JP7546574B2 - 二重リガンド薬物コンジュゲート及びその使用 - Google Patents

二重リガンド薬物コンジュゲート及びその使用 Download PDF

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Description

本願は、生物医化学の分野に関する。より詳細には、本願は、二重リガンド薬物コンジュゲート、二重リガンド薬物コンジュゲートを含む医薬組成物、二重リガンド薬物コンジュゲートを用いることによりペイロードをそれを必要としている対象に送達する方法、及び二重リガンド薬物コンジュゲートで疾患を治療する方法に関する。
一般に、罹患細胞と正常細胞とは、病理学的特徴及び生理学的特徴の双方に大きな違いがあり、そうした違いの一つは、罹患細胞がその表面に特異的な又は過剰発現した材料（抗原、化学的シグナル及び受容体など）を有するのに対し、正常細胞にはそうした材料が存在しないか、又は低発現であることにある。これを踏まえて、疾患の治療用に抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）及びポリペプチド－薬物コンジュゲート（ＰＤＣ）が開発されている。現在、幾つかのＡＤＣ及びＰＤＣベースの薬物が上市されており、又は臨床研究に入っている；しかしながら、その設計原理に起因して、ＡＤＣ及びＰＤＣベースの薬物は臨床適用が極めて限られている。
ＡＤＣの複雑さ及び比較的大きい分子量に起因して、その開発は、好適な標的の欠如、生産の難しさ及び薬物安定性の低さを含め、多くの困難に直面する。現在、ＡＤＣは主に腫瘍治療の分野で使用されている。一部の例では、癌細胞表面抗原に対するターゲティング抗体の親和性は１０－９～１０－１２（Ｋｄ、モル／リットル）に達し得る。従って、標的細胞に対して高い特異性を有するとき、ＡＤＣはまた、標的細胞と同じターゲティング受容体を含む正常細胞に対しても高い特異性を有する。更に、生体内でＡＤＣの代謝には長い時間がかかることもあり（１～３週間）、その間にもＡＤＣは正常細胞を殺傷し続けるため、毒性作用及び副作用の大幅な増加につながり得る。従って、ＡＤＣは、腫瘍細胞と正常細胞との間で細胞表面抗原の量が非常に大きく異なることを特徴とする疾患への適用性が高い。しかしながら、そのような厳しい要件を満たし得る疾患は、当該技術分野においてほとんど知られていない。
ＰＤＣは臨床又は前臨床研究で種々の疾患の治療に用いられてきたが、その場合に、化学療法薬が単純にポリペプチドに結び付けられるか、又は化学療法薬が埋め込まれたナノ粒子若しくはポリマー材料にポリペプチドが付加されるため、その分子量が大きいこと及び電荷を帯びていることに起因してほとんどのポリペプチドは細胞に侵入できないことになる。従って、現在、ほとんどのＰＤＣは細胞外治療にのみ好適であり、ＰＤＣの適用範囲及び有効性は著しく限られている。
薬物コンジュゲート化合物はまた、リガンド－薬物コンジュゲート（ＬＤＣ）であってもよく、ここでリガンドはペプチド又は小分子であり得る。しかしながら、バイオアベイラビリティ、安定性、有効性、毒性等の点で、ＬＤＣの適用には様々な問題がある。例えば、大きい分子量、親油性又は他の特性に起因して、多くのリガンドが細胞に侵入できず、その治療上の適用を制限している。加えて、リガンドは通常、従来の化学療法薬（ドキソルビシン及びパクリタキセルなど）とコンジュゲートしたとき有効性が低く、極めて有効性の高い薬物分子（ＭＭＡＥ及びＤＭ１など）とコンジュゲートすると、リガンドは高い毒性を生じることもあり、そのため腫瘍の治療に治療上有効な量に達する前に動物を被毒させ、更には殺傷することさえある。
従って、当該技術分野では、罹患細胞の表面上に広く存在する高発現の受容体に作用し、ターゲティング範囲及び治療域を広げ、薬物有効性を増強し、及び薬物副作用を回避することができる改良されたＬＤＣを入手することもまた差し迫って必要とされている。
一態様において、本願は、ペイロードと２つのターゲティング分子とを含むコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩を開示し、ここで２つのターゲティング分子は、それぞれ、相乗作用分子部分及び前立腺特異的膜抗原リガンド部分である。
別の態様において、本願は、ペイロードと２つのターゲティング分子とを含むコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩を開示し、ここで２つのターゲティング分子は、それぞれ、相乗作用分子部分及び式（Ｉ）によって表されるリガンド部分である：
別の態様において、本願は、ペイロードと２つのターゲティング分子とを含むコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩を開示し、ここで２つのターゲティング分子は、それぞれ、相乗作用分子部分及びＰ１０であり、ペイロードはカンプトテシン又はその任意の誘導体である。
一部の実施形態において、コンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩に含まれる前立腺特異的膜抗原リガンドは以下の構造を有する：
一部の実施形態において、コンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩に含まれる前立腺特異的膜抗原リガンドは以下の構造を有する：
一部の実施形態において、コンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩に含まれる前立腺特異的膜抗原リガンドは以下の構造を有する：
一部の実施形態において、コンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩に含まれる前立腺特異的膜抗原リガンドは以下の構造を有する：
一部の実施形態において、コンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩に含まれる２つのターゲティング分子は異なる。
一部の実施形態において、コンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩に含まれる相乗作用分子は細胞相互作用分子である。
一部の実施形態において、コンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩に含まれる２つのターゲティング分子は、異なる細胞分子と相互作用する細胞相互作用分子である。
一部の実施形態において、コンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩に含まれる相乗作用分子は、エンドサイトーシスの媒介能を有するエンドサイトーシス分子である。
一部の実施形態において、コンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩に含まれる相乗作用分子は、ＦＯＬＲ１、ＴＲＰＶ６、ＦＯＬＨ１（ＰＭＳＡ）、ＧＮＲＨＲ、Ｈｅｒ２、Ｔｒｏｐ２、Ｈｅｒ３、ＮＥＣＴＩＮ４、ＬＲＰ１、ＧＬＵＴ１、ＥＧＦＲ１、ＡＸＬ、ＣＡ９、ＣＤ４４、クローディン１８．２、ＡＰＮ、ＤＬＬ３、ＣＥＡＣＡＭ５、ＦＺＤ１０、ＴＦＲＣ、ＭＥＴ、ＩＧＦＲ１、ＳＳＴＲ２、ＣＣＫＢＲ、ＬＦＡ１、ＩＣＡＭ、ＧＰＲ８７、ＧＭ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦＲ、ＴＩＭ３、ＴＬＲファミリー、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＧＩＴＲＬ、ＧＩＴＲ、４－ＢＢＬ、４－１ＢＢ、ＣＤ７０、ＣＤ２７、ＩＣＯＳＬ、ＩＣＯＳ、ＨＨＬＡ２、ＣＤ２８、ＣＤ８６／８０、ＣＤ２８、ＭＨＣＩＩ抗原、ＴＣＲ、ＣＴＬＡ－４、ＣＤ１５５、ＣＤ１２２、ＣＤ１１３、ＩＧＩＴ、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ１、ガレクチン－９、ＴＩＭ－３、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７－Ｈ４、Ｂ７－Ｈ３、ホスファチジルセリン、ＨＨＬＡ２、ＬＡＧ３、ガレクチン－３、ＬＩＬＲＢ４、シグレック１５、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＳＬＡＭＦ７、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２、ＫＩＲ２ＤＬ３、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ４、ＮｅｕＧｃＧＭ３及びＣＸＣＲ４からなる群から選択される分子に結合する。
一部の実施形態において、コンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩は前立腺特異的膜抗原リガンド部分と相乗作用分子部分とを含み、ここで相乗作用分子部分は、ＦＯＬＲ１、ＴＲＰＶ６、ＦＯＬＨ１（ＰＭＳＡ）、ＳＳＴＲ２及びＧＮＲＨＲからなる群から選択される分子に結合する。
一部の実施形態において、コンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、式（Ｉ）によって表されるリガンド部分と相乗作用分子部分とを含み、ここで相乗作用分子部分は、ＦＯＬＲ１、ＴＲＰＶ６、ＳＳＴＲ２及びＧＮＲＨＲからなる群から選択される分子に結合する。
更に一部の実施形態において、コンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩はＰ１０と相乗作用分子部分とを含み、ここで相乗作用分子は、ＦＯＬＲ１、ＴＲＰＶ６、ＦＯＬＨ１（ＰＭＳＡ）及びＧＮＲＨＲからなる群から選択される分子に結合する。
一部の実施形態において、コンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩に含まれる相乗作用分子は葉酸塩又はその類似体である。一部の実施形態において、葉酸塩の類似体は、５－メチルテトラヒドロ葉酸、５－ホルミルテトラヒドロ葉酸、メトトレキサート、及び５，１０－メチレンテトラヒドロ葉酸からなる群から選択される。
一部の実施形態において、コンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、１、２、３、４個又はそれ以上のペイロードを含む。一部の実施形態において、ペイロードは、小分子化合物、ヌクレオチド、ペプチド及びタンパク質からなる群から選択される。一部の実施形態において、ペイロードは小分子化合物である。一部の実施形態において、小分子化合物は、カンプトテシン及びその任意の誘導体、アウリスタチン及びその任意の誘導体、メイタンシン及びその任意の誘導体、放射性核種錯体、シクロオキシゲナーゼ－２阻害薬、パクリタキセル及びその任意の誘導体、エポチロン及びその任意の誘導体、ブレオマイシン及びその任意の誘導体、ダクチノマイシン及びその任意の誘導体、プリカマイシン及びその任意の誘導体、及びマイトマイシンＣからなる群から選択される。一部の実施形態において、小分子化合物は、カンプトテシン又はその任意の誘導体、アウリスタチン又はその任意の誘導体、メイタンシン又はその任意の誘導体、放射性核種錯体又はシクロオキシゲナーゼ－２阻害薬である。
一部の実施形態において、本願のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩に含まれるペイロードは少なくとも１つのターゲティング分子にリンカーを介して連結される。
一部の実施形態において、本願のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩に含まれるリンカーは、ペプチドリンカー、ジスルフィドリンカー、ｐＨ依存性リンカー又は上述のリンカーの組み合わせである。
一部の実施形態において、ペプチドリンカーは、ある種の生理環境下でプロテアーゼ切断又は還元によって切断可能である。一部の実施形態において、ペプチドリンカーは、システイン、リジン、リジン－リジン、バリン－シトルリン、フェニルアラニン－リジン、バリン－リジン、システイン－リジン、システイン－グルタミン酸、アスパラギン酸－アスパラギン酸、及びアスパラギン酸－アスパラギン酸－リジンからなる群から選択され、任意選択で、上述のアミノ酸中のカルボン酸はアミド化されている。
一部の実施形態において、ジスルフィドリンカーは、ＤＭＤＳ、ＭＤＳ、ＤＳＤＭ、及びＮＤＭＤＳからなる群から選択される。
一部の実施形態において、ｐＨ依存性リンカーはシスアコニット酸無水物である。
一部の実施形態において、本願のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩のリンカーは、以下の構造：



を有し、
又はリンカーは上述の構造の組み合わせ及びペプチドリンカーである。
一部の実施形態において、本願のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩に含まれる２つのターゲティング分子は互いにスペーサーを介して連結される。一部の実施形態において、本願に記載されるスペーサーは、配列番号１～１４、Ａｒｇ－Ａｒｇ、Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ、Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｒｇ、Ｐｒｏ－Ａｒｇ及びＰｒｏ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙからなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態において、本願のコンジュゲート化合物は、以下の構造式を有するＣＢ－２０Ｂである：
一部の実施形態において、本願のコンジュゲート化合物は、以下の構造式を有するＣＢ－２０ＢＫである：
一部の実施形態において、本願のコンジュゲート化合物は、以下の構造式を有するＣＢ－６０Ｓである：
一部の実施形態において、本願のコンジュゲート化合物は、以下の構造式を有するＣＢ－６０ＳＫである：
一部の実施形態において、本願のコンジュゲート化合物は、以下の構造式を有するＣＢ－２０Ｃである：
一部の実施形態において、本願のコンジュゲート化合物は、以下の構造式を有するＣＢ－１０２０である：
一部の実施形態において、本願のコンジュゲート化合物は、以下の構造式を有するＣＢ－１３２０である：
一部の実施形態において、本願のコンジュゲート化合物は、以下の構造式を有するＣＢ－１８２０である：
一部の実施形態において、本願のコンジュゲート化合物は、以下の構造式を有するＣＲ１９４２８である：
一部の実施形態において、本願のコンジュゲート化合物は、以下の構造式を有する２０Ｒ－ＳＭ０９である：
一部の実施形態において、本願のコンジュゲート化合物は、以下の構造式を有するＣＢ－２０Ｒである：

（式中、Ｍは放射性核種である）。
一部の実施形態において、本願のコンジュゲート化合物は、以下の構造式を有するＣＢ－１８Ｇである：
一部の実施形態において、本願のコンジュゲート化合物は、以下の構造式を有するＣＲ１９４２６である：
一部の実施形態において、本願のコンジュゲート化合物は、以下の構造式を有するＣＢ－１０Ｓである：
一部の実施形態において、本願のコンジュゲート化合物は、以下の構造式を有するＣＲ１９４２５である：
一部の実施形態において、本願のコンジュゲート化合物は、以下の構造式を有するＣＢ－５０Ｓである：
別の態様において、本願は、本願のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩と、薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物を開示する。
一部の実施形態において、本組成物は、静脈内に、皮下に、経口的に、筋肉内に又は脳室内に投与される。
別の態様において、本願は、ペイロードをそれを必要としている対象に送達する方法であって、治療有効量の本願のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩、又は本願の医薬組成物を対象に投与することを含む方法を開示する。
別の態様において、本願は、対象の疾患を治療する方法であって、治療有効量の本願のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩、又は本願の医薬組成物を対象に投与することを含む方法を開示する。
一部の実施形態において、本願の対象の疾患を治療する方法は、コンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩、又は医薬組成物と組み合わせて１つ以上の療法剤を投与することを更に含む。
更に別の態様において、本願は、対象の疾患を治療するための薬物の調製における本願のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩、又は本願の医薬組成物の使用を開示する。
更に別の態様において、本願は、対象の疾患を治療するための本願のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩、又は本願の医薬組成物を開示する。
一部の実施形態において、疾患は、癌、免疫疾患、心血管疾患、代謝疾患、及び神経学的疾患からなる群から選択される。
一部の実施形態において、癌は、前立腺癌、乳癌、肺癌、腎癌、白血病、卵巣癌、胃癌、子宮癌、子宮内膜癌、肝癌、結腸癌、甲状腺癌、膵癌、結腸直腸癌、食道癌、皮膚癌、リンパ腫、及び多発性骨髄腫からなる群から選択される。
一部の実施形態において、免疫疾患は自己免疫疾患である。一部の実施形態において、自己免疫疾患は、結合組織病、全身性硬化症、関節リウマチ、及び全身性エリテマトーデスからなる群から選択される。
一部の実施形態において、心血管疾患は、アンギナ、心筋梗塞、脳卒中、心臓発作、高血圧性心疾患、リウマチ性心疾患、心筋症、不整脈、及び先天性心疾患からなる群から選択される。
一部の実施形態において、代謝疾患は、糖尿病、痛風、肥満、低血糖症、高血糖症、及び脂質異常症からなる群から選択される。
一部の実施形態において、神経学的疾患は、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、頭部傷害、多発性硬化症、眩暈、昏睡、及び癲癇からなる群から選択される。
コンジュゲート化合物ＣＢ－２０Ｂの化学構造式を示す。 コンジュゲート化合物ＣＢ－２０ＢＫの化学構造式を示す。 コンジュゲート化合物ＣＢ－６０Ｓの化学構造式を示す。 コンジュゲート化合物ＣＢ－６０ＳＫの化学構造式を示す。 コンジュゲート化合物ＣＢ－２０Ｃの化学構造式を示す。 コンジュゲート化合物ＣＢ－１０２０の化学構造式を示す。 コンジュゲート化合物ＣＢ－１３２０の化学構造式を示す。 コンジュゲート化合物ＣＢ－１８２０の化学構造式を示す。 コンジュゲート化合物ＣＲ１９４２８の化学構造式を示す。 コンジュゲート化合物２０Ｒ－ＳＭ０９及びＣＢ－２０Ｒの化学構造式を示す。 コンジュゲート化合物ＣＢ－１８Ｇの化学構造式を示す。 コンジュゲート化合物ＣＲ１９４２６の化学構造式を示す。 コンジュゲート化合物ＣＢ－１０Ｓの化学構造式を示す。 コンジュゲート化合物ＣＲ１９４２５の化学構造式を示す。 コンジュゲート化合物ＣＢ－５０Ｓの化学構造式を示す。 図２Ａは、時間の経過に伴う異なる細胞別（上から下に：ＬＮＣａＰ細胞、ＳＫＯＶ３細胞、ＤＵ１４５細胞及びＮＣＩ－Ｈ４６０細胞）のＣｙ５－ｐｅｐ－２０ＢＫ結合及びエンドサイトーシスの曲線を示す。図２Ｂは、時間の経過に伴う異なる細胞別（上から下に：ＬＮＣａＰ細胞、ＳＫＯＶ３細胞、ＤＵ１４５細胞及びＮＣＩ－Ｈ４６０細胞）のＣｙ５－ｐｅｐ－２０ＡＫ結合及びエンドサイトーシスの曲線を示す。 図３は、時間の経過に伴う異なる細胞別のＣｙ５－ＦＡ結合及びエンドサイトーシスの蛍光像を示し、ここで丸で囲んで示した蛍光は細胞核の蛍光であり、斑点状のパターンで分布する蛍光はＣｙ５－ＦＡの蛍光である。 図４Ａは、示されるとおりの腫瘍細胞の増幅に対するコンジュゲート化合物ＣＢ－２０ＢＫの阻害活性を示す。 図４Ｂは、示されるとおりの腫瘍細胞の増幅に対するコンジュゲート化合物ＣＢ－２０Ｂの阻害活性を示す。 図４Ｃは、示されるとおりの腫瘍細胞の増幅に対するコンジュゲート化合物ＣＢ－１０Ｓの阻害活性を示す。 図４Ｄは、示されるとおりの腫瘍細胞の増幅に対するコンジュゲート化合物ＣＢ－６０Ｓの阻害活性を示す。 図４Ｅは、示されるとおりの腫瘍細胞の増幅に対するコンジュゲート化合物ＣＢ－６０ＳＫの阻害活性を示す。 図４Ｆは、示されるとおりの腫瘍細胞の増幅に対するコンジュゲート化合物ＣＢ－１８Ｇの阻害活性を示す。 図４Ｇは、示されるとおりの腫瘍細胞の増幅に対するコンジュゲート化合物ＣＢ－５０Ｓの阻害活性を示す。 マウスにおけるコンジュゲート化合物ＣＢ－２０ＢＫの腫瘍抑制効果を示す。 マウスにおけるコンジュゲート化合物ＣＢ－２０ＢＫの腫瘍抑制効果を示す。 マウスにおけるコンジュゲート化合物ＣＢ－２０ＢＫの腫瘍抑制効果を示す。 マウスにおけるコンジュゲート化合物ＣＢ－２０Ｂの腫瘍抑制効果を示す。 マウスにおけるコンジュゲート化合物ＣＢ－２０Ｂの腫瘍抑制効果を示す。 マウスにおけるコンジュゲート化合物ＣＢ－１８Ｇの腫瘍抑制効果を示す。 マウスにおけるコンジュゲート化合物ＣＢ－１８Ｇの腫瘍抑制効果を示す。 マウスにおけるコンジュゲート化合物ＣＢ－１８Ｇの腫瘍抑制効果を示す。 注射用ＣＢＰ－１０１８がＬＵ２５０５肺癌モデル及びＬＵ１２０６肺癌モデルの腫瘍容積に及ぼす効果を示す。
本願には様々な態様及び実施形態が開示されることになるが、当業者が本願の主題の趣旨及び範囲から逸脱することなくそれらの態様及び実施形態に様々な等価な変更及び改良を加え得ることは明らかである。本願に開示される様々な態様及び実施形態はあくまでも例示を目的とし、限定することを意図するものではなく、真の範囲は添付の特許請求の範囲によって示される。本願に引用される全ての刊行物、特許又は特許出願は、全体として参照により援用される。特に定義されない限り、本明細書で使用されるとおりの科学技術用語は、本願が属する技術分野の当業者が一般に理解するのと同じ意味を有する。
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用されるとき、単数形「ある（ａ）」、「ある（ａｎ）」、及び「その（ｔｈｅ）」には、文脈上特に明確に指示されない限り複数の指示対象が含まれる。用語「ある（ａ）」（又は「ある（ａｎ）」）、「１つ以上」及び「少なくとも１つ」は、本明細書では同義的に用いられ得る。また、用語「～を含む／を含んでいる」、「～を包含する／包含している」、及び「～を有する／を有している」は同義的に用いられ得ることも注記される。
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用されるとき、用語「類似体」には構造的類似体及び機能的類似体が含まれる。構造的類似体は、１つ以上の異なる原子又は１つ以上の異なる官能基を含み得る類似の化学構造を有する化合物のクラスを指す。機能的類似体は、同じ又は類似の化学的、生物学的又は薬理学的効果を有する化合物のクラスを指す。例えば、葉酸塩の類似体としては、５－メチルテトラヒドロ葉酸、５－ホルミルテトラヒドロ葉酸、メトトレキサート、及び５，１０－メチレンテトラヒドロ葉酸が挙げられる。
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用されるとき、用語「誘導体」は、１つ以上の原子又は原子団が他の原子又は原子団に置換されている親化合物分子から誘導された比較的複雑な化合物を指す。例えば、カンプトテシン誘導体としては、イリノテカン、ＳＮ－３８、Ｄｘｄ、トポテカン、ＧＩ－１４７２１１Ｃ、トポテカン、９－アミノカンプトテシン、７－ヒドロキシメチルカンプトテシン、７－アミノメチルカンプトテシン、１０－ヒドロキシカンプトテシン、（２０Ｓ）－カンプトテシン、９－ニトロカンプトテシン、ギマテカン、カレニテシン、シラテカン、ルルトテカン、エキサテカン、ジフロモテカン、ベロテカン、ルルトテカン及びＳ３９６２５が挙げられる。
一態様において、本願は、ペイロードと２つのターゲティング分子とを含むコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩を開示し、ここで２つのターゲティング分子は、それぞれ、相乗作用分子部分及び前立腺特異的膜抗原リガンド部分である。
別の態様において、本願は、ペイロードと２つのターゲティング分子とを含むコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩を開示し、ここで２つのターゲティング分子は、それぞれ、相乗作用分子部分及び式（Ｉ）によって表されるリガンド部分である：
別の態様において、本願は、ペイロードと２つのターゲティング分子とを含むコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩を開示し、ここで２つのターゲティング分子は、それぞれ、相乗作用分子部分及びＰ１０であり、ペイロードはカンプトテシン又はその任意の誘導体である。
用語「ペイロード」は、本明細書で使用されるとき、標的細胞又は組織に送達されることになる分子又は材料を指す。限定なしに、ペイロードは、対象の疾患の診断、治療、又は予防における使用が意図される任意の分子又は材料であってよい。一部の実施形態において、ペイロードは約５ｋＤａ以下の分子量を有する。一部の実施形態において、ペイロードは約１．５ｋＤａ以下の分子量を有する。一部の実施形態において、ペイロードは、適切な医薬品承認及び登録機関（ＦＤＡ、ＥＭＥＡ、又はＮＭＰＡなど）によって使用が安全且つ有効と見なされている薬物又は診断試薬である。
一部の実施形態において、本願のペイロードは、小分子化合物、ヌクレオチド（ＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、ＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド及びアプタマーなど）、ペプチド、又はタンパク質（例えば、酵素）である。一部の実施形態において、ペイロードは小分子化合物である。
一部の実施形態において、本願のペイロードとしては、抗癌薬、放射性物質、ビタミン、抗ＡＩＤＳ薬、抗生物質、免疫抑制薬、抗ウイルス薬、酵素阻害薬、神経毒、オピオイド、細胞－細胞外マトリックス相互作用調節薬、血管拡張薬、降圧薬、催眠薬、抗ヒスタミン薬、抗痙攣薬、筋弛緩薬、抗パーキンソン病物質、抗痙攣薬及び筋収縮抑制薬、駆虫薬及び／又は抗原虫薬、鎮痛薬、解熱薬、ステロイド系又は非ステロイド系抗炎症薬、抗血管新生因子、抗分泌因子、抗凝固薬及び／又は抗血栓剤、局所麻酔薬、プロスタグランジン、抗鬱薬、抗精神病薬、鎮吐薬、又は造影剤が挙げられるが、これらに限定されない。
一部の実施形態において、本願のペイロードは、本願のコンジュゲート化合物とコンジュゲートされる前は遊離アミノ基又はカルボキシル基を有し、ペイロードは、上述のアミノ基又はカルボキシル基とコンジュゲート化合物の対応する部分（例えば、リンカー）との間のアシル化反応を通じてコンジュゲート化合物とコンジュゲートされる。一部の実施形態において、上述の遊離アミノ基又はカルボキシル基が（例えば、本願のコンジュゲート化合物とのコンジュゲーションにより）修飾されると、ペイロードの活性が大幅に（例えば、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％又は９９％）低下し得る。
「小分子化合物」は、本明細書で使用されるとき、約２ｋＤａ以下の分子量を有する化合物を指す。一部の実施形態において、小分子化合物は約１．５ｋＤａ以下の分子量を有する。一部の好ましい実施形態において、小分子化合物は、約１ｋＤａ、８００Ｄａ、７００Ｄａ、６００Ｄａ、又は５００Ｄａ以下の分子量を有する。一部の実施形態において、本願の小分子化合物は、カンプトテシン及びその任意の誘導体（例えば、ＳＮ３８又はＤｘｄ）、アウリスタチン及びその任意の誘導体（例えば、ＭＭＡＥ及びＭＭＡＦ）、メイタンシン及びその任意の誘導体、シクロオキシゲナーゼ－２阻害薬（例えば、セレコキシブ）、放射性核種錯体、パクリタキセル及びその任意の誘導体、エポチロン及びその任意の誘導体、ブレオマイシン及びその任意の誘導体、ダクチノマイシン及びその任意の誘導体、プリカマイシン及びその任意の誘導体、及びマイトマイシンＣからなる群から選択される。一部の実施形態において、小分子化合物は、カンプトテシン又はその任意の誘導体、アウリスタチン又はその任意の誘導体、放射性核種錯体又はシクロオキシゲナーゼ－２阻害薬である。一部の実施形態において、本願に記載される小分子化合物は、癌を軽減又は治療するための薬物である。一部の実施形態において、本願に記載される小分子化合物は、自己免疫疾患を軽減又は治療するための薬物である。
用語「カンプトテシン」は、本明細書で使用されるとき、主にカンレンボク（Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃａ ａｃｕｍｉｎａｔａ）（ヌマミズキ科（Ｎｙｓｓａｃｅａｅ））に由来する、強力な抗腫瘍活性を示す細胞毒性アルカロイドを指す。本願のカンプトテシン及びその誘導体には、既に存在する又は後に作り出されることになるカンプトテシン及びその誘導体が含まれる。本願のカンプトテシン及びその誘導体としては、カンプトテシン、イリノテカン、ＳＮ－３８、Ｄｘｄ、トポテカン、ＧＩ－１４７２１１Ｃ、トポテカン、９－アミノカンプトテシン、７－ヒドロキシメチルカンプトテシン、７－アミノメチルカンプトテシン、１０－ヒドロキシカンプトテシン、（２０Ｓ）－カンプトテシン、９－ニトロカンプトテシン、ギマテカン、カレニテシン、シラテカン、ルルトテカン、エキサテカン、ジフロモテカン、ベロテカン、ルルトテカン及びＳ３９６２５が挙げられるが、これらに限定されない。
用語「アウリスタチン及びその任意の誘導体／アウリスタチン又はその任意の誘導体」は、本明細書で使用されるとき、天然の抗腫瘍産物であるアプリシアトキシン１０、及びその一連の誘導体を指し、ここでかかる化合物は微視的自己集合を妨げて分裂期にある細胞を停止させ、それが細胞にとって強力な致死性を持つ。本願のアウリスタチン及びその任意の誘導体には、既に存在する又は後に作り出されることになるアウリスタチン及びその任意の誘導体が含まれる。本願のアウリスタチン及びその誘導体としては、アウリスタチン、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、モノメチルアウリスタチンＤ（ＭＭＡＤ）、ＡＦＰ及びＡＦＨＰＡが挙げられるが、これらに限定されない。
用語「シクロオキシゲナーゼ－２阻害薬」は、本明細書で使用されるとき、特異的シクロオキシゲナーゼ－２阻害薬のクラスである。シクロオキシゲナーゼ－２は種々の機構を通じて悪性腫瘍の発育及び浸潤に関与する。シクロオキシゲナーゼ－２阻害薬は、腫瘍細胞の遊走及び接着並びに血管内浸潤を阻害し、それによって悪性腫瘍の発生及び発育を阻害することができる。本願のシクロオキシゲナーゼ－２阻害薬には、既に存在する又は後に作り出されることになるシクロオキシゲナーゼ－２阻害薬が含まれる。シクロオキシゲナーゼ－２阻害薬としては、セレコキシブ、ロフェコキシブ、パレコキシブ、バルデコキシブ及びエトリコキシブが挙げられるが、これらに限定されない。
用語「放射性核種錯体」は、本明細書で使用されるとき、放射性核種を含有する特別なクラスの錯体を指し、ここで錯体中のキレート剤が放射性核種とキレート化して、標的物質に一層安定に結合する連結部を提供することができる。用語「放射性核種」は、本明細書で使用されるとき、放射線（α線、β線、又はγ線など）を自発的に放出することのできる元素を指す。本願の放射性核種には、既に存在する又は後に作り出されることになるあらゆる治療用及び診断用放射性核種が含まれる。本願の放射性核種としては、６７Ｃｕ、６４Ｃｕ、９０Ｙ、１０９Ｐｄ、１１１Ａｇ、１４９Ｐｍ、１５３Ｓｍ、１６５Ｈｏ、１６６Ｈｏ、１７７Ｌｕ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、９９ｍＴｃ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、９０Ｙ、１７７Ｌｕ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１９７Ａｕ、１９８Ａｕ、１９９Ａｕ、１０５Ｒｈ、１６１Ｔｂ、１４９Ｐｍ、４４Ｓｃ、４７Ｓｃ、７０Ａｓ、７１Ａｓ、７２Ａｓ、７３Ａｓ、７４Ａｓ、７６Ａｓ、７７Ａｓ、２１２Ｐｂ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、２２５Ａｃ、１１７ｍＳｎ、６７Ｇａ、２０１Ｔｌ、１２３Ｉ、１３１Ｉ、１６０Ｇｄ、１４８Ｎｄ、８９Ｓｒ及び２１１Ａｔが挙げられるが、これらに限定されない。一部の実施形態において、キレート剤は大環状キレート剤である。本願のキレート剤としては、Ｈ２ｄｅｄｐａ、Ｈ４ｏｃｔａｐａ、Ｈ２ａｚａｐａ、ＤＴＰＡ、ＣＨＸ－Ａ”－ＤＴＰＡ、ＤＴＰＡ－ビス無水物、マレイミド－ＤＴＰＡ、ＤＴＰＡ（ｔＢｕ）４、ＤｉａｍＳａｒ ＣＢ－ＴＥ２Ａ、サイクラム、ＤＯ２Ａ、ＤＯＴＡ、ＯＴＡ－ＧＡ（ｔＢｕ）４、マレイミド－ＤＯＴＡ－ＧＡ、ｐ－ＮＣＳ－Ｂｚ－ＤＯＴＡ－ＧＡ、ＮＨ２－ＤＯＴＡ－ＧＡ、ＤＯＴＡ－ＧＡ無水物、ＤＯＴＡ－トリス（ｔＢｕ）エステル、プロパルギル－ＤＯＴＡ－トリス（ｔＢｕ）エステル、ＤＯ３ＡＭ－酢酸、ＤＯ３ＡＭ－Ｎ－（２－アミノエチル）エタンアミド、ＤＯ３ＡｔＢｕ－Ｎ－（２－アミノエチル）エタンアミド、ＤＯＴＡ－ジ（ｔＢｕ）エステル、ＤＯＴＡ－トリス（ｔＢｕ）エステルＮＨＳエステル、ＤＯＴＡ－ＮＨＳエステル、プロパルギル－ＤＯＴＡ－トリス（ｔＢｕ）エステル、ＤＯＴＡＤＯＴＡ－ＧＡ無水物、ＤＯＴＡ－ＧＡ（ｔＢｕ）４、ｐ－ＮＣＳ－Ｂｚ－ＤＯＴＡ－ＧＡ、ＮＨ２－ＤＯＴＡ－ＧＡ、マレイミド－ＤＯＴＡ－ＧＡ、ＡＧｕＩＸ、Ｇａｄｏ－Ｈ、サイクレン、ＤＯ２ＡｔＢｕ、ＤＯ３ＡｔＢｕ、ＤＯ３ＡＥｔ、ＤＯ３ＡＭ、ＤＯＴＡＥｔ、ＤＯＴＰｒＥｔ、ｃｉｓ－グリオキサール－サイクレン、モノ－Ｎ－ベンジル－サイクレン、ｔｒａｎｓ－Ｎ－ジベンジル－サイクレン、トリＢＯＣ－サイクレン、モノ－Ｎ－ベンジル－ＴＡＣＮ、ジＢＯＣ－ＴＡＣＮ、架橋サイクラム（ＣＢ－サイクラム）、（１３）ａｎｅＮ４、ＴＡＣＮ、ＴＡＣＮ・３ＨＣｌ、ＴＡＣＤ、モノ－Ｎ－ベンジル－ＴＡＣＤ、ジＢＯＣ－ＴＡＣＤ、１，７－ジオキサ－４，１０－ジアザシクロドデカン、Ｃ－メチル－エステル－サイクラム、Ｃ－カルボン酸－サイクラム、ｔｒａｎｓ－Ｎ－ジメチル－サイクラム、ＴＥＴＲＡＭ、ＴＥＴＡＥｔ、ＴＥＴＡＭＥｔ２、ＴＥＴＡＭＭｅ２、ＴＥＴＡＭ、ＣＰＴＡ、ＣＢ－サイクラム誘導体、ＣＢ－ＴＥ２Ａ、メチルアミノ－（１３）ａｎｅＮ４、ビス－（１３）ａｎｅＮ４、オキソ－（１３）ａｎｅＮ４、モノ－Ｎ－ベンジル－（１３）ａｎｅＮ４、トリＢＯＣ－（１３）ａｎｅＮ４、ＴＲＩＴＲＡＭ、ＴＲＩ３ＡＥｔ、ＴＲＩ３ＡｔＢｕ、ＴＲＩＴＡＭ、ＴＲＩＴＡ、モノ－Ｎ－ベンジル－サイクラム、ホルムアルデヒド－サイクラム、ｃｉｓ－グリオキサール－サイクラム、ジオキソサイクラム、オキソサイクラム、ｔｒａｎｓ－Ｎ－ジベンジル－サイクラム、トリＢＯＣ－サイクラム、ＤＯＴＰ、ＤＯＴＭＡ、ＴＥＴＡ、ＤＯＴＡＭ、ＤｉＡｍＳａｒ、ＣＢ－サイクラム、ＣＢ－ＴＥ２Ａ、ＮＯＴＡ、ＮＯＴＡＭ、ＮＨ２－ＮＯＤＡ－ＧＡ、ヨード－ＮＯＤＡ－ＧＡ、ＮＣＳ－ＭＰ－ＮＯＤＡ、ＮＨ２－ＭＰＡＡ－ＮＯＤＡ、ＮＯＤＡ－ＧＡ（ｔＢｕ）３、ＮＯＤＡ－ＧＡ－ＮＨＳエステル、マレイミド－ＮＯＤＡ－ＧＡ、ＮＯＴＡ－ＮＨＳエステル、マレイミド－ＮＯＴＡ、プロパルギル－ＮＯＴＡ（ｔＢｕ）２、ｐ－ＮＣＳ－ベンジル－ＮＯＤＡ－ＧＡ、ＮＯＴＡ（ｔＢｕ）２、ＮＣＳ－ＭＰ－ＮＯＤＡ、ＮＨ２－ＭＰＡＡ－ＮＯＤＡ、ＮＨ２－ＮＯＤＡ－ＧＡ、ヨード－ＮＯＤＡ－ＧＡ及びＴＡＣＮが挙げられるが、これらに限定されない。
一部の実施形態において、本願のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩は１つのペイロードを含む。一部の実施形態において、本願のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩は２つ以上のペイロードを含む。例えば、本願のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０又はそれ以上のペイロードを含む。複数のペイロードを含有するコンジュゲート化合物において、ペイロードの各々は互いに同一であっても、又は異なってもよい。一部の実施形態において、ペイロードのうちの少なくとも２つが互いに異なる。
用語「ターゲティング分子」は、本明細書で使用されるとき、本願のコンジュゲート化合物を標的部位、標的組織、標的器官、標的細胞、又は標的細胞内領域へと標的化させる能力を有する任意の分子又は部分を指す。一部の実施形態において、ターゲティング分子は、本願のコンジュゲート化合物が、非標的部位、非標的組織、非標的器官、非標的細胞又は非標的細胞内領域と比較して標的部位、標的組織、標的器官、標的細胞又は標的細胞内領域により多く分布する、例えば、少なくとも１０％多く、２０％多く、５０％多く、８０％多く、１００％多く、１５０％多く、２００％多く、３００％多く、４００％多く、５００％多く等分布することを可能にする。一部の実施形態において、ターゲティング分子は、ターゲティング分子を含有するコンジュゲート化合物が、ターゲティング分子を含有しないコンジュゲート化合物と比較して、標的部位、標的組織、標的器官、標的細胞又は標的細胞内領域により多く、例えば、少なくとも１０％多く、２０％多く、５０％多く分布する、８０％多く、１００％多く、１５０％多く、２００％多く、３００％多く、４００％多く、５００％多く等分布することを可能にする。一部の実施形態において、ターゲティング分子は、かかるターゲティング分子を含有するコンジュゲート化合物が標的分子に特異的に結合するように惹起又は促進し、標的細胞によるコンジュゲート化合物のエンドサイトーシスを惹起又は促進し、及びコンジュゲート化合物が標的細胞周辺で高濃度化する及び／又は標的細胞に侵入するように惹起又は促進することができる。
一部の実施形態において、本願のコンジュゲート化合物は少なくとも２つのターゲティング分子を含む。一部の実施形態において、本願のコンジュゲート化合物に含まれる２つ以上のターゲティング分子は同一であるか、又は異なる。一部の実施形態において、本願のコンジュゲート化合物に含まれる２つ以上のターゲティング分子のうちの少なくとも２つのターゲティング分子は異なる。一部の実施形態において、本願のコンジュゲート化合物に含まれる２つ以上のターゲティング分子は、全てが互いに異なる。一部の実施形態において、本願のコンジュゲート化合物に含まれる２つ以上のターゲティング分子のうちの少なくとも２つのターゲティング分子は、異なる細胞表面タンパク質又はマーカーに特異的に結合することができる。一部の実施形態において、本願のコンジュゲート化合物に含まれる２つ以上のターゲティング分子は、異なる細胞表面タンパク質又はマーカーに特異的に結合することができる。
一部の実施形態において、本願のコンジュゲート化合物は少なくとも２つのターゲティング分子を含み、そのうちの少なくとも１つは相乗作用分子である。
用語「相乗作用分子」は、本明細書で使用されるとき、本願のコンジュゲート化合物に含まれる他のターゲティング分子と相乗的に働いて、より良好にコンジュゲート化合物が標的分子に特異的に結合するように惹起又は促進する、標的細胞によるコンジュゲート化合物のエンドサイトーシスを惹起又は促進する、コンジュゲート化合物が標的細胞周辺で高濃度化する及び／又は標的細胞に侵入するように惹起又は促進する、及び／又はコンジュゲート化合物の標的細胞への特異的結合及び維持を別様に生じさせる能力を有する任意の分子又は部分を指す。一部の実施形態において、相乗作用分子は、本願のコンジュゲート化合物が非標的部位、非標的組織、非標的器官、非標的細胞又は非標的細胞内領域と比較して標的部位、標的組織、標的器官、標的細胞又は標的細胞内領域により多く分布する、例えば、少なくとも１０％多く、２０％多く、５０％多く、８０％多く、１００％多く、１５０％多く、２００％多く、３００％多く、４００％多く、５００％多く等分布することを可能にする。一部の実施形態において、相乗作用分子は、相乗作用分子を含有するコンジュゲート化合物が、相乗作用分子を含有しないコンジュゲート化合物と比較して、標的部位、標的組織、標的器官、標的細胞又は標的細胞内領域により多く、例えば、少なくとも１０％多く、２０％多く、５０％多く、８０％多く、１００％多く、１５０％多く、２００％多く、３００％多く、４００％多く、５００％多く等分布することを可能にする。一部の実施形態において、相乗作用分子は、相乗作用分子を含有するコンジュゲート化合物が、相乗作用分子を含有しないコンジュゲート化合物と比較して、標的細胞に対してより高い活性、例えば、少なくとも１０％高い、２０％高い、５０％高い、８０％高い、１００％高い、１５０％高い、２００％高い、３００％高い、４００％高い、５００％高い等の活性を有することを可能にする。
一部の実施形態において、本願の相乗作用分子は細胞相互作用分子である。
用語「細胞相互作用分子」は、本明細書で使用されるとき、標的細胞の細胞表面材料と相互作用して、かかる細胞相互作用分子を含有するコンジュゲート化合物が細胞に特異的に結合するように惹起又は促進する、標的細胞によるコンジュゲート化合物のエンドサイトーシスを惹起又は促進する、及び／又はコンジュゲート化合物が標的細胞周辺で高濃度化する及び／又は標的細胞に侵入するように惹起又は促進する能力を有する分子を指す。
細胞相互作用分子は化学的小分子又は大型生体分子であってもよい。一部の実施形態において、細胞相互作用分子は小分子化合物又はポリペプチドである。一部の実施形態において、細胞相互作用分子は、２～５０、２～４０、２～３０、２～２５、２～２２、２～２０、２～１８、２～１５、２～１２、２～１０、２～８、４～５０、５～５０、５～４０、５～３０、５～２５、５～２２、５～２０、５～１８、５～１５、５～１２、５～１０、６、７、８、又は９アミノ酸を含む小分子化合物、又はポリペプチドである。
一部の実施形態において、ターゲティング分子は、細胞表面受容体又は他の分子に結合する能力を有するリガンドである。一部の実施形態において、ターゲティング分子のうちの少なくとも１つは、細胞表面受容体又は他の分子に結合する能力を有するリガンドである。
本願のリガンドには、選択の標的への特異的結合親和性を有するものであり得る種々の化学的分子又は生体分子が含まれてもよく、ここで選択の標的とは、例えば、細胞表面受容体、細胞表面抗原、細胞、組織、器官等であり得る。一部の実施形態において、リガンドは、標的細胞の表面上に発現するタンパク質又はマーカーに特異的に結合することができる。一部の実施形態において、本願のリガンドは、細胞表面タンパク質又はマーカーに１０－６～１０－１１Ｍ（Ｋｄ値）の親和性で結合する。一部の実施形態において、本願のリガンドは、細胞表面タンパク質又はマーカーに少なくとも１０－７、少なくとも１０－８及び少なくとも１０－９Ｍ（Ｋｄ値）の親和性で結合する。一部の実施形態において、本願のリガンドは、細胞表面タンパク質又はマーカーに１０－６Ｍ未満、１０－７Ｍ未満及び１０－８Ｍ未満（Ｋｄ値）の親和性で結合する。一部の実施形態において、本願のリガンドは細胞表面タンパク質又はマーカーに一定の親和性で結合し、ここで一定の親和性とは、標的細胞表面タンパク質又はマーカーに対するリガンドの親和性が非標的細胞表面タンパク質又はマーカーに対するよりも少なくとも２、３、４、５、６、８、１０、２０、５０、１００倍又はそれ以上高いことを指す。一部の実施形態において、標的細胞（例えば癌細胞）における本願の細胞表面タンパク質又はマーカーの発現は、正常細胞における発現と比べて有意に高い。用語「有意に」は、本明細書で使用されるとき、統計的に有意な差、又は当業者が認識し得る有意な差を指す。
一部の実施形態において、標的細胞（例えば癌細胞）における本願の細胞表面タンパク質又はマーカーの発現レベルは、正常細胞と比べて２～１，０００，０００倍高い；例えば、標的細胞（例えば癌細胞）における発現レベルは、正常細胞と比べて２～１０、２～１００、２～１，０００、２～１０，０００、２～１００，０００又は２～１，０００，０００（これは上記の数値範囲内にある任意の値に等しくてもよく、及びこの範囲の端点の値は含まれる）倍高い。一部の実施形態において、標的細胞（例えば癌細胞）における細胞表面受容体の発現レベルは正常細胞と比べて少なくとも１０倍高い、又は１００倍高い、又は１，０００倍高い、又は１０，０００倍高い、又は１００，０００倍高い。一部の実施形態において、標的細胞（例えば癌細胞）上の細胞表面タンパク質又はマーカーレベルと比較して、正常細胞上の細胞表面受容体レベルは少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又は９９％低下する。一部の実施形態において、本願に記載される細胞表面タンパク質又はマーカーは、正常細胞には検出不能である。
一部の実施形態において、本願の細胞表面タンパク質又はマーカーは細胞表面受容体である。
一部の実施形態において、本願の細胞表面受容体は、トランスフェリン受容体（ＴＦＲ）、低密度リポタンパク質受容体（ＬＤＬＲ）、葉酸受容体（ＦＲ）、成長ホルモン抑制ホルモン受容体、尿酸キナーゼ受容体、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）、インテグリン受容体（ＬＦＡ－１）、ＳＳＴ－１４受容体（ＳＳＴＲ２）、ＧＮＲＨ受容体（ＧＮＲＨＲ）、ＴＲＰＶ６及びインテグリンα受容体からなる群から選択される。
一部の実施形態において、本願の細胞表面タンパク質又はマーカーは細胞表面抗原である。
一部の実施形態において、本願の細胞表面抗原は、前立腺特異的膜抗原、ＭＵＣ１ムチン、急性リンパ芽球共通抗原、Ｔｈｙ－１細胞表面抗原、メランＡタンパク質、扁平上皮癌抗原、ガレクチン３及びヒト白血球抗原からなる群から選択される。
一部の実施形態において、本願の細胞相互作用分子は、ＦＯＬＲ１、ＴＲＰＶ６、ＦＯＬＨ１（ＰＭＳＡ）、ＧＮＲＨＲ、Ｈｅｒ２、Ｔｒｏｐ２、Ｈｅｒ３、ＮＥＣＴＩＮ４、ＬＲＰ１、ＧＬＵＴ１、ＥＧＦＲ１、ＡＸＬ、ＣＡ９、ＣＤ４４、クローディン１８．２、ＡＰＮ、ＤＬＬ３、ＣＥＡＣＡＭ５、ＦＺＤ１０、ＴＦＲＣ、ＭＥＴ、ＩＧＦＲ１、ＳＳＴＲ２、ＣＣＫＢＲ、ＬＦＡ１、ＩＣＡＭ、ＧＰＲ８７、ＧＭ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦＲ、ＴＩＭ３、ＴＬＲファミリー、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＧＩＴＲＬ、ＧＩＴＲ、４－ＢＢＬ、４－１ＢＢ、ＣＤ７０、ＣＤ２７、ＩＣＯＳＬ、ＩＣＯＳ、ＨＨＬＡ２、ＣＤ２８、ＣＤ８６／８０、ＣＤ２８、ＭＨＣＩＩ抗原、ＴＣＲ、ＣＴＬＡ－４、ＣＤ１５５、ＣＤ１２２、ＣＤ１１３、ＩＧＩＴ、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ１、ガレクチン－９、ＴＩＭ－３、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７－Ｈ４、Ｂ７－Ｈ３、ホスファチジルセリン、ＨＨＬＡ２、ＬＡＧ３、ガレクチン－３、ＬＩＬＲＢ４、シグレック１５、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＳＬＡＭＦ７、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２、ＫＩＲ２ＤＬ３、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ４、ＮｅｕＧｃＧＭ３及びＣＸＣＲ４からなる群から選択される分子に結合することができる。
一部の実施形態において、本願のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩は前立腺特異的膜抗原リガンド部分と相乗作用分子部分とを含み、ここで相乗作用分子部分は、ＦＯＬＲ１、ＴＲＰＶ６、ＦＯＬＨ１（ＰＭＳＡ）、ＳＳＴＲ２及びＧＮＲＨＲからなる群から選択される分子に結合する。
一部の実施形態において、本願のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、式（Ｉ）によって表されるリガンド部分と相乗作用分子部分とを含み、ここで相乗作用分子部分は、ＦＯＬＲ１、ＴＲＰＶ６、ＳＳＴＲ２及びＧＮＲＨＲからなる群から選択される分子に結合する。
更に一部の実施形態において、本願のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩はＰ１０と相乗作用分子部分とを含み、ここで相乗作用分子は、ＦＯＬＲ１、ＴＲＰＶ６、ＦＯＬＨ１（ＰＭＳＡ）及びＧＮＲＨＲからなる群から選択される分子に結合する。
一部の実施形態において、本願のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩における相乗作用分子のうちの１つは、エンドサイトーシスの媒介能を有するエンドサイトーシス分子部分である。用語「エンドサイトーシス」は、本明細書で使用されるとき、コンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩が標的細胞と相互作用して、次には標的細胞による自らのエンドサイトーシス、インターナリゼーション又は取込みを媒介する能力を有することを意味する。用語「エンドサイトーシス分子」は、本明細書で使用されるとき、標的細胞と相互作用して、次には標的細胞による本願のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩のエンドサイトーシス、インターナリゼーション、又は取込みを媒介する能力を有する分子を指す。
一部の実施形態において、エンドサイトーシス分子は、葉酸塩及びその類似体、エンドサイトーシスの媒介能を有するペプチド、及び細胞透過性ペプチドからなる群から選択される。
一部の実施形態において、本願のエンドサイトーシス分子は葉酸塩又はその類似体である。
葉酸塩は、その小さい分子量、非免疫原性、及び良好な安定性ゆえに他の基との化学結合の形成に有益である。葉酸塩は、細胞表面上に発現する葉酸受容体と高親和性で会合することにより葉酸塩の細胞取込みを媒介し得る。葉酸受容体はほとんどの正常細胞で極めて低発現であるものの、数多くの癌細胞において、低葉酸塩条件下で急速に分裂する細胞の高い葉酸塩要求に応えて高度に発現する（Ｋｅｌｅｍｅｎ ＬＥ，Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ，２００６；１１９：２４３－５０；Ｋａｎｅ ＭＡ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．１９８８；８１：１３９８－４０６；Ｍａｔｓｕｅ Ｈ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．１９９２；８９：６００６－９；Ｚｈａｏ Ｒ，ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｎｕｔｒ．２０１１；３１：１７７－２０１を参照のこと）。葉酸塩は細胞表面上の葉酸受容体への特異的結合能を有し、また標的細胞へのコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩のエンドサイトーシスの媒介能も有する。
一部の実施形態において、葉酸塩の類似体は、５－メチルテトラヒドロ葉酸、５－ホルミルテトラヒドロ葉酸、メトトレキサート、及び５，１０－メチレンテトラヒドロ葉酸からなる群から選択される。
一部の実施形態において、エンドサイトーシス分子は、エンドサイトーシスの媒介能を有するペプチドである。
一部の実施形態において、エンドサイトーシスの媒介能を有するペプチドは、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８及びＡｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ（ＲＧＤと呼ばれる）からなる群から選択されるアミノ酸配列、及び配列番号１６～１８のいずれかと少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％のアミノ酸配列相同性を有する相同ペプチドを含み、ここで相同ペプチドは、それぞれ配列番号１６～１８に示されるとおりのペプチドの機能的同等物である。
一部の実施形態において、本願に記載されるとおりのエンドサイトーシスの媒介能を有するペプチドは、配列番号１６～２０及びＲＧＤの配列と比較して１つのアミノ酸部位にのみアミノ酸の保存的置換を有する。一部の実施形態において、本願に記載されるとおりのエンドサイトーシスの媒介能を有するペプチドは、配列番号１６～２０の配列と比較して２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０のアミノ酸部位にアミノ酸の保存的置換を有する。
その生物学的活性に影響を及ぼさないという前提の下に、本願に記載されるとおりのエンドサイトーシスの媒介能を有するペプチドはまた、例えば、β－フルオロアラニン、１－メチル－ヒスチジン、γ－メチレン－グルタミン酸、α－メチル－ロイシン、４，５－デヒドロ－リジン、ヒドロキシプロリン、３－フルオロ－フェニルアラニン、３－アミノ－チロシン、４－メチル－トリプトファンなどを含めた、天然に存在しないアミノ酸も含有し得る。
相同性パーセンテージは、当該技術分野における様々な周知の方法によって決定することができる。例えば、配列比較は、以下の公開されているツール：ＢＬＡＳＴｐソフトウェア（国立バイオテクノロジー情報センター（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ：ＮＣＢＩ）のウェブサイト：ｈｔｔｐ：／／ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／Ｂｌａｓｔ．ｃｇｉで利用可能；また、Ａｌｔｓｃｈｕｌ Ｓ．Ｆ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２１５：４０３－４１０（１９９０）；Ｓｔｅｐｈｅｎ Ｆ．ｅｔ ａｌ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２５：３３８９－３４０２（１９９７）も参照のこと）、ＣｌｕｓｔａｌＷ２（欧州バイオインフォマティクス研究所（Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）のウェブサイト：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｍｓａ／ｃｌｕｓｔａｌｗ２／で利用可能；また、Ｈｉｇｇｉｎｓ Ｄ．Ｇ．ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，２６６：３８３－４０２（１９９６）；Ｌａｒｋｉｎ Ｍ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ（Ｏｘｆｏｒｄ，Ｅｎｇｌａｎｄ），２３（２１）：２９４７－８（２００７）も参照のこと）、及びＴｃｏｆｆｅｅ（スウェーデンバイオインフォマティクス研究所（Ｓｗｅｄｅｎ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）のウェブサイトで利用可能；また、Ｐｏｉｒｏｔ Ｏ．ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，３１（１３）：３５０３－６（２００３）；Ｎｏｔｒｅｄａｍｅ Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｏｉｌ．，３０２（１）：２０５－１７（２０００）も参照のこと）によって実現することができる。ソフトウェアを用いて配列アラインメントを実施する場合、そのソフトウェアで利用可能なデフォルトパラメータを使用してもよく、又は他の場合にはアラインメント目的に合わせてパラメータをカスタマイズしてもよい。これらは全て、当業者の知識の範囲内にある。
用語「機能的同等物」は、本明細書で使用されるとき、その誘導体ペプチドの由来である元のペプチド配列と実質的に類似した生物学的活性を保持している誘導体ペプチドを指す。機能的同等物は天然の誘導体であってもよく、又は合成的に調製される。例示的な機能的同等物は、１アミノ酸以上の置換、欠失、又は付加を有するアミノ酸配列を含み、但し、ペプチドの生物学的活性は維持されているものとする。置換に用いられるアミノ酸は、望ましくは、置換されることになるアミノ酸と類似の化学物理学的特性を有する。望ましい類似の化学物理学的特性には、電荷、バルク性、疎水性、親水性などの点での類似性が含まれる。
一部の実施形態において、機能的同等物はアミノ酸残基の保存的置換を含む。アミノ酸残基の保存的置換とは、類似の特性を備えたアミノ酸間の置換、例えば、極性アミノ酸間の置換（グルタミンとアスパラギンとの間の置換など）、疎水性アミノ酸間の置換（ロイシン、イソロイシン、メチオニン及びバリンの間での置換など）、同一の電荷を有するアミノ酸間の置換（アルギニン、リジン及びヒスチジンの間での置換、又はグルタミン酸とアスパラギン酸との間の置換など）等を指す。
一部の実施形態において、エンドサイトーシス分子は細胞透過性ペプチドである。細胞透過性ペプチド（ＣＰＰ）は、タンパク質形質導入ドメイン（ＰＴＤ）としても知られ、受容体非依存的に細胞の内部に到達する能力を有する短鎖ペプチド（概して４０アミノ酸未満）である。細胞透過性ペプチドは、ペイロードとコンジュゲートされるとペイロードの膜貫通輸送の媒介能を有し、タンパク質形質導入活性を有する。一部の実施形態において、本願に記載される細胞透過性ペプチドは、腫瘍ホーミングペプチド、ミトコンドリア透過性ペプチド、活性化可能細胞透過性ペプチド、及び抗細菌性ペプチドからなる群から選択される。一部の実施形態において、細胞透過性ペプチドは、配列番号１９（ＲＲＲＲＲＲＲＲＲ、Ｒ９と呼ばれる）及び配列番号２０（ＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲＰＰＱ、これはＴａｔペプチド、即ちＨＩＶトランス転写活性化タンパク質の細胞透過性ペプチドである）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態において、本願のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩における１つのターゲティング分子は前立腺特異的膜抗原リガンド部分である。
用語「前立腺特異的膜抗原」は、本明細書で使用されるとき、前立腺上皮細胞の膜に存在するＩＩ型膜貫通糖タンパク質であって、細胞内領域の１９アミノ酸、膜貫通領域の２４アミノ酸及び細胞外領域の７０７アミノ酸を含む７５０アミノ酸からなるものを指す。前立腺特異的膜抗原は正常な前立腺上皮細胞に発現するが、前立腺癌細胞には、はるかに高いレベルで発現する。臨床検出に用いられる従来の前立腺特異的抗原と比較して、前立腺特異的膜抗原は感度及び特異性がより高い前立腺癌腫瘍マーカーであり、特にこれはホルモン不応性前立腺癌及び前立腺癌転移性病変の両方で高発現であり、前立腺癌を他の種類の悪性腫瘍と区別する際に高い感度及び特異性を有する。更に、種々の非前立腺固形腫瘍（肺癌、膀胱癌、胃癌、膵癌、腎癌及び結腸直腸癌など）でもまた、前立腺特異的膜抗原は腫瘍血管内皮細胞に高度且つ特異的に発現する。
用語「前立腺特異的膜抗原リガンド」は、本明細書で使用されるとき、前立腺特異的膜抗原を特異的に認識して結合する能力を有する抗体、アプタマー及び小分子を指す。本願の前立腺特異的膜抗原リガンドには、既に存在する又は後に作り出されることになる前立腺特異的膜抗原リガンドが含まれるとともに、前述のリガンドの断片が、前立腺特異的膜抗原に結合する能力をそれらの断片がなおも保持している限りにおいて含まれる。抗体リガンドは最も一般的な前立腺特異的膜抗原リガンドであり、モノクローナル抗体Ｊ５９１、Ｊ５３３、Ｊ４１５及びＥ９９が挙げられるが、これらに限定されない（例えば、Ｌｉｕ Ｈ，Ｒａｊａｓｅｋａｒａｎ ＡＫ，Ｍｏｙ Ｐ ｅｔ ａｌ．「前立腺特異的膜抗原の構成的及び抗体誘導性インターナリゼーション（Ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅ ａｎｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｉｎｔｅｒｎａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｓｔａｔｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｍｅｍｂｅｒａｎｅ ａｎｔｉｇｅｎ）」 ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，１９９８，５８（１８）：４０５５－４０６０を参照のこと）。アプタマーは、指数関数的濃縮リガンド系による技術的スクリーニングを通じて得られる一本鎖ＤＮＡ又はＲＮＡであり、高い親和性及び高い特異性で前立腺特異的膜抗原に結合することができる。かかる前立腺特異的膜抗原リガンドとしては、ｘＰＳＭ－Ａ１０アプタマー及びその誘導体並びにｘＰＳＭ－Ａ９アプタマー及びその誘導体が挙げられるが、これらに限定されない（例えば、Ｌｕｐｏｉｄ ＳＥ ｅｔ ａｌ．，「前立腺特異的膜抗原を介してヒト前立腺癌細胞に結合するヌクレアーゼ安定化ＲＮＡ分子の同定及び特徴付け（Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｕｃｌｅａｓｅ－ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ ＲＮＡ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ｔｈａｔ ｂｉｎｄ ｈｕｍａｎ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ｖｉａ ｔｈｅ ｐｒｏｓｔａｔｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｍｅｍｂｒａｎｅ ａｎｔｉｇｅｎ）」，Ｃｎｃｅｒ Ｒｅｓ，２００２，６２（１４）：４０２９－４０３３を参照のこと）。抗体リガンド及びアプタマーリガンドと比較して、前立腺特異的膜抗原小分子リガンドは、低分子量、高透過性、低免疫原性、及び合成の容易さが利点であり、グルタミン尿素小分子リガンド及びホスホロアミデート小分子リガンドが挙げられるが、これらに限定されない。
一部の実施形態において、本願の前立腺特異的膜抗原小分子リガンドは、２－［［メチルヒドロキシホスフィニル］メチル］グルタル酸；２－［［エチルヒドロキシホスフィニル］メチル］グルタル酸；２－［［プロピルヒドロキシホスフィニル］メチル］グルタル酸；２－［［ブチルヒドロキシホスフィニル］メチル］グルタル酸；２－［［シクロヘキシルヒドロキシホスフィニル］メチル］グルタル酸；２－［［フェニルヒドロキシホスフィニル］メチル］グルタル酸；２－［［２－（テトラヒドロフラニル）ヒドロキシホスフィニル］メチル］グルタル酸；２－［［（２－テトラヒドロピラニル）ヒドロキシホスフィニル］メチル］グルタル酸；２－［［（（４－ピリジル）メチル）ヒドロキシホスフィニル］メチル］グルタル酸；２－［［（（２－ピリジル）メチル）ヒドロキシホスフィニル］メチル］グルタル酸；２－［［（フェニルメチル）ヒドロキシホスフィニル］メチル］グルタル酸；２－［［（（２－フェニルエチル）メチル）ヒドロキシホスフィニル］メチル］グルタル酸；２－［［（（３－フェニルプロピル）メチル）ヒドロキシホスフィニル］メチル］グルタル酸；２－［［（（３－フェニルブチル）メチル）ヒドロキシホスフィニル］メチル］グルタル酸；２－［［（（２－フェニルブチル）メチル）ヒドロキシホスフィニル］メチル］グルタル酸；２－［［（４－フェニルブチル）ヒドロキシホスフィニル］メチル］グルタル酸；及び２－［［（アミノメチル）ヒドロキシホスフィニル］メチル］グルタル酸；２－［［メチルヒドロキシホスフィニル］オキシ］グルタル酸；２－［［エチルヒドロキシホスフィニル］オキシ］グルタル酸；２－［［プロピルヒドロキシホスフィニル］オキシ］グルタル酸；２－［［ブチルヒドロキシホスフィニル］オキシ］グルタル酸；２－［［フェニルヒドロキシホスフィニル］オキシ］グルタル酸；２－［［（（４－ピリジル）メチル）ヒドロキシホスフィニル］オキシ］グルタル酸；２－［［（（２－ピリジル）メチル）ヒドロキシホスフィニル］オキシ］グルタル酸；２－［［（フェニルメチル）ヒドロキシホスフィニル］オキシ］グルタル酸；及び２［［（（２－フェニルエチル）メチル）ヒドロキシホスフィニル］オキシ］グルタル酸；２－［［（ｎ－ヒドロキシル）カルバモイル］メチル］グルタル酸；２－［［（ｎ－ヒドロキシル－ｎ－メチル）カルバモイル］メチル］グルタル酸；２－［［（ｎ－ブチル－ｎ－ヒドロキシル）カルバモイル］メチル］グルタル酸；２－［［（ｎ－ベンジル－ｎ－ヒドロキシル）カルバモイル］メチル］グルタル酸；２－［［（ｎ－ヒドロキシル－ｎ－フェニル）カルバモイル］メチル］グルタル酸；２－［［（ｎ－ヒドロキシル－ｎ－２－フェニルエチル）カルバモイル］メチル］グルタル酸；２－［［（ｎ－エチル－ｎ－ヒドロキシル）カルバモイル］メチル］グルタル酸；２－［［（ｎ－ヒドロキシル－ｎ－プロピル）カルバモイル］メチル］グルタル酸；２－［［（ｎ－ヒドロキシル－ｎ－３－フェニルプロピル）カルバモイル］メチル］グルタル酸；２－［［（ｎ－ヒドロキシル－ｎ－４－ピリジル）カルバモイル］メチル］グルタル酸；２－［［（ｎ－ヒドロキシル）アミド］メチル］グルタル酸；２－［［ｎ－ヒドロキシル（メチル）アミド］メチル］グルタル酸；２－［［ｎ－ヒドロキシル（ベンジル）アミド］メチル］グルタル酸；２－［［ｎ－ヒドロキシル（フェニル）アミド］メチル］グルタル酸；２－［［ｎ－ヒドロキシル（２－フェニルエチル）アミド］メチル］グルタル酸；２－［［ｎ－ヒドロキシル（エチル）アミド］メチル］グルタル酸；２－［［ｎ－ヒドロキシル（プロピル）アミド］メチル］グルタル酸；２－［［ｎ－ヒドロキシル（３－フェニルプロピル）アミド］メチル］グルタル酸；及び２－［［ｎ－ヒドロキシル（４－ピリジル）アミド］メチル］グルタル酸；２－［（チオニル）メチル］グルタル酸；２－［（メチルチオニル）メチル］グルタル酸；２－［（エチルチオニル）メチル］グルタル酸；２－［（プロピルチオニル）メチル］グルタル酸；２－［（ブチルチオニル）メチル］グルタル酸；２－［（フェニルチオニル］メチル］グルタル酸；２－［［（２－フェニルエチル）チオニル］メチル］グルタル酸；２－［［（３－フェニルプロピル）チオニル］メチル］グルタル酸；２－［［（４－ピリジル）チオニル］メチル］グルタル酸；２－［（ベンジルチオニル）メチル］グルタル酸；２－［（スルホニル）メチル］グルタル酸；２－［（メチルスルホニル）メチル］グルタル酸；２－［（エチルスルホニル）メチル］グルタル酸；２－［（プロピルスルホニル）メチル］グルタル酸；２－［（ブチルスルホニル）メチル］グルタル酸；２－［（フェニルスルホニル］メチル］グルタル酸；２－［［（２－フェニルエチル）スルホニル］メチル］グルタル酸；２－［［（３－フェニルプロピル）スルホニル］メチル］グルタル酸；２－［［（４－ピリジル）スルホニル］メチル］グルタル酸；２－［（ベンジルスルホニル）メチル］グルタル酸；２－［（スルホキシミニル）メチル］グルタル酸；２－［（メチルスルホキシミニル）メチル］グルタル酸；２－［（エチルスルホキシミニル）メチル］グルタル酸；２－［（プロピルスルホキシミニル）メチル］グルタル酸；２－［（ブチルスルホキシミニル）メチル］グルタル酸；２－［（フェニルスルホキシミニル］メチル］グルタル酸；２－［［（２－フェニルエチル）スルホキシミニル］メチル］グルタル酸；２－［［（３－フェニルプロピル）スルホキシミニル］メチル］グルタル酸；２－［［（４－ピリジル）スルホキシミニル］メチル］グルタル酸；及び２－［（ベンジルスルホキシミニル）メチル］グルタル酸；ｎ－［メチルヒドロキシホスフィニル］グルタミン酸；ｎ－［エチルヒドロキシホスフィニル］グルタミン酸；ｎ－［プロピルヒドロキシホスフィニル］グルタミン酸；ｎ－［ブチルヒドロキシホスフィニル］グルタミン酸；ｎ－［フェニルヒドロキシホスフィニル］グルタミン酸；ｎ－［（フェニルメチル）ヒドロキシホスフィニル］グルタミン酸；ｎ－［（（２－フェニルエチル）メチル）ヒドロキシホスフィニル］グルタミン酸；及びＮ－メチル－Ｎ－［フェニルヒドロキシホスフィニル］グルタミン酸からなる群から選択することができる。本願の前立腺特異的膜抗原リガンドにはまた、国際公開第２０１０／１０８１２５号パンフレット及び同第２００６／０９３９９１号パンフレット（上述の２つの特許出願は全体として本明細書に援用される）に開示される全ての前立腺特異的膜抗原小分子リガンドも含まれる。
一部の実施形態において、本願の前立腺特異的膜抗原小分子リガンドはグルタル酸誘導体である。一部の実施形態において、本願の前立腺特異的膜抗原小分子リガンドはグルタル酸のアミノカルボニル誘導体である。
一部の実施形態において、本願の前立腺特異的膜抗原小分子リガンドは以下の構造を有する：
一部の実施形態において、コンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩に含まれる前立腺特異的膜抗原リガンドは以下の構造を有する：
一部の実施形態において、コンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩に含まれる前立腺特異的膜抗原リガンドは以下の構造を有する：
一部の実施形態において、コンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩に含まれる前立腺特異的膜抗原リガンドは以下の構造を有する：
一部の実施形態において、コンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩に含まれる前立腺特異的膜抗原リガンドは以下の構造を有する：
一部の実施形態において、本願のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩における１つのターゲティング分子は、式（Ｉ）によって表されるリガンド部分：

又はそれと少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％又は少なくとも９０％のアミノ酸配列相同性を有するか、又はそれとの３、２又は１個以下のアミノ酸置換（例えば、保存的置換）を有するリガンド部分である。
一部の実施形態において、本願のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩における１つのターゲティング分子は、Ｐ１０、又はそれと少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％又は少なくとも９３％のアミノ酸配列相同性を有するか、又はそれとの３、２又は１個以下のアミノ酸置換（例えば、保存的置換）を有するリガンド部分である。
用語「Ｐ１０」は、本明細書で使用されるとき、アミノ酸配列Ｃｙｓ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｖａｌ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ａｒｇを有するペプチドを指す。
一部の実施形態において、本願のコンジュゲート化合物は、（１）葉酸塩リガンド及び前立腺特異的膜抗原リガンド；（２）ＴＲＰＶ６リガンド及び前立腺特異的膜抗原リガンド；（３）ＧＮＲＨＲリガンド及び前立腺特異的膜抗原リガンド；（４）ＳＳＴＲ２リガンド及び前立腺特異的膜抗原リガンド；（５）葉酸塩リガンド及びＳＳＴＲ２リガンド；又は（６）ＴＲＰＶ６リガンド及び葉酸塩リガンドからなる群から選択されるターゲティング分子を有する。
一部の実施形態において、本願に提供されるコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩における２つのターゲティング分子は、それぞれ、相乗作用分子部分及び前立腺特異的膜抗原リガンド部分である。一部の実施形態において、相乗作用分子はエンドサイトーシスの媒介能を有する。一部の実施形態において、本願に提供されるコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩における２つのターゲティング分子は、それぞれ、葉酸塩又はその類似体及び前立腺特異的膜抗原リガンド部分である。理論によって制限されることは望まないが、先行技術のリガンドの組み合わせよりも安定性が良好な特異的葉酸塩又はその類似体及び前立腺特異的膜抗原リガンド部分が選択される。
一部の実施形態において、本願に提供されるコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩における２つのターゲティング分子は、それぞれ、相乗作用分子部分及び式（Ｉ）によって表されるリガンド部分である。一部の実施形態において、相乗作用分子はエンドサイトーシスの媒介能を有する。一部の実施形態において、本願に提供されるコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩における２つのターゲティング分子は、それぞれ、葉酸塩又はその類似体及び式（Ｉ）によって表されるリガンド部分である。
一部の実施形態において、本願に提供されるコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩の２つのターゲティング分子は、それぞれ、相乗作用分子部分及びＰ１０である。一部の実施形態において、相乗作用分子はエンドサイトーシスの媒介能を有する。一部の実施形態において、本願に提供されるコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩の２つのターゲティング分子は、それぞれ、葉酸塩又はその類似体及びＰ１０である。
一部の実施形態において、本願に提供されるコンジュゲート化合物は、２つのターゲティング分子とコンジュゲートした単一のペイロードのみを含む。一部の実施形態において、本願に提供されるコンジュゲート化合物は、２つのターゲティング分子とコンジュゲートした複数のペイロードを含む。
用語「コンジュゲートした」は、本明細書で使用されるとき、２つの化学基間に直接共有結合を形成しているか、又は２つの化学基をリンカーを介して間接的に連結しているかのいずれかの、２つの化学基の共有結合による連結を指す。
一部の実施形態において、コンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩は１つ又は複数のペイロード（例えば、１つのペイロード）と２つのターゲティング分子とを含み、ここでペイロードはターゲティング分子のうちの少なくとも１つに直接、共有結合的に連結されている。一部の実施形態において、ペイロードは２つのターゲティング分子に直接、共有結合的に連結されている。
一部の実施形態において、コンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩は１つ又は複数のペイロード（例えば、１つのペイロード）と２つのターゲティング分子とを含み、ここでペイロードはターゲティング分子のうちの少なくとも１つにリンカーを介して共有結合的に連結されている。一部の実施形態において、ペイロードは２つのターゲティング分子にリンカーを介して共有結合的に連結されている。
用語「リンカー」は、本明細書で使用されるとき、ペイロードをターゲティング分子に共有結合的に連結する分子又は部分を指す。リンカーは、ペイロードを少なくとも１つのターゲティング分子に連結するための官能基を含む。一部の実施形態において、この官能基は、一方がペイロードに連結し、他方がターゲティング分子に連結する２つの反応性部分を含み得る。一部の実施形態において、官能基は互いに異なる。一部の実施形態において、官能基は、チオール反応性部分とアミン反応性部分とを含む基を含む。一部の実施形態において、官能基は互いに同一である。一部の実施形態において、官能基はマレイミド基である。一部の実施形態において、リンカーはアミノ酸を含む。一部の実施形態において、リンカーに含まれるアミノ酸中のカルボン酸はアミド化されている。一部の実施形態において、リンカーは、（例えば、２～１０、２～８、３～８、４～８、４～７、４～６、又は５個の繰り返し単位を含む）短鎖ポリエチレングリコールを含む。
一部の実施形態において、本願のリンカーは、少なくとも１つの（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０又はそれ以上の）ペイロード及び少なくとも１つのターゲティング分子への結合能を有する多価リンカーである。多価リンカーに結合するペイロードは同一であっても、又は異なってもよく、多価リンカーに結合するターゲティング分子は同一であっても、又は異なってもよい。
一態様において、リンカーは、ペイロードが血液循環の間に意図せず放出されることを回避して標的細胞又は組織に送達されるペイロードの有効量を増加させ及び毒性を回避するのに十分に安定しているものとする。別の態様において、リンカーは、標的細胞の周囲又はその中にペイロードを放出して効率的に標的細胞を殺傷し又は標的細胞の機能を遮断する能力を有するものとする。一部の実施形態において、リンカーは少なくとも１つの切断可能な官能基を含む。好ましくは、切断可能な官能基は標的細胞外で十分に安定しているが、標的細胞の中に入ると、切断されて１つ又は複数のペイロードを放出する。一部の実施形態において、切断可能な官能基は、血中又は血清中と比べて標的細胞において少なくとも１０、２０、３０、５０、１００倍又はそれ以上効率的に切断される。
切断可能リンカーは、加水分解、酵素反応、若しくは還元反応によるか、又はｐＨ変化によって切断されてもよい。一部の実施形態において、リンカーはある種の生理環境下で（例えば、適切なｐＨ環境下で）切断可能である。一部の実施形態において、リンカーはｐＨ約６．５以下の酸性環境で、又は酵素などの試薬により切断可能である。一部の実施形態において、リンカーは切断作用因子、例えば、ｐＨ、酸化還元電位又は分解性分子の存在の影響を受け易い。
一部の実施形態において、リンカーは切断不能である。切断不能リンカーは、本明細書で使用されるとき、細胞内代謝の間にも基本的にインタクトなまま留まるリンカーを指す。
一部の実施形態において、リンカーは、ペプチド結合によって連結された直鎖又は分枝鎖アミノ酸からなるペプチドリンカーである。一部の実施形態において、ペプチドリンカーは、標的細胞の周辺に又は標的細胞に高度に又は特異的に発現するプロテアーゼ、例えば、リソソーム又はエンドソーム内のカテプシンＢによって切断可能である。ペプチドリンカーは、本明細書で使用されるとき、様々な長さであり得る。典型的には、本願のペプチドリンカーは１～５０アミノ酸長である。一部の実施形態において、ペプチドリンカーは、１～４５、１～４０、１～３５、１～３０、１～２５、１～２０、１～１５、１～１０、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、１～２又は１アミノ酸長である。一部の実施形態において、ペプチドリンカーは、２～４５、２～４０、２～３５、２～３０、２～２５、２～２０、２～１５、２～１０、２～９、２～８、２～７、２～６、２～５、２～４、２～３又は２アミノ酸長である。本願に記載されるとおりのペプチドリンカーのアミノ酸の数は、その範囲の端点の値を含め、上記の数値範囲内にある任意の整数値に等しくてもよい。一部の実施形態において、ペプチドリンカーは、１、２、３、４又は５アミノ酸長であることが好ましい。一部の実施形態において、ペプチドリンカーは、システイン、リジン、リジン－リジン、バリン－シトルリン、フェニルアラニン－リジン、バリン－リジン、システイン－リジン、システイン－グルタミン酸、アスパラギン酸－アスパラギン酸、及びアスパラギン酸－アスパラギン酸－リジンであり、任意選択で、上述のアミノ酸中のカルボン酸はアミド化されている。
一部の実施形態において、リンカーは、ジスルフィド結合を含むジスルフィドリンカーである。ジスルフィド結合は、細胞内還元環境では切断されるが、循環系では安定なままであってもよい。本願のジスルフィドリンカーは、ＤＳＤＭ、ＤＭＤＳ、ＭＤＳ、又はＮＤＭＤＳであってもよい。これらのジスルフィドリンカーの構造を以下の表１に示す。
一部の実施形態において、リンカーはｐＨ依存性リンカーである。本願に記載されるとおりのｐＨ依存性リンカーは、ある種のｐＨ環境下で切断可能である。一部の実施形態において、ｐＨ依存性リンカーはアルカリ性条件下では安定しているが、酸性条件下、例えば６．５以下のｐＨ値下では切断可能であってもよい。一部の実施形態において、ｐＨ依存性リンカーはシスアコニット酸無水物である。
一部の実施形態において、コンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩のリンカーは、

又は上述の構造の組み合わせ及びペプチドリンカー（例えば、１～３アミノ酸を含むペプチドリンカーを介してターゲティング分子に結合する）である。
一部の実施形態において、コンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩のリンカーは、以下の構造：

又は上述の構造の組み合わせ及びペプチドリンカー（例えば、１～３アミノ酸を含むペプチドリンカーを介してターゲティング分子に結合する）を有する。
一部の実施形態において、コンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩のリンカーは、以下の構造：

又は上述の構造の組み合わせ及びペプチドリンカー（例えば、１～３アミノ酸を含むペプチドリンカーを介してターゲティング分子に結合する）を有する。
一部の実施形態において、コンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩のリンカーは、以下の構造：

又は上述の構造の組み合わせ及びペプチドリンカー（例えば、１～３アミノ酸を含むペプチドリンカーを介してターゲティング分子に結合する）を有する。
一部の実施形態において、コンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩のリンカーは、以下の構造：

又は上述の構造の組み合わせ及びペプチドリンカー（例えば、１～３アミノ酸を含むペプチドリンカーを介してターゲティング分子に結合する）を有する。
一部の実施形態において、コンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩のリンカーは、以下の構造：

又は上述の構造の組み合わせ及びペプチドリンカー（例えば、１～３アミノ酸を含むペプチドリンカーを介してターゲティング分子に結合する）を有する。
一部の実施形態において、コンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩のリンカーは、以下の構造：

又は上述の構造の組み合わせ及びペプチドリンカー（例えば、１～３アミノ酸を含むペプチドリンカーを介してターゲティング分子に結合する）を有する。
一部の実施形態において、コンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩のリンカーは、以下の構造：

又は上述の構造の組み合わせ及びペプチドリンカー（例えば、１～３アミノ酸を含むペプチドリンカーを介してターゲティング分子に結合する）を有する。
一部の実施形態において、コンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩のリンカーは、以下の構造：

又は上述の構造の組み合わせ及びペプチドリンカー（例えば、１～３アミノ酸を含むペプチドリンカーを介してターゲティング分子に結合する）を有する。
一部の実施形態において、コンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩のリンカーは、以下の構造：

又は上述の構造の組み合わせ及びペプチドリンカー（例えば、１～３アミノ酸を含むペプチドリンカーを介してターゲティング分子に結合する）を有する。
一部の実施形態において、コンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩のリンカーは、以下の構造：

又は上述の構造の組み合わせ及びペプチドリンカー（例えば、１～３アミノ酸を含むペプチドリンカーを介してターゲティング分子に結合する）を有する。
一部の実施形態において、コンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩のリンカーは、以下の構造：

又は上述の構造の組み合わせ及びペプチドリンカー（例えば、１～３アミノ酸を含むペプチドリンカーを介してターゲティング分子に結合する）を有する。
一部の実施形態において、本願のリンカーは、上記に記載されるとおりのリンカーのいずれか１つ又はそれらの組み合わせを含み得る。
一部の実施形態において、ペイロードは第１のターゲティング分子と直接又は間接的にコンジュゲートされ、第１のターゲティング分子は第２のターゲティング分子と直接又は間接的にコンジュゲートされる。一部の実施形態において、ペイロードは第１及び第２のターゲティング分子の各々と直接コンジュゲートされる。一部の実施形態において、ペイロードは第１及び第２のターゲティング分子の各々と間接的にコンジュゲートされる。一部の実施形態において、ペイロードは第１のターゲティング分子と間接的に、例えばリンカーを介してコンジュゲートされ、第１のターゲティング分子は第２のターゲティング分子と直接又は間接的にコンジュゲートされる。一部の実施形態において、ペイロードは第１のターゲティング分子と第１のリンカーを介してコンジュゲートされ、ペイロードは第２のターゲティング分子と第２のリンカーを介してコンジュゲートされる。一部の実施形態において、リンカーは、少なくとも１つの（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０又はそれ以上の）ペイロード及び２つのターゲティング分子に結合する多価リンカーである。
一部の実施形態において、２つのターゲティング分子は互いにスペーサーを介して連結される。一部の実施形態において、スペーサーは、標的細胞に特異的に発現する又は標的細胞に発現することになるプロテアーゼによって切断可能である。かかるプロテアーゼとしては、例えば、以下の表２に掲載されるとおりのプロテアーゼが挙げられる。一部の実施形態において、スペーサーは、以下の表２に掲載されるとおりのアミノ酸配列のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む。
用語「切断可能」又は「切断された」は、本明細書で使用されるとき、それによってペイロードとターゲティング分子との間のリンカー、又はターゲティング分子間のスペーサーが壊れて遊離ペイロード又はターゲティング分子が放出される本願に提供されるコンジュゲート化合物上での代謝過程又は反応過程を指す。リンカー及びスペーサーは、プロテアーゼによって切断されるか、又はある種の生理環境下、例えばｐＨ環境下で切断されるかのいずれかである。
一部の実施形態において、コンジュゲート化合物は、以下のとおり示される式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、又はＩＶの構造を有し、式中、ｎ、ｍ、ｐ及びｑは、独立に、０又は１（これは独立に、リンカー及びスペーサーが存在すること又は存在しないことを表す）である。以下の式中の「分子」は、「ターゲティング分子」の略である。
一部の実施形態において、本願に提供されるコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、本願に提供されるとおりの少なくとも１つの（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０又はそれ以上の）ペイロードと、本願に提供されるとおりの２つのターゲティング分子と、任意選択で本願に提供されるとおりのリンカー又はスペーサーとを含む。一部の実施形態において、本願に提供されるコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、本願に提供されるとおりの１つのペイロードと、本願に提供されるとおりの細胞表面タンパク質又はマーカーに特異的に結合する１つのリガンドと、本願に提供されるとおりの１つの相乗作用分子と、本願に提供されるとおりのリンカー又はスペーサーとを含む。
一部の実施形態において、コンジュゲート化合物は、以下のとおり示される式Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ、又はＶＩＩＩの構造を有し、式中、ｎ、ｍ、ｐ、ｑ及びｓは、独立に、０又は１（これは独立に、リンカー、多価リンカー及びスペーサーが存在すること又は存在しないことを表す）である。
一部の実施形態において、本願に提供されるコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩はペイロードと２つのターゲティング分子とを含み、ここで２つのターゲティング分子は、それぞれ、相乗作用分子部分及び前立腺特異的膜抗原リガンド部分、例えば、ＣＢ－２０Ｂ、ＣＢ－２０ＢＫ、ＣＢ－６０Ｓ、ＣＢ－６０ＳＫ、ＣＢ－２０Ｃ、ＣＢ－１０２０、ＣＢ－１３２０、ＣＢ－１８２０、ＣＲ１９４２８、２０Ｒ－ＳＭ０９及びＣＢ－２０Ｒである。
一部の実施形態において、本願に提供されるコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩は１つ以上のペイロードと２つのターゲティング分子とを含み、ここで２つのターゲティング分子は、それぞれ、相乗作用分子部分及び式（Ｉ）によって表されるリガンド部分、例えば、ＣＢ－１８Ｇ、ＣＢ－１８２０及びＣＲ１９４２６である。
一部の実施形態において、本願に提供されるコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩は１つのペイロードと２つのターゲティング分子とを含み、ここで２つのターゲティング分子は、それぞれ、相乗作用分子部分及びＰ１０であり、ペイロードはカンプトテシン又はＣＢ－１０Ｓ、ＣＲ１９４２５及びＣＢ－５０Ｓなどのその任意の誘導体である。
一部の実施形態において、本願のコンジュゲート化合物は、以下の化合物：ＣＢ－２０Ｂ、ＣＢ－２０ＢＫ、ＣＢ－６０Ｓ、ＣＢ－６０ＳＫ、ＣＢ－２０Ｃ、ＣＢ－１０２０、ＣＢ－１３２０、ＣＢ－１８２０、ＣＲ１９４２８、２０Ｒ－ＳＭ０９、ＣＢ－２０Ｒ、ＣＢ－１８Ｇ、ＣＲ１９４２６、ＣＢ－１０Ｓ、ＣＲ１９４２５及びＣＢ－５０Ｓ（各コンジュゲート化合物の具体的な構造は図１に示す）からなる群から選択される。一部の実施形態において、本願のコンジュゲート化合物は、リンカー－薬物部分をリガンド部分に共有結合で連結することにより形成される。本願のリンカー－薬物部分はペイロードとリンカーとを含み、本願のリガンド部分は２つのターゲティング分子と任意選択のスペーサー又はリンカーとを含み、ここではこれらの２つの部分が反応して共有結合を形成することにより本願のコンジュゲート化合物を形成し、共有結合は、リンカー－薬物部分のリンカーとリガンド部分のリガンド分子との間に形成されてもよく、又はリンカー－薬物部分のリンカーとリガンド部分のスペーサー又はリンカーとの間に形成されてもよい。
本願のコンジュゲート化合物、ＣＢ－２０Ｂは、リンカー－薬物部分ＬＴ１００２をリガンド部分２０Ｂ－ＳＭ０９に共有結合で連結することにより形成される。本願のコンジュゲート化合物、ＣＢ－２０ＢＫは、リンカー－薬物部分ＬＴ１００２をリガンド部分２０ＢＫ－ＳＭ０９に共有結合で連結することにより形成される。本願のコンジュゲート化合物、ＣＢ－６０Ｓは、リンカー－薬物部分ＬＴ２０００Ｃをリガンド部分６０Ｓ－ＳＭ０９に共有結合で連結することにより形成される。本願のコンジュゲート化合物、ＣＢ－６０ＳＫは、リンカー－薬物部分ＬＴ２０００Ｃをリガンド部分６０ＳＫ－ＳＭ０９に共有結合で連結することにより形成される。本願のコンジュゲート化合物、ＣＢ－２０Ｃは、リンカー－薬物部分ＬＤ１００１をリガンド部分２０ＢＫ－ＳＭ０９に共有結合で連結することにより形成される。本願のコンジュゲート化合物、ＣＢ－１０２０は、リンカー－薬物部分ＬＴ１００２をリガンド部分１０２０ＢＫ－ＳＭ０９に共有結合で連結することにより形成される。本願のコンジュゲート化合物、ＣＢ－１３２０は、リンカー－薬物部分ＬＴ１００２をリガンド部分１３２０ＢＫ－ＳＭ０９に共有結合で連結することにより形成される。本願のコンジュゲート化合物、ＣＢ－１８２０は、リンカー－薬物部分ＬＴ１００２をリガンド部分１８２０ＢＫ－ＳＭ０９に共有結合で連結することにより形成される。本願のコンジュゲート化合物、ＣＲ１９４２８は、リンカー－薬物部分ＣＲ１９４２３をリガンド部分２０ＢＫ－ＳＭ０９に共有結合で連結することにより形成される。本願のコンジュゲート化合物、ＣＢ－２０Ｒは、２０Ｒ－ＳＭ０９を放射性核種イオンＭと錯体化することにより形成される。本願のコンジュゲート化合物、ＣＢ－１８Ｇは、リンカー－薬物部分ＬＴ１００２をリガンド部分１８Ｇ－ＳＭ０９に共有結合で連結することにより形成される。本願のコンジュゲート化合物、ＣＲ１９４２６は、リンカー－薬物部分ＣＲ１９４２３をリガンド部分１８Ｇ－ＳＭ０９に共有結合で連結することにより形成される。本願のコンジュゲート化合物、ＣＢ－１０Ｓは、リンカー－薬物部分ＬＴ１０００をリガンド部分ＣＢＳＭ０９に共有結合で連結することにより形成される。本願のコンジュゲート化合物、ＣＲ１９４２５は、リンカー－薬物部分ＣＲ１９４２３をリガンド部分ＣＢＳＭ０９に共有結合で連結することにより形成される。本願のコンジュゲート化合物、ＣＢ－５０Ｓは、リンカー－薬物部分ＬＴ１０００Ｎ３をリガンド部分５０Ｓ－ＳＭ０９に共有結合で連結することにより形成される。各構造を以下の表３に示す。
一部の実施形態において、本願に提供されるコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩は血液循環及び細胞外部（細胞間質中）に入る。リンカーは細胞外環境で極めて安定しており、薬物分子が遊離することはできないため、薬物分子の毒性は遮断されている。本コンジュゲートは、細胞毒性のない、又は低毒性の薬物であり、正常細胞に毒性作用を及ぼすことにはならない。
一部の実施形態において、本願に提供されるコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩は複数の受容体又は抗原及び罹患細胞に同時に高発現する他の作用分子に結合し、それらの相乗効果により、標的細胞に対するコンジュゲート化合物の親和性が大幅に増加し、正常細胞に結合する可能性が低下する。従って、ＭＭＡＥ／Ｄｘｄ／ＳＮ３８／放射性核種錯体などの極めて有効性の高い毒素薬物を運ぶことができるため、薬物の有効性が高まり、治療域が広がり、薬物副作用が回避され得る。
一部の実施形態において、本願に提供されるコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩は標的化された細胞の内部に入り、次にリンカーが細胞の内部環境の変化（特異的酵素消化、ｐＨ変化、ジスルフィド結合の還元等による）を通じて切断されると薬物分子が放出され（薬物分子の修飾基を取り除くことに等しい）、それが腫瘍細胞に治療効果を及ぼす。
一部の実施形態において、本願のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩を使用して、標的組織環境内にある標的細胞にペイロードを特異的に送達することができる。概して、コンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩の２つのターゲティング分子には３つの利点がある。第一に、２つのターゲティング分子が複数の様式で（多くの場合に相乗的に）作用することができるため、副作用が低減されつつ治療効果が向上する。第二に、２つのターゲティング分子が結合することにより、標的受容体又は標的細胞に対するコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩の親和性及びアビディティが増加し、それによってその特異性が高まり、オフターゲット毒性が回避される。最後に、適切に設計されたとき、２つのターゲティング分子の組み合わせが、薬物コンジュゲートに求められる多機能特性を果たす。
本願のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、限定はされないが、（１）細胞表面受容体への結合能を有するリガンドとエンドサイトーシスの媒介能を有するエンドサイトーシス分子との組み合わせにより、コンジュゲート化合物が標的細胞に特異的に侵入することが可能となる；（２）本コンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩は薬物化合物の親和性及びターゲティング特異性を増強し、そのためＭＭＡＥなどの極めて有効性の高い化学療法剤が患者に送達され、かかる薬剤の治療域が広がり、副作用が回避される；（３）リンカーによってペイロードが標的細胞外で（例えば、血液循環系、細胞間質等において）放出されるのを防ぐことができ、そのため血液循環中にあるコンジュゲート化合物の安定性が確保され、薬物の毒性が低減される；標的細胞への侵入後、リンカーが切断されてペイロードが放出され、薬物の効果が発揮される一方、多剤耐性（ＭＤＲ）を回避することができる；及び（４）本願のコンジュゲート化合物の形態で幅広い薬物を送達し得るため、従って関連性のある薬物の適用範囲が拡大することを含め、予期せぬ技術的効果を実現する。従って、本願のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、ＬＤＣベースの薬物のターゲティング範囲及び治療域を広げるのみならず、一部の薬物の毒性及び副作用も低減する。
用語「ポリペプチド」、「タンパク質」及び「ペプチド」は、本明細書で使用されるとき、単一のアミノ酸又はアミノ酸の重合体であり得る。本願に記載されるとおりのポリペプチド、タンパク質又はペプチドは、天然に存在するアミノ酸及び天然に存在しないアミノ酸、又はその類似体及び模倣体を含み得る。ポリペプチド、タンパク質又はペプチドは、当該技術分野において周知の任意の方法、例えば、限定はされないが、天然材料からの単離及び精製、組換え発現、化学合成等により入手することができる。
別の態様において、本願は、本願に提供されるコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩と、薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物を開示する。
用語「薬学的に許容可能」は、本明細書で使用されるとき、妥当な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激作用、アレルギー反応等がなくヒト及び他の動物の細胞との接触に好適で、穏当なリスク対効果比に見合ったものであることを意味する。
用語「薬学的に許容可能な塩」は、本明細書で使用されるとき、本願のコンジュゲート化合物の比較的非毒性の無機酸及び有機酸付加塩及び塩基付加塩を指す。代表的な酸付加塩としては、臭化水素酸塩、塩酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、吉草酸塩、オレイン酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩、ラウリン酸塩、ホウ酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、リン酸塩、トシル化物、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、ナフタレン酸塩、メシル酸塩、グルコヘプトン酸塩、ラクトビオン酸塩、スルファミン酸塩、マロン酸塩、サリチル酸塩、プロピオン酸塩、メチレン－ビス－ｂ－ヒドロキシナフトエ酸塩、ゲンチジン酸塩、イセチオン酸塩、ジ－ｐ－トルオイル酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩、シクロヘキシルスルファミン酸塩、キナ酸塩ラウリルスルホン酸塩などが挙げられる。塩基付加塩としては、薬学的に許容可能な金属塩及びアミン塩が挙げられる。好適な金属塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、バリウム塩、亜鉛塩、マグネシウム塩、及びアルミニウム塩が挙げられる。一部の実施形態では、ナトリウム塩及びカリウム塩が好ましい。好適な無機塩基付加塩は、例えば、水素化ナトリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化アルミニウム、水酸化リチウム、水酸化マグネシウム、及び水酸化亜鉛を含めた金属塩基から調製される。好適なアミン塩基付加塩は、安定した塩を形成するのに十分な塩基性を有するアミン類から調製され、好ましくは、その低毒性及び医学的使用の許容可能性が理由で医薬品化学に高頻度に使用される以下のアミン類：アンモニア、エチレンジアミン、Ｎ－メチル－グルカミン、リジン、アルギニン、オルニチン、コリン、Ｎ，Ｎ’－ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、ジエタノールアミン、プロカイン、Ｎ－ベンジルフェネチルアミン、ジエチルアミン、ピペラジン、トリス（ヒドロキシメチル）－アミノメタン、水酸化テトラメチルアンモニウム、トリエチルアミン、ジベンジルアミン、エフェナミン、デヒドロアビエチルアミン、Ｎ－エチルピペリジン、ベンジルアミン、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、エチルアミン、塩基性アミノ酸、例えば、リジン及びアルギニン、ジシクロヘキシルアミンなどが挙げられる。
用語「薬学的に許容可能な担体」は、本明細書で使用されるとき、コンジュゲート化合物の構造及び特性を妨げることのない、本願に提供されるコンジュゲート化合物を対象に送達するための薬学的に許容可能な溶媒、懸濁液又は任意の他の薬理学的に不活性な媒体を指す。かかる担体により、コンジュゲート化合物を対象による経口摂取用に、例えば、錠剤、丸薬、カプセル、液体、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液及びトローチとして製剤化することが可能になる。かかる担体により、コンジュゲート化合物を局所投与用に注射液、注入液又は調製液として製剤化することが可能になる。
本願に提供される医薬組成物に用いられる薬学的に許容可能な担体としては、例えば、薬学的に許容可能な液体、ゲル、又は固体担体、水性媒体（塩化ナトリウム注射液、リンガー注射液、等張性デキストロース注射液、滅菌水注射液、又はデキストロース及び乳酸加リンガー注射液など）、非水性媒体（植物由来の固定油、綿実油、トウモロコシ油、ゴマ油、又はピーナッツ油など）、抗微生物剤、等張剤（塩化ナトリウム又はデキストロースなど）、緩衝液（リン酸塩又はクエン酸塩緩衝液など）、抗酸化剤（重硫酸ナトリウムなど）、麻酔薬（塩酸プロカインなど）、懸濁液／分散液（カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、又はポリビニルピロリドンなど）、キレート剤（ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）又はＥＧＴＡ（エチレングリコール四酢酸）など）、乳化剤（ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ－８０）など）、希釈剤、アジュバント、賦形剤又は非毒性補助物質、当該技術分野において周知の他の成分、又はこれらの様々な組み合わせを挙げることができるが、これらに限定されない。好適な成分としては、例えば、充填剤、結合剤、緩衝剤、保存剤、滑沢剤、香味剤、増粘剤、着色剤、又は乳化剤を挙げることができる。
一部の実施形態において、医薬組成物は注射製剤である。注射製剤には、滅菌水溶液又は分散液、懸濁液又はエマルションが含まれる。いずれの場合にも、注射製剤は無菌で、且つ注射し易いように流動体でなければならない。それは製造及び保管条件下で安定していなければならず、細菌及び真菌などの微生物の汚染作用から保護されていなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなど）、及びこれらの好適な混合物及び／又は植物油を含有する溶媒又は分散媒であってもよい。注射製剤は、適切な流動性を維持していなければならない。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用、界面活性剤の使用などによって維持することができる。微生物作用の防止は、様々な抗細菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン類、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなどによって実現することができる。
一部の実施形態において、医薬組成物は経口製剤である。経口製剤としては、カプセル、カシェ剤、丸薬、錠剤、ロゼンジ（風味付けされた基剤、通常はスクロース及びアカシア又はトラガカントを用いるもの）、散剤、顆粒、又は水性若しくは非水性液体中の溶液若しくは懸濁液として、又は水中油型若しくは油中水型液体エマルションとして、又はエリキシル剤若しくはシロップ剤として、又はトローチとして（ゼラチン及びグリセリン、又はスクロース及びアカシアなど、不活性基剤を用いるもの）及び／又は洗口液としてのものが挙げられるが、これらに限定されない。
経口投与用の固形剤形では（例えば、カプセル、錠剤、丸薬、糖衣剤、散薬、顆粒など）、コンジュゲート化合物が、クエン酸ナトリウム又はリン酸二カルシウムなどの１つ以上の薬学的に許容可能な担体、及び／又は以下のいずれか：（１）デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、及び／又はケイ酸などの充填剤又は増量剤；（２）カルボキシメチルセルロース、アルギン酸、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース及び／又はアカシアなどの結合剤；（３）グリセロールなどの保湿剤；（４）寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモ又はタピオカデンプン、アルギン酸、ある種のケイ酸塩、及び炭酸ナトリウムなどの崩壊剤；（５）パラフィンなどの溶解抑制剤；（６）第４級アンモニウム化合物などの吸収促進剤；（７）アセチルアルコール及びモノステアリン酸グリセロールなどの湿潤剤；（８）カオリン及びベントナイト粘土などの吸収剤；（９）タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、及びこれらの混合物などの滑沢剤；及び（１０）着色剤と混合される。
経口投与用の液体剤形では、コンジュゲート化合物が、以下のいずれか：薬学的に許容可能なエマルション、マイクロエマルション、溶液、懸濁液、シロップ及びエリキシル剤と混合される。コンジュゲート化合物に加えて、液体剤形は、当該技術分野で一般的に使用される不活性希釈剤、例えば水又は他の溶媒、可溶化剤及び乳化剤など、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、イソプロパノール、１，３－ブチレングリコール、油（詳細には、綿実油、ピーナッツ油、トウモロコシ油、オリーブ油、ヒマシ油及びゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール及びソルビタンの脂肪酸エステル類など、及びこれらの混合物を含有し得る。不活性希釈剤の他、経口組成物はまた、湿潤剤、乳化剤及び懸濁液、甘味剤、香味剤、着色剤、芳香剤及び保存剤などの補助剤も含むことができる。
一部の実施形態において、医薬組成物は、口腔スプレー製剤又は鼻腔内スプレー製剤である。スプレー製剤としては、水性エアロゾル、非水性懸濁液、リピドソーム（ｌｉｐｉｄｏｓｏｍｅ）製剤又は固形顆粒製剤が挙げられるが、これらに限定されない。水性エアロゾルは、薬剤の水溶液又は懸濁液を従来の薬学的に許容可能な担体及び安定剤と混合することにより調製される。担体及び安定剤は具体的な化合物の要件に応じて異なるが、一般には、非イオン性界面活性剤（Ｔｗｅｅｎ又はポリエチレングリコール）、オレイン酸、レシチン、グリシンなどのアミノ酸、緩衝溶液、塩、糖又は糖アルコールが挙げられる。エアロゾルは、概して等張液から調製され、噴霧器によって送達することができる。
一部の実施形態において、医薬組成物は、１つ以上の他の薬物と混合して使用することができる。一部の実施形態において、医薬組成物は少なくとも１つの他の薬物を含む。一部の実施形態において、他の薬物は、抗新生物薬、心血管薬、抗炎症薬、抗ウイルス薬、消化器系薬、神経系薬、呼吸器系薬、免疫系薬、皮膚科学薬、代謝薬などである。
一部の実施形態において、医薬組成物は、それを必要としている対象に対し、限定なしに、経口、注射（静脈内、筋肉内、皮下、皮内、心臓内、髄腔内、胸膜内及び腹腔内注射など）、粘膜（鼻腔及び口腔内投与など）、舌下、直腸、経皮、眼内、及び肺内投与を含め、適切な経路によって投与することことができる。一部の実施形態において、医薬組成物は、静脈内に、皮下に、経口的に、筋肉内に又は脳室内に投与することができる。
高い毒性及び高い親水性など、一部のペイロードの特性に起因して、ペイロードをそれを必要としている対象により特異的に且つより効率的に送達することが望ましい。例えば、癌治療では、化学療法剤を正常細胞への毒性がないよう癌細胞に特異的に送達することが望ましい。従って、別の態様において、本願は、ペイロードをそれを必要としている対象に送達する方法であって、治療有効量の本願に提供されるコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩、又は本願に提供される医薬組成物を対象に投与することを含む方法を開示する。本願に記載されるペイロードは、研究者、獣医師、医師又は他の臨床家が疾患を予防、阻害、改善又は治療しようとしている組織、系、動物、個体又はヒトに生物学的又は医学的応答を引き出す任意の医薬品であってよい。
用語「対象」は、本明細書で使用されるとき、ヒト及び非ヒト動物を指す。非ヒト動物には、全ての脊椎動物、例えば哺乳類及び非哺乳類が含まれる。対象はまた、ウシ、ブタ、ヒツジ、家禽及びウマなどの家畜動物、又はイヌ及びネコなどの家庭動物であってもよい。対象は雄（例えば男性）又は雌（例えば女性）であってよく、高齢者であってもよく、及び成人、青年、小児、又は乳児であってもよい。ヒト対象は、コーカサス人、アフリカ人、アジア人、セム人、又は他の人種的背景を持つヒト又はかかる人種的背景の混血であってもよい。
用語「治療有効量」は、本明細書で使用されるとき、対象の疾患又は障害の１つ以上の症状を何らかの程度軽減し、疾患又は障害に関連する又はその原因となる１つ以上の生理学的又は生化学的パラメータを部分的に或いは完全に正常に戻し、及び／又は疾患又は障害が発生する可能性を低減するコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩、又は医薬組成物の量を指す。かかる量は、概して、本願に提供される本明細書の範囲に従い当業者によって決定及び説明され得る幾つもの要因に応じて異なる。それらの要因としては、詳細な対象並びにその年齢、体重、身長、全般的な健康状態、及び病歴、使用される詳細な化合物、製剤の担体及び選択された投与経路、並びに治療下の病態の性質及び重症度が挙げられるが、これらに限定されない。
一部の実施形態において、コンジュゲート化合物、又はその薬学的に許容可能な塩、又は医薬組成物の量は、対象の疾患又は障害を阻害するのに十分であるか、又は対象における疾患又は障害の発生を予防的に阻害又は防止するのに十分である。治療有効量は対象毎に異なり得るが、概して０．０１～１００ｍｇ／ｋｇ、例えば、０．０１～９０ｍｇ／ｋｇ、０．０１～８０ｍｇ／ｋｇ、０．０１～７０ｍｇ／ｋｇ、０．０１～６０ｍｇ／ｋｇ、０．０１～５０ｍｇ／ｋｇ、０．０１～４０ｍｇ／ｋｇ、０．０１～３０ｍｇ／ｋｇ、０．０１～２０ｍｇ／ｋｇ、０．０１～１０ｍｇ／ｋｇ、０．０１～５ｍｇ／ｋｇ、０．０１～４ｍｇ／ｋｇ、０．０１～３ｍｇ／ｋｇ、０．０１～２ｍｇ／ｋｇ、０．０１～１ｍｇ／ｋｇ、及び０．０１～０．１ｍｇ／ｋｇの範囲である。本願に記載されるとおりの治療有効量は、この範囲の端点の値を含め、上記の数値範囲内にある任意の値に等しくてもよい。
別の態様において、本願は、ペイロードをそれを必要としている対象に送達する方法であって、治療有効量の本願に提供されるコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩、又は本願に提供される医薬組成物を対象に投与することを含む方法を開示する。
別の態様において、本願は、対象の疾患を治療する方法であって、治療有効量の本願に提供されるコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩、又は本願に提供される医薬組成物を対象に投与することを含む方法を開示する。
一部の実施形態において、疾患は、限定はされないが、前立腺癌、乳癌、肺癌、腎癌、白血病、卵巣癌、胃癌、子宮癌、子宮内膜癌、肝癌、甲状腺癌、膵癌、結腸癌、結腸直腸癌、食道癌、皮膚癌、リンパ腫、及び多発性骨髄腫を含めた癌である。
一部の実施形態において、癌の癌細胞は、本願で言及される細胞表面受容体又は抗原の発現を有する。一部の実施形態において、癌の癌細胞は、本願で言及される細胞表面受容体又は抗原が高発現である（例えば、Ｄｅｐｍａｐのデータによる（ｈｔｔｐｓ：／／ｄｅｐｍａｐ．ｏｒｇ／ｐｏｒｔａｌ／を参照）、対応する遺伝子発現は少なくとも０、０．０１、０．０５、０．１、０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０又は１０より高い）。一部の実施形態において、癌の癌細胞は、ＦＯＬＲ１及びＦＯＬＨ１、ＴＲＰＶ６及びＦＯＬＨ１、ＧＮＲＨＲ及びＦＯＬＨ１、ＳＳＴＲ２及びＦＯＬＨ１、ＦＯＬＲ１及びＳＳＴＲ２、又はＴＲＰＶ６及びＦＯＬＲ１が高発現である。一部の実施形態において、疾患は免疫疾患、例えば、限定はされないが、結合組織病、全身性硬化症、関節リウマチ、及び全身性エリテマトーデスを含めた自己免疫疾患である。
一部の実施形態において、疾患は、限定はされないが、アンギナ、心筋梗塞、脳卒中、心臓発作、高血圧性心疾患、リウマチ性心疾患、心筋症、不整脈、及び先天性心疾患を含めた心血管疾患である。
一部の実施形態において、疾患は、限定はされないが、糖尿病、痛風、肥満、低血糖症、高血糖症、及び脂質異常症を含めた代謝疾患である。
一部の実施形態において、疾患は、限定はされないが、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、頭部傷害、多発性硬化症、眩暈、昏睡、及び癲癇を含めた神経学的疾患である。
一部の実施形態において、本願に提供される方法は、コンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩、又は医薬組成物と組み合わせて１つ以上の療法剤を投与することを更に含む。一部の実施形態において、療法剤は抗癌治療標的を標的化し、癌に対する免疫応答を誘導若しくはブーストし、又は化学療法剤である。
具体的な例を用いて本願が更に詳細に記載されることになる。以下の例は、あくまでも例示を目的として提供され、いかなる形であれ本発明を限定することは意図されない。当業者は、本質的に同じ結果が生じるように変更又は修正することのできる種々の重大でないパラメータを容易に認識するであろう。
以下の例は、本願を更に説明することを意図している。この記載により、本願の利点及び特徴が明らかになるであろう。しかしながら、これらの説明は単に例に過ぎず、本願の範囲を限定するものと解釈されてはならない。
実施例１：コンジュゲート化合物の調製
コンジュゲート化合物ＣＢ－２０ＢＫ、ＣＢ－１８Ｇ、ＣＢ－２０Ｂ、ＣＢ－１０Ｓ、ＣＢ－２０Ｃ、ＦＡ－ＭＭＡＥ、ＣＢ－２０ＡＫ、ＣＢ－１０２０、ＣＢ－１３２０及びＣＢ－１８２０の合成
１．置換度０．４５ｍｍｏｌ／ｇの１０ｇのＲｉｎｋ ａｍｉｄｅ－ａｍ樹脂（以下、「Ｒｉｎｋ樹脂」と称する、供給元Ｓｕｎｒｅｓｉｎ Ｎｅｗ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ Ｃｏ．Ｌｔｄ．、カタログ番号１８３５９９－１０－２）を秤量し、固相反応カラムにロードした；ＤＣＭを加え、窒素ガスを溶媒中にバブリングして樹脂を３０分間膨潤させた；溶媒を汲み取った；及び樹脂上のＦｍｏｃ保護基をＤＢＬＫによって除去し、次に樹脂をＤＭＦで５回洗浄した。４．７９ｇ（９ｍｍｏｌ）のＦｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）－ＯＨ及び１．４７ｇ（１０．８ｍｍｏｌ）のＨＯＢｔを秤量し、ＤＭＦに溶解させた。氷水浴中０℃の上述の溶液に１．６７ｍｌ（１０．８ｍｍｏｌ）のＤＩＣを加えて混合することにより、５分間活性化させた。この溶液を上述の反応カラムに加え、３時間反応させて、次に溶媒を汲み取った；及び反応カラム中の樹脂を３回洗浄した。次にＦｍｏｃ保護基をＤＢＬＫによって除去した。
２．上述の操作を繰り返し、Ｆｍｏｃ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ及び中間体１０８を構造に従い順次コンジュゲートした。
３．Ｄｄｅ保護基を２％ヒドラジン水和物／ＤＭＦで２回、１回につき１０分間除去し、次に樹脂をＤＭＦで５回洗浄した。Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕ及びプテロイン酸を順次コンジュゲートした。最後に、樹脂をメタノールで２回凝縮させて、溶媒を汲み取ることにより、１７．４ｇの保護基付きペプチド樹脂を得た。
４．前のステップで得られた１７．４ｇのペプチド樹脂を２５０ｍｌ一つ口フラスコに加えた；１３９ｍｌの溶解緩衝液（ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ：ＴＩＳ＝９５：３：２（容積比））を予め調製し、２．１ｇのＤＴＴを秤量して溶解緩衝液に加えた。この溶解緩衝液を上述のフラスコに加え、混合物を室温で２．５時間反応させ、ろ過した；３０ｍｌのＴＦＡによる樹脂の洗浄を継続した；上述のろ液を合わせ、この混合物を８３４ｍｌの無水エーテルに加えると黄色の固体が沈殿し、及び遠心して固体を得て、これを無水エーテルで洗浄し、真空中で乾燥させて、６．４ｇの粗製生成物を黄色の固体として９３．４％の収率及び８２．３％のＨＰＬＣ純度で得た。この生成物を分取ＨＰＬＣにより分離した（条件：Ｃ１８カラム、移動相Ａ：水中０．１％トリフルオロ酢酸、Ｂ：アセトニトリル、溶出グラジエント：（１５－２５）％Ｂ、溶出時間：６０分；画分は収集した）；及び適合と判定された生成物を含有する画分を凍結乾燥して、４．７３ｇの２０ＢＫ－ＳＭ０９を９８．８％の純度で得た。
５．４．０９ｇ（３．１１ｍｍｏｌ）のＭｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ（ＬＴ１００２）を秤量して１０００ｍｌ一つ口フラスコに加え、５００ｍｌのリン酸緩衝液及び１００ｍｌのアセトニトリルを加えた；この溶液を撹拌し、ｐＨ＝７．２に維持した後、澄明な溶液を得た；及び４．７３ｇ（３．１１ｍｍｏｌ）の中間体２０ＢＫ－ＳＭ０９を加え、この混合物を室温で２時間反応させて、この間、ＨＰＬＣによって反応をモニタした。反応が完了した後、混合物をろ過し、ろ液を分取ＨＰＬＣにより分離した（条件：Ｃ１８カラム、移動相Ａ：炭酸水素アンモニウム溶液（ｐＨ＝７．２）、Ｂ：アセトニトリル、溶出グラジエント：（２５－３５）％Ｂ、溶出時間：６０分；画分は収集した）；適合と判定された生成物を含有する画分を凍結乾燥して、６．９６ｇのＣＢ－２０ＢＫ生成物を９８．８％の純度及び７８．８％の収率で得た。
同じように、上述の方法にある同様のステップを通じてコンジュゲート化合物ＣＢ－１８Ｇ、ＣＢ－２０Ｂ、ＣＢ－１０Ｓ、ＣＢ－２０Ｃ、ＦＡ－ＭＭＡＥ（以下のとおり示される構造を有する）、ＣＢ－２０ＡＫ（以下のとおり示される構造を有する）、ＣＢ－１０２０、ＣＢ－１３２０及びＣＢ－１８２０を得ることができる。
コンジュゲート化合物ＣＢ－５０Ｓ、ＣＢ－６０Ｓ及びＣＢ－６０ＳＫの合成
１．置換度１．１ｍｍｏｌ／ｇの１０ｇのＷａｎｇ樹脂（供給元Ｓｕｎｒｅｓｉｎ Ｎｅｗ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ Ｃｏ．Ｌｔｄ．、カタログ番号１３６５７００－４３－１）を秤量し、固相反応カラムにロードした；ＤＭＦを加え、窒素ガスを溶媒中にバブリングして樹脂を３０分間膨潤させた；１４．３ｇ（２２ｍｍｏｌ）のＦｍｏｃ－Ａｒｇ（ｐｂｆ）－ＯＨ、３．５６ｇ（２６．４ｍｍｏｌ）のＨＯＢｔ、及び０．２７ｇ（２．２ｍｍｏｌ）のＤＭＡＰを秤量し、ＤＭＦに溶解させた；氷水浴中０℃で４．１ｍｌ（２６．４ｍｍｏｌ）のＤＩＣを加えて混合することにより、５分間活性化させた；この溶液を反応カラムに加えて３時間反応させて、次に溶媒を汲み取った；及び樹脂を３回洗浄した。
２．１０．４ｍｌの酢酸酸化物及び８．９ｍｌのピリジンを５０ｍｌのＤＭＦに溶解させて混合し、樹脂を上記のステップで洗浄した後に加えた；この混合物を室温で５時間ブロッキングし、ＤＭＦで３回洗浄した；及び樹脂をメタノールで凝縮させて、次に溶媒を汲み取るとＦｍｏｃ－Ａｒｇ（ｐｂｆ）－Ｗａｎｇ樹脂が得られ、これは置換度が０．５３ｍｍｏｌ／ｇと決定された。
３．３．８ｇ（２ｍｍｏｌ）のＦｍｏｃ－Ａｒｇ（ｐｂｆ）－Ｗａｎｇ樹脂（Ｓｕｂ（置換度）＝０．５３ｍｍｏｌ／ｇ）を秤量し、反応カラムにロードした；樹脂をＤＭＦで３回洗浄し、次にＤＭＦを加えることにより３０分間膨潤させた。次にＦｍｏｃ保護基をＤＢＬＫによって除去し、樹脂をＤＭＦで６回洗浄した。２．０ｇ（６ｍｍｏｌ）のＦｍｏｃ－Ｐｒｏ－ＯＨ及び０．９７ｇ（７．２ｍｍｏｌ）のＨＯＢｔを秤量し、ＤＭＦに溶解させた；氷水浴中０℃で１．１ｍｌ（７．２ｍｍｏｌ）のＤＩＣを加えて混合することにより、５分間活性化させた；この混合物を反応カラムに加え、２時間反応させた；次にＦｍｏｃ保護基をＤＢＬＫによって除去した。
４．上述の操作を繰り返し、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｐｒｏ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－プロパルギル－Ｇｌｙ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕ及びプテロイン酸を構造に従い順次コンジュゲートした。樹脂をメタノールで２回凝縮させて、溶媒を汲み取ることにより、８．４ｇのペプチド樹脂を得た。
５．前のステップで得られた８．４ｇのペプチド樹脂を２５０ｍｌ一つ口フラスコに加えた；６７ｍｌの溶解緩衝液（ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ：ＴＩＳ＝９５：３：２（容積比））を予め調製し、０．９２ｇのＤＴＴを秤量して溶解緩衝液に加えた。この溶解緩衝液をフラスコに加え、混合物を室温で２．５時間反応させた；樹脂をろ過し、２０ｍｌのＴＦＡで洗浄した；ろ液を合わせ、この混合物を４０２ｍｌの無水エーテルに加えると黄色の固体が沈殿し、及び遠心して固体を得て、これを無水エーテルで洗浄し、真空中で乾燥させて、４．０６ｇの粗製生成物を黄色の固体として９７．３％の収率及び８４．６％のＨＰＬＣ純度で得た。この生成物を分取ＨＰＬＣにより分離した（条件：Ｃ１８カラム、移動相Ａ：水中０．１％トリフルオロ酢酸、Ｂ：アセトニトリル、溶出グラジエント：（２０－２９）％Ｂ、溶出時間：６０分；画分は収集した）；及び適合と判定された生成物を含有する画分を凍結乾燥して、２．８６ｇの５０Ｓ－ＳＭ０９を９７．６％の純度で得た。
６．１．２９ｇ（１．３７ｍｍｏｌ）のＬＴ１０００Ｎ３を秤量して５００ｍｌ一つ口フラスコに加え、２７０ｍｌの混合溶媒（ＣＡＮ：Ｈ２Ｏ＝１：４）及び３９３ｍｇ（２．７４ｍｍｏｌ）のＣｕＢｒを加えて撹拌した。２．８６ｇ（１．３７ｍｍｏｌ）の中間体５０Ｓ－ＳＭ０９を加え、この混合物を室温で２～３時間反応させて、この間、ＨＰＬＣによって反応をモニタした。反応が完了した後、混合物をろ過し、ろ液を分取ＨＰＬＣにより分離した（条件：Ｃ１８カラム、移動相Ａ：水中０．１％トリフルオロ酢酸、Ｂ：アセトニトリル、溶出グラジエント：（２２－４０）％Ｂ、溶出時間：６０分；画分は収集した）；及び適合と判定された生成物を含有する画分を凍結乾燥して、３．１７ｇのＣＢ－５０Ｓを９８．６％の純度及び７６．４％の収率で得た。
同じように、上述の方法にある同様のステップを通じてコンジュゲート化合物ＣＢ－６０Ｓ及びＣＢ－６０ＳＫを得ることができる。
ＣＢ－２０Ｒの合成
１．置換度０．４５ｍｍｏｌ／ｇの５ｇのＲｉｎｋ樹脂を秤量し、固相反応カラムにロードした；ＤＣＭを加え、窒素ガスを溶媒中にバブリングして樹脂を３０分間膨潤させた；溶媒を汲み取った；樹脂上のＦｍｏｃ保護基をＤＢＬＫによって除去した；及び次に樹脂をＤＭＦで５回洗浄した。２．４ｇ（４．５ｍｍｏｌ）のＦｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）－ＯＨ及び０．７４ｇ（５．４ｍｍｏｌ）のＨＯＢｔを秤量し、ＤＭＦに溶解させた；氷水浴中０℃で０．８４ｍｌ（５．４ｍｍｏｌ）のＤＩＣを加えて混合することにより、５分間活性化させた；この混合物を反応カラムに加え、３時間反応させた；及び溶媒を汲み取り、樹脂を３回洗浄した。次にＦｍｏｃ保護基をＤＢＬＫによって除去した。
２．上述の操作を繰り返し、Ｆｍｏｃ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ及び中間体１０８を構造に従い順次コンジュゲートした。
３．Ｄｄｅ保護基を２％ヒドラジン水和物／ＤＭＦで２回、１回につき１０分間除去し、次に樹脂をＤＭＦで５回洗浄した。ＤＯＴＡ－トリス（ｔＢｕ）エステルをコンジュゲートした。次にＤｄｅ保護基を２％ヒドラジン水和物／ＤＭＦで２回、１回につき１０分間除去し、次に樹脂をＤＭＦで５回洗浄した。Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕ及びプテロイン酸を順次コンジュゲートし、最後に樹脂をメタノールで２回凝縮させて、溶媒を汲み取ることにより、９．２ｇの保護基付きペプチド樹脂を得た。
４．前のステップで得られた９．２ｇのペプチド樹脂を２５０ｍｌ一つ口フラスコに加えた；７４ｍｌの溶解緩衝液（ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ：ＴＩＳ＝９５：３：２（容積比））を予め調製し、１．０５ｇのＤＴＴを秤量して溶解緩衝液に加えた。この溶解緩衝液をフラスコに加え、混合物を室温で２．５時間反応させた；樹脂をろ過し、２０ｍｌのＴＦＡで洗浄した；ろ液を合わせ、この混合物を５６０ｍｌの無水エーテルに加えると黄色の固体が沈殿し、及び遠心して固体を得て、これを無水エーテルで洗浄し、真空中で乾燥させて、３．８ｇの粗製生成物を黄色の固体として８７．４％の収率及び８１．２％のＨＰＬＣ純度で得た。この生成物を分取ＨＰＬＣにより分離した（条件：Ｃ１８カラム、移動相Ａ：水中０．１％トリフルオロ酢酸、Ｂ：アセトニトリル、溶出グラジエント：（１５－２５）％Ｂ、溶出時間：６０分；画分は収集した）；及び合成生成物を含有する画分を凍結乾燥して、２．９ｇの２０Ｒ－ＳＭ０９を９７．８％の純度で得た。
５．２０Ｒ－ＳＭ０９を放射性核種イオンＭと錯体化してＣＢ－２０Ｒを得た。具体的には、放射性標識１７７Ｌｕ（約５０ＭＢｑ）を１００μｌの０．５Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ＝５）と混合した。１０％ＤＭＳＯに溶解させた４０μｌの１ｍＭ ＣＢ－２０Ｒ水溶液、２μｌの飽和アスコルビン酸酸性溶液及び１７７Ｌｕを含有する１００μｌの溶液を混合し、この混合物を９５℃に１０分間加熱した。放射性ＨＰＬＣ（５分以内；水中０％－１００％ＡＣＮ；Ｃ１８カラム）により標識を検出した。
化合物ＣＲ１９４２５の合成

１．Ｎ２保護下、反応フラスコに４４１．４ｍｇのＣＲ１９４２０（上記の反応ステップに示されるとおりの構造を有する）及び８．０ｍＬのＤＭＦを加え、撹拌し、溶解させて、氷浴で冷却した；次に４５９．２ｍｇのＨＡＴＵ及び３８０μＬのＤＩＰＥＡを加えて３０分間撹拌した；及び次に５００．０ｍｇのＣＲ１９４１９（上記の反応ステップに示されるとおりの構造を有する）及び１９０μＬのＤＩＰＥＡを加え、反応が完了するまでこの混合物を室温で反応させた。反応が完了した後、反応液を酢酸水溶液に注入した；固体を沈殿させてろ過し、ろ過ケーキを酢酸水溶液及び水で洗浄し、真空中で乾燥させて、８３５．７ｍｇのＣＲ１９４２１（上記の反応ステップに示されるとおりの構造を有する）を褐色の粉末として９０．０％のＨＰＬＣ純度及び９０．６％の収率で得た。
２．Ｎ２保護下、反応フラスコに８３５．７ｍｇのＣＲ１９４２１及び１６ｍＬの１０％ピペリジンＤＭＦ溶液を加え、室温で３０分間反応させた。反応が完了した後、反応液をＴＦＡ／ＭＴＢＥに注入した；固体を沈殿させてろ過し、ろ過ケーキをＭＴＢＥで洗浄し、真空中で乾燥させて、５９９．７ｍｇのＣＲ１９４２２（上記の反応ステップに示されるとおりの構造を有する）をフィールドグレーの粉末として８４．７％のＨＰＬＣ純度及び８３．０％の収率で得た。
３．Ｎ２保護下、反応フラスコに５９９．７ｍｇのＣＲ１９４２２、５８６．７ｍｇのＣＲ１９４２４（上記の反応ステップに示されるとおりの構造を有する）及び１５ｍＬのＤＭＦを加え、撹拌し、溶解させて、氷浴で冷却した；次に４９５．７ｍｇのＨＡＴＵ及び４１０μＬのＤＩＰＥＡを加え、室温で反応させた。反応が完了した後、反応液を分取精製に供し、純粋生成物溶液からアセトニトリルを減圧除去した；残渣をジクロロメタンとメタノールとの混合溶媒で抽出し、濃縮し、乾燥させて、６７４．９ｍｇのＣＲ１９４２３（上記の反応ステップに示されるとおりの構造を有する）を黄色の粉末として８８．４％のＨＰＬＣ純度及び６３．１％の収率で得た。
４．Ｎ２保護下、反応フラスコに１４．８ｍｇのＣＲ１９４２３、３．０ｍＬのＰＢＳ緩衝液（ｐＨ＝６．６）及び３．０ｍＬのアセトニトリルを加え、撹拌し、溶解させた；次に３２．９ｍｇのＣＢＳＭ０９を加え、この混合物をＮａ２ＨＰＯ４でｐＨ６．６～６．８に調整し、３０分間反応させた。反応が完了した後、反応液を分取精製に供し、純粋生成物を凍結乾燥して、２１．８ｍｇのＣＲ１９４２５を黄色の粉末として９５．６％のＨＰＬＣ純度及び４８．８％の収率で得た。
化合物ＣＲ１９４２６の合成

１．Ｎ２保護下、反応フラスコに２５．２ｍｇのＣＲ１９４２３、３．０ｍＬのＰＢＳ緩衝液（ｐＨ＝６．６）及び３．０ｍＬのアセトニトリルを加え、撹拌し、溶解させた；次に５５．５ｍｇの１８Ｇ－ＳＭ０９を加え、この混合物をＮａ２ＨＰＯ４でｐＨ６．６～６．８に調整し、３０分間反応させた。反応が完了した後、反応液を分取精製に供し、純粋生成物を凍結乾燥して、４４．６ｍｇのＣＲ１９４２６を黄色の粉末として９５．４％のＨＰＬＣ純度及び５５．２％の収率で得た。
化合物ＣＲ１９４２８の合成

１．Ｎ２保護下、反応フラスコに４８６ｍｇのＣＲ１９４２３、３．０ｍＬのＰＢＳ緩衝液（ｐＨ＝６．６）及び３．０ｍＬのアセトニトリルを加え、撹拌し、溶解させた；次に７１２ｍｇの２０ＢＫ－ＳＭ０９を加え、この混合物をＮａ２ＨＰＯ４でｐＨ６．６～６．８に調整し、３０分間反応させた。反応が完了した後、反応液を分取精製に供し、純粋生成物を凍結乾燥して、５０８ｍｇのＣＲ１９４２８を黄色の粉末として９６．７％のＨＰＬＣ純度及び４２．３％の収率で得た。
実施例２：標的タンパク質に対するコンジュゲート化合物の親和性の決定
１．タンパク質ＦＯＬＲ１に対するＣＢ－２０ＢＫの結合親和性の決定
実験器具、材料及び試薬：
ＢＩＡｃｏｒｅ Ｔ２００（ＧＥ）
ＣＭ５チップ（ＧＥ、カタログ番号２９１０４９８８）
緩衝液：ＨＢＳ－ＥＰ＋緩衝液１０×（ＧＥ、カタログ番号ＢＲ１００６６９）、使用前に脱イオン水で１０倍希釈した。
アミノカップリングキット（ＧＥ、カタログ番号ＢＲ１０００５０）
再生試薬：１０ｍＭ Ｇｌｙｃｉｎｅ ２．０（ＧＥ、カタログ番号ＢＲ１００３５５）
１０ｍＭ Ｇｌｙｃｉｎｅ ３．０（ＧＥ、カタログ番号ＢＲ１００３５７）
実験ステップ
ＢＩＡｃｏｒｅ Ｔ２００（ＧＥ）の取扱説明書に従い実験を行い、分析物ＣＢ－２０ＢＫ、ＣＢ－２０ＡＫ、葉酸塩（ＦＡ）及びＦＡ－ＭＭＡＥのＦＯＬＲ１に対する親和性を決定した。この実験では、ＣＭ５チップをリガンドＦＯＬＲ１（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍ、カタログ番号５６４６－ＦＲ）とコンジュゲートした。実験結果は表４に示すとおりである。
表４は、ＣＢ－２０ＢＫがＦＯＬＲ１に良好な親和性で特異的に結合することを示している。ＦＯＬＲ１に対するＣＢ－２０ＢＫの結合親和性は、ＦＯＬＲ１に対するＦＡ又はＦＡ－ＭＭＡＥの結合親和性と比べてやや弱い。ＣＢ－２０ＡＫはＣＢ－２０ＢＫの葉酸塩部分を含まず、この実験ではＦＯＬＲ１への特異的結合は検出されなかった。
２．タンパク質ＦＯＬＨ１に対するＣＢ－２０ＢＫの結合親和性の決定
実験器具、材料及び試薬：
Ｇａｔｏｒ（商標）（Ｐｒｏｂｅ Ｌｉｆｅ）
ＳＡプローブ（Ｐｒｏｂｅ Ｌｉｆｅ、カタログ番号１９０６０１８）
緩衝液：Ｑ緩衝液（Ｐｒｏｂｅ Ｌｉｆｅ）、１０ｍＭ、ｐＨ＝７．４
実験ステップ
（１）分析物ビオチン－ＣＢ－２０ＢＫの合成ステップ
１）置換度０．４５ｍｍｏｌ／ｇの５．１ｇのＲｉｎｋ樹脂を秤量し、固相反応カラムにロードした；ＤＣＭを加え、窒素ガスをバブリングして樹脂を３０分間膨潤させた；溶媒を汲み取った；Ｆｍｏｃ保護基をＤＢＬＫによって除去した；及び次に樹脂をＤＭＦで５回洗浄した。２．４５ｇのＦｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）－ＯＨ及び０．７５ｇのＨＯＢｔを秤量し、ＤＭＦに溶解させた；氷水浴中０℃で０．８３ｍｌのＤＩＣを加えて５分間活性化させた；この混合物を反応カラムに加え、３時間反応させた；及び溶媒を汲み取り、樹脂を３回洗浄した。次にＦｍｏｃ保護基をＤＢＬＫによって除去した。
２）上述の操作を繰り返し、Ｆｍｏｃ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ及び中間体１０８を構造に従い順次コンジュゲートした。
３）Ｄｄｅ保護基を２％ヒドラジン水和物／ＤＭＦで２回、１回につき１０分間除去し、次に樹脂をＤＭＦで５回洗浄した。Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（ビオチン）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕ及びプテロイン酸を順次コンジュゲートし、プテロイン酸をコンジュゲートした後、樹脂をＤＭＦで２回洗浄した；及び最後に、樹脂をメタノールで凝縮させ、溶媒を汲み取ることにより、９．７ｇの保護基付きペプチド樹脂を得た。
４）前のステップで得られた９．７ｇのペプチド樹脂を２５０ｍｌ一つ口フラスコに加えた；７７．６ｍｌの溶解緩衝液（ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ：ＴＩＳ＝９５：３：２（容積比））を予め調製し、１．１ｇのＤＴＴを秤量して溶解緩衝液に加えた。この溶解緩衝液をフラスコに加え、混合物を室温で２．５時間反応させた；樹脂をろ過し、２０ｍｌのＴＦＡで洗浄した；ろ液を合わせ、この混合物を４６６ｍｌのメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルに加えると黄色の固体が沈殿し、及び遠心して固体を得て、これをメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルで洗浄し、真空中で乾燥させて、４．６ｇの黄色の固体を８３．２％のＨＰＬＣ純度で得た。この生成物を分取ＨＰＬＣにより分離し、凍結乾燥して、２．１ｇのビオチン－２０ＢＫ－ＳＭ０９を９５％以上の純度で得た。
５）５００ｍｇのＭｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ（ＬＴ１００２）を秤量して２５０ｍｌ一つ口フラスコに加え、６５ｍｌのリン酸緩衝液及び２０ｍｌのアセトニトリルを加えた；この溶液を撹拌し、ｐＨ＝７．２に維持した後、澄明な溶液を得た；及び７８５ｍｇの中間体ビオチン－２０ＢＫ－ＳＭ０９を加え、この混合物を室温で２時間反応させて、この間、ＨＰＬＣによって反応をモニタした。反応が完了した後、混合物をろ過し、分取ＨＰＬＣにより分離し、凍結乾燥して、７２３ｍｇのビオチン－ＣＢ－２０ＢＫを９６．８％の純度及び５９．４％の収率で得た。
（２）Ｇａｔｏｒ（商標）（Ｐｒｏｂｅ Ｌｉｆｅ）の取扱説明書に従い実験を行い、ＦＯＬＨ１に対するビオチン－ＣＢ－２０ＢＫの結合親和性を決定した。この実験では、ＳＡプローブがリガンドビオチン－ＣＢ－２０ＢＫに結合し、分析物がＦＯＬＨ１（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、カタログ番号１５８７７－Ｈ０７Ｈ）である。実験結果は表５に示すとおりである。
表５は、ＣＢ－２０ＢＫがＦＯＬＨ１に良好な親和性で結合することを示している。
３．ＦＯＬＨ１はＣＢ－２０ＢＫ－ＦＯＬＲ１複合体に結合する
実験材料及び試薬：
ＢＩＡｃｏｒｅ Ｔ２００（ＧＥ）
ＣＭ５チップ（ＧＥ、カタログ番号２９１０４９８８）
緩衝液：ＨＢＳ－ＥＰ＋緩衝液１０×（ＧＥ、カタログ番号ＢＲ１００６６９）、使用前に脱イオン水で１０倍希釈した。
アミノカップリングキット（ＧＥ、カタログ番号ＢＲ１０００５０）
再生試薬：１０ｍＭ Ｇｌｙｃｉｎｅ ２．０（ＧＥ、カタログ番号ＢＲ１００３５５）
１０ｍＭ Ｇｌｙｃｉｎｅ ３．０（ＧＥ、カタログ番号ＢＲ１００３５７）
実験ステップ
ＣＭ５チップをリガンド：ＦＯＬＲ１（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍ、カタログ番号５６４６－ＦＲ）とコンジュゲートした。
分析物：ＣＢ－２０ＢＫ、ＦＡ－ＭＭＡＥ及びＦＯＬＨ１（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、カタログ番号１５８７７－Ｈ０７Ｈ）
ＢＩＡｃｏｒｅ Ｔ２００（ＧＥ）の操作説明書に従いＦＯＬＲ１をＣＭ５チップにコンジュゲートした；初めにＣＢ－２０ＢＫ又はＦＡ－ＭＭＡＥをロードし、次にＦＯＬＨ１をロードした；及びＣＢ－２０ＢＫ－ＦＯＬＲ１複合体へのＦＯＬＨ１の結合を検出した。実験結果は表６に示すとおりである。
表６は、高濃度のＦＯＬＨ１溶液に関して、ＣＢ－２０ＢＫ－ＦＯＬＲ１複合体に結合したＦＯＬＨ１の量がＦＡ－ＭＭＡＥ－ＦＯＬＲ１複合体に結合した量と比べて有意に高く、それが継続的な上昇傾向を示すことを示している。ＦＡ－ＭＭＡＥ－ＦＯＬＲ１複合体に対するＦＯＬＨ１の結合は高濃度で飽和する傾向がある。この実験から、ＣＢ－２０ＢＫがＦＯＬＲ１及びＦＯＬＨ１の両方の受容体に良好な親和性で結合できることが判明した。
実施例３：標的細胞へのリガンドコンジュゲートの結合及びエンドサイトーシスに関する研究
１．コンジュゲート化合物ＣＢ－２０ＢＫの細胞結合及びエンドサイトーシス実験
標識サンプルＣｙ５－ｐｅｐ－２０ＢＫ、Ｃｙ５－ＦＡ及びＣｙ５－ｐｅｐ－２０ＡＫの合成
（１）置換度０．４５ｍｍｏｌ／ｇの２ｇのＲｉｎｋ樹脂を秤量し、固相反応カラムにロードした；ＤＣＭを加え、窒素ガスを溶媒中にバブリングして樹脂を３０分間膨潤させた；溶媒を汲み取った；Ｆｍｏｃ保護基をＤＢＬＫによって除去した；及び次に樹脂をＤＭＦで５回洗浄した。０．９６ｇ（１．８ｍｍｏｌ）のＦｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）－ＯＨ及び０．３ｇ（２．２ｍｍｏｌ）のＨＯＢｔを秤量し、ＤＭＦに溶解させた；氷水浴中０℃で０．３３ｍｌ（２．２ｍｍｏｌ）のＤＩＣを加えて混合することにより、５分間活性化させた；この混合物を反応カラムに加え、３時間反応させた；及び溶媒を汲み取り、樹脂を３回洗浄した。次にＦｍｏｃ保護基をＤＢＬＫによって除去した。
（２）上述の操作を繰り返し、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ及び中間体１０８を構造に従い順次コンジュゲートした：
（３）Ｄｄｅ保護基を２％ヒドラジン水和物／ＤＭＦで２回、１回につき１０分間除去し、次に樹脂をＤＭＦで５回洗浄した。Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕ及びプテロイン酸を順次コンジュゲートした。
（４）Ｄｄｅ保護基を２％ヒドラジン水和物／ＤＭＦで２回、１回につき１０分間除去し、次に樹脂をＤＭＦで５回洗浄した；樹脂をＣｙ５－ＣＯＯＨとコンジュゲートし、次にＤＭＦで２回洗浄した；及び最後に、樹脂をメタノールで２回凝縮させて、溶媒を汲み取ることにより、３．６ｇの保護基付きペプチド樹脂を得た。
（５）前のステップで得られた３．６ｇのペプチド樹脂を５０ｍｌ一つ口フラスコに加えた；２９ｍｌの溶解緩衝液（ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ：ＴＩＳ＝９５：３：２（容積比））を予め調製し、０．４ｇのＤＴＴを秤量して溶解緩衝液に加えた。この溶解緩衝液をフラスコに加え、混合物を室温で２．５時間反応させた；樹脂をろ過し、８ｍｌのＴＦＡで洗浄した；ろ液を合わせ、この混合物を１７３ｍｌの無水エーテルに加えると黄色の固体が沈殿し、及び遠心して固体を得て、これを無水エーテルで洗浄し、真空中で乾燥させて、１．９ｇの粗製生成物を青色の固体として８９．６％の収率及び７６．３％のＨＰＬＣ純度で得た。この生成物を分取ＨＰＬＣにより分離した（条件：Ｃ１８カラム、移動相Ａ：水中０．１％トリフルオロ酢酸、Ｂ：アセトニトリル、溶出グラジエント：（２０－２８）％Ｂ、溶出時間：５０分；画分は収集した）；及び適合と判定された生成物を含有する画分を凍結乾燥して、７３６ｍｇのＣｙ５－ｐｅｐ－２０ＢＫを９３．４％の純度で得た。
同じように、上述の方法にある同様のステップを通じて化合物Ｃｙ５－ＦＡ及びＣｙ５－ｐｅｐ－２０ＡＫを得ることができる。
フローサイトメトリー法によりサンプルＣｙ５－ｐｅｐ－２０ＡＫ／Ｃｙ５－ｐｅｐ－２０ＢＫの細胞結合及びエンドサイトーシスを検出する実験
サンプル情報：Ｃｙ５－ｐｅｐ－２０ＡＫ及びＣｙ５－ｐｅｐ－２０ＢＫ
細胞株：ＬＮＣａＰヒト前立腺癌細胞、Ｄｕ１４５ヒト前立腺癌細胞、ＳＫＯＶ３ヒト卵巣癌細胞及びＮＣＩ－Ｈ４６０ヒト肺癌細胞
主な試薬：ＩＭＤＭ培地、ウシ胎仔血清、ペニシリン－ストレプトマイシン溶液、Ｌ－グルタミン及びＰＢＳ
実験操作：
（１）細胞培養：細胞をトリプシン消化し、回収してカウントし、次にこの細胞を完全培地が入った幾つかの培養フラスコに加えた；培養フラスコを３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターに置いて細胞を培養させて、最後に約５×１０６細胞を遠心管に回収した。
（２）サンプルインキュベーション：Ｃｙ５－ｐｅｐ－２０ＡＫ／Ｃｙ５－ｐｅｐ－２０ＢＫサンプルをＰＢＳで８ｎｍｏｌ／Ｌに希釈した；細胞懸濁液を１０００ｒｐｍで５分間遠心した；上清を除去し、残渣をＰＢＳで１回洗浄した；細胞を均一に懸濁し、実験スキームに従い別々の遠心管に等分した；ＰＢＳを遠心によって除去した；２００μｌのサンプル作業溶液を各管に加え、３７℃でそれぞれ１５、３０、６０、及び９０分間インキュベートし、ＰＢＳのみを加えた１本の管をブランク対照として使用した；操作は全て、遮光下で実施した。
（３）洗浄及びローディング：作業溶液を１０００ｒｐｍで５分間遠心することによって除去し、細胞をＰＢＳで３回洗浄し、適量のＰＢＳを加えて細胞を１×１０６細胞／ｍｌに懸濁した；Ｂｅｃｋｍａｎ ＣｙｔｏＦＬＥＸフローサイトメーターの電源を予め入れておくことにより、起動時のクリーニングプロセスを完了させた；及び細胞サンプルを順次ロードし、ＡＰＣチャネルで１０，０００生細胞の蛍光を読み取った；操作は全て、遮光下で実施した。
（４）データ解析：各細胞サンプルのＡＰＣ蛍光の絶対ＭＦＩ（平均蛍光強度）及び関連するブランク対照に対する相対ＭＦＩを取得し、相対ＭＦＩに基づきデータの折れ線グラフを作成した。
結果及び分析
細胞の蛍光強度をそれぞれ１５分、３０分、６０分、及び９０分間インキュベートした時点で検出し、結果をプロットして図２Ａ及び図２Ｂに示した。これらの図から、サンプルＣｙ５－ｐｅｐ－２０ＢＫ細胞の結合及びエンドサイトーシスを見ることができる。ＦＯＬＲ１が比較的低発現のＤＵ１４５細胞株及びＦＯＬＨ１が比較的低発現のＮＣＩ－Ｈ４６０細胞株と比較して、ＦＯＬＲ１が比較的高発現のＬＮＣａＰ細胞株及びＦＯＬＨ１が比較的高発現のＳＫＯＶ３細胞株は、結合してエンドサイトーシスを受けたＣＢ－２０ＢＫの蛍光強度が有意に高い。Ｃｙ５－ｐｅｐ－２０ＡＫはＦＯＬＨ１リガンドを含むのみで、ＦＯＬＲ１リガンド、ＦＡを含まないため、Ｃｙ５－ｐｅｐ－２０ＡＫは、ＦＯＬＨ１が高発現のＬＮＣａＰ細胞では高いレベルの結合及びエンドサイトーシスを示し、ＦＯＬＨ１の発現が中程度のＳＫＯＶ３細胞では中程度のレベルの結合及びエンドサイトーシスを示す；これらの２つの細胞株では、Ｃｙ５－ｐｅｐ－２０ＡＫの結合及びエンドサイトーシスレベルはＣｙ５－ｐｅｐ－ＣＢ－２０ＢＫと比べて有意に低かった。細胞へのリガンドコンジュゲートの結合及びインターナリゼーションの程度は細胞関連受容体の発現レベルと正の相関がある。
２．細胞への単一リガンドコンジュゲートＣｙ５－ＦＡの結合及びエンドサイトーシス実験
サンプル情報：Ｃｙ５－ＦＡ
細胞株：Ｈｅｌａ子宮頸癌細胞、ＳＫＯＶ３ヒト卵巣癌細胞及びＡ５４９ヒト肺癌細胞
主な試薬：ＩＭＤＭ培地、ウシ胎仔血清、ペニシリン－ストレプトマイシン溶液、Ｌ－グルタミン、ＰＢＳ、及びＤＡＰＩを含有する抗蛍光消光封入剤
実験操作：
（１）カバーガラス上で成長する細胞：カバーガラスを２４ウェルプレートに置いた；細胞をトリプシン消化し、回収してカウントし、次に細胞を完全細胞培養培地で約２×１０５細胞／ｍｌに希釈した；５００μｌの希釈した細胞溶液を２４ウェルプレートの各ウェルに加えた；及びプレートを３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターに置いて４８時間培養した。
（２）サンプルインキュベーション：Ｃｙ５－ＦＡサンプルをＩＭＤＭ培地に７３ｎｍｏｌ／Ｌとなるように希釈した；２４ウェルプレート内の培養培地を廃棄した；２００μｌのサンプル作業溶液を各ウェルの細胞カバーガラスに加え、３７℃でそれぞれ１５、３０、及び６０分間インキュベートし、及びＩＭＤＭ培地のみを加えた１つのウェルをブランク対照として使用した；操作は全て、遮光下で実施した。
（３）洗浄及びマウント：２４ウェルプレート内の作業溶液を廃棄し、プレートを３７℃に予め温めておいたＰＢＳで３回洗浄した；細胞カバーガラスを取り出し、５μｌのＤＡＰＩ含有抗蛍光消光封入剤をスライド上に滴下して加え、次に細胞カバーガラスで覆ってマウントを完了した；操作は全て、遮光下で実施した。
（４）サンプルの画像解釈：Ｌｅｉｃａ蛍光顕微鏡ＤＭ２５００の電源を入れ、蛍光励起装置を１５分間予熱した；同じ位置で、対応する蛍光チャネルにより細胞核及びＣｙ５フルオレセインの写真を撮り、ソフトウェアで画像融合を完了した。
図３から、１５分及び３０分の時点での細胞へのサンプルＣｙ５－ＦＡの結合及びエンドサイトーシスを見ることができ、ＦＯＬＲ１が高発現の細胞株Ｈｅｌａ及びＳＫＯＶ－３の蛍光強度は、ＦＯＬＲ１が比較的低発現の細胞株Ａ５４９と比べて有意に高い。細胞へのリガンドコンジュゲートの結合及びインターナリゼーションの程度は細胞関連受容体の発現レベルと正の相関がある。
実施例４：コンジュゲート化合物における細胞拡大の阻害実験
１．ＣＢ－２０ＢＫにおける腫瘍細胞拡大の阻害実験
サンプル情報：ＣＢ－２０ＢＫ
細胞株：ＫＢヒト口腔類表皮癌細胞、Ｔ－４７Ｄヒト乳癌細胞、ＮＣＩ－Ｈ４６０ヒト肺癌細胞、ＣＡＬＵ－３ヒト肺腺癌細胞、ＨｕＨ－７ヒト肝癌細胞及びＬＮＣａＰヒト前立腺癌細胞
主な試薬：ＩＭＤＭ培地、ウシ胎仔血清、ペニシリン－ストレプトマイシン溶液、Ｌ－グルタミン及びＣＣＫ８
実験操作：
１）細胞プレーティング
細胞を予め調製し、トリプシン消化し、回収し、カウントした；完全細胞培養培地で、ＫＢ細胞を２．５×１０４細胞／ｍｌに希釈し、Ｔ－４７Ｄ細胞を１．３×１０４細胞／ｍｌに希釈し、ＮＣＩ－Ｈ４６０細胞を３．５×１０４細胞／ｍｌに希釈し、ＣＡＬＵ－３細胞を４．０×１０４細胞／ｍｌに希釈し、ＨｕＨ－７細胞を３．０×１０４細胞／ｍｌに希釈し、及びＬＮＣａＰ細胞を８．０×１０４細胞／ｍｌに希釈した；１００μｌの希釈した細胞溶液を９６ウェルプレートの各ウェルに加えた；及び各プレートに陰性対照及びブランク対照ウェルをセットした。細胞を加えた９６ウェルプレートを３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターに置いて一晩培養した。
２）サンプルの希釈及び添加
サンプルを培養培地で所望の濃度に希釈した（表８を参照のこと）。一晩培養した９６ウェルプレートの各ウェルに、５０μｌの希釈したサンプルを３レプリケートウェルとして加えた；陰性対照及びブランク対照をセットした；及びこれらのプレートを３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターに置いて７２時間培養した。
３）発色及びプレート読取り
各ウェルに、ＣＣＫ－８からの１５μｌ（ウェル内の液体容積の１０％）の発色溶液を加えた；プレートを３７℃で適切な時間にわたってインキュベートした（ＯＤ値を１．０～２．０の範囲に保つようにする）；９６ウェルプレートのカバーを取り外し、プレートをマイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ Ｓｐｅｃｔｒａ ＭＡＸ Ｐｌｕｓ）で４５０ｎｍで読み取った。
４）データ処理
データはＳｏｆｔＭａｘ Ｐｒｏを使用して編集し、４パラメータフィッティング曲線をプロットした。
５）実験結果及び分析
４パラメータフィッティング曲線グラフによれば（図４Ａ、ここではＣ値がＩＣ５０に対応する）、ＣＢ－２０ＢＫは、ＫＢ、Ｔ－４７Ｄ、ＮＣＩ－Ｈ４６０、ＣＡＬＵ－３、ＨｕＨ－７、及びＬＮＣａＰ腫瘍細胞株の成長及び拡大に阻害効果を及ぼす。細胞におけるコンジュゲート化合物の対応する受容体の発現レベルが異なるため、阻害レベルが異なる。受容体が比較的高発現の細胞株Ｔ－４７Ｄ、ＫＢ、ＬＮＣａＰ、ＨｕＨ－７及びＣＡＬＵ－３のＩＣ５０は、受容体が比較的低発現の細胞株ＮＣＩ－Ｈ４６０と比べて有意に低い。ＣＢ－２０ＢＫは、腫瘍成長阻害効果と細胞関連受容体の発現レベルとの間に相関を示す。
２．腫瘍細胞株ＬＮＣａＰ（ヒト前立腺癌細胞）及び２２ＲＶ１（ヒト前立腺癌細胞）の拡大を阻害するコンジュゲート化合物ＣＢ－２０ＢＫ及び関連化合物の実験
リガンドコンジュゲート中のペイロードの細胞増殖阻害毒性に対する感受性は細胞によって異なるため、時に定量分析が干渉を受けることもある。異なるリガンドの受容体の発現レベルが既知の一連の細胞株を選択し、リガンドコンジュゲート及び単一ペイロードの細胞増殖の阻害効果に対する応答に関して試験した。同じ細胞株におけるリガンドコンジュゲートのＩＣ５０に対する単一ペイロードのＩＣ５０の比を取ることにより、かかる干渉を取り除いた。
関連サンプル：ＭＭＡＥ、ＣＢ－２０ＢＫ、ＣＢ－２０ＡＫ及びＦＡ－ＭＭＡＥ
実験操作：ＬＮＣａＰ及び２２ＲＶ１細胞を予め調製し、カウントし、９６ウェル細胞培養プレートにそれぞれ４×１０４細胞／ｍｌ及び２．０×１０４細胞／ｍｌの細胞密度でプレーティングした（１００μｌ／ウェル）；各プレートに陰性対照及びブランク対照ウェルをセットした。一晩の接着細胞培養後、希釈した供試サンプルを５０μｌ／ウェルで加えた。プレートを３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターに置き、６８～７２時間培養した。各ウェルに、ＣＣＫ８からの１５μｌ（ウェル内の液体容積の１０％）の発色溶液を加えた；及びプレートを３７℃で４５～７０分間インキュベートし、各プレートをマイクロプレートリーダーで４５０ｎｍで読み取った。ＳｏｆｔＭａｘ Ｐｒｏを使用してデータを編集し、４Ｐフィッティング曲線をプロットした。計算されたデータを表９に示す。
上記の表から、ＬＮＣａＰと２２ＲＶ１との間でＦＯＬＲ１発現レベルに大きい差がなく、ＬＮＣａＰのＦＯＬＨ１発現レベルは２２ＲＶ１のＦＯＬＨ１発現レベルと比べて有意に高いことが分かる。ＣＢ－２０ＢＫ（ＦＯＬＨ１リガンド及びＦＯＬＲ１リガンドを有する）及びＣＢ－２０ＡＫ（ＦＯＬＨ１リガンドのみを有する）は、ＬＮＣａＰ及び２２ＲＶ１の両方の腫瘍細胞株の拡大に阻害効果を及ぼす。受容体ＦＯＬＨ１の発現レベルが異なる細胞に対するＣＢ－２０ＢＫ及びＣＢ－２０ＡＫの阻害効果は異なる。受容体ＦＯＬＨ１が比較的高発現の細胞株ＬＮＣａＰのＩＣ５０比は、この受容体が比較的低発現の細胞株２２ＲＶ１のＩＣ５０比よりも２～４倍高い。ＦＡ－ＭＭＡＥもまた、ＬＮＣａＰ及び２２ＲＶ１腫瘍細胞株の拡大に阻害効果を及ぼす。ＬＮＣａＰ及び２２ＲＶ１のＦＯＬＲ１発現レベルは極めて低いため、ＬＮＣａＰ細胞（ＦＯＬＲ１遺伝子発現レベルが０．３２１９である、データの出典はＤｅｐｍａｐによる）の発現は２２ＲＶ１（ＦＯＬＲ１遺伝子発現レベルが０．０７０４である、データの出典はＤｅｐｍａｐによる）と比べてやや高く、ＬＮＣａＰと２２ＲＶ１との間でＦＡ－ＭＭＡＥのＩＣ５０比は１．５倍異なるに過ぎない。上記のデータは、細胞増殖に対する阻害効果が細胞発現受容体ＦＯＬＨ１及びＦＯＬＲ１の発現レベルと正の相関があることを示している。
３．腫瘍細胞株ＰＡＮＣ－１（ヒト膵癌細胞）及びＣＦＰＡＣ－１（ヒト膵癌細胞）の拡大を阻害するコンジュゲート化合物ＣＢ－２０ＢＫ及び関連化合物の実験
関連サンプル：ＭＭＡＥ及びＣＢ－２０ＢＫ
実験操作：ＰＡＮＣ－１及びＣＦＰＡＣ－１細胞を予め調製し、カウントし、９６ウェル細胞培養プレートに４×１０４細胞／ｍｌの細胞密度でプレーティングした（１００μｌ／ウェル）；各プレートに陰性対照及びブランク対照ウェルをセットした。一晩の接着細胞培養後、希釈した供試サンプルを５０μｌ／ウェルで加えた。プレートを３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターに置き、６８～７２時間培養した。各ウェルに、ＣＣＫ８からの１５μｌ（ウェル内の液体容積の１０％）の発色溶液を加えた；及びプレートを３７℃で４５～７０分間インキュベートし、各プレートをマイクロプレートリーダーで４５０ｎｍで読み取った。ＳｏｆｔＭａｘ Ｐｒｏを使用してデータを編集し、４Ｐフィッティング曲線をプロットした。計算されたデータを以下の表に示す：
表１０から、ＣＦＰＡＣ－１のＦＯＬＨ１発現レベルが極めて低く、ＣＦＰＡＣ－１のＦＯＬＲ１発現レベルがＰＡＮＣ１細胞株と比べて有意に高いことが分かる。ＣＢ－２０ＢＫはＰＡＮＣ－１及びＣＦＰＡＣ－１腫瘍細胞株の拡大に阻害効果を及ぼす。受容体ＦＯＬＲ１の発現レベルが異なる細胞に対する阻害効果は異なる。受容体ＦＯＬＲ１が比較的高発現の細胞株ＣＦＰＡＣ－１のＩＣ５０比は、受容体ＦＯＬＲ１が比較的低発現のＰＡＮＣ－１のＩＣ５０比よりも有意に高く、細胞増殖に対する阻害効果は、細胞関連受容体ＦＯＬＲ１の発現レベルと正の相関がある。
実験２及び３から、ＣＢ－２０ＢＫにおけるこれらの２つのリガンド及び細胞表面上に発現するその受容体（ＦＯＬＲ１及びＦＯＬＨ１）が化合物による腫瘍細胞増殖の阻害において重要な役割を果たすことが分かる。
４．ＣＢ－２０Ｂにおける腫瘍細胞拡大の阻害実験
サンプル情報：ＣＢ－２０Ｂ
細胞株：Ａ５４９ヒト肺癌細胞、ＨｕＨ－７ヒト肝癌細胞、ＫＢヒト口腔類表皮癌細胞、ＬＮＣａＰヒト前立腺癌細胞、ＤＵ１４５ヒト前立腺癌細胞及びＴ－４７Ｄヒト乳癌細胞
主な試薬：ＩＭＤＭ培地、ウシ胎仔血清、ペニシリン－ストレプトマイシン溶液、Ｌ－グルタミン及びＣＣＫ８
実験操作：
１）細胞プレーティング
細胞を予め調製し、トリプシン消化し、回収し、カウントした；９６ウェルプレートに、完全細胞培養培地で希釈してＡ５４９細胞、ＨｕＨ－７細胞、ＫＢ細胞及びＤＵ１４５細胞を２×１０４細胞／ｍｌの密度でプレーティングし、Ｔ－４７Ｄ細胞を１×１０５細胞／ｍｌの密度でプレーティングし、及びＬＮＣａＰ細胞を６×１０４細胞／ｍｌの密度でプレーティングした；１００μｌの希釈した細胞溶液を各ウェルに加えた；及び各プレートに陰性対照及びブランク対照ウェルをセットした。細胞を加えた９６ウェルプレートを３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターに置いて一晩培養した。
２）サンプルの希釈及び添加
サンプルを培養培地で所望の濃度に希釈した（表１１を参照のこと）。一晩培養した９６ウェルプレートの各ウェルに、５０μｌの希釈したサンプルを３レプリケートウェルとして加えた；陰性対照及びブランク対照をセットした；及びこれらのプレートを３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターに置いて７２時間培養した。
３）発色及びプレート読取り
各ウェルに、ＣＣＫ－８からの１５μｌ（ウェル内の液体容積の１０％）の発色溶液を加えた；プレートを３７℃で適切な時間にわたってインキュベートした（ＯＤ値を１．０～２．０の範囲に保つようにする）；９６ウェルプレートのカバーを取り外し、プレートをマイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ Ｓｐｅｃｔｒａ ＭＡＸ Ｐｌｕｓ）で４５０ｎｍで読み取った。
４）データ処理
データはＳｏｆｔＭａｘ Ｐｒｏを使用して編集し、４パラメータフィッティング曲線をプロットした。
５）実験結果及び分析
４パラメータフィッティング曲線グラフによれば（図４Ｂ、ここではＣ値がＩＣ５０に対応する）、ＣＢ－２０Ｂは、Ａ５４９、ＨｕＨ－７、ＫＢ、ＬＮｃａｐ、ＤＵ１４５及びＴ－４７Ｄ腫瘍細胞株の成長及び拡大に阻害効果を及ぼす。細胞におけるコンジュゲート化合物の対応する受容体の発現レベルが異なるため、阻害レベルが異なる。受容体が比較的高発現の細胞株Ｔ－４７Ｄ、ＬＮｃａｐ、ＫＢ、ＨｕＨ－７及びＤＵ１４５のＩＣ５０は、受容体が比較的低発現の細胞株Ａ５４９と比べて有意に低い。ＣＢ－２０Ｂは、腫瘍成長阻害効果と細胞関連受容体の発現レベルとの間の相関を示す。
５．ＣＢ－１０Ｓにおける腫瘍細胞拡大の阻害実験
サンプル情報：ＣＢ－１０Ｓ
細胞株：ＫＢヒト口腔類表皮癌細胞、ＮＣＩ－Ｈ４６０ヒト肺癌細胞、ＲＴ４ヒト膀胱癌細胞、Ｔ－４７Ｄヒト乳癌細胞及びＬＮｃａｐヒト前立腺癌細胞
主な試薬：ＩＭＤＭ培地、ウシ胎仔血清、ペニシリン－ストレプトマイシン溶液、Ｌ－グルタミン及びＣＣＫ８
実験操作：
１）細胞プレーティング
細胞を予め調製し、トリプシン消化し、回収し、カウントした；完全細胞培養培地で、ＫＢ細胞を３．５×１０４細胞／ｍｌに希釈し、ＬＮＣａＰ細胞を８．０×１０４細胞／ｍｌに希釈し、Ｔ－４７Ｄ細胞を１．２×１０４細胞／ｍｌに希釈し、ＮＣＩ－Ｈ４６０細胞を２．５×１０４細胞／ｍｌに希釈し、及びＲＴ４細胞を１．２×１０４細胞／ｍｌに希釈した；９６ウェルプレートの各ウェルに、１００μｌの希釈した細胞溶液を加えた；及び各プレートに陰性対照及びブランク対照ウェルをセットした。細胞を加えた９６ウェルプレートを３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターに置いて一晩培養した。
２）サンプルの希釈及び添加
サンプルを培養培地で所望の濃度に希釈した（表１２を参照のこと）。一晩培養した９６ウェルプレートの各ウェルに、５０μｌの希釈したサンプルを３レプリケートウェルとして加えた；陰性対照及びブランク対照をセットした；及びこれらのプレートを３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターに置いて７２時間培養した。
３）発色及びプレート読取り
各ウェルに、ＣＣＫ－８からの１５μｌ（ウェル内の液体容積の１０％）の発色溶液を加えた；プレートを３７℃で適切な時間にわたってインキュベートした（ＯＤ値を１．０～２．０の範囲に保つようにする）；９６ウェルプレートのカバーを取り外し、プレートをマイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ Ｓｐｅｃｔｒａ ＭＡＸ Ｐｌｕｓ）で４５０ｎｍで読み取った。
４）データ処理
データはＳｏｆｔＭａｘ Ｐｒｏを使用して編集し、４パラメータフィッティング曲線をプロットした。
５）実験結果及び分析
４パラメータフィッティング曲線グラフによれば（図４Ｃ、ここではＣ値がＩＣ５０に対応する）、ＣＢ－１０Ｓは、ＫＢ、ＬＮＣａＰ、Ｔ－４７Ｄ、ＲＴ４及びＮＣＩ－Ｈ４６０腫瘍細胞株の成長及び拡大に阻害効果を及ぼす。細胞におけるコンジュゲート化合物の対応する受容体の発現レベルが異なるため、阻害レベルが異なる。受容体が比較的高発現の細胞株ＫＢ、ＬＮｃａｐ、Ｔ－４７Ｄ及びＲＴ４のＩＣ５０は、受容体が比較的低発現の細胞株ＮＣＩ－Ｈ４６０と比べて有意に低い。ＣＢ－１０Ｓは、腫瘍成長阻害効果と細胞関連受容体の発現レベルとの間の相関を示す。
６．ＣＢ－６０Ｓにおける腫瘍細胞拡大の阻害実験
サンプル情報：ＣＢ－６０Ｓ
細胞株：ＫＢヒト口腔類表皮癌細胞、Ｔ－４７Ｄヒト乳癌細胞、ＮＣＩ－Ｈ４６０ヒト肺癌細胞、ＣＡＬＵ－３ヒト肺腺癌細胞、ＨｕＨ－７ヒト肝癌細胞及びＬＮＣａＰヒト前立腺癌細胞
主な試薬：ＩＭＤＭ培地、ウシ胎仔血清、ペニシリン－ストレプトマイシン溶液、Ｌ－グルタミン及びＣＣＫ８
実験操作：
１）細胞プレーティング
細胞を予め調製し、トリプシン消化し、回収し、カウントした；完全細胞培養培地で、ＫＢ細胞を２．０×１０４細胞／ｍｌに希釈し、Ｔ－４７Ｄ細胞を１．５×１０４細胞／ｍｌに希釈し、ＮＣＩ－Ｈ４６０細胞を２．０×１０４細胞／ｍｌに希釈し、ＣＡＬＵ－３細胞を３．０×１０４細胞／ｍｌに希釈し、ＨｕＨ－７細胞を４．０×１０４細胞／ｍｌに希釈し、及びＬＮＣａＰ細胞を８．０×１０４細胞／ｍｌに希釈した；１００μｌの希釈した細胞溶液を９６ウェルプレートの各ウェルに加えた；及び各プレートに陰性対照及びブランク対照ウェルをセットした。細胞を加えた９６ウェルプレートを３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターに置いて一晩培養した。
２）サンプルの希釈及び添加
サンプルを培養培地で所望の濃度に希釈した（表１３を参照のこと）。一晩培養した９６ウェルプレートの各ウェルに、５０μｌの希釈したサンプルを３レプリケートウェルとして加えた；陰性対照及びブランク対照をセットした；及びこれらのプレートを３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターに置いて７２時間培養した。
３）発色及びプレート読取り
各ウェルに、ＣＣＫ－８からの１５μｌ（ウェル内の液体容積の１０％）の発色溶液を加えた；プレートを３７℃で適切な時間にわたってインキュベートした（ＯＤ値を１．０～２．０の範囲に保つようにする）；９６ウェルプレートのカバーを取り外し、プレートをマイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ Ｓｐｅｃｔｒａ ＭＡＸ Ｐｌｕｓ）で４５０ｎｍで読み取った。
４）データ処理
データはＳｏｆｔＭａｘ Ｐｒｏを使用して編集し、４パラメータフィッティング曲線をプロットした。
５）実験結果及び分析
４パラメータフィッティング曲線グラフによれば（図４Ｄ、ここではＣ値がＩＣ５０に対応する）、ＣＢ－６０Ｓは、ＫＢ、Ｔ－４７Ｄ、ＮＣＩ－Ｈ４６０、ＣＡＬＵ－３、ＨｕＨ－７、及びＬＮＣａＰ腫瘍細胞株の成長及び拡大に阻害効果を及ぼす。細胞におけるコンジュゲート化合物の対応する受容体の発現レベルが異なるため、阻害レベルが異なる。受容体が比較的高発現の細胞株ＬＮＣａＰ及びＨｕＨ－７のＩＣ５０は、受容体が比較的低発現の細胞株ＮＣＩ－Ｈ４６０、ＫＢ、Ｔ－４７Ｄ及びＣＡＬＵ－３と比べて有意に低い。ＣＢ－６０Ｓは、腫瘍成長阻害効果と細胞関連受容体の発現レベルとの間の相関を示す。
７．ＣＢ－６０ＳＫにおける腫瘍細胞拡大の阻害実験
サンプル情報：ＣＢ－６０ＳＫ
細胞株：ＫＢヒト口腔類表皮癌細胞、Ｔ－４７Ｄヒト乳癌細胞、ＮＣＩ－Ｈ４６０ヒト肺癌細胞、ＣＡＬＵ－３ヒト肺腺癌細胞、ＨｕＨ－７ヒト肝癌細胞及びＬＮＣａＰヒト前立腺癌細胞
主な試薬：ＩＭＤＭ培地、ウシ胎仔血清、ペニシリン－ストレプトマイシン溶液、Ｌ－グルタミン及びＣＣＫ８
実験操作：
１）細胞プレーティング
細胞を予め調製し、トリプシン消化し、回収し、カウントした；完全細胞培養培地で、ＫＢ細胞を２．５×１０４細胞／ｍｌに希釈し、Ｔ－４７Ｄ細胞を１．３×１０４細胞／ｍｌに希釈し、ＮＣＩ－Ｈ４６０細胞を３．５×１０４細胞／ｍｌに希釈し、ＣＡＬＵ－３細胞を４．０×１０４細胞／ｍｌに希釈し、ＨｕＨ－７細胞を３．０×１０４細胞／ｍｌに希釈し、及びＬＮＣａＰ細胞を８．０×１０４細胞／ｍｌに希釈した；１００μｌの希釈した細胞溶液を各ウェルに加えた；及び各プレートに陰性対照及びブランク対照ウェルをセットした。細胞を加えた９６ウェルプレートを３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターに置いて一晩培養した。
２）サンプルの希釈及び添加
サンプルを培養培地で所望の濃度に希釈した（表１４を参照のこと）。一晩培養した９６ウェルプレートの各ウェルに、５０μｌの希釈したサンプルを３レプリケートウェルとして加えた；陰性対照及びブランク対照をセットした；及びこれらのプレートを３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターに置いて７２時間培養した。
３）発色及びプレート読取り
各ウェルに、ＣＣＫ－８からの１５μｌ（ウェル内の液体容積の１０％）の発色溶液を加えた；プレートを３７℃で適切な時間にわたってインキュベートした（ＯＤ値を１．０～２．０の範囲に保つようにする）；９６ウェルプレートのカバーを取り外し、プレートをマイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ Ｓｐｅｃｔｒａ ＭＡＸ Ｐｌｕｓ）で４５０ｎｍで読み取った。
４）データ処理
データはＳｏｆｔＭａｘ Ｐｒｏを使用して編集し、４パラメータフィッティング曲線をプロットした。
５）実験結果及び分析
４パラメータフィッティング曲線グラフによれば（図４Ｅ、ここではＣ値がＩＣ５０に対応する）、ＣＢ－６０ＳＫは、ＫＢ、Ｔ－４７Ｄ、ＮＣＩ－Ｈ４６０、ＣＡＬＵ－３、ＨｕＨ－７、及びＬＮＣａＰ腫瘍細胞株の成長及び拡大に阻害効果を及ぼす。細胞におけるコンジュゲート化合物の対応する受容体の発現レベルが異なるため、阻害レベルが異なる。受容体が比較的高発現の細胞株ＬＮＣａＰ及びＨｕＨ－７のＩＣ５０は、受容体が比較的低発現の細胞株Ｔ－４７Ｄ、ＮＣＩ－Ｈ４６０、ＣＡＬＵ－３及びＫＢと比べて有意に低い。ＣＢ－６０ＳＫは、腫瘍成長阻害効果と細胞関連受容体の発現レベルとの間の相関を示す。
８．ＣＢ－１８Ｇにおける腫瘍細胞拡大の阻害実験
サンプル情報：ＣＢ－１８Ｇ
細胞株：Ａ５４９ヒト肺癌細胞、Ｈｅｌａヒト子宮頸癌細胞、ＳＣＬＣ－２１Ｈ小細胞肺癌細胞、Ｕ－２ ＯＳヒト骨肉腫細胞、Ｔ－４７Ｄヒト乳癌細胞及びＮＣＩ－Ｈ４６０ヒト肺癌細胞
主な試薬：ＩＭＤＭ培地、ウシ胎仔血清、ペニシリン－ストレプトマイシン溶液、Ｌ－グルタミン及びＣＣＫ８
実験操作：
１）細胞プレーティング
細胞を予め調製し、トリプシン消化し、回収し、カウントした；９６ウェルプレートに、完全細胞培養培地で希釈してＡ５４９細胞、Ｈｅｌａ細胞、ＳＣＬＣ－２１Ｈ細胞及びＵ－２ ＯＳ細胞を２×１０４細胞／ｍｌの密度でプレーティングし、Ｔ－４７Ｄ細胞及びＮＣＩ－Ｈ４６０細胞を３×１０４細胞／ｍｌの密度でプレーティングした；９６ウェルプレートの各ウェルに、１００μｌの希釈した細胞溶液を加えた；及び各プレートに陰性対照及びブランク対照ウェルをセットした。細胞を加えた９６ウェルプレートを３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターに置いて一晩培養した。
２）サンプルの希釈及び添加
サンプルを培養培地で所望の濃度に希釈した（表１５を参照のこと）。一晩培養した９６ウェルプレートの各ウェルに、５０μｌの希釈したサンプルを３レプリケートウェルとして加えた；陰性対照及びブランク対照をセットした；及びこれらのプレートを３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターに置いて７２時間培養した。
３）発色及びプレート読取り
各ウェルに、ＣＣＫ－８からの１５μｌ（ウェル内の液体容積の１０％）の発色溶液を加えた；プレートを３７℃で適切な時間にわたってインキュベートした（ＯＤ値を１．０～２．０の範囲に保つようにする）；９６ウェルプレートのカバーを取り外し、プレートをマイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ Ｓｐｅｃｔｒａ ＭＡＸ Ｐｌｕｓ）で４５０ｎｍで読み取った。
４）データ処理
データはＳｏｆｔＭａｘ Ｐｒｏを使用して編集し、４パラメータフィッティング曲線をプロットした。
５）実験結果及び分析
４パラメータフィッティング曲線グラフによれば（図４Ｆ、ここではＣ値がＩＣ５０に対応する）、ＣＢ－１８Ｇは、Ａ５４９、Ｈｅｌａ、ＳＣＬＣ－２１Ｈ、Ｕ－２ ＯＳ、Ｔ－４７Ｄ及びＮＣＩ－Ｈ４６０腫瘍細胞株の成長及び拡大に阻害効果を及ぼす。細胞におけるコンジュゲート化合物の対応する受容体の発現レベルが異なるため、阻害レベルが異なる。受容体が比較的高発現の細胞株ＨｅｌａのＩＣ５０は、受容体が比較的低発現の細胞株ＮＣＩ－Ｈ４６０と比べて有意に低い。ＣＢ－１８Ｇは、腫瘍成長阻害効果と細胞関連受容体の発現レベルとの間の相関を示す。
９．ＣＢ－５０Ｓにおける腫瘍細胞拡大の阻害実験
サンプル情報：ＣＢ－５０Ｓ
細胞株：ＫＢヒト口腔類表皮癌細胞、ＮＣＩ－Ｈ４６０ヒト肺癌細胞、ＲＴ４ヒト膀胱癌細胞、Ｔ－４７Ｄヒト乳癌細胞及びＬＮＣａＰヒト前立腺癌細胞
主な試薬：ＩＭＤＭ培地、ウシ胎仔血清、ペニシリン－ストレプトマイシン溶液、Ｌ－グルタミン及びＣＣＫ８
実験操作：
１）細胞プレーティング
細胞を予め調製し、トリプシン消化し、回収し、カウントした；完全細胞培養培地で、ＫＢ細胞を３．５×１０４細胞／ｍｌに希釈し、ＬＮＣａＰ細胞を８．０×１０４細胞／ｍｌに希釈し、Ｔ－４７Ｄ細胞を１．２×１０４細胞／ｍｌに希釈し、ＮＣＩ－Ｈ４６０細胞を２．５×１０４細胞／ｍｌに希釈し、及びＲＴ４細胞を１．２×１０５細胞／ｍｌに希釈した；９６ウェルプレートの各ウェルに、１００μｌの希釈した細胞溶液を加えた；及び各プレートに陰性対照及びブランク対照ウェルをセットした。細胞を加えた９６ウェルプレートを３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターに置いて一晩培養した。
２）サンプルの希釈及び添加
サンプルを培養培地で所望の濃度に希釈した（表１６を参照のこと）。一晩培養した９６ウェルプレートの各ウェルに、５０μｌの希釈したサンプルを３レプリケートウェルとして加えた；陰性対照及びブランク対照をセットした；及びこれらのプレートを３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターに置いて７２時間培養した。
３）発色及びプレート読取り
各ウェルに、ＣＣＫ－８からの１５μｌ（ウェル内の液体容積の１０％）の発色溶液を加えた；プレートを３７℃で適切な時間にわたってインキュベートした（ＯＤ値を１．０～２．０の範囲に保つようにする）；９６ウェルプレートのカバーを取り外し、プレートをマイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ Ｓｐｅｃｔｒａ ＭＡＸ Ｐｌｕｓ）で４５０ｎｍで読み取った。
４）データ処理
データはＳｏｆｔＭａｘ Ｐｒｏを使用して編集し、４パラメータフィッティング曲線をプロットした。
５）実験結果及び分析
４パラメータフィッティング曲線グラフによれば（図４Ｇ、ここではＣ値がＩＣ５０に対応する）、ＣＢ－５０Ｓは、ＫＢ、ＬＮＣａＰ、Ｔ－４７Ｄ、ＲＴ４及びＮＣＩ－Ｈ４６０腫瘍細胞株の成長及び拡大に阻害効果を及ぼす。細胞におけるコンジュゲート化合物の対応する受容体の発現レベルが異なるため、阻害レベルが異なる。受容体が比較的高発現の細胞株ＫＢ、ＬＮｃａｐ、Ｔ－４７Ｄ及びＲＴ４のＩＣ５０は、受容体が比較的低発現の細胞株ＮＣＩ－Ｈ４６０と比べて有意に低い。ＣＢ－５０Ｓは、腫瘍成長阻害効果と細胞関連受容体の発現レベルとの間の相関を示す。
１０．コンジュゲート化合物ＣＢ－１０２０における腫瘍細胞拡大の阻害実験
実験目的：ＣＢ－１０２０及び関連化合物が腫瘍細胞株ＬＮＣａＰ（ヒト前立腺癌細胞）、ＳＫ－ＢＲ－３（ヒト乳癌細胞）、ＮＣＩ－Ｈ２２６（ヒト肺癌細胞）、ＣＦＰＡＣ－１（膵癌細胞）及びＰＡＮＣ－１（膵癌細胞）に及ぼす阻害効果を試験すること。
関連サンプル：ＭＭＡＥ及びＣＢ－１０２０
実験操作：ＬＮＣａＰ、ＳＫ－ＢＲ－３、ＮＣＩ－Ｈ２２６、ＣＦＰＡＣ－１及びＰＡＮＣ－１細胞を予め調製し、カウントした；培養培地（ＩＭＤＭ＋１０％ＦＢＳ＋１×Ｌ－グルタミン＋１×Ｐ／Ｓ）で、細胞ＬＮＣａＰ、ＳＫ－ＢＲ－３及びＣＦＰＡＣ－１を４×１０４細胞／ｍｌに希釈し、ＮＣＩ－Ｈ２２６を２．０×１０４細胞／ｍｌに希釈し、ＰＡＮＣ－１を３．０×１０４細胞／ｍｌに希釈した；希釈した細胞溶液を９６ウェルプレートに１００μｌ／ウェルでプレーティングした；及び各プレートに陰性対照及びブランク対照ウェルをセットした。一晩の接着細胞培養後、希釈した供試サンプルを５０μｌ／ウェルで加えた。プレートを３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターに置き、６８～７２時間培養した。各ウェルに、ＣＣＫ８からの１５μｌ（ウェル内の液体容積の１０％）の発色溶液を加えた；及びプレートを３７℃で４５～７０分間インキュベートし、各プレートをマイクロプレートリーダーで４５０ｎｍで読み取った。ＳｏｆｔＭａｘ Ｐｒｏを使用してデータを編集し、４Ｐフィッティング曲線をプロットした。データを以下の表に示す：
上記の表から、ＬＮＣａＰ及びＳＫ－ＢＲ－３の両方がＴＲＰＶ６及びＦＯＬＲＨ１を発現し、ここでＬＮＣａｐはこれらの２つの受容体の発現レベルが比較的高いことが分かる。ＮＣＩ－Ｈ２２６、ＣＦＰＡＣ－１及びＰＡＮＣ－１はこれらの２つの受容体の発現レベルが低い又は弱い。ＣＢ－１０２０は、ＬＮＣａＰ、ＳＫ－ＢＲ－３、ＮＣＩ－Ｈ２２６、ＣＦＰＡＣ－１及びＰＡＮＣ－１腫瘍細胞株の成長及び拡大に阻害効果を及ぼす。２つの受容体が比較的高発現の細胞株ＬＮＣａＰのＣＢ－１０２０のＩＣ５０比は、受容体が中程度の発現の細胞株ＳＫ－ＢＲ－３のＩＣ５０比よりも高い；ＳＫ－ＢＲ－３のＩＣ５０比は、受容体が比較的低発現のＣＦＰＡＣ－１及び２つの受容体の発現が弱い細胞株ＮＣＩ－Ｈ２２６及びＰＡＮＣ－１のＩＣ５０比よりも高い。細胞増殖に対する阻害効果は、細胞における２つの受容体の発現レベルと正の相関がある。
１１．コンジュゲート化合物ＣＢ－１３２０における腫瘍細胞拡大の阻害実験
実験目的：ＣＢ－１３２０及び関連化合物が腫瘍細胞株ＬＮＣａＰ（ヒト前立腺癌細胞）、ＳＫ－ＢＲ－３（ヒト乳癌細胞）、ＭＤＡ－ＭＢ－４６８（ヒト乳癌細胞）及びＣＦＰＡＣ－１（膵癌細胞）に及ぼす阻害効果を試験すること。
関連サンプル：ＭＭＡＥ及びＣＢ－１３２０
実験操作：ＬＮＣａＰ、ＳＫ－ＢＲ－３、ＭＤＡ－ＭＢ－４６８及びＣＦＰＡＣ－１細胞を予め調製し、カウントした；培養培地（ＩＭＤＭ＋１０％ＦＢＳ＋１×Ｌ－グルタミン＋１×Ｐ／Ｓ）で、細胞ＬＮＣａＰ、ＳＫ－ＢＲ－３、ＭＤＡ－ＭＢ－４６８及びＣＦＰＡＣ－１を４×１０４細胞／ｍｌに希釈した；希釈した細胞溶液を９６ウェルプレートに１００μｌ／ウェルでプレーティングした；及び各プレートに陰性対照及びブランク対照ウェルをセットした。一晩の接着細胞培養後、希釈した供試サンプルを５０μｌ／ウェルで加えた。プレートを３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターに置き、６８～７２時間培養した。各ウェルに、ＣＣＫ８からの１５μｌ（ウェル内の液体容積の１０％）の発色溶液を加えた；及びプレートを３７℃で４５～７０分間インキュベートし、各プレートをマイクロプレートリーダーで４５０ｎｍで読み取った。ＳｏｆｔＭａｘ Ｐｒｏを使用してデータを編集し、４Ｐフィッティング曲線をプロットした。具体的なデータを以下の表に示す：
上記の表から、４つの細胞株のＧＮＲＨＲ発現レベルはほぼ等しく、ＬＮＣａＰのＦＯＬＨ１発現レベルは他の細胞株と比べて有意に高いことが分かる。ＣＢ－１３２０は４つの腫瘍細胞株の拡大に阻害効果を及ぼす。受容体ＦＯＬＨ１の発現レベルが異なる細胞に対するＣＢ－１３２０の阻害効果は異なる。受容体ＦＯＬＨ１が比較的高発現の細胞株ＬＮＣａｐのＩＣ５０比は、受容体が比較的低発現の他の細胞株のＩＣ５０比よりも有意に高い。
１２．コンジュゲート化合物ＣＢ－１８２０における腫瘍細胞拡大の阻害実験
実験目的：ＣＢ－１８２０及び関連化合物が腫瘍細胞株ＬＮＣａＰ（ヒト前立腺癌細胞）、ＭＤＡ－ＭＢ－４６８（ヒト乳癌細胞）、ＣＦＰＡＣ－１（膵癌細胞）及びＰＡＮＣ－１（膵癌細胞）に及ぼす阻害効果を試験すること。
関連サンプル：ＭＭＡＥ及びＣＢ－１８２０
実験操作：ＬＮＣａＰ、ＭＤＡ－ＭＢ－４６８、ＣＦＰＡＣ－１及びＰＡＮＣ－１細胞を予め調製し、カウントした；培養培地（ＩＭＤＭ＋１０％ＦＢＳ＋１×Ｌ－グルタミン＋１×Ｐ／Ｓ）で、細胞ＬＮＣａＰ、ＭＤＡ－ＭＢ－４６８及びＣＦＰＡＣ－１を４×１０４細胞／ｍｌに希釈し、及びＰＡＮＣ－１を３．０×１０４細胞／ｍｌに希釈した；希釈した細胞溶液を９６ウェルプレートに１００μｌ／ウェルでプレーティングした；及び各プレートに陰性対照及びブランク対照ウェルをセットした。一晩の接着細胞培養後、希釈した供試サンプルを５０μｌ／ウェルで加えた。プレートを３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターに置き、６８～７２時間培養した。各ウェルに、ＣＣＫ８からの１５μｌ（ウェル内の液体容積の１０％）の発色溶液を加えた；及びプレートを３７℃で４５～７０分間インキュベートし、各プレートをマイクロプレートリーダーで４５０ｎｍで読み取った。ＳｏｆｔＭａｘ Ｐｒｏを使用してデータを編集し、４Ｐフィッティング曲線をプロットした。具体的な値を以下の表に示す：
上記の表から、ＬＮＣａｐ、ＭＤＡ－ＭＢ－４６８、ＣＦＰＡＣ－１及びＰＡＮＣ－１のＳＳＴＲ２発現レベルがほぼ等しく、ＬＮＣａＰのＦＯＬＨ１発現レベルは他の細胞株のＦＯＬＨ１発現レベルと比べて有意に高いことが分かる。ＣＢ－１８２０は４つの腫瘍細胞株の拡大に阻害効果を及ぼす。受容体ＦＯＬＨ１の発現レベルが異なる細胞に対するＣＢ－１８２０の阻害効果は異なる。受容体が比較的高発現の細胞株ＬＮＣａＰのＩＣ５０比は、受容体が比較的低発現の他の細胞株のＩＣ５０比よりも有意に高く、細胞増殖に対する阻害効果は、細胞関連受容体ＦＯＬＨ１の発現レベルと正の相関がある。
１３．コンジュゲート化合物ＣＲ１９４２５、ＣＲ１９４２６及びＣＲ１９４２８における腫瘍細胞拡大の阻害実験
実験目的：ＣＲ１９４２８、ＣＲ１９４２５、ＣＲ１９４２６及び関連化合物が腫瘍細胞株ＮＣＩ－Ｈ２２６（ヒト肺癌細胞）、ＣＦＰＡＣ－１（ヒト膵癌細胞）及びＭＤＡ－ＭＢ－４６８（ヒト乳癌細胞）に及ぼす阻害効果を試験すること。
関連サンプル：ＳＮ－３８、Ｄｘｄ００１７、ＣＲ１９４２８、ＣＲ１９４２５及びＣＲ１９４２６
実験操作：ＮＣＩ－Ｈ２２６、ＣＦＰＡＣ－１及びＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞を予め調製し、カウントした；９６ウェルプレートにＭＤＡ－ＭＢ－４６８及びＣＦＰＡＣ－１細胞を２×１０４細胞／ｍｌの密度でプレーティングし（１００μｌ／ウェル）、及びＮＣＩ－Ｈ２２６細胞を１×１０４細胞／ｍｌの密度でプレーティングした（１００μｌ／ウェル）；及び各プレートに陰性対照及びブランク対照ウェルをセットした。一晩の接着細胞培養後、希釈した供試サンプルを５０μｌ／ウェルで加えた。プレートを３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターに置き、６８～７２時間培養した。各ウェルに、ＣＣＫ８からの１５μｌ（ウェル内の液体容積の１０％）の発色溶液を加えた；及びプレートを３７℃で４５～７０分間インキュベートし、各プレートをマイクロプレートリーダーで４５０ｎｍで読み取った。ＳｏｆｔＭａｘ Ｐｒｏを使用してデータを編集し、４Ｐフィッティング曲線をプロットした。具体的なデータを以下の表に示す：
実施例５：ＣＤＸモデルにおけるコンジュゲート化合物の薬力学的研究
１．ＣＤＸモデルにおけるＣＢ－２０ＢＫの薬力学的研究１
１）サンプル調製：
ＣＢ－２０ＢＫ凍結乾燥粉末を秤量し、ＰＢＳで溶解してサンプル母液として調製し、この母液を後の使用のため注射用生理食塩水で作業濃度のサンプル溶液となるように希釈した。
２）ＣＤＸモデル構築
主な細胞株：ＫＢヒト口腔類表皮癌細胞、ＭＩＡ ｐａｃａ－２ヒト膵癌細胞、ＨＣＣ１９５４ヒト乳癌細胞、ＣＡＬＵ－３ヒト肺腺癌細胞及びＤＵ１４５ヒト前立腺癌細胞
モデル構築：細胞を更生させ、培養し、回収し、カウントし、ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスの右側腹部に皮下注射した。腫瘍が成長して８０～１６０ｍｍ３に拡大したところで群分け及び投与を実施し、又はスケールアップのため迅速拡大した腫瘍塊をマウスに移植及び注射した。
３）群分け、投与及び観察
群分け：腫瘍が平均約８０～１６０ｍｍ３に成長したところで群分けを実施し、モデル対照群及び種々の用量の投与群をセットした。
投与：マウスには、尾静脈注射によって投与した。
実験観察及び測定：腫瘍接種後、腫瘍成長及び治療が動物の正常行動に及ぼす効果を、具体的には、実験動物の活動、摂食及び飲水状態、体重の増減（体重は週２回測定）、及びその他、眼、毛髪等の異常状態を含め、従来どおりモニタした。
マウスの体重並びに腫瘍塊の長径（ａ）及び短径（ｂ）を週２回測定した。腫瘍容積（ＴＶ）の計算式は、ＴＶ＝１／２×ａ×ｂ２である。
４）実験結果及び分析
マウスの腫瘍容積の変化によれば（図５Ａ～図５Ｅ）、ＣＢ－２０ＢＫは、マウスにおけるＫＢ、ＭＩＡ ａｃａ－２、ＨＣＣ１９５４、ＣＡＬＵ－３及びＤＵ１４５細胞株のＣＤＸ腫瘍モデルにおいて良好な阻害効果を有することが分かる。
２．ＣＤＸモデルにおけるＣＢ－２０ＢＫの薬力学的研究２
実験目的：ヒト化ＬＮＣａＰ、ＤＵ１４５及びＮＣＩ－Ｈ４６０細胞株の皮下異種移植モデル（ＣＤＸ）におけるコンジュゲート化合物ＣＢ－２０ＢＫの薬力学的研究を実施すること
主なＣＤＸモデル：ＬＮＣａＰ、ＤＵ１４５及びＮＣＩ－Ｈ４６０
実験スキーム：
細胞又は腫瘍組織塊を調製し、ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスの右前腹部に皮下接種した。腫瘍容積が８０～１６０ｍｍ３に拡大したところで無作為化群分けを実施し、モデル対照群及び投与群をセットした。マウスには群分けの初日から投与し、ここで投与用量は、最新の体重測定値に基づき調整した。マウスには、尾静脈注射によって１０μｌ／ｇの投与容積で投与した。群分け及び投与後、腫瘍成長及び治療が動物の正常行動に及ぼす効果を、具体的には、実験動物の活動、摂食及び飲水状態、体重の増減状態、及びその他、眼、毛髪等の異常状態を含め、モニタした。群分け及び投与後、マウスの体重を週２回測定して体重変化率を計算した；同時に、腫瘍の長径及び短径をノギスで測定し、腫瘍容積、相対腫瘍増殖率、腫瘍容積阻害率及び他の指標を計算した。腫瘍容積の式はＴＶ＝０．５ａ×ｂ２（式中、ａは腫瘍の長径であり、ｂは腫瘍の短径である）である。
上記の表から、試験サンプルＣＢ－２０ＢＫは尾静脈からの投与レジメンで程度が異なる腫瘍成長阻害効果を示すことが分かる。ヒト化ＬＮＣａＰ、ＤＵ１４５及びＮＣＩ－Ｈ４６０細胞株のＣＤＸモデルについては、試験サンプルは陰性対照群と比較して一定の抗腫瘍成長効果を有する。ＦＯＬＲ１及びＦＯＬＨ１の二重発現を有するＬＮＣａＰモデルでは、試験サンプルは３ｍｇ／ｋｇの用量で１日目、８日目及び１５日目（Ｄ１、Ｄ８及びＤ１５）に投与されており、９５．６８％のＴＧＩ値を有して優れた抗腫瘍成長効果を示し、これはＦＯＬＲ１及びＦＯＬＨ１が比較的低発現のＤＵ１４５及びＮＣＩ－Ｈ４６０モデルと比べて有意に良好である。腫瘍成長阻害効果は細胞関連受容体の発現レベルと一定の相関がある。
３．ＨｕＰｒｉｍｅ（登録商標）異種移植ＰＤＸモデルにおけるコンジュゲート化合物ＣＢ－２０ＢＫの腫瘍成長阻害実験１
実験目的：ＰＤＸモデルにおけるコンジュゲート化合物ＣＢ－２０ＢＫの薬力学的研究
主なモデル：ＬＵ１２０６、ＬＵ１３８０及びＬＵ０３６７
実験スキーム：腫瘍組織塊を調製し、ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスの右前腹部に皮下接種した。腫瘍容積が８０～１６０ｍｍ３に拡大したところで無作為化群分けを実施し、モデル対照群及び投与群をセットした。マウスには群分けの初日から投与し、ここで投与用量は、最新の体重測定値に基づき調整した。マウスには、尾静脈注射によって１０μｌ／ｇの投与容積及び３ｍｇ／ｋｇの投与量で投与した。群分け及び投与後、腫瘍成長及び治療が動物の正常行動に及ぼす効果を、具体的には、実験動物の活動、摂食及び飲水状態、体重の増減状態、及びその他、眼、毛髪等の異常状態を含め、モニタした。群分け及び投与後、マウスの体重を週２回測定して体重変化率を計算した；同時に、腫瘍の長径及び短径をノギスで測定し、腫瘍容積、相対腫瘍増殖率、腫瘍容積阻害率及び他の指標を計算した。腫瘍容積の式はＴＶ＝０．５ａ×ｂ２（式中、ａは腫瘍の長径であり、ｂは腫瘍の短径である）である。
表２２のデータから、試験サンプルＣＢ－２０ＢＫ（３ｍｇ／ｋｇ）がＬＵ１２０６、ＬＵ１３８０及びＬＵ０３６７ヒト化肺癌ＰＤＸモデルに対して一定の抗腫瘍効果を示すことが分かる。ＦＯＬＲ１及びＦＯＬＨ１の二重発現を有するＬＵ１２０６モデルのＴＧＩ値は９０．８９％であり、単一発現のＬＵ１３８０及びＬＵ０３６７モデルのＴＧＩ値は、それぞれ３０．０２％及び７１．３４％である。腫瘍成長阻害実験では、腫瘍成長阻害効果は細胞関連受容体の発現レベルと一定の相関がある。
４．ＨｕＰｒｉｍｅ（登録商標）異種移植ＰＤＸモデルにおけるコンジュゲート化合物ＣＢ－２０ＢＫの腫瘍成長阻害実験２
実験目的：ＰＤＸモデルにおけるコンジュゲート化合物ＣＢ－２０ＢＫの薬力学的研究
主なモデル：ＢＲ１２８３及びＢＲ０４３８
実験スキーム：腫瘍組織塊を調製し、ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスの右前腹部に皮下接種した。腫瘍容積が８０～１６０ｍｍ３に拡大したところで無作為化群分けを実施し、モデル対照群及び投与群をセットした。マウスには群分けの初日から投与し、ここで投与用量は、最新の体重測定値に基づき調整した。マウスには、尾静脈注射によって１０μｌ／ｇの投与容積及び３ｍｇ／ｋｇの投与量で投与した。群分け及び投与後、腫瘍成長及び治療が動物の正常行動に及ぼす効果を、具体的には、実験動物の活動、摂食及び飲水状態、体重の増減状態、及びその他、眼、毛髪等の異常状態を含め、モニタした。群分け及び投与後、マウスの体重を週２回測定して体重変化率を計算した；同時に、腫瘍の長径及び短径をノギスで測定し、腫瘍容積、相対腫瘍増殖率、腫瘍容積阻害率及び他の指標を計算した。腫瘍容積の式はＴＶ＝０．５ａ×ｂ２（式中、ａは腫瘍の長径であり、ｂは腫瘍の短径である）である。
上記の表から、ＦＯＬＲ１及びＦＯＬＨ１の二重発現を有するＢＲ１２８３及びＢＲ０４３８モデルにおける３ｍｇ／ｋｇの用量の試験サンプルＣＢ－２０ＢＫのＴＧＩ値が、それぞれ９６．４９％及び７０．７４％であり、優れた抗腫瘍成長効果を示すことが分かる。更に、ＣＢ－２０ＢＫのＴＧＩは、ＦＯＬＲ１及びＦＯＬＨ１の発現がより高いＢＲ１２８３において高くなっている。
５．ＣＤＸモデルにおけるＣＢ－２０Ｂの薬力学的研究
１）サンプル調製：
ＣＢ－２０Ｂ凍結乾燥粉末を秤量し、ＰＢＳで溶解してサンプル母液として調製し、この母液を後の使用のため注射用生理食塩水で作業濃度のサンプル溶液となるように希釈した。
２）ＣＤＸモデル構築
主な細胞株：ＫＢヒト口腔類表皮癌細胞、ＰＣ－９ヒト肺癌細胞及びＤＵ１４５ヒト前立腺癌細胞
モデル構築：細胞を更生させ、培養し、回収し、カウントして、ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスの右側腹部に皮下注射した。腫瘍が成長して８０～１６０ｍｍ３に拡大したところで群分け及び投与を実施し、又はスケールアップのため迅速拡大した腫瘍塊をマウスに移植及び注射した。
３）群分け、投与及び観察
群分け：腫瘍が平均約８０～１６０ｍｍ３に成長したところで群分けを実施し、モデル対照群及び種々の用量の投与群をセットした。
投与：マウスには、尾静脈注射によって投与した。
実験観察及び測定：腫瘍接種後、腫瘍成長及び治療が動物の正常行動に及ぼす効果を、具体的には、実験動物の活動、摂食及び飲水状態、体重の増減（体重は週２回測定）、及びその他、眼、毛髪等の異常状態を含め、従来どおりモニタした。
マウスの体重並びに腫瘍塊の長径（ａ）及び短径（ｂ）を週２回測定した。腫瘍容積（ＴＶ）の計算式は、ＴＶ＝１／２×ａ×ｂ２である。
４）実験結果及び分析
マウスの腫瘍容積の変化によれば（図６Ａ～図６Ｃ）、マウスにおけるＫＢ、ＰＣ－９及びＤＵ１４５細胞株のＣＤＸ腫瘍モデルにおいてＣＢ－２０Ｂは良好な阻害効果を有することが分かる。
６．ＣＤＸモデルにおけるＣＢ－１８Ｇの薬力学的研究
１）サンプル調製：
ＣＢ－１８Ｇ凍結乾燥粉末を秤量し、ＰＢＳで溶解してサンプル母液として調製し、この母液を後の使用のため注射用生理食塩水で作業濃度のサンプル溶液となるように希釈した。
２）ＣＤＸモデル構築
主な細胞株：ＫＢヒト口腔類表皮癌細胞、ＰＣ－９ヒト肺癌細胞、ＳＰＣ－Ａ１ヒト肺腺癌細胞、ＣＡＬＵ－３ヒト肺腺癌細胞及びＤＵ１４５ヒト前立腺癌細胞
モデル構築：細胞を更生させ、培養し、回収してカウントし、細胞溶液をＢＡＬＢ／ｃヌードマウスの右側腹部に皮下注射した。腫瘍が成長して８０～１６０ｍｍ３に拡大したところで群分け及び投与を実施し、又はスケールアップのため迅速拡大した腫瘍塊をマウスに移植及び注射した。
３）群分け、投与及び観察
群分け：腫瘍が平均約８０～１６０ｍｍ３に成長したところで群分けを実施し、モデル対照群及び種々の用量の投与群をセットした。
投与：マウスには、尾静脈注射によって投与した。
実験観察及び測定：腫瘍接種後、腫瘍成長及び治療が動物の正常行動に及ぼす効果を、具体的には、実験動物の活動、摂食及び飲水状態、体重の増減（体重は週２回測定）、及びその他、眼、毛髪等の異常状態を含め、従来どおりモニタした。
マウスの体重並びに腫瘍塊の長径（ａ）及び短径（ｂ）を週２回測定した。腫瘍容積（ＴＶ）の計算式は、ＴＶ＝１／２×ａ×ｂ２である。
４）実験結果及び分析
マウスの腫瘍容積の変化によれば（図７Ａ～図７Ｅ）、マウスにおけるＫＢ、ＰＣ－９、ＳＰＣ－Ａ１、ＣＡＬＵ－３及びＤＵ１４５細胞株のＣＤＸ腫瘍モデルにおいてＣＢ－１８Ｇは良好な阻害効果を有することが分かる。
７．ヒト化ＨＰＡＦ－ＩＩ、ＮＣＩ－Ｈ２２６及びＳＣＬＣ－２１Ｈ細胞株の皮下異種移植モデル（ＣＤＸ）におけるコンジュゲート化合物ＣＢ－１０２０、ＣＢ－１３２０及びＣＢ－１８２０の腫瘍成長阻害実験
実験目的：ＣＤＸモデルにおけるリガンドコンジュゲートＣＢ－１０２０、ＣＢ－１３２０及びＣＢ－１８２０の薬力学的研究
主なＣＤＸモデル：ＨＰＡＦ－ＩＩ（ヒト膵癌細胞）、ＮＣＩ－Ｈ２２６（ヒト肺癌細胞）及びＳＣＬＣ－２１Ｈ（小細胞肺癌細胞）
実験スキーム：
細胞又は腫瘍組織塊を調製し、ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスの右前腹部に皮下接種した。腫瘍容積が８０～１６０ｍｍ３に拡大したところで無作為化群分けを実施し、モデル対照群及び投与群をセットした。マウスには群分けの初日から投与し、ここで投与用量は、最新の体重測定値に基づき調整した。マウスには、尾静脈注射によって１０μｌ／ｇの投与容積で投与した。群分け及び投与後、腫瘍成長及び治療が動物の正常行動に及ぼす効果を、具体的には、実験動物の活動、摂食及び飲水状態、体重の増減状態、及びその他、眼、毛髪等の異常状態を含め、モニタした。群分け及び投与後、マウスの体重を週２回測定して体重変化率を計算した；同時に、腫瘍の長径及び短径をノギスで測定し、腫瘍容積、相対腫瘍増殖率、腫瘍容積阻害率及び他の指標を計算した。腫瘍容積の式はＴＶ＝０．５ａ×ｂ２（式中、ａは腫瘍の長径であり、ｂは腫瘍の短径である）である。
ＣＢ－１０２０は、ヒト化ＨＰＡＦ－ＩＩ細胞株の皮下異種移植モデルにおいて明らかな抗腫瘍成長効果を有する；ＣＢ－１３２０は、ＮＣＩ－Ｈ２２６及びＳＣＬＣ－２１Ｈ細胞株の皮下異種移植モデルにおいて明らかな抗腫瘍成長効果を有する；及びＣＢ－１８２０は、ＳＣＬＣ－２１Ｈ細胞株の皮下異種移植モデルにおいて明らかな抗腫瘍成長効果を有する。
８．ヒト化ＣＡＬＵ－３、ＳＣＬＣ－２１Ｈ及びＳＰＣ－Ａ１細胞株の皮下異種移植モデル（ＣＤＸ）におけるコンジュゲート化合物ＣＲ１９４２８の腫瘍成長阻害実験
実験スキーム：腫瘍組織塊を調製し、ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスの右前腹部に皮下接種した。腫瘍容積が８０～１６０ｍｍ３に拡大したところで無作為化群分けを実施し、モデル対照群及び投与群をセットした。マウスには群分けの初日から投与し、ここで投与用量は、最新の体重測定値に基づき調整した。マウスには、尾静脈注射によって１０μｌ／ｇの投与容積で週２回、３週連続で投与した。群分け及び投与後、腫瘍成長及び治療が動物の正常行動に及ぼす効果を、具体的には、実験動物の活動、摂食及び飲水状態、体重の増減状態、及びその他、眼、毛髪等の異常状態を含め、モニタした。群分け及び投与後、マウスの体重を週２回測定して体重変化率を計算した；同時に、腫瘍の長径及び短径をノギスで測定し、腫瘍容積、相対腫瘍増殖率、腫瘍容積阻害率及び他の指標を計算した。腫瘍容積の式はＴＶ＝０．５ａ×ｂ２（式中、ａは腫瘍の長径であり、ｂは腫瘍の短径である）である。
ＣＲ－１９４２８は、リガンドＦＯＬＲ１及びＦＯＬＨ１とペイロードＤｘｄとの薬物コンジュゲートである。上記の表から、この薬物コンジュゲートがヒト化ＣＡＬＵ－３、ＳＣＬＣ－２１Ｈ及びＳＰＣ－Ａ１細胞株の皮下異種移植モデルにおいて明らかな抗腫瘍成長効果を有することが分かる。
９．肺癌ＬＵ２５０５モデル（ＰＤＸモデル）におけるコンジュゲート化合物ＣＢＰ－１０１８の有効性に関する試験
この実験には、急速に成長する腫瘍モデルである第３世代の肺癌ＰＤＸモデルＬＵ２５０５（アジア人女性患者由来）を使用した。ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスが皮下に腫瘍を担持し、腫瘍容積が約１５０ｍｍ３に達したところで、低用量、中用量及び高用量試験サンプル群、小分子ＭＭＡＥ対照群、ターゲティングポリペプチド２０ＢＫ－ＳＭ０９対照群、及びブランク対照群（合計６群、及び各群８匹のマウス）に群分けした；群分け後１日目、８日目及び１５日目にマウスに投与した；及び観察は最終回の投与後１４日間継続した。試験サンプルＣＢＰ－１０１８の活性物質はＣＢ－２０ＢＫであり、これは、ＣＢ－２０ＢＫを補助材料と混合し、次にそれを凍結乾燥することによって得られる。
表２６及び図８Ａに示されるとおり：
いずれの群の動物も異常な臨床症状を示さず、投与後の死亡もない；及び各群の動物の体重はゆっくりと増加する。
ブランク対照群、２０ＢＫ－ＳＭ０９群、及び低用量ＣＢＰ－１０１８群の動物は、２２日目、２２日目、及び２６日目（Ｄ２６）に平均腫瘍容積が２０００ｍｍ３を超えたため安楽死させた。従って、表２６の体重、腫瘍容積、及び腫瘍成長阻害率のデータは、Ｄ２２に得られたデータである。
注射用ＣＢＰ－１０１８の有効性には明らかな用量相関があり、注射用ＣＢＰ－１０１８は低用量群では無効で、中用量群及び高用量群では有効であった。高用量群の腫瘍は１９日目（Ｄ１９）に完治し、２９日目（Ｄ２９）にも腫瘍成長の徴候は見られなかった。
ポリペプチド２０ＢＫ－ＳＭ０９群は明らかな腫瘍成長阻害効果を示さなかったことから、単一のターゲティングポリペプチドは明白な抗腫瘍効果を生じるには十分でないことが示唆される。
ＭＭＡＥ群は明白な腫瘍成長阻害効果を示した。０．３７５ｍｇ／ｋｇのＭＭＡＥ及び１．５ｍｇ／ｋｇのＣＢＰ－１０１８に等モルＭＭＡＥが含まれる。比較から、１．５ｍｇ／ｋｇのＣＢＰ－１０１８の腫瘍成長阻害効果がＭＭＡＥ群と比べて有意に良好であることが分かり、リガンドターゲティングの利点が示唆される（腫瘍成長阻害率：８２．６０％対４８．９７％）。
１０．肺癌ＬＵ１２０６モデル（ＰＤＸモデル）におけるコンジュゲート化合物ＣＢＰ－１０１８の有効性に関する試験
この実験には、急速に成長する腫瘍モデルである第５世代の肺癌ＰＤＸモデルＬＵ１２０６（アジア人女性患者由来）を使用した。ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスが皮下に腫瘍を担持し、腫瘍容積が約１５０ｍｍ３に達したところで、低用量、中用量及び高用量試験サンプル群、小分子ＭＭＡＥ対照群、ターゲティングポリペプチド２０ＢＫ－ＳＭ０９対照群、及びブランク対照群（合計６群、及び各群８匹のマウス）に群分けした；群分け後１日目、８日目及び１５日目にマウスに投与した；及び観察は最終回の投与後１４日間継続した。
表２７及び図８Ｂに示されるとおり：
いずれの群の動物も異常な臨床症状を示さず、投与後の死亡もなく、動物は全て２９日目に安楽死させた。各群の動物の体重は基本的には変化しないままであったとともに、投与初日と比べてやや増えている。
注射用ＣＢＰ－１０１８の有効性には明らかな用量相関があり、注射用ＣＢＰ－１０１８は低用量群では無効で（８．０８％の腫瘍成長阻害率）、中用量群及び高用量群では有効であり、それぞれ７５．２１％及び９７．４２％の腫瘍成長阻害率であった。低用量群と中用量群との間の有効性の違いは比較的大きい。
ポリペプチド２０ＢＫ－ＳＭ０９群は明らかな腫瘍成長阻害効果を示さなかったことから、単一のターゲティングポリペプチドは、このモデルで明白な抗腫瘍効果を生じるには十分でないことが示唆される。
ＭＭＡＥ群は明白な腫瘍成長阻害効果を示した。０．３７５ｍｇ／ｋｇのＭＭＡＥ及び１．５ｍｇ／ｋｇのＣＢＰ－１０１８に等モルのＭＭＡＥが含まれる。比較から、１．５ｍｇ／ｋｇのＣＢＰ－１０１８の腫瘍成長阻害効果がＭＭＡＥ群と比べて有意に良好であることが分かり、リガンドターゲティングの利点が示唆される（腫瘍容積阻害率：７５．２１％対３６．０３％；腫瘍重量阻害率：７８．３８％対５４．５３％）。
１１．腫瘍担持マウス（ＰＤＸモデルＬＵ２５０５）の組織分布
ＨｕＰｒｉｍｅ（登録商標）肺癌ＬＵ２５０５モデルの腫瘍塊を接種した１２匹の雌腫瘍担持マウス及び１２匹の健常雄ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスに１．５ｍｇ／１４０μＣｉ／ｋｇの［３Ｈ］ＣＢＰ－１０１８（ＭＭＡＥに同位体標識）を単回尾静脈注射によって与えた。それぞれ０．５時間、２時間、６時間及び２４時間の時点で３匹の雄マウス及び３匹の雌マウスを誘導箱に入れ、適量の二酸化炭素を吸入させることにより麻酔した；及び血液を心穿刺により採取し、次に直ちに安楽死を行いサンプルを採取した。
上記の表から、雄と雌との間で動物組織分布に差が示されないことが分かる；投与後、薬物は主に腎臓、全血（主に血漿に分布する）、肝臓及び肺に分布する；全ての組織において、０．５時間で最も高い濃度が見られ、次に薬物は急速に排出され、ここで最も遅い排出は肝臓及び腫瘍に見られる；及び腫瘍のこの遅い排出は、有効性の点でのＣＢＰ－１０１８の利点を説明するものであり得る。
１２．ラットにおける排泄実験
半分が雄で半分が雌の６匹の正常ＳＤラットに、単回尾静脈注射によって０．７５ｍｇ／７０μＣｉ／ｋｇの［３Ｈ］ＣＢＰ－１０１８を与えた。指示される時間間隔で、尿、糞便、ケージフラッシュ／洗浄液及び完全体ラットの死体などのサンプルを投与前及び投与後０～１６８時間に採取し、ＢＤＣラットの胆汁、尿、糞便及びケージフラッシュ／洗浄液などのサンプルを投与前及び投与後０～７２時間に採取した。上述のサンプルは低温の冷蔵庫（－１０℃～－３０℃）に凍結保存した。
各サンプルに、適量のシンチレーション液を加え、均一に混合し、次に液体シンチレーションカウンターを用いて放射能量を測定した。胆汁、尿、糞便、ケージフラッシュ／洗浄液及び死体などのサンプルで測定された放射能量を用いて投与用量に対する割合を計算した。血漿サンプル中の放射能量を用いてサンプル１グラム当たりの全放射能を計算した。ＷｉｎＮｏｎＬｉｎソフトウェア（バージョン７．０、Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ）を使用してノンコンパートメントモデルに従い全血漿放射能の主な薬物動態パラメータを計算した。
上記の表から、ＣＢＰ－１０１８は主に尿中に排泄され、これが全投与用量の約５７％を占め、糞便中に排泄された量は２５％未満を占めることが分かる。腎臓を経て主に尿中に排泄されるという結果は、ヌードマウスの組織分布で腎臓に大きく分布するという知見と整合する。
１３．血漿安定性
１μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ及び１００μｇ／ｍＬの濃度のＣＢＰ－１００８（その活性物質は、国際公開第２０１７０２５０４７ Ａ１号パンフレットに記載されるＬＤＣ１０Ｂであり、ＣＢＰ－１００８は、ＬＤＣ１０Ｂを補助材料と混合し、それを凍結乾燥することにより得られる；国際公開第２０１７０２５０４７Ａ１号パンフレットは全体として参照により援用される）及びＣＢＰ－１０１８を種々の種の血漿と共に３７℃で２時間インキュベートして、これらの２つの化合物の安定性を観察した。結果は（表３０にある）、ＣＢＰ－１０１８が様々な種の血漿中で安定しており、２時間インキュベートした後のその残留率が０時間における濃度の９０％を上回ることを示している。しかしながら、ＣＢＰ－１００８はラットの血漿中においてのみ安定しており（８７．９２％～９１．８２％残留率）、他の種の血漿中では不安定で、０．７５１％～２４．５２％の残留率に過ぎない。
これらの実験結果は、ＣＢＰ－１０１８の血漿安定性がＣＢＰ－１００８よりも良好であることを示唆している。
１４．ＰＫにおける半減期
血漿安定性の比較と一致して、ＣＢＰ－１０１８の薬物動態学的半減期（約１時間）はラット及びカニクイザルにおいてＣＢＰ－１００８（約２０分）よりも有意に長く、ＣＢＰ－１０１８の安定性がＣＢＰ－１００８より高いことが示唆される。

Claims (38)

  1. ペイロードと２つのターゲティング分子とを含み、
    前記２つのターゲティング分子が、それぞれ、相乗作用分子部分及び前立腺特異的膜抗原リガンド部分であり、
    前記相乗作用分子が、ＦＯＬＲ１、ＴＲＰＶ６、ＳＳＴＲ２、及びＧＮＲＨＲからなる群から選択される分子に結合する、
    コンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
  2. 前記前立腺特異的膜抗原リガンドが、以下の構造：
    を有する、請求項１に記載のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
  3. 前記前立腺特異的膜抗原リガンドが、以下の構造：
    を有する、請求項１に記載のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
  4. 前記前立腺特異的膜抗原リガンドが、以下の構造：
    を有する、請求項１に記載のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
  5. 前記前立腺特異的膜抗原リガンドが、以下の構造：
    を有する、請求項１に記載のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
  6. 前記相乗作用分子が、Ｐ１０、式（Ｉ）によって表されるリガンド部分：
    又は、下記の構造を有するリガンド部分：
    である、請求項１～５のいずれか一項に記載のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
  7. ペイロードと２つのターゲティング分子とを含み、
    前記２つのターゲティング分子が、それぞれ、相乗作用分子部分及び式（Ｉ）によって表されるリガンド部分：
    であり、
    前記相乗作用分子が、ＦＯＬＲ１に結合する、
    コンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
  8. ペイロードと２つのターゲティング分子とを含み、
    前記２つのターゲティング分子が、それぞれ、相乗作用分子部分及びＰ１０であり、
    前記相乗作用分子が、ＦＯＬＲ１に結合し、
    前記ペイロードがカンプトテシン又はその誘導体であり、
    カンプトテシンの前記誘導体が、イリノテカン、ＳＮ－３８、Ｄｘｄ、トポテカン、ＧＩ－１４７２１１Ｃ、トポテカン、９－アミノカンプトテシン、７－ヒドロキシメチルカンプトテシン、７－アミノメチルカンプトテシン、１０－ヒドロキシカンプトテシン、（２０Ｓ）－カンプトテシン、９－ニトロカンプトテシン、ギマテカン、カレニテシン、シラテカン、エキサテカン、ジフロモテカン、ベロテカン、ルルトテカン及びＳ３９６２５からなる群より選択される、
    コンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
  9. 前記相乗作用分子が葉酸塩又はその類似体であり、
    葉酸塩の前記類似体が、５－メチルテトラヒドロ葉酸、５－ホルミルテトラヒドロ葉酸、メトトレキサート、及び５，１０－メチレンテトラヒドロ葉酸からなる群より選択される、
    請求項１～８のいずれか一項に記載のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
  10. １、２、３、４個又はそれ以上のペイロードを含む、請求項１又は７に記載のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
  11. 前記ペイロードが、小分子化合物、ヌクレオチド、ペプチド、及びタンパク質からなる群から選択される、請求項１又は７に記載のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
  12. 前記ペイロードが小分子化合物である、請求項１１に記載のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
  13. 前記小分子化合物が、カンプトテシン及びその誘導体、アウリスタチン及びその誘導体、メイタンシン、放射性核種錯体、シクロオキシゲナーゼ－２阻害薬、パクリタキセル、エポチロン、ブレオマイシン、ダクチノマイシン、プリカマイシン、及びマイトマイシンＣからなる群から選択され、
    カンプトテシンの前記誘導体が、イリノテカン、ＳＮ－３８、Ｄｘｄ、トポテカン、ＧＩ－１４７２１１Ｃ、トポテカン、９－アミノカンプトテシン、７－ヒドロキシメチルカンプトテシン、７－アミノメチルカンプトテシン、１０－ヒドロキシカンプトテシン、（２０Ｓ）－カンプトテシン、９－ニトロカンプトテシン、ギマテカン、カレニテシン、シラテカン、エキサテカン、ジフロモテカン、ベロテカン、ルルトテカン及びＳ３９６２５からなる群より選択され、
    アウリスタチンの前記誘導体が、モノメチルアウリスタチンＥ、モノメチルアウリスタチンＦ、モノメチルアウリスタチンＤ、ＡＦＰ及びＡＦＨＰＡからなる群より選択される、
    請求項１２に記載のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
  14. 前記小分子化合物が、カンプトテシン又はその誘導体、アウリスタチン又はその誘導体、放射性核種錯体又はシクロオキシゲナーゼ－２阻害薬であり、
    カンプトテシンの前記誘導体が、イリノテカン、ＳＮ－３８、Ｄｘｄ、トポテカン、ＧＩ－１４７２１１Ｃ、トポテカン、９－アミノカンプトテシン、７－ヒドロキシメチルカンプトテシン、７－アミノメチルカンプトテシン、１０－ヒドロキシカンプトテシン、（２０Ｓ）－カンプトテシン、９－ニトロカンプトテシン、ギマテカン、カレニテシン、シラテカン、エキサテカン、ジフロモテカン、ベロテカン、ルルトテカン及びＳ３９６２５からなる群より選択され、
    アウリスタチンの前記誘導体が、モノメチルアウリスタチンＥ、モノメチルアウリスタチンＦ、モノメチルアウリスタチンＤ、ＡＦＰ及びＡＦＨＰＡからなる群より選択される、
    請求項１３に記載のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
  15. 前記ペイロードが前記ターゲティング分子のうちの少なくとも１つにリンカーを介して連結される、請求項１～１４のいずれか一項に記載のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
  16. 前記リンカーが、ペプチドリンカー、ジスルフィドリンカー、ｐＨ依存性リンカー又は上述のリンカーの組み合わせである、請求項１５に記載のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
  17. 前記ペプチドリンカーが、ある種の生理環境下でプロテアーゼ切断又は還元によって切断可能である、請求項１６に記載のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
  18. 前記ペプチドリンカーが、システイン、リジン、リジン－リジン、バリン－シトルリン、フェニルアラニン－リジン、バリン－リジン、システイン－リジン、システイン－グルタミン酸、アスパラギン酸－アスパラギン酸、及びアスパラギン酸－アスパラギン酸－リジンからなる群から選択され、任意選択で、上述のアミノ酸中のカルボン酸がアミド化されている、請求項１６又は１７に記載のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
  19. 前記ジスルフィドリンカーが、ＤＭＤＳ、ＭＤＳ、ＤＳＤＭ及びＮＤＭＤＳからなる群から選択される、請求項１６に記載のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
  20. 前記ｐＨ依存性リンカーがシスアコニット酸無水物である、請求項１６に記載のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
  21. 前記リンカーが、以下の構造：
    を有するか、
    又は前記リンカーが上述の構造の組み合わせ及びペプチドリンカーである、請求項１５に記載のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
  22. 前記２つのターゲティング分子が互いにスペーサーを介して連結される、請求項１～２１のいずれか一項に記載のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
  23. 前記スペーサーが、配列番号１～１４、Ａｒｇ－Ａｒｇ、Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ、Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｒｇ、Ｐｒｏ－Ａｒｇ及びＰｒｏ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙからなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項２２に記載のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
  24. 前記コンジュゲート化合物が、以下の化合物：
    （式中、Ｍは放射性核種である）からなる群から選択される、請求項１に記載のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
  25. 前記コンジュゲート化合物が、
    である、請求項７に記載のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
  26. 前記コンジュゲート化合物が、
    である、請求項８に記載のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
  27. 請求項１～２６のいずれか一項に記載のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩と、薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物。
  28. 前記組成物が、静脈内に、皮下に、経口的に、筋肉内に又は脳室内に投与される、請求項２７に記載の医薬組成物。
  29. ペイロードをそれを必要としている対象に送達するための、請求項１～２６のいずれか一項に記載のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩、又は請求項２７又は２８に記載の医薬組成物。
  30. 対象の疾患を治療するための、請求項１～２６のいずれか一項に記載のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩、又は請求項２７又は２８に記載の医薬組成物。
  31. 前記疾患が、癌、免疫疾患、心血管疾患、代謝疾患、及び神経学的疾患からなる群から選択される、請求項３０に記載のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩、又は医薬組成物。
  32. 前記癌が、前立腺癌、乳癌、肺癌、腎癌、白血病、卵巣癌、胃癌、子宮癌、子宮内膜癌、肝癌、結腸癌、甲状腺癌、膵癌、結腸直腸癌、食道癌、精巣癌、皮膚癌、リンパ腫、及び多発性骨髄腫からなる群から選択される、請求項３１に記載のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩、又は医薬組成物。
  33. 前記免疫疾患が自己免疫疾患である、請求項３１に記載のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩、又は医薬組成物。
  34. 前記自己免疫疾患が、結合組織病、全身性硬化症、関節リウマチ、及び全身性エリテマトーデスからなる群から選択される、請求項３３に記載のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩、又は医薬組成物。
  35. 前記心血管疾患が、アンギナ、心筋梗塞、脳卒中、心臓発作、高血圧性心疾患、リウマチ性心疾患、心筋症、不整脈、及び先天性心疾患からなる群から選択される、請求項３１に記載のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩、又は医薬組成物。
  36. 前記代謝疾患が、糖尿病、痛風、肥満、低血糖症、高血糖症、及び脂質異常症からなる群から選択される、請求項３１に記載のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩、又は医薬組成物。
  37. 前記神経学的疾患が、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、頭部傷害、多発性硬化症、眩暈、昏睡、及び癲癇からなる群から選択される、請求項３１に記載のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩、又は医薬組成物。
  38. 前記治療が、前記コンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩、又は前記医薬組成物と組み合わせて１つ以上の療法剤を投与することを含む、請求項３０～３７のいずれか一項に記載のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容可能な塩、又は医薬組成物。
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Families Citing this family (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2022099762A1 (zh) * 2020-11-12 2022-05-19 博瑞生物医药（苏州）股份有限公司 一种抗体偶联物中间体及其制备方法
CN117693365A (zh) * 2021-06-25 2024-03-12 同宜医药（苏州）有限公司 配体药物偶联物及其应用
US11806405B1 (en) 2021-07-19 2023-11-07 Zeno Management, Inc. Immunoconjugates and methods
TW202320858A (zh) 2021-07-19 2023-06-01 美商薩諾管理公司 免疫接合物及方法
TW202327659A (zh) * 2021-10-19 2023-07-16 大陸商同宜醫藥（蘇州）有限公司 偶聯體藥物製劑及其製備方法和用途
TW202404643A (zh) * 2022-04-20 2024-02-01 大陸商同宜醫藥（蘇州）有限公司 化合物及用途
EP4514391A1 (en) * 2022-04-27 2025-03-05 Daiichi Sankyo Company, Limited Combination of antibody-drug conjugate with ezh1 and/or ezh2 inhibitor
WO2024008102A1 (en) * 2022-07-05 2024-01-11 Wuxi Xdc (Shanghai) Co., Ltd. Linker for conjugation
CN119855612A (zh) * 2022-09-09 2025-04-18 同宜医药（苏州）有限公司 放射性核素偶联药物及其药物组合物和应用
JP2025537882A (ja) * 2022-11-17 2025-11-20 ハンス－ゲオルク レルケン 腫瘍微小環境において切断可能な小分子－薬物コンジュゲート
TW202423403A (zh) * 2022-12-09 2024-06-16 大陸商中山大學孫逸仙紀念醫院 一種治療前列腺癌的藥物組合及其應用
TW202428259A (zh) * 2022-12-23 2024-07-16 大陸商同宜醫藥（蘇州）有限公司 藥物組成物及其製備方法和用途
CN116271081A (zh) * 2023-04-04 2023-06-23 上海愿智生物技术有限公司 一种抗体偶联药物yc1605及其药物组合物和应用
WO2024222803A1 (zh) * 2023-04-26 2024-10-31 同宜医药（苏州）有限公司 一种配体-药物偶联体在治疗癌症中的用途
CN120835792A (zh) * 2023-05-24 2025-10-24 杭州禧鹤生物科技有限公司 抗体-药物偶联物靶向治疗前列腺癌和其他肿瘤
WO2025092703A1 (zh) * 2023-10-30 2025-05-08 同宜医药（苏州）有限公司 光敏剂偶联体化合物及其药物组合物和应用
WO2025262130A1 (en) * 2024-06-19 2025-12-26 BioNTech SE Antibody drug conjugate
WO2025260285A1 (en) * 2024-06-19 2025-12-26 Duality Biologics (Suzhou) Co., Ltd. Antibody drug conjugate
WO2026059501A1 (en) * 2024-09-13 2026-03-19 Hummingbird Bioscience Pte. Ltd. Linker moieties

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2016506372A (ja) 2012-11-15 2016-03-03 エンドサイト・インコーポレイテッドＥｎｄｏｃｙｔｅ， Ｉｎｃ． 薬物送達結合体およびｐｓｍａ発現細胞によって引き起こされる疾患の治療方法
WO2017205447A1 (en) 2016-05-24 2017-11-30 Endocyte, Inc. Methods of treating cancer with a psma ligand-tubulysin compound
JP2018512390A (ja) 2015-03-01 2018-05-17 エンドサイト・インコーポレイテッドＥｎｄｏｃｙｔｅ， Ｉｎｃ． Ｐｓｍａリガンド−チューブリシン化合物を用いた癌の処置方法
JP2018529632A (ja) 2015-08-11 2018-10-11 コヒレント バイオファーマ 多リガンド−薬物複合体及びその使用

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006093991A1 (en) 2005-03-02 2006-09-08 The Cleveland Clinic Foundation Compounds which bind psma and uses thereof
US9056841B2 (en) 2009-03-19 2015-06-16 The Johns Hopkins University PSMA-targeting compounds and uses thereof
CN106466484B (zh) * 2015-08-11 2021-05-04 同宜医药（苏州）有限公司 一种具有细胞内吞介导功能的多靶向配体-药物偶联体
CN106433063A (zh) 2015-08-12 2017-02-22 普立万聚合体（上海）有限公司 含有蓝光阻隔添加剂的混合物
CN107412794B (zh) * 2017-04-17 2019-01-04 中国医学科学院北京协和医院 双靶点显像分子探针及其制备方法和应用
CN107970453A (zh) * 2017-12-05 2018-05-01 北京林业大学 一种叶酸修饰的果胶纳米粒子的双靶向递送方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2016506372A (ja) 2012-11-15 2016-03-03 エンドサイト・インコーポレイテッドＥｎｄｏｃｙｔｅ， Ｉｎｃ． 薬物送達結合体およびｐｓｍａ発現細胞によって引き起こされる疾患の治療方法
JP2018512390A (ja) 2015-03-01 2018-05-17 エンドサイト・インコーポレイテッドＥｎｄｏｃｙｔｅ， Ｉｎｃ． Ｐｓｍａリガンド−チューブリシン化合物を用いた癌の処置方法
JP2018529632A (ja) 2015-08-11 2018-10-11 コヒレント バイオファーマ 多リガンド−薬物複合体及びその使用
WO2017205447A1 (en) 2016-05-24 2017-11-30 Endocyte, Inc. Methods of treating cancer with a psma ligand-tubulysin compound

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
The Prostate，2014年，Vol.74，pp.659-668

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