JP6401255B2 - ペプチド及びペプチド模倣物の併用並びに癌患者亜集団の処置 - Google Patents

ペプチド及びペプチド模倣物の併用並びに癌患者亜集団の処置 Download PDF

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Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１３年６月２４日に提出された米国仮特許出願第６１／８３８，７７７号明細書に対する優先権を主張する。この出願は、その全体を参照により本明細書に組み込まれるものとする。
本発明は、抗細胞増殖活性を有するペプチド及びペプチド模倣物を単独で含む化合物、並びに核酸（例えば、ＤＮＡ）を直接又は間接的に損傷させる処置と組み合わせた化合物に関する。従って、本発明の化合物は、細胞増殖を阻害する上で、また、これにより、癌などの細胞増殖障害を治療する上で有用である。
細胞は、Ｓ期（ＤＮＡ複製）、Ｍ期（有糸分裂）、並びにＳ期とＭ期との間の２つの間期（Ｇ１及びＧ２期）を含む。細胞周期におけるチェックポイントは、ＤＮＡ完全性、ＤＮＡ複製、細胞サイズ、及び周囲環境の状態のモニタリングなど、正確な進行を確実にする（Ｍａｌｌｅｒ，Ｊ．Ｌ．Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．，３：２６（１９９１））。多細胞生物にとって、ゲノムの完全性を維持することは特に重要であり、ゲノムの状態をモニターする複数のチェックポイントがある。その中に、ＤＮＡ複製及び有糸分裂の前にそれぞれ存在する、Ｇ１及びＧ２チェックポイントがある。いったん損傷したＤＮＡが複製されると、往々にして突然変異が発生することから、Ｓ期に入る前にＤＮＡ損傷を修正することは重要である（Ｈａｒｔｗｅｌｌ，Ｌ．Ｃｅｌｌ，７１：５４３（１９９２））。広範なＤＮＡ損傷を修復することなく、Ｇ１及びＧ２チェックポイントを通過して進行すると、アポトーシス及び／又はカタストロフ（ｃａｔａｓｔｒｏｐｈｅ）が誘導される。
大部分の癌細胞は、ｐ５３、Ｒｂ、ＭＤＭ−２、ｐ１６INK4及びｐ１９ARFなどのＧ１チェックポイント関連タンパク質に異常を有する（Ｌｅｖｉｎｅ，Ａ．Ｊ．Ｃｅｌｌ，８８：３２３（１９９７））。或いは、突然変異は、発現遺伝子産物、例えば、Ｒａｓ、ＭＤＭ−２及びサイクリンＤの過剰発現及び／又は過剰活性化を引き起こし得、これによって、Ｇ１チェックポイントの厳密性が低下する。これらの突然変異に加えて、増殖因子の過剰発現により、過剰な増殖因子シグナル伝達が引き起こされて、Ｇ１チェックポイントの厳密性を低下させ得る。機能低下及び機能増加突然変異と共に、増殖因子受容体又は下流シグナル伝達分子の連続的活性化が、Ｇ１チェックポイントを無効にすることにより、細胞の形質転換を引き起こし得る。抑止されたＧ１チェックポイントは、癌細胞に認められる高い突然変異率及び多くの突然変異に寄与する。その結果、大部分の癌細胞は、過剰なＤＮＡ損傷に逆らって生存するために、Ｇ２チェックポイントに依存する（Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒ ａｎｄ Ｆａｎ，Ｐｒｏｇ．Ｃｅｌｌ Ｃｙｃｌｅ Ｒｅｓ．，２：１６５（１９９６））。
ＤＮＡ損傷後の細胞周期Ｇ２停止を促進する機構は、酵母からヒトに至るまで、種の間で保存されていると考えられる。損傷したＤＮＡの存在下で、Ｃｄｃ２／サイクリンＢキナーゼは、Ｃｄｃ２キナーゼに対するトレオニン１４及びチロシン１５残基の阻害性リン酸化のために、不活性のまま維持されるか、又はサイクリンＢのタンパク質レベルが低下する。有糸分裂が開始すると、二重ホスファターゼＣｄｃ２５がこれらの阻害性ホスフェートを除去し、これによって、Ｃｄｃ２／サイクリンＢキナーゼを活性化する。Ｃｄｃ２／サイクリンＢキナーゼの活性化は、Ｍ期の開始に等しい。
分裂酵母の場合、損傷ＤＮＡに応答して細胞周期を停止するために、タンパク質キナーゼＣｈｋ１が必要である。Ｃｈｋ１キナーゼは、いくつかのｒａｄ遺伝子産物の下流で作用し、ＤＮＡ損傷時にリン酸化により修飾される。発芽酵母のキナーゼＲａｄ５３及び分裂酵母のＣｄｓ１は、非複製ＤＮＡからのシグナルを伝達することがわかっている。Ｃｈｋ１及びＣｄｓ１両方の排除によって、損傷ＤＮＡにより誘導されたＧ２停止の中断が起こるため、Ｃｈｋ１とＣｄｓ１との間にはいくらかの重複性があると思われる。興味深いことに、Ｃｈｋ１及びＣｄｓ１はいずれも、Ｃｄｃ２５をリン酸化し、Ｃｄｃ２５へのＲａｄ２４の結合を促進し、これによって、Ｃｄｃ２５を細胞質ゾルに隔離し、Ｃｄｃ２／サイクリンＢ活性化を阻止する。従って、Ｃｄｃ２５は、これらのキナーゼの共通の標的であると思われ、これは、この分子が、Ｇ２チェックポイントにおいて不可欠な因子であることを意味している。
ヒトの場合、分裂酵母Ｃｈｋ１のヒト相同体であるｈＣｈｋ１、並びに発芽酵母Ｒａｄ５３及び分裂酵母Ｃｄｓ１のヒト相同体であるＣｈｋ２／ＨｕＣｄｓ１はいずれも、ＤＮＡ損傷に応答して、重要な調節部位であるセリン−２１６でＣｄｃ２５Ｃをリン酸化する。このリン酸化は、分裂酵母のＲａｄ２４及びＲａｄ２５のヒト相同体である小さな酸性タンパク質１４−３−３ｓの結合部位を形成する。このリン酸化の調節の役割は、Ｃｄｃ２５Ｃ上のセリン−２１６からアラニンへの置換が、ヒト細胞における細胞周期Ｇ２を中断するという事実によって明らかに示された。しかし、Ｇ２チェックポイントの機構は、完全には理解されていない。
また、腫瘍微小環境も、癌細胞増殖、侵入、転移及び抗腫瘍免疫の阻止又は促進において特定の役割を果たし、これが患者の予後に影響を与える。マクロファージは、かつて癌細胞に対して作用すると予想されていたが、腫瘍発生において阻害及び促進の両方の役割を果たすことが判明している。古典的抗腫瘍表現型を有するマクロファージは、Ｍ１と呼ばれ、炎症誘発性であり、前腫瘍及び抗炎症性タイプのマクロファージは、Ｍ２と呼ばれ、このカテゴリー内に３つの主要なサブタイプを有する（Ｍａｒｔｉｎｅｚ ａｎｄ Ｇｏｒｄｏｎ，Ｆ１０００Ｐｒｉｍｅ Ｒｅｐｏｒｔｓ ６：１３（２０１４））。
好中球細胞外トラップ（ＮＥＴ）は、白血球と共に腫瘍微小環境の別のエレメントを提供する。ＮＥＴの形成は、侵入微生物に抵抗するために、好中球にとって有用であるが、これらは、癌患者において深部静脈血栓（ＤＶＴ）（Ｍａｒｔｉｎｎｏｄ ａｎｄ Ｗａｎｇｅｒ，Ｂｌｏｏｄ（２０１３））及び腫瘍細胞転移（Ｃｏｏｌｓ−Ｌａｒｔｉｇｕｅ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．（２０１３））に寄与し得る。従って、ＮＥＴは、患者の生存に有害な影響をもたらし得る。ＤＶＴは、一般的であり、癌患者において致死的となる可能性があり、白血球増加症（高いＷＢＣを招く）は、主要なリスク因子である（Ｐａｂｉｎｇｅｒ，Ｉ．，ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ １２２：１２（２０１３）；Ｂｌｉｘ，Ｋ．，ｅｔ ａｌ．ＰＬＯＳ Ｏｎｅ ４：８（２０１３）；Ｗａｎｇ，Ｔ．Ｆ．，ｅｔ ａｌ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｒｅｓ．１３３（１）：２５（２０１４））。
本発明によれば、細胞増殖を阻害し、アポトーシス又はカタストロフを刺激し、細胞の細胞周期Ｇ２チェックポイントを抑止するか；又は細胞増殖障害を特徴とするものなど、望ましくない細胞増殖若しくは生存を処置する方法、並びにそのための１つ又は複数の活性を有するペプチド化合物の使用が提供される。例えば、本発明は、細胞増殖を阻害する；細胞の細胞周期Ｇ２チェックポイントを抑止する；核酸損傷剤又は処置に対する細胞の感受性を高める；細胞に対する核酸損傷を増大する方法、並びに使用を提供する。
一実施形態では、過剰増殖細胞の核酸損傷を増大させるための、又は正常な範囲内の白血球数を有する哺乳動物（例えば、ヒト）における細胞増殖障害の予防若しくは治療のための方法又は使用は、ペプチド化合物を投与するステップを含み、ここで、ペプチド化合物は、以下の配列のいずれか：
Ａ）Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６又はＰ６、Ｐ５、Ｐ４、Ｐ３、Ｐ２、Ｐ１の構造を有する、Ｐ１〜Ｐ６と表示される残基を含むペプチド（ここで、Ｐ１は、Ｃｈａ、Ｎａｌ（２）、（Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）、（Ｐｈｅ−３，４，５Ｆ）、（Ｐｈｅ−４ＣＦ３）、類似の側鎖空間を占めるアミノ酸、又は側鎖に、１個又は２個の芳香族、ピペリジン、ピラジン、ピリミジン、ピペラジン、モルホリン若しくはピリミジン基、又は１個のインドール、ペンタレン、インデン、ナフタレン、ベンゾフラン、ベンゾチオフェン、キノリン、インドリン、クロマン、キノキサリン、キナゾリン基を有する任意のアミノ酸であり；Ｐ２は、Ｃｈａ、Ｎａｌ（２）、（Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）、（Ｐｈｅ−３，４，５Ｆ）、（Ｐｈｅ−４ＣＦ３）、Ｂｐａ、Ｐｈｅ４ＮＯ２、類似の側鎖空間を占めるアミノ酸、又は側鎖に、１個又は２個の芳香族、ピペリジン、ピラジン、ピリミジン、ピペラジン、モルホリン若しくはピリミジン基、又は１個のインドール、ペンタレン、インデン、ナフタレン、ベンゾフラン、ベンゾチオフェン、キノリン、インドリン、クロマン、キノキサリン、若しくはキナゾリン基を有する任意のアミノ酸であり；Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５は、任意のアミノ酸であるか、又はＰ３、Ｐ４、Ｐ５の１つ又は複数は、Ｐ２とＰ６との間の距離が、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５の各々がアミノ酸である場合の距離とほぼ同じであるように、単純な炭素鎖であり；Ｐ６は、Ｂｐａ、Ｐｈｅ４ＮＯ２、任意の１個のアミノ酸及びＴｙｒ、任意の１個のアミノ酸及びＰｈｅ、任意のアミノ酸、若しくは非存在である）；或いは
Ｂ）Ａ）のペプチド（ここで、単純な炭素鎖を有するアミノ酸は、１１−アミノウンデカン酸、１０−アミノデカン酸、９−アミノノナン酸、８−アミノカプリル酸、７−アミノヘプタン酸、６−アミノカプロン酸、又は１つ若しくは複数の不飽和炭素結合を含む類似の構造であり、及び／又は任意の１個のアミノ酸は、Ｓｅｒであり、及び／又はＰ４は、Ｔｒｐであり、及び／又は類似の側鎖空間を占めるアミノ酸は、Ｔｙｒ若しくはＰｈｅである）；或いは
以下の構造のいずれかを有するＰ１〜Ｐ１２と表示される残基を含むペプチド：Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６；Ｐ６、Ｐ５、Ｐ４、Ｐ３、Ｐ２、Ｐ１；Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６、Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２；Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６、Ｐ１２、Ｐ１１、Ｐ１０、Ｐ９、Ｐ８、Ｐ７；Ｐ６、Ｐ５、Ｐ４、Ｐ３、Ｐ２、Ｐ１、Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２；Ｐ６、Ｐ５、Ｐ４、Ｐ３、Ｐ２、Ｐ１、Ｐ１２、Ｐ１１、Ｐ１０、Ｐ９、Ｐ８、Ｐ７；Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６；Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２、Ｐ６、Ｐ５、Ｐ４、Ｐ３、Ｐ２、Ｐ１；Ｐ１２、Ｐ１１、Ｐ１０、Ｐ９、Ｐ８、Ｐ７、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６；Ｐ１２、Ｐ１１、Ｐ１０、Ｐ９、Ｐ８、Ｐ７、Ｐ６、Ｐ５、Ｐ４、Ｐ３、Ｐ２、Ｐ１；Ｐ１２、Ｐ１１、Ｐ６、Ｐ９、Ｐ８、Ｐ７、Ｐ２、Ｐ１；Ｐ１２、Ｐ１１、Ｐ１０、Ｐ６、Ｐ９、Ｐ４、Ｐ７、Ｐ２、Ｐ１；Ｐ１、Ｐ２、Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ６、Ｐ１１、Ｐ１２；又はＰ１、Ｐ２、Ｐ７、Ｐ４、Ｐ９、Ｐ６、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２（ここで、Ｐ１は、Ｃｈａ、Ｎａｌ（２）、（Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）、（Ｐｈｅ−３，４，５Ｆ）、（Ｐｈｅ−４ＣＦ３）、Ｂｐａ、Ｐｈｅ４ＮＯ２、類似の側鎖空間を占めるアミノ酸（例えば、ｄ−若しくはｌ−Ｔｙｒ、ｄ−若しくはｌ−Ｐｈｅ）、又は側鎖に、１個又は２個の芳香族、ピペリジン、ピラジン、ピリミジン、ピペラジン、モルホリン若しくはピリミジン基、又は１個のインドール、ペンタレン、インデン、ナフタレン、ベンゾフラン、ベンゾチオフェン、キノリン、インドリン、クロマン、キノキサリン、若しくはキナゾリン基を有する任意のアミノ酸であり；Ｐ２は、Ｃｈａ、Ｎａｌ（２）、（Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）、（Ｐｈｅ−３，４，５Ｆ）、（Ｐｈｅ−４ＣＦ３）、若しくは類似の側鎖空間を占めるアミノ酸、又は側鎖に、１個又は２個の芳香族、ピペリジン、ピラジン、ピリミジン、ピペラジン、モルホリン若しくはピリミジン基、又は１個のインドール、ペンタレン、インデン、ナフタレン、ベンゾフラン、ベンゾチオフェン、キノリン、インドリン、クロマン、キノキサリン、キナゾリン基を有する任意のアミノ酸であり；Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５は、任意のアミノ酸であるか、又はＰ３、Ｐ４、Ｐ５の１つ又は複数は、Ｐ２とＰ６との間の距離が、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５の各々がアミノ酸である場合の距離とほぼ同じであるように、単純な炭素鎖であり；Ｐ６は、Ｂｐａ、Ｐｈｅ４ＮＯ２、任意の１個のアミノ酸及びＴｙｒ、任意の１個のアミノ酸及びＰｈｅであり；並びにＰ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２の少なくとも３つは、塩基性アミノ酸であり、残りは、任意のアミノ酸若しくは非存在である）；或いは
Ｃ）のペプチド（ここで、単純な炭素鎖を有するアミノ酸は、１１−アミノウンデカン酸、１０−アミノデカン酸、９−アミノノナン酸、８−アミノカプリル酸、７−アミノヘプタン酸、６−アミノカプロン酸、又は１つ若しくは複数の不飽和炭素結合を含む類似の構造であり、及び／又は任意の１個のアミノ酸は、Ｓｅｒであり、及び／又はＰ４は、Ｔｒｐであり、及び／又は類似の側鎖空間を占めるアミノ酸は、Ｔｙｒ若しくはＰｈｅである）；或いは
以下の構造のいずれかを有するＰ１〜Ｐ１２と表示される残基を含むペプチド：Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６、Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２；Ｐ１２、Ｐ１１、Ｐ１０、Ｐ９、Ｐ８、Ｐ７、Ｐ６、Ｐ５、Ｐ４、Ｐ３、Ｐ２、Ｐ１；Ｐ１２、Ｐ１１、Ｐ１０、Ｐ６、Ｐ９、Ｐ４、Ｐ７、Ｐ２、Ｐ１；又はＰ１、Ｐ２、Ｐ７、Ｐ４、Ｐ９、Ｐ６、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２（ここで、Ｐ１は、Ｃｈａ、Ｎａｌ（２）、（Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）、（Ｐｈｅ−３，４，５Ｆ）、（Ｐｈｅ−４ＣＦ３）、Ｂｐａ、Ｐｈｅ４ＮＯ２、類似の側鎖空間を占めるアミノ酸、又は側鎖に、１個又は２個の芳香族、ピペリジン、ピラジン、ピリミジン、ピペラジン、モルホリン若しくはピリミジン基、又は１個のインドール、ペンタレン、インデン、ナフタレン、ベンゾフラン、ベンゾチオフェン、キノリン、インドリン、クロマン、キノキサリン、キナゾリン基を有する任意のアミノ酸であり；Ｐ２は、Ｃｈａ、Ｎａｌ（２）、（Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）、（Ｐｈｅ−３，４，５Ｆ）、（Ｐｈｅ−４ＣＦ３）、類似の側鎖空間を占めるアミノ酸、又は側鎖に、１個又は２個の芳香族、ピペリジン、ピラジン、ピリミジン、ピペラジン、モルホリン若しくはピリミジン基、又は１個のインドール、ペンタレン、インデン、ナフタレン、ベンゾフラン、ベンゾチオフェン、キノリン、インドリン、クロマン、キノキサリン、キナゾリン基を有する任意のアミノ酸であり；Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５は、任意のアミノ酸であるか、又はＰ３、Ｐ４、Ｐ５の１つ又は複数は、Ｐ２とＰ６との間の距離が、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５の各々がアミノ酸である場合の距離とほぼ同じであるように、単純な炭素鎖であり；Ｐ６は、Ｂｐａ、Ｐｈｅ４ＮＯ２、任意の１個のアミノ酸及びＴｙｒ、任意の１個のアミノ酸及びＰｈｅ、任意のアミノ酸、又は非存在であり；並びにＰ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２の少なくとも３つは、塩基性アミノ酸であり、残りは、任意のアミノ酸若しくは非存在である）；或いは
Ｅ）のペプチド（ここで、単純な炭素鎖を有するアミノ酸は、アミノウンデカン酸若しくは８−アミノカプリル酸であり、及び／又は任意の１個のアミノ酸は、Ｓｅｒであり、及び／又は類似の側鎖空間を占めるアミノ酸は、Ｔｙｒ若しくはＰｈｅである）；或いは
以下の構造のいずれかを有するＰ１〜Ｐ１２と表示される残基を含むペプチド：Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６又はＰ６、Ｐ５、Ｐ４、Ｐ３、Ｐ２、Ｐ１（ここで、Ｐ１は、Ｃｈａ、Ｎａｌ（２）、（Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）、（Ｐｈｅ−３，４，５Ｆ）、（Ｐｈｅ−４ＣＦ３）、Ｂｐａ、Ｐｈｅ４ＮＯ２、Ｔｙｒ、若しくはＰｈｅであり；Ｐ２は、Ｃｈａ、Ｎａｌ（２）、（Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）、（Ｐｈｅ−３，４，５Ｆ）、（Ｐｈｅ−４ＣＦ３）、Ｂｐａ、Ｐｈｅ４ＮＯ２、Ｔｙｒ、若しくはＰｈｅであり；Ｐ３は、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、Ｃｙｓ、Ｐｒｏ、若しくはＡｓｎであり；Ｐ４は、Ｔｒｐであり；Ｐ５は、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、若しくはＡｓｎであり；又はＰ３、Ｐ４、Ｐ５は、単一アミノウンデカン酸若しくは単一８−アミノカプリル酸であり；Ｐ６は、Ｂｐａ、Ｐｈｅ４ＮＯ２、（Ｓｅｒ−Ｔｙｒ）、若しくは（Ｓｅｒ−Ｐｈｅ）である）；或いは
以下の構造のいずれかを有するＰ１〜Ｐ１２と表示される残基を含むペプチド：Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６、Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２；Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６、Ｐ１２、Ｐ１１、Ｐ１０、Ｐ９、Ｐ８、Ｐ７；Ｐ６、Ｐ５、Ｐ４、Ｐ３、Ｐ２、Ｐ１、Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２；Ｐ６、Ｐ５、Ｐ４、Ｐ３、Ｐ２、Ｐ１、Ｐ１２、Ｐ１１、Ｐ１０、Ｐ９、Ｐ８、Ｐ７；Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６；Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２、Ｐ６、Ｐ５、Ｐ４、Ｐ３、Ｐ２、Ｐ１；Ｐ１２、Ｐ１１、Ｐ１０、Ｐ９、Ｐ８、Ｐ７、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６；Ｐ１２、Ｐ１１、Ｐ１０、Ｐ９、Ｐ８、Ｐ７、Ｐ６、Ｐ５、Ｐ４、Ｐ３、Ｐ２、Ｐ１；Ｐ１２、Ｐ１１、Ｐ６、Ｐ９、Ｐ８、Ｐ７、Ｐ２、Ｐ１；Ｐ１２、Ｐ１１、Ｐ１０、Ｐ６、Ｐ９、Ｐ４、Ｐ７、Ｐ２、Ｐ１；Ｐ１、Ｐ２、Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ６、Ｐ１１、Ｐ１２；又はＰ１、Ｐ２、Ｐ７、Ｐ４、Ｐ９、Ｐ６、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２（ここで、Ｐ１は、Ｃｈａ、Ｎａｌ（２）、（Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）、（Ｐｈｅ−３，４，５Ｆ）、（Ｐｈｅ−４ＣＦ３）、Ｂｐａ、Ｐｈｅ４ＮＯ２、Ｔｙｒ、若しくはＰｈｅであり；Ｐ２は、Ｃｈａ、Ｎａｌ（２）、（Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）、（Ｐｈｅ−３，４，５Ｆ）、（Ｐｈｅ−４ＣＦ３）、Ｂｐａ、Ｐｈｅ４ＮＯ２、Ｔｙｒ、若しくはＰｈｅであり；Ｐ３は、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、Ｃｙｓ、Ｐｒｏ、若しくはＡｓｎであり；Ｐ４はＴｒｐであり；Ｐ５は、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、若しくはＡｓｎであり；又はＰ３、Ｐ４、Ｐ５は、単一アミノウンデカン酸若しくは単一８−アミノカプリル酸であり；Ｐ６は、Ｂｐａ、Ｐｈｅ４ＮＯ２、（ｄ−Ｓｅｒ−ｄ−Ｔｙｒ）、若しくは（ｄ−Ｓｅｒ−ｄ−Ｐｈｅ）であり；並びにＰ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２の少なくとも３つは、Ａｒｇ若しくはＬｙｓであり、残りは、任意のアミノ酸若しくは非存在である）；或いは
以下の構造のいずれかを有するＰ１〜Ｐ１２と表示される残基を含むペプチド：Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６、Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２；Ｐ１２、Ｐ１１、Ｐ１０、Ｐ９、Ｐ８、Ｐ７、Ｐ６、Ｐ５、Ｐ４、Ｐ３、Ｐ２、Ｐ１；Ｐ１２、Ｐ１１、Ｐ１０、Ｐ６、Ｐ９、Ｐ４、Ｐ７、Ｐ２、Ｐ１；又はＰ１、Ｐ２、Ｐ７、Ｐ４、Ｐ９、Ｐ６、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２（ここで、Ｐ１は、Ｃｈａ、Ｎａｌ（２）であり；Ｐ２は、（Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）、（Ｐｈｅ−３，４，５Ｆ）、（Ｐｈｅ−４ＣＦ３）であり；Ｐ３は、Ｓｅｒであり；Ｐ４は、Ｔｒｐであり；Ｐ５は、Ｓｅｒ若しくはＡｓｎであり；Ｐ６は、Ｂｐａ、Ｐｈｅ４ＮＯ２、（Ｓｅｒ−Ｔｙｒ）、若しくは（Ｓｅｒ−Ｐｈｅ）であり；並びにＰ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２の少なくとも３つは、Ａｒｇであり、残りは、任意のアミノ酸若しくは非存在である）；或いは
以下の構造のいずれかを有するＰ１〜Ｐ１２と表示される残基を含むペプチド：Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６又はＰ６、Ｐ５、Ｐ４、Ｐ３、Ｐ２、Ｐ１（ここで、Ｐ１は、Ｃｈａ、若しくはＮａｌ（２）であり；Ｐ２は、（Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）、（Ｐｈｅ−３，４，５Ｆ）若しくは（Ｐｈｅ−４ＣＦ３）であり；Ｐ３は、Ｓｅｒであり；Ｐ４は、Ｔｒｐであり；Ｐ５は、Ｓｅｒであり；並びにＰ６は、Ｂｐａ、若しくは（Ｓｅｒ−Ｔｙｒ）である）；或いは
以下の構造のいずれかを有するＰ１〜Ｐ１２と表示される残基を含むペプチド：Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６；Ｐ６、Ｐ５、Ｐ４、Ｐ３、Ｐ２、Ｐ１；Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６、Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２；Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６、Ｐ１２、Ｐ１１、Ｐ１０、Ｐ９、Ｐ８、Ｐ７；Ｐ６、Ｐ５、Ｐ４、Ｐ３、Ｐ２、Ｐ１、Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２；Ｐ６、Ｐ５、Ｐ４、Ｐ３、Ｐ２、Ｐ１、Ｐ１２、Ｐ１１、Ｐ１０、Ｐ９、Ｐ８、Ｐ７；Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６；Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２、Ｐ６、Ｐ５、Ｐ４、Ｐ３、Ｐ２、Ｐ１；Ｐ１２、Ｐ１１、Ｐ１０、Ｐ９、Ｐ８、Ｐ７、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６；Ｐ１２、Ｐ１１、Ｐ１０、Ｐ９、Ｐ８、Ｐ７、Ｐ６、Ｐ５、Ｐ４、Ｐ３、Ｐ２、Ｐ１；Ｐ１２、Ｐ１１、Ｐ６、Ｐ９、Ｐ８、Ｐ７、Ｐ２、Ｐ１；Ｐ１２、Ｐ１１、Ｐ１０、Ｐ６、Ｐ９、Ｐ４、Ｐ７、Ｐ２、Ｐ１；Ｐ１、Ｐ２、Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ６、Ｐ１１、Ｐ１２；又はＰ１、Ｐ２、Ｐ７、Ｐ４、Ｐ９、Ｐ６、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２（ここで、Ｐ１は、Ｃｈａ、若しくはＮａｌ（２）であり；Ｐ２は、（Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）、（Ｐｈｅ−３，４，５Ｆ）若しくは（Ｐｈｅ−４ＣＦ３）であり；Ｐ３は、任意のアミノ酸であり；Ｐ４は、ｄ−若しくはｌ−Ｔｒｐであり；Ｐ５は、任意のアミノ酸であり；Ｐ６は、Ｂｐａ若しくは（Ｓｅｒ−Ｔｙｒ）であり；Ｐ７は、Ａｒｇであり；Ｐ８は、Ａｒｇであり；Ｐ９は、Ａｒｇであり；Ｐ１０は、Ｇｌｎ若しくはＡｒｇであり；Ｐ１１は、Ａｒｇであり；Ｐ１２は、ｄ−若しくはｌ−Ａｒｇである）；或いは
任意のアミノ酸が、Ｓｅｒ、若しくはＰｒｏである、Ｋ）のペプチド；或いは
以下の構造のいずれかを有するＰ１〜Ｐ１２と表示される残基を含むペプチド：Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６、Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２；Ｐ１２、Ｐ１１、Ｐ１０、Ｐ９、Ｐ８、Ｐ７、Ｐ６、Ｐ５、Ｐ４、Ｐ３、Ｐ２、Ｐ１；Ｐ１２、Ｐ１１、Ｐ１０、Ｐ６、Ｐ９、Ｐ４、Ｐ７、Ｐ２、Ｐ１；又はＰ１、Ｐ２、Ｐ７、Ｐ４、Ｐ９、Ｐ６、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２（ここで、Ｐ１は、Ｃｈａ若しくはＮａｌ（２）であり；Ｐ２は、（Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）であり；Ｐ３は、Ｓｅｒであり；Ｐ４は、Ｔｒｐであり；Ｐ５は、Ｓｅｒであり；Ｐ６は、Ｂｐａ若しくは（Ｓｅｒ−Ｔｙｒ）であり；Ｐ７は、Ａｒｇであり；Ｐ８は、Ａｒｇであり；Ｐ９は、Ａｒｇであり；Ｐ１０は、Ｇｌｎ若しくはＡｒｇであり；Ｐ１１は、Ａｒｇであり；並びにＰ１２は、Ａｒｇである）；或いは
哺乳動物に対するそのプロドラッグ又はその薬学的に許容される塩を含み、これによって、過剰増殖細胞の核酸損傷又は細胞増殖障害の予防若しくは治療を高める。
具体的な実施形態において、一方法又は使用は、以下の配列のいずれかを含むペプチド化合物を使用する：（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｇｌｎ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）；
（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｇｌｎ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）；
（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｇｌｎ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）；
（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｇｌｎ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）；
（ｄ−Ｃｈａ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｇｌｎ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）；
（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｇｌｎ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｃｈａ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｂｐａ）；
（ｄ−Ｃｈａ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｇｌｎ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）；
（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｇｌｎ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｃｈａ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｂｐａ）；
（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｃｈａ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｂｐａ）；
（ｄ−Ｃｈａ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）；
（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）；
（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）；
（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）；
（ｄ−Ｃｈａ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）；
（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）；
（ｄ−Ｃｈａ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）；（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）；（ｄ−Ｃｈａ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）；
（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）；又は（ｄ−Ｃｈａ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）。
別の具体的実施形態では、一方法又は使用は、以下の配列のいずれかを含むか、又はそれから構成されるペプチド化合物を使用する：
（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）（配列番号１）；
（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｇｌｎ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）；又は
（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｇｌｎ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）。
別の具体的実施形態では、一方法又は使用は、血液１マイクロリットル当たり白血球約１１，０００（ｗｂｃ／μｌ）未満の白血球数を有する哺乳動物；血液１マイクロリットル当たり白血球約４，０００〜約１１，０００（ｗｂｃ／μｌ）の白血球数を有する哺乳動物；血液１マイクロリットル当たり白血球約１０，０００（ｗｂｃ／μｌ）未満の白血球数を有する哺乳動物；血液１マイクロリットル当たり白血球約９，０００（ｗｂｃ／μｌ）未満の白血球数を有する哺乳動物；血液１マイクロリットル当たり白血球約４，０００〜約９，０００（ｗｂｃ／μｌ）の白血球数を有する哺乳動物；血液１マイクロリットル当たり白血球約８，０００（ｗｂｃ／μｌ）未満の白血球数を有する哺乳動物；血液１マイクロリットル当たり白血球約７，０００（ｗｂｃ／μｌ）未満の白血球数を有する哺乳動物；又は各臨床検査室による血液１マイクロリットル当たりの白血球（ｗｂｃ／μｌ）の正常値上限を下回る白血球数を有する哺乳動物に対して実施される。
方法及び使用は、医薬製剤中のペプチド化合物を含む。本発明の方法及び使用は、任意の経路による投与も含む。特定の実施形態では、ペプチド化合物は、局所、局部又は全身に投与する。
方法及び使用は、ペプチド化合物の薬学的に許容される塩を含む。特定の態様において、薬学的に許容される塩は、酢酸塩、スルホン酸塩、硫酸塩、ピロ硫酸塩、重硫酸塩、亜硫酸塩、重亜硫酸塩、リン酸塩、一水素リン酸塩、二水素リン酸塩、メタリン酸塩、ピロリン酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、プロピオン酸塩、デカン酸塩、カプリル酸塩、アクリル酸塩、ギ酸塩、イソ酪酸塩、カプロン酸塩、ヘプタン酸塩、プロピオール酸塩、シュウ酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、スベリン酸塩、セバシン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、ブチン−１，４−ジオエート、ヘキシン−１，６−ジオエート、安息香酸塩、クロロ安息香酸塩、安息香酸メチル、ジニトロ安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、メトキシ安息香酸塩、フタル酸塩、キシレンスルホン酸塩、フェニル酢酸塩、フェニルプロピオン酸塩、フェニル酪酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、γ−ヒドロキシ酪酸塩、グリコール酸塩、酒石酸塩、メタン−スルホン酸塩、プロパンスルホン酸塩、ナフタレン−１−スルホン酸塩、ナフタレン−２−スルホン酸塩、及びマンデル酸塩のいずれか１つ又はこれらの組み合わせである。
方法及び使用は、６〜１０、１０〜１５、１５〜２０、２０〜２５、２５〜３０、３０〜４０、４０〜５０、５０〜７５、７５〜１００、１００〜１５０、１５０〜２００、又は２００〜３００個のアミノ酸残基の長さを含むか、又はそれから構成されるペプチド化合物を含む。
方法及び使用は、ペプチド化合物であって、それに結合又は共役した細胞透過性分子を含むか、又はそれから構成されるペプチド化合物を含む。特定の非限定的態様では、細胞透過性分子は、共有結合、又はペプチド若しくは非ペプチドリンカーによってペプチド化合物に連結されている。別の具体的な非限定的態様では、細胞透過性ペプチドは、極性／荷電アミノ酸及び非極性、疎水性アミノ酸の交互のパターンを含む。また別の具体的な非限定的態様では、細胞透過性ペプチドは、ポリカチオン性又は両親媒性αへリックス構造を含む。さらに別の具体的な非限定的態様では、細胞透過性ペプチドは、ポリ−アルギニン（Ａｒｇ）配列（例えば、（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｇｌｎ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ））を含む。
また別の具体的な態様では、ペプチド化合物及び／又は細胞透過性ペプチドは、Ｌ−若しくはＤ−異性体アミノ酸、又はＬ−及びＤ−異性体アミノ酸の混合物を含む。
別の具体的実施形態では、一方法又は使用は、核酸損傷剤、核酸損傷処置、抗増殖剤、又は抗増殖処置を投与するステップをさらに含む。非限定的な核酸損傷剤、核酸損傷処置、抗増殖剤、又は抗増殖処置は、外科切除、放射線療法、電離若しくは化学放射線療法、化学療法、免疫療法、局所若しくは局部温熱（ハイパーサーミア）療法、ワクチン接種、アルキル化剤、抗代謝物、植物エキス、植物アルカロイド、ニトロソウレア（ｎｉｔｒｏｓｏｕｒｅａ）、ホルモン、又はヌクレオシド若しくはヌクレオチド類似体を含むか、又はそれから構成される。
またさらに別の具体的実施形態では、一方法又は使用は、核酸損傷剤、核酸損傷処置、抗増殖剤、若しくは抗増殖処置の前、それと同時、又はその投与後に投与されるペプチド化合物をさらに含むか、又はそれから構成される。特定の態様において、ペプチド化合物は、核酸損傷剤、核酸損傷処置、抗増殖剤、若しくは抗増殖処置の４８時間未満前又はその投与から４８時間未満後に投与され；ペプチド化合物は、核酸損傷剤、核酸損傷処置、抗増殖剤、若しくは抗増殖処置の２４時間未満前又はその投与から２４時間未満後に投与され；ペプチド化合物は、核酸損傷剤、核酸損傷処置、抗増殖剤、若しくは抗増殖処置の１２時間未満前又はその投与から１２時間未満後に投与され；ペプチド化合物は、核酸損傷剤、核酸損傷処置、抗増殖剤、若しくは抗増殖処置の６時間未満前又はその投与から６時間未満後に投与され；ペプチド化合物は、核酸損傷剤、核酸損傷処置、抗増殖剤、若しくは抗増殖処置の４時間未満前又はその投与から４時間未満後に投与され；ペプチド化合物は、核酸損傷剤、核酸損傷処置、抗増殖剤、若しくは抗増殖処置の２時間未満前又はその投与から２時間未満後に投与され；ペプチド化合物は、核酸損傷剤、核酸損傷処置、抗増殖剤、若しくは抗増殖処置の１時間未満前又はその投与から１時間未満後に投与される。
核酸損傷剤又は抗増殖剤の非限定的例としては、薬物が挙げられる。核酸損傷剤又は抗増殖剤の非限定的例として、プラチナ製剤、例えば、シスプラチン、カルボプラチン、ネダプラチン、ミタプラチン、サトラプラチン、ピコプラチン、トリプラチン、ミリプラチン、又はオキサリプラチンが挙げられる。
より具体的には、方法及び使用は、プラチナ製剤、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ペメトレキセド、ゲムシタビン、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、レベッカマイシン、アドリアマイシン（ＡＤＲ）、ブレオマイシン（Ｂｌｅｏ）、ペプレオマイシン、シスプラチン、シスプラチナム、又はｃｉｓ−ジアミンジクロロプラチナム（ＩＩ）（ＣＤＤＰ）、オキサリプラチン、又はカンプトテシン（ＣＰＴ）、シクロホスファミド、アザチオプリン、シクロスポリンＡ、プレドニゾロン、メルファラン、クロラムブシル、メクロレタミン、ブスルファン、メトトレキセート、６−メルカプトプリン、チオグアニン、５−フルオロウラシル、シトシンアラビノシド、ＡＺＴ、５−アザシチジン（５−ＡＺＣ）又は５−アザシチジン関連化合物、アクチノマイシンＤ、ミトラマイシン、ミトマイシンＣ、カルムスチン、ロムスチン、セムスチン、ストレプトゾトシン、ヒドロキシウレア、シスプラチン、ミトタン、プロカルバジン、ダカルバジン、タキサン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ドキソルビシン、ジブロモマンニトール、放射線若しくは放射性同位体を投与するステップを含むか、又はそれから構成される。放射線の具体的な非限定的例としては、紫外線照射、ＩＲ照射、Ｘ線、又はα、β若しくはγ線照射が挙げられる。放射性同位体の具体的な非限定的例としては、Ｉ131、Ｉ125、Ｓｒ89、Ｓｍ153、Ｙ90、又はＬｕ177が挙げられる。
本発明の方法及び使用は、細胞増殖性若しくは過剰増殖障害又は望ましくない細胞増殖に適用可能である。特定の実施形態において、細胞増殖障害は、腫瘍又は癌を含む。より具体的な実施形態において、細胞増殖障害は、転移性腫瘍又は癌を含む。
腫瘍又は癌の具体的な非限定的例としては、小細胞若しくは非小細胞肺癌、又は腺癌、扁平上皮癌若しくは大細胞癌などの肺腫瘍又は癌が挙げられる。腫瘍又は癌の別の具体的な非限定的例としては、癌腫、肉腫、リンパ腫、白血病、腺腫、腺癌、黒色腫、グリオーマ、グリア芽細胞腫、髄膜腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、星状細胞腫、希突起膠細胞腫、中皮腫、網膜内皮、リンパ系若しくは造血系新形成、腫瘍、癌若しくは悪性疾患が挙げられる。腫瘍又は癌のさらに別の具体的な非限定的例としては、肺、甲状腺、頭部又は頸部、鼻咽頭、喉、鼻若しくは副鼻腔、脳、脊柱、乳房、副腎、脳下垂体、甲状腺、リンパ系、消化管（口、食道、胃、十二指腸、回腸、空腸（小腸）、結腸、直腸）、泌尿生殖器（子宮、卵巣、子宮頸部、内膜、膀胱、精巣、陰茎、前立腺）、腎臓、膵臓、肝臓、骨、骨髄、リンパ系、血液、筋肉、若しくは皮膚新形成、腫瘍、又は癌が挙げられる。腫瘍又は癌のまた別の具体的な非限定的例としては、乳癌、前立腺癌、膵臓癌、胃癌、胸膜中皮腫、結腸癌、直腸癌、大腸癌、小腸癌、食道癌、十二指腸癌、舌癌、咽頭癌、唾液腺癌、脳腫瘍、神経鞘腫、肝癌、腎癌、胆管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、子宮体癌、卵巣癌、膀胱癌、尿道癌、皮膚癌、血管腫、悪性リンパ腫、悪性黒色腫、甲状腺癌、副甲状腺癌、鼻腔癌、副鼻腔癌、聴覚器官癌、口腔癌、喉頭癌、耳下腺癌、顎下腺癌、骨腫瘍、血管線維腫、網膜肉腫、陰茎癌、精巣腫瘍、小児固形癌、カポジ肉腫、上顎洞の腫瘍、線維性組織球腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、リンパ腫、多発性骨髄腫又は白血病が挙げられる。
肉腫の具体的な非限定的例としては、リンパ肉腫、脂肪肉腫、骨肉腫、軟骨肉腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫又は線維肉腫が挙げられる。造血系腫瘍、癌又は悪性疾患の具体的な非限定的例としては、骨髄腫、リンパ腫又は白血病が挙げられる。
本発明の方法及び使用は、腫瘍又は癌を治療するのに有効な量のペプチド化合物を投与するステップを含む。特定の態様では、一方法又は使用は、腫瘍又は癌の再発、増殖、進行、悪化若しくは転移を阻害又は軽減し；新形成、腫瘍、癌若しくは悪性細胞の塊、体積、サイズ若しくは細胞数の部分的若しくは完全な破壊、新形成、腫瘍、癌若しくは悪性細胞の壊死、溶解若しくはアポトーシスの刺激、誘導又は増大、新形成、腫瘍、癌若しくは悪性腫瘍の体積サイズ、細胞塊の縮小、新形成、腫瘍、癌若しくは悪性腫瘍の進行又はその体積、塊、サイズ若しくは細胞数増加の阻害又は阻止、或いは寿命の延長をもたらし；新形成、腫瘍、癌若しくは悪性疾患に関連するか、又はそれを原因とする有害な症状若しくは合併症の重症度、持続時間若しくは頻度の軽減若しくは低減をもたらすか；或いは、本方法は、疼痛、不快感、吐き気、衰弱若しくは無気力の軽減若しくは低減をもたらすか、又は精気、食欲の増加、運動能力若しくは心理的に満足できる状態（ｗｅｌｌ ｂｅｉｎｇ）の改善をもたらす。
さらに、任意選択で、核酸損傷処置（例えば、核酸損傷剤）又は抗増殖剤と組み合わせたペプチド化合物を含むキットが提供される。一実施形態では、キットは、本発明の方法（例えば、血液１マイクロリットル当たり白血球約１１，０００（ｗｂｃ／μｌ）未満の白血球数を有する哺乳動物；血液１マイクロリットル当たり白血球約４，０００〜約１１，０００（ｗｂｃ／μｌ）の白血球数を有する哺乳動物；血液１マイクロリットル当たり白血球約１０，０００（ｗｂｃ／μｌ）未満の白血球数を有する哺乳動物；血液１マイクロリットル当たり白血球約９，０００（ｗｂｃ／μｌ）未満の白血球数を有する哺乳動物；血液１マイクロリットル当たり白血球約４，０００〜約９，０００（ｗｂｃ／μｌ）の白血球数を有する哺乳動物；血液１マイクロリットル当たり白血球約８，０００（ｗｂｃ／μｌ）未満の白血球数を有する哺乳動物；血液１マイクロリットル当たり白血球約７，０００（ｗｂｃ／μｌ）未満の白血球数を有する哺乳動物；又は各臨床検査室による血液１マイクロリットル当たりの白血球（ｗｂｃ／μｌ）の正常値上限を下回る白血球数を有する哺乳動物に投与する）を実施するのに用いるためのペプチド化合物及び説明書を含む。
図１は、ブレオマイシンで処理したＪｕｒｋａｔ細胞に対して使用した場合の、各化合物の用量応答曲線を示す。Ｘ軸は、用量を示し、Ｙ軸は、処理後のＧ２／Ｍ細胞（％）を示す。 図２は、コルヒチンで処理したＪｕｒｋａｔ細胞に対して使用した場合の、各化合物の用量応答曲線を示す。Ｘ軸は、用量を示し、Ｙ軸は、処理後のＧ２／Ｍ細胞（％）を示す。 図３Ａ及び３Ｂは、様々な用量の化合物で、（Ａ）ブレオマイシン（Ｂｌｅｏ）処理又は（Ｂ）アドリアマイシン（ＡＤＲ）処理した、ヒト膵臓癌由来細胞株ＭＩＡＰａＣａ２を示す。回収した細胞を、細胞のＤＮＡについて染色してから、フローサイトメトリーを用いて分析した。ｓｕｂ−Ｇ１期細胞の集団のパーセンテージ（％）を死細胞として示す。 図４Ａ〜４Ｃは、Ｇ２チェックポイント抑止剤（ｌ−Ｇｌｙ）（ｌ−Ａｒｇ）（ｌ−Ｌｙｓ）（ｌ−Ｌｙｓ）（ｌ−Ａｒｇ）（ｌ−Ａｒｇ）（ｌ−Ｇｌｎ）（ｌ−Ａｒｇ）（ｌ−Ａｒｇ）（ｌ−Ｃｈａ）（ｌ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｌ−Ａｒｇ）（ｌ−Ｓｅｒ）（ｌ−Ｐｒｏ）（ｌ−Ｓｅｒ）（ｌ−Ｔｙｒ）（ｌ−Ｔｙｒ）（配列番号７８）の、構造活性関連性の概略図である：（Ａ）ブレオマイシン処理したＪｕｒｋａｔ細胞における、１−Ｃｈａのアミノ酸置換のＧ２チェックポイント抑止活性を順番に示し、［ｌ−Ｃｈａ＝ｌ−Ｎａｌ（２）］＞［ｌ−Ａｌａ（３−Ｂｚｔ）＝ｌ−Ｎａｌ（ｌ）＝ｌ−Ｔｒｐ＝ｌ−Ｄｐｈ］＞［ｌ−Ａｌａ（ｔＢｕ）＝Ｃｙｓ（ｔＢｕ）＝Ｌｅｕ］；（Ｂ）コルヒチン処理したＪｕｒｋａｔ細胞における、１−Ｃｈａのアミノ酸置換のＭ期チェックポイント抑止活性及び／又は非特異的毒性を順番に示し、［Ａｌａ（３−Ｂｚｔ）＝ｌ−Ｎａｌ（ｌ）＝ｌ−Ｄｐｈ］＞［ｌ−Ｃｈａ＝ｌ−Ｎａｌ（２）］；（Ｃ）ｌ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆのアミノ酸置換のＧ２チェックポイント抑止活性を順番に示す、ｌ−（Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）＝ｌ−（Ｐｈｅ−３，４，５−Ｆ）＝ｌ−（Ｐｈｅ−４ＣＦ３）］＞［ｌ−（Ｐｈｅ−３Ｂｒ，４Ｃｌ，５Ｂｒ）＝ｌ−（Ｐｈｅ−４Ｃｌ）＝ｌ−Ｔｙｒ］。 図５は、様々なアルギニンリッチ配列のＧ２抑止活性を示す。示したペプチドを、ブレオマイシンと共に、又はブレオマイシンを用いずに、Ｊｕｒｋａｔ細胞に添加した。Ｇ２／Ｍ細胞のパーセント（％）をＹ軸に示す。Ｘ軸は、以下の通りである：１、ブレオマイシン単独；２、０．２μｇ／ｍｌ；３、０．３９μｇ／ｍｌ；４、０．７８μｇ／ｍｌ；５、１．５６μｇ／ｍｌ；６、３．１２５μｇ／ｍｌ；７、６．２５μｇ／ｍｌ；８、１２．５μｇ／ｍｌ；９、２５μｇ／ｍｌ；及び１０、５０μｇ／ｍｌ。ペプチド配列は、以下の通りである：ｒｒｒｑｒｒｋｋｒ、（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｇｌｎ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｌｙｓ）（ｄ−Ｌｙｓ）（ｄ−Ａｒｇ）（配列番号７９）；ＣＢＰ５０１、（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｇｌｎ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（配列番号８０）；ＴＡＴなし、（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）（配列番号８１）；ｒｑｒｒ、（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｇｌｎ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（配列番号８２）；ｒｒｑｒｒ、（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｇｌｎ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（配列番号８３）；ｒｒｒｑ、（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｇｌｎ）（配列番号８４）；及びｒｒｒｑｒ、（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｇｌｎ）（ｄ−Ａｒｇ）（配列番号８５）。 図６は、（ｄ−Ｂｐａ）なしの様々なペプチドのＧ２抑止活性を示す。示したペプチドを、ブレオマイシンと共に、又はブレオマイシンを用いずに、Ｊｕｒｋａｔ細胞に添加した。Ｇ２／Ｍ細胞のパーセント（％）をＹ軸に示す。Ｘ軸は、以下の通りである：１、ブレオマイシン単独；２、０．２μｇ／ｍｌ；３、０．３９μｇ／ｍｌ；４、０．７８μｇ／ｍｌ；５、１．５６μｇ／ｍｌ；６、３．１２５μｇ／ｍｌ；７、６．２５μｇ／ｍｌ；８、１２．５μｇ／ｍｌ；９、２５μｇ／ｍｌ；及び１０、５０μｇ／ｍｌ。ペプチド配列は以下の通りである：ＣＢＰ０、（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｇｌｎ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（配列番号８６）；ＣＢＰ４５１、（ｄ−Ｔｙｒ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｐｒｏ）（ｌ−Ｔｒｐ）（ｌ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｇｌｎ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（配列番号８７）；ＣＢＰ４５２、（ｄ−Ｔｙｒ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｌ−Ｐｒｏ）（ｌ−Ｔｒｐ）（ｌ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｇｌｎ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（配列番号８８）；及びＣＢＰ５０１、（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｇｌｎ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（配列番号８０）。 図７は、様々なアルギニンリッチペプチド配列及びリジンリッチペプチド配列のＧ２抑止活性を示す。示したペプチドを、前述のようにＪｕｒｋａｔ細胞に添加して、Ｇ２／Ｍ細胞のパーセント（％）を計算した（Ｙ軸）。ペプチド配列は、以下の通りである：ＣＢＰ６０３、（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｐｈｅ４ＮＯ２）（ｄ−Ｃｈａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｇｌｎ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（配列番号８９）；ＣＢＰ６０７、（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（配列番号９０）；ＣＢＰ６０８、（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（配列番号９１）；及びＣＢＰ６０９、（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）（ｄ−Ｌｙｓ）（ｄ−Ｌｙｓ）（ｄ−Ｌｙｓ）（ｄ−Ｌｙｓ）（ｄ−Ｌｙｓ）（ｄ−Ｌｙｓ）（配列番号９２）。 図８は、配列のアルギニンリッチ部分の位置が変動し得ることを示す。示したペプチドを、前述のようにＪｕｒｋａｔ細胞に添加して、Ｇ２／Ｍ細胞のパーセント（％）を計算した（Ｙ軸）。ペプチド配列は、以下の通りである：ＣＢＰ５０１、（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｐｈｅ−２、３，４、５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｇｌｎ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（配列番号８０）；ＣＢＰ５１０、（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｇｌｎ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｃｈａ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｂｐａ）（配列番号９３）；ＣＢＰ５１１、（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｇｌｎ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）（配列番号９４）；及びＣＢＰ５１２、（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｃｈａ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｂｐａ）（配列番号９５）。 図９は、いくつかの試験した置換ペプチド配列の構造を示す。Ｇ２抑止活性は、明るい陰影を付けた置換の場合に増大し（*）、Ｍ期チェックポイント抑止活性及び／又は非特異的毒性は、暗い陰影を付けた置換の場合に増大し（**）、その他は、残りの置換について、ほぼ同一のままであった。 図１０は、ＣＢＰ５０１及びシスプラチンによる処理後の、ｓｃｉｄマウスにおける、腫瘍（ヒト膵臓癌腫）増殖の阻害を示す。「０日目」は、処置の開始を示す。各処置群について、標準偏差と一緒に、平均腫瘍サイズをＹ軸に示し、処置開始後の日数をＸ軸に示す。 図１１は、前述のように、キナーゼ阻害配列領域、及びＨＩＶ−ＴＡＴ形質導入配列に基づく配列領域を有するペプチドのＧ２抑止活性を示す。Ｇ２／Ｍ細胞のパーセント（％）をＹ軸に示す。Ｘ軸は、以下の通りである：１、ブレオマイシン単独；２、０．２μｇ／ｍｌ；３、０．３９μｇ／ｍｌ；４、０．７８μｇ／ｍｌ；５、１．５６μｇ／ｍｌ；６、３．１２５μｇ／ｍｌ；７、６．２５μｇ／ｍｌ；８、１２．５μｇ／ｍｌ；９、２５μｇ／ｍｌ；及び１０、５０μｇ／ｍｌ。ペプチド配列は以下の通りである：ＣＢＰ５０１、（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｇｌｎ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（配列番号８０）；ＣＢＰ７００、（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）（配列番号９６）；ＣＢＰ７０１、（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）（配列番号９７）；ＣＢＰ７０２、（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）（配列番号９８）；ＣＢＰ７０３、（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）（配列番号９９）。 図１２は、Ｇ２抑止分析のためにブレオマイシンを用い、Ｍ抑止活性及び／又は非特異的毒性のためにコルヒチンを用いた、ペプチドのＧ２抑止活性、及びＭ抑止活性、並びに／又は非特異的毒性の間の比較を示す。示したペプチドを、ブレオマイシン又はコルヒチンと共に、Ｊｕｒｋａｔ細胞に添加した。Ｇ２／Ｍ細胞のパーセント（％）をＹ軸に示す。Ｘ軸は、以下の通りである：１、ブレオマイシン又はコルヒチン単独；２，０．２μｇ／ｍｌ；３、０．３９μｇ／ｍｌ；４、０．７８μｇ／ｍｌ；５、１．５６μｇ／ｍｌ；６、３．１２５μｇ／ｍｌ；７、６．２５μｇ／ｍｌ；８、１２．５μｇ／ｍｌ；９、２５μｇ／ｍｌ；及び１０、５０μｇ／ｍｌ。ペプチド配列は、以下の通りである：ＣＢＰ５０１、（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｇｌｎ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）。 図１３は、ＣＢＰ５０１の分子構造、（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｇｌｎ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）を示す。 図１４は、ベースラインＷＢＣに対する、全ての処置患者における全生存率のカプラン・マイヤー（Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｙｅｒ）分析、すなわち、全ての処置患者におけるベースラインＷＢＣに対する、カプラン・マイヤー生存率曲線、ＯＳ中央値及びハザード比を示す。ハザード比は、カットオフレベルが低下し、カットオフレベルとしてＷＢＣ８０００／μＬでピークに達することから、向上している。 図１５は、ベースラインＷＢＣに対する、ＩＣＯＮ参加患者における全生存率のカプラン・マイヤー（Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｙｅｒ）分析、すなわち、ＩＣＯＮ参加患者におけるベースラインＷＢＣに対する、カプラン・マイヤー生存率曲線、ＯＳ中央値及びハザード比を示す。ハザード比は、カットオフレベルが低下し、カットオフレベルとしてＷＢＣ８０００／μＬでピークに達することから、向上しており、また、Ａ群及びＢ群同士の差は、ピークで統計的に有意ではなかった。 図１６は、各群が示す全処置集団におけるスクリーニング時のＷＢＣ、＞８０００又は＜８０００に対する、ログランク（Ｌｏｇ−ｒａｎｋ）（Ｍａｎｔｅｌ−Ｃｏｘ）検定によるカプラン・マイヤー生存率曲線、ＯＳ中央値、患者数、ハザード比、及びｐ値を示す。 図１７は、ＣＢＰ５０１処置を用いた活性化好中球によるＮＥＴ形成の増大を示す。 図１８は、ｉｎ ｖｉｖｏでのＣＢＰ５０１によるトロンビン／抗トロンビン複合体の増加を示す。 図１９は、ＣＢＰ５０１が、Ｍ１及びＭ２マクロファージ両方の食作用をｉｎ ｖｉｔｒｏで阻害したことを示す。 図２０は、マウスマクロファージ細胞株（ＲＡＷ２６４．７）からのＴＮＦ放出の抑制を示す。
本発明は、細胞増殖を阻害するペプチド及びペプチド模倣物を含む化合物を提供する。従って、本発明の化合物は、良性及び悪性腫瘍細胞などの望ましくない、又は不要な細胞増殖を特徴とする細胞増殖障害又は生理学的状態を治療する上で有用である。本発明のペプチド及びペプチド模倣物が、細胞増殖を阻害する能力は、少なくとも一部が、細胞周期Ｇ２チェックポイントの抑止によるものと思われる。細胞は、核酸損傷に応答して細胞周期Ｇ２チェックポイントに進入するように誘導され、Ｇ２チェックポイントを阻害することにより、ＤＮＡ複製及び細胞分裂が起こる前に、細胞は損傷を修復することができるため、本発明のペプチド及びペプチド模倣物は、核酸損傷剤及び処置プロトコルに対して細胞を感作する。核酸損傷を十分に蓄積した細胞は、Ｇ２チェックポイントが中断されるため、損傷核酸の完全な修復が不可能になる。このような細胞は、増殖の低減を呈し（例えば、修復されていない、生存に重要な遺伝子の突然変異のために）、最終的にアポトーシスを受けることになる。
正常なＧ１を有する細胞は、Ｇ１の間に核酸修復も実施され得ることから、損傷核酸の蓄積の影響を受けにくい。従って、正常細胞は、本発明の化合物の影響を受けにくい。しかし、障害又は破壊された細胞周期Ｇ１チェックポイントを有する細胞は、Ｇ１チェックポイントが障害若しくは破壊されるため、細胞が損傷核酸を完全に修復できる可能性が低くなることから、損傷核酸を蓄積する可能性が高くなる。従って、本発明のペプチド又はペプチド模倣物で、Ｇ１障害若しくは破壊細胞を処理することによって、細胞が、損傷核酸の修復を完了することができる可能性をさらに低くする。ゆえに、Ｇ１障害又は破壊細胞は、こうした本発明のペプチド及びペプチド模倣物に対してとりわけ感受性が高い。従って、ペプチド及びペプチド模倣物を含む本発明の化合物を用いて、一般に細胞増殖を阻害若しくは阻止し、特に、障害又は破壊Ｇ１チェックポイントを有する細胞の増殖を阻害することができる。
障害又は破壊Ｇ１細胞周期チェックポイントを有する細胞としては、限定はしないが、急速に増殖する細胞がある。急速に増殖する細胞、不所望に増殖する細胞又はアポトーシスを受けずに生存する細胞を特徴とする細胞増殖障害及び生理学的状態は、往々にして障害又は破壊Ｇ１細胞周期チェックポイントを有する。従って、本発明のペプチド及びペプチド模倣物が、増殖を阻害するか、又はアポトーシスを刺激する能力は、少なくとも一部が、Ｇ２細胞チェックポイントの破壊によるものと思われるため、障害又は破壊Ｇ１細胞周期チェックポイントによって急速又は不所望に増殖する細胞は、特に魅力的な標的である。
ＣＢＰ５０１は、ペプチドＴＡＴ−Ｓ２１６Ａを阻害する細胞周期Ｇ２チェックポイントである（Ｓｕｇａｎｕｍａ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５９：５８８７（１９９９））。ＴＡＴ−Ｓ２１６Ａを最適化して、正常な細胞の細胞周期表現型に影響を与えることなく、ＤＮＡ損傷剤に応答して細胞周期Ｇ２期における癌細胞の蓄積を低減するために、細胞周期表現型に基づくスクリーニング方法が使用されている（Ｓｈａ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．６：１４７（２００７））。ＣＢＰ５０１は、ＣＢＰ５０１感受性腫瘍細胞において白金濃度及び白金−ＤＮＡ付加物形成を増大することが判明しているため、カルモジュリン阻害によるＧ２チェックポイント阻害／破壊の代わりに、又はこれに加えて機能し得る（Ｍｉｎｅ，Ｎ．，ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．１０：１９２９（２０１１））。
ペプチド及びペプチド模倣物を含む本発明の化合物は、Ｇ２チェックポイントの破壊は、細胞が分裂するにつれて核酸損傷の蓄積を招く可能性があることから、核酸を損傷させるか、又は抗増殖活性を有する処置を追加することなく、それ自体で細胞増殖を抑制し得る。従って、異常な、又は不所望に増殖若しくは生存する細胞を本発明の化合物単独で、又は核酸損傷処置（例えば、化学薬剤若しくは処置プロトコル）と組み合わせて処理することにより、細胞の増殖を阻害若しくは阻止するか、又は細胞アポトーシス／カタストロフを刺激することができる。
細胞が正常又は異常（例えば、癌細胞）であるかに関係なく、急速に増殖する細胞をターゲティングする従来の抗細胞増殖剤とは違い、本発明の化合物は、障害又は破壊された細胞周期Ｇ１チェックポイントを有する細胞を選択的にターゲティングする。例えば、ＣＢＰ５０１は、シスプラチンとは異なり、ＨＵＶＥＣ細胞の増殖に影響を与えない（例えば、表３を参照）。ＣＢＰ５０１は、Ｍ期細胞周期停止及び／又はコルヒチンによって誘導される非特異的毒性にも影響を与えない（図１２）。その結果、本発明の化合物は、骨髄抑制、吐き気、食欲喪失、下痢、及び脱毛などの従来の抗細胞増殖治療薬に伴う望ましくない過剰な副作用をもたらす可能性が低い。さらに、癌細胞の大部分が、障害又は破壊された細胞周期Ｇ１チェックポイントを有するため、癌細胞は、細胞周期Ｇ２チェックポイントを抑止する本発明の化合物に対して高い感受性を示すであろう。正常細胞が影響を受けにくいということは、ペプチド及びペプチド模倣物を含む本発明の化合物を、より多量に使用できることも意味する。
本発明によれば、抗細胞増殖活性を有し、及び／又はＧ２細胞周期チェックポイントを抑止するペプチド及びペプチド模倣物を含む化合物が提供される。ペプチド又はペプチド模倣物は、細胞の増殖を阻害するか、又は細胞のアポトーシスを刺激する配列を含む。ペプチド又はペプチド模倣物はまた、細胞周期Ｇ２チェックポイントを抑止する配列も含む。一実施形態では、連続的ペプチド及びペプチド模倣物配列は、以下の構造を含む：Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６（配列番号１）又はＰ６、Ｐ５、Ｐ４、Ｐ３、Ｐ２、Ｐ１（配列番号２）；ここで、Ｐ１は、ｄ−若しくはｌ−Ｃｈａ、ｄ−若しくはｌ−Ｎａｌ（２）、ｄ−若しくはｌ−（Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）、ｄ−若しくはｌ−（Ｐｈｅ−３，４，５Ｆ）、ｄ−若しくはｌ−（Ｐｈｅ−４ＣＦ３）、類似の側鎖空間を占めるアミノ酸（例えば、ｄ−若しくはｌ−Ｔｙｒ、ｄ−若しくはｌ−Ｐｈｅ）、又は側鎖に、１個又は２個の芳香族、ピペリジン、ピラジン、ピリミジン、ピペラジン、モルホリン若しくはピリミジン基、又は１個のインドール、ペンタレン、インデン、ナフタレン基、ベンゾフラン、ベンゾチオフェン、キノリン、インドリン、クロマン、キノキサリン、キナゾリン基を有する任意のアミノ酸であり；Ｐ２は、ｄ−若しくはｌ−Ｃｈａ、ｄ−若しくはｌ−Ｎａｌ（２）、ｄ−若しくはｌ−（Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）、ｄ−若しくはｌ−（Ｐｈｅ−３，４，５Ｆ）、ｄ−若しくはｌ−（Ｐｈｅ−４ＣＦ３）、ｄ−若しくはｌ−Ｂｐａ、ｄ−若しくはｌ−Ｐｈｅ4ＮＯ2、類似の側鎖空間を占めるアミノ酸（例えば、ｄ−若しくはｌ−Ｔｙｒ、ｄ−若しくはｌ−Ｐｈｅ）、又は側鎖に、１個又は２個の芳香族、ピペリジン、ピラジン、ピリミジン、ピペラジン、モルホリン若しくはピリミジン基、又は１個のインドール、ペンタレン、インデン、ナフタレン、ベンゾフラン、ベンゾチオフェン、キノリン、インドリン、クロマン、キノキサリン、若しくはキナゾリン基を有する任意のアミノ酸であり；Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５は、任意のアミノ酸であるか、又はＰ３、Ｐ４、Ｐ５の１つ又は複数は、Ｐ２とＰ６との間の距離が、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５の各々がアミノ酸（ｄ−若しくはｌ−Ｔｒｐは、Ｐ４での一例である）である場合の距離とほぼ同じであるように、単純な炭素鎖であり；Ｐ６は、ｄ−若しくはｌ−Ｂｐａ、ｄ−若しくはｌ−Ｐｈｅ4ＮＯ2であり；任意のアミノ酸及びｄ−若しくはｌ−Ｔｙｒ（例えば、ｄ−Ｓｅｒ−ｄ−Ｔｙｒ）、任意のアミノ酸及びｄ−若しくはｌ−Ｐｈｅ（例えば、ｄ−Ｓｅｒ−ｄ−Ｐｈｅ）、任意のアミノ酸、又は非存在である。様々な態様において、単純な炭素鎖を有するアミノ酸は、ｄ−若しくはｌ−１１−アミノウンデカン酸、ｄ−若しくはｌ−１０−アミノデカン酸、ｄ−若しくはｌ−９−アミノノナン酸、ｄ−若しくはｌ−８−アミノカプリル酸、ｄ−若しくはｌ−７−アミノヘプタン酸、ｄ−若しくはｌ−６−アミノカプロン酸、又は１つ又は複数の不飽和炭素結合を含む類似の構造である。
別の実施形態において、連続的ペプチド又はペプチド模倣物配列は、以下の構造を含む：Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６（配列番号３）；Ｐ６、Ｐ５、Ｐ４、Ｐ３、Ｐ２、Ｐ１（配列番号４）；Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６、Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２（配列番号５）；Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６、Ｐ１２、Ｐ１１、Ｐ１０、Ｐ９、Ｐ８、Ｐ７（配列番号６）；Ｐ６、Ｐ５、Ｐ４、Ｐ３、Ｐ２、Ｐ１、Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２（配列番号７）；Ｐ６、Ｐ５、Ｐ４、Ｐ３、Ｐ２、Ｐ１、Ｐ１２、Ｐ１１、Ｐ１０、Ｐ９、Ｐ８、Ｐ７（配列番号８）；Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６（配列番号９）；Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２、Ｐ６、Ｐ５、Ｐ４、Ｐ３、Ｐ２、Ｐ１（配列番号１０）；Ｐ１２、Ｐ１１、Ｐ１０、Ｐ９、Ｐ８、Ｐ７、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６（配列番号１１）；Ｐ１２、Ｐ１１、Ｐ１０、Ｐ９、Ｐ８、Ｐ７、Ｐ６、Ｐ５、Ｐ４、Ｐ３、Ｐ２、Ｐ１（配列番号１２）；Ｐ１２、Ｐ１１、Ｐ６、Ｐ９、Ｐ８、Ｐ７、Ｐ２、Ｐ１（配列番号１３）；Ｐ１２、Ｐ１１、Ｐ１０、Ｐ６、Ｐ９、Ｐ４、Ｐ７、Ｐ２、Ｐ１（配列番号１４）；Ｐ１、Ｐ２、Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ６、Ｐ１１、Ｐ１２（配列番号１５）；又はＰ１、Ｐ２、Ｐ７、Ｐ４、Ｐ９、Ｐ６、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２（配列番号１６）；ここで、Ｐ１は、ｄ−若しくはｌ−Ｃｈａ、ｄ−若しくはｌ−Ｎａｌ（２）、ｄ−若しくはｌ−（Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）、ｄ−若しくはｌ−（Ｐｈｅ−３，４，５Ｆ）、ｄ−若しくはｌ−（Ｐｈｅ−４ＣＦ３）、ｄ−若しくはｌ−Ｂｐａ、ｄ−若しくはｌ−Ｐｈｅ4ＮＯ2、類似の側鎖空間を占めるアミノ酸（例えば、ｄ−若しくはｌ−Ｔｙｒ、ｄ−若しくはｌ−Ｐｈｅ）、又は側鎖に、１個又は２個の芳香族、ピペリジン、ピラジン、ピリミジン、ピペラジン、モルホリン若しくはピリミジン基、又は１個のインドール、ペンタレン、インデン、ナフタレン、ベンゾフラン、ベンゾチオフェン、キノリン、インドリン、クロマン、キノキサリン、若しくはキナゾリン基を有する任意のアミノ酸であり；Ｐ２は、ｄ−若しくはｌ−Ｃｈａ、ｄ−若しくはｌ−Ｎａｌ（２）、ｄ−若しくはｌ−（Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）、ｄ−若しくはｌ−（Ｐｈｅ−３，４，５Ｆ）、ｄ−若しくはｌ−（Ｐｈｅ−４ＣＦ３）、又は類似の側鎖空間を占めるアミノ酸（例えば、ｄ−若しくはｌ−Ｔｙｒ、ｄ−若しくはｌ−Ｐｈｅ）、又は側鎖に、１個又は２個の芳香族、ピペリジン、ピラジン、ピリミジン、ピペラジン、モルホリン若しくはピリミジン基、又は１個のインドール、ペンタレン、インデン、ナフタレン基、ベンゾフラン、ベンゾチオフェン、キノリン、インドリン、クロマン、キノキサリン、キナゾリン基を有する任意のアミノ酸であり；Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５は、任意のアミノ酸であるか、又はＰ３、Ｐ４、Ｐ５の１つ又は複数は、Ｐ２とＰ６との間の距離が、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５の各々がアミノ酸（ｄ−若しくはｌ−Ｔｒｐは、Ｐ４での一例である）である場合の距離とほぼ同じであるように、単純な炭素鎖であり；Ｐ６は、ｄ−若しくはｌ−Ｂｐａ、ｄ−若しくはｌ−Ｐｈｅ4ＮＯ2、任意のアミノ酸及びｄ−若しくはｌ−Ｔｙｒ（例えば、ｄ−Ｓｅｒ−ｄ−Ｔｙｒ）、任意のアミノ酸及びｄ−若しくはｌ−Ｐｈｅ（例えば、ｄ−Ｓｅｒ−ｄ−Ｐｈｅ）であり、Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２の少なくとも３つは、塩基性アミノ酸であり、残りは、任意のアミノ酸若しくは非存在である。様々な態様において、単純な炭素鎖を有するアミノ酸は、ｄ−若しくはｌ−１１−アミノウンデカン酸、ｄ−若しくはｌ−１０−アミノデカン酸、ｄ−若しくはｌ−９−アミノノナン酸、ｄ−若しくはｌ−８−アミノカプリル酸、ｄ−若しくはｌ−７−アミノヘプタン酸、ｄ−若しくはｌ−６−アミノカプロン酸、又は１つ又は複数の不飽和炭素結合を含む類似の構造である。
別の実施形態では、連続的ペプチド又はペプチド模倣物配列は、以下の構造を含む：Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６、Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２（配列番号１７）；Ｐ１２、Ｐ１１、Ｐ１０、Ｐ９、Ｐ８、Ｐ７、Ｐ６、Ｐ５、Ｐ４、Ｐ３、Ｐ２、Ｐ１（配列番号１８）；Ｐ１２、Ｐ１１、Ｐ１０、Ｐ６、Ｐ９、Ｐ４、Ｐ７、Ｐ２、Ｐ１（配列番号１９）；又はＰ１、Ｐ２、Ｐ７、Ｐ４、Ｐ９、Ｐ６、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２（配列番号２０）；ここで、Ｐ１は、ｄ−若しくはｌ−Ｃｈａ、ｄ−若しくはｌ−Ｎａｌ（２）、ｄ−若しくはｌ−（Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）、ｄ−若しくはｌ−（Ｐｈｅ−３，４，５Ｆ）、ｄ−若しくはｌ−（Ｐｈｅ−４ＣＦ３）、ｄ−若しくはｌ−Ｂｐａ、ｄ−若しくはｌ−Ｐｈｅ4ＮＯ2、類似の側鎖空間を占めるアミノ酸（例えば、ｄ−若しくはｌ−Ｔｙｒ、ｄ−若しくはｌ−Ｐｈｅ）、又は側鎖に、１個又は２個の芳香族、ピペリジン、ピラジン、ピリミジン、ピペラジン、モルホリン若しくはピリミジン基、又は１個のインドール、ペンタレン、インデン、ナフタレン、ベンゾフラン、ベンゾチオフェン、キノリン、インドリン、クロマン、キノキサリン、又はキナゾリン基を有する任意のアミノ酸であり；Ｐ２は、ｄ−若しくはｌ−Ｃｈａ、ｄ−若しくはｌ−Ｎａｌ（２）、ｄ−若しくはｌ−（Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）、ｄ−若しくはｌ−（Ｐｈｅ−３，４，５Ｆ）、ｄ−若しくはｌ−（Ｐｈｅ−４ＣＦ３）、類似の側鎖空間を占めるアミノ酸（例えば、ｄ−若しくはｌ−Ｔｙｒ、ｄ−若しくはｌ−Ｐｈｅ）、又は側鎖に、１個又は２個の芳香族、ピペリジン、ピラジン、ピリミジン、ピペラジン、モルホリン若しくはピリミジン基、又は１個のインドール、ペンタレン、インデン、ナフタレン、ベンゾフラン、ベンゾチオフェン、キノリン、インドリン、クロマン、キノキサリン、キナゾリン基を有する任意のアミノ酸であり；Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５は、任意のアミノ酸であるか、又はＰ３、Ｐ４、Ｐ５の１つ又は複数は、Ｐ２とＰ６との間の距離が、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５の各々がアミノ酸（ｄ−若しくはｌ−Ｔｒｐは、Ｐ４での一例である）である場合の距離とほぼ同じであるように、単純な炭素鎖であり；Ｐ６は、ｄ−若しくはｌ−Ｂｐａ、ｄ−若しくはｌ−Ｐｈｅ4ＮＯ2、任意のアミノ酸及びｄ−若しくはｌ−Ｔｙｒ（例えば、ｄ−Ｓｅｒ−ｄ−Ｔｙｒ）、任意のアミノ酸及びｄ−若しくはｌ−Ｐｈｅ（例えば、ｄ−Ｓｅｒ−ｄ−Ｐｈｅ）、任意のアミノ酸、又は非存在であり；Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２の少なくとも３つは、塩基性アミノ酸であり、残りは、任意のアミノ酸若しくは非存在である。様々な態様において、単純な炭素鎖を有するアミノ酸は、ｄ−若しくはｌ−アミノウンデカン酸又はｄ−若しくはｌ−８−アミノカプリル酸である。
別の実施形態では、連続的ペプチド又はペプチド模倣物配列は、以下の構造を含む：Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６（配列番号２１）又はＰ６、Ｐ５、Ｐ４、Ｐ３、Ｐ２、Ｐ１（配列番号２２）；ここで、Ｐ１は、ｄ−若しくはｌ−Ｃｈａ、ｄ−若しくはｌ−Ｎａｌ（２）、ｄ−若しくはｌ−（Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）、ｄ−若しくはｌ−（Ｐｈｅ−３，４，５Ｆ）、ｄ−若しくはｌ−（Ｐｈｅ−４ＣＦ３）、ｄ−若しくはｌ−Ｂｐａ、ｄ−若しくはｌ−Ｐｈｅ4ＮＯ2、ｄ−若しくはｌ−Ｔｙｒ、若しくはｄ−若しくはｌ−Ｐｈｅであり；Ｐ２は、ｄ−若しくはｌ−Ｃｈａ、ｄ−若しくはｌ−Ｎａｌ（２）、ｄ−若しくはｌ−（Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）、ｄ−若しくはｌ−（Ｐｈｅ−３，４，５Ｆ）、ｄ−若しくはｌ−（Ｐｈｅ−４ＣＦ３）、ｄ−若しくはｌ−Ｂｐａ、ｄ−若しくはｌ−Ｐｈｅ4ＮＯ2、ｄ−若しくはｌ−Ｔｙｒ、又はｄ−若しくはｌ−Ｐｈｅであり；Ｐ３は、ｄ−若しくはｌ−セリン、ｄ−若しくはｌ−アルギニン、ｄ−若しくはｌ−システイン、ｄ−若しくはｌ−プロリン、又はｄ−若しくはｌ−アスパラギンであり；Ｐ４は、ｄ−若しくはｌ−トリプトファンであり；Ｐ５は、ｄ−若しくはｌ−セリン、ｄ−若しくはｌ−アルギニン、又はｄ−若しくはｌ−アスパラギンであり；或いはＰ３、Ｐ４、Ｐ５は、単一ｄ−若しくはｌ−アミノウンデカン酸又は単一ｄ−若しくはｌ−８−アミノカプリル酸であり；Ｐ６は、ｄ−若しくはｌ−Ｂｐａ、ｄ−若しくはｌ−Ｐｈｅ4ＮＯ2、（ｄ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ）、又は（ｄ−Ｓｅｒ−Ｐｈｅ）である。
また別の実施形態では、連続的ペプチド又はペプチド模倣物配列は、以下の構造を含む：Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６、Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２（配列番号２３）；Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６、Ｐ１２、Ｐ１１、Ｐ１０、Ｐ９、Ｐ８、Ｐ７（配列番号２４）；Ｐ６、Ｐ５、Ｐ４、Ｐ３、Ｐ２、Ｐ１、Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２（配列番号２５）；Ｐ６、Ｐ５、Ｐ４、Ｐ３、Ｐ２、Ｐ１、Ｐ１２、Ｐ１１、Ｐ１０、Ｐ９、Ｐ８、Ｐ７（配列番号２６）；Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６（配列番号２７）；Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２、Ｐ６、Ｐ５、Ｐ４、Ｐ３、Ｐ２、Ｐ１（配列番号２８）；Ｐ１２、Ｐ１１、Ｐ１０、Ｐ９、Ｐ８、Ｐ７、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６（配列番号２９）；Ｐ１２、Ｐ１１、Ｐ１０、Ｐ９、Ｐ８、Ｐ７、Ｐ６、Ｐ５、Ｐ４、Ｐ３、Ｐ２、Ｐ１（配列番号３０）；Ｐ１２、Ｐ１１、Ｐ６、Ｐ９、Ｐ８、Ｐ７、Ｐ２、Ｐ１（配列番号３１）；Ｐ１２、Ｐ１１、Ｐ１０、Ｐ６、Ｐ９、Ｐ４、Ｐ７、Ｐ２、Ｐ１（配列番号３２）；Ｐ１、Ｐ２、Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ６、Ｐ１１、Ｐ１２（配列番号３３）；又はＰ１、Ｐ２、Ｐ７、Ｐ４、Ｐ９、Ｐ６、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２（配列番号３４）；ここで、Ｐ１は、ｄ−若しくはｌ−Ｃｈａ、Ｎａｌ（２）、ｄ−若しくはｌ−（Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）、ｄ−若しくはｌ−（Ｐｈｅ−３，４，５Ｆ）、ｄ−若しくはｌ−（Ｐｈｅ−４ＣＦ３）、ｄ−若しくはｌ−Ｂｐａ、ｄ−若しくはｌ−Ｐｈｅ4ＮＯ2、ｄ−若しくはｌ−Ｔｙｒ、又はｄ−若しくはｌ−Ｐｈｅであり；Ｐ２は、ｄ−若しくはｌ−Ｃｈａ、ｄ−若しくはｌ−Ｎａｌ（２）、ｄ−若しくはｌ−（Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）、ｄ−若しくはｌ−（Ｐｈｅ−３，４，５Ｆ）、ｄ−若しくはｌ−（Ｐｈｅ−４ＣＦ３）、ｄ−若しくはｌ−Ｂｐａ、ｄ−若しくはｌ−Ｐｈｅ4ＮＯ2、ｄ−若しくはｌ−Ｔｙｒ、又はｄ−若しくはｌ−Ｐｈｅであり；Ｐ３は、ｄ−若しくはｌ−セリン、ｄ−若しくはｌ−アルギニン、ｄ−若しくはｌ−システイン、ｄ−若しくはｌ−プロリン、又はｄ−若しくはｌ−アスパラギンであり；Ｐ４は、ｄ−若しくはｌ−トリプトファンであり；Ｐ５は、ｄ−若しくはｌ−セリン、ｄ−若しくはｌ−アルギニン、又はｄ−若しくはｌ−アスパラギンであり；或いはＰ３、Ｐ４、Ｐ５は、単一ｄ−若しくはｌ−アミノウンデカン酸又は単一ｄ−若しくはｌ−８−アミノカプリル酸であり；Ｐ６は、ｄ−若しくはｌ−Ｂｐａ、ｄ−若しくはｌ−Ｐｈｅ4ＮＯ2、（ｄ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ）、又は（ｄ−Ｓｅｒ−Ｐｈｅ）であり；また、Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２の少なくとも３つは、ｄ−若しくはｌ−Ａｒｇ又はｄ−若しくはｌ−Ｌｙｓであり、残りは、任意のアミノ酸若しくは非存在である。
別の実施形態では、連続的ペプチド又はペプチド模倣物配列は、以下の構造を含む：Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６、Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２（配列番号３５）；Ｐ１２、Ｐ１１、Ｐ１０、Ｐ９、Ｐ８、Ｐ７、Ｐ６、Ｐ５、Ｐ４、Ｐ３、Ｐ２、Ｐ１（配列番号３６）；Ｐ１２、Ｐ１１、Ｐ１０、Ｐ６、Ｐ９、Ｐ４、Ｐ７、Ｐ２、Ｐ１（配列番号３７）；又はＰ１、Ｐ２、Ｐ７、Ｐ４、Ｐ９、Ｐ６、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２（配列番号３８）；ここで、Ｐ１は、ｄ−若しくはｌ−Ｃｈａ、又はｄ−若しくはｌ−Ｎａｌ（２）であり；Ｐ２は、ｄ−若しくはｌ−（Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）、ｄ−若しくはｌ−（Ｐｈｅ−３，４，５Ｆ）、ｄ−若しくはｌ−（Ｐｈｅ−４ＣＦ３）であり；また、Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２の少なくとも３つは、ｄ−若しくはｌ−Ａｒｇであり、残りは、任意のアミノ酸若しくは非存在であり；Ｐ３は、ｄ−若しくはｌ−セリンであり；Ｐ４は、ｄ−若しくはｌ−トリプトファンであり；Ｐ５は、ｄ−若しくはｌ−セリン又はｄ−若しくはｌ−アスパラギンであり；Ｐ６は、ｄ−若しくはｌ−Ｂｐａ、ｄ−若しくはｌ−Ｐｈｅ4ＮＯ2、（ｄ−若しくはｌ−Ｓｅｒ−ｄ−若しくはｌ−Ｔｙｒ）、又は（ｄ−若しくはｌ−Ｓｅｒ−Ｐｈｅ）である。
また別の実施形態では、連続的ペプチド又はペプチド模倣物配列は、以下の構造を含む：Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６（配列番号３９）又はＰ６、Ｐ５、Ｐ４、Ｐ３、Ｐ２、Ｐ１（配列番号４０）；ここで、Ｐ１は、ｄ−若しくはｌ−Ｃｈａ、又はｄ−若しくはｌ−Ｎａｌ（２）であり；Ｐ２は、（ｄ−若しくはｌ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）、（ｄ−若しくはｌ−Ｐｈｅ−３，４，５Ｆ）又は（ｄ−若しくはｌ−Ｐｈｅ−４ＣＦ３）であり；Ｐ３は、ｄ−若しくはｌ−Ｓｅｒであり；Ｐ４は、ｄ−若しくはｌ−Ｔｒｐであり；Ｐ５は、ｄ−若しくはｌ−Ｓｅｒであり；Ｐ６は、ｄ−若しくはｌ−Ｂｐａ、又は（ｄ−若しくはｌ−Ｓｅｒ−ｄ−若しくはｌ−Ｔｙｒ）である。
さらに別の実施形態では、連続的ペプチド又はペプチド模倣物配列は、以下の構造を含む：Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６（配列番号４１）；Ｐ６、Ｐ５、Ｐ４、Ｐ３、Ｐ２、Ｐ１（配列番号４２）；Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６、Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２（配列番号４３）；Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６、Ｐ１２、Ｐ１１、Ｐ１０、Ｐ９、Ｐ８、Ｐ７（配列番号４４）；Ｐ６、Ｐ５、Ｐ４、Ｐ３、Ｐ２、Ｐ１、Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２（配列番号４５）；Ｐ６、Ｐ５、Ｐ４、Ｐ３、Ｐ２、Ｐ１、Ｐ１２、Ｐ１１、Ｐ１０、Ｐ９、Ｐ８、Ｐ７（配列番号４６）；Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６（配列番号４７）；Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２、Ｐ６、Ｐ５、Ｐ４、Ｐ３、Ｐ２、Ｐ１（配列番号４８）；Ｐ１２、Ｐ１１、Ｐ１０、Ｐ９、Ｐ８、Ｐ７、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６（配列番号４９）；Ｐ１２、Ｐ１１、Ｐ１０、Ｐ９、Ｐ８、Ｐ７、Ｐ６、Ｐ５、Ｐ４、Ｐ３、Ｐ２、Ｐ１（配列番号５０）；Ｐ１２、Ｐ１１、Ｐ６、Ｐ９、Ｐ８、Ｐ７、Ｐ２、Ｐ１（配列番号５１）；Ｐ１２、Ｐ１１、Ｐ１０、Ｐ６、Ｐ９、Ｐ４、Ｐ７、Ｐ２、Ｐ１（配列番号５２）；Ｐ１、Ｐ２、Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ６、Ｐ１１、Ｐ１２（配列番号５３）；又はＰ１、Ｐ２、Ｐ７、Ｐ４、Ｐ９、Ｐ６、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２（配列番号５４）；ここで、Ｐ１は、ｄ−若しくはｌ−Ｃｈａ、又はｄ−若しくはｌ−Ｎａｌ（２）であり；Ｐ２は、（ｄ−若しくはｌ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）、（ｄ−若しくはｌ−Ｐｈｅ−３，４，５Ｆ）若しくは（ｄ−若しくはｌ−Ｐｈｅ−４ＣＦ３）であり；Ｐ３は、任意のアミノ酸（例えば、ｄ−若しくはｌ−Ｓｅｒ、又はｄ−若しくはｌ−Ｐｒｏ）であり；Ｐ４は、ｄ−若しくはｌ−Ｔｒｐであり；Ｐ５は、任意のアミノ酸（例えば、ｄ−若しくはｌ−Ｓｅｒ）であり；Ｐ７は、ｄ−若しくはｌ−Ａｒｇであり；Ｐ８は、ｄ−若しくはｌ−Ａｒｇであり；Ｐ９は、ｄ−若しくはｌ−Ａｒｇであり；Ｐ１０は、ｄ−若しくはｌ−Ｇｌｎ又はｄ−若しくはｌ−Ａｒｇであり；Ｐ１１は、ｄ−若しくはｌ−Ａｒｇであり；Ｐ１２は、ｄ−若しくはｌ−Ａｒｇであり；Ｐ６は、ｄ−若しくはｌ−Ｂｐａ又は（ｄ−若しくはｌ−Ｓｅｒ−ｄ−若しくはｌ−Ｔｙｒ）である。
また別の実施形態では、連続的ペプチド又はペプチド模倣物配列は、以下の構造を含む：Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６、Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２（配列番号５５）；Ｐ１２、Ｐ１１、Ｐ１０、Ｐ９、Ｐ８、Ｐ７、Ｐ６、Ｐ５、Ｐ４、Ｐ３、Ｐ２、Ｐ１（配列番号５６）；Ｐ１２、Ｐ１１、Ｐ１０、Ｐ６、Ｐ９、Ｐ４、Ｐ７、Ｐ２、Ｐ１（配列番号５７）；又はＰ１、Ｐ２、Ｐ７、Ｐ４、Ｐ９、Ｐ６、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２（配列番号５８）；ここで、Ｐ１は、ｄ−若しくはｌ−Ｃｈａ又はｄ−若しくはｌ−Ｎａｌ（２）であり；Ｐ２は、（ｄ−若しくはｌ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）であり；Ｐ３は、ｄ−若しくはｌ−Ｓｅｒであり；Ｐ４は、ｄ−若しくはｌ−Ｔｒｐであり；Ｐ５は、ｄ−若しくはｌ−Ｓｅｒであり；Ｐ７は、ｄ−若しくはｌ−Ａｒｇであり；Ｐ８は、ｄ−若しくはｌ−Ａｒｇであり；Ｐ９は、ｄ−若しくはｌ−Ａｒｇであり；Ｐ１０は、ｄ−若しくはｌ−Ｇｌｎ又はｄ−若しくはｌ−Ａｒｇであり；Ｐ１１は、ｄ−若しくはｌ−Ａｒｇであり；Ｐ１２は、ｄ−若しくはｌ−Ａｒｇであり；Ｐ６は、ｄ−若しくはｌ−Ｂｐａ又は（ｄ−若しくはｌ−Ｓｅｒ−ｄ−若しくはｌ−Ｔｙｒ）である。
さらにまた別の実施形態では、連続的ペプチド又はペプチド模倣物配列は、以下の構造を含む：（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｇｌｎ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（配列番号９９）；（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｇｌｎ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）（配列番号１００）；（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｇｌｎ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（配列番号５９）；（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｇｌｎ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）（配列番号６０）；（ｄ−Ｃｈａ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｇｌｎ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（配列番号６１）；（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｇｌｎ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｃｈａ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｂｐａ）（配列番号６２）；（ｄ−Ｃｈａ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｇｌｎ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（配列番号６３）；（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｇｌｎ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｃｈａ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｂｐａ）（配列番号６４）；（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｃｈａ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｂｐａ）（配列番号６５）；（ｄ−Ｃｈａ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（配列番号６６）；（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）（配列番号６７）；（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（配列番号６８）；（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）（配列番号６９）；（ｄ−Ｃｈａ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（配列番号７０）；（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）（配列番号７１）；（ｄ−Ｃｈａ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（配列番号７２）；（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）（配列番号７３）；（ｄ−Ｃｈａ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（配列番号７４）；（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）（配列番号７５）；又は（ｄ−Ｃｈａ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（配列番号７６）。
さらに別の実施形態では、連続的ペプチド又はペプチド模倣物配列は、以下の構造を含む：（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｇｌｎ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（配列番号７７）。
本発明のペプチド又はペプチド模倣物は、任意選択で、細胞膜透過を補助するためにポリ−ｌｙｓ及び／又はａｒｇ配列を含む。他のアミノ酸配列（例えば、ＨＩＶ ｔａｔ、細胞表面受容体／タンパク質のリガンドなど）は、膜を透過することができ、Ｇ２抑止ペプチド及びペプチド模倣物の細胞進入を促進するために、他の分子を用いることができる（例えば、リポソーム、ミセル及び他の脂質分子、ウイルス及び他のベクター、エレクトロポレーションなど）ことから、ポリ−ｌｙｓ及び／又はポリ−ａｒｇ配列の含有は、任意選択である。従って、別の実施形態では、ペプチド及びペプチド模倣物は、細胞進入を補助するポリ−ｌｙｓ及び／又はａｒｇ配列を含まない。例えば、２つの特定の実施形態において、細胞膜透過を補助するポリ−ｌｙｓ／ａｒｇ配列を含まない最小配列は、Ｐ６、Ｐ５、Ｐ４、Ｐ３、Ｐ２、Ｐ１、例えば、ｄ−Ｂｐａ、ｄ−Ｓｅｒ、ｄ−Ｔｒｐ、ｄ−Ｓｅｒ、ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６Ｆ、ｄ−Ｃｈａ（配列番号１０１）；及びｄ−Ｔｙｒ、ｄ−Ｓｅｒ、ｄ−Ｐｒｏ、ｄ−Ｔｒｐ、ｄ−Ｓｅｒ、ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６Ｆ、ｄ−Ｃｈａ（配列番号１０２）を含む。２つの別の特定の実施形態では、細胞膜透過を補助するポリ−ｌｙｓ／ａｒｇ配列を含まない最小配列は、例えば、ｄ−Ｂｐａ、ｄ−Ｃｙｓ、ｄ−Ｔｒｐ、ｄ−Ｓｅｒ、ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６Ｆ、ｄ−Ｃｈａ、ｄ−Ｃｙｓ（配列番号１０３）；及びｄ−Ｔｙｒ、ｄ−Ｃｙｓ、ｄ−Ｐｒｏ、ｄ−Ｔｒｐ、ｄ−Ｓｅｒ、ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６Ｆ、ｄ−Ｃｈａ、ｄ−Ｃｙｓ（配列番号１０４）を含み；Ｃｙｓ残基は、任意選択で環状化される。
既述したように、本発明の化合物は、抗細胞増殖活性又はＧ２抑止活性を単独で有する。また、このような本発明の化合物を、核酸損傷を直接又は間接的に引き起こす処置と組み合わせることにより、増大することができる。抗細胞増殖活性は、処置が核酸を損傷するかにかかわらず、細胞増殖を阻害する処置と組み合わせることによって、抗細胞増殖活性を増大させることもできる。従って、本発明は、本発明の化合物（例えば、ペプチド又はペプチド模倣物配列）と核酸損傷剤を含む組成物、並びに本発明の化合物（例えば、ペプチド又はペプチド模倣物配列）と抗細胞増殖剤を含む組成物も提供する。
本明細書で用いる場合、「細胞周期Ｇ２チェックポイントを抑止する」、「細胞周期Ｇ２チェックポイントを破壊する」、「細胞周期Ｇ２チェックポイントを障害する」という用語、及びこれらの文法上の変形は、Ｇ２チェックポイントで細胞周期を停止するように、細胞を阻害することを意味する。細胞周期Ｇ２チェックポイントが抑止された細胞は、細胞がＧ２チェックポイント中にある時間の長さの減少を呈示し、これは、Ｇ２チェックポイントの完全な非存在から、適切な条件下で分単位、時間単位、日単位、週単位、又はそれを超える時間の減少を有するＧ２チェックポイントまで変動し得る。従って、本発明の化合物と接触させた細胞は、その細胞が化合物の非存在下で通常に有するものより、長さが短いＧ２チェックポイント時間を有する。例えば、Ｇ２チェックポイント時間の長さの減少は、特定の時間、例えば、４時間の間、Ｇ２中にある細胞が、本発明の化合物と接触させると、４時間未満、例えば、３．５、３、２．５、２、１時間又は１時間未満の間、Ｇ２中にあることを意味する。
本明細書で用いる場合、「アポトーシス」という用語は、当該技術分野で理解されているように、プログラムされた細胞死、並びに細胞生理学において関連する変化、例えば、核酸の断片化、カスパーゼ活性化などを指す。「カタストロフ（ｃａｔａｓｔｒｏｐｈｅ）」は、有糸分裂プロセス中の誤りから起こる細胞死を意味する。カタストロフにおいて、アポトーシスに特有に存在する特徴、例えば、カスパーゼ活性化、染色体濃縮などは少ない。
本明細書で用いる場合、「ペプチド」、「ポリペプチド」及び「タンパク質」という用語は、置き換え可能に用いられ、アミド結合又は非アミド同等物により共有結合された２つ以上のアミノ酸を指す。本発明のペプチドは、どんな長さであってもよい。例えば、ペプチドは、約５〜１００個若しくはそれを超える残基、例えば、５〜１２、１２〜１５、１５〜１８、１８〜２５、２５〜５０、５０〜７５、７５〜１００個又はそれを超える長さを有してよい。本発明のペプチドは、ｌ−及びｄ−異性体、並びにｌ−及びｄ−異性体の組み合わせを含む。ペプチドは、タンパク質の翻訳後プロセシング、例えば、環状化（例えば、ジスルフィド若しくはアミド結合）、リン酸化、グリコシル化、カルボキシル化、ユビキチン化、ミリスチル化、又は脂質化に典型的に関連する修飾を含み得る。
本明細書で開示されるペプチドは、模倣物が１つ又は複数の機能又は活性を有する限りにおいて、アミノ酸構造及び機能類似体、例えば、合成若しくは非天然アミノ酸又はアミノ酸類似体を有するペプチド模倣物を有する化合物をさらに包含する。従って、本発明の化合物は、「模倣」形態及び「ペプチド模倣」形態を含む。
本明細書で用いる場合、「模倣物」及び「ペプチド模倣物」という用語は、本発明のペプチドと実質的に同じ構造的及び／又は機能的特徴を有する合成化学化合物を指す。模倣物は、合成の非天然アミノ酸類似体から完全に構成されていてもよく、又は１つ又は複数の天然ペプチドアミノ酸と、１つ又は複数の非天然アミノ酸類似体を含むキメラ分子であってもよい。模倣物はまた、置換が模倣物の活性を破壊しない限りにおいて、いくつの天然アミノ酸保存的置換を含んでもよい。保存的変異体である本発明のポリペプチドに関して、常用の試験を用いて、模倣物が、必要な活性を有するかどうか、例えば、検出可能な細胞周期Ｇ２チェックポイント抑止活性を有するかを決定することができる。従って、被験者に投与するか、又は細胞と接触させると、Ｇ２細胞周期チェックポイントを検出可能に破壊する模倣物は、Ｇ２チェックポイント抑止活性を有する。
ペプチド模倣組成物は、非天然構造成分の任意の組み合わせを含んでもよく、これらの成分は、典型的に、次の３つの構造基に由来する：ａ）天然アミド結合（「ペプチド結合」）連結以外の残基連結基；ｂ）天然に存在するアミノ酸残基に代わる非天然残基；又はｃ）二次構造模倣を誘導する、すなわち、二次構造、例えば、βターン、γターン、βシート、αへリックスコンフォメーションなどを誘導若しくは安定化する残基。例えば、ポリペプチドは、１つ又は複数の残基が、アミド結合以外の化学手段により連結されている場合、模倣物として特性決定することができる。個別のペプチド模倣残基をアミド結合、非天然及び非アミド化学結合、他の化学結合又はカップリング手段、例えば、グルタルアルデヒド、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、二官能価マレイミド、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）若しくはＮ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）により連結することができる。アミド結合に代わる連結基として、例えば、ケトメチレン（例えば、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−に代わり、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ2−）、アミノメチレン（ＣＨ2−ＮＨ）、エチレン、オレフィン（ＣＨ＝ＣＨ）、エーテル（ＣＨ2−Ｏ）、チオエーテル（ＣＨ2−Ｓ）、テトラゾール（ＣＮ4−）、チアゾール、レトロアミド、チオアミド、又はエステルが挙げられる（例えば、Ｓｐａｔｏｌａ（１９８３）、Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄｓ，Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｖｏｌ．７，ｐｐ ２６７−３５７，“Ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｄ Ｂａｃｋｂｏｎｅ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ，”Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｃｋｅｒ，ＮＹを参照）。
前述したように、ペプチドは、天然に存在するアミノ酸残基の代わりに１つ又は複数の非天然残基を含有することにより、模倣物として特徴付けることができる。非天然残基は当該技術分野で公知である。天然アミノ酸残基の模倣物として有用な非天然残基の具体的な非限定的例は、芳香族アミノ酸の模倣物であり、例えば、Ｄ−又はＬ−ナフィルアラニン；Ｄ−又はＬ−フェニルグリシン；Ｄ−又はＬ−２チエニルアラニン；Ｄ−又はＬ−１、−２、３−、若しくは４−ピレネイルアラニン；Ｄ−又はＬ−３チエネイルアラニン；Ｄ−又はＬ−（２−ピリジニル）−アラニン；Ｄ−又はＬ−（３−ピリジニル）−アラニン；Ｄ−又はＬ−（２−ピラジニル）−アラニン；Ｄ−又はＬ−（４−イソプロピル）−フェニルグリシン；Ｄ−（トリフルオロメチル）−フェニルグリシン；Ｄ−（トリフルオロメチル）−フェニルアラニン；Ｄ−ｐ−フルオロ−フェニルアラニン；Ｄ−又はＬ−ｐ−ビフェニルフェニルアラニン；Ｋ−又はＬ−ｐ−メトキシ−ビフェニルフェニルアラニン；Ｄ−又はＬ−２−インドール（アルキル）アラニン；及びＤ−又はＬ−アルキルアイニン（ａｌｋｙｌａｉｎｉｎｅｓ）が挙げられ、ここで、アルキルは、置換又は非置換メチル、エチル、プロピル、ヘキシル、ブチル、ペンチル、イソプロピル、イソ−ブチル、ｓｅｃ−イソチル、イソ−ペンチル、又は非酸性アミノ酸であってよい。天然芳香環の代わりに用いることができる非天然アミノ酸の芳香環として、例えば、チアゾリル、チオフェニル、ピラゾリル、ベンズイミダゾリル、ナフチル、フラニル、ピロリル、及びピリジル芳香環が挙げられる。
酸性アミノ酸の模倣物は、陰電荷を維持しながら、非カルボキシレートアミノ酸；（ホスホノ）アラニン；及び硫酸化トレオニンでの置換によって作製することができる。カルボキシル側鎖基（例えば、アスパルチル又はグルタミル）はまた、例えば、１−シクロヘキシル−３（２−モルホリニル−（４−エチル）カルボジイミド又は１−エチル−３（４−アゾニア−４，４−ジメトールペンチル）カルボジイミドなどのカルボジイミド（Ｒ’−Ｎ−Ｃ−Ｎ−Ｒ’）との反応により選択的に修飾することもできる。また、アスパルチル又はグルタミル基は、アンモニウムイオンとの反応により、アルパラギニル及びグルタミニル基に変換することもできる。
塩基性アミノ酸の模倣物は、例えば、リシン及びアルギニンに加えて、アミノ酸オルチニン、シトルリン、又は（グアニジノ）−酢酸、又は（グアニジノ）アルキル−酢酸での置換により作製することができ、ここで、アルキルは、置換又は非置換メチル、エチル、プロピル、ヘキシル、ブチル、ペンチル、イソプロピル、イソ−ブチル、ｓｅｃ−イソチル、イソ−ペンチル、又は非酸性アミノ酸であってよい。アスパラギン又はグルタミンについては、ニトリル誘導体（例えば、ＣＯＯＨの代わりにＣＮ部分を含む）を置換することができる。アスパラギニル及びグルタミニル残基を脱アミノ化して、対応するアスパルチル又はグルタミル残基にすることができる。
アルギニン模倣物は、任意選択でアルカリ条件下にて、例えば、フェニルグリオキサール、２，３−ブタンジオン、１，２−シクロヘキサンジオン、又はニンヒドリンなどの１つ又は複数の試薬とアルギニルを反応させることによって作製することができる。チロシン残基模倣物は、芳香族ジアソニウム化合物又はテトラニトロメタンとチロシルを反応させることによって作製することができる。Ｎ−アセチルイミジゾール及びテトラニトロメタンを用いて、それぞれ、Ｏ−アセチルチロシル種及び３−ニトロ誘導体を形成することができる。
リシン模倣物は、コハク酸又は他のカルボン酸無水物とリシニルを反応させることによって作製することができる（また、アミノ末端残基を改変することができる）。リシン及びその他のαアミノ含有残基模倣物はまた、ピコリンイミド酸メチル、ピリドキサールリン酸、ピリドキサール、クロロボロヒドリド（ｃｈｌｏｒｏｂｏｒｏｈｙｄｒｉｄｅ）、トリニトロベンゼンスルホン酸、Ｏ−メチルイソ尿素、２，４，ペンタンジオンなどのイミドエステルとの反応、及びグリオキシル酸とのトランスアミダーゼ触媒反応によって作製することもできる。
メチオニン模倣物は、メチオニンスルホキシドとの反応によって作製することができる。プロリン模倣物として、例えば、ピペコリン酸、チアゾリジンカルボン酸、３−又は４−ヒドロキシプロリン、デヒドロプロリン、３−又は４−メチルプロリン、及び３，３−ジメチルプロリンが挙げられる。ヒスチジン模倣物は、ジエチルプロカーボネート（ｄｉｅｔｈｙｌｐｒｏｃａｒｂｏｎａｔｅ）又はパラ−ブロモフェナシルブロミドとヒスチジルを反応させることによって作製することができる。その他の模倣物としては、例えば、プロリン及びリシンのヒドロキシル化；セリル若しくはトレオニル残基のヒドロキシル基のリン酸化；リシン、アルギニン及びヒスチジンのαアミノ基のメチル化；Ｎ末端アミンのアセチル化；主鎖アミド残基のメチル化若しくはＮメチルアミノ酸による置換；又はＣ末端カルボキシル基のアミド化により作製されるものを含む。
また、反対のキラリティーのアミノ酸（若しくはペプチド模倣物残基）により１つ又は複数の残基を置換することもできる。従って、Ｌ−立体配置（これはまた、化学実体の構造に応じて、Ｒ若しくはＳとも呼ぶこともできる）に天然に存在する任意のアミノ酸を、同じアミノ酸若しくは模倣物であるが、反対のキラリティーのもの（Ｄアミノ酸と呼ばれるが、さらに、Ｒ若しくはＳ型と呼ばれることもある）で置換することができる。
本発明のペプチド及びペプチド模倣物はさらに、本明細書に記載した配列の修飾形態を含むが、その場合、修飾形態は、非修飾又は標準ペプチド若しくはペプチド模倣物の機能の少なくともその一部を保持するものとする。例えば、修飾されたペプチド若しくはペプチド模倣物は、細胞増殖阻害又はＧ２抑止活性の少なくとも一部を保持するが、標準ペプチド若しくはペプチド模倣物に対して、増大若しくは低減した細胞増殖阻害又はＧ２抑止活性を有し得る。
修飾されたペプチド及びペプチド模倣物は、別の残基で置換された１つ又は複数のアミノ酸残基を有するか、その配列に１つ又は複数のアミノ酸残基を付加してもよく、又はその配列から１つ又は複数のアミノ酸残基を欠失させてもよい。一実施形態では、修飾ペプチド又はペプチド模倣物は、１つ又は複数のアミノ酸置換、付加若しくは欠失（例えば、１〜３、３〜５、５〜１０個若しくはそれを超える）を有する。一態様では、置換は、側鎖が、標準アミノ酸又は模倣物（置換されたアミノ酸又は模倣物）と類似する空間を占めるアミノ酸又は模倣物によって行う。また別の態様では、置換は、ヒト残基と構造的に類似した非ヒトアミノ酸によって行う。具体的態様では、置換は、保存的アミノ酸置換である。
本明細書で用いる場合、「類似の空間」という用語は、標準部分とサイズが類似した３次元空間を占める化学的部分を意味する。典型的に、類似の空間を占める部分は、標準部分とサイズが類似している。「類似の側鎖空間を占める」アミノ酸又は模倣物は、標準アミノ酸又は模倣物とサイズが類似した３次元空間を占める側鎖を有する。ｄ−（Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）、ｌ−（Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）、ｄ−（Ｐｈｅ−３，４，５Ｆ）、ｌ−（Ｐｈｅ−３，４，５Ｆ）、ｄ−（Ｐｈｅ−４ＣＦ３）又はｌ−（Ｐｈｅ−４ＣＦ３）の具体的な例は、（ｌ若しくはｄ−Ｐｈｅ−２Ｒ１，３Ｒ２，４Ｒ３，５Ｒ４，６Ｒ５）であり、ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５は、塩化物、臭化物、フッ化物、ヨウ化物、水素、酸化水素であるか、又は非存在であってもよい。低分子、例えば、約１オングストロームのサイズを有するフッ化物の場合、類似の空間は、部分が存在しなくてもよい。
「保存的置換」という用語は、生物学的、化学的又は構造的に類似する残基による１個のアミノ酸の置換を意味する。生物学的に類似するとは、置換が、生物学的活性、例えば、抗細胞増殖又はＧ２抑止活性と適合性であることを意味する。構造的に類似するとは、アミノ酸が、長さが類似する側鎖を有する（例えば、アラニン、グリシン及びセリンなど）か、又は類似のサイズを有することを意味する。化学的類似性は、残基が、同じ電荷を有するか、又はいずれも親水性若しくは疎水性であることを意味する。具体的な例として、イソロイシン、バリン、ロイシン若しくはメチオニンなどの１個の疎水性残基の置換、又は１個の極性残基による別の残基の置換、例えば、アルギニンによるリシンの、グルタミン酸によるアスパラギン酸の、グルタミンによるアスパラギンの、セリンによるトレオニンの置換などが挙げられる。
従って、本発明のペプチド及びペプチド模倣物は、表１に記載するペプチド及びペプチド模倣物配列と同一ではない配列を有するペプチド及びペプチド模倣物を包含する。一実施形態では、ペプチド及びペプチド模倣物は、表１に記載する配列と５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又はそれを超える同一性を有する配列を有する。一態様では、同一性は、配列の規定区間、例えば、アミノ又はカルボキシ末端３〜５残基に及ぶ。
ペプチド及びペプチド模倣物を含む本発明の化合物は、当該技術分野で公知の任意の方法を用いて生成及び単離することができる。ペプチドは、当該技術分野で公知の化学的方法を用いて、全部又は一部を合成することができる（例えば、Ｃａｒｕｔｈｅｒｓ（１９８０）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．Ｓｙｍｐ．Ｓｅｒ．２１５−２２３；Ｈｏｒｎ（１９８０）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．Ｓｙｍｐ．Ｓｅｒ．２２５−２３２；及びＢａｎｇａ，Ａ．Ｋ．，Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ，Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ａｎｄ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ（１９９５）Ｔｅｃｈｎｏｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｌａｎｃａｓｔｅｒ，ＰＡを参照のこと）。様々な固相技術を用いて、ペプチド合成を実施することができ（例えば、Ｒｏｂｅｒｇｅ（１９９５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６９：２０２；Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ（１９９７）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．２８９：３−１３を参照のこと）、また、例えば、ＡＢＩ ４３１Ａ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を製造者の指示に従って使用して、自動化合成を達成することができる。
個々の合成残基及びポリペプチドを組み込んだ模倣物は、当該技術分野で公知の様々な手順及び方法を用いて合成することができる（例えば、Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｅｓ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｖｅ Ｖｏｌｕｍｅｓ，Ｇｉｌｍａｎ，ｅｔ ａｌ．（Ｅｄｓ）Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹを参照のこと）。また、ペプチド及びペプチド模倣物は、コンビナトリアル方法を用いて合成することもできる。ペプチド及びペプチド模倣物ライブラリーを作製する技術は、公知であり、例えば、マルチピン（ｍｕｌｔｉｐｉｎ）、ティーバッグ（ｔｅａ ｂａｇ）、及びスプリットカップルミックス法（ｓｐｌｉｔ−ｃｏｕｐｌｅ−ｍｉｘ）技術（例えば、ａｌ−Ｏｂｅｉｄｉ（１９９８）Ｍｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．９：２０５−２２３；Ｈｒｕｂｙ（１９９７）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１：１１４−１１９；Ｏｓｔｅｒｇａａｒｄ（１９９７）Ｍｏｌ．Ｄｉｖｅｒｓ．３：１７−２７；並びにＯｓｔｒｅｓｈ（１９９６）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．２６７：２２０−２３４を参照のこと）が挙げられる。修飾ペプチドは、化学修飾方法（例えば、Ｂｅｌｏｕｓｏｖ（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３４４０−３４４４；Ｆｒｅｎｋｅｌ（１９９５）Ｆｒｅｅ Ｒａｄｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．１９：３７３−３８０；及びＢｌｏｍｍｅｒｓ（１９９４）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３３：７８８６−７８９６を参照のこと）によってさらに生成することができる。
ペプチドはまた、より免疫原性のペプチドを生成するために、組換えにより合成されたペプチドをより容易に単離するために、又は抗体若しくは抗体発現Ｂ細胞を同定及び単離するために、１つ又は複数の別のドメインが連結した融合タンパク質として合成及び発現させることもできる。検出及び精製を促進するドメインとしては、例えば、固定化金属上での精製を可能にするポリヒスチジン配列（ｐｏｌｙ−ｈｉｓｔｉｄｉｎｅ ｔｒａｃｔ）及びヒスチジン−トリプトファンモジュールなどの金属キレートペプチド；固定化免疫グロブリン上での精製を可能にするプロテインＡドメイン；及びＦＬＡＧＳ伸長／アフィニティ精製システム（Ｉｍｍｕｎｅｘ Ｃｏｒｐ，Ｓｅａｔｔｌｅ ＷＡ）で使用されるドメインが挙げられる。精製ドメインとペプチドとの間にＸａ因子又はエンテロキナーゼ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ ＣＡ）などの切断可能なリンカー配列を導入すると、ペプチド精製を容易にすることができる。例えば、発現ベクターは、６つのヒスチジン残基、続いてチオレドキシン及びエンテロキナーゼ切断部位に連結されたペプチドコード化核酸配列を含んでもよい（例えば、Ｗｉｌｌｉａｍｓ（１９９５）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３４：１７８７−１７９７；Ｄｏｂｅｌｉ（１９９８）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒ．Ｐｕｒｉｆ．１２：４０４−１４を参照のこと）。ヒスチジン残基は、融合タンパク質の検出及び精製を容易にし、エンテロキナーゼ切断部位は残りの融合タンパク質からペプチドを精製するための手段を提供する。融合タンパク質をコード化するベクター及び融合タンパク質の適用に関する技術は、当該技術分野において公知である（例えば、Ｋｒｏｌｌ（１９９３）ＤＮＡ Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１２：４４１−５３を参照のこと）。
本発明はさらに、本発明のペプチドをコード化する核酸も提供する。特定の実施形態において、核酸は、約８〜１２、１２〜１５、１５〜１８、１５〜２０、１８〜２５、２０〜２５、２５〜３５、２５〜５０、若しくは５０〜１００個のアミノ酸又はそれを超える長さを有する本発明のペプチド配列をコード化する。
「核酸」及び「ポリヌクレオチド」という用語は、本明細書において置き換え可能に用いられ、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）及びリボ核酸（ＲＮＡ）などの全形態の核酸を指す。核酸は、二本鎖、一本鎖、若しくは三重らせん、線状又は環状であってよい。核酸としては、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、及びアンチセンスがある。ＲＮＡ核酸は、スプライシング若しくは非スプライシングｍＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡ又はアンチセンス（例えば、ＲＮＡｉ）であってよい。本発明の核酸としては、天然、合成、並びにヌクレオチド類似体及び誘導体がある。このような改変又は修飾ポリヌクレオチドは、例えば、ヌクレアーゼ耐性を賦与する類似体を含む。また、核酸の長さは、例示したペプチド配列より短くてもよい。例えば、ペプチド配列のいずれかのサブ配列は、抗増殖又はＧ２抑止活性を有するペプチドをコード化することができる。
様々な公知の標準的クローニング及び化学合成方法のいずれかを用いて、核酸を生成することができ、また、部位指定突然変異誘発又は当業者には公知の他の組換え技術によって意図的に改変することもできる。ポリヌクレオチドの純度は、配列決定、ゲル電気泳動などにより決定することができる。
本発明の核酸を核酸構築物に挿入してもよく、その構築物において、核酸の発現は、「発現制御エレメント」により影響又は調節され、この組み合わせは、「発現カセット」と呼ばれる。「発現制御エレメント」という用語は、これが作動可能に連結された核酸配列の発現を制御する又はその発現に影響を与える１つ又は複数の配列エレメントを意味する。核酸配列に作動可能に連結された発現制御エレメントは、核酸配列の転写、並びに必要に応じてその翻訳を制御する。
「作動可能に連結された」という用語は、このように表現される成分が、その意図する様式で機能するのを可能にする関係にある機能性並置を指す。典型的に、発現制御エレメントは、遺伝子の５’又は３’末端に並置されるが、これはまた、イントロンであってもよい。プロモータは、一般にコード配列の５’側に位置する。「プロモータ」は、転写を指令するのに十分な最小配列エレメントを意味する。
発現制御エレメントとしては、プロモータ、エンハンサー、転写ターミネータ、遺伝子サイレンサー、タンパク質コード化遺伝子の前の開始コドン（例えば、ＡＴＧ）が挙げられる。発現制御エレメントは、構成性転写、誘導性転写（すなわち、活性化のために外部シグナルを必要とする）を活性化するか、又は転写を抑制する（すなわち、シグナルが転写をオフにし；シグナルを除去すると、転写が活性化される）。発現カセットは、遺伝子発現を特定の細胞型又は組織について制御可能にするのに十分な制御エレメント（すなわち、組織特異的制御エレメント）を含んでもよい。
宿主細胞への増殖、それに続く遺伝子操作のために、本発明の核酸をプラスミドに挿入してもよい。プラスミドは、宿主細胞中で安定に増殖させることができる核酸であり；プラスミドは、任意選択で、宿主細胞においてペプチドをコード化する核酸の発現を駆動するために、発現制御エレメントを含む。「ベクター」という用語は、本明細書ではプラスミドと同義に用いられ、宿主細胞における発現のための発現制御エレメントも含み得る。プラスミド及びベクターは、一般に、細胞及びプロモータにおける増殖のための少なくとも１つの複製起点を含む。プラスミド及びベクターは、例えば、ペプチドコード化核酸の遺伝子操作、ペプチドの生成、及び宿主細胞又は全生物におけるペプチドの発現に有用である。
従って、ペプチドは、細菌系では、Ｔ７などの構成性プロモータ、又は誘導性プロモータ（例えば、バクテリオファージλ、ｐｌａｃ、ｐｔｒｐ、ｐｔａｃ（ｐｔｒｐ−ｌａｃハイブリッドプロモータ））を用いて；酵母系では、構成性プロモータ（例えば、ＡＤＨ若しくはＬＥＵ２など）、又はＧＡＬなどの誘導性プロモータを用いて（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２，Ｃｈ．１３，ｅｄ．，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈ．Ａｓｓｏｃ．＆Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，１９８８）；Ｇｒａｎｔ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１５３：５１６（１９８７），ｅｄｓ．Ｗｕ＆Ｇｒｏｓｓｍａｎ；Ｂｉｔｔｅｒ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１５２：６７３（１９８７），ｅｄｓ．Ｂｅｒｇｅｒ＆Ｋｉｍｍｅｌ，Ａｃａｄ．Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．；及びＳｔｒａｔｈｅｒｎ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｙｅａｓｔ Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ（１９８２）ｅｄｓ．Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｖｏｌｓ．Ｉ ａｎｄ ＩＩ；Ｒ．Ｒｏｔｈｓｔｅｉｎ（ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｖｏｌ．１１，Ｃｈ．３，ｅｄ．Ｄ．Ｍ．Ｇｌｏｖｅｒ，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，Ｗａｓｈ．，Ｄ．Ｃ．，１９８６）を参照のこと）；昆虫細胞系では、構成性若しくは誘導性プロモータ（例えば、エクジソンなど）を用いて；哺乳動物細胞系では、構成性プロモータ（例えば、ＳＶ４０、ＲＳＶ）又は哺乳動物細胞のゲノム由来の誘導性プロモータ（例えば、メタロチオネインＩＩＡプロモータ、熱ショックプロモータ）又は哺乳動物ウイルス由来の誘導性プロモータ（例えば、アデノウイルス後期プロモータ若しくは誘導性マウス乳腺腫瘍ウイルスの長い末端反復）を用いて、発現させることができる。ペプチド発現系はさらに、ｉｎ ｖｉｖｏでの使用のために設計されたベクターをさらに含み、そのようなベクターとして、アデノウイルスベクター（米国特許第５，７００，４７０号明細書及び同第５，７３１，１７２号明細書）、アデノ関連ベクター（米国特許第５，６０４，０９０号明細書）、単純ヘルペスウイルスベクター（米国特許第５，５０１，９７９号明細書）及びレトロウイルスベクター（米国特許第５，６２４，８２０号明細書、同第５，６９３，５０８号明細書及び同第５，６７４，７０３号明細書、並びにＷＩＰＯ公報国際公開第９２／０５２６６号パンフレット及び同第９２／１４８２９号パンフレット）が挙げられる。ウシパピローマウイルス（ＢＰＶ）もまた遺伝子療法で使用されている（米国特許第５，７１９，０５４号明細書）。このような遺伝子療法ベクターとしてはまた、ＣＭＶベースのベクター（米国特許第５，５６１，０６３号明細書）もある。
従って、本発明は、宿主細胞に挿入される本発明のペプチドのコード化核酸も提供する。一実施形態では、宿主細胞は、原核細胞である。別の実施形態では、宿主細胞は、真核細胞である。様々な態様において、真核細胞は、酵母若しくは哺乳動物（例えば、ヒト、霊長類など）細胞である。
本明細書で用いる場合、「宿主細胞」は、核酸が導入される細胞であり、これは、増殖することができ、転写、又はコード化されたペプチドを発現することができる。この用語はまた、対象とする宿主細胞の任意の子孫を含む。
宿主細胞として、限定はしないが、細菌又は酵母などの微生物；並びに植物、昆虫及び哺乳動物細胞が挙げられる。例えば、組換えバクテリオファージ核酸、プラスミド核酸若しくはコスミド核酸発現ベクターで形質転換した細菌；組換え酵母発現ベクターで形質転換した酵母；組換えウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイクウイルス、ＣａＭＶ；タバコモザイクウイルス、ＴＭＶ）に感染させた、若しくは組換えプラスミド発現ベクター（例えば、Ｔｉプラスミド）で形質転換させた植物細胞系；組換え発現ベクター（例えば、バキュロウイルス）に感染させた昆虫細胞系；又は組換えウイルス発現ベクター（例えば、レトロウイルス、アデノウイルス、ワクシニアウイルス）に感染させた動物細胞系、若しくは安定な発現のために操作された形質転換動物細胞系が提供される。
発現ベクターはまた、選択圧に対する耐性を付与する選択マーカ又は識別マーカ（例えば、βガラクトシダーゼ）をコード化する核酸を含有してもよく、これによって、ベクターを有する細胞を同定し、増殖及び拡大することができる。或いは、選択マーカは、第２ベクター上にあってもよく、ベクターを、本発明のポリヌクレオチドを含有する第１ベクターと一緒に、宿主細胞に共トランスフェクトする。いくつかの選択系を用いることができ、このような系として、限定はしないが、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ遺伝子（Ｗｉｇｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ １１：２２３（１９７７））、ヒポキサンチン−グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ遺伝子（Ｓｚｙｂａｌｓｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ４８：２０２６（１９６２））、及びアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｌｏｗｙ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ ２２：８１７（１９８０））遺伝子があり、これらは、それぞれ、ｔｋ−、ｈｇｐｒｔ−又はａｐｒｔ−細胞に使用することができる。抗代謝物耐性は、メトトレキセートに対する耐性を付与するｄｈｆｒ（Ｏ’Ｈａｒｅ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７８：１５２７（１９８１））；ミコフェノール酸に対する耐性を付与するｇｐｔ遺伝子（Ｍｕｌｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７８：２０７２（１９８１））；アミノグリコシドＧ−４１８に対する耐性を付与するネオマイシン遺伝子（Ｃｏｌｂｅｒｒｅ−Ｇａｒａｐｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５０：１（１９８１））；及びヒグロマイシンに対する耐性を付与するヒグロマイシン遺伝子（Ｓａｎｔｅｒｒｅ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ ３０：１４７（１９８４））についての選択基準として用いることができる。別の選択遺伝子として、以下のものが挙げられる：細胞が、トリプトファンの代わりにインドールを使用できるようにするｔｒｐＢ；細胞が、ヒスチジンの代わりにヒスチノールを使用できるようにするｈｉｓＤ（Ｈａｒｔｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：８０４７（１９８８））；及びオルチニンデカルボキシラーゼ阻害剤である２−（ジフルオロメチル）−ＤＬ−オルニチン、ＤＦＭＯに対する耐性を付与するＯＤＣ（オルチニンデカルボキシラーゼ）（ＭｃＣｏｎｌｏｇｕｅ（１９８７）（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ））。
本明細書で用いる場合、「核酸損傷処置」及び「核酸損傷剤」という用語は、核酸（例えば、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ又はｒＲＮＡ）を直接若しくは間接的に損傷させる任意の処置レジメンを意味する。このような薬剤の特定の例として、アルキル化剤、ニトロソウレア、抗代謝物、植物アルカロイド、植物エキス及び放射性同位体が挙げられる。また、薬剤の具体的な例としては、核酸損傷薬、例えば、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、カペシタビン、Ｓ−１（テガフール（Ｔｅｇａｆｕｒ）、５−クロロ−２，４−ジヒドロキシピリジン及びオキソニン酸）、５−エチニルウラシル、アラビノシルシトシン（ａｒａ−Ｃ）、５−アザシチジン（５−ＡＣ）、２’，２’−ジフルオロ−２’−デオキシシチジン（ｄＦｄＣ）、プリン抗代謝物（メルカプトプリン、アザチオプリン、チオグアニン）、ゲムシタビン塩酸塩（Ｇｅｍｚａｒ）、ペントスタチン、アロプリノール、２−フルオロ−アラビノシル−アデニン（２Ｆ−ａｒａ−Ａ）、ヒドロキシ尿素、サルファマスタード（ビスクロロエチルスルフィド）、メクロレタミン、メルファラン、クロラムブシル、シクロホスファミド、イフォスファミド、チオテパ、ＡＺＱ、マイトマイシンＣ、ジアンヒドロガラクチトール、ジブロモダシトール（ｄｉｂｒｏｍｏｄｕｃｉｔｏｌ）、スルホン酸アルキル（ブスルファン）、ニトロソ尿素（ＢＣＮＵ、ＣＣＮＵ、４−メチルＣＣＮＵ、又はＡＣＮＵ）、プロカルバジン、デカルバジン、レベッカマイシン、アントラサイクリン、例えば、ドキソルビシン（アドリアマイシン：ＡＤＲ）、ダウノルビシン（Ｃｅｒｕｂｉｃｉｎｅ）、イダルビシン（Ｉｄａｍｙｃｉｎ）及びエピルビシン（Ｅｌｌｅｎｃｅ）、アントラサイクリン類似体、例えば、ミトキサントロン、アクチニマイシンＤ、非インターカレートトポイソメラーゼ阻害剤、例えば、エピポドフィロトキシン（エトポシド＝ＶＰ１６、テニポシド＝ＶＭ−２６）、ポドフィロトキシン、ブレオマイシン（Ｂｌｅｏ）、ペプレオマイシン、核酸付加物を形成する化合物（白金誘導体（例えば、シスプラチン（ＣＤＤＰ）、シスプラチンのトランス類似体、カルボプラチン、イプロプラチン、テトラプラチン、及びオキサリプラチンを含む））、カンプトテシン、トポテカン、イリノテカン（ＣＰＴ−１１）、並びにＳＮ−３８が挙げられる。核酸損傷処置の具体的な例としては、放射線照射（例えば、紫外線（ＵＶ）、赤外線（ＩＲ）、又はα線、β線、若しくはγ線の照射）及び環境的ショック（例えば、ハイパーサーミア）が挙げられる。
本明細書中で用いる場合、「抗増殖処置」及び「抗増殖剤」という用語は、その処置又は薬剤が核酸に損傷を与えるかどうかにかかわらず、細胞、ウイルス、細菌、又はその他の単細胞生物若しくは多細胞生物の増殖を直接又は間接的に阻害するあらゆる処置レジメンを意味する。抗増殖剤の特定の例は、細胞増殖又はウイルス増殖若しくは複製を阻害する抗腫瘍薬及び抗ウイルス薬である。具体的な例としては、中でも、シクロホスファミド、アザチオプリン、シクロスポリンＡ、プレドニソロン、メルファラン、クロラムブシル、メクロレタミン、ブスルファン、メトトレキセート、６−メルカプトプリン、チオグアニン、シトシンアラビノシド、タキソール、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ドキソルビシン、アクチノマイシンＤ、ミトラマイシン、カルムスチン、ロムスチン、セムスチン、ストレプトゾトシン、ヒドロキシ尿素、シスプラチン、ミトタン、プロカルバジン、ダカルバジン、及びジブロモマンニトールが挙げられる。ヌクレオシド及びヌクレオチド類似体（例えば、ＡＺＴ又は５−ＡＺＣ）などの、核酸複製の誤りを引き起こすか、又は核酸複製を阻害する抗増殖剤。
本発明のペプチド及びペプチド模倣物はまた、微小管安定化剤又は微小管不安定化剤、例えば、ビンカアルカロイド（ビンブラスチン＝ＶＬＢ、ビンクリスチン＝ＶＣＲ、ビンオレルビン＝ＶＲＬＢ、ビンフルニン＝ＶＦＬ）、並びにタキサン（パクリタキセル及びドセタキセル＝タキソテール（ｔａｘｏｔａｒｅ））の抗細胞増殖活性を増強することができる。従って、このような薬剤を本発明の組成物にさらに含有させて、本発明の方法に使用してもよい。
本発明の化合物を用いて処置される細胞は、その増殖がｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｅｘ ｖｉｖｏ、又はｉｎ ｖｉｖｏで阻害又は阻止されることが要望されるあらゆる細胞を含む。特定の標的細胞は、正常細胞よりも短い細胞周期Ｇ１チェックポイント時間を呈示するか、又はその細胞が核酸修復を完了するのに十分な時間が経過する前にＧ１チェックポイントを出るように障害された細胞周期Ｇ１チェックポイントを有する。従って、候補細胞としては、細胞が正常又は異常のいずれかにかかわらず、急速に増殖する細胞が挙げられる。具体的な例は、良性細胞又は腫瘍性細胞、転移性細胞又は非転移性細胞である。さらに別の候補細胞は、それらの増殖速度又は細胞がＧ１期に留まる時間の長さを測定することによって同定することができる。候補細胞はまた、試験細胞と本発明の化合物を、単独で、又は核酸損傷処置と組み合わせて接触させ、接触させた細胞が、増殖の低減又は細胞死若しくはアポトーシス／カタストロフの増大を示すかどうかを決定することによって同定することもできる。
従って、本発明の化合物は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｅｘ ｖｉｖｏ及びｉｎ ｖｉｖｏで細胞増殖を阻害するのに有用である。従って、異常であるか、又は望ましくない、若しくは不要な細胞増殖又は細胞生存、或いは異常又は欠損した細胞分化により特徴付けられる障害又は生理学的状態を有するか又はそのリスクがある被験者は、本発明の化合物単独で、又は核酸損傷を直接的若しくは間接的に引き起こす処置若しくは抗増殖処置と組み合わせて治療することができる。
このように、本発明に従って、細胞増殖を阻害する方法、核酸損傷剤又は核酸損傷処置に対する細胞の感受性を増大する方法、及びｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｅｘ ｖｉｖｏ及びｉｎ ｖｉｖｏで細胞に対する核酸損傷を増大する方法が提供される。一実施形態では、一方法は、細胞の増殖を阻害するのに十分な量の本発明のペプチド又はペプチド模倣物と細胞（例えば、培養細胞若しくは被験者中に存在する細胞）とを接触させるステップを含む。別の実施形態において、一方法は、核酸損傷剤又は処置に対する細胞の感受性を増大するのに十分な量の本発明のペプチド又はペプチド模倣物と細胞とを接触させるステップを含む。さらに別の実施形態において、一方法は、細胞の核酸損傷を増加させるのに十分な量の本発明のペプチド又はペプチド模倣物と細胞とを接触させるステップを含む。様々な態様において、一方法はさらに、核酸損傷剤と細胞とを接触させるステップ、又は細胞を核酸損傷処置に付すステップを含む。
さらに、被験者における細胞増殖障害又は細胞分化障害を処置するための方法が提供され、このような障害としては、望ましくないか、若しくは不必要な細胞増殖又は細胞生存を特徴とする状態、アポトーシスの欠損又は異常を特徴とする状態、細胞生存の異常又は欠損を特徴とする状態、並びに細胞分化の異常又は欠損を特徴とする状態が挙げられる。一実施形態において、この方法は、細胞増殖障害を有する被験者又は細胞増殖障害を有するリスクがある被験者に、その細胞増殖障害を治療するのに有効な量の、本発明のペプチド又はペプチド模倣物を投与するステップを含む。一態様において、この量は、被験者の状態を改善するのに十分なものである。特定の態様では、上記の改善としては、標的細胞（例えば、異常に増殖している細胞）の少なくとも一部における、細胞増殖の低減、細胞数の減少、細胞数の増加の阻害、アポトーシスの増大、又は生存の低減が挙げられる。また別の態様では、この被験者に、細胞増殖を阻害する処置を実施する前、それと同時、又はその後に、本発明の化合物を投与する。別の特定の態様では、細胞増殖障害の細胞の少なくとも一部は、血液、乳房、肺、甲状腺、頭部又は頸部、脳、リンパ液、消化管、尿生殖器管、腎臓、膵臓、肝臓、骨、筋肉、又は皮膚に位置する。
別の実施形態において、本方法は、固形腫瘍を治療するために、特定の量の化合物を被験者に投与するステップを含む。また別の実施形態において、この方法は、液体腫瘍を治療するために、特定の量の化合物を被験者に投与するステップを含む。様々な態様において、腫瘍を有する被験者に、別の抗腫瘍療法の前、それと同時、又はその後に、本発明の化合物を投与する。
本明細書中で使用される場合、「増殖障害」及び「増殖状態」という用語は、いずれかの病理学的又は非病理学的な生理学的状態を意味し、これらは、（例えば、細胞、ウイルス、細菌、真菌などの）異常な、又は望ましくない増殖を特徴とする。「細胞増殖障害」及び「細胞増殖状態」という用語は、いずれかの病理学的又は非病理学的な生理学的状態を意味し、これらは、異常な、又は望ましくない細胞増殖によって特徴付けられ、またこのような状態には、（例えば、アポトーシス欠損に起因する）望ましくないか、若しくは不要な細胞増殖又は細胞生存を特徴とする状態、アポトーシス欠損若しくは異常又は欠損を特徴とする状態、並びに異常な、又は望ましくないか、若しくは不要な細胞生存を特徴とする状態も含まれる。「分化障害」という用語は、いずれかの病理学的又は非病理学的な生理学的状態を意味し、これらは、分化異常又は欠損を特徴とする。
治療が可能な増殖障害又は分化障害としては、良性及び腫瘍性の両方の、疾患及び非病理学的な生理学的状態が挙げられ、これらは、異常な、又は望ましくない細胞数、細胞増殖又は細胞生存を特徴とする。従って、このような障害又は状態は、病態を成しうるが、そのようなものとして、あらゆるタイプの癌性増殖若しくは発癌過程、転移性組織、又は悪性に形質転換された細胞、組織、若しくは器官が挙げられ、或いはこれらは、非病理学的であり得る（すなわち、正常から逸脱するが、一般的には疾患に関連しない）。本発明に従って治療することができる非病理学的状態の具体的な例は、創傷修復からの組織再生であり、これにより、瘢痕が生じる。
増殖障害又は分化障害を含む細胞は、細胞塊において凝集されているか、又は分散している可能性がある。「固形腫瘍」という用語は、典型的に、一緒に凝集して塊を形成する、新形成又は転移を指す。具体的な例としては、内臓腫瘍（例えば、胃癌又は結腸癌）、肝癌、ｖｅｎａｌ癌腫、肺及び脳の腫瘍／癌が挙げられる。「液体腫瘍」とは、造血系の新形成（例えば、リンパ腫、骨髄腫及び白血病）、又はそれらが一般的に固形塊を形成しない場合に、天然にびまん性の新形成を指す。白血病の具体的な例としては、急性及び慢性リンパ芽球性骨髄腫、骨髄芽球性骨髄腫並びに多発性骨髄腫が挙げられる。
このような障害としては、ほぼあらゆる細胞又は組織型に影響を及ぼし得る、新生物又は癌、例えば、癌腫、肉腫、黒色腫、転移性障害又は造血系新生物障害が挙げられる。転移性腫瘍は、複数の原発腫瘍型から生じ得るが、このようなものとして、限定はしないが、以下が挙げられる：乳房、肺、甲状腺、頭部及び頸部、脳、リンパ、消化管（口、食道、胃、小腸、結腸、直腸）、尿生殖器管（子宮、卵巣、子宮頸部、膀胱、精巣、陰茎、前立腺）、腎臓、膵臓、肝臓、骨、筋肉、皮膚など。
癌腫とは、上皮組織又は内分泌組織の悪性疾患を指し、このようなものとしては、呼吸器系癌腫、消化器系癌腫、泌尿生殖器系癌腫、精巣癌腫、乳房癌腫、前立腺癌腫、内分泌系癌腫、及び黒色腫が挙げられる。例示的な癌腫としては、子宮頸部、肺、前立腺、乳房、頭部及び頸部、結腸、肝臓及び卵巣から生じる癌腫が挙げられる。この用語はまた、例えば、癌性組織及び肉腫性組織から構成される悪性腫瘍を含む癌肉腫も包含する。腺癌としては、腺組織の癌腫、又は、腫瘍が、腺様構造を形成するものが挙げられる。
肉腫とは、間葉細胞起源の悪性腫瘍を指す。例示的な肉腫としては、例えば、リンパ肉腫、脂肪肉腫、骨肉腫、及び線維肉腫が挙げられる。
本明細書で用いる場合、「造血系増殖障害」という用語は、例えば、骨髄細胞、リンパ系若しくは赤血球細胞の系統、又はそれらの前駆細胞から生じる、造血系起源の過形成細胞／新生物細胞を伴う疾患を意味する。典型的には、これらの疾患は、未分化型急性白血病、例えば、赤芽球性白血病及び急性巨核芽球性白血病に起因する。別の骨髄系障害の例として、限定はしないが、以下：急性前骨髄球性白血病（ＡＰＭＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）及び慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）が挙げられ、リンパ系悪性疾患としては、限定はしないが、以下：急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）（Ｂ細胞系統ＡＬＬ及びＴ細胞系統ＡＬＬを含む）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、前リンパ球性白血病（ＰＬＬ）、ヘアリーセル白血病（ＨＬＬ）及びワルデンストレームマクログロブリン血症（ＷＭ）が挙げられる。さらなる悪性リンパ腫としては、限定はしないが、以下：非ホジキンリンパ腫及びその変異型、末梢Ｔ細胞リンパ腫、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫（ＡＴＬ）、皮膚Ｔ細胞白血病（ＣＴＣＬ）、大顆粒リンパ球性白血病（ＬＧＦ）、ホジキン病及びリード・シュテルンベルグ病が挙げられる。
本発明の化合物と組み合わせて使用する処置は、本明細書に開示されているか、又は当該技術分野において公知である、あらゆる抗増殖処置、核酸損傷処置、又は抗腫瘍処置を包含する。例えば、抗細胞増殖処置又は抗腫瘍処置は、任意選択で薬物処置と組み合わせた、照射処置又は外科的切除を含んでもよい。この処置は、化学物質（例えば、放射性同位体）、薬物（例えば、化学療法薬）、又は遺伝子療法、例えば、抗癌遺伝子（例えば、Ｒｂ、ＤＣＣ、ｐ５３など）、ドミナントネガティブ抗癌遺伝子、若しくは抗癌遺伝子に対するアンチセンスの投与を含んでもよい。この化合物は、他の処置プロトコルの前、それと同時、又はその後に、投与することができる。例えば、抗細胞増殖療法（例えば、照射療法、化学療法、遺伝子治療、外科的切除など）のための候補被験者に、抗細胞増殖治療を開始する前に、本発明の化合物を投与することができる。従って、予防的処置方法が提供される。
「被験者」という用語は、動物、典型的には哺乳動物、例えば、霊長類（ヒト、サル、テナガザル、チンパンジー、オランウータン、マカク）、飼育動物（イヌ及びネコ）、家畜（ウマ、ウシ、ヤギ、ヒツジ、ブタ）、及び実験動物（マウス、ラット、ウサギ、モルモット）などを指す。被験者には、動物疾患モデル（たとえば、腫瘍保有マウス）も含まれる。
処置に適した被験者は、増殖若しくは分化障害のための処置又は（例えば抗腫瘍治療）を、現在受けている被験者、又はその処置を受ける候補である被験者を包含する。別の候補被験者としては、例えば、細胞増殖障害を発症するリスクがある被験者が挙げられる。従って、本発明の方法は、細胞増殖障害のリスクはあるが、未だその障害の明白な症状を示していない被験者を処置するために適用可能である。リスクがある被験者は、細胞増殖障害を発症する遺伝的素因又は家族歴を有するものとして、識別することができる。例えば、活性化癌遺伝子を有するか、又は腫瘍サプレッサ遺伝子の変異若しくは欠失を有する被験者は、候補被験者である。従って、リスクがある被験者は、遺伝子損傷の存在について常用的遺伝子スクリーニングを使用するか、又はその被験者がその障害のリスクがあることを明らかにするためのその被験者の家族歴に関する問診を用いて、識別することができる。リスクがある被験者の特定の例としては、新形成細胞若しくは薬物耐性新形成細胞がＣＤ４０を発現する、癌に対する素因を示す家族歴又は他の遺伝的特徴を有する被験者がある。遺伝病の特定の具体的な例は、網膜芽細胞腫であり、これは、Ｒｂ腫瘍サプレッサ遺伝子の欠損によって引き起こされる。
投与量は、典型的には、望ましい影響をもたらすのに充分な量である、「有効量」又は「十分量」である。従って、有効量は、増殖細胞を含む細胞の少なくとも一部（例えば、標的細胞の少なくとも一部）の、細胞増殖の低減、細胞数の減少、増殖増大の阻害、細胞数増加の阻害、アポトーシス増大、又は生存の低減のうちの１つ又は複数を含む。このように、例えば、細胞増殖を阻害することが望ましい場合、有効量は、細胞増殖若しくは増殖細胞数を検出可能に低減する量、又は細胞アポトーシスを増大する量、又は細胞生存を低減する量である。従って、この量は、標的細胞数を減少するため、標的細胞数を安定化するため、又は標的細胞数の増加を阻害するために、十分なものとなり得る。例えば、この障害が固形腫瘍を包含する場合、その腫瘍の少なくとも一部の、腫瘍サイズの縮小、腫瘍サイズの安定化、又はそれを超える腫瘍増殖の阻止（例えば、細胞の５〜１０％の増殖阻害、又は腫瘍塊を含む細胞の１０〜２０％若しくはそれを超える増殖の阻害）が、満足のゆく臨床エンドポイントである。障害が液体腫瘍を含む場合、その腫瘍細胞の少なくとも亜集団の、腫瘍細胞数の減少、腫瘍細胞数の安定化、又はそれを超える腫瘍細胞数の増加の阻害（例えば、その細胞の５〜１０％、又は細胞の１０〜２０％若しくはそれを超える増殖の阻害）が、満足のゆく臨床エンドポイントである。
さらに、有効とみなされる量は、状態又は障害の進行を、予防又は阻害することができる。例えば、特定の腫瘍は、進行するにつれて、転移形態に進行するなど、攻撃性を増していく。そのため、有効とみなされる量は、腫瘍が攻撃性を増すこと、又は転移することも抑制若しくは阻止する。従って、障害又は状態の悪化の阻害又は予防（すなわち、状態の安定化）は、さらに別の満足な臨床エンドポイントである。
液体腫瘍を含む生物学的サンプル（例えば、血液又は組織サンプル）の試験によって、腫瘍細胞塊若しくは腫瘍細胞数が減少したかどうか、又は腫瘍細胞増殖の阻害が起こったかどうかを立証することができる。固形腫瘍の場合には、侵襲的及び非侵襲的画像化法によって、腫瘍サイズの減少又は腫瘍サイズ増加の阻害を確認することができる。受容体陽性腫瘍の受容体数の減少は、腫瘍細胞増殖の減少又は阻害を評価するために使用することができる。ホルモン産生腫瘍（例えば、乳癌、精巣癌、又は卵巣癌）のホルモン量は、その腫瘍の増殖の減少又は阻害を評価するために使用することができる。
有効量はまた、障害又は状態に関連する症状の重症度若しくは頻度を、客観的又は主観的に軽減若しくは減少することができる。例えば、疼痛、吐き気若しくはその他の不快感を軽減するか、又は食欲若しくは主観的な満足できる状態（ｓｕｂｊｅｃｔｉｖｅ ｗｅｌｌ ｂｅｉｎｇ）を高める、本発明の化合物の量は、満足のゆく臨床エンドポイントである。
有効量はまた、別のプロトコルを用いる処置の量（例えば、投与量）又は頻度の減少も含み、これは、満足のゆく臨床エンドポイントとみなされる。例えば、本発明の化合物を用いて治療する癌患者が、癌細胞増殖を阻害するために必要な核酸損傷処置が低減し得る。この場合、有効量は、本発明の化合物による処置なしで、投与される投与の頻度若しくは量と比較して、その被験者が投与される核酸損傷剤の投与頻度若しくは投与量を減少させる、量を包含する。
被験者の状態又は治療利益の改善をもたらす本発明の方法は、期間が比較的短くてもよく、例えば、その改善は、数時間、数日間、又は数週間継続する場合もあり、又は長期間（例えば、数ヵ月若しくは数ヵ年）にわたり延長する場合もある。有効量は、その状態又は障害の何らかの症状若しくは全ての症状を完全に除去する必要はない。従って、有効量についての満足のゆく臨床エンドポイントは、その障害若しくは状態の状況を決定するために適切な上記の基準若しくは当該技術分野で公知の他の基準を用いて決定される、短期間又は長期間にわたる被験者の状態の主観的改善若しくは客観的改善が存在する場合に達成される。本明細書に記載されるか、又は当該技術分野で公知であるような１つ又は複数の有益な効果をもたらす上で有効な量は、被験者の状態の「改善」又は被験者に対する「治療利益」と呼ばれる。
本発明の化合物の有効量は、動物研究に基づいて、又は任意選択でヒト臨床試験において、決定することができる。特定の被験者を処置するために必要な投与量及び時機に影響を与え得る様々な要因（例えば、被験者の健康状態、年齢、若しくは性別、障害若しくは状態の重症度若しくは段階、治療歴、望ましくない副作用に対する感受性、要望される臨床成果、及び他の障害若しくは状態の存在）を、当業者は認識するであろう。このような要因は、治療利益のために充分な量をもたらすために必要な投与量及び時機に影響を与え得る。投与レジメンはまた、薬物速度論（すなわち、医薬組成物の吸収速度、バイオアベイラビリティ、代謝、及びクリアランス）も考慮に入れる（例えば、Ｅｇｌｅｔｏｎ（１９９７）“Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｔｒａｎｓｐｏｒｔ ｏｆ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｄ ｐｅｐｔｉｄｅ ｄｒｕｇｓ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｂｒａｉｎ”Ｐｅｐｔｉｄｅｓ １８：１４３１〜１４３９；及びＬａｎｇｅｒ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７〜１５３３を参照のこと）。さらに、用量又は処置プロトコルは、具体的に被験者に合わせて設計してもよく、又はゲノム薬理学データに基づいて改変してもよい。
従って、本発明の化合物は、単独で、又は医薬組成物として、要望される効果を達成する任意のプロトコル若しくは経路に従って、全身投与、局部（ｒｅｇｉｏｎａｌｌｙ）投与（例えば、器官又は組織に向けて、例えば、肝臓の細胞増殖障害を治療するために門脈中に注射することにより）、又は局所（ｌｏｃａｌｌｙ）（例えば、腫瘍塊中に直接）投与することができる。本化合物及び医薬組成物は、単回若しくは多回用量として、毎日（例えば、低用量で）、又は断続的に（例えば、より高い用量で、１日置き、週１回など）、投与することができる。本化合物及び医薬組成物は、吸入（例えば、気管内吸入）を介して、経口的に、静脈内に、動脈内に、脈管内に、髄腔内に、腹腔内に、筋肉内に、皮下に、体腔内に、経皮的（例えば、局所）に、経粘膜的（例えば、口腔、膀胱、膣、子宮、直腸、若しくは鼻）に、多数回投与により、徐放（例えば、一定時間にわたる段階的灌流）により、又は単回ボーラスにより、投与することができる。薬物を投与するための移植可能なデバイス（微小製造デバイスを含む）は公知であり、また、被験者に本発明の化合物を送達するために適用可能である。
静脈内（ＩＶ）投与される化合物は、数時間（典型的には、１、３、若しくは６時間）にわたって、約０．０１ｍｇ／時間〜約１．０ｍｇ／時間であり、これは、断続的なサイクルで１若しくは数週間にわたり反復することができる。特に、薬物を隔離部位に投与して血流中には投与しない場合（例えば、体腔又は器官管腔（例えば、脳脊髄液（ＣＳＦ））中に投与する場合）には、上記よりかなり高い投与量（例えば、約１０ｍｇ／ｍｌまでの範囲）を用いてもよい。
従って、本発明は、医薬組成物をさらに提供する。このような医薬組成物は、被験者にｉｎ ｖｉｖｏ若しくはｅｘ ｖｉｖｏで投与する上で、及び例えば、本発明の化合物で被験者を治療する上で有用である。
本明細書において用いる場合、「薬学的に許容される」及び「生理学的に許容される」という用語は、薬学的投与に適合性である、溶媒（水性溶媒若しくは非水性溶媒）、溶液、乳濁物、分散媒、コーティング、等張剤及び吸収促進剤若しくは吸収遅延剤を包含する。従って、「医薬組成物」又は「医薬製剤」は、被験者における薬学的使用に好適な組成物を指す。この医薬組成物及び製剤は、特定の量の本発明の化合物（例えば、有効量の本発明のペプチド若しくはペプチド模倣物、それをコードする核酸、ベクター、若しくは細胞）と、薬学的若しくは生理学的に許容される担体とを含む。
医薬組成物は、特定の投与経路（全身又は局所投与）と適合性であるように製剤化することができる。従って、医薬組成物は、様々な経路による投与に好適な担体、希釈剤、若しくは賦形剤を含む。
経腸（経口）投与のための製剤は、錠剤（コーティング錠剤若しくは非コーティング錠剤）、カプセル剤（硬質若しくは軟質）、ミクロスフェア、乳濁剤、粉末、顆粒、結晶、懸濁液、シロップ剤又はエリキシル剤中に含有させることができる。従来の非毒性固体担体（例えば、薬剤グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、滑石、セルロース、グルコース、スクロース、炭酸マグネシウムなど）を用いて、固形製剤を調製することができる。また、補助的活性化合物（例えば、保存剤、抗菌剤、抗ウイルス剤、及び抗真菌剤）を製剤に含有させてもよい。経腸投与のために、液体製剤を用いることもできる。担体は、石油、動物油、植物又は合成油（例えば、ピーナッツ油、ダイズ油、鉱油、ゴマ油）を含む様々な油から選択することができる。好適な製剤用賦形剤としては、例えば、デンプン、セルロース、タルク、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、イネ、コムギ、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノールが挙げられる。
経腸送達、非経口送達、又は経粘膜送達のための医薬組成物は、例えば、水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、ハンクス溶液、リンゲル溶液、デキストロース／生理食塩水、及びグルコース溶液を含む。製剤は、生理学的条件に近づけるための補助物質（例えば、緩衝剤、等張化剤、湿潤剤、界面活性剤など）を含んでもよい。添加剤はまた、別の活性成分（例えば、殺菌剤又は安定化剤）も含み得る。例えば、この溶液は、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、モノラウリン酸ソルビタン又はオレイン酸トリエタノールアミンを含み得る。さらに別の非経口製剤及び非経口方法は、Ｂａｉ（１９９７）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ．８０：６５−７５；Ｗａｒｒｅｎ（１９９７）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｓｃｉ．１５２：３１−３８及びＴｏｎｅｇａｗａ（１９９７）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８６：５０７−５１５に記載されている。非経口調製物は、ガラス製又はプラスチック製の、アンプル、使い捨てシリンジ、又は多用量バイアル中に封入することができる。
皮内投与又は皮下投与のための医薬組成物は、滅菌希釈剤（例えば、水、生理食塩水溶液、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、又は他の合成溶媒）；抗菌剤（例えば、ベンジルアルコール又はメチルパラベン）；抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、亜硫酸水素グルタチオン又は亜硫酸水素ナトリウム）；キレート剤（例えば、エチレンジアミン四酢酸）；緩衝剤（例えば、酢酸塩、クエン酸塩、又はリン酸塩）；並びに等張化剤（例えば、塩化ナトリウム又はデキストロース）を含み得る。
注射のための医薬組成物としては、水溶液（水溶性である場合）又は分散体、及び滅菌した注入可能な溶液若しくは分散剤の即時調製のための滅菌粉末が挙げられる。静脈内投与のために適切な担体としては、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ（商標）（ＢＡＳＦ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，ＮＪ）又はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。この担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコールなど）、並びにこれらの好適な混合物を含有する、溶媒又は分散媒であってよい。流動性は、例えば、レシチンのようなコーティングの使用によって、分散体の場合に要求される粒度の維持によって、及び界面活性剤の使用によって、維持することができる。抗菌剤及び抗真菌剤としては、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸及びチメロサールが挙げられる。等張剤、例えば、糖類、ポリアルコール（例えば、マンニトール、ソルビトール）、塩化ナトリウムを組成物に含有させてもよい。得られる溶液は、そのままでの使用のためにパッケージングするか、又は凍結乾燥することができ、その後、凍結乾燥調製物を、投与の前に滅菌溶液と後に組み合わせることができる。
薬学的に許容される担体は、吸収若しくはクリアランスを安定化、増大又は遅延させる化合物を含み得る。このような化合物としては、例えば、炭水化物（例えば、グルコース、スクロース、若しくはデキストラン）；低分子量タンパク質；ペプチドのクリアランス若しくは加水分解を低減させる組成物；或いは、賦形剤又はその他の安定化剤及び／若しくは緩衝剤が挙げられる。吸収を遅延させる薬剤としては、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンが挙げられる。また、医薬組成物（リポソーム担体を含む）の吸収を安定化、増大又は低減させるために、界面活性剤を用いてもよい。消化から保護するために、化合物を組成物と複合体化して、酸及び酵素的加水分解に対してそれを耐性にするか、又は化合物を適度に耐性の担体（例えば、リポソーム）中で複合体化してもよい。化合物を消化から保護するための手段は、当該技術分野で公知である（例えば、Ｆｉｘ（１９９６）Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ．１３：１７６０−１７６４；Ｓａｍａｎｅｎ（１９９６）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４８：１１９−１３５；及び米国特許第５，３９１，３７７号明細書（これは、治療薬の経口送達のための脂質組成物を記載する）を参照のこと）。
経粘膜投与又は経皮投与の場合、透過しようとするバリアに対して適切な透過剤を製剤中に使用する。このような透過剤は、一般に当該技術分野で公知であり、例えば、経粘膜投与については、界面活性剤、胆汁酸塩、及びフシジン酸誘導体が挙げられる。経粘膜投与は、鼻スプレー又は坐剤を用いて行うことができる（例えば、Ｓａｙａｎｉ（１９９６）“Ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｃｒｏｓｓ ａｂｓｏｒｐｔｉｖｅ ｍｕｃｏｓａｅ”Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒ．Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔ．１３：８５−１８４を参照のこと）。経皮投与の場合、この活性化合物は、当該技術分野で一般的に公知である軟膏、膏薬、ゲル、又はクリーム剤として製剤化することができる。経皮的送達系はまた、パッチを用いて達成することもできる。
吸入送達の場合、医薬製剤は、エアロゾル又は霧の形態で送達することができる。エアロゾル投与の場合、製剤は、界面活性剤及び噴射剤と一緒に微粉砕された形態で供給することができる。別の実施形態において、製剤を呼吸器組織に送達するためのデバイスは、その内部で製剤が蒸発するデバイスである。当該技術分野で公知のその他の送達系としては、乾燥粉末エアロゾル、液体送達系、吸入器、空気噴射噴霧器及び噴射剤系が挙げられる（例えば、Ｐａｔｔｏｎ（１９９８）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １６：１４１−１４３；Ｄｕｒａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ；Ａｒａｄｉｇｍ，Ｈａｙｗａｒｄ，ＣＡ；Ａｅｒｏｇｅｎ，Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ，ＣＡ；及びＩｎｈａｌｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｓａｎ Ｃａｒｌｏｓ，ＣＡを参照のこと）。
生分解性の生体適合性ポリマー、例えば、エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、及びポリ乳酸を使用することができる。このような製剤の調製のための方法は、当業者には公知である。これらの材料はまた、Ａｌｚａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ及びＮｏｖａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．から商業的に入手可能である。リポソーム懸濁液（抗体又はウイルスコートタンパク質を使用して、細胞又は組織へとターゲティングされたリポソームを含む）も、薬学的に許容される担体として使用することができる。これらは、例えば、米国特許第４，２３５，８７１号明細書；同第４，５０１，７２８号明細書；同第４，５２２，８１１号明細書；同第４，８３７，０２８号明細書；同第６，１１０，４９０号明細書；同第６，０９６，７１６号明細書；同第５，２８３，１８５号明細書；同第５，２７９，８３３号明細書；Ａｋｉｍａｒｕ（１９９５）Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１：１９７−２１０；Ａｌｖｉｎｇ（１９９５）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．１４５：５−３１；及びＳｚｏｋａ（１９８０）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｂｉｏｅｎｇ．９：４６７）に記載されているように、当該技術分野で公知の方法に従って調製することができる。ペプチドなどの低分子の持続的送達が可能な生分解性マイクロスフィア若しくはカプセル又は他の生分解性ポリマー構造は、当該技術分野において公知である（例えば、Ｐｕｔｎｅｙ（１９９８）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６：１５３−１５７を参照のこと）。本発明の化合物は、ミセル内に組み込んでもよい（例えば、Ｓｕｎｔｒｅｓ（１９９４）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４６：２３−２８；Ｗｏｏｄｌｅ（１９９２）Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．９：２６０−２６５を参照のこと）。ペプチドは、脂質単層又は脂質二重層の表面に結合させることができる。例えば、ペプチドは、ヒドラジド−ＰＥＧ−（ジステアロイルホスファチジル）エタノールアミン含有リポソームに結合させることができる（例えば、Ｚａｌｉｐｓｋｙ（１９９５）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．６：７０５−７０８を参照のこと）。或いは、任意の形態の脂質膜（例えば、平面脂質膜又はインタクトな細胞（例えば、赤血球）の細胞膜）を使用してもよい。リポソーム製剤及び脂質含有製剤は、任意の手段、例えば、静脈内投与、経皮投与（例えば、Ｖｕｔｌａ（１９９６）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．８５：５−８を参照のこと）、経粘膜投与、又は経口投与などによって送達することができる。
薬学的に許容される製剤は、約１％〜９９．９％の活性成分（例えば、ペプチド又はペプチド模倣物）含有することができる。医薬組成物は、従来の周知の滅菌技術によって滅菌するか、又は濾過滅菌することができる。
さらなる医薬製剤及び送達系は、当該技術分野で公知であり、本発明の方法及び組成物に適用可能である（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９０）１８ｔｈ ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ；Ｔｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｉｎｄｅｘ（１９９６）１２ｔｈ ｅｄ．，Ｍｅｒｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ，Ｗｈｉｔｅｈｏｕｓｅ，ＮＪ；Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｓｏｌｉｄ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ，Ｔｅｃｈｎｏｎｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｉｎｃ．，Ｌａｎｃａｓｔｅｒ，Ｐａ．，（１９９３）；及びＰｏｚｎａｎｓｋｙ ｅｔ ａｌ．，Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｒ．Ｌ．Ｊｕｌｉａｎｏ ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ，Ｎ．Ｙ．（１９８０），ｐｐ．２５３−３１５を参照のこと）。
医薬製剤は、投与しやすさ及び投薬量の均一性のために単位投与量形態でパッケージングすることができる。「単位投与量形態」とは、本明細書で用いられる場合、治療しようとする被験者への投与のための物理的に個別の単位投与量を指し；各単位は、製剤用担体又は賦形剤と組み合わせて、要望される効果をもたらす予め決定した量の化合物を含有する。
本明細書で使用する略語は以下の通りである：
Ｃｈａ：シクロヘキシル−アラニン
Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ：フッ化物は、フェニルアラニンのフェニル残基の２、３、４、５、６位にある
Ｆ：フッ化物
Ｂｐａ：ベンゾイル−フェニルアラニン
Ｎａｌ（２）：２−ナフチル−アラニル
Ａｌａ（３−ｂｚｔ）：（３−ベンゾチエニル）−アラニン
Ｎａｌ（１）：１−ナフチル−アラニル
Ｄｐｈ：ジフェニル−アラニン
Ａｌａ（ｔＢｕ）：ｔ−ブチル−アラニル
Ｃｙｓ（ｔＢｕ）：ｔ−ブチル−システイン
Ｐｈｅ−３，４，５−Ｆ：フッ化物は、フェニルアラニンのフェニルの３、４、５位にある
Ｐｈｅ−４ＣＦ３：ＣＦ３は、フェニルアラニンのフェニル残基の４位にある
Ｐｈｅ−３Ｂｒ，４Ｃｌ，５Ｂｒ：フェニルアラニンのフェニルにおいて、臭化物が３位、塩化物が４位、及び臭化物が５位にある
Ｐｈｅ−４Ｃｌ：塩化物が、フェニルアラニンのフェニルの４位にある
Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６など、及び（Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６など）；並びにＰ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２など、及び（Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２など）：それぞれ、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６、など、及びＰ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２、などの連続的配列。
別に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書中に記載された方法及び材料と類似するか又は同等である方法及び材料を本発明の実施又は試験において使用することができるが、好適な方法及び材料は、本明細書に記載されている。
本明細書において引用される全ての刊行物、特許及び他の参考文献は、その全体を参照として組み込むものとする。矛盾する場合、本明細書（定義を含む）が優先される。
本明細書において用いられるように、単数形「１つの（ａ）」、「及び（ａｎｄ）」、「その（ｔｈｅ）」及び「である（ｉｓ）」は、文脈が明らかに別のことを示すのでない限り、複数の指示対象を含む。従って、例えば、１つの「化合物」と言う場合、複数の化合物を含み、「１つの残基」又は１つの「アミノ酸」と言う場合、１つ又は複数の残基及びアミノ酸への言及を含む。
本発明の実施形態をいくつか記載した。しかし、本発明の精神及び範囲から逸脱することなく、様々な改変を実施できることは理解されよう。従って、以下の実施例は、本発明を例示することを意図しためであって、特許請求の範囲に記載する本発明の範囲を限定するものではない。
実施例１
この実施例では、材料及びいくつかの方法を説明する。この実施例には、分析したペプチド／ペプチド模倣物の配列も記載する。
化学物質及び試薬 ブレオマイシンを、Ｗａｋｏ Ｐｕｒｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．（Ｏｓａｋａ，Ｊａｐａｎ）から購入し、これを、蒸留Ｈ2Ｏ中に１０ｍｇ／ｍｌで溶解させた。ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）及びアドリアマイシンを、Ｓｉｇｍａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）から購入した。
細胞培養 ヒトＴ細胞白血病由来細胞株であるＪｕｒｋａｔを、１０％ウシ胎仔血清（ＩＢＬ：Ｉｍｍｕｎｏ−Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｇｕｎｍａ，Ｊａｐａｎ）を補充したＲＰＭＩ １６４０培地（Ｓｉｇｍａ）中で３７℃／５％ ＣＯ2にて培養した。ヒト膵臓癌由来細胞株であるＭＩＡＰａＣａ２を、１０％ウシ胎仔血清を補充したＤＭＥＭ中で３７℃／５％ ＣＯ2にて培養した。
細胞周期分析 ブレオマイシン、又はアドリアマイシンで処理した細胞の細胞周期状態を、Ｋａｗａｂｅ（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ ３８５：４５４−４５８により記載されているように、フローサイトメトリーにより分析した。手短には、２百万個の細胞を、２００μｌのＫｒｉｓｈａｎ’ｓ溶液（０．１％ クエン酸ナトリウム、５０μｇ／ｍｌ ＰＩ、２０μｇ／ｍｌ ＲＮアーゼＡ及び０．５％ ＮＰ−４０）中に再懸濁してから、４℃にて１時間インキュベートし、フローサイトメトリー、プログラムＣＥＬＬＱｕｅｓｔ（商標）（Ｂｅｃｋｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を用いたＦＡＣＳｃａｎ（商標）（Ｂｅｃｋｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ）により分析した。
実施例２
この実施例は、様々なペプチドのＧ２抑止活性、活性に対する様々な配列並べ替えの影響（配列長さを減じる作用を含む）を示すデータを記載する。
Ｇ２チェックポイント抑止のフローサイトメトリー分析を、ヒト白血病由来Ｊｕｒｋａ細胞株を用いて実施した。手短には、培養した細胞を、様々な用量のペプチド／ペプチド模倣物及び４０μｇ／ｍｌのブレオマイシンで２４時間処理した。細胞のＤＮＡをヨウ化プロピジウムで染色し、フローサイトメトリーによって分析した。これらの結果を表２にまとめる。
ブレオマイシン処理Ｊｕｒｋａｔ細胞に対して用いた場合の各ペプチド／ペプチド模倣物の用量応答曲線を図１、５、６、７、８、１１及び１２に示し；Ｙ軸は、処理から２４時間後の％Ｇ２／Ｍ Ｊｕｒｋａｔ細胞を示す。
化合物によるＭ期チェックポイント抑止のフローサイトメトリー分析を、コルヒチン（５μｇ／ｍｌ又は０．５μｇ／ｍｌ）で処理したヒトＴ細胞白血病Ｊｕｒｋａｔ細胞株、並びに様々な用量のペプチド／ペプチド模倣物を用いて、２４時間実施した（図１２）。細胞のＤＮＡを染色し、前述したように、フローサイトメトリーによって分析した。これらの結果を表２にまとめる。
コルヒチン処理Ｊｕｒｋａｔ細胞に対して用いた場合の各ペプチド／ペプチド模倣物の用量応答曲線を図２及び１４に示し；Ｙ軸は、処理から２４時間後の％Ｇ２／Ｍ Ｊｕｒｋａｔ細胞を示す。
「単独で使用した場合の副作用の出現」は、Ｊｕｒｋａｔ細胞周期妨害（すなわち、有意な量のＳｕｂＧ１細胞（死細胞）又は各々のＤＮＡ含量が通常より多く変異している細胞の出現）を生じたペプチド／ペプチド模倣物用量を示す。例えば、Ｇ１細胞は、通常、ＦＡＣＳ分析において鋭いピークを呈するが、処理後、細胞周期が妨害された場合、そのピークは、より幅広く、かつより低くなり、このことは、不適切な細胞周期進行又は細胞死の開始を示す。「Ｇ２抑止用量」は、２４時間処理した後に検出可能なＧ２チェックポイント抑止活性を生成した４０μｇ／ｍｌのブレオマイシンによるペプチド／ペプチド模倣物用量を示す。「コルヒチンと共に使用された場合の副作用の出現」は、２４時間の処理後にＪｕｒｋａｔ細胞周期妨害を生じた５μｇ／ｍｌコルヒチンによるペプチド／ペプチド模倣物用量を示す。
シスプラチンと併用した場合のＣＢＰ５０１のＧ２チェックポイント抑止活性を、種々の細胞株において試験した。手短には、シスプラチン（３μｇ／ｍｌ）及びＣＢＰ５０１（０．４μＭ、２μＭ及び１０μＭ）を、同時に細胞培養物に添加し、これを３７℃、５％ＣＯ2で３時間インキュベートした。培地を吸引し、これらの化合物を含まない新鮮な培地を加え、細胞をさらに４５時間インキュベートした。浮遊細胞を含む細胞をトリプシン−ＥＤＴＡ溶液を用いて収集し、Ｋｒｉｓｈａｎ’ｓ溶液と一緒にインキュベートして、前述のようにフローサイトメトリーによりＤＮＡ含量について分析した。これらの結果を表３にまとめる。ＨＵＶＥＣ以外の陰影によるハイライトは、Ｇ２集団の有意な喪失及び増加したｓｕｂＧ１集団を有する細胞株を示し、これは、Ｇ２チェックポイント抑止及びＣＢＰ５０１によるシスプラチンに対する感作を示す。正常Ｇ１チェックポイントを有する細胞であるＨＵＶＥＣ細胞が、少なくとも５０μＭ ＣＢＰ５０１まで、感作されなかったという観測結果は、ＣＢＰ５０１が、非特異的であるのではなく、Ｇ２チェックポイントに特異的であることを示す。
ブレオマイシン（Ｂｌｅｏ）又はアドリアマイシン（ＡＤＲ）で処理したヒト膵臓癌由来細胞株ＭＩＡＰａＣａ２に対する異なる用量での様々な化合物のＧ２チェックポイント抑止活性を試験した。手短には、細胞を、化合物及びブレオマイシン（１０μｇ／ｍｌ）又はアドリアマイシン（１μｇ／ｍｌ）と一緒に３時間インキュベートした。培地を交換し、さらに２１時間インキュベートした。収集した細胞を、ヨウ化プロピウムによってＤＮＡについて染色し、前述したようにフローサイトメトリーにより分析した。ｓｕｂＧ１細胞集団の％を図３において死細胞として示す。これらの結果は、ＣＢＰ５０１が、ブレオマイシン及びアドリアマイシンの両方に対してＭＩＡＰａＣａ２細胞を、用量依存的に感作したことを示している。
図４Ａ及び４Ｃは、複数のペプチド対（ここで、一方のアミノ酸残基は、他方のアミノ酸残基とは異なる）を用いて実施したＧ２チェックポイント抑止活性の要約である。これらのペプチドのＧ２チェックポイント抑止活性を、前述のようにブレオマイシン処理したＪｕｒｋａｔ細胞を用いて分析した。図４Ｂは、複数のペプチド対（ここで、一方のアミノ酸残基は、他方のアミノ酸残基とは異なる）を用いて実施したＭチェックポイント抑止活性及び／又は非特異的毒性分析の要約である。これらのペプチドのＭチェックポイント抑止活性及び／又は非特異的毒性を、前述のようにコルヒチン処理したＪｕｒｋａｔ細胞を用いて分析した。
ブレオマイシンで処理した細胞に対する、異なる用量の様々なアルギニンリッチ配列のＧ２チェックポイント抑止活性を試験した。手短には、ブレオマイシン（４０μｇ／ｍｌ）を含むＪｕｒｋａｔ細胞の培養培地に、０．２μｇ／ｍｌ、０．３９μｇ／ｍｌ、０．７８μｇ／ｍｌ、１．５６μｇ／ｍｌ、３．１２５μｇ／ｍｌ、６．２５μｇ／ｍｌ、１２．５μｇ／ｍｌ、２５μｇ／ｍｌ及び５０μｇ／ｍｌのペプチドを添加した。引き続いて、２４時間後に細胞を回収し、Ｋｒｉｓｈａｎ溶液で染色し、以前に記載されたようにフローサイトメトリーで分析した。％Ｇ２／Ｍ細胞（Ｙ軸）をペプチド用量（Ｘ軸）に対してプロットした（図５）。このデータは、「（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｇｌｎ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（配列番号：１３７）」塩基性残基リッチ配列が、より少ないか又はより多い数の残基を有する配列と比較して最良の配列であることを示す。
ブレオマイシンで処理した細胞に対する、異なる用量で（Ｄ−Ｂｐａ）を含まないペプチドのＧ２チェックポイント抑止活性を試験した。手短には、ブレオマイシン（４０μｇ／ｍｌ）を含むＪｕｒｋａｔ細胞の培養培地に、０．２μｇ／ｍｌ、０．３９μｇ／ｍｌ、０．７８μｇ／ｍｌ、１．５６μｇ／ｍｌ、３．１２５μｇ／ｍｌ、６．２５μｇ／ｍｌ、１２．５μｇ／ｍｌ、２５μｇ／ｍｌ及び５０μｇ／ｍｌのペプチドを添加した。続いて、細胞を回収し、以前に記載されたようにフローサイトメトリーで分析した。％Ｇ２／Ｍ細胞（Ｙ軸）をペプチド用量（Ｘ軸）に対してプロットした（図６）。この結果は、配列（Ｔｙｒ）（Ｓｅｒ）（Ｐｒｏ）（Ｔｒｐ）（Ｓｅｒ）（Ｐｈｅ−２，３，４，５，６Ｆ）（Ｃｈａ）（配列番号：１３８）が、配列（Ｂｐａ）（Ｓｅｒ）（Ｔｒｐ）（Ｓｅｒ）（Ｐｈｅ−２，３，４，５，６Ｆ）（Ｃｈａ）（配列番号：１３９）と同等のＧ２チェックポイント抑止活性を有することを示す。
異なる用量のブレオマイシンで処理した細胞のアルギニンリッチ配列及びリジンリッチ配列のＧ２チェックポイント抑止活性を試験した。手短には、ブレオマイシン（４０μｇ／ｍｌ）を含むＪｕｒｋａｔ細胞の培養培地に、表示用量（Ｘ軸）のペプチドを添加した。続いて、細胞を回収し、前述したようにフローサイトメトリーで分析した。％Ｇ２／Ｍ細胞（Ｙ軸）をペプチド用量（Ｘ軸）に対してプロットした（図７）。これらの結果は、塩基性アミノ酸リッチ配列の場合、Ａｒｇ配列がＬｙｓ配列より良好な活性をもたらすことが明らかであり、Ｇｌｎがこれらの配列の機能に必須ではないことを示す。
アルギニンリッチ領域の位置が変化する配列のＧ２チェックポイント抑止活性を試験した。手短には、２４時間にわたって、ブレオマイシン（４０μｇ／ｍｌ）を含むＪｕｒｋａｔ細胞の培養培地に、表示用量（Ｘ軸）のペプチドを添加した。続いて、細胞を回収し、前述したようにフローサイトメトリーで分析した。％Ｇ２／Ｍ細胞（Ｙ軸）をペプチド用量に対してプロットした（図８）。
データは、このペプチドのＧ２抑止活性が、アルギニンリッチ領域の位置の変化によって有意には改変されないことを示す。さらに、ＣＢＰ５０１は水溶性であったが、ＣＢＰ５１１は水溶性でなかった。この違いは、いくつかの系が水に不溶性の化合物を好むため、特定の薬物送達系に有利となり得る。
図９は、様々なペプチド対で実施された分析の概要を示し、ここで、１つのアミノ酸残基のみが対の間で異なった。これらのペプチドのＧ２チェックポイント抑止活性を記載のようにブレオマイシン処理したＪｕｒｋａｔ細胞を用いて分析した。
各アミノ酸のサイズ、電荷及び疎水性は、その配列がいかに効果的に標的分子に適合するかを決定する。ペプチド又はペプチド模倣物の側鎖は、自由に移動し、１つ又は２つの不都合な側鎖を有する場合であっても、ペプチド又はペプチド模倣物は標的分子のポケット又は溝に適合することができる。この概要は、各側鎖について好ましいサイズが存在することを示し、このことは、各側鎖に対する標的タンパク質の結合領域（ポケット又は溝）のサイズを示唆する。例えば、ベンゼン、インドール及びシクロヘキサンなどの環状構造を有する側鎖は、Ｇ２抑止又はＭ抑止の強度及び／又は非特異的な毒性を決定する；図９及び４を参照すると、５員より大きい環状構造はＧ２抑止活性に影響を及ぼし、（Ｐ１及びＰ２の中程度のサイズはＧ２抑止活性を増大するが、大き過ぎる構造（Ｐ１、Ｐ５及びＰ６）は、Ｍ抑止及び／又は非特異的毒性を増大する。
環状構造を含まない側鎖は、中性と思われる。従って、より良好な活性を得るために、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ４及びＰ６の適切なサイズの環状構造、並びにＰ３及びＰ５の非環状構造又は６員未満の環状構造のいずれかが望ましい。Ｐ１、Ｐ２及びＰ６についての適切な環は、５員又は６員のいずれかの２環の融合による１〜６員環から得られる。Ｐ４の場合、適切なサイズの環は、２つの環の融合であり、その各々は、５員又は６員である。従って、Ｐ１の場合、Ｃｈａ又はＮａｌ（２）が、最も適合すると思われ；Ｐ２の場合、Ｐｈｅ−２，３，４，５，６Ｆ、Ｐｈｅ−３，４，５Ｆ又はＰｈｅ−ＣＦ３が最良であると思われる。これらの側鎖サイズは、標的分子におけるこの領域が相互作用する位置に２つのポケットか、又は１つのより大きなポケットのいずれかが存在することを示す。Ｐ３及びＰ５の場合、小さな側鎖（例えば、Ｓｅｒ又はＰｒｏ）が受容可能であり、より大きな側鎖（例えば、Ａｒｇ）もまた受容可能であるが、このことは、標的分子のこの領域にはポケットが存在せず、従って、側鎖は単に標的とは反対方向に延在し得ることを示す。しかし、環状構造は、ペプチド又はペプチド模倣物が別の分子（すなわち標的分子以外）と相互作用させることが可能であり、これによって、副作用が増大し得る。Ｐ６の場合、Ｂｐａ又はＳｅｒ−Ｔｙｒの方が、Ｔｙｒ単独又はこれより小さい側鎖よりも良好であると思われ、これは、標的内に水平に延びる、より深い溝を示している。また、Ｐ４に対する残基のサイズに基づき、標的内に、Ｐ４についての浅く、より広いポケットも存在し得る。
以下のペプチドを、Ｊｕｒｋａｔ及びブレオマイシンを使用して、記載するように分析した。ペプチドの配列は以下の通りである：ＣＢＰ５０１、（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｇｌｎ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（配列番号８０）；ＣＢＰ７００、（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）（配列番号９６）；ＣＢＰ７０１、（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）（配列番号９７）；ＣＢＰ７０２、（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）（配列番号９８）；及びＣＢＰ７０３、（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）（配列番号９９）。この結果は、ＣＢＰ７００、７０１、７０２、７０３が、他の例示したペプチドより短いが、有意なＧ２チェックポイント抑止活性を有する他のペプチドと同等の、Ｇ２チェックポイント抑止活性を保持することを示す（図１１）。
ＣＢ５０１によるＧ２チェックポイント抑止活性と非特異的毒性（Ｍチェックポイント抑止）との比較を行った。手短には、Ｊｕｒｋａｔ細胞を、Ｇ２チェックポイント抑止活性及び非特異的毒性のそれぞれについて、４０μｇ／ｍｌのブレオマイシン又は０．５μｇ／ｍｌのコルヒチンで処理した。処理した細胞の各々のＤＮＡ量を、前述したように、フローサイトメトリーにより分析した。データは、Ｇ２チェックポイントが、ＣＢＰ５０１の場合、用量依存的に抑止されたのに対し、非特異的毒性は、Ｍ期停止細胞の不変のパーセンテージによって決定されるように、５０μＭまでのペプチドでは存在しなかったことを示す（図１２）。
実施例３
この実施例は、ペプチド／ペプチド模倣物のキナーゼ阻害活性及び様々なペプチドの血清安定性分析を記載する。
２つのキナーゼ（Ｃｈｋ１及びＣｈｋ２）が、Ｇ２チェックポイント機構には重要であることから、両酵素のキナーゼ阻害分析を実施した。ｉｎ ｖｉｔｒｏキナーゼ阻害分析を、「ＰｅｐＴａｇ（登録商標）Ｎｏｎ−Ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｋｉｎａｓｅ Ａｓｓａｙｓ」（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して、ＰＫＣの代わりに精製ＣＨＫ２キナーゼを使用した以外は、同社のプロトコルに従って実施した。精製ＰＫＣは、Ｕｐｓｔａｔｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．から購入した。これらの結果を表４Ａに示す。
ｉｎ ｖｉｔｒｏキナーゼ阻害分析を、ＣｙｃＬｅｘ，Ｃｏ．Ｌｔｄ．（Ｎａｇａｎｏ，Ｊａｐａｎ）により実施した。手短には、ヒスチジンタグを有するバキュロウイルス由来の組換えヒト全長Ｃｈｋ１、又はＧＳＴと融合した大腸菌（Ｅ．Ｃｏｌｉ）由来の組換えヒト全長Ｃｈｋ２をキナーゼとして使用した。大腸菌（Ｅ．Ｃｏｌｉ）由来の組換えＧＳＴ−Ｃｄｃ２５Ｃ（アミノ酸１６７〜２６７）を基質として使用した。反応条件は、２０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ−ＫＯＨ（ｐＨ７．５）、１ｍＭ ＤＴＴ、８０μｇ／ｍｌ ＢＳＡ、１０ｍＭ ＭｇＣｌ2及び５０ｍＭ ＡＴＰ（３０℃で６０分間）であった。ＧＳＴ−Ｃｄｃ２５Ｃのセリン２１６のリン酸化を、酵素結合免疫アッセイを用い、抗Ｃｄｃ２５Ｃ−リン酸化Ｓ２１６抗体により検出した。これらの結果を表４Ｂに示す。
このデータは、Ｃｈｋ１及びＣｈｋ２のキナーゼ阻害の両方がＧ２抑止用量よりも高い用量（ＣＢＰ５００、５０１、５０５、５０６、６０３によるＧ２抑止についてのＩＣ50は、全て１μＭ未満である）で生じることを示す。これらの結果は、これらのペプチドが、Ｃｈｋ１／２分子を阻害することに加え、作用の機構を有することを示唆するものである。或いは、ペプチドは、恐らく細胞内で蓄積されるため、その濃度は、周囲の培地より細胞内で高くなる。
マウス及びヒトの血清中でのペプチドの安定性を決定するために、血清分析を行った。手短には、ペプチド（１０ｍＭ又は２．５ｍＭ）を、新しく調製したヒト血清と一緒に、３７℃で１時間インキュベートした。ＣＢＰ５０１（１０ｍＭ）を、新しく調製したマウス血清と一緒に、３７℃で１時間インキュベートした。ペプチド及びブレオマイシン（４０μｇ／ｍｌ）を用いて、又は用いずに、Ｊｕｒｋａｔ細胞を血清で処理した後、２４時間インキュベートした。Ｇ２期細胞の集団を、以前に記載されるようにフローサイトメトリーにより決定した。血清処理ペプチドの残留Ｇ２チェックポイント抑止活性を、処理血清のＧ２細胞のパーセント（％）と、培地処理ペプチド、ブレオマイシン及びＪｕｒｋａｔ細胞を用いて作成した標準曲線を比較することにより決定した（表５Ａ）。残留ＣＢＰ５０１量を、エタノール処理での脱タンパク後にＨＰＬＣにより決定した（表５Ｂ）。このデータは、ｄ型アミノ酸（例えば、ＣＢＰ５０１及びＣＢＰ６０３）を有するペプチドが、ｌ型アミノ酸（例えば、ＣＢＰ４１３）を有するペプチドよりも、血清中で安定であることを示す。
実施例４
この実施例は、培養細胞上のＣＢＰ５０１の抗細胞増殖活性を記載する。この実施例はまた、ペプチド／ペプチド模倣物のｉｎ ｖｉｖｏ活性を示すデータを記載する。
化合物の抗細胞増殖活性を証明するために、培養ＭＩＡＰａＣａ２ヒト膵臓癌細胞を、ＣＢＰ５０１（１０μｍＭ）、シスプラチン（１、３又は９μｇ／ｍｌ）及びオキサリプラチン（１、３又は９μｇ／ｍｌ）単独で、並びに組み合せて処理した。手短には、細胞を１ウェルあたり３００細胞で６ウェルプレートに塗布し、一晩インキュベートした後、化合物で３時間処理した。培地を交換し、さらに１０日間培養した。引き続き、細胞を７０％メタノールで固定し、０．１％クリスタルバイオレットで染色し、可視化した。コロニー形成分析結果は、ＣＢＰ５０１がシスプラチンとオキサリプラチンの両方のＭＩＡＰａＣａ２細胞に対する細胞傷害活性を増強することを示した。
正常ヒト臍帯内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）を用いて同様の試験を行った。正常細胞はコロニーを形成しないため、これらは、１ウェルあたり３００細胞ではなく、１ウェルあたり３０００細胞を塗布した。これらの結果は、ペプチドがそれ自体では正常細胞の増殖を妨害せず、ペプチドは、細胞に対するシスプラチン及びオキサリプラチンの細胞傷害活性を増強もしないことを示す。従って、ペプチドは、核酸傷害処置に感作された過剰増殖細胞（ｈｙｐｅｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎｇ ｃｅｌｌ）（例えば癌細胞）とは対照的に、核酸傷害処置を受けた正常細胞に対して有意なＧ２抑止活性を呈示しないことが明らかである。これらの結果は、正常細胞ではなく、感作した増殖細胞における、核酸傷害処置に対するペプチドの特異性を示す。
アラマーブルー（ＡｌａｍａｒＢｌｕｅ）分析を行い、シスプラチンを用いて、及び用いずにＣＢＰ５０１の増殖阻害活性を分析した。手短には、ＭＩＡＰａＣａ２細胞を１、３、１０、３０、１００μＭのシスプラチン、又は１０μＭのシスプラチンを用いて、又は用いずに、０．２２、０．６７、２、６及び１８μＭのＣＢＰ５０１に、１ウェルあたり２５００細胞で、９６ウェルプレート中で３時間曝露し、これを２回反復した。培地を交換し、さらに２４、４８又は７２時間インキュベートした。インキュベーションの後、２０μｌのアラマーブルー（ａｌａｍａｒＢｌｕｅ）９０％試薬を各ウェルに添加し、さらに６時間、蛍光強度により細胞生存度を検出した。蛍光強度をＳｐｅｃｔｒａｆｌｕｏｒ Ｐｌｕｓプレートリーダーを用いて、励起５３０ｎｍ及び発光５９０ｎｍで測定した。ＩＣ50を算出した（表６）。
この試験は、ＣＢＰ５０１が単独で、モル用量のシスプラチンより良好に細胞増殖を阻害することを示している。ＣＢＰ５０１は、１０μＭのシスプラチン（癌処置のために使用されるシスプラチンの量に近い）と組み合わせた場合、より低い用量で細胞増殖を抑制した。さらに、ＣＢＰ５０１の増殖抑制活性は、シスプラチンよりも長く；７２時間でのＩＣ50は、シスプラチンよりもＣＢＰ５０１を使用した場合の方がはるかに優れていた。
ＣＢＰ５０１のｉｎ ｖｉｖｏ半減期を、ＣＢＰ５０１の腹腔内注射（４０ｍｇ／ｋｇ）から１、３及び６時間後のマウス血清中のＣＢＰ５０１を定量することにより決定した。残留するインタクトなＣＢＰ５０１の量を、注射済みマウスから採取したマウス血清をエタノール処理により脱タンパクした後、ＨＰＬＣにより決定した（表７）。
ペプチドに対する耐性を決定するために、１０匹のマウスの群にＣＢＰ５０１（５、８若しくは１０ｍｇ／ｋｇ）を静脈内に１回、又はＣＢＰ５０１（５０、８０又は１００ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内に１回、注射した。注射済みマウスを、その生存について１週間観察した（表８）。
化合物のｉｎ ｖｉｖｏ効力を試験するために、ＭＩＡＰａＣａ２ヒト膵臓癌細胞をｓｃｉｄマウスに皮下移植した。原発腫瘍のサイズが０．１ｃｍ３以上（例えば、直径７又は８ｍｍ）になったときに処置を開始した（０日目）。ＣＤＤＰ（３ｍｇ／ｋｇ）及びＣＢＰ５０１（１０又は４０ｍｇ／ｋｇ）を単独で、又は組み合せて腹腔内投与した。カリパスを用いて週３回腫瘍サイズを測定し、体積を以下の式：
重量（ｍｇ）＝［幅（ｍｍ）２×長さ（ｍｍ）］／２
を用いて計算した。各処置群に対する平均腫瘍サイズを処置開始後の日数に対してプロットする（ｎ＝４）（図１０）。
この結果は、ＣＢＰ５０１処置が単独で、ｉｎ ｖｉｖｏでのヒト膵臓癌細胞の増殖を抑制することを示す。この結果はさらに、ＣＢＰ５０１がシスプラチンの抗腫瘍活性を増加したことを示す。
実施例５
この実施例は、肺癌の説明及びＣＢＰ５０１を用いた試験を含む。
肺癌は、欧米諸国において成人の癌死亡の主要原因である。米国では、２００９年に２１９，４４０人の患者が新たに診断され、この疾患によって１５９，３９０人が死亡し、これは、癌による死亡全体の約２９％を占める（例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ ｃａｎｃｅｒ ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｃａｎｃｅｒ Ｆａｃｔｓ＆Ｆｉｇｕｒｅｓ ２００９を参照のこと）。新たな癌患者全体の８７％が、非小細胞癌（ＮＳＣＬＣ）組織学であり、それには３つの主要なタイプ：腺癌、扁平上皮癌（類表皮）癌、及び大細胞癌がある（Ａｍｅｒｉｃａｎ ｃａｎｃｅｒ ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｃａｎｃｅｒ Ｆａｃｔｓ＆Ｆｉｇｕｒｅｓ ２００９）。手術技術及び併用療法の向上にもかかわらず、ＮＳＣＬＣと診断された患者の予後は不良である。疾患がまだ局在化している、早期に検出された患者については、５年生存率は４７％であるが、ＮＳＣＬＣ患者の大部分（６８％）（例えば、ＡＪＣＣ Ｃａｎｃｅｒ Ｓｔａｇｉｎｇ Ｍａｎｕａｌ．（Ｆｌｅｍｉｎｇ ＩＤ，ｅｄｉｔｏｒ．Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ：Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ−Ｒａｖｅｎ；２００２）を参照のこと）は、進行疾患（ＩＩＩ期）又は転移性疾患（ＩＶ期）と診断され、化学療法を必要とする。ＩＩＩ期の患者の場合、５年生存率は８．４％、ＩＶ期の場合、１．６％であり、進行ＮＳＣＬＣの患者の大部分は、２年以内に病死する（例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ ｃａｎｃｅｒ ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｃａｎｃｅｒ Ｆａｃｔｓ＆Ｆｉｇｕｒｅｓ ２００９；ＡＪＣＣ Ｃａｎｃｅｒ Ｓｔａｇｉｎｇ Ｍａｎｕａｌ．：Ｆｌｅｍｉｎｇ ＩＤ，ｅｄｉｔｏｒ．Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ：Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ−Ｒａｖｅｎ；２００２．を参照のこと）。患者の生存及びクオリティオブライフの有意な向上をもたらすことができる新規治療薬の導入は、アンメットニーズである。
パフォーマンスステータス（Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｓｔａｔｕｓ）が良好な進行期（ＩＩＩｂ又はＩＶ）ＮＳＣＬＣを有する患者は、化学療法から利益を得ることができる（例えば、Ｓｏｕｑｕｅｔ，ＰＪ．，ｅｔ ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ ３４２：１９−２１，１９９３；Ｍａｒｉｎｏ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｓｔ １０６：８６１−８６５，１９９４；Ｍａｒｉｎｏ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ ７６：５９３−６０１，１９９５；Ｈｅｌｓｉｎｇ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ３４：１０３６−１０４４，１９９８；Ｃｕｌｌｅｎ，ＭＨ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ １７：３１８８−３１９４，１９９９；Ｐｆｉｓｔｅｒ，ＤＧ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２２：３３０−３５３，２００４を参照のこと）。化学療法２剤併用療法（ｄｏｕｂｌｅｔｓ）は、単剤又は化学療法なしと比較して、生存率を改善することが証明されている（例えば、Ｂｕｎｎ，ＰＡ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２０：２３Ｓ−３３Ｓ，２００２を参照のこと）。進行ＮＳＣＬＣにおいて現在推奨される第１選択の化学療法レジメンとしては、標準レジメンとしてゲムシタビン、ビノレルビン、又はタキサン（パクリタキセル若しくはドセタキセル）、イリノテカン、エトポシド、ビンブラスチン、及び／又はペメトレキセドと組み合わせた白金化合物（シスプラチン［ＣＤＤＰ］又はカルボプラチン）がある（Ｐｆｉｓｔｅｒ，ＤＧ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２２：３３０−３５３，２００４）。
ランダム化試験では、様々な白金−２剤併用療法が、レジメンに毒性、利便性及び費用に関して、若干の違いはあるものの、全て同様の効力を示すことが証明されている。結果から、全奏効率（ＯＲＲ）が１７〜３２％、生存期間中央値が７〜１０ヵ月、また１年生存率が３０〜４５％であることが判明した（例えば、Ｓｃａｇｌｉｏｔｔｉ，Ｇ．，ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｍｉｎ Ｏｎｃｏｌ ３２：Ｓ５−Ｓ８，２００５；Ｓｃｈｉｌｌｅｒ，ＪＨ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ３４６：９２−９８，２００２；Ｓｃａｇｌｉｏｔｔｉ，Ｇ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２０：４２８５−４２９１，２００２；Ｋｅｌｌｙ，Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ １９：３２１０−３２１８，２００１；Ｆｏｓｓｅｌｌａ，Ｆ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２１：３０１６−３０２４，２００３を参照のこと）。
３剤化学療法のほとんどの例は、これまでのところ、さらなる生存率の増加をもたらしておらず、毒性を増している。しかし、カルボプラチン＋パクリタキセル＋ベバシズマブについての近年の研究は、ある程度の生存利益を示しており（例えば、Ｓａｎｄｌｅｒ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ３５５：２５４２−２５５０，２００６）、毒性が重複しないターゲティング薬剤の添加は、２剤併用化学療法を改善し得ることを示唆している。化学療法の有益性を最適化しようとする積極的な試みが、抗腫瘍活性を予測する分子マーカの使用によって進められている。ＮＳＣＬＣにおける化学療法の効力を予測する遺伝子が、明らかになりつつある（例えば、Ｂｅｐｌｅｒ，Ｇ．，ｅｔ ａｌ．，ＡＳＣＯ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎａｌ Ｂｏｏｋ：３５０−３５２，２００８；Ｓｏｍｍｅｒｓ，Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ａｍ Ｓｏｃ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２６ ２００８を参照のこと）。中でも、注目すべきは、ＥＲＣＣ１、ＢＲＣＡ１／２、ＲＲＭ１及びＴＳなどのマーカである（表９）。
実施例６
この実施例は、特定のヒト患者亜集団が、ペプチド及び化学療法（核酸損傷）薬の併用に好都合に応答することを示すデータの説明を含む。意外なことに、データは、ＣＢＰ５０１による治療前に、血液１立方ミリメートル当たり１０，０００個未満の白血球（ＷＢＣ）を有する非扁平上皮非小細胞肺癌ＮＳＣＬＣ）に関する臨床試験の患者集団の亜群が、ＣＢＰ５０１の投与による利益を受けたことを明らかにしている。
ＣＢＰ５０１は、完全にＤ−アミノ酸からなる合成ドデカペプチドである（図１３）。これは、ＴＡＴ−Ｓ２１６Ａの進化形態であり、これは、フローサイトメトリーに基づくＤＮＡ含量アッセイにおいて、ＤＮＡ損傷剤による処置に応答して、Ｇ２（４Ｎ）細胞の蓄積を低減するようにその活性が最適化された。
合計７８人の患者におけるＣＢＰ５０１を調べるために、第Ｉ相用量範囲探索及び薬物動態試験の２つを実施した。すなわち、１日目、８日目、及び１５日目に、６０分の静脈注入として、ＣＢＰ５０１の単剤療法試験を４週間毎に繰り返し、３週間に１回、シスプラチンとの併用療法試験を実施する（例えば、Ｓｈａｐｉｒｏ，ＧＩ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．Ｍａｙ １５；１７（１０）：３４３１−４２，２０１１）。
第Ｉ相単剤試験（ＣＢＰ０４−０１）：これは、ヒトにおける最初の単剤第Ｉ相用量漸増試験であり、進行した固形腫瘍を有する患者集団において、２８日毎に３回の注射（１−８−１５日）のレジメンを調べた。合計６８サイクルを投与し、患者１人当たりの数中央値は、２であった（１〜８の範囲）。２人の患者は、病勢不変（ｓｔａｂｌｅ ｄｉｓｅａｓｅ）で、７サイクルの治療に達したが、その一人は、膵臓癌を有し、もう一人は、卵巣癌を有していた。患者の大部分（８７％）は、疾患の進行のために試験を中止した。毒性によって中止した患者はいなかった（例えば、Ｓｈａｐｉｒｏ，ＧＩ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．Ｍａｙ １５；１７（１０）：３４３１−４２，２０１１を参照のこと）。
シスプラチンと併用したＣＢＰ５０１の第Ｉ相試験（ＣＢＰ０６−０１）：この第Ｉ相試験の主な目標は、２１日毎に１回併用して投与した場合の、ＣＢＰ５０１及びシスプラチンのＭＴＤ及びＲＤを決定することであった。まず、ＣＢＰ５０１を１時間の注入として投与し、処置開始から２時間後にシスプラチンを投与した。また、第Ｉ相単剤試験について開発された同じレジメンに従って、アレルギー反応の予防処置も患者に施した（ロラタジン、デキサメタゾン、ラニチジン及びジフェンヒドラミン）。
合計４８人の患者を米国の３つの医療施設で処置し、合計１８２サイクルを投与し、患者１人当たりの数中央値は、４であった（１〜１３の範囲）。ＣＢＰ５０１は、３．６ｍｇ／ｍ2〜３６．４ｍｇ／ｍ2の用量の範囲で調べた。試験した最も高い用量レベルは、ＣＢＰ５０１が３６．４ｍｇ／ｍ2、シスプラチンが７５ｍｇ／ｍ2であった。この用量レベルで、６人の患者のうち２人は、治験担当医師により用量制限として判断されたアレルギー反応を経験した（グレード３）。ＭＴＤは、そのすぐ下の用量レベル、すなわちＣＢＰ５０１：２４．３ｍｇ／ｍ2、シスプラチン：７５ｍｇ／ｍ2とみなされた。数人の患者において、わずかな活性の兆候が記録されている（例えば、Ｓｈａｐｉｒｏ，ＧＩ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．Ｍａｙ １５；１７（１０）：３４３１−４２，２０１１を参照のこと）。
無機白金配位錯体である、シスプラチン（シス−ジアミノジクロロプラチナム）は、ＤＮＡのグアニン及びアデニン残基のＮ７位で優先的に反応して、多様な一官能基及び二官能基付加物を形成する。これらの付加物は、複製及び転写などの両ＤＮＡ鎖の分離を必要とする様々な細胞プロセスを妨害することにより、薬物の細胞傷害性に寄与する。
シスプラチンは、精巣及び卵巣癌に対するその確実な抗腫瘍活性のために、多様な腫瘍に対して臨床的に評価されている。その承認以来、シスプラチンは、極めて重要な化学療法薬となり、単独で、又は他の抗腫瘍薬と組み合わせて広く使用されている。シスプラチンはまた、例えば、肺癌、膀胱癌並びに頭部及び頸部癌などの他の腫瘍タイプを呈する患者における実質的な緩和効果も付与することが知られており、これらの疾患に使用されるほとんどの化学療法レジメンに含まれている。
ペメトレキセド二ナトリウムは、ユニークな６−５融合ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン核を有する、構造的に新規の抗葉酸剤であり、チミジレートシンターゼ、ジヒドロ葉酸レダクターゼ、及びグリシンアミドリボヌクレオチドホルミルトランスフェラーゼのような、細胞増殖及び分裂に必要な基質の合成に関与する葉酸依存性酵素の機能を阻害する（例えば、Ｔａｙｌｏｒ，ＥＣ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ３５：４４５０−４４５４，１９９２；Ｓｃｈｕｌｔｚ，ＲＭ．，ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １９：４３７−４４３，１９９９を参照のこと）。
ペメトレキセドは、肺、乳房、結腸、肋膜、膵臓、胃、膀胱、頭部及び頸部、並びに子宮頸部を含む、非常に多様な腫瘍タイプにおいて、臨床試験で活性を示している。シスプラチンとペメトレキセドの併用は、その疾患が、切除不能であるか、或いは、根治目的の手術の候補ではないかのいずれかのＭＰＭ患者の治療のために、２００４年２月４日にＦＤＡにより承認された。
ＮＳＣＬＣを有する化学療法未処置患者における第ＩＩ相試験では、シスプラチン又はカルボプラチンと併用したペメトレキセドは、他の白金２剤併用と比較して、有効な結果をもたらした（例えば、Ｓｃａｇｌｉｏｔｔｉ，Ｇ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １１：６９０−６９６，２００５；Ｚｉｎｎｅｒ Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ １０４：２４４９−２４５６，２００５；Ｍａｎｅｇｏｌｄ，Ｃ．，ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ Ｏｎｃｏｌ １１：４３５−４４０，２０００；Ｓｈｅｐｈｅｒｄ，ＦＡ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ ９２：５９５−６００，２００１を参照のこと）。加えて、ペメトレキセドは、優れた安全性プロフィール及び好都合な投与スケジュールを有する。
最近のランダム化第ＩＩＩ相試験では、非劣性設計試験において、最大６サイクルまで３週間毎にシスプラチンとゲムシタビン、又はシスプラチンとペメトレキセドで処置したＩＩＩ期若しくはＩＶ期ＮＳＣＬＣを有する、１７２５人の化学療法未処置患者同士の間で全生存率（ＯＳ）を比較した（例えば、Ｓｃａｇｌｉｏｔｔｉ，Ｇ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２６：３５４３−３５５１，２００８；Ｐｉｍｅｎｔｅｌ，Ｆ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ａｍ Ｓｏｃ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２６（Ｐａｒｔ Ｉ ｏｆ ＩＩ）：４４８ｓ，２００８，（Ｓｕｐｐｌ．１５Ｓ）（ａｂｓｔｒ）♯４４８ｓを参照のこと）。シスプラチンとペメトレキセドの場合のＯＳは、シスプラチンとゲムシタビンと比較して遜色なかった（生存率中央値は、両処置について１０．３ヵ月）。ＯＳは、腺癌患者（ｎ＝８４７；それぞれ、１２．６ヵ月及び１０．９ヵ月）及び大細胞癌組織学（ｎ＝１５３；それぞれ、１０．４ヵ月及び６．７ヵ月）を有する患者では、シスプラチンとペメトレキセドの方が、シスプラチン／ゲムシタビンに対して統計的に優れていた。シスプラチンとペメトレキセドの場合、評価グレード３又は４の好中球減少、貧血、及び血小板減少；発熱性好中球減少；並びに脱毛は、シスプラチン／ゲムシタビン処置群より有意に低かったが、グレード３若しくは４の吐き気は、より一般的であった。
患者及び方法：
臨床試験設計：オープンラベル、多施設、第ＩＩ相ランダム化、２群、比較試験。このプロトコルで、ＣＢＰ５０１と共に、又はこれを用いずに全用量シスプラチン及びペメトレキセドを評価した。患者を１：１の比で、ペメトレキセド、シスプラチンとＣＢＰ５０１（Ａ群）又はペメトレキセドとシスプラチン（Ｂ群）にランダム化した。ランダム化は、ベースライン病期（ＩＩＩｂ対ＩＶ）、脳への転移の存在、並びに患者がベバシツマブ療法に適格であるか否かに従って層別化した。
治験機関／試験場所：米国、ロシア、カナダ、ブラジル、アルゼンチン及びペルーにおける約４０の施設。
試験の目的：
第１：局所的に進行した（悪性胸水若しくは心膜液を伴うＩＩＩＢ期）又は転移性（ＩＶ期）非扁平上皮ＮＳＣＬＣを有する患者において、ＣＢＰ５０１を含む又は含まないシスプラチン及びペメトレキセドの効力、すなわち無増悪生存率を比較すること。
第２：試験レジメンの安全性プロフィール、及び全生存率などの無増悪生存率以外の効力パラメータを特性決定すること。
試験集団：
参加基準：
１．いずれかの具体的試験手順の開始前の、署名されたインフォームドコンセントの取得。
２．以前に化学療法又は他の全身治療を受けていない、胸水若しくは心膜液を伴うＩＩＩＢ期又はＩＶ期の、非扁平上皮非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）（根治的切除が不可能な）の組織学的又は細胞学的に確認された診断。
３．固形がんにおける効果判定基準（Ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｃｒｉｔｅｒｉａ ｉｎ Ｓｏｌｉｄ Ｔｕｍｏｒｓ）（ＲＥＣＩＳＴ）に従う少なくとも１つの一次元的に測定可能な病変
４．年齢が少なくとも１８歳の男性若しくは女性患者
５．ＥＣＯＧパフォーマンスステータス（ＰＳ）：０〜１
６．平均余命＞３ヵ月
７．以前の局所放射線療法は、それが、試験薬剤の最初の投与の≧３週間前に完了していれば、許容される
８．疼痛管理のための既存の骨病変に対する同時緩和放射線療法は許容される
９．以前の手術は、それが、試験薬剤の最初の投与の少なくとも４週間前に実施され、かつ、患者が完全に回復していれば許容される
１０．以下を含む適切な器官機能：
・骨髄：白血球（ＷＢＣ）数≧４×１０９／Ｌ、絶対好中球数（ＡＮＣ）≧１．５×１０９／Ｌ、血小板数≧１００×１０９／Ｌ、ヘモグロビン≧９ｇ／ｄＬ
・肝機能：ビリルビン≦１．５×正常値上限（ＵＬＮ）、アスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ／ＳＧＯＴ）及びアラニントランスアミダーゼ（ＡＬＴ／ＳＧＰＴ）≦２．５×ＵＬＮ（又は肝臓転移が存在する場合には、≦５×ＵＬＮ）、ＩＮＲ≦１．５×ＵＬＮ、アルブミン≦３．０ｇ／ｄＬ
・腎機能：血清クレアチニン≦１．５ｍｇ／ｄＬ又はクレアチニンクリアランス≧４５ｍＬ／分（コッククロフト・ゴールト（Ｃｏｃｋｃｒｏｆｔ ａｎｄ Ｇａｕｌｔ）式によって計算）
１１．妊娠可能な女性は、妊娠検査が陰性であり、かつ、試験前の４週間及び最後の試験薬投与後４カ月の間、治験機関により承認された少なくとも１つの避妊形態を使用しなければならない。本試験の目的のために、妊娠の可能性は、「閉経後少なくとも１年経過したか、又は手術により不妊となった場合を除く、全ての女性患者」と定義する
１２．男性患者は、試験期間中、及び最後の試験薬投与後４カ月の間、治験機関により承認されたバリア避妊の形態を使用しなければならない
１３．処置及びフォローアップに協力することができること。
除外基準：
１．試験に参加する前に、骨髄の３０％超に対する放射線療法
２．腫瘍サンプル中の神経内分泌特徴の存在
３．化学療法、新規生物学的療法（小分子、抗体）、免疫療法による以前の治療
４．測定可能な病変の非存在
５．進行中若しくは活動性の感染症、症状性うっ血性心不全、不安定狭心症、症状性又はコントロール不良不整脈、コントロール不良血栓性若しくは出血性障害、又は治験担当医師の所見でいずれか他の重篤なコントロール不良の医学的障害
６．試験参加前５年以内の、別の悪性疾患の何らかの病歴（治癒した皮膚基底細胞癌又は治癒した子宮頸部上皮内癌を除く）
７．患者のコンプライアンスを妨げるいずれかの有意な中枢神経系（ＣＮＳ）又は精神障害の存在
８．ＮＣＩ−ＣＴＣＡＥ Ｖｅｒｓｉｏｎ ３に従い、＞グレード１の末梢神経障害のエビデンス
９．試験参加前２８日以内の、いずれか他の検査機関による処置、又は別の臨床試験への参加
１０．妊娠又は授乳中の患者、又は適切な避妊を用いずに妊娠している可能性がある全ての患者
１１．既知のＨＩＶ、ＨＢＶ、ＨＣＶ感染
１２．症状性脳転移の存在。脳転移患者は、以下：
・根治的治療の完了から少なくとも２週間の間、局所治療（手術若しくは放射線）後の安定な神経学的状態を有し、かつ、試験参加前の１週間の間、コルチコステロイドの使用を中止していなければならない。
・神経学的及び他のＡＥの評価と混同し得る神経機能障害がない状態でなければならない
１３．葉酸、ビタミンＢ１２若しくはコルチコステロイドを摂取することができないか、摂取を嫌がる
１４．５日（ピロキシカムなどの長期作用薬の場合には８日）間、１日≦１．３グラムのアスピリン、又はアスピリン以外の他の非ステロイド性抗炎症剤を中断することができない
１５．有意な体重減少（試験前の６週間で≧１０％）
１６．試験参加前に、排液又は他の方法により管理することができない、（診察により）臨床的に有意な三間隙（ｔｈｉｒｄ ｓｐａｃｅ）体液（例えば、腹水又は胸水）収集物の存在。
患者の数：
合計１９５人の患者を処置し、そのうち９７人の患者は、ＣＢＰ５０１、シスプラチン及びペメトレキセドで処置し（Ａ群）、９８人の患者は、ペメトレキセド及びシスプラチンで処置した（Ｂ群）。
試験薬剤：
調製：ＣＢＰ５０１ペプチド酢酸塩（ペプチド塩基単位）を含む滅菌凍結乾燥粉末が入った単一用量バイアル（２０ｍｇ）に、注射用のＣＢＰ５０１を導入した。投与のために、バイアル内容物を、５％デキストロース注射液（Ｄｅｘｔｒｏｓｅ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ，ＵＳＰ）中で再構成した後、５％デキストロース注射液（Ｄｅｘｔｒｏｓｅ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ，ＵＳＰ）の１００ｍＬ ｉ．ｖ．バッグに添加した。
ペメトレキセド：市販されているペメトレキセド製剤を使用し、注射用の２０ｍＬの０．９％塩化ナトリウム溶液で再構成した後、１００ｍＬまで希釈した。
シスプラチン：市販のシスプラチン製剤を用いて、投与のために、２５０ｍＬの通常生理食塩水で希釈した。
用量レジメン及び投与経路：
ＣＢＰ５０１、ペメトレキセド及びシスプラチンを、３週間毎に最大６サイクルにわたって、同じ日（１日目）に投与した。１サイクルは、３週間（２１日）とみなした。
Ａ群
１．ＣＢＰ５０１ ２５ｍｇ／ｍ2を１時間の静脈注入として投与した。
２．ＣＢＰ５０１注入の直後、ペメトレキセド５００ｍｇ／ｍ2を１０分にわたる静脈注入として投与した。
３．ペメトレキセド注入の直後、シスプラチン７５ｍｇ／ｍ2を１時間の静脈注入として投与した。
Ｂ群
１．ペメトレキセド５００ｍｇ／ｍ2を１０分にわたる静脈注入として投与した。
２．ペメトレキセド注入の直後、シスプラチン７５ｍｇ／ｍ2を１時間の静脈注入として投与した。
各併用剤は、中心又は末梢静脈アクセスを介して投与した。
予防的処置：
参加した患者全員が、以下を受けた：
１．ビタミン剤：全ての患者は、毎日低用量の経口葉酸製剤又は葉酸とマルチビタミンを摂取するよう指示された。最初のペメトレキセド投与前の７日間、少なくとも５回の毎日用量の葉酸を摂取しなければならず、さらに、投与は、全処置コースを通じて、また最後のペメトレキセドの投与後２１日にわたって継続すべきである。提案される葉酸の用量は、３５０〜１０００μｇの範囲であった。患者はさらに、ペメトレキセドの最初の投与の前週、その後３サイクル毎に１回（１）のビタミンＢ１２の筋内注射を受けた。後のビタミンＢ１２の注射は、ペメトレキセドと同じ日に実施した場合もある。ビタミンＢ１２の用量は、１０００μｇであった。
２．処置投与の前日、当日、及びその翌日に、１日２回デキサメタゾン４ｍｇの経口投与。
３．予防的制吐処置：標準的処置施設プロトコルに従い、５ＨＴ３アンタゴニスト＋ステロイドから構成される。患者には、必要に応じて、さらなる経口制吐薬を投与した。
・心血管障害のない患者には、以下の水和（ｈｙｄｒａｔｉｏｎ）プロトコルが提案された。治験機関で常用的に投与される同様のプロトコルを実施した場合もある：
１．患者は、２０ｍＥｑ ＫＣｌ／リットル及び１ｇ ＭｇＳＯ４／リットルで、合計１．５〜２．０リットルの水和（５％デキストロース又は１／２正常生理食塩水）を受け、流速は５００ｍＬ／時であった。
２．患者は、１時間の水和注入を受けた後、１２．５ｇのマンニトールをＩＶプッシュ（ｐｕｓｈ）により投与した。
３．その後、水和注入を継続しながら、シスプラチン注入（１ｍｇ／ｍＬで正常生理食塩水と混合）を１時間かけて注入した。
４．水和の間、尿量を２５０ｍＬ／時に維持する必要がある場合、追加のマンニトール（ＩＶプッシュ（ｐｕｓｈ）により、１２．５〜５０．０）を投与した。
・ＣＢＰ５０１で処置する患者（Ａ群）については、ヒスタミン放出による症状の発生及び重症度を軽減するために、続いて以下の予防的レジメンを受けることが推奨された：
１．各ＣＢＰ５０１注入前に、ジフェンヒドラミン（ＤＰＨ）５０ｍｇ ＩＶ及びラニチジン５０ｍｇ ＩＶ（又は別のヒスタミンＨ２アンタゴニスト）。
２．ＣＢＰ５０１投与の前日（−１日目）、当日（０日目）及び翌日（１日目）にロラタジン（１０ｍｇ）ＰＯ。
患者当たりの試験期間：
患者は、以下の事項のいずれかが早期に認められない限り、最大６サイクルの試験処置を受けるものとする：
・病勢の進行
・許容できない毒性
・同意の撤回
・深刻なプロトコル違反
・処置の遅延＞２週間（患者に対する利益が見込まれるか、知覚される場合を除く）。
治療の中止後、患者は、病勢進行、又は別の全身抗癌療法の開始まで８週間毎に、その後、死亡まで６ヵ月毎に追跡調査する。
インフォームドコンセント
治験機関は、いずれかの具体的スクリーニング手順を実施する前に、患者に対して、試験の目的及び方法、並びに予想される効果及び有害な反応を十分に説明した。患者には、情報シートを提供し、試験の詳細について尋ね、及び参加するかどうかを決定する十分な時間及び機会が与えられた。患者、及び患者とインフォームドコンセントについて相談する人が、同意書に署名し、日付を記した。
治験機関は、患者が、試験への参加を拒否すること、また、いつでも、あらゆる理由で試験を止めることは完全に自由であることを説明した。同様に、治験機関及び／又はスポンサーも、安全又は行政上の理由で、いつでも患者に試験を止めさせることが自由であった。患者の人権保護に必要なその他のあらゆる要件は、現行のＣＦＲ（２１、３１２Ｄ部、５０及び５６）及びＩＣＨ（ＩＣＨ Ｅ６ １９９７）ＧＣＰガイドライン並びに１９６４年のヘルシンキ宣言（Ｄｅｃｌａｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｈｅｌｓｉｎｋｉ）（２００４年に東京で明確化）に従って説明された。
患者数の割り当て
処置群への患者のランダム化及び割り当ては、施設ごとに管理された。
統計分析：
Ｃｏｘ比例ハザードモデル（Ｃｏｘ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎａｌ ｈａｚａｒｄｓ ｍｏｄｅｌ）を使用して、２つの処置群同士のＰＦＳについてのハザード比（ＨＲ）を推定した。このモデルは、１因子として処置群、並びにランダム化層別化因子を含んだ。以下の共変数を調べた：年齢、性別、人種（白人／非白人）、以前の手術／処置（あり／なし）、以前の放射線療法（あり／なし）、Ｘ線の読影（正常／異常）、ＥＣＧ解釈（正常／異常）、骨スキャン（正常／異常）、及び診断からの時間。年齢、及び診断から試験処置までの時間などの連続変数は、より良好なモデル適合性が得られれば、２つ又はいくつかのクラスの値を指定することにより、カテゴリー変数に変換した場合もある。以下の基準を用いて、段階的回帰アルゴリズムにより、説明変数を入力した：変数は、モデルに入力するためには、０．２５レベルで、またモデル内に残るためには、０．１５レベルで、有意でなければならない。最終モデルの場合、ハザード比の点推定（ｐｏｉｎｔ ｅｓｔｉｍａｔｅ）を９５％ＣＩと一緒に提供した。
スクリーニング時にＷＢＣ＜１００００μＬを有する患者について、亜群分析を実施した。さらに別の亜群分析を、分析対象の各患者についての生データと共に、ソフトウェアＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ５を用いて実施した。
効力結果：
無増悪生存期間（ＰＳＦ）についての他の共変数を探索しないＣｏｘ比例ハザードモデル分析は、Ａ群（ＣＢＰ５０１を用いる群）の方が、Ｂ群より高いハザードを有する（ＨＲ＝１．２０［０．８８、１．６５］）ことを示したが、これは、統計的に有意ではなかった（Ｐ＝０．２５）。他の共変数を探索する同じモデルもまた、Ａ群が、Ｂ群より高いハザードを有する（ＨＲ＝１．２１［０．８５、１．７３］）ことを示したが、これは、統計的に有意ではなかった（Ｐ＝０．３０）。
スクリーニング時にＷＢＣ＜１００００／μＬを有する患者について、他の共変数を探索しないＣｏｘ比例ハザードモデル分析は、Ａ群の方が、Ｂ群より高いハザードを有する（ＨＲ＝１．０４［０．７３、１．４９］）ことを示したが、これは、統計的に有意ではなかった（Ｐ＝０．８１）。他の共変数を探索する同じモデルもまた、Ａ群が、Ｂ群より高いハザードを有する（ＨＲ＝１．０６［０．７１、１．５９］）ことを示したが、これは、統計的に有意ではなかった（Ｐ＝０．７８）。
ＰＦＳのハザード比は、両方の分析でスクリーニング時に、ＷＢＣ＜１００００／μＬを有する患者に分析を限定した場合、Ａ群について向上することが認められた（表Ａ、Ｂ）。
全処置集団に対する全生存率（ＯＳ）についてのＣｏｘ比例ハザードモデル分析
他の共変数を探索しない、及び探索する場合のいずれも、Ａ群の方が、Ｂ群より低いハザードを有した（ＨＲ＝０．９６及び０．７７）。この差は統計的に有意ではなかった（Ｐ＝０．８２及び０．２５）。
スクリーニング時にＷＢＣ＜１００００／μＬを有する患者に対するＯＳについてのＣｏｘ比例ハザードモデル分析
処置集団において、スクリーニング時にＷＢＣ＜１００００μＬを有する患者のＯＳについては、他の共変数を探索しない、及び探索する場合のいずれも、Ａ群の方が、Ｂ群より低いハザードを有した（ＨＲ＝０．８０及び０．６９）；この差は統計的に有意ではなかった（Ｐ＝０．３２及び０．１６）。
ＯＳのハザード比は、全ての分析でスクリーニング時にＷＢＣ＜１００００／μＬを有する患者に分析を限定した場合、Ａ群について向上することが認められた（表Ｃ、Ｄ）。
図１４は、全ての処置患者におけるスクリーニング時（ベースライン）のＷＢＣに対する、カプラン・マイヤー（Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｙｅｒ）生存率曲線、ＯＳ中央値及びハザード比を示す。ハザード比は、カットオフレベルが低減し、カットオフレベルとしてＷＢＣ８０００／μＬでピークに達することから、向上している。
図１７を参照にして、ヒト末梢血から、Ｈｅｔａｓｅｐ（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ ｔｅｃｈｎｏｌ．）で赤血球の除去後、ＥａｓｙＳｅｐ好中球濃縮キット（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ ｔｅｃｈｎｏｌ．）で好中球を精製した。精製済み好中球（１×１０6細胞／ウェル、２４ウェルプレートを、１μＭのＣＢＰ５０１と一緒に、又はこれを用いずに１５分間培養し（ＥＤＴＡの添加により反応を停止した）、１ｎＭ ＰＭＡ、３若しくは１０μＭ Ａ２３１８７、又は１００若しくは１０００ｎｇ／ｍｌのＬＰＳと一緒にさらに４時間培養した。これらのウェルを２回洗浄してから、ＤＮアーゼと一緒に１５分間インキュベートし、上清を回収し、エラスターゼ基質と一緒に２時間インキュベートした後、に分析して、エラスターゼ活性を検出した。
図１８を参照にして、８週齢のＣ５７ＢＬ／６マウスに対し、ジフェンヒドラミンの注射の３０分前に、ＬＰＳを２．５、５、若しくは１０ｕｇ／ｍｌで静脈内注射するか、又はしなかった。ジフェンヒドラミンの注射の３０分後に、ＣＢＰ５０１（７．５ｍｇ／ｋｇ）を注射した。ＣＢＰ５０１又はモック注射から３時間後に採取した血液から分離した血漿中でＥＬＩＳＡによりトロンビン／抗トロンビン複合体を定量した。４匹のマウスから各条件においてデータを得た。
図１９を参照にして、０．３２ｕＭのＰＭＡによりヒト末梢血単核細胞を刺激し、４８時間のＰＭＡ刺激後、全懸濁細胞を除去することによって、マクロファージを取得した。細胞をさらに５０ｎｇ／ｍｌのＩＦＮ−γ、１０ｎｇ／ｍｌのＬＰＳと一緒にインキュベートしてＭ１表現型を取得し、２０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−４とインキュベートして、Ｍ２マクロファージを取得した。いずれの処置もＣＢＰ５０１を用いて、又は用いずに行った。蛍光標識ビーズ及びフローサイトメトリーを用いて、食作用活性をモニターした。
図２０を参照にして、マクロファージ細胞系ＲＡＷ２６４．７を０．１又は１μＭのＣＢＰ５０１と一緒に、又はこれを用いずに３〜６時間インキュベートした後、１０又は１０００ｎｇ／ｍｌのＬＰＳと一緒に、又はこれを用いずに４時間、さらにインキュベートした。放出されたＴＮＦをＥＬＩＳＡにより測定した。
ＣＢＰ５０１は、前臨床試験（Ｓｈａ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．６：１４７（２００７））及び第Ｉ相臨床試験（Ｓｈａｐｉｒｏ，Ｇ．Ｉ．，ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．（２０１１））において、有効な抗腫瘍剤としての可能性を示した。ＣＢＰ５０１は、例えば、細胞周期Ｇ２チェックポイント抑止（Ｓｈａ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．６：１４７（２００７））及び腫瘍細胞中の白金濃度により、又はカルモジュリン阻害（Ｍｉｎｅ，Ｎ．，ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．１０：１９２９（２０１１））を通して、２つの作用機構下で作動し得る。
本明細書で立証されるように、意外なことには、非扁平上皮非小細胞肺癌患者に対する第ＩＩ相臨床試験の患者集団についての亜群分析によって、スクリーニング時に高い白血球数（ＷＢＣ）を有する群と、正常な又は低いＷＢＣを有する群との間で、患者群の生存率に統計的に有意な（ｐ＜０．０００１）差があることがみいだされた。
さらに、本明細書に記載の結果により示されるように、ＣＢＰ５０１は、腫瘍細胞に対する直接の作用以外に、患者が、マクロファージによるＮＥＴのクリアランス／食作用の低下によって炎症を起こした場合、カルモジュリンを阻害して、好中球細胞外トラップ（ＮＥＴ）を増大することにより、マクロファージなどの腫瘍微小環境にも作用し得る。これは、深部静脈血栓症（ＤＶＴ）及び転移を有する可能性を増大し、これによって、患者の生存に有害な影響を及ぼし得る。反対に、患者におけるＭ２型マクロファージの阻害は、腫瘍増殖、血管新生、転移及び腫瘍免疫回避（これらの全てが、腫瘍転移を促進し、これにより、患者の生存が短くなり得る）に対するマクロファージの正の作用を阻止し得る。
この観察結果と一致して、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのＣＢＰ５０１処置による活性化好中球のＮＥＴ形成の増大、及びＬＰＳ刺激マウスにおけるトロンビン／抗トロンビン複合体形成の増大が証明されている。ＣＢＰ５０１によるサイトカイン分泌並びにＭ１及びＭ２型両方のマクロファージの食作用の阻害も明らかにされている。
臨床試験では、腫瘍細胞に対するシスプラチンの細胞傷害性を増強することによって作用するＣＢＰ５０１が判明したが、本明細書の結果は、非扁平上皮ＮＳＣＬＣ患者に対する第ＩＩ相試験についてなされた亜群分析によって予想外の発見を明らかにし、これは、ＣＢＰ５０１によるレジメンに応答して、臨床試験のスクリーニング時に高い白血球数（ＷＢＣ）を有する患者群の生存はより短く、正常な又は低いＷＢＣを有する他の患者群は、より長く生存したことを示し、この差は、ログランク（Ｌｏｇ−ｒａｎｋ）（Ｍａｎｔｅｌ−Ｃｏｘ）検定による全生存率に関するカプラン・マイヤー曲線に基づき算出されたｐ値が０．０００１未満であることから、統計的に極めて有意であった。
従って、意外にも、処置前に正常な又は低いＷＢＣを有する患者は、ＣＢＰ５０１処置から利益を受けるが、高いＷＢＣを有する患者は、同じ処置により有害な影響を受ける場合があることが判明した。カルモジュリンに対するＣＢＰ５０１の阻害活性は、マクロファージ、白血球及びリンパ球などの多様な微小環境細胞に対する作用が、それらの活性を阻害又は調節して、二方向性の結果を誘発し得たことを示唆している。何故なら、例えば、マクロファージを単に阻害することによって、Ｍ１型マクロファージを阻害した場合には、患者の生存に有害に作用し得、Ｍ２マクロファージを阻害した場合には、患者の生存を延長させ得るからである。
カルモジュリン阻害剤は、マクロファージ（Ｈｏｒｗｉｔｚ，Ｓ．Ｂ．，ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．９１：７９８（１９８１）；Ｔａｋｅｎａｗａ，Ｔ．，ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．１５：２０８（１９８２）；Ｗｅｓｔｒａ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ．ＢＭＣ Ｍｕｓｃｕｌｏｓｋｅｌｅｔ．Ｄｉｓｏｒｄ．３０：１１（２０１０））、白血球（Ｎａｃｃａｃｈｅ，Ｐ．Ｈ．，ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．９７（１）：６２（１９８０）；Ｔａｋｅｓｈｉｇｅ，Ｋ．，ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．９９（２）：４８４（１９８１）；Ｊｏｎｅｓ，Ｈ．Ｐ．，ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．７１４（１）：１５２（１９８２）；Ｊｏｎｅｓ，Ｈ．Ｐ．，ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．０１５：３８９（１９８４）；Ｖｅｒｐｌｏｅｇｅｎ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２６９（１８）４６２５（２００２））及びリンパ球（Ｓａｌｉｓｂｕｒｙ，Ｊ．Ｌ．，ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ １２：２９４（１９８１）；Ｂｏｕｂａｌｉ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．５２（２）：５１（２０１２））の複数の機能を阻害することが報告されている。高いＷＢＣを有する患者は、Ｍ１マクロファージ（これらが炎症性であるため）を有する傾向があり、正常な又は低いＷＢＣを有する腫瘍患者は、Ｍ２マクロファージを有する傾向がある（Ｈａｏ，Ｎ．，ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎ．Ｄｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０１２））。また、高いＷＢＣを有する患者は、有意な数の癌患者の死因である深部静脈血栓症（ＤＶＴ）に、より罹患しやすいこともわかっている（Ｐａｂｉｎｇｅｒ，Ｉ．，ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ １２２：１２（２０１３）；Ｂｌｉｘ，Ｋ．，ｅｔ ａｌ．ＰＬＯＳ Ｏｎｅ ４：８（２０１３）；Ｗａｎｇ，Ｔ．Ｆ．，ｅｔ ａｌ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｒｅｓ．１３３（１）：２５（２０１４））。これらの患者は、より多くのＮＥＴを有する傾向があり、ＮＥＴは、腫瘍転移を促進し（Ｃｏｏｌｓ−Ｌａｒｔｉｇｕｅ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．（２０１３））、それが、肺癌患者など多くの癌患者の短期予後の一因となっている。
この実施例では、全ての治療集団において分析したとき、標準的レジメンである、ペメトレキセド及びシスプラチンへのＣＢＰ５０１の追加から検出された統計的に有意な生存利益はなかった。しかし、意外にも、亜群分析によって、ＣＢＰ５０１の追加が、臨床試験のスクリーニング時に正常な又は低いＷＢＣを示した患者群に対して利益をもたらしたことが明らかにされた。ＷＢＣの正常値は、部位及び国によって異なる。正常値ＷＢＣの上限値は、８０００／μｌ〜１１０００／μｌであり得る。
正常範囲のＷＢＣを有する患者が、ＣＢＰ５０１から利益を受け、スクリーニング時に高いＷＢＣを有する患者が、シスプラチン及びペメトレキセドで処置された患者より効果が劣っていたことは、対照群であるシスプラチン及びペメトレキセド処置集団と比較して、いずれの差も統計的に有意ではなかったものの、驚くべきことであった。
ＣＢＰ５０１の恐らく二方向性作用の明確な理由は明らかではないが、ＣＢＰ５０１によるカルモジュリンの阻害作用から、マクロファージ、白血球及びリンパ球などの多様な微小環境細胞におけるカルモジュリンの阻害が、それらの活性を阻害又は調節し、二方向性の結果を誘発したことがわかる。何故なら、例えば、それが、Ｍ１型マクロファージを阻害した場合には、マクロファージの抗腫瘍活性を阻害及び／又はＮＥＴのクリアランス（ＮＥＴは、血栓形成及び転移を促進するため）を阻害することによって、患者の生存に有害に作用し得、またそれが、前腫瘍（ｐｒｏ−ｔｕｍｏｒ）Ｍ２マクロファージを阻害した場合には、患者の生存期間を延長させ得るからである。加えて、シスプラチンは、マクロファージをＭ１からＭ２型に歪める（ｓｋｅｗ）することが知られ（Ｄｉｊｋｇｒａａｆ，Ｅ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１５：７３（８）：２４８０（２０１３））、化学療法はそれ自体で、腫瘍転移を促進することが知られており（Ｈａａｓ，Ｍ．Ｊ．ＳｃｉＢＸ １−３（２０１１））、従って、化学療法の続行中にＣＢＰ５０１が存在すると、腫瘍転移に有意な影響をもたらし得る。カルモジュリン阻害剤は、マクロファージ（Ｈｏｒｗｉｔｚ，Ｓ．Ｂ．，ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．９１：７９８（１９８１）；Ｔａｋｅｎａｗａ，Ｔ．，ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．１５：２０８（１９８２）；Ｗｅｓｔｒａ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ．ＢＭＣ Ｍｕｓｃｕｌｏｓｋｅｌｅｔ．Ｄｉｓｏｒｄ．３０：１１（２０１０））、白血球（Ｎａｃｃａｃｈｅ，Ｐ．Ｈ．，ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．９７（１）：６２（１９８０）；Ｔａｋｅｓｈｉｇｅ，Ｋ．，ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．９９（２）：４８４（１９８１）；Ｊｏｎｅｓ，Ｈ．Ｐ．，ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．７１４（１）：１５２（１９８２）；Ｊｏｎｅｓ，Ｈ．Ｐ．，ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．０１５：３８９（１９８４）；Ｖｅｒｐｌｏｅｇｅｎ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２６９（１８）４６２５（２００２））及びリンパ球（Ｓａｌｉｓｂｕｒｙ，Ｊ．Ｌ．，ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ １２：２９４（１９８１）；Ｂｏｕｂａｌｉ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．５２（２）：５１（２０１２））の複数の機能を阻害することが知られている。高いＷＢＣを有する患者は、より多くのＭ１マクロファージ（これらが炎症誘発性であるため）を有する傾向があり、正常な又は低いＷＢＣを有する腫瘍患者は、Ｍ２マクロファージを有する傾向がある（Ｈａｏ，Ｎ．，ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎ．Ｄｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０１２））。また、高いＷＢＣを有する患者は、より多くのＮＥＴを有する傾向がある。ＮＥＴの食作用がＣＢＰ５０１により阻止された場合、患者は、ＤＶＴ及び転移を有するリスクが増加し、そのいずれも生存期間を短縮し得る。
或いは、カルモジュリンは、白血球の正常機能に関与している（Ｈｏｒｗｉｔｚ，Ｓ．Ｂ．，ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．９１：７９８（１９８１）；Ｔａｋｅｎａｗａ，Ｔ．，ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．１５：２０８（１９８２）；Ｗｅｓｔｒａ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ．ＢＭＣ Ｍｕｓｃｕｌｏｓｋｅｌｅｔ．Ｄｉｓｏｒｄ．３０：１１（２０１０）；Ｎａｃｃａｃｈｅ，Ｐ．Ｈ．，ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．９７（１）：６２（１９８０）；Ｔａｋｅｓｈｉｇｅ，Ｋ．，ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．９９（２）：４８４（１９８１）；Ｊｏｎｅｓ，Ｈ．Ｐ．，ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．７１４（１）：１５２（１９８２）；Ｊｏｎｅｓ，Ｈ．Ｐ．，ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．０１５：３８９（１９８４）；Ｖｅｒｐｌｏｅｇｅｎ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２６９（１８）４６２５（２００２）；Ｓａｌｉｓｂｕｒｙ，Ｊ．Ｌ．，ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ １２：２９４（１９８１）；Ｂｏｕｂａｌｉ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．５２（２）：５１（２０１２）；Ｈａｏ，Ｎ．，ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎ．Ｄｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０１２））。ＣＢＰ５０１は、白血球が過剰に必要とされる場合、例えば、患者が、白血球数を増加させる活動性感染に罹患している場合、ＷＢＣの機能に潜在的有害性をもたらすことにより、全生存率に対する有益な活性を妨害し、相殺（ｓｅｔ ｏｆｆ）し得る。
カルモジュリンは、Ｔ細胞アネルギーを誘導し得ることが示唆されているため、カルモジュリン阻害もまた、リンパ球に作用することにより、抗癌免疫に影響を及ぼし得る（Ｂｏｕｂａｌｉ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ． Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．５２（２）：５１（２０１２））。
処置前又はベースラインＷＢＣ数は、白金ベース療法で処置するＮＳＣＬＣ患者についての予後予測因子であることが判明している（Ｔｅｒａｍｕｋａｉ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ（４５（１１：１９５０（２００９）；Ｋｉｍ，Ｊ．Ｗ．，ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．Ｔｒｅｓｔ．４５：４）：３２５（２０１３））。ＣＢＰ５０１は、シスプラチンの活性を調節することによって、この効果を増強することができる。患者は全て、処置の前に、広く承認された標準的手順に従いＷＢＣ数の実験室分析を受けることから、ＷＢＣ数に基づいて患者を選択することができる。
カルモジュリンは、移動に重要な役割を果たすことが証明されているため、ＣＢＰ５０１によるカルモジュリン阻害はまた、白金濃度とは独立に、腫瘍移動及び転移も直接阻害し得る（Ｗａｎｇ，Ｈ．，ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｃｏｍｍｕｎ．４：１３５４（２０１３））。

Claims (36)

  1. 哺乳動物における細胞増殖障害の予防若しくは治療のための医薬品組成物を製造することにおけるペプチド化合物又はその薬学的に許容される塩の使用であって、
    前記ペプチド化合物が、（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）（配列番号１）を含み、
    前記哺乳動物が、血液１マイクロリットル当たり白血球１１，０００（ｗｂｃ／μｌ）未満の白血球数を有する、使用。
  2. 前記哺乳動物が、血液１マイクロリットル当たり白血球４，０００〜１１，０００（ｗｂｃ／μｌ）の白血球数を有する、請求項１に記載の使用。
  3. 前記哺乳動物が、血液１マイクロリットル当たり白血球１０，０００（ｗｂｃ／μｌ）未満の白血球数を有する、請求項１に記載の使用。
  4. 前記哺乳動物が、血液１マイクロリットル当たり白血球９，０００（ｗｂｃ／μｌ）未満の白血球数を有する、請求項１に記載の使用。
  5. 前記哺乳動物が、血液１マイクロリットル当たり白血球４，０００〜９，０００（ｗｂｃ／μｌ）の白血球数を有する、請求項１に記載の使用。
  6. 前記哺乳動物が、血液１マイクロリットル当たり白血球８，０００（ｗｂｃ／μｌ）未満の白血球数を有する、請求項１に記載の使用。
  7. 前記哺乳動物が、血液１マイクロリットル当たり白血球７，０００（ｗｂｃ／μｌ）未満の白血球数を有する、請求項１に記載の使用。
  8. 前記ペプチド化合物が、医薬製剤の形態である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の使用。
  9. 前記ペプチド化合物の前記薬学的に許容される塩が、酢酸塩、スルホン酸塩、硫酸塩、ピロ硫酸塩、重硫酸塩、亜硫酸塩、重亜硫酸塩、リン酸塩、一水素リン酸塩、二水素リン酸塩、メタリン酸塩、ピロリン酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、プロピオン酸塩、デカン酸塩、カプリル酸塩、アクリル酸塩、ギ酸塩、イソ酪酸塩、カプロン酸塩、ヘプタン酸塩、プロピオール酸塩、シュウ酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、スベリン酸塩、セバシン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、ブチン−１，４−ジオエート、ヘキシン−１，６−ジオエート、安息香酸塩、クロロ安息香酸塩、安息香酸メチル、ジニトロ安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、メトキシ安息香酸塩、フタル酸塩、キシレンスルホン酸塩、フェニル酢酸塩、フェニルプロピオン酸塩、フェニル酪酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、γ−ヒドロキシ酪酸塩、グリコール酸塩、酒石酸塩、メタン−スルホン酸塩、プロパンスルホン酸塩、ナフタレン−１−スルホン酸塩、ナフタレン−２−スルホン酸塩、及びマンデル酸塩から選択される、請求項１〜８のいずれか１項に記載の使用。
  10. 前記ペプチド化合物が、６〜１０、１０〜１５、１５〜２０、２０〜２５、２５〜３０、３０〜４０、４０〜５０、５０〜７５、７５〜１００、１００〜１５０、１５０〜２００、又は２００〜３００個のアミノ酸残基の長さを有する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用。
  11. 前記医薬品組成物は、該ペプチド化合物に結合又は連結した細胞透過性分子をさらに含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用。
  12. 前記細胞透過性分子が、共有結合、又は、ペプチドリンカー若しくは非ペプチドリンカーによって前記ペプチド化合物に連結されている、請求項１１に記載の使用。
  13. 前記細胞透過性分子が、極性／荷電アミノ酸及び非極性、疎水性アミノ酸の交互のパターンを含む細胞透過性ペプチドである、請求項１１に記載の使用。
  14. 前記細胞透過性分子が、ポリカチオン性又は両親媒性のαへリックス構造を含む細胞透過性ペプチドである、請求項１１に記載の使用。
  15. 前記ペプチド化合物及び／又は前記細胞透過性分子が、Ｌ−若しくはＤ−異性体アミノ酸、又は、Ｌ−異性体アミノ酸とＤ−異性体アミノ酸との混合物を含む、請求項１１に記載の使用。
  16. 前記細胞透過性分子が、ポリ−アルギニン（Ａｒｇ）配列を含む細胞透過性ペプチドである、請求項１１に記載の使用。
  17. 前記細胞透過性分子が、（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｇｌｎ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）を含む細胞透過性ペプチドであるか、又はそれから構成される細胞透過性ペプチドである、請求項１１に記載の使用。
  18. 前記医薬品組成物は、核酸損傷剤、核酸損傷処置、抗増殖剤又は抗増殖処置と共に前記ペプチド化合物を投与するためのものである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用。
  19. 前記核酸損傷剤、前記核酸損傷処置、前記抗増殖剤又は前記抗増殖処置が、外科切除、放射線療法、電離若しくは化学放射線療法、化学療法、免疫療法、局所若しくは局部温熱（ハイパーサーミア）療法、ワクチン接種、アルキル化剤、抗代謝物、植物エキス、植物アルカロイド、ニトロソウレア、ホルモン、又は、ヌクレオシド若しくはヌクレオチド類似体を含む、請求項１８に記載の使用。
  20. 前記ペプチド化合物が、核酸損傷剤、核酸損傷処置、抗増殖剤、又は、抗増殖処置の前、その投与若しくは処置と同時、又は、その投与若しくは処置の後に投与される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用。
  21. 前記ペプチド化合物が、核酸損傷剤、核酸損傷処置、抗増殖剤又は抗増殖処置の前後４ ８時間未満の期間に投与される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用。
  22. 前記核酸損傷剤又は前記抗増殖剤が、薬物を含む、請求項１８〜２１のいずれか一項に記載の使用。
  23. 前記核酸損傷剤又は前記抗増殖剤が、プラチナ製剤、シスプラチン、カルボプラチン、ネダプラチン、ミタプラチン、サトラプラチン、ピコプラチン、トリプラチン、ミリプラチン、又は、オキサリプラチンを含む、請求項１８〜２１のいずれか一項に記載の使用。
  24. 前記医薬品組成物は、プラチナ製剤、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ペメトレキセド、ゲムシタビン、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、レベッカマイシン、アドリアマイシン（ＡＤＲ）、ブレオマイシン（Ｂｌｅｏ）、ペプレオマイシン、シスプラチン、シスプラチナム、又はｃｉｓ−ジアミンジクロロプラチナム（ＩＩ）（ＣＤＤＰ）、オキサリプラチン、又はカンプトテシン（ＣＰＴ）、シクロホスファミド、アザチオプリン、シクロスポリンＡ、プレドニゾロン、メルファラン、クロラムブシル、メクロレタミン、ブスルファン、メトトレキセート、６−メルカプトプリン、チオグアニン、５−フルオロウラシル、シトシンアラビノシド、ＡＺＴ、５−アザシチジン（５−ＡＺＣ）又は５−アザシチジン関連化合物、アクチノマイシンＤ、ミトラマイシン、ミトマイシンＣ、カルムスチン、ロムスチン、セムスチン、ストレプトゾトシン、ヒドロキシウレア、シスプラチン、ミトタン、プロカルバジン、ダカルバジン、タキサン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ドキソルビシン、ジブロモマンニトール、放射線若しくは放射性同位体と共に前記ペプチド化合物を投与するためものである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の使用。
  25. 前記細胞増殖障害が、腫瘍又は癌を含む、請求項１に記載の使用。
  26. 前記細胞増殖障害が、転移性腫瘍又は転移性癌を含む、請求項２５に記載の使用。
  27. 前記腫瘍又は前記癌が、小細胞肺癌若しくは非小細胞肺癌を含む、請求項２５又は２６に記載の使用。
  28. 前記腫瘍又は前記癌が、腺癌、扁平上皮癌、大細胞癌、癌腫、肉腫、リンパ腫、白血病、腺腫、腺癌、黒色腫、グリオーマ、グリア芽細胞腫、髄膜腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、星状細胞腫、希突起膠細胞腫、中皮腫、網膜内皮、リンパ系若しくは造血系新形成、腫瘍、癌又は悪性疾患を含む、請求項２５又は２６に記載の使用。
  29. 前記肉腫が、リンパ肉腫、脂肪肉腫、骨肉腫、軟骨肉腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫又は線維肉腫を含む、請求項２５又は２６に記載の使用。
  30. 前記造血系新形成、腫瘍、癌又は悪性疾患が、骨髄腫、リンパ腫又は白血病を含む、請求項２８に記載の使用。
  31. 前記腫瘍又は癌が、肺、甲状腺、頭部又は頸部、鼻咽頭、喉、鼻若しくは副鼻腔、脳、脊柱、乳房、副腎、脳下垂体、甲状腺、リンパ系、消化管（口、食道、胃、十二指腸、回腸、空腸（小腸）、結腸、直腸）、泌尿生殖器（子宮、卵巣、子宮頸部、内膜、膀胱、精巣、陰茎、前立腺）、腎臓、膵臓、肝臓、骨、骨髄、リンパ系、血液、筋肉、若しくは皮膚新形成、腫瘍、又は癌を含む、請求項２５又は２６に記載の使用。
  32. 前記腫瘍又は癌が、乳癌、前立腺癌、膵臓癌、胃癌、胸膜中皮腫、結腸癌、直腸癌、大腸癌、小腸癌、食道癌、十二指腸癌、舌癌、咽頭癌、唾液腺癌、脳腫瘍、神経鞘腫、肝癌、腎癌、胆管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、子宮体癌、卵巣癌、膀胱癌、尿道癌、皮膚癌、血管腫、悪性リンパ腫、悪性黒色腫、甲状腺癌、副甲状腺癌、鼻腔癌、副鼻腔癌、聴覚器官癌、口腔癌、喉頭癌、耳下腺癌、顎下腺癌、骨腫瘍、血管線維腫、網膜肉腫、陰茎癌、精巣腫瘍、小児固形癌、カポジ肉腫、上顎洞の腫瘍、線維性組織球腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、リンパ腫、多発性骨髄腫又は白血病を含む、請求項２５又は２６に記載の使用。
  33. 前記哺乳動物が、ヒトである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用。
  34. 前記ペプチド化合物が、以下：
    （ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｇｌｎ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）、又は
    （ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｇｌｎ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ａｒｇ）（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）
    を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用。
  35. 投与される前記ペプチド化合物の量が、腫瘍又は癌を治療するのに有効である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用。
  36. 哺乳動物における過剰増殖細胞の核酸損傷を増大させるための医薬品組成物を製造する ことにおけるペプチド化合物又はその薬学的に許容される塩の使用であって、
    前記ペプチド化合物が、（ｄ−Ｂｐａ）（ｄ−Ｓｅｒ）（ｄ−Ｔｒｐ）（ｄ−Ｓｅｒ） （ｄ−Ｐｈｅ−２，３，４，５，６−Ｆ）（ｄ−Ｃｈａ）（配列番号１）を含み、
    前記哺乳動物が、血液１マイクロリットル当たり白血球１１，０００（ｗｂｃ／μｌ） 未満の白血球数を有する、使用。
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