JP6568324B2

JP6568324B2 - ７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン化合物の調製方法

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Publication number: JP6568324B2
Application number: JP2018543332A
Authority: JP
Inventors: スタク，ティモシー・リー; ビレン，デニス; ウエストリック，バレリー・スー; グナワーデーナ，バジーシャ・ワーナジス・リヤナ
Original assignee: ゾエティス・サービシーズ・エルエルシー
Priority date: 2016-02-16
Filing date: 2017-02-07
Publication date: 2019-08-28
Anticipated expiration: 2037-02-07
Also published as: ZA201804871B; EP3416965B1; CN108699072A; AU2017221193A1; CA3012589C; WO2017142740A1; KR102124449B1; US20170233397A1; RU2699034C1; JP2019505547A; US9926327B2; CL2018002344A1; KR20180100225A; BR112018016708B1; NZ744341A; MX2018009912A; BR112018016708A2; CO2018008253A2; CN108699072B; MX374347B

Description

本明細書では、７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン化合物、特にＮ−メチル−１−｛ｔｒａｎｓ−４−［メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ］シクロヘキシル｝−メタンスルホンアミド、その中間体、及びその獣医学的に許容される塩の改善された調製方法について記載する。

プロテインキナーゼは、タンパク質における特定の残基のリン酸化を触媒する酵素のファミリーであり、チロシンキナーゼとセリン／スレオニンキナーゼに大別される。成長因子またはサイトカインの突然変異、過剰発現、または不適切な調節、調節解除、もしくは脱調節、ならびに過剰産生または過少産生に起因する不適切なキナーゼ活性は、がん、アレルギー、喘息及びその他の呼吸器疾患、自己免疫疾患、ならびに炎症性疾患を含むが、これらに限定されない多数の疾患に関与している。キナーゼ活性が不適切であると、上述の疾患及び関連疾患に関与する細胞増殖、細胞分化、生存、アポトーシス、有糸分裂誘発、細胞周期制御、及び細胞運動性に関わる種々の生物学的細胞応答を誘発する。

このようにプロテインキナーゼは、治療介入の標的として重要な酵素クラスであることが明らかになってきた。特に、細胞内プロテインチロシンキナーゼのＪＡＫファミリー（ＪＡＫ−１、ＪＡＫ−２、ＪＡＫ−３、及びＴｙｋ−２）は、サイトカインシグナル伝達において中心的な役割を果たす（Ｋｉｓｓｅｌｅｖａｅｔａｌ，Ｇｅｎｅ，２００２，２８５，１；Ｙａｍａｏｋａｅｔａｌ．ＧｅｎｏｍｅＢｉｏｌｏｇｙ２００４，５，２５３））。サイトカインはそれらの受容体に結合すると、ＪＡＫを活性化させ、次いでサイトカイン受容体をリン酸化し、それによってシグナル伝達分子、特に最終的に遺伝子発現に至るシグナル伝達兼転写活性化因子（ＳＴＡＴ）ファミリーのメンバーに対するドッキング部位を形成する。多数のサイトカインがＪＡＫファミリーを活性化することが知られている。

ＪＡＫ阻害剤の調製方法は、以前に米国特許第６，６１０，８４７号で記載されている。米国特許第ＵＳ８，１３３，８９９号には、特定のＪＡＫ阻害剤、Ｎ−メチル−１−｛ｔｒａｎｓ−４−［メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ］シクロヘキシル｝−メタンスルホンアミドの調製方法が記載された。式１の化合物を調製するこの現行の合成方法は、７回の単離を含む少なくとも１０段階の合成工程から構成される。本明細書に記載の改善された合成経路は、わずか６段階の合成工程と４回の単離で構成される。このように、ＪＡＫ阻害剤、Ｎ−メチル−１−｛ｔｒａｎｓ−４−［メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ］シクロヘキシル｝−メタンスルホンアミドを調製する代替方法、特に処理時間及びコストを低減できるものが依然として必要とされている。

本発明は、式１：

の７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン化合物、Ｎ−メチル−１−｛ｔｒａｎｓ−４−［メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ］シクロヘキシル｝−メタンスルホンアミド、またはその獣医学的に許容される塩、及びその中間体の改善された製造方法を提供する。

本発明の一態様は、（４−（メチルアミノ）フェニル）−メタンスルホン酸である中間体Ｂ

を調製する方法であって、
中間体ａ１

（式中、Ｘは臭素またはヨウ素であり、ＹはＣｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｏ−トシル、Ｏ−メシル、またはＯ−トリフレート（または亜硫酸塩による求核置換を受けやすい任意の官能基））を亜硫酸塩（ＭＳＯ_３、ここでＭはＮａ、Ｋ、またはＣａである）と、水または水性有機溶媒中で約５０℃から還流温度で反応させ、合成された亜硫酸塩である中間体ａ２

を得る工程を含む方法である。

好ましくは、中間体ａ１の変数Ｘ及びＹは、いずれもＢｒ（すなわち、４−ブロモベンジルブロミド）であり、中間体ａ２のＭはＮａまたはＫである。一態様では、亜硫酸塩は亜硫酸ナトリウムである。別の態様では、亜硫酸塩は亜硫酸カリウムである。上記に定める反応において、４−ブロモベンジルブロミドの存在下で亜硫酸ナトリウムを使用すると、中間体Ａ、（４−ブロモフェニル）メタン−スルホン酸ナトリウム（すなわち、中間体ａ２）（以下に示す通り、ＸはＢｒであり、ＭはＮａである）を得る。この亜硫酸塩変換のための水性有機溶媒は、約１％〜約５０％の有機溶媒である。有機溶媒の好ましい量は、約１０％〜約３０％である。有機溶媒のより好ましい量は、約１５％である。好ましい有機溶媒はアセトニトリルである。本発明の別の態様では、有機溶媒はまた、アセトン、水混和性アルコール、及び水混和性エーテルから選択することができる。反応温度は約５０℃から還流温度である。好ましい反応温度は、約８０℃で約４時間、その後、反応物を約１０℃に冷却する。得られるスルホン酸ナトリウ固体、中間体Ａ

を濾過により単離する。続いて中間体Ａを少なくとも約５０℃の温度のメチルアミン水溶液中で触媒の銅または銅塩と反応させる。反応物を冷却し、水を添加する。酸を加えてｐＨを約３．２に調整する。得られたスラリーをさらに冷却し、得られた固体、中間体Ｂを単離する。少なくとも約５０℃の反応温度とは好ましくは約９０℃であり、反応時間は約１６時間である。銅触媒は、Ｃｕ（０）塩またはＣｕ（１）塩であり得る。好ましい銅触媒はＣｕ（１）塩である。より好ましい銅触媒はＣｕＢｒである。触媒充填量は、約０．２５ｍｏｌ％を超える任意の量であり得る。好ましい銅触媒の充填量は約２ｍｏｌ％である。メチルアミン水溶液のメチルアミン濃度は約５％〜約４０％である。反応にとって好ましいメチルアミンの量は、約１０％〜約２５％のメチルアミンである。反応にとって、より好ましいメチルアミンの量は、約１７％のメチルアミンである。この反応物を約９０℃から約６５℃に冷却する。クエン酸溶液を反応物に添加し、約２０分間撹拌して銅残渣を除去する。水を加え、濃塩酸水溶液でｐＨを約３．２に調整する。得られたスラリーを約１５℃に冷却し、得られた固体、中間体Ｂを濾過により単離し、水で洗浄する。

本発明の別の態様は、（４−（メチルアミノ）フェニル）−メタンスルホン酸である中間体Ｂ

を調製する方法であって、
４−ブロモベンジルブロミドと亜硫酸ナトリウムとを水または約１５％のアセトニトリルを含む水性有機溶媒中、温度約８０℃で約４時間反応させた後、反応物を約１０℃に冷却する工程を含む。得られたスルホン酸ナトリウム固体、中間体Ａを濾過により単離し、約１７％のメチルアミンを含む水性有機溶媒中で、２ｍｏｌ％ＣｕＢｒ触媒と温度約９０℃で約１６時間反応させる。反応物を約６５℃に冷却する。クエン酸溶液を添加し、反応物を約２０分間撹拌して銅残渣を除去した後、水を添加する。濃ＨＣｌ水溶液でｐＨを約３．２に調整する。得られたスラリーを約１５℃に冷却し、得られた固体、中間体Ｂを濾過により単離し、水で洗浄する。

本発明の別の態様は、トランス型アキラル幾何異性体、ｔｒａｎｓ−４−（（メチルアミノ）シクロヘキシル）メタンスルホン酸、中間体Ｃ

の、高温での中間体Ｂの接触水素化による調製である。中間体Ｂを触媒の存在下、温度約４０℃〜約１００℃で約１２時間〜約２０時間、水性有機溶媒中で水素と反応させる。好ましい反応温度は、約１４時間〜約１８時間、約５０℃〜約８０℃である。より好ましい反応温度は、約１６時間、約７０℃である。水素化は、加圧された水素ガスまたは他の水素移動条件下で、例えば水素源としてギ酸またはギ酸塩を使用して達成することができる。好ましい水素源は、約２０ｐｓｉ〜約７０ｐｓｉの圧力下にある水素ガスである。好ましい圧力は約３０ｐｓｉである。触媒は、反応性金属触媒、例えば、パラジウム（例えば、Ｐｄ（０）；またはＰｄ（ＩＩ）；水酸化パラジウム（Ｐｄ（ＯＨ）_２））、ルテニウム（Ｒｈ）、白金（Ｐｔ及びＰｔＯ_２））などである。好ましい触媒はパラジウムである。好ましいパラジウム触媒は炭素担持Ｐｄ（０）である。Ｐｄ（０）の好ましい担持量は、炭素に対して約１０％である。水性有機溶媒は、水とメタノールである。メタノールの好ましい量は約２５％である。この反応により、トランス（７０％）及びシス（３０％）両方のアキラル幾何異性体、（４−（メチルアミノ）シクロヘキシル）メタンスルホン酸溶液を得る。トランス／シスのスラリーを精製してトランス異性体を得るために、反応物の容量を濃縮し、アルコールを水性スラリーに添加する。好ましいアルコールは、メタノール、エタノール、またはイソプロパノールである。より好ましいアルコールはエタノールである。エタノール水溶液は、水が約１０％〜約２０％である。好ましくは、エタノール水溶液は、水が約１６％〜約１７％である。スラリーを約４５℃に加熱した後、約４時間かけて約０℃に冷却する。固体（中間体Ｃ）を濾過により単離し、アルコール、好ましくはエタノールで洗浄する。

本発明の別の態様は、以下の工程を含む、中間体Ｃを調製する方法である：
ａ）４−ブロモベンジルブロミドと亜硫酸ナトリウム塩とを水または約１０％〜約３０％のアセトニトリルを含む水性溶媒中、約８０℃で反応させ、固体、中間体Ａを濾過により単離する；
ｂ）固体、中間体Ａをメチルアミンが約１０％〜約２５％であるメチルアミン水溶液及びＣｕＢｒ触媒中で、少なくとも約５０℃の温度で約１６時間反応させた後、反応物を約６５℃に冷却し、クエン酸を添加して残留銅を除去し、水を加えて濃ＨＣｌでｐＨを３．２に調整し、反応物を約１５℃に冷却し、固体、中間体Ｂを濾過により単離する；
ｃ）固体、中間体Ｂを、約２５％のメタノールを含有する水性有機溶媒中で、パラジウム触媒及び水素と約５０℃〜約８０℃で約１４時間〜約１８時間反応させる；
ｄ）前の反応で得た容量を濃縮し、アルコールを添加して、約４５℃に加熱した後、反応物を約４時間かけて約０℃に冷却し、固体、中間体Ｃを濾過により単離し、アルコールで洗浄する。

本発明のさらに別の態様は、以下の工程を含む、中間体Ｃを調製する方法である：
ａ）４−ブロモベンジルブロミドと亜硫酸ナトリウム塩とを約１５％のアセトニトリルを含む水性有機溶媒中、約８０℃で約４時間反応させ、次いで反応物を約１０℃に冷却した後、固体、中間体Ａを濾過により単離する；
ｂ）固体、中間体Ａをメチルアミンが約１７％であるメチルアミン水溶液及び約２ｍｏｌ％であるＣｕＢｒ触媒と約９０℃で約１６時間反応させた後、反応物を約６５℃に冷却し、クエン酸を添加して残留銅を除去する；
ｃ）水を加えて濃塩酸水溶液でｐＨを約３．２に調整し、反応物を約１５℃に冷却し、固体、中間体Ｂを濾過により単離する；
ｄ）固体、中間体Ｂを、約２５％のメタノールを含有する水性有機溶媒中で、約２０ｐｓｉ〜約７０ｐｓｉの水素ガス及びＰｄ（０）触媒と温度約７０℃で約１６時間反応させる；
ｅ）反応物の容量を濃縮し、エタノールを添加する；
ｆ）反応物を約４５℃に加熱した後、約４時間かけて約０℃に冷却する；
ｇ）固体、中間体（Ｃ）を濾過により単離し、固体をエタノールで洗浄する。

本発明のさらに別の態様は、以下の工程を含む、化合物、中間体Ｃを調製する方法である：
ａ）中間体Ｂを水性有機溶媒中で、約３０ｐｓｉの水素ガス、及び炭素に約１０％担持されているＰｄ（０）触媒と約７０℃で約１６時間反応させる（この場合の水性有機溶媒は約２５％のメタノール水溶液である）；
ｂ）反応物の容量を濃縮し、エタノールを添加する；
ｃ）反応物を約４５℃に加熱した後、約４時間かけて約０℃に冷却する；
ｄ）固体、中間体Ｃを濾過により単離し、固体をエタノールで洗浄する。

本発明の別の態様は、ｔｒａｎｓ−４−（メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロヘキシル）メタンスルホン酸カリウム塩、中間体Ｅ

を調製する方法であって、
中間体Ｃを７Ｈ−ピロロ｛２，３−ｄ｝ピリミジン類似体、中間体Ｄ１

（式中、ＷはＣｌ、Ｆ、Ｂｒ、Ｉ、Ｏ−トリフラート、Ｏ−メシル、またはＯ−トシルである）、さらに塩基と、水または約１％〜約５０％の有機溶媒を含有する水性有機溶媒中で、温度約６０℃〜約１０５℃で反応させることにより調製する。好ましいピリミジン類似体は、中間体Ｄ、４−クロロ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（すなわち、ＷがＣｌである中間体Ｄ１）である。有機溶媒の好ましい量は、約１％〜約２０％である。有機溶媒のより好ましい量は、約５％である。有機溶媒としては、アルコール（例えば、メタノール、エタノール、プロパノールなど）、エーテル（例えば、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジオキサン、ジメトキシエタン、ビス（２−メトキシエトキシ）エタンなど）、及び極性非プロトン性溶媒（例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、アセトン、アセトニトリル、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）、スルホランなど）が挙げられる。反応にとって好ましい溶媒は極性非プロトン性溶媒である。より好ましい有機溶媒はＮＭＰまたはスルホランである。好ましい水性有機溶媒は、約５％のＮＭＰまたはスルホラン水溶液である。好ましい水性有機溶媒は、約５％のＮＭＰである。反応は水中で行うのが好ましい。塩基は、炭酸塩（例えば、カリウム、ナトリウム、リチウム、セシウムなど）、水酸化物（例えば、リチウム、カリウム、ナトリウム、セシウムなど）、及びトリアルキルアミン、１，８−ジアザビシクロウンデカ−７−エンなどである有機塩基からなる塩基の群から選択される。好ましい塩基は炭酸塩である。より好ましい塩基は、炭酸カリウムである。この反応工程の好ましい温度は約１２時間、約９８℃である。反応物を約３０℃に冷却すると得られる沈殿固体が中間体Ｅであり、これを濾過により単離する。固体を水とアルコールの混合物（１：１）、次いでアルコールで洗浄するか、またはアルコールのみで洗浄し、減圧乾燥する。好ましいアルコールはメタノールである。

本発明の別の態様は、中間体Ｃを中間体Ｄと、水中で、炭酸カリウムの存在下、約９８℃で約１２時間反応させ、反応物を約３０℃に冷却し、固体を濾過により単離し、固体を水：メタノール（１：１）、次いでメタノールで洗浄するか、またはメタノールのみで洗浄し、固体を乾燥させることにより、中間体Ｅを調製する方法である。

本発明の別の態様は、中間体Ｅ、（（ｔｒａｎｓ）−４−（メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロヘキシル）−メタンスルホン酸カリウム塩から、スルホニルクロリド、中間体Ｆ、（（ｔｒａｎｓ）−４−（メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロヘキシル）−メタンスルホニルクロリドへの変換を、

この変換を生じさせることが知られている試薬と中間体Ｅを反応させることにより調製する方法である。反応物の温度は約−２０℃〜約３０℃の範囲である。好ましい温度は約−１０℃〜約２０℃の範囲である。この反応にとってより好ましい温度は約１０℃である。この変換を生じさせることが知られている一般的な試薬として、塩化オキサリル、塩化チオニル、塩化ホスホリル、五塩化リン、ホスゲン、トリホスゲンなどが挙げられる。好ましい試薬は、塩化オキサリル、塩化チオニル、または塩化ホスホリルである。スルホン酸塩からスルホニルクロリドへの変換は、塩化物試薬と相溶性のある有機溶媒、例えば、塩化メチレン、アセトニトリル（ＡＣＮ）、ジクロロエタン、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）、ジイソプロピルホルムアミド（ＤＩＰＦ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、２−メチル−テトラヒドロフラン、ジメトキシメタン、ジオキサンなど、及びそれらの混合物中で実施することができる。この反応にとって好ましい溶媒はＡＣＮまたはＴＨＦである。好ましい溶媒はＡＣＮである。別の好ましい溶媒はＴＨＦである。溶媒混合物は、８５：１５〜９９：１の範囲であり得る。溶媒混合物として、例えば、ＡＣＮ：ＤＭＡ（９８：２）、ＡＣＮ：ＤＩＰＦ（９７：３）、ＴＨＦ：ＮＭＰ（９５：５）、ＴＨＦ：ＤＩＰＦ（９５：５）、ＴＨＦ／ＤＩＰＦ（９８：２）、ＴＨＦ：ＤＭＡ（９０：１０）、ＡＣＮ：ＤＭＦ（８５：１５）などが挙げられる。この場合、約５％のＤＩＰＦが反応の触媒としてＴＨＦに添加される。スルホネートと有機溶媒を混合し、約１０℃に冷却する。塩化オキサリル、塩化チオニル、または塩化ホスホリルを、温度を約１０℃に維持して、約１時間〜約２４時間（好ましくは約３時間〜約１０時間、より好ましくは約１時間〜約３時間）撹拌しながら溶媒混合物に添加し、中間体Ｆを調製する。中間体Ｆは単離しないが、単離してもよい。

本発明の別の態様は、スルホニルクロリド（中間体Ｆ）をスルホンアミド（式１の化合物）へ変換する方法である。既に約１０℃であるスルホニルクロリドのスラリー（中間体Ｆ）を約−１０℃のメチルアミン冷水溶液に徐々に添加する。メチルアミン溶液は、メチルアミンが約４０％である。添加後、混合物に約１０〜１５容量（１容量≒１ｍＬ／グラム）、好ましくは１１〜１４容量、より好ましくは約１４容量の水を加え、懸濁液を徐々に加熱還流する。約８〜１２容量、好ましくは約１０容量の溶媒を、約６５℃〜約７５℃で留去する（すなわち、１０ｇ規模の反応の場合、約１００ｍＬ）。スラリーを約３５℃まで冷却して、固体を濾過し、室温にて水で洗浄し、乾燥させる。得られた固体の収率は約９２％である。別法として、冷メチルアミンの添加後に、約８容量の水を混合物に加え、ゆっくりと還流させて、約５容量の溶媒を約６５℃〜約７５℃で留去し、次いで蒸留しながら約６容量の水を添加し、合計約１０容量の溶媒が除去されるまで蒸留を継続してもよい。上記のようにスラリーを約３５℃まで冷却し、濾過し、洗浄して、固体を乾燥させる。

本発明の別の態様は、式１の化合物、Ｎ−メチル−１−｛ｔｒａｎｓ−４−［メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ］シクロヘキシル｝−メタンスルホンアミド、

またはその獣医学的に許容される塩の調製方法であって、
ａ）化合物、ｔｒａｎｓ−４−（（メチルアミノ）シクロヘキシル）メタンスルホン酸を、水または水性有機溶媒中で、７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン類似体、さらに塩基と、反応温度約６０℃〜約１０５℃で反応させ、スルホン酸塩を調製すること；
ｂ）有機溶媒中でスルホン酸塩をスルホニルクロリド中間体に変換すること；
ｃ）スルホニルクロリド中間体をメチルアミン冷水溶液と反応させることにより、スルホニルクロリド中間体を式１の化合物に変換することを含む方法である。

工程（ａ）において、７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン類似体は、４−クロロ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンであり、反応は、水または５％Ｎ−メチルピロリドンまたはスルホランである水性有機溶媒中で行われ、塩基は炭酸カリウムであり、反応温度は約１２時間、約９８℃である。工程（ｂ）において、スルホン酸塩からスルホニルクロリドへの変換は、スルホン酸塩を塩化オキサリル、塩化チオニル、または塩化ホスホリルと、アセトニトリルまたはテトラヒドロフランを含む有機溶媒中で、反応温度約１０℃で反応させることにより調製される。さらに有機溶媒は、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホルムアミド、またはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドをさらに含む。好ましい溶媒には、テトラヒドロフラン及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルホルムアミドを含む。工程（ｃ）において、メチルアミン冷水溶液は約４０％であり、約−１０℃である。好ましい反応では、スルホニルクロリド中間体をメチルアミン冷溶液に添加した後に反応物に水を添加する。次いで、反応物をゆっくりと加熱還流させ、溶媒を温度約６５℃〜約７５℃で留去し、得られた固体を約３５℃まで冷却した後、固体を濾過し、室温にて水で洗浄し、濾過し、乾燥させる。得られた固体は、式１の化合物となる。

本発明のさらに別の態様は、以下の工程を含む、式１の化合物、Ｎ−メチル−１−｛ｔｒａｎｓ−４−［メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ］シクロヘキシル｝−メタンスルホンアミドの調製方法である：
ａ）化合物、ｔｒａｎｓ−４−（（メチルアミノ）シクロヘキシル）メタンスルホン酸（中間体Ｃ）を４−クロロ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（中間体Ｄ）及び塩基と、水または約５％ＮＭＰまたはスルホランを含む水性有機溶媒中で、温度約６０℃〜約１０５℃で反応させ、反応物を約３０℃まで冷却し、固体を濾過により単離し、固体を水とメタノール（１：１）、次いでメタノールで洗浄するか、または固体をメタノールのみで洗浄し、スルホネート固体（中間体Ｅ）を乾燥させる；
ｂ）アセトニトリルまたはアセトニトリル／ＤＭＡ（９８：２）またはＴＨＦ：ＤＩＰＦ（９０：１０〜９８：２）またはＴＨＦ：ＤＭＦ（９７：３〜９９：１）の有機溶媒にスルホネート固体を添加し、反応物を約１０℃まで冷却し、反応温度を約１０℃に維持したまま塩化オキサリル、塩化チオニル、または塩化ホスホリルを添加してスルホニルクロリド中間体Ｆを調製することにより、スルホネート（中間体Ｅ）をスルホニルクロリド（中間体Ｆ）に変換する；
ｃ）冷却した（約−１０℃）４０％メチルアミン水溶液に工程（ｂ）の反応物を添加することにより、中間体Ｆを式１の化合物に変換する；
ｄ）水（約１４容量）を添加し、スラリーをゆっくりと加熱還流させ、約６５℃〜約７５℃で約１０容量の溶媒を留去する。次いで、反応混合物を再び約３５℃まで徐々に冷却する；
ｅ）固体を濾過により単離し、室温にて固体を水で洗浄し、濾過して固体を乾燥させる。

本発明のさらに別の態様は、以下の工程を含む、式１の化合物、Ｎ−メチル−１−｛ｔｒａｎｓ−４−［メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ］シクロヘキシル｝−メタンスルホンアミドの調製方法である：
ａ）化合物、ｔｒａｎｓ−４−（（メチルアミノ）シクロヘキシル）メタンスルホン酸（中間体Ｃ）を４−クロロ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（中間体Ｄ）及び炭酸カリウムと、水中にて温度約９８℃で約１２時間反応させ、反応物を約３０℃まで冷却し、固体を濾過により単離し、固体を水とメタノール（１：１）、次いでメタノールで洗浄するか、または固体をメタノールのみで洗浄し、スルホネート固体（中間体Ｅ）を乾燥させる；
ｂ）ＴＨＦ：ＤＩＰＦ（９５：５）の有機溶媒にスルホネート固体を添加し、反応物を約１０℃まで冷却し、反応温度を約１０℃に維持したまま塩化オキサリルまたは塩化ホスホリルを添加してスルホニルクロリド、中間体Ｆを調製することにより、スルホネート（中間体Ｅ）をスルホニルクロリド（中間体Ｆ）に変換する；
ｃ）冷却した（約−１０℃）４０％メチルアミン水溶液に工程（ｂ）の反応物を添加することにより、スルホニルクロリド固体、中間体Ｆを式１の化合物に変換する；
ｄ）約１４容量の水を添加し、スラリーをゆっくりと加熱還流させ、約６５℃〜約７５℃で約１０容量の溶媒を留去した後、反応物を約３５℃まで冷却する；
ｅ）固体を濾過により単離し、室温にて固体を水で洗浄し、濾過して固体を乾燥させる。

本発明のさらに別の態様は、化合物、（ｔｒａｎｓ−４−（メチル（７−トシル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）−シクロヘキシル）メタン−スルホン酸カリウム塩（中間体Ｈ）

の調製方法であり、以下の工程を含む：
ａ）ｔｒａｎｓ−４−（（メチルアミノ）シクロヘキシル）メタンスルホン酸（中間体Ｃ）及び４−クロロ−７−トシル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（ＳｉｇｍａＡｌｄｒｉｃｈ）を、アセトニトリル水溶液中、約７５℃で塩基と反応させる；
ｂ）約８０℃に加温し、約７０％の有機溶媒を蒸留により除去する；
ｃ）ｎ−ブタノールを添加し、下側の水層を廃棄する；
ｄ）残った有機物を加熱し、ｎ−ブタノールを添加する；
ｅ）冷却して結晶化固体、中間体Ｈを得る。

本発明のさらに別の態様は、以下の工程を含む、中間体Ｈの調製方法である：
ａ）ｔｒａｎｓ−４−（（メチルアミノ）シクロヘキシル）メタンスルホン酸（中間体Ｃ）及び４−クロロ−７−トシル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（ＳｉｇｍａＡｌｄｒｉｃｈ）を、約４０％のアセトニトリル水溶液中、約７５℃で約４時間炭酸カリウムと反応させる；
ｂ）約８０℃に加温し、約７０％の有機溶媒を蒸留により除去する；
ｃ）ｎ−ブタノールを添加し、下側の水層を廃棄する；
ｄ）残った有機物を約６５℃に加熱し、ｎ−ブタノールを添加する；
ｅ）反応物を約３時間かけて約１５℃に冷却し、結晶化固体、中間体Ｈを得る。

本発明のさらに別の態様は、以下の工程を含む、式１の化合物、Ｎ−メチル−１−｛ｔｒａｎｓ−４−［メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ］シクロヘキシル｝−メタンスルホンアミドの調製方法である：
ａ）（ｔｒａｎｓ−４−（メチル（７−トシル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）−シクロヘキシル）メタンスルホン酸カリウム塩（中間体Ｈ）を塩化チオニルと、ＴＨＦ及びＤＭＦを含む有機溶媒中で反応させ、約３５℃で約４時間加熱する；
ｂ）反応物を約０℃まで冷却し、温度を約１５℃未満に維持しながら水を徐々に添加する；
ｃ）温度を約１５℃未満に維持しながら反応物を２０％メチルアミン水溶液に添加する；
ｄ）反応物を約３５℃に加温し、相分離させ、下側の水層を廃棄する；
ｅ）ＫＯＨ水溶液を添加し、約４時間加熱還流する；
ｆ）水を加え、内部温度が約７０℃になるまで溶液を蒸留する；
ｇ）スラリーを約１０℃まで冷却する；
ｈ）濾過により固体（式１の化合物）を単離する。

本発明の別の態様は、以下の工程を含む、式１の化合物のマレイン酸塩を調製する方法である：
ａ）Ｎ−メチル−１−｛ｔｒａｎｓ−４−［メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ］シクロヘキシル｝−メタンスルホンアミドをマレイン酸と水中で反応させる；
ｂ）反応物を約６０℃に加熱する；
ｃ）溶液を約５５℃に冷却し、先に調製した式１の化合物のマレイン酸塩を種晶として添加する；
ｄ）毎時約１℃の速度で約３７℃まで、次いで毎時約３℃の速度で約５℃まで冷却する；
ｅ）固体を濾過により単離する。

本発明の別の態様は、（４−（メチルアミノ）フェニル）メタンスルホン酸；ｔｒａｎｓ−４−（（メチルアミノ）シクロヘキシル）メタンスルホン酸；ｔｒａｎｓ−４−（メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロヘキシル）メタンスルホン酸カリウム塩；ｔｒａｎｓ−４−（メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロヘキシル）メタンスルホン酸ナトリウム塩；（（ｔｒａｎｓ）−４−（メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロヘキシル）−メタンスルホニルクロリド；（ｔｒａｎｓ−４−（メチル（７−トシル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）−シクロヘキシル）メタン−スルホン酸カリウム塩；及び（ｔｒａｎｓ−４−（メチル（７−トシル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）−シクロヘキシル）メタン−スルホン酸ナトリウム塩から選択される化合物である。

さらに別の態様は、化合物（４−（メチルアミノ）フェニル）メタンスルホン酸である。さらに別の態様は、化合物ｔｒａｎｓ−４−（（メチルアミノ）シクロヘキシル）−メタンスルホン酸である。さらに別の態様は、化合物ｔｒａｎｓ−４−（メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロヘキシル）メタンスルホン酸カリウム塩である。さらに別の態様は、化合物ｔｒａｎｓ−４−（メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロヘキシル）メタンスルホン酸ナトリウム塩である。さらに別の態様は、化合物（（ｔｒａｎｓ）−４−（メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロヘキシル）−メタンスルホニルクロリドである。さらに別の態様は、化合物（ｔｒａｎｓ−４−（メチル（７−トシル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）−シクロヘキシル）メタン−スルホン酸カリウム塩である。さらに別の態様は、化合物（ｔｒａｎｓ−４−（メチル（７−トシル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）−シクロヘキシル）メタン−スルホン酸ナトリウム塩である。

本発明の別の態様は、獣医学的に許容される担体及び本明細書に記載の方法から調製される式１の化合物を含む動物薬組成物である。

本発明のさらに別の態様は、哺乳動物における、アレルギー反応、アレルギー性皮膚炎、アトピー性皮膚炎、湿疹、掻痒症、喘息、ならびに慢性喘息、難治性喘息、遅発性喘息、気道過敏性気管支炎、気管支喘息、アレルギー性喘息、内因性喘息、外因性喘息、塵喘息、再発気道閉塞、及び慢性閉塞性肺疾患から選択されるその他の閉塞性気道疾患、関節リウマチ、自己免疫性血小板減少症、自己免疫性溶血性貧血、全身性エリテマトーデス、水疱性類天疱瘡、及び脱毛症から選択される自己免疫疾患、乳癌、骨癌、前立腺癌、膀胱癌、メラノーマ、肥満細胞癌、扁平上皮細胞癌、リンパ腫、及び白血病から選択されるがん、炎症性腸疾患、好酸性胃腸炎、肥満細胞症、角膜結膜炎、ならびに乾性角結膜炎から選択される障害または病態を抑制または治療するために、本明細書に記載の方法から調製される式１の化合物を使用する方法またはその使用である。

本発明のさらに別の態様は、哺乳動物における、アレルギー反応、アレルギー性皮膚炎、アトピー性皮膚炎、掻痒症、喘息、ならびに慢性喘息、難治性喘息、遅発性喘息、気道過敏性気管支炎、気管支喘息、アレルギー性喘息、内因性喘息、外因性喘息、塵喘息、再発気道閉塞、及び慢性閉塞性肺疾患から選択されるその他の閉塞性気道疾患から選択される障害または病態を抑制または治療するために、本明細書に記載の方法から調製される式１の化合物を使用する方法またはその使用である。好ましいその使用方法または使用には、アレルギー反応、アレルギー性皮膚炎、アトピー性皮膚炎、及び掻痒症から選択される障害または病態の抑制または治療が含まれる。

本発明のさらに別の態様は、本明細書に記載の方法から調製される式１の化合物を、それを必要とする哺乳動物に投与するための医薬品の調製に使用することである。

結晶形態Ｂ（Ａ）の例示的なＰＸＲＤパターンを示す。結晶形態Ｂ（参照標準）を重畳している形態Ｂ（Ａ）の例示的なＰＸＲＤパターンを示す。結晶形態Ｃの例示的なＰＸＲＤパターンを示す。Ｎ−メチル−１−｛ｔｒａｎｓ−４−［メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ］−シクロヘキシル｝メタンスルホンアミドマレイン酸塩の結晶形態Ｂ（Ａ）の比較ＰＸＲＤ。

式１の化合物、Ｎ−メチル−１−｛ｔｒａｎｓ−４−［メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ］シクロヘキシル｝−メタンスルホンアミド、その中間体、及びそれらの獣医学的に許容される塩に関して、以下の用語は、以下に定義される意味を有する。

定義
本明細書で使用される場合、「約」とは、指定値の実験誤差以内（例えば、平均の９５％信頼区間内）または指定値の１０％以内のいずれか大きい方である変数の指定値及び変数の全値を指す。

疾患を「抑制する」、「治療する」、または疾患の「治療」には、（１）疾患を予防すること、すなわち、疾患に罹患するまたは素因を有する可能性があるが、疾患の症状／徴候がまだ生じていないか、または発症していない哺乳動物に疾患の臨床症状または徴候を発症させないようにすること；（２）疾患を阻害すること、すなわち、疾患またはその臨床症状／徴候の発症を停止または低減すること；または（３）疾患を緩和すること、すなわち、疾患またはその臨床症状／徴候の退縮を引き起こすことを含む。

本明細書で使用される場合、「哺乳動物」とはヒト及び非ヒト動物を指す。動物（複数可）には、家畜と「コンパニオンアニマル」の両方が含まれる。語句「コンパニオンアニマル（単数複数を問わない）」とは、ペットとして飼われている動物を指す。コンパニオンアニマルの例としては、ネコ、イヌ、及びウマが挙げられる。用語「家畜」とは、食品または繊維などの製品を作るため、または労働のために農業環境で飼育または育てられた動物を指す。いくつかの実施形態では、家畜はヒトが消費するのに適したものである。家畜の例としては、ウシ、ヤギ、ウマ、ブタ、子羊を含むヒツジ、及びウサギ、ならびにニワトリ、アヒル、及びシチメンチョウなどの鳥類が挙げられる。

本明細書で使用される場合、「パーセント」（％）とは、個々のパーセント値を指す。水性有機溶媒のような液体中の％（体積／体積％またはｖ／ｖ％）を指す場合、％は溶液の全体積中の溶媒の体積％である（例えば、５％ＮＭＰ＝５ｍＬのＮＭＰと９５ｍＬの水）。液体中の固体の％（重量／体積％またはｗ／ｖ％）を指す場合、％値は、溶液の全体積中の固体の重量と解釈され、１００ｍＬ溶液中の溶質のグラム数を指す。固体を指す場合、（重量％またはｗ／ｗ％）とは、固体組成物の総重量（質量）に対する１つの成分の重量（質量）を指す。

本明細書で使用される場合、「治療有効量」とは、疾患の治療のため哺乳動物に投与したときに、そのような治療が疾患に対して有効となるのに十分な化合物の量を指す。「治療有効量」は、化合物、疾患及びその重症度、ならびに治療される哺乳動物の年齢、体重などに応じて決定されることになる。本発明の場合、治療有効量は、約０．４ｍｇ／ｋｇ〜約０．６ｍｇ／ｋｇである。

「獣医学的に許容される」とは、非ヒト動物での使用に適していることを意味する。

同じ分子式を有しているが、原子の結合の性質もしくは順序、または原子の空間配置が異なる化合物を「異性体」と呼ぶ。原子の空間配置が異なる異性体を「立体異性体」と呼ぶ。当業者であれば、式１の化合物がシス型及びトランス型のアキラルなジアステレオマーとして存在する可能性があることを理解されよう。具体的には、本発明は、Ｎ−メチル−１−｛ｔｒａｎｓ−４−［メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ］シクロヘキシル｝−メタンスルホンアミドという化学名を有する式１の化合物

またはその獣医学的に許容される塩の調製方法を提供する。

本発明の範囲には、式１のものを含む、本明細書に記載の中間体のすべての異性体（例えば、シス型、トランス型のアキラルなジアステレオマー）単独、ならびにその任意の混合物が包含される。

立体異性体混合物、例えばジアステレオマーの混合物は、既知の方法で適切な分離方法によって、それぞれの対応する異性体に分離することができる。ジアステレオマー混合物は、例えば、分別結晶化、クロマトグラフィー、溶媒分配、及び同様の手順によって個々のジアステレオマーに分離することができる。この分離は、いずれか１つの出発化合物の段階で、または式１の化合物自体に行うことができる。

投与経路
動物の障害を治療するための治療的使用において、本発明の化合物（式１）またはその動物薬組成物を経口投与、非経口投与、局所投与、直腸投与、経粘膜投与、または腸内投与することができる。非経口投与には、全身作用を生じさせるための間接注射または罹患領域への直接注射が含まれる。局所投与には、局所塗布によって容易に到達可能な皮膚または器官、例えば、目または耳の治療が含まれる。これにはまた、全身作用を生じさせる経皮送達を含む。直腸投与には坐剤の形態が含まれる。好ましい投与経路は、経口及び非経口である。

動物薬用の塩
式１の化合物は、その天然形態で、または塩として使用することができる。安定な非毒性の酸性塩または塩基性塩の形成が望ましい場合、獣医学的に許容される塩としての化合物の投与が適している場合がある。式１の化合物の獣医学的に許容される塩として、酢酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベシル酸塩、重炭酸塩／炭酸塩、重硫酸塩／硫酸塩、ホウ酸塩、カンシル酸塩、クエン酸塩、エジシル酸塩、エトグルタル酸塩（ｅｔｏｇｌｕｔａｒａｔｅ）、エシル酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘキサフルオロリン酸塩、ヒベンズ酸塩、塩酸塩／塩化物、臭化水素酸塩／臭化物、ヨウ化水素酸塩／ヨウ化物、イソチオン酸塩、乳酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メシル酸塩、メチル硫酸塩、ナフチル酸塩、２−ナプシル酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オロチン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、リン酸塩／リン酸水素塩／リン酸二水素塩、サッカリン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、トシル酸塩、及びトリフルオロ酢酸塩が挙げられる。好ましい塩はマレイン酸塩である。

組成物／製剤
本発明の動物薬組成物は、当技術分野で周知の方法、例えば従来的な混合、溶解、造粒、糖衣錠製造、粉末化、乳化、カプセル化、封入、凍結乾燥処理、または噴霧乾燥によって製造することができる。本発明に従って使用される動物薬組成物は、活性化合物の製剤への加工を容易にし、製薬に使用することができる賦形剤及び補助剤を含む１種以上の獣医学的に許容される担体を使用して従来の方法で製剤化することができる。適切な製剤は、選択された投与経路に依存する。獣医学的に許容される賦形剤及び担体は一般に当業者に既知であり、よってこれは本発明に含まれる。このような賦形剤及び担体は、例えば、「ＲｅｍｉｎｇｔｏｎｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ」ＭａｃｋＰｕｂ．Ｃｏ．，ＮｅｗＪｅｒｓｅｙ（１９９１）に記載されている。本発明の製剤は、短時間作用性、高速放出性、長時間作用性、及び徐放性に設計することができる。したがって、動物製剤はまた、制御放出用または遅延放出用に製剤化することもできる。

用量
本発明での使用に適した動物薬組成物には、意図された目的、すなわち障害または疾患の抑制または治療を達成するのに十分な量で活性成分が含有されている組成物を含む。より具体的には、治療有効量とは、疾患の症状／徴候を予防、緩和、もしくは改善するか、または治療される対象の生存を延長させるのに有効な化合物の量を意味する。動物薬組成物及びその単位剤形中の活性成分（本発明の式１の化合物）の量は、投与方法、化合物固有の効力、及び所望の濃度に応じて幅広く変更または調整することができる。治療有効量の決定は、当業者が十分に行える範囲である。一般に、活性成分の量は、組成物の０．０１重量％〜９９重量％の範囲となる。

一般に、治療有効量の活性成分の用量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ体重／日〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重／日、好ましくは約０．１ｍｇ／ｋｇ体重／日〜約１０ｍｇ／ｋｇ体重／日、より好ましくは約０．３ｍｇ／ｋｇ体重／日〜約３ｍｇ／ｋｇ体重／日、さらにより好ましくは約０．３ｍｇ／ｋｇ体重／日〜約１．５ｍｇ／ｋｇ体重／日、さらにより好ましくは約０．４ｍｇ／ｋｇ体重／日〜約０．６ｍｇ／ｋｇ体重／日の範囲となる。好ましい用量レジメンは、約０．４ｍｇ／ｋｇ体重／日〜約０．６ｍｇ／ｋｇ体重／日を最大１４日間経口投与し、その後、維持療法として１日１回約０．４ｍｇ／ｋｇ体重〜約０．６ｍｇ／ｋｇ体重の用量で経口投与することである。式１の化合物のマレイン酸塩の錠剤強度は、投与量中、３．６ｍｇ、５．４ｍｇ、及び１６ｍｇと規定される。このような錠剤は、１日１回または１日２回の投与で約０．４〜０．６ｍｇ／ｋｇ体重という投与量を維持するように様々な比率で投与することができる。用量は、各対象に要求される条件、及び治療される障害または疾患の重症度に応じて変更できるものと理解されるべきである。利便上、単回投与で、あるいは適切な間隔で投与される分割投与として、例えば１日あたり２回、３回、４回、またはそれ以上の分割量として望ましい量を与えてもよい。分割量自体を、例えば、複数回の大まかな間隔を空けた個別の投与にさらに分割してもよい。例えば、これは、吸入器からの複数回の吸入、または目の中への複数滴の点眼によるものなどである。

また、望ましい血漿濃度を迅速に達成するために、初回に投与する用量が上記の上限レベルを上回ってもよいものと理解されるべきである。他方で、初回用量を最適値より小さくし、治療期間中に特定の状況に応じて１日用量を徐々に増加させてもよい。必要に応じて、１日量はまた、複数回の投与量、例えば、１日あたり２〜４回に分割することができる。

医療及び獣医学の用途
本発明の化合物は、Ｊａｎｕｓキナーゼ−１（ＪＡＫ−１）、Ｊａｎｕｓキナーゼ−２（ＪＡＫ−２）、及びＪａｎｕｓキナーゼ−３（ＪＡＫ−３）、特にＪＡＫ−１に対して有効性を有するＪａｎｕｓキナーゼ阻害剤（ＪＡＫ−ｉ）である。したがって、がん、喘息、アトピー性皮膚炎、自己免疫障害、掻痒の抑制、慢性呼吸器疾患、及び免疫抑制／免疫調節が望ましい他の適応症の治療薬として有用である。好ましい用途は、イヌにおけるアレルギー性皮膚炎に伴う掻痒の抑制及びアトピー性皮膚炎の抑制である。

式１の化合物は、単独で、または哺乳動物の免疫系を調節する１種以上の追加薬剤、もしくは抗炎症剤と組み合わせて、獣医学的に許容される形態で投与することができる。これらの薬剤として、シクロスポリンＡ、ラパマイシン、ＦＫ−５０６（タクロリムス）、レフルノミド、デオキシスペルグアリン、ミコフェノール酸、アザチオプリン、ダクリズマブ、アスピリン、アセトアミノフェン、イブプロフェン、ナプロキセン、ピロキシカム、及び抗炎症性ステロイド（例えば、プレドニゾロンまたはデキサメタゾン）が挙げられるが、これらに限定されない。これらの薬剤は、当業者に既知の標準的な獣医学的慣例に従って、同一または別々の剤形の一部として、同一または異なる投与経路によって、及び同一または異なる投与スケジュールで投与することができる。

ＪＡＫ−３を含むＪＡＫキナーゼは、小児癌の最も一般的な形態である急性リンパ芽球性白血病をもつ小児由来の原発性白血病細胞において多量に発現し、研究によれば、ある特定の細胞でのＳＴＡＴ活性化がアポトーシスを制御するシグナルと相関している（Ｄｅｍｏｕｌｉｎｅｔａｌ．，（１９９６），Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１６：４７１０−６；Ｊｕｒｌａｎｄｅｒｅｔａｌ．，（１９９７），Ｂｌｏｏｄ８９：４１４６−５２；Ｋａｎｅｋｏｅｔａｌ．，（１９９７），Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎ．１０９：１８５−１９３；ａｎｄＮａｋａｍｕｒａｅｔａｌ．，（１９９６），Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：１９４８３−８）。ＪＡＫキナーゼはリンパ球の分化、機能、及び生存にとって重要であることも知られている。特に、ＪＡＫ−３は、リンパ球、マクロファージ、及び肥満細胞の機能に不可欠な役割を果たす。このＪＡＫキナーゼの重要性を考慮すると、ＪＡＫ経路を調節する化合物は、ＪＡＫ−３のために選ばれたものを含め、リンパ球、マクロファージ、または肥満細胞の機能が関与する疾患または病態の治療に有用であり得る（Ｋｕｄｌａｃｚｅｔａｌ．，（２００４）Ａｍ．Ｊ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ４：５１−５７；Ｃｈａｎｇｅｌｉａｎ（２００３）Ｓｃｉｅｎｃｅ３０２：８７５−８７８）。

ＪＡＫ経路の標的化またはＪＡＫキナーゼの調節が治療上、有用であると企図される病態として、関節炎、喘息、自己免疫疾患、がんまたは腫瘍、糖尿病、ある種の眼疾患、眼障害または眼病態、炎症、腸炎症、アレルギー、神経変性疾患、乾癬、移植拒絶反応、及びウイルス感染が挙げられる。ＪＡＫの阻害が有益であり得る病態について、以下でさらに詳細に考察する。

このように、式１の化合物またはその獣医学的に許容される塩及び動物薬組成物を使用して、種々の病態または疾患を治療することができるが、それらは、
慢性もしくは難治性喘息、遅発性喘息、気道過敏性気管支炎、気管支喘息、アレルギー性喘息、内因性喘息、外因性喘息、塵喘息、再発気道閉塞、及び慢性閉塞性肺疾患を含む、喘息及びその他の閉塞性気道疾患；
単臓器または単細胞型自己免疫障害に指定されるもの、例えば、自己免疫性溶血性貧血、悪性貧血の自己免疫性萎縮性胃炎、自己免疫性脳脊髄炎、自己免疫性睾丸炎、自己免疫性血小板減少症、交感神経性眼炎、潰瘍性大腸炎、及び膜性糸球体症など、全身性自己免疫疾患に関与すると指定されるもの、例えば、全身性エリテマトーデス、全身性硬化症、及び水疱性類天疱瘡などを含む自己免疫疾患または障害、ならびに、自己免疫性脱毛症及び甲状腺炎を含むＯ細胞（体液性）に基づき得るまたはＴ細胞に基づき得る別の自己免疫疾患；
がんまたは腫瘍、例えば、消化管／胃腸管癌、結腸癌、肝臓癌、肥満細胞腫瘍及び扁平上皮細胞癌を含む皮膚癌、乳癌及び乳腺癌、卵巣癌、前立腺癌、リンパ腫、急性骨髄性白血病及び慢性骨髄性白血病を含む白血病、腎臓癌、肺癌、筋肉癌、骨癌、膀胱癌、脳癌、口腔黒色腫及び転移性黒色腫を含む黒色腫、カポジ肉腫、多発性骨髄腫を含む骨髄腫、骨髄増殖性障害、増殖性糖尿病性網膜症、ならびに固形腫瘍を含む血管新生関連疾患；
眼の自己免疫疾患、角結膜炎、及び乾性角結膜炎（ドライアイ）を含む眼疾患、眼障害、または眼病態；
潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、セリアック病、直腸炎、好酸球性胃腸炎、及び肥満細胞症を含む、腸の炎症、アレルギー、または病態；
アトピー性皮膚炎、湿疹、乾癬、強皮症、掻痒症、及び他の掻痒病態を含む、皮膚の疾患、病態、または障害；
ウマの蚊刺過敏症、夏癬、及びスイートイッチなどの馬アレルギー疾患を含む哺乳動物のアレルギー性皮膚炎を含むアレルギー反応などである。

別の実施形態は、ＪＡＫ−１、ＪＡＫ−２、ＪＡＫ−３、及び／またはＴｙｋ−２を含むＪＡＫ酵素を阻害する方法であって、ＪＡＫ酵素を非治療量または治療有効量の式１の化合物と接触させることを含む方法を提供する。そのような方法は、ｉｎｖｉｖｏまたはｉｎｖｉｔｒｏで行うことができる。ｉｎｖｉｔｒｏでの接触には、種々の量または濃度での、選択された酵素に対する式１の化合物の有効性を決定するスクリーニングアッセイを含み得る。治療有効量の式１の化合物とのｉｎｖｉｖｏでの接触には、記載された疾患、障害、もしくは病態の治療、または接触を行う動物における臓器移植拒絶反応の予防を含み得る。ＪＡＫ酵素及び／または宿主動物に対する式１の化合物の効果もまた、決定または測定することができる。ＪＡＫ活性を決定する方法としては、ＷＯ１９９９／６５９０８及びＷＯ２００７／０１２９５３に記載されるものが挙げられる。

以下の反応スキームは、式１の化合物を調製するための一般合成手順を例示している。出発物質はすべて、これらのスキームに記載された手順によって、または当業者に既知の手順によって調製される。

以下の非限定的な試薬を使用して、本明細書に記載の中間体及び式１の化合物を調製した：テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）；Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）；Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）；Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）；１，８−ジアザビシクロウンデカ−７−エン（ＤＢＵ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホルムアミド（ＤＩＰＦ）、メタノール（ＭｅＯＨ）、エタノール（ＥｔＯＨ）、水酸化カリウム（ＫＯＨ）、及びアセトニトリル（ＡＣＮ）。メチルアミンの４０％水溶液は、業者（例えば、ＳｉｇｍａＡｌｄｒｉｃｈ）から購入することができる。中間体Ｇ（４−クロロ−７−トシル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン）もＳｉｇｍａＡｌｄｒｉｃｈから購入することができる。

スキーム１：中間体（Ｃ）、ｔｒａｎｓ−４−（（メチルアミノ）シクロヘキシル）−メタンスルホン酸の調製。

中間体ａ１を出発物質として、アセトニトリル、アセトン、水混和性アルコール（例えば、メタノール、エタノール、プロパノールなど）、または水混和性エーテル（例えば、ＴＨＦ、ジエチルエーテル、ジオキサンなど）などの有機溶媒を０〜約５０％含有する水溶液中で、Ｙを亜硫酸塩（例えば、Ｍはカリウム、ナトリウム、またはカルシウムである）で置換し、中間体ａ２を調製する。Ｙは、亜硫酸塩による求核置換を受けやすい任意の官能基であってよく、例えば、Ｙは、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｏ−トシル、Ｏ−メシル、Ｏ−トリフラートなどであり得る。ＸはＢｒであるが、Ｉであってもよい。好ましい出発物質は、市販されている４−ブロモベンジルブロミド（すなわち、Ｘ及びＹが両方ともＢｒである中間体ａ１）である。反応は約５０℃から還流温度の間で行うことができる。４−ブロモベンジルブロミドを出発物質とし、本明細書に記載の反応条件下で亜硫酸ナトリウムと反応させると、（４−ブロモフェニル）メタンスルホン酸ナトリウム、中間体Ａが得られる。

次に、約５％〜約４０％のメチルアミンを含有する水溶液中で、中間体Ａの臭素を求核置換して中間体Ｂを調製する。銅触媒は、銅（０）または任意の銅（１）塩であってよく、触媒の充填量は約０．２５ｍｏｌ％を超える任意の量であり得る。好ましい触媒は、約２ｍｏｌ％の銅（１）塩ＣｕＢｒである。この反応は、約５０℃超の温度で行うことができる。次いで、酸を加えて亜硫酸塩をプロトン化し、中間体Ｂを調製する。第３工程では、パラジウムを用いて温和な条件下で中間体Ｂを接触水素化し、トランス特異的な中間体Ｃを調製する。既知の科学文献（例えば、米国特許出願公開第２００９−０１４３３０２号、米国特許第ＵＳ４，４２４，２１３号、及びＮａｉｒ，Ｍ．Ｇ．，Ｊ．ＭｅｄＣｈｅｍ．１９８３，２６（２），ｐｇ．１３５）には、主としてシス特異的な幾何類似体を生成する、反応性の高い金属触媒（例えば、Ｒｈ、Ｐｔ、及びＰｔＯ_２）による４−置換Ｎ−アルキルアニリンの水素化について記載されている。好ましくは、水とメタノールの溶媒中で、炭素担持Ｐｄ（０）を用いて、加圧した水素ガス（約２０ｐｓｉ〜約７０ｐｓｉ）により水素化を行う。最終反応により、約７０：３０の（トランス：シス）比でトランス幾何構造体の中間体Ｃが生成される。水性アルコール（例えば、メタノール、エタノール、イソプロパノールなど）からの結晶化により、トランス特異的生成物を９９％超まで精製することができる。別法として、Ｐｄ（０）触媒、またはＰｄ（ＯＨ）_２などの酸化パラジウム（Ｐｄ（ＩＩ））触媒を使用し、水素源としてギ酸またはギ酸塩を用いた水素移動条件下で中間体Ｃを中間体Ｂから調製することができる。

スキーム２：式（１）の化合物の調製

第１の工程で、中間体Ｃを７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン類似体（中間体Ｄ１）と反応させてスルホン酸塩を調製する。好ましいＤ１中間体は、容易に入手可能な市販化合物である４−クロロ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（中間体Ｄ、すなわちＤ１のＷはＣｌである）であり、これをカップリング反応に使用してスルホン酸塩（中間体（Ｅ））を調製する。中間体Ｄ類似体の官能基Ｗは、Ｃｌである必要はないが、容易に置換可能な任意の官能基（例えば、Ｆ、Ｂｒ、Ｉ、Ｏ−トリフレート、Ｏ−メシル、Ｏ−トシルなど）であり得る。好ましい溶媒は、約５％のＮＭＰまたはスルホランを含む水であるが、反応は、水のみで、または水混和性アルコール（例えば、メタノール、エタノール、プロパノールなど）、水混和性エーテル（ＴＨＦ、ジメチルエーテル、ビス（２−メトキシエチル）エーテル、ジオキサンなど）、及び極性非プロトン性溶媒（例えば、アセトン、アセトニトリル、ＤＭＳＯ、ＤＭＦなど）を含む、約０〜５０％の他の水混和性有機溶媒を添加して行うことができる。この別法には塩基も必要であり、これは炭酸カリウムが優先されるが、他の炭酸塩（例えば、リチウム、ナトリウム、またはセシウム）、水酸化物（リチウム、カリウム、ナトリウム、またはセシウム）、またはトリアルキルアミン（例えば、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミンなど）及び１，８−ジアザビシクロウンデカ−７−エン（ＤＢＵ）などの有機塩基であってもよい。この反応の反応温度は、少なくとも約６０℃〜約１０５℃である。好ましい温度は約９８℃である。

第２の工程は、塩化オキサリル、塩化ホスホリル、塩化チオニル、またはこの変換を生じさせることが知られている他の任意の試薬（例えば、五塩化リン、ホスゲン、トリホスゲンなど）を使用した、スルホニルクロリド（中間体Ｆ）への変換を経由し、スルホン酸塩（中間体Ｅ）を式１のメチルスルホンアミドに変換することである。この反応に好ましい溶媒はアセトニトリルまたはＴＨＦであるが、塩化オキサリルまたは塩化ホスホリルと相溶性のある他の溶媒、及び他の塩化物試薬が、塩化メチレン、ジクロロエタン、ＤＭＦ、ＤＭＡ、ＮＭＰ、ＤＩＰＦ、ＴＨＦ、２−メチルテトラヒドロフラン、ジメトキシエタン、ジオキサンなどと同様に機能することが示されている。これらの溶媒、例えば、ＴＨＦとＤＭＡ、ＴＨＦとＤＩＰＦといった混合物も企図される。この反応は、好ましくは約０℃〜約２０℃の温度で行われるが、この範囲に限定されない。好ましい反応温度は約１０℃である。スルホニルクロリド（中間体Ｆ）を冷メチルアミンと反応させて式１のメチルスルホンアミドを生成する。好ましくは、メチルアミンは低温（約−１５℃〜約０℃）であり、４０％メチルアミン水溶液であるが、気体状のメチルアミン、及び有機溶媒（ＴＨＦまたはエタノールなど）に溶解したメチルアミンも機能し得る。

トシル中間体を用いて式１の化合物を調製する代替合成法
この別法による変換を以下のスキーム３に示す。中間体Ｃを中間体Ｇ（市販化合物、４−クロロ−７−トシル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン；すなわち、Ｔｓはトシルである））と反応させ、カップリングされた中間体Ｈ（ＣＡＳ１２０８３１９−３０−５）を得る。この反応は、好ましくは、アセトニトリル／水の４０／６０混合物中で行われるが、２−プロパノール、ＴＨＦ、及びジオキサンなどの他の有機溶媒を使用してもよい。反応には塩基が必要であり、好ましくは少なくとも１．５当量の炭酸カリウムであるが、他の有機塩基（例えば、炭酸塩、トリアルキルアミン、ＤＢＵなど）を使用してもよい。この反応は、好ましくは約７５℃以上で行われるが、約５０℃の低温で行ってもよい。中間体Ｈを、ｎ−ブタノール／水の混合物または水単独からの結晶化により単離する。

スキーム３：トシル中間体Ｈの調製

以下の手順の工程及び実施例は、本発明の式１の中間体及び式１の化合物の調製方法を例示したものである。

中間体Ａ：（４−ブロモフェニル）メタンスルホン酸ナトリウム
４−ブロモベンジルブロミド（５００ｇ、２．００ｍｏｌ）及び亜硫酸ナトリウム（２９６ｇ、１．１５ｅｑ）を入れたフラスコに、水（１．２５Ｌ）及びアセトニトリル（２２０ｍＬ）を添加した。スラリーを約４時間撹拌しながら約８０℃に加熱した後、約１０℃まで冷却した。固体を濾過により単離し、減圧乾燥させ、５４７ｇの白色固体（中間体（Ａ））を得た。^１ＨＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ，６００ＭＨｚ）：７．４４（ｄ，２Ｈ），７．１８（ｄ，２Ｈ），４．００（ｓ，２Ｈ）。ＭＳ：Ｍ＋Ｈ−Ｎａ＝２５１。

中間体Ｂ：（４−（メチルアミノ）フェニル）メタンスルホン酸
（４−ブロモフェニル）メタンスルホン酸ナトリウム（中間体Ａ、１．００ｋｇ、３６６ｍｍｏｌ）を入れたフラスコに、臭化銅（Ｉ）（１０．３ｇ）、水（１．２Ｌ）、及び４０％メチルアミン水溶液（０．８５Ｌ）を添加した。フラスコを密封し、反応物を約９０℃で約１６時間加熱した。反応物を約６５℃に冷却し、クエン酸（６８ｇ）水溶液（１３０ｍＬ）を添加して、約２０分間撹拌して銅残渣を除去した。反応物に水（１．４Ｌ）を添加し、濃塩酸水溶液でｐＨを３．２に調整した。白色スラリーを約１５℃に冷却した後、生成物を濾過により単離した。生成物を水（０．７Ｌ）で洗浄した後、減圧乾燥させ、６３０ｇの白色固体（中間体（Ｂ））を得た。^１ＨＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ，６００ＭＨｚ）：７．４２（ｄ，２Ｈ），７．３１（ｄ，２Ｈ），４．０７（ｓ，２Ｈ），２．９３（ｓ，３Ｈ）。ＭＳ：Ｍ＋Ｈ＝２０２。

中間体Ｃ：ｔｒａｎｓ−４−（（メチルアミノ）シクロヘキシル）メタンスルホン酸
（４−（メチルアミノ）フェニル）メタンスルホン酸（１００ｇｍ、４９８ｍｍｏｌ、中間体Ｂ）を入れた水素化容器に、水（３７５ｍＬ）、メタノール（１２５ｍＬ）、及び炭素担持１０％パラジウム（５０％湿潤品、６ｇ）を加えた。反応物を約７０℃に加熱し、水素（３０ｐｓｉ）圧力を約１６時間維持した。触媒を濾過により除去した。反応物を減圧下で容量１８０ｍＬまで濃縮した。この溶液にエタノール８００ｍＬを添加した。反応物を約４５℃まで加熱した後、約４時間かけて約０℃に冷却した。生成物を濾過により単離し、エタノール（１００ｍＬ）で洗浄し、減圧乾燥させて、４５ｇの白色固体（中間体（Ｃ））を得た。^１ＨＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ，６００ＭＨｚ）：２．９１（ｓ，ｍ），２．７１（ｄ，２Ｈ），２．５４（ｓ，３Ｈ），１．９９（ｄｄ，４Ｈ），１．７０（ｍ，１Ｈ），１．２８（ｄｑ，２Ｈ），１．０５（ｄｑ，２Ｈ）；Ｍ＋Ｈ＝２０８

中間体Ｅ：（（ｔｒａｎｓ）−４−（メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロヘキシル）−メタンスルホン酸カリウム塩
ｔｒａｎｓ−４−（（メチルアミノ）シクロヘキシル）メタンスルホン酸（５．０ｇ、２４ｍｍｏｌ、中間体Ｃ）、４−クロロ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（３．５ｇ、２２．８ｍｍｏｌ、中間体Ｄ（ＷがＣｌである中間体Ｄ１））、及び炭酸カリウム（５．７７ｇ、４１ｍｍｏｌ）を入れたフラスコに水（２７ｍＬ）を添加した。混合物を約９８℃で約１２時間加熱し、約３０℃まで冷却し、濾過した。固体をメタノール（３２ｍＬ）で洗浄した。これを約６０℃で減圧乾燥させた後、７．４６ｇの白色粉末（中間体（Ｅ））を得た。^１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，６００ＭＨｚ）：１１．７（ｓ，１Ｈ），８．０７（ｓ，１Ｈ），７．１１（ｄ，１Ｈ），６．５１（ｓ，１Ｈ），４．５５（ｂｒｓ，１Ｈ），３．１４（ｓ，３Ｈ），２．３７（ｄ，２Ｈ），２．１０（ｂｒｄ，２Ｈ），１．７１（ｍ，１Ｈ），１．６４（ｍ，４Ｈ），１．０９（ｍ，２Ｈ）。Ｍ＋Ｈ−Ｋ＝３２４

式１：Ｎ−メチル−１−｛ｔｒａｎｓ−４−［メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ］シクロヘキシル｝メタンスルホンアミドの調製
ＤＭＦ（０．５ｍＬ）またはＤＩＰＦ（５ｍＬ）を加えたアセトニトリル（３０ｍＬ）またはＴＨＦ（１００ｍＬ）中の、（（ｔｒａｎｓ）−４−（メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロヘキシル）メタンスルホン酸カリウム塩（中間体Ｅ）（１０．０ｇ、２７．６ｍｍｏｌ）のスラリーを約１０℃に冷却した。これに塩化オキサリル（４５ｍｍｏｌ、３．９ｍＬ、５．７ｇ（１．６５当量））または塩化ホスホリル（４９．６８ｍｍｏｌ、４．６ｍＬ、１．８当量）をゆっくりと添加し、スラリーを約１０℃に維持し、少なくとも約１時間〜約３時間撹拌し、（（ｔｒａｎｓ）−４−（メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロヘキシル）−メタンスルホニルクロリド中間体（中間体Ｆ）を調製した。反応物を、冷却した（約−１０℃）メチルアミン水溶液（４０％、３０ｍＬ、３３０ｍｍｏｌ）にゆっくりと添加した。添加が完了したら、水（１４０ｍＬ）を加え、反応物を約２時間かけてゆっくりと約６５℃〜約７５℃に加温する間に、約１００ｍｌの溶媒を蒸留し、その後、約１時間かけて約３５℃まで徐々に冷却し、固体を濾過により単離した。さらに固体を室温にて４０ｍＬの水で洗浄し、生成物を濾過により単離した。固体を減圧乾燥させ、８．３ｇの白色固体（式１の化合物）を得た。^１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，６００ＭＨｚ）：１１．６（ｓ，１Ｈ），８．０９（ｓ，１Ｈ），７．１３（ｔ，１Ｈ），６．５４（ｓ，１Ｈ），４．６８（ｂｒｓ，１Ｈ），３．１７（ｓ，３Ｈ），２．９６（ｄ，３Ｈ），２．５９（ｄ，２Ｈ），２．０５（ｂｒｄ，２Ｈ），１．８５（ｍ，１Ｈ），１．６９（ｍ，４Ｈ），１．２９（ｍ，２Ｈ）。Ｍ＋Ｈ＝３３８。

別法として、トシル保護したスルホン酸ナトリウムを用いて式１の化合物を調製することができる。

中間体Ｈ：（ｔｒａｎｓ−４−（メチル（７−トシル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）−シクロヘキシル］メタンスルホン酸カリウム塩
ｔｒａｎｓ−４−（（メチルアミノ）シクロヘキシル）メタンスルホン酸（中間体Ｃ、４４．０ｇ、２１２ｍｍｏｌ）及び４−クロロ−７−トシル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（６０．０ｇ、１９５ｍｍｏｌ、中間体Ｇ）を入れたフラスコに、水（１２０ｍＬ）、アセトニトリル（９０ｍＬ）、及び炭酸カリウム（７０．８ｇ、５０７ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を約７５℃で約４時間加熱した後、約８０℃まで加温し、約６５ｍＬの溶媒を蒸留により除去した。反応物に、ｎ−ブタノール（３００ｍＬ）及び水（４０ｍＬ）を添加した。反応物を約７０℃に加温し、下側の水層を除去し、廃棄した。残った有機物を約７０℃に加熱し、追加量のｎ−ブタノール（６００ｍＬ）を添加した。溶液を約３時間かけて約１５℃に冷却した。この間に結晶化した生成物を、濾過により単離し、ｎ−ブタノール（１００ｍＬ）で洗浄した。生成物を約６０℃で減圧乾燥させ、９４．７ｇの白色粉末（中間体Ｈ）を得た。^１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，６００ＭＨｚ）：８．２２（ｓ，１Ｈ），７．９７（ｄ，２Ｈ），７．５９（ｄ，１Ｈ），７．４４（ｄ，２Ｈ），６．８０（ｂｒｓ，１Ｈ），４．７（ｂｒｓ，１Ｈ），３．１２（ｓ，３Ｈ），２．３７（ｓ，３Ｈ），２．３５（ｄ，２Ｈ），２．０７（ｍ，２Ｈ），１．７４（ｍ，１Ｈ），（１．６０（ｍ，４Ｈ），１．０８（ｍ，２Ｈ）。ＭＳＭ＋Ｈ−Ｎａ＝４７９

中間体Ｈからの式１の化合物の調製
フラスコに、トシル硫酸カリウム（中間体Ｈ）（７０ｇ、１３５ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ（４９０ｍＬ）、ＤＭＦ（１ｇ、１３ｍｍｏｌ）、及び塩化チオニル（２９．１ｇ、２４４ｍｍｏｌ）を入れた。反応物を３時間かけて３５℃に加熱した後、約０℃まで冷却した。温度を約１５℃未満に維持しながら水（２ｍＬ）を徐々に添加した。メチルアミン水溶液（２０％水溶液、１８８ｍＬ）を約−５℃に冷却した。温度が約１０℃を超えないような速度で、冷却したメチルアミン溶液に反応物を添加した。反応物を約３５℃に加温し、下側の水層を廃棄した。残った有機相に４５％水酸化カリウム水溶液（３８ｇ、３０５ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を約４時間加熱還流した。反応物に追加の水（４５０ｍＬ）を加え、この溶液を内部温度が約７５℃に達するまで蒸留した。得られたスラリーを約１０℃に冷却し、生成物を濾過により単離した。生成物を減圧乾燥させて３９ｇの白色固体（式１）を得た。１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，６００ＭＨｚ）：１１．６（ｓ，１Ｈ），８．０９（ｓ，１Ｈ），７．１３（ｔ，１Ｈ），６．５４（ｓ，１Ｈ），４．６８（ｂｒｓ，１Ｈ），３．１７（ｓ，３Ｈ），２．９６（ｄ，３Ｈ），２．５９（ｄ，２Ｈ），２．０５（ｂｒｄ，２Ｈ），１．８５（ｍ，１Ｈ），１．６９（ｍ，４Ｈ），１．２９（ｍ，２Ｈ）。Ｍ＋Ｈ＝３３８。

式１の化合物塩の形成、実施例１
フラスコに、マレイン酸（９．５ｇ、８１．８ｍｍｏｌ）、Ｎ−メチル−１−｛ｔｒａｎｓ−４−［メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ］シクロヘキシル｝メタンスルホンアミド（式１の化合物；２５ｇ、７４．１ｍｍｏｌ）、及び水（２５０ｍＬ）を入れた。これを約６０℃に加熱すると、物質は透明な溶液になった。溶液を約５５℃に冷却し、先に単離した式１の化合物のマレイン酸塩（２５ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ）を種晶として添加した。反応物を、毎時約１℃の速度で約３７℃まで、次いで毎時約３℃の速度で約５℃まで冷却した。生成物を濾過により単離し、水（１００ｍＬ）で洗浄した。これにより、３０．９ｇの白色物質、Ｎ−メチル−１−｛ｔｒａｎｓ−４−［メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ］シクロヘキシル｝メタンスルホンアミドマレイン酸塩を一水和物、形態Ｂ（Ａ）として得た。１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）１２．０（ｓ，１Ｈ），８．１８（ｓ，１Ｈ），７．２５（ｂｒｓ，１Ｈ），６．９０（ｑ，１Ｈ），６．６４（ｂｒｓ，１Ｈ），６．１９（ｓ，２Ｈ），４．５５（ｂｒｓ，１Ｈ），３．２０（ｓ，３Ｈ），２．９５（ｄ，２Ｈ），２．５８（ｄ，３Ｈ），２．０５（ｄ，２Ｈ），１．８５（ｍ，１Ｈ），１．７２（ｂｒｓ，４Ｈ），１．３０（ｍ，２Ｈ）。

式１の化合物塩の形成、実施例２
フラスコに、マレイン酸（１４．４５ｇ、１２４．５ｍｍｏｌ）、Ｎ−メチル−１−｛ｔｒａｎｓ−４−［メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ］シクロヘキシル｝メタンスルホンアミド（式１の化合物；４０ｇ、１１８．５ｍｍｏｌ）、及び水（４００ｍＬ）を入れた。これを約６５℃に加熱すると、物質は透明な溶液になった。溶液を約５０℃に冷却し、先に単離した式１の化合物のマレイン酸塩（４００ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）を種晶として添加した。反応物を、毎時約２℃の速度で約４０℃まで、次いで毎時約５℃の速度で約５℃まで冷却した。生成物を濾過により単離し、冷水（１６０ｍＬ）で洗浄した後、相対湿度４２％で空気乾燥させた。これにより、５０．０ｇの白色物質、Ｎ−メチル−１−｛ｔｒａｎｓ−４−［メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ］シクロヘキシル｝メタンスルホンアミドマレイン酸塩を一水和物、形態Ｂ（Ａ）として得た。

式１の化合物塩の形成、実施例３
Ｎ−メチル−１−｛ｔｒａｎｓ−４−［メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ］シクロヘキシル｝メタンスルホンアミド（式１の化合物）及びマレイン酸（１．１当量；０．３７８ｋｇ／ｋｇの式１の化合物）を入れたタンクに、５０〜６５℃の水（１０Ｌ／ｋｇ）を加え、混合物を固体が溶解するまで５５〜６０℃で撹拌した。この溶液を清澄化して予熱したタンクに受け、再び５５〜６０℃で撹拌して透明な溶液を得た。結晶化混合物を４５℃に冷却し、予め単離した形態Ｃの生成物を種晶として添加する。３７℃に達するまで１℃／時、次いで０〜５℃まで３℃／時の冷却が得られるようにジャケットを調整した。短時間の撹拌後、生成物を濾取し、冷水（５Ｌ／ｋｇ）で洗浄した。カールフィッシャー法による水分含量が約４％になるまで、調節した低露点窒素（４０℃）で生成物（形態Ｃ）を乾燥させた。

結晶形態
Ｎ−メチル−１−｛ｔｒａｎｓ−４−［メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ］−シクロヘキシル｝メタンスルホンアミドマレイン酸塩のいくつかの結晶形態が既知であり、これを図１〜図３に示す。形態Ａは、米国特許第ＵＳ８，９８７，２８３号に記載されており、無水物である。形態Ｂは一水和物である。形態Ａ及び形態Ｂは水分子により化学的に異なるので、厳密な多形性という意味では多形体ではないため、より一般的な用語として形態または結晶形態を使用する。形態Ｂ（Ａ）は、主として形態Ｂであるが、少量画分の無水物（形態Ａ）を含む場合がある。実施例２の形態Ｂ（Ａ）のＰＸＲＤを図１に示し、ピーク位置、面間隔ｄ、及び２シータ値を表１に示す。Ｎ−メチル−１−｛ｔｒａｎｓ−４−［メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ］−シクロヘキシル｝メタンスルホンアミドマレイン酸塩の定量化に、形態Ｂ（Ａ）に対する参照標準物質を使用する（Ａｐｏｑｕｅｌ）。Ｂ（Ａ）の参照標準物質と実施例２の重畳ＰＸＲＤスキャンを図２に示す。形態Ｃは、相対湿度に応じて化学量論的に変化する水和物形態であり、そのＰＸＲＤを図３に示し、ピーク位置、面間隔ｄ、及び２シータ値を表２に示す。

ＵＳ８，９８７，２８３及びＵＳ６，８９０，９２９に記載の方法に従って調製されたＮ−メチル−１−｛ｔｒａｎｓ−４−［メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ］−シクロヘキシル｝−メタンスルホンアミドマレイン酸塩（ＬｏｔＸ）から得た、比較形態Ｂ（Ａ）のＰＸＲＤパターンを図４に、ピーク位置、面間隔ｄ、及び２シータ値を表３に示す。

Ｘ線回折図は、４０ｋＶ及び４０ｍＡ（１５ｍＡ−ＬｏｔＸ）、Ｋ２ａ波長１．５４０６オングストロームで稼働する固定スリット及びＣｕ源と連動するＬｙｎｘＥｙｅ検出器を備えたＢｒｕｋｅｒＡＸＳ［Ｃｏｖｅｎｔｒｙ，ＵＫ］ＥｎｄｅａｖｏｒＤ４を使用して得た。この回折図は、２シータ角度３〜５０（４０−ＬｏｔＸ）度の領域で得た。ステップサイズは、２シータ角度０．０２０（０．０３０−ＬｏｔＸ）度であり、ステップごとの取得時間は０．５秒であった。取得の間、試料ホルダーを２０ｒｐｍで回転させた。分析対象面が水平になるようにバックグラウンドゼロのシリカウェハ上に固体を薄く広げることによって分析用の試料を作製した。データは、ＢｒｕｋｅｒＡＸＳから入手したＥＶＡソフトウェアパッケージで分析した。

熟練した結晶学者であれば理解しているように、本明細書の表及び図で報告する様々なピークの相対強度は、Ｘ線ビーム内での結晶の配向効果または分析する物質の純度または試料の結晶化度などのいくつかの要素に応じて変動する可能性がある。ＰＸＲＤのピーク位置もまた、試料高さの変動に応じて変化する可能性があるが、ピーク位置は、実質的に表に定義されたままである。熟練した結晶学者はまた、異なる波長を用いた測定値には、ブラッグ方程式ｎＡ＝２ｃｉｓｉｎθに従って異なるシフトが生じることを理解しているであろう。そのような別の波長を使用して生成された別のＰＸＲＤパターンは、本発明の結晶物質のＰＸＲＤパターンの別の代表例であるとみなされるため、本発明の範囲内である。

表１．Ｎ−メチル−１−｛ｔｒａｎｓ−４−［メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ］−シクロヘキシル｝メタンスルホンアミドマレイン酸塩の結晶形態Ｂ（Ａ）のＰＸＲＤピークデータ

表２．Ｎ−メチル−１−｛ｔｒａｎｓ−４−［メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ］−シクロヘキシル｝メタンスルホンアミドマレイン酸塩の結晶形態ＣのＰＸＲＤピークデータ

表３．Ｎ−メチル−１−｛ｔｒａｎｓ−４−［メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ］−シクロヘキシル｝メタンスルホンアミドマレイン酸塩の結晶形態Ｂ（Ａ）の比較ＰＸＲＤピークデータ

本発明の態様
態様１
式１

の化合物またはその獣医学的に許容される塩の調製方法であって、
ａ）化合物である、ｔｒａｎｓ−４−（（メチルアミノ）シクロヘキシル）メタンスルホン酸を、水または水性有機溶媒中で、７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン類似体、さらに塩基と、反応温度約６０℃〜約１０５℃で反応させ、スルホン酸塩を調製すること；
ｂ）有機溶媒中で前記スルホン酸塩をスルホニルクロリド中間体に変換すること；及び
ｃ）前記スルホニルクロリド中間体をメチルアミン冷水溶液と反応させることにより、前記スルホニルクロリド中間体を式１の化合物に変換することを含む、前記方法。
態様２
工程（ａ）において、前記７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン類似体は、４−クロロ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンであり、前記反応は、水または５％Ｎ−メチルピロリドンまたはスルホランである水性有機溶媒中で行われ、前記塩基は炭酸カリウムであり、前記反応温度は約１２時間、約９８℃である、態様１に記載の方法。
態様３
工程（ｂ）において、前記スルホン酸塩から前記スルホニルクロリド中間体への変換は、前記スルホン酸塩を塩化オキサリル、塩化チオニル、または塩化ホスホリルと、有機溶媒中で反応させることにより調製される、態様１に記載の方法。
態様４
前記有機溶媒がアセトニトリルまたはテトラヒドロフランを含み、前記反応温度が約０℃〜約２０℃の範囲である、態様３に記載の方法。
態様５
前記有機溶媒が、ジメチルアセトアミド、ジイソプロピルホルムアミド、またはジメチルホルムアミドをさらに含む、態様４に記載の方法。
態様６
前記有機溶媒が、テトラヒドロフラン及びジイソプロピルホルムアミドを含む、態様５に記載の方法。
態様７
前記メチルアミン水溶液が約４０％であり、約−１０℃である、態様１に記載の方法。
態様８
前記スルホニルクロリド中間体を前記メチルアミン冷溶液に添加した後に、前記反応物に水を添加することをさらに含む、態様７に記載の方法。
態様９
前記反応物をゆっくりと加熱還流させた後、前記溶媒を温度約６５℃〜約７５℃で留去し、得られた固体を約３５℃まで冷却した後、前記固体を濾過し、水で洗浄し、濾過し、乾燥させる、態様８に記載の方法。
態様１０
式１

の化合物またはその獣医学的に許容される塩の調製方法であって、
ａ）前記化合物である、ｔｒａｎｓ−４−（（メチルアミノ）シクロヘキシル）メタンスルホン酸を４−クロロ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン及び炭酸カリウムと、水中にて約９８℃で約１２時間反応させ、前記反応物を約３０℃まで冷却し、前記固体を濾過により単離し、前記固体を水とメタノール（１：１）、次いでメタノールで洗浄するか、または前記固体をメタノールのみで洗浄し、前記スルホネート固体を乾燥させる工程；
ｂ）ＴＨＦ：ＤＩＰＦ（９５：５）の有機溶媒に前記スルホネート固体を添加し、前記反応物を約１０℃まで冷却し、前記反応温度を約１０℃に維持したまま塩化オキサリルまたは塩化ホスホリルを添加して前記スルホニルクロリドを調製することにより、前記スルホネートを前記スルホニルクロリドに変換する工程；
ｃ）約−１０℃に冷却した４０％メチルアミン水溶液に工程（ｂ）の前記反応物を添加することにより、前記スルホニルクロリド固体を式１の化合物に変換する工程；
ｄ）約１４容量の水を添加し、前記スラリーをゆっくりと加熱還流させ、約６５℃〜約７５℃で約１０容量の溶媒を留去した後、前記反応物を約３５℃までゆっくりと冷却する工程；
ｅ）前記固体を濾過により単離し、室温にて前記固体を水で洗浄した後、前記固体を乾燥させる工程を含む、前記方法。
態様１１
化合物である、中間体Ｃ

を調製する方法であって、
ａ）４−ブロモベンジルブロミドと亜硫酸ナトリウム塩とを水または約１０％〜約３０％のアセトニトリルを含む水性溶媒中、約８０℃で反応させ、固体である、中間体Ａを濾過により単離する工程；
ｂ）前記固体である、中間体Ａを１０％〜２５％のメチルアミン水溶液及びＣｕＢｒ触媒中で、少なくとも約５０℃の温度で約１６時間反応させた後、前記反応物を約６５℃に冷却し、残留銅を除去し、水を加えて濃ＨＣｌでｐＨを３．２に調整し、前記反応物を約１５℃に冷却し、固体である、中間体Ｂを濾過により単離する工程；
ｃ）前記固体である、中間体Ｂを、約２５％のメタノールを含有する水性有機溶媒中で、パラジウム触媒及び水素と約５０℃〜約８０℃で約１４時間〜約１８時間反応させる工程；及び
ｄ）前の反応で得た容量を濃縮し、アルコールを添加して、約４５℃に加熱した後、前記反応物を約４時間かけて約０℃に冷却し、前記固体である、中間体Ｃを濾過により単離し、アルコールで洗浄する工程を含む、前記方法。
態様１２
工程（ａ）において前記アセトニトリルが約１５％であり、工程（ｂ）において、前記メチルアミン水溶液が約１７％であり、前記ＣｕＢｒ触媒が約２ｍｏｌ％であり、少なくとも約５０℃の温度とは約９０℃であり、かつ、前記残留銅がクエン酸溶液の添加によって除去される、態様１１に記載の方法。
態様１３
工程（ｃ）において、前記パラジウム触媒がＰｄ（０）触媒であり、かつ、前記水素が約７０℃、約１６時間の水素ガスである、態様１１に記載の方法。
態様１４
工程（ｄ）において前記アルコールがエタノールである、態様１１に記載の方法。
態様１５
（４−（メチルアミノ）フェニル）メタンスルホン酸；
ｔｒａｎｓ−４−（（メチルアミノ）シクロヘキシル）メタンスルホン酸；
ｔｒａｎｓ−４−（メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロヘキシル）メタンスルホン酸カリウム塩；
ｔｒａｎｓ−４−（メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロヘキシル）メタンスルホン酸ナトリウム塩；
（（ｔｒａｎｓ）−４−（メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロヘキシル）−メタンスルホニルクロリド；
（ｔｒａｎｓ−４−（メチル（７−トシル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）−シクロヘキシル）メタン−スルホン酸カリウム塩；及び
（ｔｒａｎｓ−４−（メチル（７−トシル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）−シクロヘキシル）メタン−スルホン酸ナトリウム塩からなる群から選択される化合物。

Claims

式１

の化合物またはその獣医学的に許容される塩の調製方法であって、
ａ）化合物である、ｔｒａｎｓ−４−（（メチルアミノ）シクロヘキシル）メタンスルホン酸を、水または水性有機溶媒中で、７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン類似体、さらに塩基と、反応温度６０℃〜１０５℃で反応させ、スルホン酸塩を調製すること；
ｂ）有機溶媒中で前記スルホン酸塩をスルホニルクロリド中間体に変換すること；及び
ｃ）前記スルホニルクロリド中間体をメチルアミン冷水溶液と反応させることにより、前記スルホニルクロリド中間体を式１の化合物に変換することを含む、前記方法。
工程（ａ）において、前記７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン類似体は、４−クロロ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンであり、前記反応は、水または５％Ｎ−メチルピロリドンまたはスルホランである水性有機溶媒中で行われ、前記塩基は炭酸カリウムであり、前記反応温度は１２時間、９８℃である、請求項１に記載の方法。
工程（ｂ）において、前記スルホン酸塩から前記スルホニルクロリド中間体への変換は、前記スルホン酸塩を塩化オキサリル、塩化チオニル、または塩化ホスホリルと、有機溶媒中で反応させることにより調製される、請求項１に記載の方法。
前記有機溶媒がアセトニトリルまたはテトラヒドロフランを含み、前記反応温度が０℃〜２０℃の範囲である、請求項３に記載の方法。
前記有機溶媒が、ジメチルアセトアミド、ジイソプロピルホルムアミド、またはジメチルホルムアミドをさらに含む、請求項４に記載の方法。
前記有機溶媒が、テトラヒドロフラン及びジイソプロピルホルムアミドを含む、請求項５に記載の方法。
前記メチルアミン水溶液が４０％であり、−１０℃である、請求項１に記載の方法。
前記スルホニルクロリド中間体を前記メチルアミン冷溶液に添加した後に、前記反応物に水を添加することをさらに含む、請求項７に記載の方法。
前記反応物をゆっくりと加熱還流させた後、前記溶媒を温度６５℃〜７５℃で留去し、得られた固体を３５℃まで冷却した後、前記固体を濾過し、水で洗浄し、濾過し、乾燥させる、請求項８に記載の方法。
式１

の化合物またはその獣医学的に許容される塩の調製方法であって、
ａ）前記化合物である、ｔｒａｎｓ−４−（（メチルアミノ）シクロヘキシル）メタンスルホン酸を４−クロロ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン及び炭酸カリウムと、水中にて９８℃で１２時間反応させ、前記反応物を３０℃まで冷却し、前記固体を濾過により単離し、前記固体を水とメタノール（１：１）、次いでメタノールで洗浄するか、または前記固体をメタノールのみで洗浄し、前記スルホネート固体を乾燥させる工程；
ｂ）ＴＨＦ：ＤＩＰＦ（９５：５）の有機溶媒に前記スルホネート固体を添加し、前記反応物を１０℃まで冷却し、前記反応温度を１０℃に維持したまま塩化オキサリルまたは塩化ホスホリルを添加して前記スルホニルクロリドを調製することにより、前記スルホネートを前記スルホニルクロリドに変換する工程；
ｃ）−１０℃に冷却した４０％メチルアミン水溶液に工程（ｂ）の前記反応物を添加することにより、前記スルホニルクロリド固体を式１の化合物に変換する工程；
ｄ）１４容量の水を添加し、前記スラリーをゆっくりと加熱還流させ、６５℃〜７５℃で１０容量の溶媒を留去した後、前記反応物を３５℃までゆっくりと冷却する工程；
ｅ）前記固体を濾過により単離し、室温にて前記固体を水で洗浄した後、前記固体を乾燥させる工程を含む、前記方法。
化合物である、中間体Ｃ

を調製する方法であって、
ａ）４−ブロモベンジルブロミドと亜硫酸ナトリウム塩とを水または１０％〜３０％のアセトニトリルを含む水性溶媒中、８０℃で反応させ、固体である、中間体Ａを濾過により単離する工程；
ｂ）前記固体である、中間体Ａを１０％〜２５％のメチルアミン水溶液及びＣｕＢｒ触媒中で、少なくとも５０℃の温度で１６時間反応させた後、前記反応物を６５℃に冷却し、残留銅を除去し、水を加えて濃ＨＣｌでｐＨを３．２に調整し、前記反応物を１５℃に冷却し、固体である、中間体Ｂを濾過により単離する工程；
ｃ）前記固体である、中間体Ｂを、２５％のメタノールを含有する水性有機溶媒中で、パラジウム触媒及び水素と５０℃〜８０℃で１４時間〜１８時間反応させる工程；及び
ｄ）前の反応で得た容量を濃縮し、アルコールを添加して、４５℃に加熱した後、前記反応物を４時間かけて０℃に冷却し、前記固体である、中間体Ｃを濾過により単離し、アルコールで洗浄する工程を含む、前記方法。
工程（ａ）において前記アセトニトリルが１５％であり、工程（ｂ）において、前記メチルアミン水溶液が１７％であり、前記ＣｕＢｒ触媒が２ｍｏｌ％であり、少なくとも５０℃の温度とは９０℃であり、かつ、前記残留銅がクエン酸溶液の添加によって除去される、請求項１１に記載の方法。
工程（ｃ）において、前記パラジウム触媒がＰｄ（０）触媒であり、かつ、前記水素が７０℃、１６時間の水素ガスである、請求項１１に記載の方法。
工程（ｄ）において前記アルコールがエタノールである、請求項１１に記載の方法。
（４−（メチルアミノ）フェニル）メタンスルホン酸；
ｔｒａｎｓ−４−（（メチルアミノ）シクロヘキシル）メタンスルホン酸；
ｔｒａｎｓ−４−（メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロヘキシル）メタンスルホン酸カリウム塩；
ｔｒａｎｓ−４−（メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロヘキシル）メタンスルホン酸ナトリウム塩；及び
（（ｔｒａｎｓ）−４−（メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロヘキシル）−メタンスルホニルクロリド
からなる群から選択される化合物。