧ形態計測

ＤＲＧニューロンにおける形態計測の研究により、化合物４ｉを有するＤＲＧニューロンの細胞体の大きさのみについて顕著な効果が明らかとなった。表５は形態計測の結果を示し、統計学的データを表６（細胞体）及び表７（核）に列挙する。

表５：ＤＲＧの形態計測（μｍ^２）

Ｎｕ＝核、Ｎｕｃｌ＝核小体

表６：細胞体

表７：核小体

上記では本発明について説明しているが、多くの方法によって改変可能な場合があるということは明らかであろう。このような改変は、本発明の趣旨及び範囲内であるとみなされ、このような改変は全て、添付の特許請求の範囲の範囲内に包含されるものである。

（参照による援用）
本明細書中に記載する全ての刊行物、特許及び付与前特許出願公開は、任意の及び全ての目的のために、あたかもそれぞれの個別の刊行物及び特許出願が参照として援用されていることが示されているかのように、特別にかつ個別に本明細書中に参照として援用される。不一致がある場合、本開示が優先する。

Claims (8)

1. 腫瘍細胞を化学増感するための医薬組成物であって、
   下記式：
   

   

   である化合物：並びに、その医薬品に許容される塩、水和物、エステル、溶媒和物及びこれらの混合物の、前記腫瘍細胞を少なくとも１つの化学療法薬剤の効果に増感させるのに十分な量、及び、
   医薬品に許容される担体、希釈剤又は賦形剤
   を含む、医薬組成物。
2. 下記式：
   

   

   の医薬品に許容される塩を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
3. 医薬品に許容される塩がマレイン酸塩である、請求項２に記載の医薬組成物。
4. 下記式：
   

   

   のエステルを含む、請求項１に記載の医薬組成物。
5. 下記式：
   

   

   の化合物を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
6. 腫瘍細胞が、ＡＣＴＨ産生腫瘍、急性リンパ球性白血病、急性非リンパ球性白血病、副腎皮質ガン、膀胱ガン、脳ガン、乳ガン、子宮頚部ガン、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄球性白血病、直腸結腸ガン、皮膚Ｔ−細胞リンパ腫、子宮内膜ガン、食道ガン、ユーイング肉腫、胆嚢ガン、毛様細胞白血病、頭頚部ガン、ホジキンリンパ腫、カポジ肉腫、腎臓ガン、肝臓ガン、肺ガン（小細胞及び／又は非小細胞ガン）、悪性腹膜滲出、悪性胸膜滲出、黒色腫、中皮腫、多発性骨髄腫、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、骨肉腫、卵巣ガン、卵巣（胚細胞）ガン、前立腺ガン、膵臓ガン、陰茎ガン、網膜芽細胞腫、皮膚ガン、軟組織肉腫、扁平上皮細胞ガン腫、胃ガン、精巣ガン、甲状腺ガン、栄養膜新生物、子宮ガン、膣ガン、外陰部ガン及びウィルムス腫瘍からなる群より選択される
   ことを特徴とする請求項１〜５のいずれかに記載の医薬組成物。
7. 前記化学療法薬剤が、タキソイド、テモゾロマイド、アドリアマイジン、カンプトテシン、カルボプラチン、シスプラチン、ダウノルビシン、ドセタキセル、ドキソルビシン、インターフェロン（α，β，γ）、インターロイキン２、イリノテカン、パクリタキセル、トポテカン、その治療上有効なアナログ及び誘導体、並びに、これらの混合物からなる群より選択される
   ことを特徴とする請求項１〜５のいずれかに記載の医薬組成物。
8. 前記化学療法薬剤がテモゾロマイドである
   ことを特徴とする請求項１〜５のいずれかに記載の医薬組成物。

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