JP7460094B2 - 子宮頸がんの治療方法 - Google Patents

Description

本開示は、ヒト乳頭腫ウイルス（ｈｕｍａｎ ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ，ＨＰＶ）誘導がんを予防または治療するための（ａ）ヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）ワクチン；および（ｂ）チェックポイント阻害剤を含む製薬学的組成物およびヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）感染によって誘発された子宮頸がんの治療に関する。

持続的ウイルス感染は、たびたびウイルス特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の機能的不活性化を誘導して、増殖し、免疫刺激サイトカインを生成し、ウイルス感染細胞を溶解させる能力を損傷させる。子宮頸がんは、全世界的に女性のがん死亡の主な原因の1つであり、事例の約７５％が最も頻度の高い高危険ヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）類型、すなわちＨＰＶ１６およびＨＰＶ１８への持続的感染によって誘発される。ＨＰＶ持続性は、一般的に立証可能なＨＰＶ特異的Ｔ細胞免疫の欠如と関連しており、前悪性および悪性患者で発見されたウイルス特異的Ｔ細胞は、一般的に機能不全であり、時には、さらに抑制性であると報告される。これらの発見は、ウイルス特異的Ｔ細胞の機能障害がＨＰＶ誘導子宮頸がんの出現と関連があることを示唆する。

子宮頸がんは、高危険ＨＰＶ感染、ウイルス持続性、持続感染細胞の前悪性病変へのクローン性増殖および分化、および浸潤性がんへの漸進的変形の過程を通じて発生する。

世界保健機関（ＷＨＯ）によれば、子宮頸がんは、女性のがんの中で４番目に多いがんであり、２０１８年に５７０，０００件と推定される新しい事例が発生し、これは、全体女性がん死亡の７．５％を占める。前悪性子宮頸部上皮内新生物２および３（ＣＩＮ２および３）、特にＨＰＶ１６に対して陽性の新生物が浸潤性がんに発展する確率が略３０％である高危険病変として見なされる。したがって、持続的ＨＰＶ感染の重症合併症を予防し、ＨＰＶ関連新生物を根絶できる効果的な治療ワクチンに対する緊急の必要性がある。

ＨＰＶ Ｅ６およびＥ７タンパク質は、腫瘍抑制タンパク質であるｐ５３および網膜芽細胞腫（ｐＲｂ）それぞれに結合し、分解を促進することによって、ウイルス腫瘍タンパク質として作用する。これらのウイルス腫瘍タンパク質は、これらのタンパク質が腫瘍形成を誘導するだけでなく、ＨＰＶ感染した前悪性および悪性細胞で構成的に発現するので、ＣＩＮ２／３および子宮頸がんに対する治療ワクチンに対する理想的な標的セットである。子宮頸部病変の退行は、体液性でなく、細胞性免疫反応の存在と関連があるので、強力なＥ６／Ｅ７特異的Ｔ細胞免疫を選択的に誘導できる治療ワクチンが非常に好ましい。

ＨＰＶによって誘発された子宮頸がんの効果的な予防／治療を提供するために進行中の努力の1つとして、（１）ＨＰＶ１６のＥ６タンパク質のＮ末端部分、（２）ＨＰＶ１６のＥ６タンパク質のＣ末端部分、（３）ＨＰＶ１６のＥ７タンパク質のＮ末端部分、（４）ＨＰＶ１６のＥ７タンパク質のＣ末端部分、（５）ＨＰＶ１８のＥ６タンパク質のＮ末端部分、（６）ＨＰＶ１８のＥ６タンパク質のＣ末端部分、（７）ＨＰＶ１８のＥ７タンパク質のＮ末端部分、および（８）ＨＰＶ１８のＥ７タンパク質のＣ末端部分から選択された３個以上のアミノ酸配列を含み、この融合タンパク質は、ｐ５３に結合しないか、ＨＰＶ１６またはＨＰＶ１８のＥ６タンパク質と二量体を形成せず、融合タンパク質は、ｐＲｂに結合しないか、ＨＰＶ１６またはＨＰＶ１８のＥ７タンパク質と二量体を形成しない融合タンパク質が、同時係属中の米国出願番号１５／５０３，９９７に記述されている。同時係属中の米国出願番号１５／５０３，９９７の全体内容は、参照として本願に含まれる。

ＨＰＶ類型１６および１８に由来するＥ６およびＥ７の３Ｄ構造を変換させるように構成された融合ポリペプチド、および免疫エンハンサーペプチドを含む融合タンパク質、および融合タンパク質をコード化するポリヌクレオチドは、共同係留中の米国出願番号１３／８１６，７１６に開示される。同時係属中の米国出願番号１３／８１６，７１６の一つの例示具現例による融合タンパク質は、ＨＰＶ類型１６および１８に由来するＥ６およびＥ７の３Ｄ構造を変換させるために組み換えられた融合ポリペプチドを含むことができる。より具体的に、融合ポリペプチドは、ＨＰＶ類型１６に由来するＥ６タンパク質の１番目～８５番目のアミノ酸、Ｅ７タンパク質の１番目～６５番目のアミノ酸、Ｅ６タンパク質の７１番目～１５８番目のアミノ酸、Ｅ７タンパク質の５１番目～９８番目のアミノ酸、ＨＰＶ類型１８に由来するＥ６タンパク質の１番目～８５番目のアミノ酸、Ｅ７タンパク質の１番目～６５番目のアミノ酸、Ｅ６タンパク質の７１番目～１５８番目のアミノ酸、Ｅ７タンパク質の５１番目～１０５番目のアミノ酸が順に結合した融合ポリペプチドである。同時係属中の米国出願番号１３／８１６，７１６の一具現例において融合ポリペプチドおよび免疫エンハンサーペプチドをコード化する核酸分子に関連する。例示的免疫エンハンサーペプチドとしては、ＣＤ４０リガンド、Ｆｌｔ３リガンド、フラジェリン、および／またはＯＸ４０が挙げられる。融合タンパク質、最適シグナル配列（例えば、ｔＰａ）、および免疫エンハンサーペプチド（例えば、Ｆｌｔ３リガンド）をコード化するポリヌクレオチドの具現例は、同時係属中の米国出願番号１３／８１６，７１６の実施例１を参照して製造することができる。同時係属中の米国出願番号１３／８１６，７１６の全体内容は、参照として本願に含まれる。

身体固有の免疫系を向上させて、身体ががん細胞に対する免疫反応を増幅させることができるようにする免疫療法は、免疫系ががん細胞を発見して攻撃することができるように免疫系が作動する方式を増進させたり変更することができる。

がん治療法についてチェックポイント阻害抗体を使用した研究は、以前にはがん治療に対して耐性を有すると見なされたがんにおける先例のない反応率を発生させた。ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１およびＰＤ－Ｌ１に対する拮抗作用チェックポイント遮断抗体を使用した治療法は、がんおよび他の疾患に対する免疫療法の最も有望な新しい方案の1つである。大多数の抗がん剤とは対照的に、チェックポイント阻害剤は、腫瘍細胞を直接に標的化せず、かえって免疫系の内因性抗腫瘍活性を向上させるために、リンパ球受容体またはそれのリガンドを標的とする。免疫チェックポイント抗体は、主に罹患した細胞、組織または病原体に対する免疫反応を調節することによって作用するので、それは、他の治療方式、例えば、抗体薬物コンジュゲートの抗腫瘍効果を向上させるために抗体薬物コンジュゲートとともに使用できる。

プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１）（ＣＤ２７９としても知られている）は、Ｂ細胞およびＮＫ細胞で発現する、免疫グロブリンスーパーファミリーの細胞表面膜タンパク質をコード化する。抗ＰＤ１抗体は、黒色腫、非小細胞肺がん、膀胱がん、前立腺がん、大腸がん、頭頸部がん、トリプルネガティブ乳がん、白血病、リンパ腫および腎細胞がんの治療に使用されてきた。例示的抗ＰＤ１抗体としては、ペムブロリズマブ（ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ）（ＫＥＹＴＲＵＤＡ、ＭＥＲＣＫ）、ニボルマブ（ｎｉｖｏｌｕｍａｂ）（ＢＭＳ－９３６５５８，ＢＲＩＳＴＯＬ－ＭＹＥＲＳ ＳＱＵＩＢＢ）、セミプリマブ（ｃｅｍｉｐｌｉｍａｂ）（ＬＩＢＴＡＹＯ）、およびピディリズマブ（ｐｉｄｉｌｉｚｕｍａｂ）（ＣＴ－０１１，ＣＵＲＥＴＥＣＨ ＬＴＤ．）が挙げられる。

プログラム細胞死１リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）（ＣＤ２７４としても知られている）は、活性化Ｔ細胞、Ｂ細胞、骨髄細胞およびマクロファージで発見されるＰＤ－１に対するリガンドである。ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１の複合体は、ＣＤ８＋ Ｔ細胞の増殖を阻害し、免疫反応を減少させる。抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、非小細胞肺がん、黒色腫、大腸がん、腎細胞がん、膵臓がん、胃がん、卵巣がん、乳がん、および血液がんの治療に使用されてきた。例示的抗ＰＤ－Ｌ１抗体としては、ＭＤＸ－１１０５（ＭＥＤＡＲＥＸ）、デュルバルマブ（ｄｕｒｖａｌｕｍａｂ）（ＭＥＤＩ４７３６，ＭＥＤＩＭＭＵＮＥ）、アベルマブ（ａｖｅｌｕｍａｂ）（ＢＡＶＥＮＣＩＯ）、アテゾリズマブ（ａｔｅｚｏｌｉｚｕｍａｂ）（ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＧＥＮＥＮＴＥＣＨ）およびＢＭＳ－９３６５５９（ＢＲＩＳＴＯＬ－ＭＹＥＲＳ ＳＱＵＩＢＢ）が挙げられる。

細胞毒性Ｔリンパ球抗原４（ＣＴＬＡ－４）（ＣＤ１５２としても知られている）は、また、Ｔ細胞上で排他的に発現する免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーである。ＣＴＬＡ－４は、Ｔ細胞活性化を阻害する作用をし、ヘルパーＴ細胞活性を阻害し、調節Ｔ細胞免疫抑制活性を向上させると報告される。例示的抗ＣＴＬＡ４抗体としては、イピリムマブ（ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ）（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）およびトレメリムマブ（ｔｒｅｍｅｌｉｍｕｍａｂ）（ＰＦＩＺＥＲ）が挙げられる。

ペムブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ、Ｍｅｒｃｋ ａｎｄ Ｃｏ．Ｉｎｃ．）は、ＦＤＡ承認テストによって測定される非化学療法中にまたは後に、腫瘍がＰＤ－Ｌ１（ＣＰＳ ≧１）を発現する疾患に進行する再発性または転移性子宮頸がん患者に対して最近承認された。主要な効能結果は、盲検下独立中央判定によって評価されるところ、ＲＥＣＩＳＴ １．１による客観的反応率（ＯＲＲ）、および反応期間であった。１１．７ヶ月の追跡時間中央値で、７７人の患者でＯＲＲが１４．３％（９５％ＣＩ：７．４、２４．１）であり、２．６％完全反応および１１．７％部分反応を含む。独立判定によって応答した１１人の患者に基づて推定された反応期間中央値は到達せず（範囲４．１、１８．６＋ヶ月）；９１％は、６ヶ月またはそれ以上の反応期間を有した。腫瘍がＰＤ－Ｌ１発現を示さない患者では反応が観察されなかった（ＣＰＳ １）。臨床実験（ＫＥＹＮＯＴＥ－１５８）に登録された子宮頸がん患者のうち少なくとも１０％で最も頻度の高い有害反応は、疲労、痛み、発熱、末端浮腫、筋骨格系疼痛、下痢／大腸炎、腹痛、吐き気、嘔吐、便秘、食欲減退、出血、尿路感染（ＵＴＩ）、感染、発疹、甲状腺機能低下症、頭痛、および呼吸困難であった。ペムブロリズマブは、８％の患者で有害反応に起因して中断された。深刻な有害反応が３９％の患者で発生した。報告された最も頻度の高い深刻な有害反応は、貧血（７％）、瘻孔（４．１％）、出血（４．１％）、および感染（ＵＴＩ除外）（４．１％）であった。

しかしながら、約７０％がＨＰＶ１６および／または１８感染によって誘発される子宮頸がん、および／またはＰＤ－Ｌ１陰性の患者における子宮頸がんの効果的な治療および／または治療の向上に対する必要性が依然として存在する。

本開示の態様は、共通期間（ｃｏｍｍｏｎ ｔｉｍｅ ｐｅｒｉｏｄ）にわたってＨＰＶワクチン療法と抗ＰＤ１チェックポイント阻害抗体療法の組み合わせ投与を含み、広範囲な実験後に、抗ＰＤ１チェックポイント阻害抗体療法と比較して、子宮頸がん、特に進行性、転移性、再発性子宮頸がんの成長に対して抑制効果を増加させることが明らかになった。本発明の組み合わせ治療は、ＰＤ－１陽性患者、ＨＰＶ－１６陽性および／またはＨＰＶ－１７陽性患者でＨＰＶワクチン単独または抗ＰＤ１チェックポイント阻害抗体単一療法よりも治療効能の向上を示す。驚くべきことに、本発明の組み合わせ治療は、抗ＰＤ１抗体単一療法で全く反応しないＰＤ－１陰性患者における治療効能をさらに示す。

本開示の目的は、ヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）誘導がんを予防または治療するためのヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）ワクチンおよびチェックポイント阻害剤を含む製薬学的組成物を含む。

本開示の他の目的は、ヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）誘導がんを予防または治療するための医薬の製造におけるヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）ワクチンおよびチェックポイント阻害剤を含む製薬学的組成物の用途を含む。

本開示のさらに他の目的は、単一療法として使用されたとき、ＨＰＶワクチンまたはチェックポイント阻害剤単独よりもさらに大きな治療効果を生成するために、対象体に共通期間にわたってＨＰＶワクチンおよびチェックポイント阻害剤を投与する段階を含む、それを必要とする対象体でヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）誘導がんを治療する方法を含む。

本開示は、子宮頸がんを有する対象体に本願に記述された融合タンパク質またはＤＮＡワクチンおよび免疫調節化合物を同時にまたは順次に投与する段階を含む、子宮頸がんの組み合わせ治療に関する。具現例において、子宮頸がんは、ＨＰＶ感染によって誘発される。

本開示は、それを必要とする対象体で子宮頸がんを治療したり治療を向上させるために、有効量のＨＰＶワクチンおよびチェックポイント阻害剤を組み合わせて投与する段階を含む、がんの組み合わせ治療に関する。具現例において、子宮頸がんは、ＨＰＶ感染によって誘発される。

本開示は、それを必要とする対象体で子宮頸がんを治療したり治療を向上させる方法において組み合わせたＨＰＶワクチンおよびチェックポイント阻害剤の用途に関し、方法は、有効量のＨＰＶワクチンおよび有効量のチェックポイント阻害剤を子宮頸がんの治療の向上または治療を必要とする対象体に投与する段階を含む。具現例において、子宮頸がんは、ＨＰＶ感染によって誘発される。具現例において、個体は、ＰＤ－Ｌ１陽性または陰性である。また、具現例において、個体は、ＰＤ－Ｌ１陰性である。さらに他の具現例において、個体は、ＰＤ－Ｌ１陽性であり、ＨＰＶ１６に感染する。具現例において、子宮頸がんは、進行性、再発性、または転移性子宮頸がんである。具現例において、子宮頸がんは、扁平上皮細胞がんまたは腺がんである。具現例において、個体は、ＰＬ－Ｌ１陽性であってもよく、ＨＰＶ１６に感染していてもよく、扁平上皮細胞がんを患っている。

本開示は、子宮頸がんを治療したり治療を向上させるための併用療法組成物に関し、併用療法組成物は、有効量のＨＰＶワクチンおよび有効量のチェックポイント阻害剤を含み、ＨＰＶワクチンおよびチェックポイント阻害剤は、それを必要とする個体に同時に、別々に、または順次に投与される。具現例において、子宮頸がんは、ＨＰＶ感染によって誘発される。具現例において、個体は、ＰＤ－Ｌ１陽性または陰性である。また、具現例において、個体は、ＰＤ－Ｌ１陰性である。さらに他の具現例において、個体は、ＰＤ－Ｌ１陽性であり、ＨＰＶ１６に感染する。具現例において、子宮頸がんは、進行性、再発性、または転移性子宮頸がんである。具現例において、子宮頸がんは、扁平上皮細胞がんまたは腺がんである。具現例において、個体は、ＰＬ－Ｌ１陽性であってもよく、ＨＰＶ１６に感染していてもよく、扁平上皮細胞がんを患っている。

本開示は、子宮頸がんを治療したり治療を向上させるための併用療法組成物に関し、併用療法組成物は、本質的に有効量のＨＰＶワクチンおよび有効量のチェックポイント阻害剤からなり、ＨＰＶワクチンおよびチェックポイント阻害剤は、それを必要とする個体に同時に、別々に、または順次に投与される。具現例において、子宮頸がんは、ＨＰＶ感染によって誘発される。具現例において、個体は、ＰＤ－Ｌ１陽性または陰性である。また、具現例において、個体は、ＰＤ－Ｌ１陰性である。さらに他の具現例において、個体は、ＰＤ－Ｌ１陽性であり、ＨＰＶ１６に感染する。具現例において、子宮頸がんは、進行性、再発性、または転移性子宮頸がんである。具現例において、子宮頸がんは、扁平上皮細胞がんまたは腺がんである。具現例において、個体は、ＰＬ－Ｌ１陽性であってもよく、ＨＰＶ１６に感染していてもよく、扁平上皮細胞がんを患っている。

本開示は、（ａ）ヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）ワクチン；および（ｂ）ヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）誘導がんを予防または治療するためのチェックポイント阻害剤を含む製薬学的組成物に関し、（ａ）ＨＰＶワクチン療法構成要素は、ＨＰＶワクチンの追加ブーストを含んで対象体に投与されるように適応し、（ｂ）チェックポイント阻害剤療法構成要素は、チェックポイント阻害剤療法の追加ブーストを含んで対象体に投与されるように適応し、前記構成要素（ａ）および（ｂ）のそれぞれの治療的有効量で、組み合わせ投与は、構成要素（ａ）または（ｂ）単独の投与による個体の免疫反応のいかなる増加よりもＨＰＶ誘導がんを治療するための対象体の免疫反応を増加させる能力を有する。具現例において、対象体は、ＰＤ－Ｌ１陽性または陰性である。また、具現例において、個体は、ＰＤ－Ｌ１陰性である。さらに他の具現例において、個体は、ＰＤ－Ｌ１陽性であり、ＨＰＶ１６に感染する。具現例において、子宮頸がんは、進行性、再発性、または転移性子宮頸がんである。具現例において、子宮頸がんは、扁平上皮細胞がんまたは腺がんである。具現例において、個体は、ＰＬ－Ｌ１陽性であってもよく、ＨＰＶ１６に感染していてもよく、扁平上皮細胞がんを患っている。

本開示は、本質的に（ａ）ＨＰＶワクチンの追加ブーストを含んで対象体に投与されるように適応したＨＰＶワクチン療法構成要素、および（ｂ）チェックポイント阻害剤療法の追加ブーストを含んで対象体に投与されるように適応したチェックポイント阻害剤療法構成要素からなる、それを必要とする対象体でヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）誘導がんを治療するための製薬学的組成物に関し、前記構成要素（ａ）および（ｂ）のそれぞれの治療的有効量で、組み合わせ投与は、構成要素（ａ）または（ｂ）単独の投与による個体の免疫反応のいかなる増加よりもＨＰＶ誘導がんを治療するための対象体の免疫反応を増加させる能力を有する。具現例において、対象体は、ＰＤ－Ｌ１陽性または陰性である。また、具現例において、個体は、ＰＤ－Ｌ１陰性である。さらに他の具現例において、個体は、ＰＤ－Ｌ１陽性であり、ＨＰＶ１６に感染する。具現例において、子宮頸がんは、進行性、再発性、または転移性子宮頸がんである。具現例において、子宮頸がんは、扁平上皮細胞がんまたは腺がんである。具現例において、個体は、ＰＬ－Ｌ１陽性であってもよく、ＨＰＶ１６に感染していてもよく、扁平上皮細胞がんを患っている。

本開示は、さらに、（ａ）第２用量レベルで投与される、配列番号９のポリヌクレオチドを含む多数のＨＰＶワクチン療法構成要素、および（ｂ）1つの用量レベルで投与される多数のチェックポイント阻害剤療法構成要素を含む、ヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）がん患者を治療するための２つの別の治療構成要素を含む製薬学的組成物に関し、ＨＰＶワクチン療法構成要素（ａ）は、チェックポイント阻害剤療法構成要素（ｂ）とともに投与され、構成要素（ａ）および（ｂ）のそれぞれは、第１および第２用量レベルの有効量で、チェックポイント阻害剤療法構成要素（ｂ）の効能を増加させることによって患者の免疫反応を増加させ、単一療法として投与された構成要素（ａ）および（ｂ）のそれぞれよりも向上した免疫反応の利益を提供するようにそれぞれ構成される。

本開示は、ヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）誘導がんを予防または治療するための医薬の製造における（ａ）ヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）ワクチン；および（ｂ）チェックポイント阻害剤を含む製薬学的組成物の用途に関する。

本開示は、ヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）誘導がんを治療する方法において製薬学的組み合わせの用途に関し、前記方法は、単一療法として使用されたとき、いずれか1つのＨＰＶワクチンまたはチェックポイント阻害剤単独よりもさらに大きい治療効果を生成するために、共通期間にわたってそれを必要とする対象体にＨＰＶワクチンおよびチェックポイント阻害剤を投与する段階を含む。

前述の方法、組み合わせ治療、用途、組成物および製薬学的組成物の態様において、ＨＰＶワクチンは、ＤＮＡワクチンでありうる。具現例において、チェックポイント阻害剤は、単クローン性抗体でありうる。単クローン性抗体の例示具現例は、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、または抗ＰＤ１／ＰＤ－Ｌ１抗体、またはそれらの組み合わせでありうる。具現例において、チェックポイント阻害剤は、ペムブロリズマブでありうる。具現例において、ＨＰＶワクチンは、配列番号１５のポリヌクレオチドまたは配列番号１５に対して約８５％以上、約８６％以上、約８７％以上、約８８％以上、約８９％以上、約９０％以上、約９１％以上、約９２％以上、約９３％以上、約９４％以上、約９５％以上、約９６％以上、約９７％以上、約９８％以上、約９９％以上、または約１００％の配列同一性を有する変異体を含むＤＮＡワクチンである。

前述の方法、組み合わせ治療、用途、組成物および製薬学的組成物の態様において、対象体、個体、または患者は、進行性、手術不可能な、転移性子宮頸がんを有していてもよい。がんは、再発性でありうる。具現例において、がんは、扁平上皮細胞がんまたは腺がんである。具現例において、がんは、扁平上皮細胞がんである。

前述の方法、組み合わせ治療、用途、組成物および製薬学的組成物の態様において、対象体、個体、または患者は、ＨＰＶ１６および／またはＨＰＶ１８陽性である。さらに他の具現例において、個体は、ＰＤ－Ｌ１陽性であり、ＨＰＶ１６に感染する。具現例において、個体は、ＰＬ－Ｌ１陽性であってもよく、ＨＰＶ１６に感染していてもよく、扁平上皮細胞がんを患っている。

前述の方法、組み合わせ治療、用途、組成物、および製薬学的組成物の態様において、対象体、個体、または患者は、抗がん治療を受けたことがあるか、受けている。抗がん治療は、公知の治療中の1つでありうる。具現例において、対象体、個体、または患者は、少なくとも１回の化学療法を受けたことがあるか、受けている。

前述の方法、組み合わせ治療、用途、組成物、および製薬学的組成物の態様において、対象体、個体、または患者は、ＰＤ－Ｌ１陽性またはＰＤ－１Ｌ陰性でありうる。さらに他の具現例において、対象体、個体、または患者は、ＨＰＶ１６陽性でありうる。さらに他の具現例において、対象体は、ＰＤ－Ｌ１－陽性およびＨＰＶ１６陽性であってもよく、子宮頸がんは、扁平上皮細胞がんである。

前述の方法、組み合わせ治療、用途、組成物、および製薬学的組成物の態様において、ＨＰＶワクチンは、ＧＸ－１８８またはＧＸ－１８８変異体でありうる。ＧＸ－１８８Ｅは、ｔＰＡおよびＦｌｔ３ＬにカップリングされたＨＰＶ１６および１８のＥ６／Ｅ７融合タンパク質をコード化する配列（配列番号９）を含む配列番号１５の配列を含むデオキシリボ核酸構成物である（図１参照）。具現例において、約２ｍｇのＧＸ－１８８Ｅは、１、２、４、７、１３、１９週目に筋肉内に投与され、４６週目に選択的用量が投与されうる。

前述の方法、組み合わせ治療、用途、組成物、および製薬学的組成物の態様において、チェックポイント阻害剤は、ペムブロリズマブであり、チェックポイント阻害剤の用量は、３週ごとに約２００ｍｇでありうる。具現例において、ペムブロリズマブは、静脈内に投与されうる。

具現例によれば、少なくとも１３週の共通期間内に対象体に投与するための２つの異なる治療を組み合わせることによって対象体でＨＰＶ誘導がんを治療する方法が開示され、方法は、ＨＰＶワクチン療法およびチェックポイント阻害抗体療法を含み、チェックポイント阻害抗体は、第１固定用量で複数回投与され、ワクチンは、第２固定用量で複数回投与され；ＨＰＶワクチンの第１投与およびチェックポイント阻害剤の第１投与は、少なくとも１３週期間の日に発生し、ＨＰＶワクチンの後続投与およびチェックポイント阻害剤の後続投与は、共通期間内に発生する。

組み合わせ治療の一態様において、チェックポイント阻害剤の第１固定用量は、５０ｍｇ～５００ｍｇであり、ＨＰＶワクチンの第２固定用量は、０．５ｍｇ～５ｍｇである。方法によれば、ＨＰＶワクチンは、筋肉内に投与され、チェックポイント阻害剤は、静脈内に投与される。具現例において、チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ１抗体または抗ＰＤ－Ｌ１抗体であり、ＨＰＶワクチンは、配列番号１５の核酸構成物または配列番号１５に対して８５％以上の配列同一性を有する機能的変異体を含む。さらに他の具現例において、ＨＰＶ誘導がんは、転移性、再発性または進行性子宮頸がんであり、対象体は、抗がん治療を受けることがあるか、受けており；ＨＰＶは、ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１８、またはそれらの組み合わせであり；対象体は、ＰＤ－Ｌ１陽性またはＰＤ－Ｌ１陰性である。さらに他の具現例において、個体は、ＰＤ－Ｌ１陽性であり、ＨＰＶ１６に感染する。さらに他の具現例において、個体は、ＰＬ－Ｌ１陽性であり、ＨＰＶ１６に感染していてもよく、扁平上皮細胞がんを患っている。

図１は、ＧＸ－１８８を運搬するベクターの構造の概略図である。 図２Ａは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスを使用する子宮頸がん動物モデルでテストされた薬物の投与スケジュールおよび抗腫瘍効果の評価を示す。Ｄ０、Ｄ７、Ｄ１４、Ｄ２１、Ｄ２８、Ｄ３５、Ｄ４２、およびＤ４９は、開始日（Ｄ０）からの経過日の数を示す。テスト薬物は、抗ｍＰＤ１単クローン性抗体（ｍＡｂ）、ＧＸ－１８８Ｅ、およびＧＸ－１８８Ｅ＋抗ｍＰＤ１ ｍＡｂであった。ＨＰＶ類型１６のＥ７を発現するように形質転換されたＣ５７ＢＬ／６マウス肺上皮細胞からの細胞株であるＴＣ－１／Ｌｕｃが、実験１で記述されたように、Ｃ５７ＢＬ／６マウスで腫瘍を誘導するために使用される。 図２Ｂ～図２Ｅは、対照群（図２Ｂ）、抗ｍＰＤ１ ｍＡｂ単独（図２Ｃ）、ＧＸ－１８８Ｅ単独（図２Ｄ）、および抗ｍＰＤ１ ｍＡｂ＋ＧＸ－１８８Ｅの組み合わせ（図２Ｅ）による抗腫瘍効能を示す。ＧＸ－１８８Ｅ単独投与グループは、遅延した腫瘍細胞成長による平均生存期間の明確な増加を示したが、最終生存率は１７％であった（１匹／６匹）。ＧＸ－１８８Ｅ＋抗ｍＰＤ－１ ｍＡｂ組み合わせグループは、腫瘍細胞成長の遅延および生存期間の明確な増加を示し、一方、生存率も、５０％に増加した（３匹／６匹）。 図２Ｂ～図２Ｅは、対照群（図２Ｂ）、抗ｍＰＤ１ ｍＡｂ単独（図２Ｃ）、ＧＸ－１８８Ｅ単独（図２Ｄ）、および抗ｍＰＤ１ ｍＡｂ＋ＧＸ－１８８Ｅの組み合わせ（図２Ｅ）による抗腫瘍効能を示す。ＧＸ－１８８Ｅ単独投与グループは、遅延した腫瘍細胞成長による平均生存期間の明確な増加を示したが、最終生存率は１７％であった（１匹／６匹）。ＧＸ－１８８Ｅ＋抗ｍＰＤ－１ ｍＡｂ組み合わせグループは、腫瘍細胞成長の遅延および生存期間の明確な増加を示し、一方、生存率も、５０％に増加した（３匹／６匹）。 図２Ｂ～図２Ｅは、対照群（図２Ｂ）、抗ｍＰＤ１ ｍＡｂ単独（図２Ｃ）、ＧＸ－１８８Ｅ単独（図２Ｄ）、および抗ｍＰＤ１ ｍＡｂ＋ＧＸ－１８８Ｅの組み合わせ（図２Ｅ）による抗腫瘍効能を示す。ＧＸ－１８８Ｅ単独投与グループは、遅延した腫瘍細胞成長による平均生存期間の明確な増加を示したが、最終生存率は１７％であった（１匹／６匹）。ＧＸ－１８８Ｅ＋抗ｍＰＤ－１ ｍＡｂ組み合わせグループは、腫瘍細胞成長の遅延および生存期間の明確な増加を示し、一方、生存率も、５０％に増加した（３匹／６匹）。 図２Ｂ～図２Ｅは、対照群（図２Ｂ）、抗ｍＰＤ１ ｍＡｂ単独（図２Ｃ）、ＧＸ－１８８Ｅ単独（図２Ｄ）、および抗ｍＰＤ１ ｍＡｂ＋ＧＸ－１８８Ｅの組み合わせ（図２Ｅ）による抗腫瘍効能を示す。ＧＸ－１８８Ｅ単独投与グループは、遅延した腫瘍細胞成長による平均生存期間の明確な増加を示したが、最終生存率は１７％であった（１匹／６匹）。ＧＸ－１８８Ｅ＋抗ｍＰＤ－１ ｍＡｂ組み合わせグループは、腫瘍細胞成長の遅延および生存期間の明確な増加を示し、一方、生存率も、５０％に増加した（３匹／６匹）。 図３は、患者登録適格性および第一目標および第二目標を示す。５４人の患者が登録され、１５人の患者が治療を受けている。安全性分析について、ＧＸ－１８８Ｅまたは抗ｍＰＤ１ ｍＡｂ（ペムブロリズマブ）のうちいずれか1つの少なくとも１回用量を受けた５４人の患者を含ませた。効能分析について、少なくとも４５日の治療を受けた４８人の患者がプロトコルによってＧＸ－１８８Ｅに対する反応に対して評価されうると見なされた。この中間分析は、少なくとも1つの基準線後の腫瘍評価データを得た後に行われた。 図４は、抗ＰＤ１ ｍＡｂ（ペムブロリズマブ）単一療法と比較して、ＧＸ－１８８Ｅプラス抗ＰＤ１ ｍＡｂ（ペムブロリズマブ）の併用療法の基準線特徴を示す。 図５は、任意の等級（３１．５）および等級３－４（５．６％）であるＧＸ－１８８Ｅ＋抗ＰＤ１ ｍＡｂ（ペムブロリズマブ）組み合わせ治療の安全性プロファイルが、任意の等級（６５．３％）および等級３－４（１２．２％）であるＫｅｙｎｏｔｅ－１５８単一療法を使用する抗ＰＤ１ ｍＡｂ（ペムブロリズマブ）単一療法に相当することを示す。また、等級３治療関連有害事象（ＴＲＡＥ）を経験した３人の患者のうち１人が、等級４を示した。試験薬物関連死亡は発生しなかった。全体的に、抗ＰＤ１ ｍＡｂ（ペムブロリズマブ）と組み合わせたＧＸ－１８８Ｅが安全であり、忍容性があった。 図６Ａおよび図６Ｂは、ＲＥＣＩＳＴによる最良総合反応率（ＢＯＲＲ）を示す。６個の完全反応（ＣＲ）が確認され、ＣＲの全ての場合は、ＰＤ－Ｌ１陽性、ＨＰＶ１６＋および扁平上皮細胞がん患者で観察される。ＰＤ－Ｌ１陰性、ＨＰＶ１８＋または腺がん患者で臨床反応が観察される。 図６Ａおよび図６Ｂは、ＲＥＣＩＳＴによる最良総合反応率（ＢＯＲＲ）を示す。６個の完全反応（ＣＲ）が確認され、ＣＲの全ての場合は、ＰＤ－Ｌ１陽性、ＨＰＶ１６＋および扁平上皮細胞がん患者で観察される。ＰＤ－Ｌ１陰性、ＨＰＶ１８＋または腺がん患者で臨床反応が観察される。 図７は、腫瘍負荷の基準線からの標的病変の縦方向変化を示す。現在、追跡期間中央値は、６．１ヶ月（範囲；１．７～２４．２ヶ月）であった。ＣＲ：完全反応；ＰＲ：部分反応；ＳＤ：安定疾患；ＰＤ：進行性疾患。 図８は、最良総合反応がＣＲおよびＰＲである患者（Ｎ＝１６人）の反応期間および１６個の反応中８個が進行中であることを示す。ＰＦＳ中央値は、２．７ヶ月（範囲；１．３～２４．２ヶ月）であり、ＯＳ中央値は到達しなかった。 図９Ａ～図９Ｄは、ＣＲを有する患者（図９Ａおよび図９Ｂ）、およびＰＲを有する患者（図９Ｃおよび９Ｄ）で１０および１９週に基準線およびペムブロリズマブ治療とともにＧＸ－１８８Ｅ後における標的病変のＴスキャンを示す。図９Ａで、以前に２回の化学療法を受けたことがあり、右肺門リンパ節転移がある、ＨＰＶ１６、ＰＤ－Ｌ１陽性、扁平上皮細胞がんがある６３歳の子宮頸がん患者。軸上の肺ＣＴは、転移性リンパ節症を示した（矢印）。図９Ｂは、組み合わせ治療後、２つの腫瘍マーカー（ＣＥＡおよびＴＡ４）のレベルを示す；点線は、腫瘍マーカーの正常レベルに対するカットオフ基準を示す。図９Ｃで、２回の化学療法を受けたことがある、ＨＰＶ１８、ＰＤ－Ｌ１陽性、腺がんがある４１歳の子宮頸がん患者。骨盤ＣＴは、骨盤腔に卵子、低密度転移性腫瘤（矢印）を示した。図９Ｄは、組み合わせ治療後に２つの腫瘍マーカー（ＣＥＡおよびＴＡ４）のレベルを示す；点線は、腫瘍マーカーの正常レベルに対するカットオフ基準を示す。 図９Ａ～図９Ｄは、ＣＲを有する患者（図９Ａおよび図９Ｂ）、およびＰＲを有する患者（図９Ｃおよび９Ｄ）で１０および１９週に基準線およびペムブロリズマブ治療とともにＧＸ－１８８Ｅ後における標的病変のＴスキャンを示す。図９Ａで、以前に２回の化学療法を受けたことがあり、右肺門リンパ節転移がある、ＨＰＶ１６、ＰＤ－Ｌ１陽性、扁平上皮細胞がんがある６３歳の子宮頸がん患者。軸上の肺ＣＴは、転移性リンパ節症を示した（矢印）。図９Ｂは、組み合わせ治療後、２つの腫瘍マーカー（ＣＥＡおよびＴＡ４）のレベルを示す；点線は、腫瘍マーカーの正常レベルに対するカットオフ基準を示す。図９Ｃで、２回の化学療法を受けたことがある、ＨＰＶ１８、ＰＤ－Ｌ１陽性、腺がんがある４１歳の子宮頸がん患者。骨盤ＣＴは、骨盤腔に卵子、低密度転移性腫瘤（矢印）を示した。図９Ｄは、組み合わせ治療後に２つの腫瘍マーカー（ＣＥＡおよびＴＡ４）のレベルを示す；点線は、腫瘍マーカーの正常レベルに対するカットオフ基準を示す。 図９Ａ～図９Ｄは、ＣＲを有する患者（図９Ａおよび図９Ｂ）、およびＰＲを有する患者（図９Ｃおよび９Ｄ）で１０および１９週に基準線およびペムブロリズマブ治療とともにＧＸ－１８８Ｅ後における標的病変のＴスキャンを示す。図９Ａで、以前に２回の化学療法を受けたことがあり、右肺門リンパ節転移がある、ＨＰＶ１６、ＰＤ－Ｌ１陽性、扁平上皮細胞がんがある６３歳の子宮頸がん患者。軸上の肺ＣＴは、転移性リンパ節症を示した（矢印）。図９Ｂは、組み合わせ治療後、２つの腫瘍マーカー（ＣＥＡおよびＴＡ４）のレベルを示す；点線は、腫瘍マーカーの正常レベルに対するカットオフ基準を示す。図９Ｃで、２回の化学療法を受けたことがある、ＨＰＶ１８、ＰＤ－Ｌ１陽性、腺がんがある４１歳の子宮頸がん患者。骨盤ＣＴは、骨盤腔に卵子、低密度転移性腫瘤（矢印）を示した。図９Ｄは、組み合わせ治療後に２つの腫瘍マーカー（ＣＥＡおよびＴＡ４）のレベルを示す；点線は、腫瘍マーカーの正常レベルに対するカットオフ基準を示す。 図９Ａ～図９Ｄは、ＣＲを有する患者（図９Ａおよび図９Ｂ）、およびＰＲを有する患者（図９Ｃおよび９Ｄ）で１０および１９週に基準線およびペムブロリズマブ治療とともにＧＸ－１８８Ｅ後における標的病変のＴスキャンを示す。図９Ａで、以前に２回の化学療法を受けたことがあり、右肺門リンパ節転移がある、ＨＰＶ１６、ＰＤ－Ｌ１陽性、扁平上皮細胞がんがある６３歳の子宮頸がん患者。軸上の肺ＣＴは、転移性リンパ節症を示した（矢印）。図９Ｂは、組み合わせ治療後、２つの腫瘍マーカー（ＣＥＡおよびＴＡ４）のレベルを示す；点線は、腫瘍マーカーの正常レベルに対するカットオフ基準を示す。図９Ｃで、２回の化学療法を受けたことがある、ＨＰＶ１８、ＰＤ－Ｌ１陽性、腺がんがある４１歳の子宮頸がん患者。骨盤ＣＴは、骨盤腔に卵子、低密度転移性腫瘤（矢印）を示した。図９Ｄは、組み合わせ治療後に２つの腫瘍マーカー（ＣＥＡおよびＴＡ４）のレベルを示す；点線は、腫瘍マーカーの正常レベルに対するカットオフ基準を示す。 図１０は、標的病変サイズの合計において基準線からの最大変化を示すグラフである。標的病変で基準線からの最大変化は、患者で1つ以上の評価可能な基準線後のイメージ（ｎ＝４５個）を有する患者でＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１によって評価された。それぞれのバーは、１人の患者を示し、点線は、ＰＤ（＋２０％）またはＰＲ（－３０％）に対するＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１基準を示す。４８人の患者のうち、３人の患者（患者ＩＤ １６０７、１６０８、１８０２）は、標的病変が盲検下独立中央判定（ＢＩＣＲ）により評価できないものと評価されたので、このグラフに含まれていない。

用語の定義
別途表示されない限り、または文脈から暗示されない限り、下記の用語および語句は、以下に提供された意味を含む。明示的に別途表示されないか、または文脈からあらわれない限り、下記の用語および語句は、それが属する技術分野において獲得した意味を排除しない。本願に提供された態様の範疇が請求範囲のみによって限定されるので、定義は、特定具現例を記述する目的で提供され、本願に提供された態様を制限しようとする意図ではない。別途定義されない限り、本願において使用されたすべての技術的および科学的用語は、本願に提供された態様の属する技術分野における通常の知識を有する者によって一般的に理解されるような意味を有する。

本願において使用される用語「ＧＸ－１８８変異体」、「ＧＸ－１８８類似体」、「ＧＸ－１８８変異体構成物」、「ＧＸ－１８８類似体構成物」または任意の類似用語は、構成物の少なくとも1つの用量の投与後に生体内でＧＸ－１８８（図１または配列番号９）の投与後に誘導された細胞免疫反応に似ている細胞免疫反応を構成物が誘導するものを示す。細胞免疫反応は、もし変異体構成物がＧＸ－１８８によって誘導された細胞免疫反応と同一またはそれよりもさらに高い細胞免疫反応を誘導できるものであれば、類似なものでありうる。他の具現例において、細胞免疫反応は、もし変異体構成物がＧＸ－１８８によって誘導された免疫反応より少なくとも約０．９倍（例えば、９０％）、約０．８倍、約０．７倍、約０．６倍、約０．５倍、または約０．４倍さらに高い細胞免疫反応を誘導すると、類似なものでありうる。一具現例において、細胞免疫反応は、ＣＤ８ Ｔ細胞反応、ＣＤ４ Ｔ細胞反応、サイトカイン分泌、またはそれらの任意の組み合わせである。さらに他の具現例において、細胞免疫反応は、増加した数の多機能性Ｔ細胞を含む。特定具現例において、多機能性Ｔ細胞は、流動細胞分析によって測定されるとき、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＴＮＦ－α、ＭＩＰ－β、ＣＤ１０７ａ／ｂ、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選ばれた少なくとも３個、少なくとも４個、または少なくとも５個のマーカーを示す。ＧＸ－１８８変異体の例は、ＧＸ－１８８Ｅ（配列番号１５）でありうる。

本願において使用されるような用語「ＧＸ－１８８Ｅ」は、配列番号１５のヌクレオチド配列を有する核酸構成物または配列番号１５に対して少なくとも約８０％以上、約８１％以上、約８２％以上、約８４％以上、約８５％以上、約８６％以上、約８７％以上、約８８％以上、約８９％以上、約９０％以上、約９１％以上、約９２％以上、約９３％以上、約９４％以上、約９５％以上、約９６％以上、約９７％以上、約９８％以上、約９９％以上、または約１００％の配列同一性を有するそれの変異体である。

２つのポリペプチド間の「配列同一性」という用語は、1つのポリペプチドのアミノ酸配列を第２ポリペプチドの配列と比較することによって測定される。本願で議論される場合、任意の特定ポリペプチドがさらに他のポリペプチドに対して少なくとも約５０％、約６０％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または１００％同一であるか否かは、限定されるものではないが、ＢＥＳＴＦＩＴプログラム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｖｅｒｓｉｏｎ ８ ｆｏｒ Ｕｎｉｘ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐａｒｋ，５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒｉｖｅ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．５３７１１）のような技術分野に知られている方法およびコンピュータプログラム／ソフトウェアを使用して測定することができる。ＢＥＳＴＦＩＴは、２つの配列間の相同性の最良セグメントを探すために、Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈｅｍａｔｉｃｓ ２：４８２－４８９（１９８１）のローカル相同性アルゴリズムを使用する。特定配列が、例えば、本発明による参照配列と９５％同一であるかを測定するために、ＢＥＳＴＦＩＴまたは任意の他の配列整列プログラムを使用するとき、媒介変数は、もちろん、同一性の百分率が参照ポリペプチド配列の全長にわたって計算され、相同性のギャップが参照配列のアミノ酸の総数の最大５％に許容されるように設定される。

用語「約」は、本願において概略的に、概略、周辺の、または～の領域にあることを意味するために使用される。用語「約」が数字範囲とともに使用されるとき、用語は、設定された数字値の上下の境界を拡張させることによってその範囲を修飾する。一般的に、用語「約」は、本願において１０パーセントの上または下の（さらに高いかまたはさらに低い）変動によって明示された値の上下の数字値を修飾するために使用される。

用語「有意味な」または「有意味に」は、統計的有意味性を示し、一般的に２つの標準偏差（２ＳＤ）またはさらに大きい差異を示す。

本願において使用されるような用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」は、方法または組成物に必須であるが、必須であるかどうかにかかわらず、明示されていない要素を含むように開放された組成物、方法、およびそれらのそれぞれの構成要素と関連して使用される。

用語「からなる」は、本願において記述される組成物、方法、およびそれらのそれぞれの構成要素を示し、具現例の説明で引用されていない任意の要素を排除する。

本願において使用されるような用語「本質的になる」は、与えられた具現例に必要な要素を示す。用語は、その具現例の基本的および新規なまたは機能的な特徴に実質的に影響を及ぼさない要素の存在を許容する。

単数形態を示す用語「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈が明らかに異なるものを示さない限り、複数の対象物を含む。同様に、単語「または」は、文脈が明らかに異なるものを示さない限り、「および」を含むものと意図される。たとえ本願に記述されたものと似ているか、同等な方法および物質が本開示の実施または教示に使用できるが、好適な方法および物質が以下で記述される。略語、「ｅ．ｇ 」は、ラテン語の例を挙げると（ｅｘｅｍｐｌｉ ｇｒａｔｉａ）に由来したものであり、本願において非制限的な例を示すために使用される。したがって、略語「ｅ．ｇ」は、用語「例えば」と同義語である。

具現例において、「免疫調節化合物」は、限定されるのではないが、サイトカイン、例えばインターフェロン、単クローン性抗体、例えばＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路阻害剤（ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤）、抗ＣＴＬＡ４抗体、シクロホスファミド、サリドマイド、レバミゾール、レナリドミド、またはそれらの組み合わせを含む。具現例において、免疫調節化合物は、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ１抗体と抗ＣＴＬＡ４抗体の組み合わせ、抗ＰＤ－Ｌ１抗体と抗ＣＴＬＡ抗体の組み合わせである。用語「ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路阻害剤」は、ＰＤ－Ｌ１のＰＤ－１への結合を阻害または遮断する化合物であり、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、および抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１抗体を含むことができる。

免疫調節化合物は、ペムブロリズマブまたはＭＤＸ－１１０６（Ｍｅｒｃｋ）、ニボルマブ、セミプリマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、ＴＨＡＬＯＭＩＤ（サリドマイド）、シクロホスファミド、レバミゾール、レナリドミド、ＣＣ－４０４７（ポマリドミド）、ＣＣ－１１００６（Ｃｅｌｇｅｎｅ）、およびＣＣ－１００１５（Ｃｅｌｇｅｎｅ）のような抗ＰＤ１抗体または抗ＰＤ－Ｌ１抗体、およびＷＯ２００７０２８０４７、ＷＯ２００２０５９１０６、およびＷＯ２００２０９４１８０のうちいずれか1つに記述された免疫調節化合物から選択できる。免疫調節化合物は、抗ＰＤ１抗体でありうる。具現例において、抗ＰＤ１抗体は、ペムブロリズマブである。

用語「がん」および「がん性」は、細胞集団が調節されない細胞成長によって特徴づけられる哺乳類での生理的状態を示したり記述する。がんの例としては、限定されるのではないが、がん腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、および白血病が挙げられる。そのようながんのより具体例としては、扁平上皮細胞がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、肺の腺がん、肺の扁平上皮がん、腹膜のがん、肝細胞がん、消化管がん、膵臓がん、膠芽細胞腫、子宮頸がん、卵巣がん、肝がん、膀胱がん、肝腫、乳がん、結腸がん、大腸がん、子宮内膜または子宮がん、唾液腺がん、腎臓がん、肝がん、前立腺がん、外陰部がん、甲状腺がん、肝臓がんおよび多様な類型の頭頸部がんが挙げられる。

用語「腫瘍」および「新生物」は、前がん性病変を含み、陽性（非がん性）または悪性（がん性）である、過度な細胞成長または増殖から始まった任意の組織塊を示す。腫瘍は、子宮頸部腫瘍でありうる。特定具現例において、子宮頸部腫瘍は、陽性腫瘍または悪性腫瘍である。特定具現例において、子宮頸部腫瘍は、扁平上皮細胞がん（ＳＣＣ）、腺がん、腺扁平上皮がん、小細胞がん、神経内分泌腫瘍（ＮＥＴ）、ガラス質細胞がん、絨毛腺腺がん（ＶＧＡ）、非がん性悪性腫瘍、黒色腫、リンパ腫、または子宮頸部上皮内新生物（ＣＩＮ）である。一部の具現例において、子宮頸部腫瘍は、ＣＩＮ１、ＣＩＮ２、ＣＩＮ３、または子宮頸がんである。

用語「がん細胞」、「腫瘍細胞」、および文法的同等語は、腫瘍細胞集団の大部分を含む非腫瘍形成細胞、および腫瘍形成幹細胞（がん幹細胞）を両方とも含み、腫瘍または前がん性病変に由来する細胞の総集団を示す。

本願に記述された融合タンパク質をコード化するポリヌクレオチドの「有効量」は、具体的に記載された目的を行うのに十分な量である。「有効量」は、記載された目的と関連して実験的におよび日常的方式で決定できる。

本願において使用されるような用語「治療的有効量」は、必要な投与量で必要な期間の間所望の治療結果を達成するのに効果的な量を示す。治療的結果は、例えば、症状の減少、生存期間の延長、腫瘍のサイズおよび／または体積の減少、腫瘍の成長の阻害などでありうる。治療的結果は、「治癒」である必要はない。

「治療する」または「治療」または「治療するための」または「緩和させる」または「緩和させるための」のような用語は、診断された病理的状態または障害を治癒、鈍化、症状を減少、進行を停止させる、腫瘍組織のサイズまたは体積を減少させる、および／または腫瘍成長を中断させる治療的尺度を示す。したがって、治療を必要とする対象体は、すでに障害と診断を受けたか、障害を有するもの疑われる対象体を含む。

「対象体」または「個体」または「動物」または「患者」または「哺乳類」は、診断、予測、または治療法が好ましい任意の対象体、特に哺乳類対象体を意味する。哺乳類対象体としては、限定されるのではないが、ヒト、家畜動物、農場動物、動物園動物、スポーツ動物、イヌ、ネコのような愛玩用動物、ギニアピッグ、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、畜牛、ウシ；類人猿、サル、オランウータン、およびチンパンジーのような霊長類；イヌおよびオオカミのようなイヌ科動物；ネコ、ライオン、およびトラのようなネコ科動物；ウマ、ロバ、およびシマウマのような馬科動物；クマ、ウシ、ブタ、およびヒツジのような食用動物；シカおよびキリンのような有蹄類；マウス、ラット、ハムスターおよびギニアピッグのようなげっ歯類；などが挙げられる。特定具現例において、哺乳類は、ヒト対象体である。

用語「組み合わせ治療／療法」、「組み合わせた治療」、「組み合わせの」または「組み合わせて」は、同時におよび／または異なる時間に、規定された期間内に、少なくとも前記２つの区別される治療剤を使用する、少なくともワクチンおよびチェックポイント阻害剤治療を意味する。

用語「チェックポイント阻害剤」および／または「抗体」は、部分的にまたは全体的に免疫系が身体のＴ細胞を使用してがんを攻撃するのを防止できる身体のチェックポイントを取り除くために、および、投与方法と関係なく、個体（または動物）に投与するために商用化され、および／または販売されるかにかかわらず、設計された任意の1つ以上の商業的薬物および／または非商業的薬物を意味する。

用語「ＰＤ－１」は、チェックポイント阻害抗体の一例を意味する。

用語「基準線」は、実験の１日目の腫瘍体積（ＴＶ）を意味する。

用語「ベクター」は、転写単位を含有する用語であり（「発現ベクター」としても知られている）、本願において使用されるように、投与されたとき、生体内で標的細胞に進入してコード化されたタンパク質を発現できるウイルスおよび／または非ウイルス発現ベクターを示す。外因性タンパク質の生体内での伝達および発現に適したウイルスベクターは、よく知られており、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、ワクチニアベクター、水痘ベクター、単純ヘルペスウイルスベクターなどが挙げられる。ウイルスベクターは、好ましくは、正常細胞で複製欠損で作られる。例えば、米国特許第６，６６９，９４２号；第６，５６６，１２８号；第６，７９４，１８８号；第６，１１０，７４４号および第５，１３３，０２９号参照。ベクターは、非経口で、例えば、静脈内に、動脈内に、筋肉内に、皮下に、またはその他で投与されうる。投与は、また、経口で、鼻腔で、直腸で、経皮でまたはエアロゾル吸入で行うことができる。ベクターは、ボーラスとして投与されたり、徐々に注入されることができる。本出願においてベクターは、好ましくは、皮下に投与される。

組成物および治療
ＧＸ－１８８の組成物は、注射によって非経口で、例えば、皮下に、皮内に、皮膚内に、皮膚下にまたは筋肉内に投与されうる。本願において使用される用語「ＧＸ－１８８組成物」、「ＧＸ－１８８の組成物」、「ＧＸ－１８８剤形」および「ＧＸ－１８８含有剤形」は、配列番号９または１５の配列を含むポリヌクレオチド 構成物または配列番号９または配列番号１５に対して約８５％以上、約８６％以上、約８７％以上、約８８％以上、約８９％以上、約８９％以上、約９０％以上、約９１％以上、約９２％以上、約９３％以上、約９４％以上、約９５％以上、約９６％以上、約９７％以上、約９８％以上、または約９９％以上の配列同一性を有するそれの変異体を含む組成物または剤形を示す。

他のモードの投与に適したさらなる剤形としては、坐剤および場合によっては、口腔、鼻腔、頬、舌下、腹腔内、膣内、肛門、硬膜外、脊椎、および頭蓋内剤形が挙げられる。坐剤の場合、伝統的な結合剤および担体は、例えば、ポリアルキレングリコールまたはトリグリセリドを含むことができ；そのような坐剤は、０．５％～１０％（重量／重量）、好ましくは、１％～２％（重量／重量）の範囲で活性成分を含有する混合物から形成されることができる。経口用剤形は、例えば、製薬等級のマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどのような一般的に使用される賦形剤を含む。これらの組成物は、溶液、懸濁液、錠剤、丸薬、カプセル、持続放出剤形または粉末の形態を取ることができ、１０％～９５％（重量／重量）、好ましくは、２５％～７０％（重量／重量）の活性成分を含有することができる。

ＧＸ－１８８含有剤形は、投与剤形と符合する方式で、および、治療効果があり、免疫原性となる量で投与されうる。投与される量は、例えば、個体の免疫系が免疫反応を装着する能力、および所望の免疫程度を含み、治療される対象体によって変わる。好適な投与量の範囲は、ワクチン接種当たり数百マイクログラムの活性成分程度であり、好ましい範囲は、約１μｇ～２０ｍｇ、例えば、約５μｇ～１０ｍｇの範囲である。具現例において、用量は、約０．５μｇ～１０００μｇ、１μｇ～１０００μｇの範囲、または１μｇ～５００μｇの範囲、特に約１０μｇ～１００μｇの範囲でありうる。さらに他の態様において、投与量は、０．１ｍｇ～２０ｍｇの範囲でありうる。さらに他の態様において、投与量は、０．５ｍｇ～１０ｍｇの範囲でありうる。また、さらに他の態様において、投与量は、１ｍｇ～５ｍｇの範囲でありうる。また、さらに他の態様において、投与量は、０．５ｍｇ～２０ｍｇ、１ｍｇ～２０ｍｇ、０．５ｍｇ～５ｍｇ、１．５ｍｇ～１０ｍｇ、２ｍｇ～５ｍｇ、２．５ｍｇ～５ｍｇ、３ｍｇ～５ｍｇ、または２ｍｇ～１０ｍｇの範囲でありうる。さらに他の具現例において、ＧＸ－１８８の投与量は、約０．５ｍｇ、約０．６ｍｇ、約０．７ｍｇ、約０．８ｍｇ、約０．９ｍｇ、約１ｍｇ、約１．１ｍｇ、約１．２ｍｇ、約１．３ｍｇ、約１．４ｍｇ、約１．５ｍｇ、約１．６ｍｇ、約１．７ｍｇ、約１．８ｍｇ、約１．９ｍｇ、約２ｍｇ、約２．１ｍｇ、約２．２ｍｇ、約２．３ｍｇ、約２．４ｍｇ、約２．５ｍｇ、約２．６ｍｇ、約２．７ｍｇ、約２．８ｍｇ、約２．９ｍｇ、約３ｍｇ、約３．１ｍｇ、約３．２ｍｇ、約３．３ｍｇ、約３．４ｍｇ、約３．５ｍｇ、約３．６ｍｇ、約３．７ｍｇ、約３．８ｍｇ、約３．９ｍｇ、約４ｍｇ、約４．１ｍｇ、約４．２ｍｇ、約４．３ｍｇ、約４．４ｍｇ、約４．５ｍｇ、約４．６ｍｇ、約４．７ｍｇ、約４．８ｍｇ、約４．９ｍｇ、または約５ｍｇであってもよく、ほぼ毎週、隔週に１回、３週ごとに１回、４週ごとに１回の間隔で投与されうる。ＧＸ－１８８剤形は、５日、１０日、１５日、２０日、または３０日、または４０日の間隔で投与されうる。

一態様によれば、初期投与およびブースター接種に対する好適な療法は、また、可変的であるが、初期投与と続いて後続接種または他の投与によって典型化される。例えば、一具現例において、ＧＸ－１８８は、１週目、２週目、４週目、７週目、１３週目、および１９週目に、および選択的にさらに４６週目に約２ｍｇの固定用量で投与されうる。投与は、筋肉内経路を通じて行われることができる。さらに他の具現例において、ＧＸ－１８８は、１週目、２週目、４週目、８週目、１４週目、および２０週目に、および選択的にさらに４６週目に約２ｍｇの固定用量で投与されうる。他の具現例において、投与量は、各投与時に変わることができる。

免疫調節剤は、別個の剤形として投与されうる。具現例において、抗ＰＤ１抗体は、静脈内に同時にまたはＧＸ－１８８投与と異なる時間に投与されうる。抗ＰＤ１抗体は、約１ｍｇ～１０００ｍｇの用量で投与されうる。具現例において、抗ＰＤ１抗体の用量は、約１０ｍｇ～５００ｍｇ、約５０ｍｇ～５００ｍｇ、約１００ｍｇ～５００ｍｇ、約１００ｍｇ～３００ｍｇ、約１５０ｍｇ～３００ｍｇ、約１８０ｍｇ～２５０ｍｇ、約１９０ｍｇ～２５０ｍｇ、約１８５ｍｇ～２２５ｍｇ、約１８５ｍｇ～２２０ｍｇ、約１９５ｍｇ～２５０ｍｇ、約１９５ｍｇ～２２５ｍｇ、約１９０ｍｇ～２３０ｍｇ、約２００ｍｇ～４００ｍｇ、約２００ｍｇ～３００ｍｇ、約２５０ｍｇ～３００ｍｇ、約２８０ｍｇ～３５０ｍｇ、約３００ｍｇ～５００ｍｇ、約３００ｍｇ～４００ｍｇ、約３００ｍｇ～１０００ｍｇ、約３００ｍｇ～９００ｍｇ、約３００ｍｇ～８００ｍｇ、約３００ｍｇ ７００ｍｇ、または約３００ｍｇ～６００ｍｇの範囲でありうる。抗ＰＤ１抗体は、1週間に1回、週２回、週３回、週４回、毎週、１０日ごとに、1週間おきに1回、２０日ごとに、３週ごとに、４週ごとに、月に1回、1カ月おきに1回、または3カ月に1回などの間隔で投与されうる。具現例において、抗ＰＤ１抗体は、ペムブロリズマブであり、５週、６週、７週、８週、９週、１０週、１１週、１２週、１３週、１４週、１５週、１６週、１７週、１８週、１９週、２０週、２１週、２２週、２３週、２４週、２５週またはそれ以上の期間の間ＧＸ－１８８の最初の投与前に開始して、同時に、またはその後に週３回静脈内に２００ｍｇの用量で投与されうる。期間は、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、またはそれ以上のようなカレンダーのケ月単位で測定されうる。または、治療療法は、例えば、約２００ｍｇの固定された投与量で１０用量、１１用量、１２用量、１３用量、１４用量、１５用量、１６用量、１７用量、１８用量、１９用量、２０用量、２１用量、２２用量、２３用量、２４用量、２５用量、２６用量、２７用量、２８用量、２９用量、３０用量、３１用量、３２用量、３３用量、３４用量、３５用量、またはそれ以上のような投与回数を含んでもよい。

配列番号１０の配列またはそれの機能的変異体を含む融合タンパク質は、中性または塩形態としてワクチンに剤形化されうる。製薬学的に許容される塩としては、酸付加塩（ペプチドの遊離アミノ基で形成される）が挙げられるが、それは、無機酸、例えば、塩酸またはリン酸、または酢酸、シュウ酸、酒石酸、マンデル酸などのような有機酸を使用して形成される。遊離カルボキシル基を使用して形成された塩は、また、例えば、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、または水酸化鉄のような無機塩基、およびイソプロピルアミン、トリメチルアミン、２－エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどのような有機塩基に由来することができる。配列番号１０の配列を含む融合タンパク質の機能的変異体は、配列番号１０に対して約８５％以上、約８６％以上、約８７％以上、約８８％以上、約８９％以上、約８９％以上、約９０％以上、約９１％以上、約９２％以上、約９３％以上、約９４％以上、約９５％以上、約９６％以上、約９７％以上、約９８％以上、または約９９％以上の配列同一性のポリペプチドでありうる。

具現例によれば、進行性、手術不可能な、転移性子宮頸がん患者にＧＸ－１８８および抗ＰＤ１抗体の投与は、腫瘍のサイズおよび／または体積の減少のような有意味な治療効果、およびＴ細胞反応、ＰＤ－Ｌ１、ＣＥＡ、および／またはＴＡ４レベルによって測定されるところ、改善された抗がん免疫反応を示す。例えば、ＧＸ－１８８変異体および抗ＰＤ１抗体の投与は、ＨＰＶ特異的Ｔ細胞反応によって効果的に誘導された。ペムブロリズマブ単一療法がＰＤ－１陰性患者に対して効果を示さなかったが、その一方で、ＧＸ－１８８とペムブロリズマブの併用療法は、ＰＤ１陰性の子宮頸がん患者を治療するのにまたは治療を向上させるのに効果的である。

以下、本発明は、実施例を参照してより詳細に記述される。当該技術に熟達した者にとって、下記の実施例は、単に本発明を例示するものであり、本発明の範疇は、これらの実施例によって限定されないことが明らかだろう。

実施例１．前臨床研究
ＧＸ－１８８Ｅおよび抗ＰＤ１抗体を使用した併用療法の子宮頸がんに及ぼす抗腫瘍効能を動物モデルで評価した。ＨＰＶ類型１６のＥ７を発現するように形質転換されたＣ５７ＢＬ／６マウス肺上皮細胞からの細胞株であるＴＣ－１細胞をＧＸ－１８８効能評価用動物モデルの生産のための細胞株として選択した。

Ｃ５７ＢＬ／６マウスで１×１０^５ ＴＣ－１腫瘍細胞（慶北国立大学病院のＪａｅｔａｅ Ｌｅｅ教授によって提供される）の皮下移植による腫瘍形成後に、１、２、および４週目にマウスに４μｇのＧＸ－１８８Ｅまたは剤形緩衝液（ＰＢＳ）を電気穿孔（ＯｒｂｉｊｅｃｔｏｒＴＭ，Ｅｌｉｍｔｅｋ Ｃｏ．，Ｌｔｄ）を通じて筋肉内に投与した。併用療法および抗マウスＰＤ－１抗体（抗ｍＰＤ－１ ｍＡｂ）単独グループに対して、２５０μｇの抗ｍＰＤ１抗体（ＢｉｏＸｃｅｌｌ、クローンＲＭＰ１－１４）をＴＣ－１細胞の移植後２週後に開始して１週間隔で５回腹腔内に投与した。腫瘍細胞ｃｈａｌｌｅｎｇｅ後、週２回腫瘍のサイズを測定し、生存率を調査した（図２Ａ）。

対照群（ＰＢＳ）グループのすべての動物が死亡し、それに使用された腫瘍ｃｈａｌｌｅｎｇｅ条件が適切であったことを確認した。抗ｍＰＤ－１抗体のみを投与したとき、一部の動物は、対照群グループにおける腫瘍細胞成長と比較して、弱い効果、すなわち遅延した腫瘍細胞成長を示した。しかしながら、すべての動物が結局死亡したので、抗ｍＰＤ－１抗体は、生存率にいかなる変化も誘導しなかった。ＧＸ－１８８Ｅのみを投与したとき、遅延した腫瘍細胞成長に起因して平均生存期間に明確な増加があったが、最終生存率は１７％（１匹／６匹）であった。他方では、ＧＸ－１８８Ｅと抗ｍＰＤ－１抗体の組み合わせを投与したとき、腫瘍細胞成長の遅延および生存期間に明確な増加があり、その一方で、生存率も、５０％（３匹／６匹）に増加した（図２Ｂ～図２Ｅ）。

結果に基づいて、本発明者らは、ＧＸ－１８８Ｅによって誘導された抗原特異的細胞免疫反応がすでに形成された腫瘍細胞を効果的に除去することができ、それが遅延した腫瘍細胞成長および増加した生存期間につながることを立証した。さらに、免疫調節化合物とＧＸ－１８８Ｅ治療ワクチンの組み合わせを受けたグループは、ＧＸ－１８８Ｅ単独グループと同等のレベルの遅延した腫瘍細胞成長および生存期間の延長を示し、また、それは、長期的な観点から生存率の増加につながった。

所定のチェックポイント阻害剤の作用メカニズムに基づいて推論すると、この研究の発見は、以前の研究の結果と似ており、それは、抗ＰＤ１抗体がＴ細胞の抗腫瘍殺活性を延長させたことを示した。したがって、結果は、チェックポイント阻害剤がＧＸ－１８８Ｅを含むＨＰＶ標的化免疫治療ワクチンの効能を向上させるための好適なシナジーパートナーであることを示唆する。

この研究結果は、抗ＰＤ１抗体を免疫治療ワクチンＧＸ－１８８Ｅと組み合わせることがＧＸ－１８８Ｅの効能を向上させたことを示し、それは、チェックポイント阻害剤が免疫治療ワクチンとの併用療法に使用するための好適な候補になりうることを示唆した。

実施例２：臨床研究
ＧＸ－１８８Ｅ（配列番号１５）は、ＨＰＶ１６／１８ Ｅ６／Ｅ７をコード化するＨＰＶ治療ＤＮＡワクチンである。１２人の前がん患者をＧＸ－１８８Ｅで免疫化し、Ｉ相の９人の患者のうち７人およびＩＩ相の５２人の患者のうち３５人がワクチン接種後３６週内に子宮頸部病変の退行を示した。臨床的利益は、ＧＸ－１８８Ｅワクチン接種による向上したＨＰＶ特異的ＩＦＮ－γ反応と関連があった。前がん患者における概念の臨床的証明を勘案して、本発明者らは、子宮頸がん患者で、ＧＸ－１８８Ｅワクチン接種がＨＰＶ特異的Ｔ細胞の頻度を増加させることによってチェックポイント阻害剤に対する臨床応答者の割合を増加させると推測した。

ＩＩ相臨床試験で、本発明者らは、最初またはその後の化学療法が失敗したＨＰＶ１６および／または１８陽性再発／進行性子宮頸がん患者でペムブロリズマブと組み合わせたＧＸ－１８８Ｅの安全性および効能を評価した。

Ａ．研究設計および参加者
研究は、前向き、非盲検、ＩＩ相研究であった。プロトコルは、各研究サイトで機関監査委員会または倫理委員会によって承認を受け、各患者から書面同意書を受けた。研究をヘルシンキ宣言およびすべての適用される法律によって行った。

５４人の患者を登録し、研究組み合わせで治療した。試験対象患者基準は、書面同意書に署名した１８歳以上の女性患者；０－１の米国東海岸がん臨床試験グループパフォーマンスステータスを提供し、組織学的に再発性／進行性ＨＰＶ陽性（ＨＰＶ１６および／またはＨＰＶ１８）子宮頸がんが確認されたヒト；再発性／進行性がんに対して利用可能な治療法で治療後に疾患が進行したヒトを含む。患者は、もし活性中枢神経系転移または活性自己免疫疾患、同種固形臓器または骨髓移植、または免疫欠乏の診断履歴がある場合、研究から排除させた。すべての患者は、スクリーニング時／基準線における分子および組織学的分析のためにそれらの保管したまたは新鮮な腫瘍生検サンプルを提出した。ＩＦＮ－γＥＬＩＳｐｏｔ検定のためにスクリーニング時および１、４、７、１０、１６、２２、および４９週目に末梢血サンプルを患者から採血した。

Ｂ．過程
ＧＸ－１８８Ｅを三角筋または外側広筋のうちいずれか1つに筋肉内に２ｍｇを投与した後、直ちに１、２、４、７、１３、および１９週目に共局在電気穿孔（ＴｒｉＧｒｉｄ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍ，Ｉｃｈｏｒ ｍｅｄｉｃａｌ ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．）を行って、４６週目に1つの選択的用量を投与した。ペムブロリズマブを標準臨床および機関慣行に基づいて、すべての過程および評価が完了した後、それぞれ３週治療周期の１日目に静脈内注入を使用して投与した。

ＧＸ－１８８Ｅによって誘導された細胞免疫反応を調査するために、ＨＰＶ１６／１８ Ｅ６／Ｅ７特異的Ｔ細胞反応を’研究設計および参加者’に表示した時間に分析した。ＩＦＮ－γＥＬＩＳｐｏｔ分析（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，ＣＡ，ＵＳＡ）のために、冷凍保存し、解凍した末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）をＫｉｍ ＴＪ，Ｊｉｎ Ｈ－Ｔ，Ｈｕｒ Ｓ－Ｙ，ｅｔ ａｌ．Ｃｌｅａｒａｎｃｅ ｏｆ ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ ＨＰＶ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｅｒｖｉｃａｌ ｌｅｓｉｏｎ ｂｙ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ＤＮＡ ｖａｃｃｉｎｅ ｉｎ ＣＩＮ３ ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｎａｔｕｒｅ ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ ２０１４；５（１）：１－１４に以前に記述されたように適応させ、さらに処理した。ＨＰＶ Ｅ６／Ｅ７に対するＴ細胞反応をシグナルと基準線レベルとを比較することによって測定し、ワクチン接種後に反応が基準線における反応より５倍以上である場合、陽性と見なした。

Ｃ．結果
患者を略９週ごとに反応に対して放射線学的に評価した（ＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１およびｉＲＥＣＩＳＴの両方によって）、研究用生成物の安全性を、実験室テスト結果および身体検査結果を記録し、報告し、分析することによって評価し、それは、患者の基底疾患、有害反応、および活力兆候を考慮した。患者が経験した有害事象（ＡＥ）、例えば、薬物毒性を包括的に評価した。研究者らは、米国国立がん研究所による有害事象に対する共通用語基準（ＣＴＣＡＥ ｖ４．０３）に基づいてＡＥの重症度を評価した。

Ｄ．統計学的分析
少なくとも1つの用量の研究用治療を受けたすべての患者を安全性集団に含ませ、安全性プロファイルについて分析した。ＡＥをＭｅｄＤＲＡ有害事象辞書によってコード化した。結果を表で作成し、それらの頻度、影響を受けた臓器システム、および研究治療との関係を調査した。最良総合反応率を含む効能結果を技術統計を使用して分析した。客観的反応をＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１および免疫治療剤に対する固形腫瘍反応評価基準（ｉＲＥＣＩＳＴ）によって評価した。客観的反応（ＰＲまたはＣＲ）、安定疾患（ＳＤ）、および疾患進行（ＰＤ）のすべての測定に対して確証スキャンを獲得した。

Ｅ．結果
５４人の患者を登録させ、４８人の患者を安全性について評価した（図３）。４５日の治療を受けない３人の患者は、プロトコルによるＧＸ－１８８Ｅワクチン接種に対する反応評価に対して不適格であると見なした。したがって、４８人の患者を治療効能について評価した。ＧＸ－１８８Ｅおよびペムブロリズマブ組み合わせを受けた患者の基準線特徴を図４に示し、組織学およびＨＰＶ類型を除いて、以前に報告されたペムブロリズマブ単一療法で治療されたものと類似していた。

５４人の患者を治療し、安全性について評価したが、任意の等級に対して３１．５％ ＴＲＡＥ（治療関連有害事象）および５．６の等級３－４ ＴＲＡＥを示した（図５）。全身的臓器分類によって分類されるところ、最も頻度の高いＴＲＡＥは、胃腸疾患（９．３％）および皮膚および皮下組織疾患（７．４％）であった。３人の患者（５．６％）が等級３ ＴＲＡＥを経験し、そのうちの１人の患者がアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）レベルの等級４上昇に関連したアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）レベルの等級３上昇があった。この患者は、免疫関連有害事象（ｉｒＡＥ）と評価されたＴＲＡＥによって治療を中断した。全体的に、抗ＰＤ１抗体（ペムブロリズマブ）投与と組み合わせたＧＸ－１８８Ｅワクチン接種は、安全であり、忍容性があるものと見なされた。図６Ａおよび図６Ｂは、研究サイトで放射線専門家によって評価された抗腫瘍反応の要約を示す。

図５、図６Ａ、および図６Ｂで、略語は、下記の意味を示す：
ＴＲＡＥ：治療関連有害事象；
ＢＯＲ：最良総合反応；
ＤＯＲ：反応期間；
ＣＲ：完全反応；
ＰＲ：部分反応；
ＳＤ：安定疾患；
ＰＤ：進行性疾患；
ＮＥ：評価不可能；
ＤＣＲ：疾患制御率；
ＰＤ－Ｌ１：プログラム死リガンド１；
ＳＣＣ：扁平上皮細胞がん；および
ＡＣ：腺がん。

図６Ａから分かるように、ＢＯＲＲは、３３．３％（１６人／４８人）であり、ＤＣＲは、５０％（２４人／４８人）であった。ＢＯＲＲを示した１６人の患者のうち、６人の患者がＣＲを有することが確認され、いずれも、持続的であり、進行中であり、反応持続期間は、カットオフ時点で１．３～２４．２ヶ月であり；すべてのＣＲ患者は、ＰＤ－Ｌ１陽性であり、ＨＰＶ１６および扁平上皮細胞がんを有した。反応をＨＰＶ１６および／または１８陽性患者で全て観察したが、ＨＰＶ１６陽性が好意的な反応を示した（３５．３％対比２８．６％）。予想外に、反応は、ＰＤ－Ｌ１陽性腫瘍だけでなく、ＰＤ－Ｌ１陰性腫瘍でも観察された：ＢＯＲＲおよびＤＣＲは、ＰＤ－Ｌ１陽性腫瘍患者でそれぞれ４１．７％（１５人／３６人）および６１．１％（２２人／３６人）であり、ＰＤ－Ｌ１陰性腫瘍患者でそれぞれ８．３％（１人／１２人）および１６．７％（２人／１２人）であった。

図７および図８に示されたように、１０週目に腫瘍減少を示した患者は、時間の経過について反応が改善される傾向を示した。追跡期間中央値は、６．１ヶ月（範囲、カットオフ日基準１．７～２４．２ヶ月）であり、その時間まで２４人の患者（５０．０％）で進行性疾患（ＰＤ）が発生した。

６３歳患者からの腫瘍イメージを図９Ａに示す。患者は、ＨＰＶ１６およびＰＤ－Ｌ１陽性扁平上皮細胞がんを有し、以前に２回の化学療法を受けたことがあり、リンパ節に転移した。治療後、患者は、ＣＲおよび腫瘍マーカーＴＡ４の正常レベルまでの有意味な減少を示した。図９Ｃは、ＨＰＶ１８およびＰＤ－Ｌ１陽性腺がんがあり、以前に２回の化学療法を受けたことがあり、骨盤腫瘤およびリンパ節転移がある４１歳患者からの腫瘍イメージを示す。治療後に、患者は、ＰＲを示し、時間の経過につれてさらに他の腫瘍マーカーＣＥＡで有意味な減少を示した。図９Ｂおよび図９Ｄは、組み合わせ治療後に２つの腫瘍マーカー（ＣＥＡおよびＴＡ４）のレベルを示す；点線は、腫瘍マーカーの正常レベルに対するカットオフ基準を表示する。

図１０で、標的病変のサイズで基準線（図７に示される）からの最大変化がＰＤ－Ｌ１発現状態を含むウォーターフォールプロットで要約される。ＰＤ－Ｌ１陽性患者は、ＢＯＲＲの観点からＰＤ－Ｌ１陰性患者が反応したものよりもさらに良好にＧＸ－１８８Ｅプラスペムブロリズマブの併用療法に反応した（１５／３６人に対して１／１２人）（図６Ａ）。

重要なことには、１人のＰＤ－Ｌ１陰性患者で３０％より高い標的サイズ減少が観察されたのに対し、ペムブロリズマブ単独の以前の研究でＰＤ－Ｌ１陰性患者では反応が観察されなかった。抗原特異的Ｔ細胞反応と関連して、ＩＦＮ－γＥＬＩＳｐｏｔ検定の結果は、基準線からの倍数変化として示された（不図示）。反応評価が可能な２３人の患者のうち１８人（７８．３％）がＤＮＡワクチン誘導Ｔ細胞反応を示し、これは、ペムブロリズマブと組み合わせたＧＸ－１８８Ｅが過度に前処理されたがん患者でもＨＰＶ Ｅ６／Ｅ７特異的Ｔ細胞反応を効果的に誘導したことを示す。

Ａ．議論
臨床研究結果は、ペムブロリズマブと組み合わせたＨＰＶワクチン接種が再発性／進行性、手術不可能な、転移性子宮頸がん患者で効果的な抗腫瘍反応を誘導したことを示した。臨床利益は有望であった（全体患者で３３．３％ＢＯＲＲ、ＰＤ－Ｌ１陽性患者で４１．７％ＢＯＲＲ）。本発明者らの知っている限り、これは、再発性／進行性子宮頸がん患者に対してがんワクチンとチェックポイント阻害剤を使用する併用療法に対する最初の報告である。腫瘍抗原特異的Ｔ細胞ががんワクチンによって誘導された後に、それは、腫瘍組織に移動し、浸潤して、冷たい腫瘍を熱い腫瘍に（ｃｏｌｄ ｔｏ ｈｏｔ ｔｕｍｏｒ）転換させる。腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）は、ＩＦＮ－γを分泌し、それは、免疫攻撃に対する適応抵抗メカニズムとして、腫瘍細胞からＰＤ－Ｌ１の発現を誘導する。チェックポイント阻害剤が消耗したＴＩＬの腫瘍細胞溶解性機能を活性化することによって抗腫瘍反応を誘導するので、腫瘍特異的ＴＩＬの存在は、チェックポイント阻害剤に対する抗腫瘍反応の先行条件である。チェックポイント阻害剤に対する相対的に乏しい臨床反応とのＴＩＬおよびＰＤ－Ｌ１陰性性の不在の相関関係によって証明された通り、ＰＤ－Ｌ１陰性性を有する非免疫原性の冷たい腫瘍は、ＴＩＬおよびＰＤ－Ｌ１発現を増加させるためにさらなる戦略を必要とすると示唆される。

がんワクチンは、腫瘍特異的Ｔ細胞反応を誘導する最も効率的な方法と見なされる。ＧＸ－１８８Ｅワクチン接種は、ＨＰＶ前がん患者でＡｇ特異的Ｔ細胞反応を効果的に誘導した。ＧＸ１８８Ｅワクチン接種は、ＴＩＬの頻度を増加させ、引き続いて、腫瘍でＰＤ－Ｌ１発現を向上させる可能性がある。これがＧＸ１８８Ｅワクチン接種が抗ＰＤ１抗体とともに臨床効能をどのように向上させたかに関する可能な説明である。

結果は、ＨＰＶ１６感染、ＰＤ－Ｌ１陽性、および扁平上皮細胞がんと比較して、ＨＰＶ１８感染、ＰＤ－Ｌ１陰性、および腺がんがある再発性／進行性子宮頸がんが乏しい臨床反応を招く傾向があることを示す。

要約すれば、過度に前処理された再発性／進行性子宮頸がん患者でＧＸ－１８８Ｅおよびチェックポイント阻害剤（ペムブロリズマブを含むＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路阻害剤）を組み合わせた治療が安全であり、忍容性があり、以前に報告されたペムブロリズマブ単一療法に類似の安全性プロファイルを示す。このような結果は、ＧＸ－１８８Ｅワクチン接種がいかなる有意味な有害事象を付加しなかったが、過度に前処理された子宮頸がん患者でＨＰＶ特異的Ｔ細胞反応を効果的に誘導したことを示した。本願の組み合わせ治療は、ＰＤ－Ｌ１陽性患者で略４１．７、ＨＰＶ１６陽性患者で３５．３％、および扁平上皮細胞がんで３３．３％の高い反応率を示した。また、本願の組み合わせ治療は、ペムブロリズマブ単一療法が効果的ではないとは対照的に、ＰＤ－Ｌ１陰性患者で効果的であった。しかも、本願の組み合わせ治療は、ＨＰＶ１８および腺がんにおいても臨床反応を立証した。

したがって、抗ＰＤ１抗体と組み合わせたＧＸ－１８８Ｅを使用する本願の組み合わせ治療は、現在利用可能な標準治療法が失敗したＨＰＶ１６／１８陽性再発性または進行性子宮頸がん患者の治療に安全であり、効果的であり、子宮頸がんだけでなく、口腔咽頭および肛門性器がんのようなＨＰＶ１６／１８関連がんに対する新しい標準療法となる可能性がある。
特定の実施形態では、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
ヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）誘導がんを予防または治療するためのヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）ワクチンおよびチェックポイント阻害剤を含む製薬学的組成物。
（項目２）
ＨＰＶワクチンは、配列番号１５のポリヌクレオチドまたは配列番号１５に対して８５％以上の配列同一性を有する機能性変異体を含むＨＰＶワクチンを含む、項目１に記載の製薬学的組成物。
（項目３）
ＨＰＶワクチンの用量は、０．５ｍｇ～５ｍｇである、項目２に記載の製薬学的組成物。
（項目４）
ＨＰＶワクチンは、筋肉内注射用である、項目２に記載の製薬学的組成物。
（項目５）
チェックポイント阻害剤は、プログラム死（ＰＤ）－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤である、項目１に記載の製薬学的組成物。
（項目６）
チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ－１抗体または抗ＰＤ－１Ｌ抗体である、項目１に記載の製薬学的組成物。
（項目７）
チェックポイント阻害剤は、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、セミプリマブ、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、項目１に記載の製薬学的組成物。
（項目８）
チェックポイント阻害剤の用量は、５０ｍｇ～５００ｍｇである、項目５に記載の製薬学的組成物。
（項目９）
チェックポイント阻害剤は、静脈内注射用である、項目５に記載の製薬学的組成物。
（項目１０）
ＨＰＶワクチンおよびチェックポイント阻害剤は、複数回投与される、項目１に記載の製薬学的組成物。
（項目１１）
ＨＰＶワクチンおよびチェックポイント阻害剤は、同時に、別々に、または順次に投与される、項目１に記載の製薬学的組成物。
（項目１２）
ＨＰＶワクチンは、１、２、４、７、１３、および１９週目に、およびさらに選択的に４６週目に投与される、項目１に記載の製薬学的組成物。
（項目１３）
チェックポイント阻害剤は、３週間隔で投与される、項目１に記載の製薬学的組成物。
（項目１４）
ＨＰＶ誘導がんは、子宮頸がんである、項目１に記載の製薬学的組成物。
（項目１５）
子宮頸がんは、扁平上皮細胞がんまたは腺がんである、項目１４に記載の製薬学的組成物。
（項目１６）
ＨＰＶ誘導がんは、転移性、再発性、または進行性がんであり、対象体は、抗がん治療を受けたことがあるか、受けている、項目１に記載の製薬学的組成物。
（項目１７）
ＨＰＶは、ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１８、またはそれらの組み合わせである、項目１に記
載の製薬学的組成物。
（項目１８）
ＨＰＶ誘導がんを予防または治療するための対象体は、ＰＤ－Ｌ１陽性またはＰＤ－Ｌ１陰性である、項目１に記載の製薬学的組成物。
（項目１９）
ＨＰＶは、ＨＰＶ１６であり；ＨＰＶ誘導がんを予防または治療するための対象体は、ＰＤ－Ｌ１陽性である、項目１に記載の製薬学的組成物。
（項目２０）
ＨＰＶ誘導がんは、扁平上皮細胞がんである子宮頸がんであり；ＨＰＶは、ＨＰＶ１６であり；および／またはＨＰＶ誘導がんを予防または治療するための対象体は、ＰＤ－Ｌ１陽性である、項目１に記載の製薬学的組成物。
（項目２１）
ヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）誘導がんを予防または治療するための医薬の製造における（ａ）ヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）ワクチン；および（ｂ）チェックポイント阻害剤を含む製薬学的組成物の用途。

Claims (17)

1. 子宮頸がんを予防または治療するための製薬学的組成物であって、ヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）ワクチンおよびチェックポイント阻害剤を含み、
   前記ＨＰＶワクチンは、配列番号１５のポリヌクレオチドまたは配列番号１５に対して９５％以上の配列同一性を有する変異体を含むＨＰＶワクチンを含み、
   前記変異体が、細胞免疫反応を誘導し、
   前記チェックポイント阻害剤が、抗ＰＤ－１抗体である、製薬学的組成物。
2. 前記ＨＰＶワクチンの用量は、０．５ｍｇ～５ｍｇである、請求項１に記載の製薬学的組成物。
3. 前記ＨＰＶワクチンは、筋肉内注射用である、請求項１に記載の製薬学的組成物。
4. 前記チェックポイント阻害剤は、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、セミプリマブ、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１に記載の製薬学的組成物。
5. 前記ＨＰＶワクチンは、配列番号１５のポリヌクレオチドまたは配列番号１５に対して９５％以上の配列同一性を有する変異体を含むＨＰＶワクチンを含み、
   前記変異体が、細胞免疫応答を誘導し、
   前記チェックポイント阻害剤は、ペムブロリズマブである、請求項１に記載の製薬学的組成物。
6. 前記チェックポイント阻害剤の用量は、５０ｍｇ～５００ｍｇである、請求項１に記載の製薬学的組成物。
7. 前記チェックポイント阻害剤は、静脈内注射用である、請求項１に記載の製薬学的組成物。
8. 前記ＨＰＶワクチンおよび前記チェックポイント阻害剤は、複数回投与される、請求項１に記載の製薬学的組成物。
9. 前記ＨＰＶワクチンおよび前記チェックポイント阻害剤は、同時に、別々に、または順次に投与される、請求項１に記載の製薬学的組成物。
10. 前記ＨＰＶワクチンは、１、２、４、７、１３、および１９週目に、およびさらに選択的に４６週目に投与される、請求項１に記載の製薬学的組成物。
11. 前記チェックポイント阻害剤は、３週間隔で投与される、請求項１に記載の製薬学的組成物。
12. 前記子宮頸がんは、扁平上皮細胞がんまたは腺がんである、請求項１１に記載の製薬学的組成物。
13. 前記子宮頸がんは、転移性、再発性、または進行性がんであり、前記子宮頸がんを予防または治療するための対象体は、抗がん治療を受けたことがあるか、受けている、請求項１に記載の製薬学的組成物。
14. 前記ＨＰＶは、ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１８、またはそれらの組み合わせである、請求項１に記載の製薬学的組成物。
15. 前記子宮頸がんを予防または治療するための対象体は、ＰＤ－Ｌ１陽性またはＰＤ－Ｌ１陰性である、請求項１に記載の製薬学的組成物。
16. 前記ＨＰＶは、ＨＰＶ１６であり；前記子宮頸がんを予防または治療するための対象体は、ＰＤ－Ｌ１陽性である、請求項１に記載の製薬学的組成物。
17. 前記子宮頸がんは、扁平上皮細胞がんである子宮頸がんであり；前記ＨＰＶは、ＨＰＶ１６であり；および／または前記子宮頸がんを予防または治療するための対象体は、ＰＤ－Ｌ１陽性である、請求項１に記載の製薬学的組成物。
    
    

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