JP5876191B2 - 安定なペキシガナン製剤 - Google Patents

Description

本発明は、長期間保存しても化学的におよび物理的に安定なペキシガナンの局所用製剤、およびその調製方法を提供する。

創傷の治療における最大の懸念事項は感染症である。感染を伴う創傷では創傷治癒の過程が長引き、入院期間が長くなる。創傷感染症は二次感染、切断、さらには死を引き起こすことも多い。創傷感染症の治療においては、抗生物質耐性細菌の蔓延が特に深刻な問題である。実際のところ、抗生物質を非常に長い期間使用すると、実にその多くが耐性細菌を生じる。

感染を引き起こしやすい型の創傷の一つとしては糖尿病に関連がある創傷があり、これには、糖尿病患者が発症することが多い慢性の創傷である糖尿病性足部潰瘍などが含まれる。糖尿病性合併症に起因する創傷は広く見られる。糖尿病では、末梢神経障害を伴い、感染した創傷が抗生物質の全身投与では治療できない可能性が高くなる場合がある。潰瘍が治癒するまでには数ヶ月もかかる場合があり、その間患者は、骨への感染（骨髄炎）および／または進行性壊疽を含む、再感染または新規感染のリスクに曝される。一般的には糖尿病、特に糖尿病性足感染症は、先進国における非外傷性足切断の最大の原因であり、また現在では、糖尿病に関連する入院の原因として、足部潰瘍が最も多くなっている。従って創傷感染症は、患者と医療制度の両方にとって大きな負担となっている。

創傷感染症の治療には、抗生物質の全身性投与が行われることが多い。しかしながら全身性治療は、特に、腎臓および肝臓の機能不全を患っていることが一般的な糖尿病患者では重篤な副作用を引き起こすことが多い。加えて全身性治療では、創傷部位への血液供給が損なわれていることによって、組織への浸透が不十分になることが多い。最も有用な全身性抗生物質は、長期間の使用によって耐性細菌を生成する。従って、抗生剤を創傷へと送達するための投与経路としては、効果的な局所治療が好ましいことが多い。

ペキシガナンは、多様な作用を有する局所投与用の抗菌性ペプチドである。ペキシガナンは、一般的に皮膚および軟部組織に感染するグラム陽性およびグラム陰性細菌に対する抗菌活性を有する。ペキシガナンには、その作用機序の結果として、耐性を誘導する可能性が低いことと、既存の治療用抗生物質との交差耐性をもたないという利点がある。しかしながら、安定な局所用ペキシガナン組成物は調剤化するのが非常に難しく、現時点では利用することができない。

ペプチドは化学的に不安定で、複数の立体構造をとり、自己会合する傾向にあり、そして複雑な物理的不安定性を示すため、処方するのが、特に局所用の形態に処方することが難しいことが多い。有効かつ市販の医薬製剤にとって、化学的および物理的双方の安定性が重要である。安定でない製剤は、効力の低下および低品質ならびに患者のコンプライアンスの低下をまねく。局所用製剤は特に、容器中で長期間保存されている間とその後皮膚に使用される間、安定性を維持しなくてはならない。従って、創傷感染症の治療に有効で、かつ、長期間保存しても化学的におよび物理的に安定なペキシガナンの局所用投与のための剤形に対するニーズが未だ存在する。

本発明は、局所用投与用の安定なペキシガナン製剤を提供することで、上に概要を示した問題を克服し、当該技術分野を前進させるものである。本発明の製剤は、長期間にわたって高い化学的安定性と高い物理的安定性の両方を有するものである。

そのため一態様において本発明は、ＨＬＢ値が約１２〜約１７の範囲の第一の親水性界面活性剤とＨＬＢ値が約３．５〜約５．５の第二の疎水性界面活性剤を含む、ペキシガナンまたはその酸付加塩を含む局所用製剤を提供し、ここで第一の親水性界面活性剤と第二の疎水性界面活性剤は製剤の約１．５〜約５．０重量％を構成し、かつ、第一の界面活性剤の第二の界面活性剤に対する重量比は、合わせたＨＬＢが１２．５〜約１４．５の範囲になるようなものとする。

好ましくは、第一の親水性界面活性剤のＨＬＢ値は約１３〜約１６であり、より好ましくは、第一の親水性界面活性剤のＨＬＢ値は１４．９である。好ましくは、第二の疎水性界面活性剤のＨＬＢ値は約３．５〜約５．５であり、より好ましくは、第二の親水性界面活性剤のＨＬＢ値は４．７である。

好ましくは、第一の親水性界面活性剤と第二の疎水性界面活性剤は製剤の約２重量％〜約４．５重量％を構成する。より好ましくは、第一の親水性界面活性剤と第二の疎水性界面活性剤は製剤の約３．５重量％を構成する。

好ましくは、第一の親水性界面活性剤と第二の疎水性界面活性剤の合わせたＨＬＢは約１２．５〜約１４．５である。より好ましくは、第一の親水性界面活性剤と第二の疎水性界面活性剤の合わせたＨＬＢは１３．６である。また好ましくは、第一の親水性界面活性剤と第二の疎水性界面活性剤の合わせたＨＬＢは１４．４である。

好ましくは、第一の親水性界面活性剤はツイーン（Ｔｗｅｅｎ）６０であり、第二の疎水性界面活性剤はスパン（Ｓｐａｎ）６０である。

別の態様において安定な局所用製剤は、１．０５重量％のペキシガナン酢酸塩；２０．０重量％のプロピレングリコール；０．１重量％のＥＤＴＡ；７．５重量％のステアリルアルコール；２．０重量％のセチルアルコール；１．０重量％のミリスチン酸イソプロピル；０．１重量％のＢＨＴ；０．４３重量％のスパン６０；３．０７重量％のツイーン６０；０．１重量％のツイーン８０および（適量の）酢酸ナトリウム緩衝液を含み得る。

別の態様において安定な局所用製剤は、１．０５重量％のペキシガナン酢酸塩；２０．０重量％のプロピレングリコール；０．１重量％のＥＤＴＡ；６．０重量％のステアリルアルコール；２．０重量％のセチルアルコール；３．０重量％のミリスチン酸イソプロピル；０．１重量％のＢＨＴ；０．１７重量％のスパン６０；３．３３重量％のツイーン６０；０．１重量％のツイーン８０および（適量の）酢酸ナトリウム緩衝液を含み得る。

さらなる態様において本発明は、それを必要とする患者の感染部位に、有効量の本発明の製剤を局所的に投与することを含む、皮膚または創傷感染症の治療方法を提供する。

化学的におよび物理的に安定なペキシガナンを含む局所用製剤を調製できることが発見された。本発明のさらなる側面は、以下に示す態様の詳細な説明によって、より明らかになるだろう。

本開示の目的においては、以下の用語は以下の意味を有する。

「活性成分」という用語は、治療用または美容用活性を有する成分を指す。

「局所投与」という用語は、皮膚創傷を含む皮膚、毛髪、耳、粘膜への投与、直腸投与、経鼻投与、ならびに口腔内の歯への適用を指す。

「安定な製剤」という用語は、医薬品として使用するのに十分な安定性をもつ、いかなる製剤をも指す。製剤は、周囲温度、好ましくは１０℃〜３０℃で、妥当な期間、好ましくは１ヶ月よりも長く、より好ましくは３ヶ月よりも長く、さらにより好ましくは６ヶ月よりも長く、最も好ましくは１年よりも長く保存することができるのに十分な安定性を有することが好ましい。製剤は、室温、つまり２５℃で、長期間安定性を維持することが好ましい。

「物理的安定性」という用語は、油と水の乳剤が混ざり合っていて、油相と水相が分離しておらず、製品の物理的特性に有意な変化が認められないことを意味する。

「化学的安定性」という用語は、望ましいパーセンテージの治療薬が完全性を保っていて、化学的経路、例えば酸化または加水分解によって生じる分解産物のパーセンテージが許容可能なレベルであることを意味する。具体的には、製品の意図される保存温度で長期間保存した後に、薬剤濃度の低下が１０％以下である場合、その製剤は基本的に、化学的に安定であると見なされる。すなわち、有効な製品について、約９０％の薬剤濃度が維持されることが重要である。長期間保存する際の安定性は、例えば、２５℃での長期保存の指標として４０℃で少なくとも６の加速試験を使って示してもよい。化学分解は、加水分解、ジスルフィド結合の開裂、ｐＨ、温度、成分同士の相互作用、酸化、および／または光触媒分解などの複数の機序を介して起こり得る。

「治療上有効量」という用語は、意義のある利益、例えば、創傷の治癒、細菌の混入もしくは感染の増殖阻害、予防もしくは回復寛解、または創傷治癒速度の向上、そのような混入もしくは感染の増殖阻害、予防または回復寛解を示すのに十分なポリペプチドの量を指す。意義のある利益は対照と比較して統計的に有意であることが好ましい。細菌感染または細菌の量を減らすのに十分な量かつ十分な時間、対象とペキシガナンポリペプチドとを接触させることができる。

本明細書で使用する場合「創傷」という用語は、多少なりとも皮膚が裂けている、切れている、穴が開いている、または破損している、いかなる種類の傷害をも指す。創傷は急性である場合も、または慢性である場合もある。慢性創傷とは、組織を傷つける過程が比較的ゆっくりと進む創傷である。慢性創傷としては、例えば、圧迫性、静脈性、および糖尿病性の潰瘍が挙げられる。

「糖尿病性潰瘍」および「糖尿病性足感染症」とは、糖尿病を患っているヒトに関連がある難治性の創傷を指す。糖尿病性の足における難治性の創傷は、糖尿病の合併症のうちでも最もよく見られるものの一つと考えられており、患者の生活の質に影響を及ぼす世界的にも主要な医学的、社会的、および経済的な負担となっている。典型的には、血液循環が不十分であったり、または組織の他の全身性サポートが不全になり崩壊すると、慢性創傷となる。難治性創傷は血行不全、機能している血管が不十分であること、外側端の血管や毛細血管の構築が不十分であること、および不動と関連があるため、難治性創傷は高齢者や糖尿病患者で最も多く見られる。糖尿病患者は下肢の神経損傷を患うことが多いため、小さな創傷または刺激が、気づかないうちに発生する場合がある。微小血管系の異常および糖尿病の他の副作用があるとすれば、これらの創傷は治癒するのに時間がかかり、かつ、確実に治癒するための専門的な治療法が要求される。治癒していない創傷に加えて、その後、創傷部位に感染が起きて慢性膿瘍が誘導される可能性がある。感染症が臨界点に達すると、感染が局所的に拡大するかまたは全身性となる。

本明細書で使用する場合「対象」という用語は、哺乳類の対象、好ましくはヒト対象、より好ましくは慢性創傷を患っているヒト対象、例えば糖尿病を患っている対象を指す。

マガイニンは天然に存在し、動物に見られるカチオン性ペプチドである。マガイニンは、微生物細胞のアニオン性リン脂質と相互作用し、その結果として生じる細胞膜の破壊を介した広範囲に及ぶ抗菌活性を有している。ペキシガナン（ＭＳＩ ７８としても知られている）は、カエルの皮膚から単離された生体防御ペプチドであるマガイニン２の合成カチオン性ペプチド類似体である。ペキシガナンの化学組成は、
Ｈ−Ｇｌｙ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−ＮＨ₂［配列番号１］である。

ペキシガナンの配列は７つの天然に存在するアミノ酸からなり、このうちの６つはＬの立体配置をとっており、７番目の（グリシン）は光学不活性である。このペプチドは残留水を含む酢酸塩の形態で、製剤原料の天然成分として単離される。

この分子は、全てのキラル中心が予め決められた立体化学である、単一のジアステレオマーとして合成される。ペキシガナンの実験的な分子式はＣ₁₂₂Ｈ₂₁₀Ｎ₃₂Ｏ₂₂である。

その内容の全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第５，９１２，２３１号を参照のこと。

ペキシガナンは、皮膚および軟部組織に一般的に感染するグラム陽性球菌（例えばメチシリン耐性黄色ブドウ球菌（スタフィロコッカス アウレウス）（ＭＲＳＡ））およびグラム陰性生物に対する抗菌活性を有する。ペキシガナンはその作用機序から、耐性を誘導する可能性が低く、かつ、既存の抗生物質に対する交差耐性がない。ペキシガナンは、微生物の細胞内で融解を起こすことによって作用するため、抗菌物質耐性細菌を含む細菌の増殖に対する有効な阻害剤として作用する。ペキシガナンは創傷の局所投与に有効であり、この場合、ペキシガナンは創傷中に存在する細菌の増殖を阻害し、細菌感染を治療する。ペキシガナンは、ペキシガナン酢酸塩などの酸付加塩の形態で投与されることが好ましい。

従ってペキシガナンは、創傷感染症の有効かつ好ましい治療である。しかしながら、医薬投与に好適で安定な局所用製剤は未だ達成されていない。

長期間保存する場合の化学的な不安定さは、ペプチド製剤に共通の課題である。時間が経つとペプチドは、アミド分解、酸化、加水分解、ジスルフィド交換、およびラセミ化などの複数の機序を介して分解し得る。多くの治療用分子とは異なり、ペプチドは官能基を閉じ込めることができる球状の構造をとらないため、多くのペプチド側鎖は活性酸素種に曝されている。ペプチド鎖の高い柔軟性は、高効率のアミド分解を引き起こし得る。ペプチドに見られる自己会合の挙動は、高い化学的不安定性を引き起こす可能性がある。さらに、高度に自己会合するペプチドはミセルを形成し、それらのペプチドが膜を通過する能力に影響を及ぼす場合がある。

ペプチドの特性によって、製剤化における物理的な不安定さも引き起こされる。ペプチドの自己会合能によって凝集がおこり、最終的には巨大な凝集体が形成される。

本発明は、ペプチド製剤の長期保存に関連があるこれらの課題を克服することが可能な安定な局所用製剤を提供する。本発明の製剤は、ペキシガナンと薬学上許容可能な賦形剤を含む。

本明細書に記載の組成物は局所的に投与されるため、この組成物を局所投与に好適な剤形、これらには限定されないが、クリーム、ローション、膏薬、ゲル、軟膏もしくは溶液、懸濁液、乳剤、スプレーまたは他の局所用投与に好適な剤形で提供してもよい。好ましくは、製剤は、クリームまたはゲルの剤形で提供される。

任意の好適な用量のペキシガナンを、本発明の方法を介して投与することができる。好ましくは、ペキシガナンは酸付加塩の形態であり、好ましくは、この酸付加塩は酢酸塩の形態である。当然のことながら、投与される用量は既知の要因によって、例えば特定の化合物、塩もしくは組み合わせの薬力学的な特徴；対象の年齢、健康状態、もしくは体重；症状の特質および程度；薬剤および患者の代謝特性；同時に投与される治療の種類；治療頻度；または所望される効果によって、様々になる。好ましいペキシガナン酢酸塩の濃度は製剤の１〜３重量％である。より好ましくは、濃度は１．０５重量％である。

本明細書に記載の局所用製剤は様々な賦形剤を含む。選択される賦形剤は、使用されるパーセンテージにおいては通常ペキシガナンを沈殿させず、ペキシガナンに害を与えるいかなる反応をも引き起こさず、かつ、ペキシガナンが十分に可溶化し、分散するのを補助するものである必要がある。賦形剤としては、これらに限定されるものではないが、キレート剤、硬化剤、酸化防止剤、乳化剤、溶媒、皮膚軟化剤、ゲル化剤、湿潤剤、抗菌性防腐剤、消泡剤、およびｐＨ調整剤が挙げられ得る。

本発明の製剤は乳化剤を含む。乳化剤としては、これらには限定されないが、ツイーン６０、スパン６０、ツイーン８０、セキステアリン酸メチルグルコース、ＰＥＧ−２０セキステアリン酸メチルグルコシド、ステアレス−２１、モノステアリン酸ポリエチレングリコール２０ソルビタン、モノステアリン酸ポリエチレングリコール６０ソルビタン、モノステアリン酸ポリエチレングリコール８０ソルビタン、ステアレス−２０、セテス−２０、ステアリン酸ＰＥＧ−１００、ステアロイルサルコシネートナトリウム、水添レシチン、ココイルグリセリル硫酸ナトリウム、ステアリル硫酸ナトリウム、ステアロイルラクチラートナトリウム、モノステアリン酸ＰＥＧ−２０グリセリル、ショ糖モノステアリン酸、ショ糖ポリステアリン酸、ステアリン酸ポリグリセリル１０、ミスチリン酸ポリグリセリル１０、ステアレス１０、オレス−３リン酸ＤＥＡ、オレス−１０リン酸ＤＥＡ、ＰＰＧ−５セテス１０リン酸ナトリウム塩、ＰＰＧ−５セテス１０リン酸カリウム塩、ステアレス−２、ＰＥＧ−５ダイズステロール油、ＰＥＧ−１０ダイズステロール油、セチルリン酸ジエタノールアミン、モノステアリン酸ソルビタン、モノステアリン酸ジエチレングリコール、モノステアリン酸グリセリン、ステアレス−２または−１００、ステアリン酸、およびそれらの混合物が挙げられ得る。

本発明の製剤は少なくとも２種類の乳化剤を含む。好ましくは、第一の乳化剤は親水性の乳化剤である。好ましくは、この第一の親水性乳化剤はツイーン６０である。好ましくは、第二の乳化剤は疎水性の乳化剤である。好ましくは、この第二の疎水性乳化剤はスパン６０である。

乳化剤の油相に対する親水親油バランス（ＨＬＢ）も安定性に影響を及ぼす。ＨＬＢは、分子の異なる領域に関する値を計算することによって規定される、ある物質の親水性または親油性の程度を示す尺度である。ＨＬＢ値が０とは、完全に疎水性の分子であることに相当し、値が２０であることは、完全に親水性の分子であることに相当する。

第一の乳化剤と第二の乳化剤の割合が製剤の化学的安定性に重要であることが、思いがけず見出された。乳化剤の割合が理想的であれば、保存温度における製剤の長期的な化学的安定性が有意に改善されることが分かった。第一の乳化剤と第二の乳化剤の割合を調整すること、つまり２種類の乳化剤の合わせたＨＬＢを調製することが物理的な安定性に影響を及ぼすことは分かっていたが、化学的な安定性に何らかの影響を与えるとは予想されていなかった。しかしながら、第一の親水性乳化剤と第二の疎水性乳化剤の割合を変化させることで、長期間保存しても製剤の化学的安定性が大きく向上することが分かった。

第一の親水性乳化剤のＨＬＢ値は約１２〜約１７の範囲である。より好ましくは、第一の親水性乳化剤のＨＬＢ値は約１３〜約１６の範囲である。例えば、第一の親水性乳化剤のＨＬＢは１４．９であってよい。

第二の疎水性乳化剤のＨＬＢ値は約３．５〜約５．５の範囲である。より好ましくは、第二の疎水性乳化剤のＨＬＢ値は約３．５〜約５．５の範囲である。例えば、第二の疎水性乳化剤のＨＬＢは４．７であってよい。

第一の親水性界面活性剤と第二の疎水性界面活性剤は合わせて製剤の約１．５〜約５．０重量％を構成し得る。好ましくは、第一の親水性界面活性剤と第二の疎水性界面活性剤は製剤の約２〜約４．５重量％を構成する。より好ましくは、第一の親水性界面活性剤と第二の疎水性界面活性剤は製剤の約３．５重量％を構成する。第一の親水性乳化剤とおよび第二の乳化剤が同時に存在する場合、２種類の乳化剤の合わせたＨＬＢを測定してもよい。合わせたＨＬＢは、製剤を構成する個々の乳化剤のパーセンテージで加重した個々のＨＬＢ値の加重平均を考慮することで計算される。好ましくは、第一の親水性乳化剤と第二の疎水性乳化剤の合わせたＨＬＢは約１２．５〜約１４．５の範囲である。また好ましくは、第一の親水性界面活性剤と第二の疎水性界面活性剤の合わせたＨＬＢは１４．４である。

第一の乳化剤および第二の乳化剤に加えてさらなる乳化剤、例えば第三の乳化剤もしくは第四の乳化剤、またはそれ以上の数の乳化剤を使用してもよい。

本発明の製剤はキレート剤を含む場合がある。好ましいキレート剤としては、これらには限定されないが、例えば、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、エデト酸２ナトリウムおよびＥＤＴＡ誘導体、クエン酸、およびそれらの混合物が挙げられる。

本発明の製剤は、粘性を高めるためおよび／または硬さを高めるために使用される硬化剤を含む場合がある。好ましい硬化剤としては、これらには限定されないが、ステアリルアルコール、セチルアルコール、ワックス、セテアレス−２０、セテアレス−３０、セテアリルアルコール、セテス２０、セト（ｃｅｔｏ）ステアリルアルコール、セチルアルコール、セチルステアリルアルコール、およびそれらの混合物が挙げられ得る。

本発明の製剤は溶媒を含む場合がある。好ましい溶媒としては、これらには限定されないが、プロピレングリコール、水、イソプロピルアルコール、流動ワセリン、エーテル、石油エーテル、アルコール類（例えば、エタノールおよび高級アルコール）、シリコーン、芳香族化合物（例えば、トルエン）、アルカン（例えば、ペンタン、ヘキサンおよびヘプタン）、ケトン（例えば、アセトンおよびメチルエチルケトン）、塩素付加炭化水素（例えば、クロロホルム、四塩化炭素、塩化メチレンおよび二塩化エチレン）、アセテート（例えば、酢酸エチル）、エステルおよび油（例えば、ミリスチン酸イソプロピル、アジピン酸ジイソプロピルおよび鉱物油）ならびにそれらの混合物が挙げられる。溶媒はまた、抗菌特性も有し得る。

本発明の製剤は防腐剤を含む場合がある。好ましい防腐剤としては、これらには限定されないが、フェノキシエタノール、パラベン（例えばメチルパラベンおよびプロピルパラベン）、プロピレングリコール、ソルベート、尿素誘導体（例えばジアゾリンジニル尿素）、およびそれらの混合物が挙げられ得る。

本発明の製剤は、皮膚軟化剤を含む場合がある。好ましい皮膚軟化剤としては、これらには限定されないがカプリル酸／カプリン酸トリグリセリド、ヒマシ油、カカオバター、アジピン酸ジイソプロピル、グリセリン、モノステアリン酸グリセリル、モノステアリン酸グリセリン、ステアリン酸グリセリル、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、ラノリン、ラノリン・アルコール、水添ラノリン、流動パラフィン、リノール酸、鉱物油、オレイン酸、白色ワセリン、ポリエチレングリコール、ポリオキシエチレングリコール脂肪アルコールエーテル、ポリオキシプロピレン１５−ステアリルエーテル、ステアリン酸プロピレングリコール、スクアラン、シリコーン化合物、ステアリルアルコール、尿素およびそれらの混合物が挙げられる。

本発明の製剤は、酸化防止剤を含む場合がある。好ましい酸化防止剤としては、これらには限定されないが、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、没食子酸プロピル、コエンザイムＱ１０、ローズマリー油、緑茶、リコピン、ブドウ種子エキス、松樹皮エキス、ビタミンＣ、天然ベータカロテン、合成ベータカロテン、ガンマ−オリザノール（フェルラ酸のエステル）、セレン、ルテイン、およびそれらの混合物が挙げられる。

本発明の製剤は、緩衝剤を含む場合がある。好ましい緩衝剤としては、これらには限定されないが、酢酸緩衝剤、例えば酢酸ナトリウムの緩衝剤、クエン酸緩衝剤、リン酸緩衝剤、乳酸緩衝剤、ホウ酸緩衝剤、およびそれらの混合物が挙げられる。本発明の製剤のｐＨは好ましくは４．０〜６．０の範囲である。より好ましくは、本発明の製剤のｐＨは５．０である。

一例として、製剤は、ペキシガナン酢酸塩、プロピレングリコール、ＥＤＴＡ、ステアリルアルコール、セチルアルコール、ミリスチン酸イソプロピル、ＢＨＴ、０．４３重量％のスパン６０、３．０７重量％のツイーン６０、ツイーン８０、および酢酸ナトリウム緩衝液を含み得る。例えば、製剤は以下のようになる場合がある。

さらなる製剤は以下のようになる場合がある。

さらなる製剤は以下のようになる場合がある。

さらなる製剤は以下のようになる場合がある。

さらなる製剤は以下のようになる場合がある。

さらなる製剤は以下のようになる場合がある。

当業者であれば、局所用製剤の投与方法を知っている。本発明は、それを必要とする患者の感染部位に有効量の本発明の製剤を局所的に投与することを含む、皮膚または創傷感染症の治療方法を提供する。

特定の実施例を参照しながら本発明を説明してきたが、本発明の精神から逸脱することなく様々な変更を施すことが可能であり、かつ、当業者であればそのような変更を容易に思いつくことが理解される。

下記の実施例では、以下に挙げる製剤についての試験を行った。

実施例１：６ヶ月後および１１ヶ月後の化学的安定性
製剤３２１６−６、３２１６−１０および３２１６−７２の化学的安定性について試験した。安定性はＨＰＬＣ試験によって決定した。クロマトグラフィーには以下のパラメータを用いた。
カラム：ハロ（登録商標）Ｃ１８ ２．７μｍ、４．６×１５０ｍｍ
注入量：２０μＬ
カラム温度：７０℃
流速：１．４ｍＬ／分
検出：２１４ｎｍ
泳動時間：２７分
移動相Ａ：５％アセトニトリル：５％イソプロパノール：９０％水
０．１％トリフルオロ酢酸
移動相Ｂ：７０％アセトニトリル：２０％イソプロパノール：１０％水：
０．１％トリフルオロ酢酸

薬剤の分解に関する測定を行った。１１ヶ月後のデータと１８ヶ月後の化学的安定性に関するデータを以下にまとめる。全３種類の薬剤の２５℃、つまり室温での化学的安定性を示している。前述したように、４０℃でのより短時間での試験が、２５℃でのより長時間での安定性の指標となっている。製剤を４０℃で６ヶ月間試験することは、同じ製剤を２５℃で２年間おいた場合の安定性を表していると見なされる。

結果は、製剤３２１６−６よりも製剤３２１６−１０と３２１６−７２に含まれているペキシガナンが化学的により安定であることを示している。以下に示すように、３２１６−６の薬剤濃度は、ｔ＝０（開始時点）の表示量である１０２．４％から、６ヶ月目の時点では８７％に急激に下がった。市販の製剤が安定だと見なされるには、薬剤濃度が９０％超に維持されることが非常に望ましい。製剤３２１６−１０と製剤３２１６−７２はこれを達成している。

さらに４０℃では、３２１６−１０と３２１６−７２に比較して、３２１６−６での薬剤成分の分解度合がより高かった。例えば、４０℃、１１ヶ月後の時点で見られた製剤３２１６−６の総分解物の値は、４０℃においた製剤３２１６−１０で見られたもののおよそ２倍である。これは化学的安定性の点で有意な差である。

以下に示す結果は、保存温度に長期間おいた場合、製剤３２１６−１０と製剤３２１６−７２は製剤３２１６−６よりもずっと化学的に安定であることを示している。製剤３２１６−１０および３２１６−７２と製剤３２１６−０６の差は乳化剤の割合にある。

実施例２：４０℃、１８ヶ月後の化学的安定性
３２１６−６、３２１６−１０、および３２１６−７２の化学的安定性を、製剤を２５℃で長期間保存したことの予測となる、４０℃１８ヶ月後で試験した。結果が、４０℃での製剤３２１６−１０および３２１６−７２と製剤３２１６−６を比較すると、分解物の値に有意な差があることを示していることが分かる。言い換えれば、１８後の分解物の値に見られる製剤３２１６−６と製剤３２１６−１０および−７２の差は、これら同じ製剤に関して１１ヶ月目に見られた差（上記実施例１に示した）よりも大きい。

実施例３：物理的安定性
室温での見た目、ｐＨ（適切性）、粘性に関する製剤の物理的安定性についての試験、および原薬についての検定を行った。

試料を、５℃、２５℃および４０℃で１、２、および３ヶ月間試験した。４０℃での試験は、製品を２５℃で長期間保存した場合の安定性の良い指標となる。４０℃で短期間、例えば６ヶ月間試験することは、２５℃（つまり室温）でより長期間（２４ヶ月）おいた場合の安定性の指標であると、つまり加速試験の条件と見なされる。

暦日で３または４日間−２０℃に保存し、その後暦日で３または４日間室温で保存するという凍結／融解サイクルを、合計３回実施した。

見た目、ｐＨおよび粘性を測定した。見た目に関しては、白色またはオフホワイトの見た目が滑らかなクリームで、相が個別に分離している証拠が見られないことを好ましいとした。ｐＨについては、局所用として好適なｐＨは約４．５〜約８の範囲のｐＨとなり得る。

粘性については、クリームを室温で測定した。１３グラムの試料の粘性を、＃２９スピンドルを備えた血流計を用い、３０ｒｐｍで測定した。計測は室温で２分間行った。粘性は理想的には５０００−４００００センチポアズの範囲であり、好ましくは１００００および２００００センチポアズの範囲である。

これらの物理的安定性に関するパラメータを示している結果は以下の通りであった。

実施例４：ストレス試験
長期間保存しても製品が分離せずに一体となっている可能性の評価を補助するために、遠心ストレス試験を実施した。以下に示すように、遠心分離機を使って製剤のストレス試験を行った。製剤３２１６−１０は、２種類の乳化剤、スパン６０とツイーン６０の割合という点を除き、全ての面で製剤３２１６−６と同じであった。３２１６−６では、重量％の割合は２：１．５であり、３２１６−１０ではこの割合を０．４３：３．０７と変化させた。２種類の乳化剤の総量は同じく３．５重量％とした。しかしながら、２種類の乳化剤の割合を調整すると、安定性が非常に向上した。相分離に要した時間から明らかなように、製剤３２１６−１０の方が、ストレス試験における物理的な統合性をより維持することができた。２５℃での遠心分離試験では、３２１６−６は５０００ｇで１０分遠心した後に分離を示したのに対し、３２１６−１０は同じストレス条件で分離を示すまで６０分を要した。４０℃（加速条件）で同様に行った試験では、３２１６−６は６０分後に分離したが、そのような分離は３２１６−１０では認められなかった。

実施例５：ペキシガナン製剤の調製
工程１：精製水、酢酸ナトリウム三水和物および氷酢酸を混合することにより、酢酸ナトリウム緩衝液を準備した。
工程２：第一（主）の製造容器の中で、プロピレングリコール、ポリソルベート６０、および、およそ８５％の酢酸ナトリウム緩衝液を合わせた。この混合物を、撹拌子を使って混合しながら６５〜７０℃に加熱した。温度を維持した。
工程３：第二の容器中で、ステアリルアルコール、セチルアルコール、モノステアリン酸ソルビタン、ミリスチン酸イソプロピルおよびＢＨＴを合わせ、混合しながら６５〜７０℃に加熱し、全ての固体材料を確実に融解させた。温度を維持した。
工程４：第三の容器中で、残りの酢酸ナトリウム緩衝液、ポリソルベート８０、エデト酸２ナトリウムおよびペキシガナン酢酸塩を合わせ、溶液が透明になるまで、混合しながら３５〜４５℃に加熱した。温度を維持した。
工程５：ホモジナイザーを使いながら、工程３の油相を、工程２の水相に徐々に加えた。
工程６：加熱を終了した。ホモジナイズを続けた。氷浴上で乳剤を５５℃まで冷却した。
工程７：ホモジナイズを終了し、乳剤を氷浴から出した。
工程８：撹拌子を使った混合を開始した。工程４の薬剤相を工程７の乳剤に加えた。
工程９：混合を続けながら、一回分を室温に冷却した。
工程１０：ｐＨを記録した。必要に応じて、ｐＨを１０％のＨＣｌまたは１０％のＮａＯＨを使って５．０±０．２に調整した。産物が滑らかで均一になるまで混合した。

実施例６：活性成分であるペキシガナン酢酸塩の調製と精製
活性成分であるペキシガナン酢酸塩は凍結乾燥した粉末として提供される。

ペキシガナン酢酸塩のペプチド−樹脂前駆物質を、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄに記載されている一般的な手順（固相ペプチド合成Ｉ、テトラペプチドの合成（Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ．Ｉ．Ｔｈｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ａ Ｔｅｔｒａｐｅｐｔｉｄｅ）米国化学会誌（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．）１９６３ ８５（１４）：２１４９−２１５４）にわずかに修正を加えて生成した。各アミノ酸のα−アミノ基を塩基感受性のＦｍｏｃ基で保護し、側鎖の官能基を酸に不安定な基で保護した。Ｆｍｏｃ−Ｒｉｎｋアミド樹脂（置換：およそ０．７ｍｅｑ／ｇ）を製造工程の最初の樹脂支持体として用い、合成を行った。ペプチド鎖のアセンブリには、標準的なＦｍｏｃ化学を、以下の一般的なサイクルに従って利用した。
・最初の樹脂からＮ末端Ｆｍｏｃ基を除去するか、あるいはＤＭＦに溶解したピペリジンの２０（体積）％溶液を使って、末端アミノ酸を付加する；
・ＤＭＦで洗浄する；
・ＤＩＣを使用し、ＨＯＢｔ存在下で次のアミノ酸を結合させる；および
・ＤＭＦで洗浄する。

Ｆｍｏｃ基を除去し、ＤＭＦで洗浄した後、樹脂の試料を少量取り、樹脂に結合した残留アミン基を測定する呈色試験である、ニンヒドリン工程内管理試験にかける。試験は陽性であり、遊離アミン基の存在を確認した。

適切なアミノ酸誘導体、つまり、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨおよびＦｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨを使ってこのサイクルを繰り返した。カップリング工程の評価として、各合成サイクルの最後に、ニンヒドリン試験による工程内モニタリングを行った。陰性の試験結果は、遊離アミンが存在しないことを示すものであった（完全なカップリング）。試験が陽性で、未反応のアミンの存在が示された場合には（不完全なカップリング）、カップリング反応を延長してもよく、保護したアミノ酸誘導体の再カップリングを行ってもよく、または、ＤＩＥＡ存在下で無水酢酸を使用したアセチル化（キャッピング）を行ってもよい。

樹脂をＩＰＡで洗浄し、窒素流の下で乾燥させ、ペキシガナン酢酸塩の保護したペプチド−樹脂前駆物質を得た。生成物を樹脂から切り出し、同時に、サブロットのペプチド−樹脂前駆物質を、ＴＦＡと水の混合液（ＴＦＡ：Ｈ₂Ｏ、およそ９５：５、体積比）でおよそ２時間半、周囲温度で処理することによって脱保護した。その後、樹脂を濾過して除去し、さらなるＴＦＡで洗浄し、ろ液をまとめて回転蒸発器で濃縮した。濃縮したろ液にＭＴＢＥを加えることで粗生成物を沈殿させ、濾過して単離し、ＭＴＢＥを使ってろ紙上で洗浄し、その後、真空オーブン中、周囲温度で一定重量になるまで乾燥させた。

前工程からの粗ペキシガナンを、Ｃ₁₈逆相シリカカラムを使った、２工程の分取ＲＰＨＰＬＣによって精製した。この精製の間に、画分の純度を分析ＨＰＬＣで評価した。過程の第一工程では、サブロットの粗生成物を、希釈剤である酢酸水溶液酢酸（およそ１０％、体積比）に個別に再溶解し、この溶液を濾過して、予めメタノールで洗浄し、０．１Ｍのリン酸トリエチルアンモニウム水溶液、ｐＨ２．３（ＴＥＡＰ）で平衡化させておいた分取ＨＰＬＣのカラムに負荷した。アセトニトリルのＴＥＡＰ緩衝液溶液を使って勾配をかけ、２３０ｎｍの紫外光（ＵＶ）でモニタリングしながら、生成物を溶出した。得られた画分を工程内ＨＰＬＣ法で分析し、工程内管理に要求される純度になるようにまとめた。純度が工程内管理の基準に満たない画分は、再度前述した手順にかけるか、あるいは廃棄してもよい。

精製の第二段階では、第一の精製工程で得られ、まとめておいたある程度精製したペプチドを希釈し、予め０．１％のＴＦＡ水溶液で平衡化させておいた分取カラムに負荷した。ＴＦＡ（０．１％）水溶液に溶解したアセトニトリル溶液を使って勾配をかけ、２３０ｎｍの紫外光（ＵＶ）でモニタリングしながら、生成物を溶出した。得られた画分を工程内ＨＰＬＣ法で分析し、工程内管理に要求される純度になるようにまとめた。純度が工程内管理の基準に満たない画分は、再度前述した手順にかけるか、あるいは廃棄してもよい。

２工程の精製にかけてたくわえた画分を個別に凍結乾燥し、精製した生成物のＴＦＡ塩のサブロットを得た。これを、過程の次工程で酢酸塩に変換させるまで、冷蔵条件で保存した。

精製の前工程で得られた生成物の精製したＴＦＡ塩を、ダウエックス１×２−１００樹脂を使ったイオン交換により、酢酸塩へと変換させた。酢酸水溶液（およそ１０％、体積比）で希釈した、たくわえたサブロットの溶液を、過剰のダウエックス１×２−１００（酢酸塩形態）を充填したカラムに通し、これをその後、別の酢酸水溶液で洗浄して、生成物を完全に回収した。

対イオン交換工程から得られ、たくわえた溶出液を濾過し、乾燥するまで凍結乾燥して、ペキシガナンの酢酸塩を得た。

本発明を限定するためでなく、例示する目的で説明してきた。当然のことながら、図で示した特定の態様および使用した用語は、限定というよりはむしろ、説明の語の本来の意味を意図するものである。さらに、前項で記載した成分／治療薬のいかなる組み合わせも、添付の請求項に包含されると見なされる。加えて、注入装置の全ての具体的な態様も添付の請求項に包含されると見なされる。前述した教示を考慮すれば、本発明には多数の修正および変更が可能である。そのため、明白な修正も添付の請求項に包含されると見なされる。

Claims (7)

1. ＨＬＢ値が約１２〜約１７の範囲の第一の親水性界面活性剤とＨＬＢ値が約３．５〜約５．５の範囲の第二の疎水性界面活性剤を含む、ペキシガナンまたはその酸付加塩を含む局所用製剤であって、前記第一の親水性界面活性剤と第二の疎水性界面活性剤が前記製剤の約１．５〜約５．０重量％を構成し、かつ、前記第一の界面活性剤の第二の界面活性剤に対する重量比が、第一の界面活性剤及び第二の界面活性剤の合わせたＨＬＢが１２．５〜約１４．５の範囲になり、但し、前記合わせたＨＬＢは、製剤中の第一の界面活性剤及び第二の界面活性剤のパーセンテージで加重した各々のＨＬＢ値の加重平均であり、かつ前記第一の親水性界面活性剤がツイーン６０であり、前記第二の疎水性界面活性剤がスパン６０である、局所用製剤。
2. 前記第一の親水性界面活性剤と第二の疎水性界面活性剤が、前記製剤の約２重量％〜約４．５重量％を構成している、請求項１に記載の局所用製剤。
3. 前記第一の親水性界面活性剤と第二の疎水性界面活性剤が、前記製剤の約３．５重量％を構成している、請求項１に記載の局所用製剤。
4. 前記第一の親水性界面活性剤と第二の疎水性界面活性剤の合わせたＨＬＢが１３．６である、請求項１に記載の局所用製剤。
5. （ｉ）１．０５重量％のペキシガナン酢酸塩
   （ｉｉ）２０．０重量％のプロピレングリコール
   （ｉｉｉ）０．１重量％のＥＤＴＡ
   （ｉｖ）７．５重量％のステアリルアルコール
   （ｖ）２．０重量％のセチルアルコール
   （ｖｉ）１．０重量％のミリスチン酸イソプロピル
   （ｖｉｉ）０．１重量％のＢＨＴ
   （ｖｉｉｉ）０．４３重量％のスパン６０
   （ｉｘ）３．０７重量％のツイーン６０
   （ｘ）０．１重量％のツイーン８０および
   （ｘｉ）（適量の）酢酸ナトリウム緩衝液
   を含む、安定な局所用製剤。
6. （ｉ）１．０５重量％のペキシガナン酢酸塩
   （ｉｉ）２０．０重量％のプロピレングリコール
   （ｉｉｉ）０．１重量％のＥＤＴＡ
   （ｉｖ）６．０重量％のステアリルアルコール
   （ｖ）２．０重量％のセチルアルコール
   （ｖｉ）３．０重量％のミリスチン酸イソプロピル
   （ｖｉｉ）０．１重量％のＢＨＴ
   （ｖｉｉｉ）０．１７重量％のスパン６０
   （ｉｘ）３．３３重量％のツイーン６０
   （ｘ）０．１重量％のツイーン８０および
   （ｘｉ）（適量の）酢酸ナトリウム緩衝液
   を含む、安定な局所用製剤
7. 有効量の請求項１〜６のいずれか１項に記載の局所用製剤を含む、皮膚または創傷感染症の治療剤。