JP6537601B2 - アザ二環式化合物の結晶 - Google Patents

Description

本発明は、安定で経口吸収性に優れ、抗腫瘍剤として有用なアザ二環式化合物の新規な結晶に関する。

一般的に、医薬品の有効活性成分として化合物が使用されるとき、品質を安定に保持するために及び／又は保管管理を容易にするために、化合物の化学的及び物理学的な安定性が必要である。このため、得られた化合物は安定結晶形であることが好ましく、通常、医薬品用の原薬としては最安定結晶形が選択される例が多い。

現在、抗腫瘍剤として複数のＨＳＰ９０阻害剤が報告されており、特許文献１及び２には、優れたＨＳＰ９０阻害作用を有し、抗腫瘍活性を示す化合物として３−エチル−４−｛３−イソプロピル−４−（４−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−イミダゾ−ル−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−１−イル｝ベンズアミド（以下、「化合物１」ともいう）が記載されている。

一方、一般的に、経口投与用の医薬組成物においては、有効成分の安定性のみならず、経口投与時の優れた吸収性が求められるが、特許文献１及び２には、化合物１の結晶、並びにその結晶の安定性及び経口吸収性については全く記載がない。

国際公開第２０１２／０９３７０８号 国際公開第２０１１／００４６１０号

本発明は、抗腫瘍剤として有用な化合物１の安定で経口吸収性に優れた結晶を提供することを目的とする。

本発明者らは上記の課題を解決すべく、特許文献１に記載の製造方法に準じて化合物１を合成したところ、化合物１のＩ型結晶が得られた。しかし、後述の実施例の通り、Ｉ型結晶は経口吸収性に課題があったため、さらに結晶化条件の検討を重ねた。その結果、化合物１を特定の有機溶媒に添加して懸濁することによりＩＩ型結晶が得られること、さらにＩＩ型結晶がＩ型結晶と比較して安定性及び経口吸収性に優れていることを見出し、本発明を完成するに至った。

すなわち、本発明は、次の〔１〕〜〔１５〕を提供するものである。

〔１〕粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、回折角（２θ±０．２°）が、７．７゜、８．０゜、１１．１゜、１２．５゜、１２．９゜、１５．２゜、１５．８゜、１７．２゜、１９．０゜、２２．５゜、２６．１゜、及び２７．４゜から選択される少なくとも３つ以上の特徴的なピークを有することを特徴とする、３−エチル−４−｛３−イソプロピル−４−（４−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−イミダゾ−ル−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−１−イル｝ベンズアミドのＩＩ型結晶。
〔２〕粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、回折角（２θ±０．２°）が、７．７゜、８．０゜、１１．１゜、１２．５゜、１２．９゜、１５．２゜、１５．８゜、１７．２゜、１９．０゜、２２．５゜、２６．１゜、及び２７．４゜から選択される少なくとも５つ以上の特徴的なピークを有する結晶である〔１〕に記載のＩＩ型結晶。
〔３〕示差熱−熱重量同時測定により決定した吸熱ピークが２７０℃付近である〔１〕又は〔２〕に記載のＩＩ型結晶。
〔４〕〔１〕〜〔３〕のいずれかに記載のＩＩ型結晶を含有する医薬組成物。
〔５〕〔１〕〜〔３〕のいずれかに記載のＩＩ型結晶を含有する経口投与用医薬組成物。
〔６〕〔１〕〜〔３〕のいずれかに記載のＩＩ型結晶を含有する抗腫瘍剤。
〔７〕医薬組成物を製造するための、〔１〕〜〔３〕のいずれかに記載のＩＩ型結晶の使用。
〔８〕医薬組成物が経口投与用医薬組成物である〔７〕に記載の使用。
〔９〕抗腫瘍剤を製造するための、〔１〕〜〔３〕のいずれかに記載のＩＩ型結晶の使用。
〔１０〕医薬として使用するための、〔１〕〜〔３〕のいずれかに記載のＩＩ型結晶。
〔１１〕腫瘍の治療に使用するための、〔１〕〜〔３〕のいずれかに記載のＩＩ型結晶。
〔１２〕腫瘍の治療方法であって、それを必要とする対象に〔１〕〜〔３〕のいずれかに記載のＩＩ型結晶の有効量を投与することを含む、方法。
〔１３〕（１）３−エチル−４−｛３−イソプロピル−４−（４−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−イミダゾ−ル−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−１−イル｝ベンズアミドを、有機溶媒中で加熱懸濁して懸濁液を得る工程と、
（２）上記（１）で得られた懸濁液から固体状の３−エチル−４−｛３−イソプロピル−４−（４−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−イミダゾ−ル−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−１−イル｝ベンズアミドを得る工程
を含む、〔１〕〜〔３〕のいずれかに記載のＩＩ型結晶の製造方法。
〔１４〕有機溶媒が、２−プロパノール、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸ブチル、シクロペンチルメチルエーテル、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、アセトン、アセトニトリル又はこれらの混合溶媒である〔１３〕に記載のＩＩ型結晶の製造方法。
〔１５〕（１）３−エチル−４−｛３−イソプロピル−４−（４−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−イミダゾ−ル−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−１−イル｝ベンズアミドを、２−プロパノール、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸ブチル、シクロペンチルメチルエーテル、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、アセトン、アセトニトリル及びこれらの混合溶媒から選ばれる有機溶媒中で懸濁して懸濁液を得る工程と、
（２）上記（１）で得られた懸濁液から固体状の３−エチル−４−｛３−イソプロピル−４−（４−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−イミダゾ−ル−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−１−イル｝ベンズアミドを得る工程
を含む、〔１〕〜〔３〕のいずれかに記載のＩＩ型結晶の製造方法。

本発明によれば、化合物１のＩＩ型結晶は、高い安定性と優れた経口吸収性を有しており、経口用医薬品として有用である。

化合物１のＩ型結晶の粉末Ｘ線回折スペクトルを示す（縦軸は強度（ｃｐｓ）、横軸は回折角（２θ±０．２°）を表す）。 化合物１のＩＩ型結晶の粉末Ｘ線回折スペクトルを示す（縦軸は強度（ｃｐｓ）、横軸は回折角（２θ±０．２°）を表す）。 化合物１のＩＩ型結晶の示差走査熱量（ＤＳＣ）曲線示す。 化合物１のＩＩ型結晶の血中濃度測定試験結果を示す。

本発明における化合物１は、３−エチル−４−｛３−イソプロピル−４−（４−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−イミダゾ−ル−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−１−イル｝ベンズアミドである（下記式）。化合物１は、ＨＳＰ９０阻害活性を有し、優れた抗腫瘍活性を示すことが知られている。なお、化合物１は特許文献１及び２に記載の製造方法に基づき合成することができる。

本発明の結晶は、化合物１のＩＩ型結晶を含むものであればよく、ＩＩ型結晶の単一結晶であってもＩＩ型結晶以外の結晶を含む多形混合物であってもよい。本発明の結晶においては高純度のＩＩ型結晶が好ましい。具体的には結晶の化学純度が９０％以上のＩＩ型結晶であることが好ましく、９５％以上であることがより好ましく、９８％以上であることが特に好ましい。

本発明のＩＩ型結晶は、化合物１を特定の有機溶媒に添加して懸濁することで得ることができる。具体的には、次の工程（１）及び（２）：
（１）化合物１を有機溶媒中で懸濁して懸濁液を得る工程、
（２）上記（１）で得られた懸濁液から固体状の化合物１を得る工程
を含む製造方法によりＩＩ型結晶を得ることができる。
ここで有機溶媒に添加する化合物１としては、結晶であるか否かを問わないが、高純度のＩＩ型結晶を得る観点から、結晶の化合物１を用いることが好ましく、特に化合物１のＩＩ型結晶を用いることが好ましい。また。本発明の結晶化において種晶を用いても良い。高純度のＩＩ型結晶を得る観点から種晶としてはＩＩ型結晶が好ましい。

本発明の結晶化で用いられる有機溶媒としては、メタノール、ｎ−プロパノール、２−プロパノール、エチレングリコールなどのアルコール類；酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸ブチルなどの脂肪族カルボン酸エステル類；ジエチルエーテル、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル、シクロペンチルメチルエーテル、１，４−ジオキサン、テトラヒドロフランなどのエーテル類；アセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、シクロヘキサノンなどのケトン類；トルエン、キシレン、クロルベンゼンなどの芳香族溶媒；アセトニトリル、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、１，３−ジメチル−２−イミダゾリジノン、およびジメチルスルホキシドなどの非プロトン性極性有機溶媒又はこれらの混合溶媒が例示できる。好ましくは、ケトン類、炭素数３以上の一価アルコール、二価アルコール、脂肪族カルボン酸エステル類、エーテル類、非プロトン性極性有機溶媒又はこれらの混合溶媒であり、さらに好ましくは２−プロパノール、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸ブチル、シクロペンチルメチルエーテル、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、アセトン、アセトニトリル又はこれらの混合溶媒である。特に好ましくは、ＩＩ型結晶の純度及び収率の観点から、酢酸メチル、メチルエチルケトン、アセトン又はこれらの混合溶媒である。

本発明の結晶化における有機溶媒の量（ｖ／ｗ）は、ＩＩ型結晶の純度及び収率の観点から、化合物１の量に対して２〜３０倍量が好ましく、３〜２０倍量がより好ましく、４〜１５倍量が特に好ましい。

本発明の結晶化においては、化合物１を有機溶媒に添加し、加熱懸濁して長時間還流することが好ましい。本発明の結晶化における加熱温度は還流できる温度であれば特に限定されず、用いる有機溶媒によって適宜設定される。好ましくは、５２℃〜１２６℃である。
本発明の結晶化における還流する時間は、短すぎると結晶化が十分に進まず、純度の高い結晶が得られず、一方、長すぎると結晶の分解が起こり、収率が低下するため、１２〜６０時間が好ましく、１６〜４８時間がより好ましい。

本発明の結晶化においては還流後、冷却することにより析出したＩＩ型結晶を採取することができる。冷却温度としては適時設定できるが室温が好ましい。

析出した結晶は、例えば、ろ過、有機溶剤による洗浄、減圧乾燥等の公知の分離精製手段によって、前記溶解溶液や混合溶液から単離精製することができる。
洗浄に使用される有機溶剤としては、例えば、低級アルコール、アセトン、アセトニトリル等が挙げられる。ＩＩ型結晶化で用いた有機溶媒を使用して洗浄してもよい。

このようにして得られた本発明のＩＩ型結晶は、図２に示すとおり、粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、回折角（２θ±０．２°）が、７．７゜、８．０゜、１１．１゜、１２．５゜、１２．９゜、１５．２゜、１５．８゜、１７．２゜、１９．０゜、２２．５゜、２６．１゜、及び２７．４゜から選ばれる３つ以上、好ましくは５つ以上、より好ましくは８つ以上、さらに好ましくは１２の特徴的なピークを有する結晶である。また、図３で示す示差走査熱量測定（ＤＳＣ測定）の結果のとおり、ＩＩ型結晶は２７０℃付近に吸熱ピークを有する。

これに対してＩ型結晶は、図１で示すとおり、粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、回折角（２θ±０．２°）が、８．１゜、１２．１゜、１４．０゜、１６．２゜、２１．５゜、２５．４゜及び２８．３゜に特徴的なピークを有する結晶である。

粉末Ｘ線回折スペクトルにおけるピーク値は、測定機器により、もしくはピークの読み取り条件等の測定条件により、多少の誤差を生じることがある。本明細書においてピーク値は、±０．２°程度の範囲で測定誤差を有し得る。
ＤＳＣ測定において、測定される吸熱ピーク（ピークトップ値）は、１分あたりの昇温の幅や試料の量及び純度等により測定温度が変化することがある。本明細書において「付近」という用語は±５．０℃を意味する。

後述する実施例のとおり、化合物１のＩ型結晶とＩＩ型結晶は、経口投与時の吸収性が大きく異なる。一般的に準安定型の方が安定型よりも溶解度が高いため（辻彰 著、新薬剤学、南江堂）、準安定型のＩ型結晶と比して安定型のＩＩ型結晶の経口吸収性が高いことは予想外の結果である。

また、化合物１のＩ型結晶は、還流を行うことによりＩＩ型結晶に変化する。そして、ＩＩ型結晶は、高温条件及び高湿条件において安定である。従って、ＩＩ型結晶は、Ｉ型結晶に比べて安定であり、医薬品原料として有用である。
従って、本発明のＩＩ型結晶は、医薬組成物の有効成分として有用であり、特に経口投与用医薬組成物の有効成分として有用である。本発明のＩＩ型結晶は、化合物１が優れたＨＳＰ９０阻害活性を有することから、抗腫瘍剤として有用である。対象となる癌は特に制限されないが、頭頚部癌、消化器癌（食道癌、胃癌、消化管間質腫瘍、十二指腸癌、肝臓癌、胆道癌（胆嚢・胆管癌など）、膵臓癌、小腸癌、大腸癌（結腸直腸癌、結腸癌、直腸癌など）など）、肺癌、乳癌、卵巣癌、子宮癌（子宮頚癌、子宮体癌など）、腎癌、膀胱癌、前立腺癌、尿路上皮癌、骨・軟部肉腫、血液癌（Ｂ細胞リンパ腫、慢性リンパ性白血病、末梢性Ｔ細胞性リンパ腫、骨髄異形成症候群、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病など）、多発性骨髄腫、皮膚癌、中皮腫等が挙げられる。

本発明のＩＩ型結晶を医薬組成物の有効成分として用いるにあたっては、必要に応じて薬学的に許容される担体と配合し、予防又は治療目的に応じて各種の投与形態を採用可能であり、該形態としては錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤等の経口剤が好ましい。これらの投与形態は、各々当業者に公知慣用の製剤方法により製造できる。

以下、実施例を挙げて本発明を更に具体的に説明するが、本発明はこれらによって何ら限定されるものではない。本発明は実施例により十分に説明されているが、当業者により種々の変更や修飾が可能であろうことは理解される。したがって、そのような変更や修飾が本発明の範囲を逸脱するものでない限り、それらは本発明に包含される。
実施例で用いた各種試薬は、特に記載の無い限り市販品を使用した。ＮＭＲスペクトルは、ＡＬ４００（４００ＭＨｚ；日本電子（ＪＥＯＬ））、Ｍｅｒｃｕｒｙ４００（４００ＭＨｚ；アジレント・テクノロジー）型スペクトロメータ、又は４００ＭＮＭＲプローブ（Ｐｒｏｔａｓｉｓ）を装備したＩｎｏｖａ４００（４００ＭＨｚ；アジレント・テクノロジー）型スペクトロメータを使用し、重溶媒中にテトラメチルシランを含む場合は内部基準としてテトラメチルシランを用い、それ以外の場合には内部基準としてＮＭＲ溶媒を用いて測定し、全δ値をｐｐｍで示した。

略号の意味を以下に示す。
ｓ：シングレット
ｄ：ダブレット
ｔ：トリプレット
ｑ：カルテット
ｄｄ：ダブル ダブレット
ｄｔ：ダブル トリプレット
ｔｄ：トリプル ダブレット
ｔｔ：トリプル トリプレット
ｄｄｄ：ダブル ダブル ダブレット
ｄｄｔ：ダブル ダブル トリプレット
ｄｔｄ：ダブル トリプル ダブレット
ｔｄｄ：トリプル ダブル ダブレット
ｍ：マルチプレット
ｂｒ：ブロード
ｂｒｓ：ブロードシングレット

粉末Ｘ線回折測定
粉末Ｘ線回折は、試験物質適量を必要に応じてメノウ製乳鉢で軽く粉砕した後、次の試験条件に従って測定した。
装置：ＰＡＮａｌｙｔｉｃａｌ ＥＭＰＹＲＥＡＮ
ターゲット：Ｃｕ
Ｘ線出力設定：４０ｍＡ，４５ｋＶ
走査範囲：２．０〜４０．０°
ステップサイズ：０．０２６°
発散スリット：自動
照射幅：１０．００ｍｍ
試料幅：１０．００ｍｍ
データ処理を含む装置の取り扱いは、各装置で指示された方法及び手順にしたがった。

熱分析測定 （示差走査熱量測定（ＤＳＣ測定））
ＤＳＣ測定は、次の試験条件に従って測定した。
装置：ＴＡインスツルメント Ｑ１０００
試料：およそ１ｍｇ
試料容器：アルミニウム製
昇温速度：３００℃まで１０℃／分で昇温
雰囲気ガス：窒素
窒素ガス流量：５０ｍＬ／ｍｉｎ．
データ処理を含む装置の取り扱いは、各装置で指示された方法及び手順にしたがった。

比較例１ ３−エチル−４−｛３−イソプロピル−４−（４−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−イミダゾ−ル−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−１−イル｝ベンズアミドのＩ型結晶の合成
国際公開第２０１２／０９３７０８号パンフレット及び国際公開第２０１１／００４６１０号パンフレットに記載の製造方法に準じて得られた３−エチル−４−｛３−イソプロピル−４−（４−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−イミダゾ−ル−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−１−イル｝ベンズアミドの白色固体（３．５８ｇ）をエタノール（７．８４ｍＬ）に加え室温で２時間攪拌した。ろ取後エタノール（７．８４ｍＬ）で洗浄後７０〜８０℃で２０時間減圧乾燥し、Ｉ型結晶（収量：２．４０ｇ、収率：６１．２％、純度：９８．２１％）を得た。
また、Ｉ型結晶は、図１で示すとおり、粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、回折角（２θ）が、８．１゜、１０．９゜、１２．１゜、１４．０゜、１４．９゜、１６．２゜、１７．７゜、２０．２゜、２１．０゜、２１．５゜、２２．６゜、２４．３゜、２５．４゜２６．４゜、２７．０゜、２８．３゜、３０．２゜、３０．９゜、３１．５゜、３２．７゜、３４．７゜、３５．４゜及び３６．６゜の特徴的なピークを示した。

¹Ｈ−ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ₆）：δｐｐｍ ９．３５ （１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．８８Ｈｚ）， ８．９３ （１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．２２Ｈｚ）， ８．８４ （１Ｈ，ｂｒｓ）， ８．７２ （１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．９５Ｈｚ）， ８．７０ （１Ｈ，ｓ） ，８．６３ （１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．２２Ｈｚ）， ８．６０ （１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．２９，１．９５Ｈｚ）， ８．４６ （１Ｈ，ｓ） ，８．２５ （１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２９Ｈｚ）， ８．２２ （１Ｈ，ｂｒｓ）， ８．１２ （１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．８８Ｈｚ）， ４．５９ （３Ｈ，ｓ） ，３．９５ （１Ｈ，ｔｔ，Ｊ＝６．８３，６．８３Ｈｚ）， ３．２１ （２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．５６Ｈｚ）， １．８３（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８３Ｈｚ）， １．７５ （３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５６Ｈｚ）：ＬＲＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ４５５［Ｍ＋Ｈ］

実施例１ ３−エチル−４−｛３−イソプロピル−４−（４−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−イミダゾ−ル−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−１−イル｝ベンズアミドのＩＩ型結晶の合成
国際公開第２０１２／０９３７０８号パンフレット及び国際公開第２０１１／００４６１０号パンフレットに記載の製造方法に準じて得られた３−エチル−４−｛３−イソプロピル−４−（４−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−イミダゾ−ル−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−１−イル｝ベンズアミドの白色固体（４．０ｇ）をアセトン（１９．５４ｍＬ）に加え、加熱還流下１６時間攪拌した。室温へ放冷後、固体をろ取し、アセトン（８．４ｍＬ）で洗浄後７０〜８０℃で１６〜２４時間減圧乾燥を行い、ＩＩ型結晶を得た（収量：１．５９ｇ，収率：５７．０％、純度９８．３７％）。
また、ＩＩ型結晶は、図２で示すとおり、粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、回折角（２θ）が、７．７゜、８．０゜、１１．１゜、１２．５゜、１２．９゜、１４．２゜、１５．２゜、１５．８゜、１７．２゜、１７．７゜、１９．０゜、２０．２゜、２１．１゜、２２．５゜、２２．８゜、２３．５゜、２４．５゜、２６．１゜、２６．７゜、２７．４゜、２８．０゜、２８．７゜、２９．４゜、３０．０゜、３１．７゜、３５．１゜、３６．２゜、３６．９゜及び３７．６゜の特徴的なピークを示した。また、図３で示すとおり、示差走査熱量測定（ＤＳＣ測定）の結果、ＩＩ型結晶は２７０℃付近に吸熱ピークを示した。

¹Ｈ−ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ₆）：δｐｐｍ ９．３５ （１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．８８Ｈｚ）， ８．９３ （１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．２２Ｈｚ）， ８．８４ （１Ｈ，ｂｒｓ）， ８．７２ （１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．９５Ｈｚ）， ８．７０ （１Ｈ，ｓ） ，８．６３ （１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．２２Ｈｚ）， ８．６０ （１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．２９，１．９５Ｈｚ）， ８．４６ （１Ｈ，ｓ） ，８．２５ （１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２９Ｈｚ）， ８．２２ （１Ｈ，ｂｒｓ）， ８．１２ （１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．８８Ｈｚ）， ４．５９ （３Ｈ，ｓ） ，３．９５ （１Ｈ，ｔｔ，Ｊ＝６．８３，６．８３Ｈｚ）， ３．２１ （２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．５６Ｈｚ）， １．８３（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８３Ｈｚ）， １．７５ （３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５６Ｈｚ）：ＬＲＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ４５５［Ｍ＋Ｈ］

実施例２ ３−エチル−４−｛３−イソプロピル−４−（４−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−イミダゾ−ル−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−１−イル｝ベンズアミドのＩＩ型結晶の合成
国際公開第２０１２／０９３７０８号パンフレット及び国際公開第２０１１／００４６１０号パンフレットに記載の製造方法に準じて得られた３−エチル−４−｛３−イソプロピル−４−（４−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−イミダゾ−ル−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−１−イル｝ベンズアミドの白色固体（４００ｍｇ）をメチルエチルケトン（２．８ｍＬ）に加え、加熱還流下１６時間攪拌した。室温へ放冷後、固体をろ取し、メチルエチルケトン（１．２ｍＬ）で洗浄後７０〜８０℃で１６〜２４時間減圧乾燥を行い、ＩＩ型結晶を得た（収量：１９７ｍｇ、収率：６０．９％、純度９８．８３％）。

実施例３ ３−エチル−４−｛３−イソプロピル−４−（４−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−イミダゾ−ル−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−１−イル｝ベンズアミドのＩＩ型結晶の合成
国際公開第２０１２／０９３７０８号パンフレット及び国際公開第２０１１／００４６１０号パンフレットに記載の製造方法に準じて得られた３−エチル−４−｛３−イソプロピル−４−（４−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−イミダゾ−ル−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−１−イル｝ベンズアミドの白色固体（４００ｍｇ）をアセトニトリル（４．０ｍＬ）に加え、加熱還流下３時間攪拌した。室温へ放冷後、固体をろ取し、アセトニトリル（１．２ｍＬ）で洗浄後７０〜８０℃で３時間減圧乾燥を行い、ＩＩ型結晶を得た（収量：１２０ｍｇ、収率：４３．０％、純度９８．２５％）。

実施例４ ３−エチル−４−｛３−イソプロピル−４−（４−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−イミダゾ−ル−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−１−イル｝ベンズアミドのＩＩ型結晶の合成
国際公開第２０１２／０９３７０８号パンフレット及び国際公開第２０１１／００４６１０号パンフレットに記載の製造方法に準じて得られた３−エチル−４−｛３−イソプロピル−４−（４−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−イミダゾ−ル−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−１−イル｝ベンズアミドの白色固体（４００ｍｇ）をメチルイソブチルケトン（４．０ｍＬ）に加え、加熱還流下３時間攪拌した。室温へ放冷後、固体をろ取し、メチルイソブチルケトン（１．２ｍＬ）で洗浄後７０〜８０℃で３時間減圧乾燥を行い、ＩＩ型結晶を得た（収量：１５４ｍｇ、収率：５５．３％、純度９６．８９％）。

実施例５ ３−エチル−４−｛３−イソプロピル−４−（４−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−イミダゾ−ル−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−１−イル｝ベンズアミドのＩＩ型結晶の合成
国際公開第２０１２／０９３７０８号パンフレット及び国際公開第２０１１／００４６１０号パンフレットに記載の製造方法に準じて得られた３−エチル−４−｛３−イソプロピル−４−（４−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−イミダゾ−ル−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−１−イル｝ベンズアミドの白色固体（４００ｍｇ）を２−プロパノール（４．０ｍＬ）に加え、加熱還流下３時間攪拌した。室温へ放冷後、固体をろ取し、２−プロパノール（１．２ｍＬ）で洗浄後７０〜８０℃で３時間減圧乾燥を行い、ＩＩ型結晶を得た（収量：１０８ｍｇ、収率：３８．８％、純度９６．８３％）。

実施例６ ３−エチル−４−｛３−イソプロピル−４−（４−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−イミダゾ−ル−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−１−イル｝ベンズアミドのＩＩ型結晶の合成
国際公開第２０１２／０９３７０８号パンフレット及び国際公開第２０１１／００４６１０号パンフレットに記載の製造方法に準じて得られた３−エチル−４−｛３−イソプロピル−４−（４−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−イミダゾ−ル−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−１−イル｝ベンズアミドの白色固体（４００ｍｇ）を酢酸エチル（４．０ｍＬ）に加え、加熱還流下３時間攪拌した。室温へ放冷後、固体をろ取し、酢酸エチル（１．２ｍＬ）で洗浄後７０〜８０℃で３時間減圧乾燥を行い、ＩＩ型結晶を得た（収量：１５６ｍｇ、収率：５６．０％、純度９６．４５％）。

実施例７ ３−エチル−４−｛３−イソプロピル−４−（４−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−イミダゾ−ル−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−１−イル｝ベンズアミドのＩＩ型結晶の合成
国際公開第２０１２／０９３７０８号パンフレット及び国際公開第２０１１／００４６１０号パンフレットに記載の製造方法に準じて得られた３−エチル−４−｛３−イソプロピル−４−（４−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−イミダゾ−ル−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−１−イル｝ベンズアミドの白色固体（４００ｍｇ）を酢酸ブチル（４．０ｍＬ）に加え、加熱還流下３時間攪拌した。室温へ放冷後、固体をろ取し、酢酸ブチル（１．２ｍＬ）で洗浄後７０〜８０℃で３時間減圧乾燥を行い、ＩＩ型結晶を得た（収量：１６４ｍｇ、収率：５８．８％、純度９６．０４％）。

実施例８ ３−エチル−４−｛３−イソプロピル−４−（４−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−イミダゾ−ル−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−１−イル｝ベンズアミドのＩＩ型結晶の合成
国際公開第２０１２／０９３７０８号パンフレット及び国際公開第２０１１／００４６１０号パンフレットに記載の製造方法に準じて得られた３−エチル−４−｛３−イソプロピル−４−（４−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−イミダゾ−ル−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−１−イル｝ベンズアミドの白色固体（４００ｍｇ）をシクロペンチルメチルエーテル（４．０ｍＬ）に加え、加熱還流下３時間攪拌した。室温へ放冷後、固体をろ取し、シクロペンチルメチルエーテル（１．２ｍＬ）で洗浄後７０〜８０℃で３時間減圧乾燥を行い、ＩＩ型結晶を得た（収量：１９２ｍｇ、収率：６８．８％、純度９５．６８％）。

実施例９ ３−エチル−４−｛３−イソプロピル−４−（４−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−イミダゾ−ル−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−１−イル｝ベンズアミドのＩＩ型結晶の合成
国際公開第２０１２／０９３７０８号パンフレット及び国際公開第２０１１／００４６１０号パンフレットに記載の製造方法に準じて得られた３−エチル−４−｛３−イソプロピル−４−（４−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−イミダゾ−ル−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−１−イル｝ベンズアミドの白色固体（４００ｍｇ）を酢酸プロピル（４．０ｍＬ）に加え、加熱還流下３時間攪拌した。室温へ放冷後、固体をろ取し、酢酸プロピル（１．２ｍＬ）で洗浄後７０〜８０℃で３時間減圧乾燥を行い、ＩＩ型結晶を得た（収量：１７２ｍｇ、収率：６１．５％、純度９６．７７％）。

実施例１０ ３−エチル−４−｛３−イソプロピル−４−（４−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−イミダゾ−ル−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−１−イル｝ベンズアミドのＩＩ型結晶の合成
国際公開第２０１２／０９３７０８号パンフレット及び国際公開第２０１１／００４６１０号パンフレットに記載の製造方法に準じて得られた３−エチル−４−｛３−イソプロピル−４−（４−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−イミダゾ−ル−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−１−イル｝ベンズアミドの白色固体（４００ｍｇ）に酢酸メチル（２．２ｍＬ）を加え、加熱還流下１６時間攪拌した。室温へ放冷後、固体をろ取し、酢酸メチル（０．９４ｍＬ）で洗浄後、８０℃で減圧乾燥を行い、ＩＩ型結晶を得た（収量：２１５．５ｍｇ、収率：６８．６％、純度９８．０６％）。

試験例１ 血中濃度測定試験
Ｉ型結晶及びＩＩ型結晶のそれぞれの投与液（５０ｍｇ／１０ｍＬ／ｋｇ）を作成した。これらの投与液を摂食条件下にて飼育していたマウス（Ｂａｌｂ／ｃＡ）に体重１ｋｇあたり１０ｍＬの容量で経口投与用ゾンデを用いて経口投与した。投与後、マウス用ケージに戻し状態を確認した。ケージ内では給水及び給餌は自由に取れる状態とした。投与１、２、３、４、８及び２４時間後にマウスをイソフルランにて麻酔し、キャピラリ採血管を用いて６０μＬ眼窩静脈叢より採血した。採血した血液は、氷冷し、遠心操作により血漿を分離した。
ＬＣ−ＭＳ／ＭＳを用いて、Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｒｅａｃｔｉｏｎ Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ法で測定した各血漿中の化合物１の濃度から、Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ社製ソフトウェア、Ｐｈｏｅｎｉｘ ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ（ｖ６．３．０）を用いて、対数線形台形法でＡＵＣ_0-24hrを算出した。

結果を図４及び表１に示す。本試験より、ＡＵＣ_0-24hr（投与後０〜２４時間の血中濃度−時間曲線下面積）では、ＩＩ型結晶はＩ型結晶の約３倍の値を示すことがわかった。したがって、本発明にかかるＩＩ型結晶は経口吸収性が顕著に優れており、経口用医薬組成物として有用である。

試験例２ 固体安定性試験（加速試験）
実施例１で得られたＩＩ型結晶を、４０℃±２℃／７５％ＲＨ±５％ＲＨで１ヶ月、３ヶ月及び６ヶ月間保存したときの固体安定性を、次の条件で測定した。
保存条件：４０℃±２℃／７５％ＲＨ±５％ＲＨ
測定ポイント：１ヶ月，３ヶ月及び６ヶ月
保存量：６ｇ
保存容器：ポリ袋二重，結束バンド止め＋プラスチックドラム
試料溶液の調製法：ＩＩ型結晶１００ｍｇを精密に量り、アセトニトリル・水混液（４：１）を加えて溶かし（溶解しにくい場合は、超音波照射し、溶解する）、正確に２００ｍＬとする。この液１０ｍＬを正確に量り、水・アセトニトリル混液（１：１）を加えて正確に２０ｍＬとし、試料溶液とした。

ＨＰＬＣ測定は、下記条件にて実施した。
カラム：一般財団法人化学物質評価研究機構 Ｌ−ｃｏｌｕｍｎ２ ＯＤＳ
粒子径：３μｍ，内径：４．６ｍｍ，長さ：１５ｃｍ
測定波長：２２０ｎｍ
移動相：移動層Ａ：１０ｍｍｏｌ／Ｌリン酸塩緩衝液（ｐＨ６．９），移動層Ｂ：アセトニトリル
流量：約１．０ｍＬ／分

移動相の送液は、移動相Ａ及びＢの混合比を次の様に変えて濃度勾配を制御する。

試料溶液中の類縁物質量をＨＰＬＣ分析にて測定し評価した結果を表３に示す。
尚、類縁物質は、３−エチル−４−｛３−イソプロピル−４−（４−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−イミダゾ−ル−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−１−イル｝ベンズアミド以外に検出された物質である。

この結果、化合物１のＩＩ型結晶は類縁物質の生成が少なく、優れた固体安定性を示すことが明らかになった。

Claims (11)

1. 粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、回折角（２θ±０．２°）が、７．７゜、８．０゜、１１．１゜、１２．５゜、１２．９゜、１５．２゜、１５．８゜、１７．２゜、１９．０゜、２２．５゜、２６．１゜、及び２７．４゜の特徴的なピークを有することを特徴とする、３−エチル−４−｛３−イソプロピル−４−（４−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−イミダゾ−ル−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−１−イル｝ベンズアミドのＩＩ型結晶。
2. 示差熱−熱重量同時測定により決定した吸熱ピークが２７０℃付近である請求項１に記載のＩＩ型結晶。
3. 請求項１又は２に記載のＩＩ型結晶を含有する医薬組成物。
4. 請求項１又は２に記載のＩＩ型結晶を含有する経口投与用医薬組成物。
5. 請求項１又は２に記載のＩＩ型結晶を含有する抗腫瘍剤。
6. 医薬組成物を製造するための、請求項１又は２に記載のＩＩ型結晶の使用。
7. 医薬組成物が経口投与用医薬組成物である請求項６記載の使用。
8. 抗腫瘍剤を製造するための、請求項１又は２に記載のＩＩ型結晶の使用。
9. 医薬として使用するための、請求項１又は２に記載のＩＩ型結晶。
10. 腫瘍の治療に使用するための、請求項１又は２に記載のＩＩ型結晶。
11. （１）３−エチル−４−｛３−イソプロピル−４−（４−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−イミダゾ−ル−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−１−イル｝ベンズアミドを、２−プロパノール、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸ブチル、シクロペンチルメチルエーテル、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、アセトン、アセトニトリル及びこれらの混合溶媒から選ばれる有機溶媒中で加熱還流する工程と、
    （２）上記（１）の後、冷却して析出した固体状の３−エチル−４−｛３−イソプロピル−４−（４−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−イミダゾ−ル−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−１−イル｝ベンズアミドを得る工程
    を含む、請求項１又は２に記載のＩＩ型結晶の製造方法。