JP5776086B2 - 損なわれた神経伝達に関係する障害を治療するための新規作用薬 - Google Patents

Description

発明の詳細な説明

本発明は、損なわれた、すなわち低下した神経伝達に関係する障害を治療するための作用薬としてのオレガノ抽出物および／またはオレガノ抽出物の揮発性成分の使用に関する。さらに本発明は、このようなオレガノ抽出物および／またはそれらの揮発性成分を含有する、食品および医薬組成物にも関する。

本発明に従って、このような抽出物は、セロトニン再取り込み阻害剤、ノルアドレナリン再取り込み阻害剤、およびドーパミン再取り込み阻害剤であることが分かった。したがってそれらは、二重取り込み阻害剤および三重取り込み阻害剤である医薬品の作用を模倣できる。したがってこれらの抽出物およびそれらの揮発物は、うつ病、および不安をはじめとする気分障害を治療するのに特に効果的であり、ヒトにおいてバイオリズムを調整するのに使用できる。それらはまた、多数の獣医学用途も有して、ストレスに起因する行動上のまたは生理学的な影響を予防または治療するのに使用できる。

国際公開第９５／０５８３８号パンフレットは、（組織の形態（ｍｏｒｒｐｈｏｌｏｇｙ）、構造および量などの）末梢神経系における有害な変化と戦うためのクローブ、ナツメグ、コショウ、タイム、パプリカ、オレガノ、マヨナラ、バジル、およびフレンチタラゴンまたはその構成物（例えばタイム油からのリナロール、ツジョン、カンフェン、カルバクロール、およびチモール）から誘導できる植物揮発性油の使用を開示する。脳内の生化学的過程に影響を及ぼすためのこれらの物質の使用の教示はない。

国際公開第０１／４５７８０号パンフレットは、場合により芳香療法と組み合わされた光療法の使用を開示し、オリガヌムは、神経過敏と合併する睡眠障害を治療することが可能な成分の１つである。したがってこの組成物は、嗅覚手段を通じて投与される。

［本発明の分野］
本発明は、損なわれたまたは低下した神経伝達に関係する障害を治療および予防するための組成物を製造するためのオレガノ抽出物および／またはそれらの揮発性成分の使用に関する。したがって一態様では、本発明は、損なわれたまたは低下した神経伝達に関係する障害を治療するための、少なくとも１つのオレガノ抽出物またはそれらの揮発性成分の１つを含んでなる、食品または医薬、または獣医学組成物に関する。

本発明のオレガノ抽出物およびそれらの揮発性成分は、セロトニン再取り込み阻害剤として作用し、したがって神経伝達にセロトニンが利用できる時間を延長することが意外にも分かった。これは気分調和およびストレス解消効果をもたらす。さらに本発明のオレガノ抽出物およびそれらの揮発性成分はまた、ノルアドレナリン再取り込み阻害剤、ドーパミン再取り込み阻害剤、および／またはセロトニン、ノルアドレナリンおよび／またはドーパミンの二重再取り込み阻害剤、またはノルアドレナリン、セロトニン、およびドーパミンの三重再取り込み阻害剤としても効果的である。したがってそれらは、セロトニンまたはノルアドレナリン神経伝達またはその組み合わせによって媒介されるうつ病、不安、またはその組み合わせを治療するのに特に有用である。それらはまた、従来から取り込み阻害剤である医薬品によって治療されている、うつ病、またはその他の病状と関連付けられている泌尿生殖器疾患（緊張性および急迫性尿失禁の治療のための）、および神経疼痛などのその他の疾患の治療においても有用かもしれない。

主要神経伝達物質は、セロトニン、ドーパミン、ノルアドレナリン、アセチルコリン、グルタメート、γ−アミノ−酪酸である。気分関連障害に特に関連性がある神経伝達物質は、セロトニン、ノルアドレナリン、およびドーパミンである。神経伝達の増大は、シナプス前神経末端内への再取り込み阻害を通じて、またはモノアミンオキシダーゼＡおよびＢなどの分解酵素の阻害によって神経伝達物質異化作用を妨げることで、シナプス間隙中の神経伝達物質濃度が増大し、それが増大されまたは延長された神経伝達のために利用できるようになることで達成される。

［定義］
「損なわれた神経伝達」および「低下した神経伝達」という用語は、本明細書全体を通じて同義的に使用される。それらは、当業者によく知られているそれらの意味に従って本明細書で使用され、神経伝達物質の生合成、プロセシング、保存、放出、再取り込み、および受容体結合のレベルで起きるかもしれない、神経伝達の調節解除状態に関連する。損なわれた神経伝達、特に神経伝達低下は、ヒトをはじめとする動物で、例えば様々なタイプのうつ病の１つなどの、行動、情動、気分、および思考過程の撹乱として、それ自体が発現するかもしれない。

「オレガノ抽出物および／またはその揮発性成分」という用語は、抽出可能化合物の完全な混合物だけでなく、単独で採取された植物の揮発性成分のみ、または互いのあらゆる組み合わせもまた含んでなることを意味する。本発明に従ったオレガノ抽出物の最も重要な揮発性成分は、カルバクロール、チモール、チモキノン、およびチモキノールである。オレガノ抽出物のさらなる揮発性成分の例は、４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノール、２，３−ジイソプロピル−５−メチルフェノール、２，４−ジイソプロピル−３−メチルフェノール、２，４−ジイソプロピル（ｄｉｉｓｏｐｒｐｙｌ）−５−メチルフェノール、２，５−ジイソプロピル−３−メチルフェノール、２，５−ジイソプロピル−４−メチルフェノール、２，６−ジイソプロピル−３−メチルフェノール、およびｐ−メント−３−エン−１−オールである。

茶は痕跡量の揮発物しか含有しないので、本発明の「オレガノ抽出物」という表現は、オレガノ種の生のまたは乾燥させた葉またはあらゆるその他の部分からできた茶または熱水抽出物を包含しない。

しかし水蒸気蒸留によって得られた抽出物は、本発明の範囲内である。このような抽出物は、一般に容易に分解されない揮発性化合物を含有する。チモキノンおよびその他の揮発物は水蒸気蒸留中により迅速に分解するので、蒸留された油はそれらをほとんど含有しない。しかしそれらは多量のカルバクロールを含有できる。それらの安定性のために、ＳＦＣＯ２抽出物が特に好ましい（未開封容器内で５年まで）。

「動物」は、ヒトを含み、哺乳類、魚、および鳥を包含する。好ましいのはヒト、ペットまたはコンパニオンアニマル、家畜、および毛皮産業で使用される動物である。

「家畜」は、サケおよびマスなどの魚、エビなどの水産養殖動物、ブタ、ウマ、反芻動物（畜牛、ヒツジ、ヤギ）、および家禽（ガチョウ、ニワトリ、ブロイラー、産卵鶏、ウズラ、アヒル、およびシチメンチョウなど）を含む。好ましいのは、家禽、畜牛、ヒツジ、ヤギ、およびブタである。

「ペット」または「コンパニオンアニマル」は、イヌ、ネコ、鳥、観賞魚、モルモット、（ジャック）ウサギ、ノウサギ、およびフェレットを含む。イヌおよびネコが好ましい。

「毛皮産業で使用される動物」は、ミンク、キツネ、およびノウサギを含む。

「食品組成物」としては、（強化）食品／飼料および飲料などのあらゆるタイプの栄養製品が挙げられ、臨床栄養製品および栄養補助食品もまた挙げられる。

「強化」とは、少なくともオレガノ抽出物またはその１つ以上の揮発性成分が、食品／飼料または飲料の製造中に添加されることを意味する。

ヒトでは、損なわれたまたは低下した神経伝達に関係する障害、したがって本発明の薬剤で治療または予防される障害として、うつ病、不安、過敏、不幸／不満、悲哀、不快、強迫性行動、不眠症、およびバイオリズム異常（乱れた概日リズム）が挙げられる。

したがって本発明の薬剤は、気分調和作用薬、気分／活力改善剤、ストレス緩和剤、不安低下剤、緊張低下剤、弛緩薬、睡眠改善剤、およびバイオリズム正常化剤として特徴づけることができる。

神経伝達物質調節因子である多数の医薬組成物は、様々な気分関連障害において有効であることが判明している。本発明の抽出物は、同一または同様の生化学的経路を使用して効き目があると分かっているので、次にそれらは取り込み阻害剤として、同様の病状のために有用であると結論できる。

したがって脳内で神経伝達物質レベルを増大させ、ひいてはそれらの伝達を増強させる化合物は、抗うつ特性ならびに多様なその他の精神障害に対する有益な効果を示すことができる（「神経伝達物質、薬物、および脳機能（Ｎｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒｓ，Ｄｒｕｇｓ ａｎｄ Ｂｒａｉｎ ｆｕｎｃｔｉｏｎ）」Ｒ．Ａ．ウェブスター（Ｗｅｂｓｔｅｒ）（編）、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、２００１年、１８７〜２１１頁、２８９〜４５２頁、４７７〜４９８頁）。

損なわれた神経伝達に関係する障害を治療するための薬剤は、抗うつ薬、気分改善剤、ストレス緩和剤、病状改善剤、不安低下剤、および強迫行動低下剤を包含する。それらは全て、特に中枢神経系において生理学的神経伝達を改善、増強、サポートし、したがって精神機能障害を軽減する。

イミプラミン、アミトリプチリン、およびクロミプラミンなどの三環系抗うつ薬化合物（ＴＣＡ）は、セロトニン、ノルアドレナリンおよび／またはドーパミンの再取り込みを阻害する。それらは利用できる最も効果的な抗うつ薬と広く見なされるが、それらは例えばコリン作動性受容体などのいくつかの脳受容体とさらに反応するので、いくつかの不都合を有する。最も重要なことには、ＴＣＡを過量に摂取すると急性心臓毒性を示すことが多いために危険である。

別のクラスの抗うつ薬は、フルオキセチン、パロキセチン、セルトラリン、シタロプラム、およびフルボキサミンをはじめとするいわゆるＳＳＲＩ（選択的セロトニン再取り込み阻害剤）であり、それらはセロトニン再取り込みによってセロトニン作動性神経伝達を終結する高親和性塩化ナトリウム依存神経伝達物質輸送体であるセロトニン輸送体（ＳＥＲＴ）をブロックする。それらはうつ病および不安症の治療において効果的であることが判明しており、通常、ＴＣＡよりも耐容性がより高い。これらの治療薬は典型的に低投薬量で開始され、それらが治療的なレベルに達するまで増大させてもよい。一般的な副作用は悪心である。その他のあり得る副作用としては、食欲減退、口渇、発汗、感染症、便秘症、あくび、振戦、眠気、および性的機能不全が挙げられる。

また系統的レビューおよびプラセボ対照無作為化臨床試験（ＲＣＴ）は、いくつかのＳＳＲＩ（エスシタロプラム、パロキセチン、およびセルトラリン）、ＳＮＲＩベンラファキシン、いくつかのベンゾジアゼピン（アルプラゾラムおよびジアゼパム）、三環系抗うつ薬イミプラミン、および５−ＨＴ_１Ａ部分作動薬ブスピロンが、全て急性期治療において有効であることを示唆する。一般に治療効果は中等度であることが多く、症状は治療期間が中断すると再出現する。したがってＳＳＲＩよりも副作用が低く、長期間にわたって服用できる化合物による連続した長期治療または予防は、薬物療法よりも好ましいかもしれない。これはそれを必要とする人々に、栄養補助食品の形態のオレガノ抽出物またはそれらの揮発性成分を補給することで達成できる。

したがって依然として、損なわれた神経伝達に関係する障害を治療するために、既知の抗うつ薬のマイナスの副作用を示さない化合物に対する必要性がある。多くの患者は既知の薬物の服用と関連付けられている副作用が少ない、または皆無である代替的な治療法に関心を持っている。重度のうつ病は持続性の再発性疾患であり、それは通常、診断されにくい。さらに多くの患者は、軽度または中等度のうつ病を患っている。したがってうつ病などの精神疾患／障害の発症を治療または予防するために、リスクがある人々において使用でき、および気分を安定させる化合物ならびに医薬品および／または食品組成物の開発に対する関心が高まっている。

さらにモノアミンオキシダーゼ（ＭＡＯ）ＡおよびＢを阻害することで、神経伝達物質の異化作用をより広く阻害する化合物、いわゆるＭＡＯ阻害剤（ＭＡＯＩ）が、抗うつ効果を示す。ＭＡＯは、セロトニン、ノルアドレナリン、およびドーパミンなどのアミン基含有神経伝達物質の酸化を触媒する。

さらに神経伝達の調節因子は、精神および認知機能に対して多面発現効果を発揮する。うつ病に加えて、その他のヒト病状の例を下に列挙する。

［全般性不安障害（ＧＡＤ）およびその他の不安障害］
うつ病および全般性不安障害（ＧＡＤ）などの様々な精神疾患および病状は、例えば低い神経伝達物質レベルなどの損なわれた神経伝達に関係することがよく知られている。患者は、うつ病の併存疾患としてまたは単独で、全般性不安症候群または全般性不安障害を患うことが多い。ＧＡＤは一次医療において高度に蔓延している不安病状および慢性病である（患者の約１０％）（ウィッチェン（Ｗｉｔｔｃｈｅｎ）ら、２００５年、Ｅｕｒ．Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍ．１５：３５７〜３７６頁）。患者らは一次医療医に多数の身体症状を呈する。ＧＡＤは、慢性緊張、および不安懸念および緊張（＞６ヶ月）によって特徴づけられ、それらは日常生活に支障を来すほどで抑制できず、特徴的な過覚醒状態症候群（情動不安、筋肉緊張、および睡眠問題をはじめとする）を伴う。未治療の場合、ＧＡＤは慢性の変動する経過をとって、加齢に伴ってよりひどくなる傾向がある。ＧＡＤ患者は亜症候群性うつを患う。ＧＡＤ患者は、全ての不安および抑うつ性障害中、総体的な直接的および間接的医療関連の経済負担が最も高い高利用者に分類される。高いＧＡＤ発生率にもかかわらず、わずかな患者だけが診断され、投薬を処方され、または精神科医への紹介を受ける。患者の認識およびモニタリングを助ける単純な診断用ツールが必要である。特定の診断に関係なく、医師は効果的なＧＡＤ症状の治療を必要とする。パロキセチンなどのＳＳＲＩは、ＧＡＤ治療のために効果的である［ストッキ（Ｓｔｏｃｃｈｉ）ら、２００３年、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ ６３（３）：２５０頁］。

いくつかのＳＳＲＩが、ＦＤＡによって不安障害の治療のために認可されている。
フルオキセチン − ＯＣＤ、ＰＤ
セルトラリン − ＯＣＤ、ＰＤ、ＰＴＳＤ、ＳＡＤ
パロキセチン − ＯＣＤ、ＰＤ、ＳＡＤ、ＧＡＤ、ＰＴＳＤ
エスシタロプラム − ＧＡＤ
フルボキサミン − ＯＣＤ
［ＯＣＤ：強迫性障害、ＰＤ：パニック障害、ＰＴＳＤ：心的外傷後ストレス障害、ＳＡＤ：社会不安障害、ＧＡＤ：全般性不安障害］

［攻撃性］
病的な衝動的攻撃性は、前帯状皮質において［^１１Ｃ］ＭｃＮ ５６５２結合が顕著に低下していることを示したＰＥＴを使用して実証されるように、この脳領域におけるより低いセロトニン作動性神経支配と関連付けられるかもしれない［フランクル（Ｆｒａｎｋｌｅ）ら、２００５年、Ａｍ．Ｊ．Ｐｓｙｃｈ、１６２：９１５〜９２３頁］。この点に関して、セロトニン機能障害は、衝動的および暴力的犯罪行為、アルコール濫用、および自殺企図と関連づけられており、ならびに攻撃的行動のために施設収容された児童で報告されていることにも留意すべきである。

トリプトファンの食餌性欠乏は、実験室状況で攻撃的反応の増大をもたらす一方、トリプトファンの増強は攻撃的反応の減少をもたらすことが実証されている。したがっておそらくセロトニンの減少は、攻撃性の増大に関係している［マーシュ（Ｍａｒｓｈ）ら、２００２年、Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍ ２６：６６０〜６７１頁］。

［注意欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ）］
１種以上のモノアミンの再取り込みに影響するいくつかの抗うつ薬はまた、ＡＤＨＤの治療においても効果的であり、一般に使用される興奮性治療薬の良好な代替物である。（１）その作用機序がノルアドレナリンおよびセロトニン再取り込みの遮断、およびβ−アドレナリン作動性受容体の下方制御を伴う、イミプラミン、デシプラミン、およびアミトリプチリンなどの三環系抗うつ薬（ＴＣＡ）、（２）ブプロピオン（ドーパミン／ノルアドレナリン再取り込み阻害剤）およびベンラファキシン（ＳＮＲＩ）などの二重（ｄｕａｌ）再取り込み阻害剤、（３）アトモキセチンおよびトモキセチンなどの単一（ｓｉｎｇｌｅ）再取り込み阻害剤（前前頭皮質シナプス前ノルアドレナリン輸送体の遮断）［グレイダナス（Ｇｒｅｙｄａｎｕｓ）、２００５年、Ｉｎｄ．Ｊ．Ｐｅｄ．７２：９５３〜９６０頁；シュイナード（Ｃｈｏｕｉｎａｒｄ）、２００５年、Ｊ．Ｐｓｙｃｈ．＆Ｎｅｕｒｏ．３１（３）：１６８〜１７６頁］。

［概日リズム撹乱］
気分障害および職業上のストレスは、概日リズム（いわゆるバイオリズム）の撹乱をもたらす場合がある。これらの病状は慢性および持続性であることが多い。また長距離飛行によって（時差ぼけ）、ならびに交代勤務によって誘発される概日リズムの調節解除は、同様の症状および苦痛を引き起こす場合がある。したがって（動物またはヒトが慣れている）正常な概日リズムを維持し、および／または認知機能および記憶の障害、および精神および身体の疲労などの乱された概日リズムと関連付けられている症状を軽減および予防する、食餌補給による治療は、全体的な生活の質を改善し、それを必要とする人々の活力のために有益であることが保証される。

［睡眠障害、不眠症、および慢性疲労症候群］
睡眠とうつ病とは密接に関連している。睡眠ＥＥＧ異常は、うつ病において普通であり、不眠症はうつ病をもたらす場合がある。睡眠変化は、うつ病に関与するその他の生物学的リズムに影響を与える（フォーゲル（Ｖｏｇｅｌ）ら、１９９０年、Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｂｉｏｂｅｈａｖ Ｒｅｖ １４：４９〜６３頁；マッカーリー（ＭｃＣａｒｌｅｙ）、１９８２年、Ａｍ Ｊ Ｐｓｙｃｈ．１３９：５６５〜５７０頁）。抗うつ薬は睡眠連続性を改善し、急速眼球運動（ＲＥＭ）睡眠を減少させて、徐波（ＳＷＳ）睡眠を延長させることができる（Ｓ．Ｒ．パンディ・ペルマル（Ｐａｎｄｉ−Ｐｅｒｕｍａｌ）ら（編）「睡眠の臨床薬理学（Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｓｌｅｅｐ）」より、スラナー（Ｓｒａｎｅｒ）ら、２００６年、Ｂｉｒｋｈａｅｕｓｅｒ、Ｂａｓｅｌ、１０３〜１２４頁）。

ＴＣＡは、一般に慢性疲労症候群の治療のために使用される。ＴＣＡは、第四段階、急速眼球運動睡眠を促進すると考えられている［クレイグ（Ｃｒａｉｇ）ら、２００２年 Ａｍ．Ｆａｍ．Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ、６５：１０８３〜１０９０頁］。

［強迫性障害（ＯＣＤ）］
５−ＨＴ_２受容体における増強された神経伝達が、ＯＣＤにおけるＳＳＲＩの治療作用と関係があるかもしれない。眼窩前頭皮質、尾状核頭、および視床間のニューロンループ中の活動亢進は、ＳＳＲＩによって、眼窩前頭皮質中の阻害性５−ＨＴ_２受容体の活性化増大のために減衰するかもしれない［Ｂｌｉｅｒら、２００１年、Ｊ．Ｐｓｙｃｈ＆Ｎｅｕｒｏ．２６（１）：３７〜４３頁］。ジメルジン、フルオキセチン、およびセルトラリンなどのＳＳＲＩは、ＯＣＤの治療において効果的であることが実証されている［シュイナード（Ｃｈｏｕｉｎａｒｄ）、２００５年、Ｊ．Ｐｓｙｃｈ＆Ｎｅｕｒｏ．３１（３）：１６８〜１７６頁］。

［疼痛］
様々な作用機序がある抗うつ薬はまたは、疼痛治療においても効果的であることができる。例えば強力な５−ＨＴ_２拮抗薬であるアミトリプチリンおよびミアンセリンは、慢性疼痛の抑制のために使用される［Ｂｌｉｅｒら、２００１年、Ｊ．Ｐｓｙｃｈ＆Ｎｅｕｒｏ、２６（１）：３７〜４３頁］。ノルアドレナリン／セロトニン／ドーパミン再取り込み阻害剤であるデュロキセチンは、糖尿病性末梢神経障害と関連付けられている神経障害性疼痛の治療において有効である［シュイナード（Ｃｈｏｕｉｎａｒｄ）、２００５年、Ｊ．Ｐｓｙｃｈ＆Ｎｅｕｒｏ．３１（３）：１６８〜１７６頁］。このタイプの疼痛は、炎症と関連付けられているものと異なる。本発明に従って、炎症を低下させるのとは異なる機序を使用して疼痛を低下させる。

したがって本発明は、有効量のオレガノ抽出物または１つ以上のその揮発性成分をそれを必要とする動物（ヒトをはじめとする）に投与するステップを含んでなる、損なわれた神経伝達に関係する障害を治療する方法に関する。

したがって抗うつ薬として、オレガノ抽出物およびそれらの揮発性成分、ならびにそれらを含有する組成物／薬剤は、例えば単極性うつ病、双極性うつ病、急性うつ病、慢性うつ病、亜慢性うつ病、気分変調、分娩後うつ病、月経前不快気分／症候群（ＰＭＳ）、更年期うつ症状、攻撃性、注意欠陥障害（ＡＤＳ）、社会不安障害、季節性気分障害、不安／全般性不安障害（ＧＡＤ）、線維筋痛症候群、慢性疲労、睡眠障害（不眠症）、心的外傷後ストレス障害、パニック障害、強迫性障害、むずむず脚症候群、神経過敏、片頭痛／原発性頭痛および疼痛一般、嘔吐、過食症、神経性食欲不振症、無茶食い障害、胃腸障害、燃え尽き症候群、過敏および倦怠感などの精神的、行動および情動／感情的、神経症的、神経変性的、摂食およびストレス関連障害を治療するための薬剤である。

抗うつ薬として、オレガノ抽出物およびそれらの揮発性成分、ならびにそれらを含有する組成物／薬剤はまた、神経認知障害を第一次および第二次予防および／または治療するための組成物を製造するのにも使用できる。さらにそれらはまた、例えば心臓血管疾患、脳卒中、癌、アルツハイマー病、およびパーキンソン病などの慢性疾患における併存疾患として生じる神経伝達障害に関連した、うつ症状またはその他の症状を治療するのに効果的でもある。本発明に従ってオレガノ抽出物およびそれらの揮発性成分、ならびにそれらを含有する組成物／薬剤は、心臓血管疾患、脳卒中、癌、アルツハイマー病、およびパーキンソン病それ自体を治療するためでなく、これらの疾患によって引き起こされるうつ病を治療するのに使用される。

オレガノ抽出物またはそれらの揮発性成分は、損なわれた神経伝達に関係する障害を治療するための薬剤を製造するのに使用できる。それらはまた、気分調和作用薬、気分／活力改善剤、ストレス緩和剤、病状改善剤、不安低下剤、緊張低下剤、悲哀低下剤、不幸／不満低下剤、過敏低下剤、不快低下剤、強迫行動低下剤、弛緩薬、睡眠改善剤および／または不眠症軽減薬として使用される組成物を製造するためにさらに使用できる。

「気分改善剤」、「活力改善剤」または「情緒的健康増幅剤」とは、それで治療された個人の気分または活力が改善されて、自信が高まりおよび／またはマイナス思考および／またはマイナスの緊張、悲哀、不幸／不満および過敏、および不快が低下することを意味する。それはまた、情動が安定しおよび／または全般的な、特に精神的な幸福および活力が改善または維持されて、ならびに気分変動のリスクが減少し、前向きな気分が保たれて、活動的および意欲的に感じられることも意味する。

「緊張低下剤、悲哀低下剤、不幸／不満低下剤、過敏低下剤、不快低下剤」とは、（慢性）緊張および心配が低下しまたは改善されることを意味する。情動不安および筋肉緊張をはじめとする過覚醒状態症候群もまた、低下しまたは軽減される。社会的およびその他の恐怖症もまた、少なくとも部分的に消散される。一般に社会環境は、より脅威の少ないものとして経験される。個人は感情的にくつろいで心地よさを経験し、他の人たちとの親交および接触を楽しむ。一般に、個人は毎日の仕事を行うにあたり、活動的および意欲的に感じる。

「弛緩薬」は、時差ぼけまたは交代勤務が原因で乱された個人の概日リズム（バイオリズム）を修正することで、完全にまたは部分的に機能する。弛緩薬は、このような撹乱と関連付けられている症状、すなわち認知機能および記憶の障害、精神的および肉体的疲労を少なくとも部分的に予防しまたは消滅させ、総体的な生活の質および活力を改善するであろう。したがってオレガノ抽出物または１つ以上のそれらの揮発性成分はまた、認知機能および記憶の障害を予防しおよび／または消滅させ、精神的および肉体的疲労を予防しおよび／または消滅させ、全体的な生活の質および活力を改善するのに使用してもよい。

本発明のさらなる実施態様は、「病状改善剤」としての、すなわち病気のまたは正常な健康な個人において、過敏および倦怠感を低下させ、身体的および精神的疲労を低下させ、予防し、または軽減し、平静な睡眠に有利に働き、すなわち不眠症および睡眠障害に抗して睡眠を改善し、より全般的なエネルギーを増大させ、特に脳エネルギー生成を増大させる手段としてのオレガノ抽出物またはそれらの揮発性成分の使用、およびそれらを含有する組成物の使用に関する。さらにこのような「病状改善剤」は、一般的な認知力改善のために、特に注意および集中力、記憶、想起能力、学習能力、言語処理、問題解決、知的機能の維持または改善のために、短期記憶改善のために、精神的敏捷性増大のために、集中能力および精神的鋭敏さ増大のために、精神的覚醒増強のために、精神疲労低減のために、良好な認知性のサポートのために、安定した認知機能の維持のために、空腹感および満腹の制御のために、ならびに運動能の制御のために使用される。

したがって本発明の好ましい態様は、気分調和作用薬および／またはストレス緩和剤としてのオレガノ抽出物およびそれらの揮発性成分の使用に関する。

本発明のさらなる好ましい実施態様では、ヒトにおいて概日リズムを維持するために、ヒトにおいて乱された概日リズムと関連付けられている症状を軽減および／または予防するために、オレガノ抽出物またはそれらの揮発性成分が使用される。したがって気分が安定し、感情的な落ち着きが達成されて、日常生活のストレスが処理され、肉体的および心理学的機能が維持される。さらに全体的な生活の質が改善されるように、認知機能および記憶の障害、および精神的および肉体的疲労などの乱された概日リズムと関連付けられている症状が、軽減および／または予防される。これらの人々はまた、活力の維持からも恩恵を受ける。また、長距離飛行（時差ぼけ）によって、ならびに交代勤務によって誘発される概日リズムの調節解除、およびそれと関連付けられている症状が、軽減および／または予防される。

本発明の別の好ましい態様は、抗うつ薬として使用するための組成物を製造するためのオレガノ抽出物またはそれらの揮発性成分の使用に関する。

本発明の文脈で「治療」とは、併用治療ならびに予防もまた包含する。「予防」は、最初の発生の予防（一次予防）、または再発予防（二次予防）であることができる。予防はまた、損なわれた神経伝達に、または不安定な気分またはストレスに悩まされるリスクが低下することも意味する。「予防」という用語は、特に乱された概日リズムと関連付けられている特定の症状を発症するリスクまたは発症率の低下を特に包含する。

別の実施態様では、オレガノ抽出物またはそれらの揮発性成分の効果的な用量を特に精神的幸福を維持するため、安定した認知機能を維持するため、前向きな気分、リラクセーションの維持を助けるため、および良好な認知性をサポートするために使用してもよい。

本発明の抽出物またはそれらの揮発性成分は、特に中枢神経系における生理学的神経伝達を改善、増強、サポートし、したがって精神機能障害を軽減するかもしれない。

本発明のさらに別の態様は、ヒトにおいてカルバクロールの血漿レベルを少なくとも１０ｎｇ／ｍｌに増大させることで、好ましくはヒトにおいてカルバクロールの血漿レベルを１０ｎｇ／ｍｌ〜５１０００ｎｇ／ｍｌの範囲内で増大させることで、ヒトにおいて損なわれた神経伝達に関係する障害を予防または治療する方法である。血漿レベルは、実施例で述べられているようにして測定されてもよい。

［獣医学用途］
本発明の別の態様は、オレガノ抽出物および／またはその揮発分（ｖｏｌｉｔｉｌｅｓ）の獣医学用途である。動物は、ストレスの多い状況に対して、有害な行動上のおよび／または生理学的反応を示すかもしれない。例えば量産環境で育てられる、または輸送される動物は、肉またはミルクの量または質が低下する可能性がある。ストレスを受けた家禽は、毛引き、産卵低下、および共食いに訴える可能性がある。多くの動物は、攻撃的になりまたは強迫性行動を示す可能性がある。本発明の抽出物および揮発分（ｖｏｌｉｔｉｌｅｓ）は、神経伝達物質に作用することで、動物におけるこれらの望ましくない行動および生理機能を軽減できる。

本発明の好ましい実施態様では、オレガノ抽出物またはそれらの揮発性成分は、量産家畜飼育において、屠殺場への輸送中に、家畜のストレスを予防するために投与され、および／または屠殺場への輸送中に前記家畜の肉質低下を予防するために、投与される。

本発明の別の好ましい実施態様では、オレガノ抽出物またはそれらの揮発性成分は、飼い主との離別、飼い主の交代、または飼い主の喪失、休暇中の離別、およびいわゆる「ペットホテル」での飼育、ペットシェルターまたは避難所での飼育などのストレスの多い条件下で示される、ストレス、緊張および攻撃性および／または強迫行動を低下させるために、ペットまたはコンパニオンアニマルに投与される。

特にペット動物および家畜は、強化されまたは改善された神経伝達を必要とする条件にあることができる。このような条件は、例えば捕獲または輸送後に、または収容中に生じ、動物は類似性障害を発症し、苦痛を感じまたは攻撃的になり、または常同行為、または不安、緊張、悲哀、不幸／不満および過敏、不快、および強迫行動を示す。

したがってオレガノ抽出物またはそれらの揮発性成分、および上述の選択物は、一般にヒトをはじめとする動物のための、好ましくはヒトおよびその他の哺乳類、特にペット動物および家畜のための抗うつ薬として使用できる。

本発明の別の実施態様は、効果的な用量のオレガノ抽出物または１つ以上のその揮発性成分をそれを必要とする家畜に投与するステップを含んでなる、量産家畜飼育中に、屠殺場への輸送中に、家畜のストレスを予防し、および／または屠殺場への輸送中に前記家畜の肉質低下を予防する方法である。家畜は、好ましくは家禽、畜牛、ヒツジ、ヤギ、およびブタである。

本発明の別の好ましい実施態様では、例えば肉質および産卵数の損失をもたらす毛引きおよび共食いを予防するために、オレガノ抽出物またはそれらの揮発性成分が家禽に投与される。したがって本発明の別の態様は、効果的な用量のオレガノ抽出物または１つ以上のその揮発性成分をそれを必要とする家禽に投与するステップを含んでなる、輸送ストレスに際しての産卵数損失、毛引きおよび共食い、および肉質の損失を予防する方法に関する。

本発明の別の態様は、効果的な用量のオレガノ抽出物または１つ以上のその揮発性成分をそれを必要とする動物に投与するステップを含んでなる、水産養殖においてストレスを予防および／または軽減する方法であり、動物は魚またはエビである。

本発明のさらに別の態様は、効果的な用量のオレガノ抽出物または１つ以上のその揮発性成分をそれを必要とするペット動物、特にそれを必要とするネコおよびイヌに投与するステップを含んでなる、飼い主との離別、飼い主の交代、または飼い主の喪失、休暇中の離別、およびいわゆる「ペットホテル」での飼育、ペットシェルターステーションおよびその他の密集飼育および繁殖条件での飼育などのストレスの多い条件下のペット動物において、ストレス、緊張、攻撃性および／または強迫行動を低下させる方法である。

本発明のなおも別の態様は、毛皮産業で使用される動物において、好ましくはミンク、キツネおよび／またはノウサギのために、ストレスの多い条件と関連付けられている症状を予防および／または低下させる方法である。

動物のためには、オレガノ抽出物またはそれらの揮発性成分は好ましくは強化飼料または強化飲料として（例えば飲用水への添加物として）投与される。

［オレガノ抽出物およびそれらの揮発性成分］
オレガノ抽出物は、ハナハッカ（Ｏｒｉｇａｎｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ）などのオリガヌム（Ｏｒｉｇａｎｕｍ）属、およびタチジャコウソウ（Ｔｈｙｍｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ）などのティムス（Ｔｈｙｍｕｓ）属に属する植物（全植物体またはその部分）のいずれかに由来する抽出可能化合物、特に揮発性化合物の濃縮物形態であってもよい。「オレガノ」という用語によってカバーされるオリガヌム（Ｏｒｉｇａｎｕｍ）属からの植物のさらなる例は、Ｏ．マヨナラ（ｍａｊｏｒａｎａ）、Ｏ．ディクタムヌス（ｄｉｃｔａｍｕｓ）、Ｏ．クレティクム（ｃｒｅｔｉｃｕｍ）、ポットマジョラム（Ｏ．ｘ ｍａｊｏｒｉｃｕｍ）、ゴールデンオレガノ（Ｏ．ａｕｒｅｕｍ）、Ｏ．コンパクタ（ｃｏｍｐａｃｔａ）（ｃｏｍｐａｃｔｕｓ）、Ｏ．シリアカ（ｓｙｒｉａｃａ）、ターキッシュオレガノ（Ｏ．ｔｙｔｔｈａｎｔｕｍ）、Ｏ．ヘラクレオティクム（ｈｅｒａｃｌｅｏｔｉｃｕｍ）、Ｏ．スミルナオイム（ｓｍｙｒｎａｅｕｍ）、およびグリーンオレガノ（Ｏ．ｖｉｒｅｎｓ）である。「オレガノ」という用語によってカバーされるティムス（Ｔｈｙｍｕｓ）属からの植物のさらなる例は、キャラウエイタイム（Ｔ．ｈｅｒｂｕｓ−ｂａｒｏｎａ）、レモンタイム（Ｔ．ｃｉｔｒｉｏｄｏｒｕｓ）、Ｔ．マストキナ（ｍａｓｔｉｃｈｉａｎａ）、ブロードリーフタイム（Ｔ．ｐｕｌｅｇｉｏｉｄｅｓ）、ヨウシュイブキジャコウソウ（Ｔ．ｓｅｒｐｙｌｌｕｍ）、ティムス・オドラティッシムス（Ｔ．ｐａｌｌａｓｉａｎｕｓ）、およびヘアリー・タイム（Ｔ．ｐｒａｅｃｏｘ）である。濃縮物は抽出のために使用された溶剤をなおも含有しても、含有しなくても、または特定キャリア材料に転移されてもよい。抽出物は、（ａ）例えばメタノール、エタノール、酢酸エチル、ジエチルエーテル、ｎ−ヘキサン、塩化メチレンのような溶剤、または二酸化炭素（純粋なまたはアルコールなどのその他の溶剤との混合物中の）または酸化二窒素のような超臨界流体での抽出、（ｂ）精油を得るための水蒸気蒸留、または（ｃ）窒素のような熱ガスでの抽出／蒸留などの当該技術分野でよく知られている方法に従って得られてもよい。

好ましくは超臨界二酸化炭素の使用での抽出によって得られたオレガノ抽出物が使用される。このような抽出物は、有機溶剤、タンパク質、および重金属を含有しないという利点を有する。所望ならば、超臨界二酸化炭素での抽出に第２の超臨界流体ＣＯ２抽出ステップを続けて、ワックスを除去し、選択的に揮発物を濃縮する。

オレガノ抽出物またはそれらの揮発性成分は、天然または合成または混合（すなわち部分的天然、部分的合成）起源であることができ、すなわちそれらは、植物の抽出および分画によって得られるほかに化学的に合成して、所望ならばあらゆる所望の量で共に混合できる。それらは、例えばそれらを例えば１０％（ｗ／ｗ）以下程度の低濃度、またはほぼ１００％（ｗ／ｗ）までの濃度で含有する溶液として、あらゆる所望の純度および濃度で調製および使用できる。

好ましいのは、オレガノ抽出物の揮発性成分の少なくとも１つを高比率で含有するオレガノ抽出物である。より好ましいのは、抽出物総重量を基準にして、少なくとも合計７０重量％の上述の揮発性成分を含有するオレガノ抽出物である。完全に天然のオレガノ抽出物をその少なくとも１つの特定の揮発性成分で強化してもよい。

本発明の文脈で好ましいオレガノ抽出物は、オレガノ抽出物の重量を基準として、少なくとも３０重量％のカルバクロールを含んでなるオレガノ抽出物、少なくとも５０重量％のカルバクロールを含んでなるオレガノ抽出物、より好ましくは少なくとも６０重量％のカルバクロールを含んでなるオレガノ抽出物、最も好ましくは少なくとも６５重量％のカルバクロールを含んでなるオレガノ抽出物である。

また好ましいオレガノ抽出物は、オレガノ抽出物の重量を基準として、０〜３０重量％の範囲内の量でチモキノンを含んでなるオレガノ抽出物、好ましくは少なくとも１重量％のチモキノンを含んでなるオレガノ抽出物、より好ましくは少なくとも２重量％のチモキノンを含んでなるオレガノ抽出物、なおもより好ましくは少なくとも５重量％のチモキノンを含んでなるオレガノ抽出物、最も好ましくは５〜３０重量％の範囲のチモキノンを含んでなるオレガノ抽出物である。

その他の好ましいオレガノ抽出物は、オレガノ抽出物の重量を基準として、少なくとも５０重量％のカルバクロールおよび０〜２５重量％のチモキノンを含んでなるオレガノ抽出物、好ましくは少なくとも５０重量％のカルバクロールおよび少なくとも１重量％のチモキノンを含んでなるオレガノ抽出物、より好ましくは少なくとも５５重量％のカルバクロールおよび少なくとも２重量％のチモキノンを含んでなるオレガノ抽出物、なおもより好ましくは少なくとも６０重量％のカルバクロールおよび少なくとも５重量％のチモキノンを含んでなるオレガノ抽出物、最も好ましくは少なくとも６５重量％のカルバクロールおよび５〜２５重量％の範囲のチモキノンを含んでなるオレガノ抽出物である。

また好ましいのは、カルバクロール、チモキノン、ｐ−シメン、チモキノール、リモネン、リナロール、ボルネオール、４−テルピネオール、チモール、およびカリオフィレンからなる群から選択される単一の揮発性成分、またはそれらの混合物が使用される方法である。好ましくは揮発性成分は、カルバクロール、チモキノン、およびｐ−シメンからなる群から選択され、より好ましくは揮発性成分はカルバクロールおよび／またはチモキノンであり、最も好ましくは揮発性成分はカルバクロールである。

なおもより好ましいのは、親水性抽出物である、ロスマリン酸、オイゲノール、オイゲノール塩、オイゲノール異性体、酵母細胞壁、または１−ピペロイルピペリジンの構成物の本質的な量を含有しないオレガノ抽出物である。「本質的な量」とは、本明細書での用法では、仮に存在する場合、前記オレガノ抽出物またはオレガノ材料または揮発性成分の総重量を基準にして、好ましくは０．５重量％未満、より好ましくは０．２重量％未満、なおもより好ましくは０．１重量％未満であるこれらのいずれかの成分の総量である。

さらにオレガノ抽出物と次の組み合わせなどの植物抽出物の特定の組み合わせは本発明で好ましくない。ヒメマツタケ（Ａｇａｒｉｃｕｓ ｂｌａｚｅｉ）、イラクサ、チョウセンアザミ、サンザシ（Ｃｒａｔａｅｇｕｓ）、ヤクモソウ（Ｌｅｏｎｕｒｕｓ）、セイヨウノコギリソウ、ヤドリギ、クラタエグ（Ｃｒａｔａｅｇ，）、サンシキスミレ（Ｈｅｒｂａ ｖｉｏｌａ ｔｒｉｃｏｌｏｒ）、コガネバナ（Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａｅ ｂａｉｃａｌｅｎｓｉｓ）、ターメリック、ミツバオウレ、メギ。

本発明の組成物は、好ましくは、強化食品、強化飼料、または強化飲料などの栄養組成物の形態、またはヒトをはじめとする動物のための強化液体食品／飼料の形態である。

本発明に従った食品および医薬組成物は、例えば食品または飼料（のための添加剤／補給剤）、食品または飼料プレミックス、強化食品または飼料、錠剤、丸薬、顆粒、糖衣丸、カプセル、粉末や錠剤などの発泡性調合物などの固形形態、または例えば飲料、ペースト、および油性懸濁液などの溶液、エマルジョンまたは懸濁液などの液体形態などの人体をはじめとする動物体へ投与するのに適した形態のあらゆるガレヌス製剤、特に経口投与に慣例的なあらゆる形態であってもよい。ペーストは、カプセルが、例えば（魚、ブタ、家禽、ウシ）ゼラチン、植物タンパク質またはリグニンスルホネートのマトリックスを特色とする、硬質または軟質シェルカプセル内にカプセル化してもよい。適用形態のその他の例は、経皮、非経口または注射用投与形態である。食品および医薬組成物は、制御（遅延）放出製剤の形態であってもよい。本発明の組成物は経鼻投与されない。

本発明に従った食品組成物は、（ガム、タンパク質、加工デンプンなどの）保護親水コロイド、バインダー、塗膜形成剤、封入作用薬／材料、壁／シェル材料、マトリックス化合物、コーティング、乳化剤、表面活性剤、可溶化剤（油、脂肪、ワックス、レシチンなど）、吸着材、キャリア、充填材、共化合物、分散剤、湿潤剤、加工助剤（溶剤）、流動化剤、味覚マスキング剤、増量剤、ゲル化剤、ゲル形成剤、抗酸化剤、および抗菌剤をさらに含有してもよい。

食品の例は、シリアルバーと、ヨーグルトなどの乳製品と、ケーキおよびクッキーなどのベーカリー製品である。強化食品の例は、シリアルバーと、パン、ロールパン、ベーグル、ケーキ、およびクッキーなどのベーカリー製品である。栄養補助食品の例は、錠剤、丸薬、顆粒、糖衣丸、カプセル、および発泡性調合物であり、清涼飲料と、フルーツジュースと、レモネードと、ニアウォーター飲料と、茶と、スープおよび乳製品（ミューズリー飲料）などの液体食品の形態のミルクベースの飲料となどの非アルコール性飲料の形態である。

飲料は、非アルコール性およびアルコール性飲料と、ならびに飲用水および液体食品に添加される液体調製品とを包含する。非アルコール性飲料は、例えば清涼飲料、スポーツドリンク、フルーツジュース、野菜ジュース（例えばトマトジュース）、レモネード、茶、およびミルクベースの飲料である。液体食品は、例えばスープおよび乳製品（例えばミューズリー飲料）である。

少なくとも１つのオレガノ抽出物またはその揮発性成分の１つに加えて、本発明に従った医薬組成物は、限定されるものではないが、水、あらゆる起源のゼラチン、植物ガム、リグニンスルホネート、滑石、糖、デンプン、アラビアゴム、植物油、ポリアルキレングリコール、着香剤、保存料、安定剤、乳化剤、緩衝液、潤滑剤、着色剤、湿潤剤、充填材などをはじめとする従来の医薬添加剤およびアジュバント、賦形剤または希釈剤をさらに含有してもよい。キャリア材料は、経口／非経口／注射投与に適した有機または無機不活性キャリア材料であることができる。

ヒトでは、本発明の目的のためのオレガノ抽出物またはそれらの揮発性成分の適切な１日量は１日あたり体重１ｋｇあたり０．００１ｍｇから体重１ｋｇあたり約１００ｍｇの範囲内であってもよい。より好ましいのは体重１ｋｇあたり約０．０１〜約１０ｍｇの１日量であり、特に好ましいのは体重１ｋｇあたり約０．０５〜５．０ｍｇの１日量である。

ヒトのための投薬単位の固体調合物中では、オレガノ抽出物またはその揮発性成分は、投薬単位あたり約０．１ｍｇ〜約１０００ｍｇ、好ましくは約１ｍｇ〜約５００ｍｇの量で適切に存在する。ここで言及される条件と関連付けられている症状の緩和のために、オレガノ抽出物またはその揮発性成分のいずれかは、少なくとも１週間、最高６〜１２ヶ月まで、食餌と共に毎日１回または２回服用される。ここで言及される条件と関連付けられている症状の発症を予防し、一般にリラックスした状態を維持するために、定期的摂取が適切である。

食品組成物中で、特にヒトのための食品および飲料中で、オレガノ抽出物またはその揮発性成分は、食品または飲料の総重量を基準にして、約０．０００１（１ｍｇ／ｋｇ）〜約５重量％（５０ｇ／ｋｇ）、好ましくは約０．００１％（１０ｍｇ／ｋｇ）〜約１重量％、（１０ｇ／ｋｇ）より好ましくは約０．０１（１００ｍｇ／ｋｇ）〜約０．５重量％（５ｇ／ｋｇ）の量で適切に存在する。上で定義される条件と関連付けられている症状の軽減のために、食品は少なくとも１〜３週間にわたり毎日１回または２回、または定期的に、すなわち少なくとも毎日１回摂取される。

本発明の好ましい実施態様の食品および飲料中では、オレガノ抽出物またはその揮発性成分の量は一食当たり１０〜３０ｍｇ、すなわち食品または飲料１ｋｇあたり１２０ｍｇである。食品は少なくとも１〜３週間にわたり毎日１回または２回、または好ましくは定期的に少なくとも毎日１回摂取される。

ヒトを除く動物では、本発明の目的でオレガノ抽出物またはその揮発性成分の適切な１日量は、毎日体重１ｋｇあたり０．００１ｍｇから体重１ｋｇあたり約１０００ｍｇの範囲内であってもよい。より好ましいのは体重１ｋｇあたり約０．１ｍｇ〜約５００ｍｇの１日量、特に好ましいのは体重１ｋｇあたり約１ｍｇ〜１００ｍｇの１日量である。量産家畜飼育および毛皮産業飼育または水産養殖などのストレスの多い条件と関連付けられている症状を予防し、低下させるために、オレガノ抽出物またはその揮発性成分を含有する製品を屠殺までの動物の全生涯にわたって与える。特に家禽、畜牛、ヒツジ、ヤギ、およびブタなどの家畜、特に畜牛およびブタを屠殺場に輸送する場合、好ましくは輸送中に、より好ましくは輸送の少なくとも３日前および輸送中に約３〜８００ｍｇ／ｋｇ体重の抽出物および／または揮発性物質（ｖｏｌｉｔｉｌｅｓ）の１日量をそれらに投与すべきである。

ペットでは、動物シェルターファームまたはペットショップなどのストレスの多い条件下で、少なくとも１〜３週間、または飼育期間全体にわたって製品を投与すべきである。休暇中の離別、「ペットホテル」での飼育、動物病院での受診または入院などの短期ストレス条件下では、ストレスの多い出来事の少なくとも３日前、および好ましくは７日前に、製品を投与してもよい。

本発明を以下の非限定的例によって例示する。

［実施例］
［実施例１：２種のＯ．ウルガレ（ｖｕｌｇａｒｅ）抽出物の調製］
下の実施例で「−ｓｅ」はフェノールタイプオレガノ抽出物１を指し、「−ｔｏ」はテルピネオールタイプオレガノ抽出物２を指し、どちらもドイツ国のフラベックス（Ｆｌａｖｅｘ）から得られる。

Ｏ．ウルガレ（ｖｕｌｇａｒｅ）の乾燥させた葉を粉砕して、超臨界二酸化炭素で抽出した。抽出パラメーターは、次のとおり。温度４５℃、作動圧力３００バール（−ｔｏ）または１００バール（−ｓｅ）、１ｋｇの植物材料あたり１７ｋｇ（−ｔｏ）および１５ｋｇ（−ｓｅ）の二酸化炭素が必要であり、抽出物は圧力を３０℃で６０バールに加圧して分離器内に得られた。

２５ｋｇ（−ｔｏ）または５０ｋｇ（−ｓｅ）の植物材料は、それぞれ１ｋｇの抽出物を生じた。

抽出物１は次の組成物を有した（ガスクロマトグラフィーによる分析）
精油総含量は８３％であった（残存部分は植物ワックス）。
揮発性成分：テルピネン０．２％、シメン２．６％、４−テルピネオール１．５％、チモキノン２３％、チモール０．３％、カルバクロール６２％、カリオフィレン１．５％。

抽出物２（ＲＶ１４１−２３）は、精油の総含量を基準にして、３５〜５０％のｔｒａｎｓβテルピネオール、５〜１０％のｃｉｓβテルピネオール、８〜１２％の４−テルピネオールをはじめとしてテルピネオールの含量が高く、チモール５〜１２％、カルバクロール＜１％をはじめとしてフェノールが相対的に少ない、８０〜９０％の精油を含有した。

［実施例２：オレガノ抽出物３の調製］
ハナハッカ（Ｏｒｉｇａｎｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ）の葉を容積比９：１のメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルおよびメタノールの溶剤混合物で抽出した。

［実施例３：オレガノ抽出物４フラベックス（Ｆｌａｖｅｘ）の調製および組成物］
実施例１抽出物１に従ってオレガノ葉を調製した。異なる採取ロットのために、組成物は抽出物１とわずかに異なる。

精油の総含量は８９．５％（残存部分は植物ワックス）であった。
揮発性成分：シメン７．８％、４−テルピネオール１．２％、チモキノン、１２．１％、チモール０．２２％、カルバクロール６８．５％、カリオフィレン１．６％、リモネン０．１％、リナロール０．７７％、ボルネオール２．６％。

［実施例４：オレガノ抽出物の詳細な組成］
オレガノ葉の水蒸気蒸留によって抽出物を調製した。
組成は次のとおり。
分析法ＧＣ／ＭＳ

［実施例５：オレガノ抽出物によるセロトニン取り込み阻害］
ヒトセロトニン再取り込み輸送体（ｈＳＥＲＴ）を安定して発現するＨＥＫ−２９３細胞を米国のバンダービルト大学（Ｖａｎｄｅｒｂｉｌｔ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）のＲ．ブレークリー（Ｒ．Ｂｌａｋｅｌｙ）から得た。スイス国アルシュヴィル（Ａｌｌｓｃｈｗｉｌ）のバイオコンセプト（Ｂｉｏｃｏｎｃｅｐｔ）から購入した、１０％ウシ胎仔血清、ペニシリン、ストレプトマイシン、Ｌ−グルタミン、および抗生物質Ｇ４１８を含有するダルベッコの修正イーグル培地中で細胞を通常どおり生育させ、トリプシン処理によって継代培養した。アッセイの１日前に、細胞を前述の培地中に播種した。アッセイの直前に、３５μＭパージリン、２．２ｍＭ ＣａＣｌ_２、１ｍＭアスコルビン酸、および５ｍＭ Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸（「Ｈｅｐｅｓ」緩衝液）を添加した、シグマケミカル（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ Ｌｔｄ．）から購入したクレブス−リンゲル炭酸水素塩緩衝液で培地を置換した。英国スラウ（Ｓｌｏｕｇｈ）のアマーシャム・バイオサイエンシズＧＥヘルスケア（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）からの濃度２０ｎＭの放射標識（^３Ｈ）セロトニンの添加、および室温で３０分間のインキュベーションによって、細胞中へのセロトニン取り込みを判定した。組み込まれなかった標識の除去に続いて、上記緩衝液で穏やかに３回洗浄し、液体シンチレーション計数によって組み込まれたセロトニンを定量化した。

輸送体によるセロトニン取り込みは、オレガノ抽出物によって用量依存様式で阻害された。３種のオレガノ抽出物によるセロトニン取り込み阻害について測定したＩＣ_５０値を表１に示す。

［実施例６：オレガノ抽出物１によるモノアミンオキシダーゼ阻害］
有機アミンｐ−チラミンまたはベンジルアミンをそれぞれモノアミンオキシダーゼＡ（ＭＡＯ−Ａ）およびＢ（ＭＡＯ−Ｂ）酵素のための基質として使用した。この反応により生成される過酸化水素（Ｈ_２Ｏ_２）を西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）で触媒されるバニリン酸との反応によって定量化した。

反応は、ポリスチレンマイクロタイタープレート内で実施した。ＭＡＯ酵素（最終濃度２Ｕ／ｍｌ）を必要に応じてシグマからのｐ−チラミン（最終濃度０．５ｍＭ）、またはシグマからのベンジルアミン（最終濃度０．５ｍＭ）のどちらか、およびｐＨ７．６の０．２Ｍカリウムリン酸緩衝液中の色素産生溶液（フルカ（Ｆｌｕｋａ）からのバニリン酸、フルカからの４−アミノアンチピリン、およびシグマからの西洋ワサビペルオキシダーゼをそれぞれ最終濃度０．２５ｍＭ、０．１２５ｍＭ、および１Ｕ／ｍｌで含有する）と混合した。反応を例えばモレキュラー・デバイス・コーポレーション（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）からのスペクトラマックス（Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘ）Ｍ５などのマイクロタイタープレート吸光度読み取り装置内で追跡した。４９５ｎｍでの吸光度を１５秒毎に４０分間にわたり読み取って、モレキュラー・デバイス・コーポレーションからのＳＯＦＴｍａｘＰｒｏを使用した直線回帰によって初期反応速度を計算した。

モノアミンオキシダーゼ酵素に対するオレガノ抽出物１の効果は、基質とのインキュベーションの１０分前およびその最中における、０．０３〜１００μＭの一連の濃度でのアッセイ中へのその包含によって判定された。ＨＲＰが触媒する反応部分に対する化合物の効果を判定するために、ＭＡＯ酵素をモレキュラープローブズ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ）からのＨ_２Ｏ_２（最終濃度０．２ｍＭ）によって置換した。ＭＡＯ−Ａおよび−Ｂを含有する反応がどちらもオレガノ抽出物１によって用量依存様式で阻害されたのに対し、対照反応は影響を受けなかった。オレガノ抽出物１によるモノアミンオキシダーゼ活性の阻害について測定されたＩＣ_５０値を表２に示す。

［実施例７：マウスにおける初期観察（アーウィン（Ｉｒｗｉｎ））試験におけるオレガノ抽出物１の影響］
最初の毒性用量、活性用量範囲、および行動および生理学的機能に対する試験物質の主要効果を検出する方法は、アーウィンによって述べられた方法に従う（アーウィン Ｓ．１９６８年、Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａ．１３：２２２〜２５７頁）。

マウスに試験物質を投与し、ビヒクルを投与した対照群との同時比較で観察した（非盲検法）。どの時点においても３つの処置群を同一対照群と比較した。処置群内の全動物は同時に観察した。

アーウィンに由来する標準化観察格子に従って、行動修飾、生理学的および神経毒性症状、瞳孔径、および直腸温度を記録した。格子は次の項目を含有する：致死性^＊、痙攣^＊、振戦^＊、挙尾反応^＊、鎮静、励起、異常歩行^＊（千鳥足、つま先歩行）、跳躍^＊、運動失調^＊、身もだえ^＊、立毛^＊、常同性^＊（匂い嗅ぎ、噛みくだき、頭の動き）、瞬間的首振り動作^＊、ひっかき行動^＊、呼吸^＊、攻撃性^＊、恐れ、接触反応性、筋緊張、立ち直り反射喪失、眼瞼下垂、眼球突出、握力喪失、無動症、強直症、牽引力喪失、角膜反射喪失、痛覚消失、脱糞、流涎、流涙、瞳孔直径（単位＝１／４５ｍｍ）、および直腸温度。

観察は、試験物質投与の１５、３０、６０、１２０、および１８０分後に、また２４時間後にも実施した。（^＊）で印を付けた症状は、投与の０〜１５分後に連続的に観察した。群毎に５匹のマウスを調べた。

オレガノ４抽出物は、食塩水（０．９％ｗ／ｖ ＮａＣｌ）中の３％（ｖ／ｖ）ＤＭＳＯ、３％（ｖ／ｖ）ツイーン（Ｔｗｅｅｎ）８０に可溶化して、マウスに腹腔内（ｉ．ｐ．）注射した。

［結果］
− ３ｍｇ／ｋｇのオレガノ抽出物１は、ビヒクルと比較して、追加的な行動変化を誘発しなかった。
− １０ｍｇ／ｋｇではオレガノ抽出物１は３匹のマウスで軽度の鎮静を誘発し、５匹のマウス全てで恐れを１５〜３０分間低下させた。
− ３０ｍｇ／ｋｇでは、オレガノ抽出物１は、４または５匹のマウスで軽度の鎮静を１５〜６０分間誘発し、３または４匹のマウスで恐れを１５〜６０分間低下させ、１〜５匹のマウスで筋緊張を３０〜６０分間低下させた。
− １００ｍｇ／ｋｇでは、オレガノ抽出物１は鎮静を誘発し、それは４または５匹のマウスで１５〜１８０分間にわたり軽度から顕著であり、１匹のマウスで２４時間めに軽度であった。それは４または５匹のマウスで１５〜１８０分間恐れを低下させ、４匹のマウスで接触反応性を６０〜１８０分間低下させ、３または４匹のマウスで筋緊張を３０分間〜２４時間低下させた。

したがってオレガノ抽出物１は用量依存性の中程度の鎮静および弛緩効果を示し、恐れを低下させた。

［実施例８：ポーソルト（Ｐｏｒｓｏｌｔ）の水泳試験］
「絶望行動試験」または「ポーソルトの強制水泳試験」は、うつ病のための検証された動物モデルである（ナガツ（Ｎａｇａｔｓｕ）、２００４年、Ｎｅｕｒｏ Ｔｏｘ．２５：１１〜２０頁；およびポーソルトら、１９７７年、Ａｒｃｈ．Ｉｎｔ．Ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎ ２２９：３２７〜３３６頁を参照されたい）。それはセロトニン、ドーパミン、およびノルアドレナリンをはじめとするいくつかの神経伝達物質の伝達の増強に反応する。

抗うつ薬活性を検出する試験は、ポーソルトら、前出によって述べられているようにして実施した。迅速に逃げられない状況で泳ぐことを強制されたマウスは、不動となる。抗うつ薬は不動持続時間を減少させる。

マウスをそれから逃げられない１０ｃｍの水（２２℃）を含有するシリンダー（高さ＝２４ｃｍ、直径＝１３ｃｍ）に個別に入れた。マウスを水に６分間入れて、最後の４分間の不動持続時間を測定した。

４群毎に１５匹のマウスについて調べた。試験は盲検法で実施し、すなわち実験を行う者は、マウスに注射した者と異なり、したがって各マウスが４群のいずれに属するかを知らなかった。

オレガノ抽出物１を３種の用量（１０、３０、および６０ｍｇ／ｋｇ）で評価し、試験３０分前にｉ．ｐ．投与して、ビヒクルを同一様式で投与される対照群と比較した。このように投与されたオレガノ抽出物４は、ビヒクル（３％（ｖ／ｖ）ＤＭＳＯおよび３％（ｖ／ｖ）ツイーン（登録商標）８０を含有する食塩溶液）に溶解した。比較物質としてベンラファキシン（１６ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）、および基準化合物としてイミプラミン（３２ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）を同一実験条件下で投与した。

独立スチューデントのｔ検定を使用して処置群と対照群とを比較し、データを分析して表３に提示する。

したがってオレガノ抽出物１は、対照群と比較して、中用量および最高用量群でそれぞれ１７％および２４％不動時間を顕著に減少させた。全体的にオレガノ抽出物１の顕著な用量依存性効果があった。同一実験条件下で投与されたイミプラミン（３２ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）およびベンラファキシン（１６ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）は、ビヒクル対照と比較して不動行動を顕著に減少させた（それぞれ−７０％および−５１％、ｐ＜０．００１）。

これらの結果はオレガノ抽出物１（６０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）が、うつ病関連行動を顕著に低下させるその能力において、三環系抗うつ薬イミプラミン、およびＳＮＲＩベンラファキシンと同様の有効性を有することを示す。

［実施例９：不安様または強迫行動試験としてのガラス玉覆い隠し試験］
「防御的覆い隠し」行為は、元は不快な味の液体で充填された給水口（ウィルキー（Ｗｉｌｋｉｅ）ら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ａｎａｌ．Ｂｅｈａｖｉｏｒ １９７９年、３１：２９９〜３０６頁）または電気ショック棒（Ｐｉｎｅｌら、１９７８年、Ｊ．Ｃｏｍｐ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｐｓｙｃｈ．９２：７０８〜７１２頁）などの侵害性の対象物を埋めるラットによって示された。ガラス玉覆い隠し試験は、このような試験の修正法として考案された。ポーリング（Ｐｏｌｉｎｇ）ら、１９８１年、Ｊ．Ｅｘｐ．Ａｎａｌ．Ｂｅｈａｖｉｏｒ １９８１年、３５：３１〜４４頁）では、１０または２１日間連続して、ラットを毎日それぞれ２５個のガラス玉を入れた個々のケージにさらした。１０日間にわたり毎日、または２１日間さらした２４時間後に埋められたガラス玉の数を数えた。著者らは、ガラス玉の覆い隠しが、目新しさによって、またはあらゆる侵害性の刺激に起因して決まるのではないことを報告した。

マウスによるガラス玉覆い隠し行為は、鎮静を誘発しない用量において、ＳＳＲＩ（例えばフルボキサミン、フルオキセチン、シタロプラム）、三環系抗うつ薬（例えばイミプラミン、デシプラミン）、および選択的ノルアドレナリン取り込み阻害剤（例えばレボキセチン）に加えて、一連のマイナー（例えばジアゼパム）およびメジャー（例えばハロペリドール）トランキライザーに感応性であることが報告されている（Ｂｒｏｅｋｋａｍｐら、１９８６年、Ｅｕｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１２６：２２３〜２２９頁）。モデルは、不安様または強迫性行動のどちらかを反映してもよい（Ｄｅ Ｂｏｅｒら、２００３年、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａ ４６３：１４５〜１６１頁参照）。

ここで適用される方法は、Ｂｒｏｅｋｋａｍｐら、１９８６年、前出によって述べられる方法に従う。床上に５ｃｍのおがくず、およびケージ中央にまとめて２５個のガラス玉（直径１ｃｍ）を入れた透明プラスチックケージ（３３×２１×１８ｃｍ）に、マウス（処置群あたりｎ＝１５匹）を個別に入れた。第２のひっくり返したケージを蓋にした。３０分の試験期間の終わりに、おがくずで（少なくとも３分の２）覆われたガラス玉の数を数えた。試験は、薬剤処置プロトコルに関して何も知らない研究者によって実施された。

試験に先だって、１０匹の未処置マウスを各ケージに１５分間入れておくことで、全ての試験ケージおよびガラス玉を「含浸」した。

オレガノ抽出物１を１０、３０、および６０ｍｇ／ｋｇで評価し、試験の３０分前にｉ．ｐ．投与して、ビヒクル対照群と比較した。オレガノ抽出物１を３％（ｖ／ｖ）ＤＭＳＯおよび３％（ｖ／ｖ）ツイーン（登録商標）８０「ビヒクル」を含有する食塩溶液に溶解した。対照群に同一様式でビヒクルを投与する一方、同一実験条件で投与されるフルオキセチン（３２ｍｇ／ｋｇ）を参照物質として使用した。独立スチューデントのｔ検定を使用して処置群とビヒクル対照とを比較し、データを分析した。

［結果］

試験の３０分前にｉ．ｐ．投与されたオレガノ抽出物１（１０、３０、および６０ｍｇ／ｋｇ）により、ビヒクル対照と比較して、覆われたガラス玉の数は用量依存的に減少した（それぞれ−４０％、ｐ＜０．０５；−７３％、ｐ＜０．００１；および−６７％、ｐ＜０．００１）。

同一実験的条件下で投与されたフルオキセチン（３２ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）およびベンラファキシン（１６ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）により、ビヒクル対照と比較してガラス玉覆い隠し行動がほとんどなくなった（それぞれ−９３％および−９８％、ｐ＜０．００１）。

これらの結果は、オレガノ抽出物１が、不安／強迫行動を顕著に低下させるその能力において、ＳＳＲＩフルオキセチン、およびＳＮＲＩベンラファキシンと同様の有効性を有することを示す。

［実施例１０：マウスの明暗箱試験におけるオレガノ抽出物１の効果］
抗不安活性を検出する本方法は、Ｃｒａｗｌｅｙ、１９８１年、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｅｈａｖ．１５：６９５〜６９９頁で述べられた方法に従う。抗不安薬は明室で過ごす時間を増大させる。

動物を半分（２５×２７×２７ｃｍ）が明るく開放され、別の半分（２０×２７×２７ｃｍ）が暗く閉鎖された２室の箱の明室に入れた。３分間の試験中に、各室内で過ごす時間ならびに動物が横断して別の側に行く回数を評点した。群あたり１５匹のマウスを試験した。試験は盲検法で実施した。

オレガノ抽出物１を３用量（１０、３０、および６０ｍｇ／ｋｇ）で評価し、試験の３０分前にｉ．ｐ．投与してビヒクル対照群と比較した。オレガノ抽出物１を３％（ｖ／ｖ）ＤＭＳＯおよび３％（ｖ／ｖ）ツイーン（登録商標）８０（「ビヒクル」）を含有する食塩溶液に溶解した。対照群にはビヒクルを投与し、比較物質としてベンラファキシン（１６ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ）、および参照物質としてクロバザム（１６ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ）を使用し、全て試験の３０分前に投与した。

１０および６０ｍｇ／ｋｇのオレガノ抽出物１は、ビヒクル対照と比較して、明室で過ごす時間を増大させた（それぞれ＋２８％、および＋３５％、ｐ＝０．０５０６、ほぼ有意）。それは１０ｍｇ／ｋｇで横断回数を増大させる傾向があったが（＋５１％、ｐ＝０．０８８８）、３０および６０ｍｇ／ｋｇでは明らかな効果はなかった。したがってオレガノ抽出物１は、マウスの明暗箱試験で測定されるとき、中程度の抗不安効果を有すると考えられるかもしれない。

［実施例１１：亜慢性経口胃管栄養法後のマウスのポーソルト強制水泳試験におけるオレガノ抽出物４の効果］
抗うつ活性を検出するこの試験は、化合物投与経路および用量が異なったこと以外は、実施例７で述べられているのと同一様式で実施した。オレガノ抽出物４を３種の用量（７５、１５０、および３００ｍｇ／ｋｇ）で評価し、試験の２４、５、および１時間前に経口的に（ｐ．ｏ．）投与し、ビヒクル対照群と比較した。このようにして投与されたオレガノ抽出物１は、トコフェロール除去コーンオイル「ビヒクル」）に溶解した。対照群にはビヒクル（ｐ．ｏ．）を投与する一方、別の群には基準化合物としてイミプラミン（３２ｍｇ／ｋｇ、ｐ．ｏ．；水に溶解）を試験の２４、５、および１時間前に投与した。

マウスをそれから逃げられない１３．５ｃｍの水（２２℃）を含有するシリンダー（高さ＝２４．５ｃｍ、直径＝１９．５ｃｍ）に個別に入れた。マウスを水に６分間入れてビデオカメラを通じて自動的に視察し、ドイツ国のＴＳＥシステムズ・ゲーエムベーハー（ＴＳＥ Ｓｙｓｔｅｍｓ社）から市販されるソフトウェアシステム（ＶｉｄｅｏＭｏｔ２）によってモニターして、最後の４分間における不動持続時間を測定した。

５群のそれぞれで１０匹のマウスを試験した。分散分析（ＡＮＯＶＡ）およびボンフェローニポストホック検定を使用して、処置群および陽性対照群とビヒクル群とを比較し、データを分析した。

したがってオレガノ抽出物４は、低用量および中用量群で、対照群と比較して不動時間をそれぞれ４１％および３２％顕著に減少させた。全体的にオレガノ抽出物４の顕著な効果があった。同一実験条件下で投与されたイミプラミン（３２ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）は、ビヒクル対照と比較して不動行動を顕著に減少させた（−５０％、ｐ＜０．００１）。

これらの結果は、オレガノ抽出物４（７５および１５０ｍｇ／ｋｇ、ｐ．ｏ．）が、うつ病関連行動を顕著に低下させるその能力において、三環系抗うつ薬イミプラミンと同様の有効性を有することを示す。

［実施例１２：生体内微小透析によって測定される海馬セロトニンレベルに対するオレガノ抽出物４の効果］
食物および水を自由摂取させる制御温度（２１±２℃）および湿度（５５±１０％）（照明０７．００〜１９．００）条件下において、オスのスプラーグ・ドーリー（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ）ラット（２５０〜３２０ｇ）を４〜５匹で集団飼育した。ラットは抱水クロラール（４００ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）を使用して麻酔し、次の座標（パキノス（Ｐａｘｉｎｏｓ）およびワトソン（Ｗａｔｓｏｎ）６に従ったブレグマおよび硬膜表面から、体軸方向に−４．５ｍｍ、内外方向に−２．５ｍｍ、背腹方向に−４．５ｍｍ）の定位固定枠を使用して、ＢＡＳｉからの１個の微小透析プローブ（ＭＤ２２００型、２ｍｍ膜、３０，０００ダルトンカットオフ）を背側海馬中に移植し、歯科用セメントで適切な位置に固定した。加温パッドを使用して、体温を３６℃に保ち、デジタル直腸温度計によってモニターした。微小透析プローブを１μｌ／分の人工脳脊髄液（ａＣＳＦ）で灌流し、灌流液サンプルを１５分毎に収集して、電気化学検出付き高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を使用してアッセイし細胞外のモノアミンレベルを判定した。

ＨＰＬＣ移動相（０．５ｍＭ ＥＤＴＡ、０．１Ｍモノクロロ酢酸 ｐＨ３．１、０．１５ｇ／Ｌ硫酸オクチルナトリウム、５％アセトニトリル、０．７％テトラヒドロフラン）をシステムを通じて７０μｌ／分で汲み上げた。５μｌ注入ループ付き逆相１×１００ｍｍ ＯＤＳ ３ｍｍマイクロボアカラムを使用してモノアミンを分離し、ガラス状炭素電極をＡｇ／ＡｇＣｌ基準電極に対して＋６５０ｍＶに設定した、ＢＡＳｉからのイプシロン（Ｅｐｓｉｌｏｎ）電気化学検出器を使用して検出した。ピーク溶出時間を参照標準と比較して透析液ピークを同定し、直線回帰分析を使用してピーク面積測定に従って定量化した。５ＨＴおよび５ＨＩＡＡの検出限界は、単位時間あたりバックグラウンドノイズの２倍のピーク面積を生じるサンプル量と定義され、双方の例でおよそ０．１フェントモル／サンプルであった。

予備研究は、透析プローブの移植に続いて、５ＨＴレベルは、外科手術によって起きた血液凝固により活性化された血小板からの放出のために最初は高いが、外科手術終了の１５０分以内に基礎５ＨＴレベルがほぼ一定になったことを実証した。したがって注射は、外科手術に続いて１５０、２１０、および２７０分後に通常どおり投与して、最後の注射の６０分後まで灌流液サンプルを収集した。

通常のアッセイでは２匹のラットを準備し、内１匹はオレガノ抽出物、もう１匹は対照（ビヒクル）サンプルを試験するために使用した。アッセイ間における５ＨＴの基礎放出の変動性、および細胞外液中の５ＨＴを検出する微小透析プローブ効率の変動性のために、１回目の注射（すなわち１３５分および１５０分の時点でのサンプル）直前に得られた２つの値に応じて、これらのデータを正規化した。したがって各化合物についての反復試験からのデータは、微小透析研究では通常の慣行のように基礎レベルの％で表現される。５ＨＴ総放出量に対する各用量の抽出物の効果を判定するために、各用量の投与に続く試料採取期間にわたって台形法を使用して曲線下面積（ＡＵＣ）を推定し、（検定要素が処置および用量である）二元配置ＡＮＯＶＡと、それに続くボンフェローニｔ−検定を使用した個々の用量でのポストホック比較によって、試験化合物／抽出物の値を適切な対照と比較した。全ての統計学的分析は、グラフパッド・プリズム（Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ）を使用して実施した。

オレガノ抽出物４（１０、３０、および６０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）を０．２％（ｗ／ｖ）ヒドロキシプロピルメチルセルロースを含有する食塩水に溶解する一方、基準化合物フルオキセチン（３、１０および３０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）は食塩水に溶解した。０．２％（ｗ／ｖ）ヒドロキシプロピルメチルセルロース含有食塩水または食塩水単独をそれぞれ投与した２つの対照群について、さらに調査した。

二元配置ＡＮＯＶＡによって分析された、各用量処置の投与に続いて６０分以内にＡＵＣとして測定された累積５ＨＴ放出の推定（表７）はまた、オレガノ抽出物４による処置の顕著な全体的効果も示す（Ｆ（１，３０）＝５．６１；ｐ＜０．０５）。

［実施例１３：オレガノ抽出物１によるドーパミン取り込み阻害］
ドーパミンをはじめとするいくつかの神経伝達物質の作用は、細胞膜輸送タンパク質による、シナプス接合部でのそれらの迅速な取り込みおよびそれからのクリアランスを通じて制御される。中枢ドーパミン作動性ニューロン中のドーパミン輸送体は、９０％までの放出神経伝達物質を回収する役割を担う。モノアミン輸送体は、コカイン、アンフェタミン、および抗うつ薬などのいくつかの精神活性薬剤の高親和性標的である。これらの作用薬は、輸送体をブロックして、その結果ニューロンへの取り込み妨げることで、中枢および末梢神経系の双方で細胞外神経伝達物質濃度のレベルを上昇させ、それらの行動的および自律神経系的効果に寄与する。

ヒトドーパミン輸送体（ｈＤＡＴ）を発現するＣＨＯ−Ｋｉ／ｈＤＡＴ細胞をアッセイ前に播種した。１０分間の５０ｎＭ［^３Ｈ］ドーパミンの添加前に、細胞（２×１０^５／ｍｌ）を修正トリス−ＨＥＰＥＳ緩衝液ｐＨ７．１中のオレガノ抽出物および／またはビヒクルと共に、２５℃で２０分インキュベートした。１０μＭノミフェンシンの存在下で特異的シグナルを判定した。次に細胞を１％ＳＤＳ溶解緩衝液で可溶化した。ビヒクル対照と比較して、［^３Ｈ］ドーパミン取り込みの５０％以上（≧５０％）の減少は顕著な阻害活性を示唆する。純粋化合物（ノミフェンシンチモキノール）を０．００３１６、０．０１、０．０３１６、０．１、０．３１６、１、３．１６、１０、３１．６、および１００μＭの１００μＭまでの１０種の濃度でスクリーニングした。オレガノ抽出物を０．００３１６、０．０１、０．０３１６、０．１、０．３１６、１、３．１６、１０、３１．６、および１００μｇ／ｍｌの１００μｇ／ｍｌまでの１０種の濃度でスクリーニングした。これらの同一濃度を同時に別個の群の未処置細胞に適用し、顕著な取り込み阻害が観察された場合に限って、可能な化合物誘発性細胞毒性について評価した。

［参考文献］
Ｇｉｒｏｓら、１９９２年、Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４２：３８３〜３９０頁
Ｐｒｉｓｔｕｐａら、１９９４年、Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４５：１２５〜１３５頁

［実施例１４：オレガノ抽出物によるノルアドレナリン取り込み阻害］
ノルアドレナリンをはじめとするいくつかの神経伝達物質の作用は、細胞膜輸送タンパク質による、シナプス接合部でのそれらの迅速な取り込みおよびそれからのクリアランスを通じて制御される。中枢アドレナリン作動性ニューロン中のノルアドレナリン輸送体は、９０％までの放出神経伝達物質を回収する役割を担う。モノアミン輸送体は、コカイン、アンフェタミン、および抗うつ薬などのいくつかの精神活性薬剤の高親和性標的である。これらの作用薬は、輸送体をブロックして、その結果ニューロンへの取り込み妨げることで、中枢および末梢神経系の双方で細胞外神経伝達物質濃度のレベルを上昇させ、それらの行動的および自律神経系的効果に寄与する。

ヒト組み換えノルアドレナリン輸送体を安定して発現するイヌ腎臓ＭＤＣＫ細胞をアッセイ前日に播種した。細胞（２×１０^５／ｍｌ）を修正Ｔｒｉ−ＨＥＰＥＳ緩衝液ｐＨ７．１中のオレガノ抽出物および／またはビヒクルと共に２５℃で２０分間プレインキュベートし、次に２５ｎＭ［^３Ｈ］ノルアドレナリンを添加して１０分間インキュベーションした。次にウェル内の細胞を２回すすぎ、１％ＳＤＳ溶解緩衝液で可溶化して溶解産物をカウントし、［^３Ｈ］ノルアドレナリン取り込みを判定した。１０μＭデシプラミンの存在下で特異的シグナルを判定した。ビヒクル対照と比較して、［^３Ｈ］ノルアドレナリン取り込みの５０％以上（≧５０％）の減少は顕著な阻害活性を示唆する。純粋化合物（デシプラミン）を０．００３１６、０．０１、０．０３１６、０．１、０．３１６、１、３．１６、１０、３１．６、および１００μＭの１００μＭまでの１０種の濃度でスクリーニングした。オレガノ抽出物１を０．００３１６、０．０１、０．０３１６、０．１、０．３１６、１、３．１６、１０、３１．６、および１００μｇ／ｍｌの１００μｇ／ｍｌまでの１０種の濃度でスクリーニングした。これらの同一濃度を同時に別個の群の未処置細胞に適用し、顕著な取り込み阻害が観察された場合に限って、可能な化合物誘発性細胞毒性について評価した。

［参考文献］
Ｇａｌｌｉら、１９９５年、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．１９８：２１９７〜２２１２頁

［実施例１５：カルバクロールの血漿レベルの測定］
「遊離」カルバクロール（アグリコン）および「総」カルバクロール（アグリコン＋抱合形態）の濃度を６４個のラット血漿サンプル中で判定した。４匹のオスおよび４匹のメスラットに、経口胃管栄養法によって、それぞれ体重１ｋｇあたり８００ｍｇのオレガノ抽出物４の単回投与を行った。投与液は調合物１グラムあたり抽出物２００ｍｇの濃度でコーンオイル中で調製した。血漿サンプルを、胃管栄養法投与の０、０．５、１、２、３、４、６、８、２４時間、および４８時間後（終点）に、少なくとも３匹のオスおよび３匹のメスから収集した。

サンプルの稼働中浄化および脱塩のためのカラム切り替えシステムを使用して、液体クロマトグラフィータンデム質量分析（ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）システムによってサンプル分析を実施した。

内部基準（Ｄ２−チモール）の添加およびタンパク質の沈殿後（「遊離」分析物の場合）またはβ−グルクロニダーゼによる予備消化とそれに続くタンパク質沈殿（「総」分析物の場合）の後、サンプルを精製カラムとして使用されたウォーターズ（Ｗａｔｅｒｓ）ＸＴｅｒｒａ（商標）ＭＳ Ｃ１８ガードカラムに注入し、次にウォーターズＸＴｅｒｒａ（商標）Ｃ１８カラム上に移した。検出はＭＲＭモードのタンデム質量分析法を使用して実施した。

較正および品質管理サンプルを５％アルブミンウシ血清溶液およびヒト血漿中で調製した。日毎の性能は、各分析バッチ内の品質管理（ＱＣ）サンプルの結果によって管理した。定量化の下限を「遊離」カルバクロールでは１０．０ｎｇ／ｍＬ、「総」カルバクロールでは２０．０ｎｇ／ｍＬに設定した。

オスおよびメスラットへのオレガノ抽出物４の経口投与後の動態研究を実施した。

この分析研究の目的は、ラット血漿サンプル中の「遊離」および「総」カルバクロール濃度の判定であった。全部で６４個のサンプルが成功裏に分析された。血漿サンプルを胃管栄養法実施後の異なる時点で収集した。投与された用量は、コーンオイル中の８００ｍｇ／ｋｇオレガノ抽出物４であった。

測定された「遊離」カルバクロール濃度は検出不能から５０１００ｎｇ／ｍＬ、「総」カルバクロール濃度は検出不能から５００００ｎｇ／ｍＬの範囲であった。

［実施例１６：軟質ゼラチンカプセルの調製］
以下の成分を含んでなる軟質ゼラチンカプセルを調製してもよい。

軽度の慢性気分変調治療のために、３ヶ月間にわたって毎日２個のカプセルをヒト成人に投与してもよい。

［実施例１７：軟質ゼラチンカプセルの調製］
以下の成分を含んでなる軟質ゼラチンカプセルを調製してもよい。

月経前症候群および月経前不快気分障害の治療のために、毎日１個のカプセルを好ましくは月経サイクルの後半に１４日間にわたり服用してもよい。

［実施例１８：即席フレーバー清涼飲料の調製］

全成分を混合し、５００μｍの篩にかける。得られた粉末を適切な容器に入れて、管状ブレンダー内で少なくとも２０分間混合する。飲料を調製するために、得られた混合粉末の１２５ｇを十分な水と混合して１リットルの飲料を作る。

即席で飲める清涼飲料は、一食当たり（２５０ｍｌ）約３０ｍｇのオレガノ抽出物を含有する。強化剤として、および一般的健康のために、毎日２食（２４０ｍｌ）が推奨される。

［実施例１９：強化ノンベイクシリアルバーの調製］

オレガノ抽出物を脱脂粉乳と予混合して、遊星形ボールミキサーに入れる。コーンフレークおよびライスクリスピーを穏やかに混合する。次に乾燥カットリンゴを添加する。第１の料理用深鍋内で、砂糖、水、および塩を上記の量で混合する（溶液１）。第２の料理用深鍋内でグルコース−、転化糖−およびソルビトール−シロップを上記の量で混合する（溶液２）。ベーキング油脂、パーム核油脂、レシチン、および乳化剤の混合物は脂肪相である。溶液１を１１０℃に加熱する。溶液２を１１３℃に加熱して、次に冷水浴中で冷却する。その後、溶液１および２を合わせる。脂肪相を７５℃の水浴中で溶解する。脂肪相を、合わせた溶液１および２の混合物に添加する。リンゴ香料およびクエン酸を液体糖−脂肪混合物に添加する。液状の塊を乾燥成分に添加して、遊星形ボールミキサー内でよく混合する。塊を大理石プレート上にのせて所望の厚さに延ばす。塊を室温に冷却して小片に切断する。ノンベイクシリアルバーは、一食当たり（３０ｇ）約２５ｍｇのオレガノ抽出物を含有する。一般的健康および元気づけのために、１〜２個のシリアルバーを毎日食べてもよい。

［実施例２０：イヌのストレス解消および元気回復のためのオレガノ抽出物またはその揮発性成分を含んでなるドライドッグフード］
市販のイヌ用基礎食（例えばドイツ国Ｄ−４７６２５ Ｋｅｖｅｌａｅｒ−Ｗｅｔｔｅｎ Ｍａｒｉｅｎｓｔｒａｓｓｅ ８０−８４のＭＥＲＡ−Ｔｉｅｒｎａｈｒｕｎｇ ＧｍｂＨからのＭｅｒａ Ｄｏｇ「Ｂｒｏｃｋｅｎ」）に、オレガノ抽出物またはその揮発性成分濃縮物の重量を基準として、体重１ｋｇあたり５０ｍｇの１日量を対象に投与するのに十分な量のオレガノ抽出物溶液をスプレーする。食物組成物を乾燥すると、約９０重量％の乾燥物質を含有する。毎日およそ２００ｇのドライフードを摂取する体重１０ｋｇの平均的なイヌでは、ドッグフードは１ｋｇあたりおよそ２５００ｍｇのオレガノ抽出物またはその揮発性成分を含有する。より体重の重いイヌでは、飼料混合物を適宜に調製する。

［実施例２１：オレガノ抽出物またはその揮発性成分を含んでなるウェットキャットフード］
市販のネコ用基礎食（例えばドイツ国Ｄ−８６５１７ Ｗｅｈｒｉｎｇｅｎ Ｓｕｅｄｌｉｃｈｅ Ｈａｕｐｔｓｔｒａｓｓｅ ３８のＴｉｅｒｆｅｉｎｎａｈｒｕｎｇからのＨａｐｐｙ Ｃａｔ「Ａｄｕｌｔ」）と、乾燥オレガノ抽出物またはその揮発性成分濃縮物の重量を基準として、体重１ｋｇあたり１００ｍｇの１日量を対象に投与するのに十分な量のオレガノ抽出物またはその揮発性成分の溶液とを混合する。およそ４００ｇのウェットフードを摂取する体重５ｋｇの平均的ネコでは、キャットフードは１２５０ｍｇ／ｋｇのオレガノ抽出物を含有する。食物組成物を乾燥すると、約９０重量％の乾燥物質を含有する。

［実施例２２：オレガノ抽出物を含有するイヌ用おやつ］
市販のイヌ用おやつ（例えばドイツ国４７６２５ Ｋｅｖｅｌａｅｒ−Ｗｅｔｔｅｎ Ｍａｒｉｅｎｓｔｒａｓｓｅ ８０−８４のＭＥＲＡ−Ｔｉｅｒｎａｈｒｕｎｇ ＧｍｂＨから提供されるイヌ用Ｍｅｒａ Ｄｏｇ「ビスケット（Ｂｉｓｃｕｉｔ）」）に、オレガノ抽出物またはその揮発性成分濃縮物の重量を基準として、おやつ１ｇあたり５〜５０ｍｇをおやつに投与するのに十分な量のオレガノ抽出物またはその揮発性成分の溶液をスプレーする。食物組成物を乾燥すると、約９０重量％の乾燥物質を含有する。

［実施例２３：オレガノ抽出物を含有するネコ用おやつ］
市販のネコ用おやつ（例えばドイツ国２７２８３ Ｖｅｒｄｅｎ／Ａｌｌｅｒ Ｅｉｔｚｅｒ Ｓｔｒ．２１５のウィスカス・マスターフーズ社（Ｗｈｉｓｋａｓ，Ｍａｓｔｅｒｆｏｏｄｓ ＧｍｂＨ）から提供されるネコ用Ｗｈｉｓｋａｓ Ｄｅｎｔａｂｉｔｓ）に、乾燥オレガノ抽出物またはその揮発性成分濃縮物の重量を基準として、おやつ１ｇあたり５〜５０ｍｇをおやつに投与するのに十分な量のオレガノ抽出物またはその揮発性成分の溶液をスプレーする。食物組成物を乾燥すると、約９０重量％の乾燥物質を含有する。

Claims (8)

1. カルバクロールまたはチモキノールを含む、オリガヌム（Ｏｒｉｇａｎｕｍ）属の植物から得られるオレガノ抽出物の、経口投与用医薬組成物の製造における使用であって、
   前記医薬組成物は、
   注意および集中力、記憶、想起能力、学習能力、言語処理、問題解決、知的機能の維持または改善のために、
   短期記憶改善のために、
   精神的敏捷性増大のために、
   集中能力および精神的鋭敏さ増大のために、
   精神的覚醒増強のために、
   精神疲労低減のために、
   良好な認知性のサポートのために、
   安定した認知機能の維持のために、
   空腹感および満腹の制御ならびに運動能の制御のために、または、
   概日リズムの乱れを予防または正常化するために使用され、
   抗うつ薬、気分／活力改善剤、ストレス緩和剤、病状改善剤、不安低下剤、緊張低下剤、悲哀低下剤、不幸／不満低下剤、過敏低下剤、不快低下剤、強迫行動低下剤、弛緩薬、睡眠改善剤および／または不眠症軽減薬として使用される、使用。
2. 獣医学用途である、請求項１に記載の使用。
3. 前記オレガノ抽出物の１日量は、ヒトでは毎日体重１ｋｇあたり０．００１ｍｇから体重１ｋｇあたり１００ｍｇの範囲内であり、ヒトを除く動物では、毎日体重１ｋｇあたり０．００１ｍｇから体重１ｋｇあたり１００ｍｇの範囲内である、請求項１または２に記載の使用。
4. 前記オレガノ抽出物がハナハッカ（Ｏｒｉｇａｎｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ）から得られる、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用。
5. カルバクロールまたはチモキノールを含む、オリガヌム（Ｏｒｉｇａｎｕｍ）属の植物から得られるオレガノ抽出物を含む経口投与用医薬組成物であって、
   前記医薬組成物は、
   注意および集中力、記憶、想起能力、学習能力、言語処理、問題解決、知的機能の維持または改善のために、
   短期記憶改善のために、
   精神的敏捷性増大のために、
   集中能力および精神的鋭敏さ増大のために、
   精神的覚醒増強のために、
   精神疲労低減のために、
   良好な認知性のサポートのために、
   安定した認知機能の維持のために、
   空腹感および満腹の制御ならびに運動能の制御のために、または、
   概日リズムの乱れを予防または正常化するために使用され、
   抗うつ薬、気分／活力改善剤、ストレス緩和剤、病状改善剤、不安低下剤、緊張低下剤、悲哀低下剤、不幸／不満低下剤、過敏低下剤、不快低下剤、強迫行動低下剤、弛緩薬、睡眠改善剤および／または不眠症軽減薬として使用される、医薬組成物。
6. 獣医学用途である、請求項５に記載の医薬組成物。
7. 前記オレガノ抽出物の１日量は、ヒトでは毎日体重１ｋｇあたり０．００１ｍｇから体重１ｋｇあたり１００ｍｇの範囲内であり、ヒトを除く動物では、毎日体重１ｋｇあたり０．００１ｍｇから体重１ｋｇあたり１００ｍｇの範囲内である、請求項５または６に記載の医薬組成物。
8. 前記オレガノ抽出物がハナハッカ（Ｏｒｉｇａｎｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ）から得られる、請求項５〜７のいずれか一項に記載の医薬組成物。