JP7587528B2 - Ｃｂｌ－ｂ阻害のためのシアノシクロブチル化合物及びその使用 - Google Patents

Ｃｂｌ－ｂ阻害のためのシアノシクロブチル化合物及びその使用 Download PDF

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Description

関連出願の相互参照
[0001] 本願は、米国特許法第１１９条に基づき、２０１９年５月１７日に出願された米国仮特許出願第６２／８４９，７２２号；２０１９年７月３０日に出願された同第６２／８８０，４３７号；２０１９年８月１９日に出願された同第６２／８８８，８４５号；及び２０１９年８月１９日に出願された同第６２／８８８，８７０号の利益を主張するものであり、各々の内容は全体として参照により本明細書に援用される。
分野
[0002] 本明細書には、Ｃｂｌ－ｂ酵素を阻害するための化合物及び組成物並びに免疫系の調節、疾患の処置、及び細胞のインビボ、インビトロ、又はエキソビボ処置におけるその使用方法が提供される。また、本明細書には、Ｃｂｌ－ｂ酵素の阻害薬と癌ワクチンとの組み合わせを含む医薬組成物、キット、及び癌の処置方法；並びにＣｂｌ－ｂ酵素の阻害薬と腫瘍溶解性ウイルスとの組み合わせを含む医薬組成物、キット、及び癌の処置方法も提供される。
背景
[0003] ユビキチンプロテアソーム経路は、タンパク質機能及び異化の制御に関わる複雑なシステムである。真核細胞のタンパク質は、７６アミノ酸、８．５キロダルトンのタンパク質であるユビキチンを抱合する。ユビキチン化として公知のこの抱合の結果、標的タンパク質の機能変化又は分解が生じる。標的タンパク質のユビキチン化は、ユビキチン並びにＥ１、Ｅ２、及びＥ３酵素として公知の一組の酵素が関わる一連の反応の組み合わせを経て起こる。ユビキチンは、ユビキチン活性化酵素、即ちＥ１酵素によって活性化される。次にユビキチンは、ユビキチン結合酵素、即ちＥ２酵素に転移する。最後に、ユビキチンリガーゼ、即ちＥ３酵素が、Ｅ２酵素から標的タンパク質へのユビキチンの転移を促進する。標的タンパク質のポリユビキチン化が主なシグナルとして働くと、ユビキチンを抱合したタンパク質のプロテアソーム分解につながり、そこでタンパク質がタンパク質分解を受けることになる。Ｅ３リガーゼによるユビキチン化はまた、タンパク質活性、相互作用、又は局在化にも変化を生じさせ得る。ユビキチン化は、細胞分裂、ＤＮＡ修復、及び細胞シグナル伝達を含め、多様な生物学を制御する。
[0004] 細胞におけるタンパク質の合成及び分解は、細胞周期制御、細胞増殖、アポトーシス、及び他の多くの細胞過程に決定的に重要である。従って、ユビキチンプロテアソーム経路が調節可能になると、疾患過程に介入する機会が豊富に得られる。介入機構には、癌遺伝子産物の分解亢進、腫瘍抑制タンパク質の分解低下、免疫細胞応答の調節、及び抗腫瘍免疫応答の調節が含まれ得る。
[0005] 数多くの臨床試験で治療用癌ワクチンが評価されている。しかしながら、米国で使用が許可されている治療用癌ワクチンは、２つのみである。詳細には、膀胱癌の処置にウシ型結核菌（Mycobacterium bovis）のカルメット・ゲラン桿菌株が承認されており、前立腺癌の処置にエキソビボ活性化型自己細胞ワクチンが承認されている。それでも、癌ワクチンで処置される患者の奏効率及び全生存期間は、理想を大幅に下回る。従って、当該技術分野では、癌ワクチンの有効性を改善する方法が必要とされている。
[0006] 癌の処置に腫瘍溶解性ウイルスを採用する臨床試験は数多く行われているが、米国及び欧州で使用が許可されている腫瘍溶解性ウイルスは、１つのみである。詳細には、タリモジーン・ラハーパレプベックが、黒色腫の処置に承認されている遺伝子修飾型単純ヘルペスウイルスである。しかしながら、タリモジーン・ラハーパレプベックですら、全生存期間の改善又は内臓転移を有する患者への利益は見られていない。従って、当該技術分野では、腫瘍溶解性ウイルス治療の有効性を改善する方法が必要とされている。
[0007] ヒトゲノムでは、約３５種のＥ２酵素及び５００種を超えるＥ３酵素がコードされる。Ｃａｓｉｔａｓ Ｂ系統リンパ腫癌遺伝子ｂ（Ｃｂｌ－ｂ）は、Ｔ細胞活性化を負に制御するＥ３ユビキチンリガーゼである（Wallner et al., Clin Dev Immunol, 2012: 692639）。従ってＥ２又はＥ３酵素を調節する薬剤が発見されれば、特定のＥ２又はＥ３酵素が関わる疾患過程に対抗する治療の可能性がもたらされる。本特許出願は、１つのかかるＥ３酵素、Ｃａｓｉｔａｓ Ｂ系統リンパ腫癌遺伝子ｂ（Ｃｂｌ－ｂ）を阻害する薬剤；癌ワクチンと組み合わせた使用のための、Ｃｂｌ－ｂを阻害する薬剤、及びＣｂｌ－ｂ阻害薬と癌ワクチンとを含む医薬組成物；及び腫瘍溶解性ウイルスと組み合わせた使用のための、Ｃｂｌ－ｂを阻害する薬剤、及びＣｂｌ－ｂ阻害薬と腫瘍溶解性ウイルスとを含む医薬組成物に関する。
概要
[0008] 本明細書には、Ｃｂｌ－ｂ酵素を阻害するための化合物及び組成物並びに免疫系の調節、疾患の処置、及び細胞のインビボ、インビトロ、又はエキソビボ処置におけるその使用方法が開示される。また、本明細書には、癌の処置におけるＣｂｌ－ｂ阻害薬の使用方法も開示される。端的には、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬は、癌を有する個体に対し、単独で投与されるか、又は併用治療の一部として、免疫チェックポイント阻害薬、抗新生物剤、及び放射線治療のうちの１つ以上と共に投与されるかのいずれかである。加えて、本明細書に開示されるとおりの化合物又は組成物によってインビボ及び／又はインビトロ処置される細胞が、癌を処置するための養子細胞治療で使用されてもよい。
[0009] 本明細書には、式（Ｉ）の化合物
Figure 0007587528000001
又はその互変異性体、その立体異性体、若しくはその薬学的に許容可能な塩［式中、
Figure 0007587528000002
は、
Figure 0007587528000003
であり；
Ｚ１は、ＣＨ又は窒素であり；
Ｚ２は、ＣＨ又は窒素であり；
Ｒ１は、水素、Ｃ１～Ｃ６アルキル、又はＣ１～Ｃ６ハロアルキルであり；
Ｒ２は、水素、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキル、又はＣ３～Ｃ６シクロアルキルであり；
Ｒ３は、－ＣＦ３又はシクロプロピルであり；
Ｒ４は、－ＣＦ３又はシクロプロピルであり；
Ｘは、水素、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキル、又は、
Figure 0007587528000004
であり；
Ｒ５は、水素、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキル、Ｃ１～Ｃ６アルキル－ＯＨ、又はＣ１～Ｃ６アルキル－ＣＮであり；
Ｒ６は、単環式Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、縮合二環式Ｃ４～Ｃ８シクロアルキル、架橋二環式Ｃ４～Ｃ８シクロアルキル、スピロ二環式Ｃ５～Ｃ８シクロアルキル、又は５～６員環ヘテロシクリルであり、これらの各々は、１～５個のＲ７基によって任意選択で置換されているか；
又はＲ５及びＲ６は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、５～１０員環単環式、縮合二環式、若しくは架橋ヘテロシクリル、又は５～１０員環単環式若しくは二環式ヘテロアリールを形成し、このヘテロシクリル又はヘテロアリールの各々は、窒素及び酸素からなる群から選択される１～２個の更なるヘテロ原子を任意選択で含み、及びこのヘテロシクリル又はヘテロアリールの各々は、１～５個のＲ８基によって任意選択で置換されており；
各Ｒ７は、独立に、ハロ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキル、Ｃ１～Ｃ６アルキル－ＯＨ、又はＣ１～Ｃ６アルキル－ＣＮであり；
各Ｒ８は、独立に、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキル、Ｃ１～Ｃ６アルキル－ＯＨ、－ＣＮ、Ｃ１～Ｃ６アルキル－ＣＮ、－（Ｃ１～Ｃ６アルキレン）－Ｏ－（Ｃ１～Ｃ６アルキル）、ヒドロキシ、又はハロであるか、
又は同じ炭素原子に結合した２個のＲ８基が、それらが結合している炭素原子と一緒になって、スピロＣ３～Ｃ６シクロアルキル又はスピロ５～６員環ヘテロシクリルを形成し；
各Ｒ９は、独立に、水素、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキル、又はＣ１～Ｃ６アルキル－ＯＨであり；及び
ｎは、０又は１である］が提供される。
[0010] 一部の実施形態において、
Figure 0007587528000005
は、
Figure 0007587528000006
である。一部の実施形態において、Ｚ１は、ＣＨである。一部の実施形態において、Ｚ１は、Ｎである。
[0011] 一部の実施形態において、
Figure 0007587528000007
は、
Figure 0007587528000008
である。
[0012] 一部の実施形態において、
Figure 0007587528000009
は、
Figure 0007587528000010
である。一部の実施形態において、Ｚ２は、ＣＨである。一部の実施形態において、Ｚ２は、Ｎである。
[0013] 一部の実施形態において、
Figure 0007587528000011
は、
Figure 0007587528000012
である。
[0014] 一部の実施形態において、Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ３アルキル、又はＣ１～Ｃ３ハロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ１は、Ｈ、－ＣＨ３、又は－ＣＦ３である。
[0015] 一部の実施形態において、Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３ハロアルキル、又はＣ３～Ｃ４シクロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ２は、Ｈ、－ＣＨ３、－ＣＦ３、－ＣＨＦ２、－ＣＨ２Ｆ、又はシクロプロピルである。
[0016] 一部の実施形態において、ｎは、０である。一部の実施形態において、ｎは、１である。
[0017] 一部の実施形態において、Ｘは、Ｈである。一部の実施形態において、Ｘは、Ｃ１～Ｃ３アルキル又はＣ１～Ｃ３ハロアルキルである。一部の実施形態において、Ｘは、－ＣＨ３又は－ＣＦ３である。
[0018] 一部の実施形態において、Ｘは、
Figure 0007587528000013
である。
[0019] 一部の実施形態において、Ｒ５は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ３アルキル、又はＣ１～Ｃ３ハロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ５は、Ｈ、－ＣＨ３、－ＣＦ３、－ＣＨ２ＣＮ、又は－ＣＨ２ＯＨである。
[0020] 一部の実施形態において、Ｒ６は、単環式Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、縮合二環式Ｃ４～Ｃ８シクロアルキル、架橋二環式Ｃ４～Ｃ８シクロアルキル、スピロ二環式Ｃ５～Ｃ８シクロアルキル、又は５～６員環ヘテロシクリルであり、これらの各々は、１～５個のＲ７基によって任意選択で置換されている。一部の実施形態において、Ｒ６は、
Figure 0007587528000014
からなる群から選択される。
[0021] 一部の実施形態において、各Ｒ７は、存在する場合、独立に、ハロ、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３ハロアルキル、Ｃ１～Ｃ３アルキル－ＯＨ、又はＣ１～Ｃ３アルキル－ＣＮである。一部の実施形態において、各Ｒ７は、存在する場合、独立に、フルオロ、－ＣＨ３、－ＣＦ３、－ＣＨ２ＯＨ、又は－ＣＨ２ＣＮである。
[0022] 一部の実施形態において、Ｒ５及びＲ６は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、５～１０員環単環式、縮合二環式、若しくは架橋ヘテロシクリル、又は５～１０員環単環式若しくは二環式ヘテロアリールを形成し、このヘテロシクリル又はヘテロアリールの各々は、Ｎ及びＯからなる群から選択される１～２個の更なるヘテロ原子を任意選択で含み、及びこのヘテロシクリル又はヘテロアリールの各々は、１～５個のＲ８基によって任意選択で置換されている。一部の実施形態において、Ｒ５及びＲ６は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、
Figure 0007587528000015
からなる群から選択される部分を形成する。
[0023] 一部の実施形態において、各Ｒ８は、存在する場合、独立に、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３ハロアルキル、Ｃ１～Ｃ３アルキル－ＯＨ、－ＣＮ、Ｃ１～Ｃ３アルキル－ＣＮ、－（Ｃ１～Ｃ３アルキレン）－Ｏ－（Ｃ１～Ｃ３アルキル）、ヒドロキシ、若しくはハロであるか、又は同じ炭素原子に結合した２つのＲ８基が、それらが結合している炭素原子と一緒になって、スピロＣ３～Ｃ４シクロアルキル若しくはスピロ５～６員環ヘテロシクリルを形成する。一部の実施形態において、各Ｒ８は、存在する場合、独立に、－ＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ３、－ＣＦ３、－ＣＨ２ＯＨ、－ＣＮ、－ＣＨ２ＣＮ、－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ３、ヒドロキシ、若しくはＦであるか、又は同じ炭素原子に結合した２つのＲ８基が、それらが結合している炭素原子と一緒になって、スピロシクロプロピルを形成する。
[0024] 一部の実施形態において、各Ｒ９は、独立に、Ｈ、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３ハロアルキル、又はＣ１～Ｃ３アルキル－ＯＨである。一部の実施形態において、各Ｒ９は、独立に、Ｈ、－ＣＨ３、－ＣＦ３、又は－ＣＨ２ＯＨである。
[0025] また、本明細書には、表１にある化合物から選択される化合物、又はその互変異性体、若しくはその薬学的に許容可能な塩も開示される。また、本明細書には、上記若しくは本明細書に開示される任意の化合物から選択される化合物、又はその互変異性体、若しくはその薬学的に許容可能な塩、及び薬学的に許容可能な賦形剤も開示される。
[0026] また、本明細書には、免疫細胞の活性を調節する方法であって、有効量の上記若しくは本明細書に開示される任意の化合物、又はその互変異性体、若しくはその薬学的に許容可能な塩と免疫細胞を接触させることを含む方法も開示される。
[0027] また、本明細書には、それを必要としている個体におけるＣｂｌ－ｂ活性の阻害に応答性の癌を処置する方法であって、有効量の上記若しくは本明細書に開示される任意の化合物、又はその互変異性体、若しくはその薬学的に許容可能な塩を個体に投与することを含む方法も開示される。
[0028] また、本明細書には、それを必要としている個体におけるＣｂｌ－ｂ活性を阻害する方法であって、有効量の上記若しくは本明細書に開示される任意の化合物、又はその互変異性体、若しくはその薬学的に許容可能な塩を個体に投与することを含む方法も開示される。
[0029] また、本明細書には、それを必要としている個体におけるＣｂｌ－ｂ活性に関連する疾患又は病態の処置又は予防方法であって、上記若しくは本明細書に開示される任意の化合物、又はその互変異性体、若しくはその薬学的に許容可能な塩を個体に投与することを含む方法も開示される。
[0030] また、本明細書には、修飾免疫細胞を作製する方法であって、有効量の上記若しくは本明細書に開示される任意の化合物、又はその互変異性体、若しくはその薬学的に許容可能な塩の存在下で免疫細胞を含有する細胞集団を培養することを含む方法も開示される。
[0031] また、本明細書には、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬を含む修飾免疫細胞も開示され、ここでＣｂｌ－ｂ阻害薬は、上記若しくは本明細書に開示される任意の化合物、又はその互変異性体、若しくはその薬学的に許容可能な塩である。
[0032] また、本明細書には、単離修飾免疫細胞も開示され、ここで免疫細胞は、上記若しくは本明細書に開示される任意の化合物、又はその互変異性体、若しくはその薬学的に許容可能な塩と接触させたものであるか、又は接触した状態にあるものである。
[0033] また、本明細書には、単離修飾免疫細胞を含有する細胞集団を含む組成物も開示され、ここで免疫細胞は、上記若しくは本明細書に開示される任意の化合物、又はその互変異性体、若しくはその薬学的に許容可能な塩と接触させたものであるか、又は接触した状態にあるものである。
[0034] また、本明細書には、異常細胞増殖を阻害する方法であって、有効量の単離修飾免疫細胞をそれを必要としている個体に投与することを含む方法も開示され、ここで免疫細胞は、上記若しくは本明細書に開示される任意の化合物、又はその互変異性体、若しくはその薬学的に許容可能な塩と接触させたものであるか、又は接触した状態にあるものである。
[0035] また、本明細書には、異常細胞増殖を阻害する方法であって、単離修飾免疫細胞を含有する細胞集団を含む組成物をそれを必要としている個体に投与することを含む方法も開示され、ここで免疫細胞は、上記若しくは本明細書に開示される任意の化合物、又はその互変異性体、若しくはその薬学的に許容可能な塩と接触させたものであるか、又は接触した状態にあるものである。
[0036] また、本明細書には、異常細胞増殖を阻害する方法であって、有効量の上記若しくは本明細書に開示される任意の化合物、又はその互変異性体、若しくはその薬学的に許容可能な塩を投与することを含む方法も開示される。
[0037] また、本明細書には、免疫細胞を含有する細胞集団とＣｂｌ－ｂ阻害薬とを含む細胞培養組成物も開示され、ここでＣｂｌ－ｂ阻害薬は、上記若しくは本明細書に開示される任意の化合物、又はその互変異性体、若しくはその薬学的に許容可能な塩である。
[0038] また、本明細書には、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬とアジュバント及び抗原のうちの一方又は両方とを含む医薬組成物も開示され、ここでＣｂｌ－ｂ阻害薬は、上記若しくは本明細書に開示される任意の化合物、又はその互変異性体、若しくはその薬学的に許容可能な塩である。
[0039] また、本明細書には、本明細書に開示されるとおりの任意の修飾免疫細胞、本明細書に開示されるとおりの細胞集団を含む任意の組成物、本明細書に開示されるとおりの任意の細胞培養組成物、又は本明細書に開示されるとおりの任意の医薬組成物を含む製品も開示される。
[0040] また、本明細書には、本明細書に開示されるとおりの任意の修飾免疫細胞又は本明細書に開示されるとおりの細胞集団を含む任意の組成物を含むキットも開示される。
[0041] また、本明細書には、Ｃｂｌ－ｂ活性に関連する疾患又は病態の処置又は予防用医薬品の製造におけるＣｂｌ－ｂ阻害薬の使用も開示され、ここでＣｂｌ－ｂ阻害薬は、上記若しくは本明細書に開示される任意の化合物、又はその互変異性体、若しくはその薬学的に許容可能な塩である。
[0042] 本明細書に開示される任意の実施形態において、Ｃｂｌ－ｂタンパク質は、哺乳類Ｃｂｌ－ｂ、又はヒトＣｂｌ－ｂであり得る。
[0043] また、本明細書には、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬化合物、ワクチン、及びＣｂｌ－ｂ阻害薬とワクチンとを含む組成物、並びに癌の処置におけるその使用方法も開示される。Ｃｂｌ－ｂ阻害薬及び癌ワクチンは、癌を有する個体に投与され得る。
[0044] また、本明細書には、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬化合物、腫瘍溶解性ウイルス、及びＣｂｌ－ｂ阻害薬と腫瘍溶解性ウイルスとを含む組成物、並びに癌の処置におけるその使用方法も開示される。Ｃｂｌ－ｂ阻害薬及び腫瘍溶解性ウイルスは、癌を有する個体に投与され得る。
[0045] 本明細書には、免疫化する方法であって、それを必要としている個体に有効量の小分子Ｃｂｌ－ｂ阻害薬を投与すること、及び個体に有効量のワクチンを投与することを含む方法が提供される。
[0046] 本明細書には、癌を処置する方法であって、癌を有する個体に有効量の小分子Ｃｂｌ－ｂ阻害薬を投与すること、及び個体に有効量の腫瘍溶解性ウイルスを投与することを含む方法が提供される。
[0047] 本明細書には、癌を処置する方法であって、癌を有する個体に、免疫細胞の活性化閾値を低下させる能力を有する有効量の薬剤を投与すること、及び個体に有効量の治療用癌ワクチンを投与すること；又は個体に有効量の腫瘍溶解性ウイルスを投与することを含む方法が提供される。
[0048] 本明細書には、癌ワクチンと小分子Ｃｂｌ－ｂ阻害薬とを含む医薬組成物が提供され、任意選択でこの組成物は、薬学的に許容可能な賦形剤を更に含む。
[0049] 本明細書には、癌の処置用キットであって、（ａ）小分子Ｃｂｌ－ｂ阻害薬；（ｂ）治療用癌ワクチン；及び（ｃ）個体の癌を処置するための有効量のＣｂｌ－ｂ阻害薬及び治療用癌ワクチンの投与に関する説明書を含むキットが提供される。
[0050] 本明細書には、癌の処置用キットであって、（ａ）小分子Ｃｂｌ－ｂ阻害薬と治療用癌ワクチンとを含む医薬組成物；及び（ｂ）個体の癌を処置するためのＣｂｌ－ｂ阻害薬と治療用癌ワクチンとを含む有効量の医薬組成物の投与に関する説明書を含むキットが提供される。
[0051] 本明細書には、腫瘍溶解性ウイルスと小分子Ｃｂｌ－ｂ阻害薬とを含む医薬組成物が提供され、任意選択でこの組成物は、薬学的に許容可能な賦形剤を更に含む。
[0052] 本明細書には、癌の処置用キットであって、（ａ）小分子Ｃｂｌ－ｂ阻害薬；（ｂ）腫瘍溶解性ウイルス；及び（ｃ）個体の癌を処置するための有効量のＣｂｌ－ｂ阻害薬及び腫瘍溶解性ウイルスの投与に関する説明書を含むキットが提供される。
[0053] 及び、本明細書には、癌の処置用キットであって、（ａ）小分子Ｃｂｌ－ｂ阻害薬と腫瘍溶解性ウイルスとを含む医薬組成物；及び（ｂ）個体の癌を処置するための小分子Ｃｂｌ－ｂ阻害薬と腫瘍溶解性ウイルスとを含む有効量の医薬組成物の投与に関する説明書を含むキットが提供される。
詳細な説明
[0054] 本明細書には、Ｃｂｌ－ｂ酵素を阻害する化合物及び医薬組成物、並びにかかる化合物及び医薬組成物を使用した処置方法が提供される。本化合物及び組成物は、免疫系の調節方法、疾患の処置、及び細胞のインビボ、インビトロ、又はエキソビボ処置に使用することができる。また、本明細書には、癌ワクチンとＣｂｌ－ｂ酵素を阻害する化合物とを含む医薬組成物、並びにかかる化合物、癌ワクチン、及び医薬組成物を使用した処置方法も提供される。また、本明細書には、腫瘍溶解性ウイルスとＣｂｌ－ｂ酵素を阻害する化合物とを含む医薬組成物、並びにかかる化合物、腫瘍溶解性ウイルス、及び医薬組成物を使用した処置方法も提供される。
[0055] Ｔ細胞活性化及びＴ細胞寛容は、自己免疫を防ぐ一方で、腫瘍に対する免疫応答を制御する、厳密にコントロールされた過程である。寛容は、「自己」抗原を発現する細胞に対する免疫系の攻撃を防ぐ。末梢性寛容では、「自己」抗原を認識するＴ細胞（即ち、自己反応性Ｔ細胞）が、胸腺外で「自己」抗原と遭遇した後に機能的に応答しなくなるか、又は排除される。従って末梢性寛容過程は、自己免疫疾患の防止に重要である。通常、癌細胞は、癌細胞の表面上に発現した腫瘍抗原を認識する活性化Ｔ細胞によって除去される。しかしながら、癌では、腫瘍微小環境が癌細胞に対するＴ細胞寛容を支援し得るため、癌細胞が免疫系による認識及び除去を回避することが可能となる。癌細胞が腫瘍免疫監視を回避する能力は、抑制されない腫瘍成長の一因となり得る。従って、Ｔ細胞寛容は、ある種のＴ細胞機能不全であり得る。Ｔ細胞機能不全の一般的原理については、当該技術分野において周知である（Schietinger et al., Trends Immunol., 35: 51-60, 2014を参照されたい）。抑制されない腫瘍成長の一因となり得る別の種類のＴ細胞機能不全には、Ｔ細胞枯渇、Ｔ細胞老化、及び／又はＴ細胞アネルギーがある。従って、Ｔ細胞機能不全を、例えば、Ｔ細胞活性化の増加、Ｔ細胞増殖の増加、Ｔ細胞寛容の低下、及び／又はＴ細胞枯渇の低下によって処置することは、癌の予防又は処置に有益である。免疫監視における癌細胞の認識及び除去には、免疫系の更なる細胞が重要である。例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞は、癌細胞を同定して死滅させることが可能な自然免疫系のリンパ球である（Martinez-Losato et al., Clin Cancer Res., 21: 5048-5056, 2015を参照されたい）。最近の研究ではまた、個別の表現型及び機能を有するＢ細胞サブセットが、抗腫瘍応答において多様な役割を呈することも示されている（Saravaria et al., Cell Mol Immunol., 14: 662-674, 2017を参照されたい）。腫瘍監視におけるその役割により、ＮＫ細胞及びＢ細胞もまた、癌の予防又は処置の治療標的として適したものであり得る。
[0056] Ｃｂｌ－ｂは、ＲＩＮＧ型Ｅ３リガーゼであり、免疫活性化の負の制御因子としてのその機能により、免疫系において重要な役割を果たす。Ｃｂｌ－ｂは、Ｔ細胞の活性化を低下させるのに不可欠な役割を担い、従ってＴ細胞寛容を亢進させる。諸研究によれば、ｃｂｌ－ｂ欠損Ｔ細胞は、抗原認識受容体及び共刺激分子（例えば、ＣＤ２８）による活性化の閾値の低下を示すことが分かっている。例えば、Ｔ細胞においてＣｂｌ－ｂが失われると、Ｔ細胞活性化及び増殖時のＣＤ２８共刺激の要件が外れる（Bachmaier et al., Nature, 403: 211-216, 2000を参照されたい）。かかるｃｂｌ－ｂ－／－Ｔ細胞は、大部分がＴ細胞アネルギー（Ｔ細胞が機能的に不活性化されて、Ｔ細胞増殖が大きく損なわれる寛容機構である）に抵抗性である（Jeon et al., Immunity, 21: 167-177, 2004；及びSchwartz et al., Annu Rev Immunol., 21: 305-34, 2003を参照されたい）。この裏付けとして、ｃｂｌ－ｂノックアウトマウスにおいてＣｂｌ－ｂが失われると、Ｔ細胞寛容の誘導が損なわれ、自己免疫（autioimmunity）が悪化した（Jeon et al., Immunity, 21: 167-177, 2004を参照されたい）。重要なことに、マウスにおいてＣｂｌ－ｂが失われると、細胞傷害性Ｔ細胞に主に依存するロバストな抗腫瘍応答もまた生じた。ある研究では、ｃｂｌ－ｂ－／－ ＣＤ８＋ Ｔ細胞が制御性Ｔ細胞媒介抑制に抵抗性であり、活性化及び腫瘍浸潤の亢進を呈することが示された。樹立腫瘍の拒絶を媒介するには、ナイーブｃｂｌ－ｂ－／－ ＣＤ８＋ Ｔ細胞の治療的移植が十分であった（Loeser et al., J Exp Med., 204: 879-891, 2007を参照されたい）。最近の研究では、Ｃｂｌ－ｂがＮＫ細胞活性化においても役割を果たすことが示されている。Ｃｂｌ－ｂを遺伝子欠失させるか、又はそのＥ３リガーゼ活性を標的化して不活性化させると、マウスモデルでＮＫ細胞に転移性腫瘍を自然に拒絶させることが可能であった（Paolino et al., Nature, 507: 508-512, 2014を参照されたい）。
[0057] 本明細書には、Ｃｂｌ－ｂの強力な阻害薬であり、且つ癌などの疾患の新規処置手法に使用し得る化合物及び組成物が提供される。一部の実施形態において、本明細書に提供される化合物及び組成物は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及びＢ細胞の活性化を増加させるなど、免疫系を調節する方法、並びにかかる細胞のインビボ、インビトロ、又はエキソビボ処置において使用することができる。
Ｉ．定義
[0058] 本明細書に開示される薬剤の「有効量」は、具体的に記載される目的を実行するのに十分な量である。「有効量」は、記載される目的との関連で、実験的に、及び常法で決定されてもよい。薬剤の「有効量」又は「十分な量」は、有益な臨床結果を含め、有益な結果など、所望の生物学的効果を生み出すのに適切な量である。一部の実施形態において、用語「有効量」は、個体（例えば、ヒトなどの哺乳類）の疾患又は障害を「処置」するのに有効な薬剤の量を指す。
[0059] 用語「Ｃｂｌ－ｂ」は、本明細書で使用されるとき、Ｃｂｌ－ｂタンパク質を指す。この用語にはまた、スプライス変異体又はアレル変異体を含め、Ｃｂｌ－ｂの天然に存在する変異体も含まれる。この用語にはまた、組換えＣｂｌ－ｂタンパク質又はそのトランケート型変異体など、Ｃｂｌ－ｂの天然に存在しない変異体も含まれ、それらは、概して、天然に存在するＣｂｌ－ｂ又は天然に存在するＣｂｌ－ｂ変異体の結合能力（例えば、Ｅ２酵素に結合する能力）を維持している。
[0060] 用語「医薬製剤」及び「医薬組成物」は、活性成分の生物学的活性が有効であることを許容するような形態の、且つ製剤又は組成物が投与されるであろう個体にとって容認し難いほどの毒性がある追加的な成分を含有しない調合物を指す。かかる製剤又は組成物は無菌であってよい。かかる製剤又は組成物は無菌であってよく、但し、腫瘍溶解性ウイルスは含まれてもよいものとする。
[0061] 「賦形剤」には、本明細書で使用されるとき、用いられる投薬量及び濃度でそれに曝露される細胞又は哺乳類にとって毒性のない、薬学的に許容可能な賦形剤、担体、媒体、又は安定剤が含まれる。多くの場合、生理学的に許容可能な賦形剤は、ｐＨ緩衝水溶液である。
[0062] 医薬組成物中の記載されるとおりの化合物、又は医薬組成物に対するクレームに記載されるとおりの化合物への言及は、医薬組成物の他の要素のない、即ち、担体、賦形剤等のない、医薬組成物中の記載される式によって記述される化合物を指す。
[0063] 疾患を「処置すること」又は「処置」という用語は、プロトコルを実行することを指し、それには、臨床結果を含め、有益な又は所望の結果を個体において達成しようとする試みの中で、個体（ヒト又はその他）に１つ以上の治療剤を投与することが含まれ得る。有益な又は所望の臨床結果としては、限定はされないが、１つ以上の症状の軽減又は改善、疾患の程度の縮小、疾患の安定化した（即ち、悪化しない）状態、疾患の広がりの防止、疾患の進行の遅延又は減速、疾患状態の改善又は緩和、及び寛解（部分的にしろ、又は全面的にしろ）が挙げられる。「処置」はまた、処置を受けていない個体の予想生存期間と比較して、生存期間を延ばすことも意味し得る。更に、「処置すること」及び「処置」は、１用量の１つ又は複数の治療剤の投与によって起こることもあり、又は１つ又は複数の治療剤の一連の用量を投与したときに起こることもある。「処置すること」又は「処置」は、徴候又は症状が完全に軽減される必要はなく、治癒する必要はない。「処置」はまた、処置下の個体又は細胞の自然経過を変えるように設計された（即ち、その臨床的介入が存在しなければ起こるであろう個体又は細胞の経過を変えるように設計された）、個体に１つ以上の治療剤を投与することなどの臨床的介入も指し得る。用語「治療剤」とは、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬、修飾免疫細胞又はその組成物を指し得る。
[0064] 本明細書で使用されるとき、「個体」又は「対象」は哺乳類である。処置目的では、「哺乳類」には、ヒト；非ヒト霊長類；家畜及び農場動物；及びイヌ、ウマ、ウサギ、ウシ、ブタ、ハムスター、スナネズミ、マウス、フェレット、ラット、ネコなど、動物園動物、競技動物、又は愛玩動物が含まれる。一部の実施形態において、個体又は対象はヒトである。
[0065] 本明細書で使用されるとき、用語「Ｔ細胞機能不全」は、抗原刺激に対する免疫応答性が低下した状態を指す。用語「Ｔ細胞機能不全」には、抗原認識が起こり得るが、続く免疫応答は、腫瘍成長を抑制するには不十分であるというＴ細胞枯渇及び／又はＴ細胞アネルギーの両方に共通する要素が含まれる。用語「Ｔ細胞機能不全」にはまた、抗原認識を増殖、サイトカイン産生、及び／又は標的細胞殺傷などの下流Ｔ細胞エフェクター機能に結び付ける能力が損なわれるなど、抗原認識に対して難応答性又は不応答性であることも含まれる。
[0066] 用語「Ｔ細胞アネルギー」は、Ｔ細胞受容体を通じて送達されるシグナルが不完全又は不十分であることに起因して抗原刺激に応答しない状態を指す。「Ｔ細胞アネルギー」はまた、抗原による刺激時に共刺激がなく、その結果、続く抗原による活性化に対し、例え共刺激のコンテクストであっても細胞が難応答性となる場合にも生じ得る。
[0067] 用語「Ｔ細胞枯渇」は、癌で起こり得る持続的なＴＣＲシグナル伝達によって起こるＴ細胞機能不全の状態を指す。これは、それが不完全な又は欠陥のあるシグナル伝達を通じて起こるのでなく、持続的なシグナル伝達によって起こる点で、アネルギーとは区別される。これは、エフェクター機能の不良、抑制性受容体の持続的発現、及び機能性エフェクター又はメモリーＴ細胞と異なる転写状態によって定義される。
[0068] 「Ｔ細胞機能不全障害」は、抗原刺激に対するＴ細胞の応答性の低下によって特徴付けられる障害又は病態である。応答性が低下すると、腫瘍の抑制が無効となり得る。一部の実施形態において、用語「Ｔ細胞機能不全障害」には、血液癌又は非血液癌などの癌が包含される。一部の実施形態において、「Ｔ細胞機能不全障害」は、Ｔ細胞がアネルギー状態にあるものか、又はサイトカインの分泌能力、増殖能力、若しくは細胞溶解活性の実行能力が低下しているものである。
[0069] 「Ｔ細胞機能を亢進させること」は、持続的な若しくは増幅した生物学的機能を呈するように、又は枯渇した若しくは不活性なＴ細胞が再生若しくは再活性化するようにＴ細胞を誘導し、誘発し、又は刺激することを意味する。亢進したＴ細胞機能の例としては、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬による処置前のＴ細胞の状態と比べたＴ細胞活性化の増加（例えば、サイトカイン産生の増加、Ｔ細胞活性化マーカーの発現の増加等）、Ｔ細胞増殖の増加、Ｔ細胞枯渇の低下、及び／又はＴ細胞寛容の低下が挙げられる。Ｔ細胞機能の亢進を測る方法は、当該技術分野において公知である。
[0070] 「増殖」は、本明細書では、細胞の増殖を指して使用される。増殖の増加には、ベースライン値と比べて一層多い数の細胞の産生が包含される。増殖の低下には、ベースライン値と比べて減少した数の細胞の産生が包含される。一部の実施形態において、細胞はＴ細胞などの免疫細胞であり、増殖の増加が望ましい。一部の実施形態において、細胞は癌細胞であり、増殖の減少が望ましい。
[0071] 「アルキル」は、本明細書で使用されるとき、飽和直鎖状（即ち、分岐していない）又は分岐鎖状一価炭化水素鎖又はこれらの組み合わせを指す。詳細なアルキル基は、指定される数の炭素原子を有するもの、例えば、１～２０個の炭素原子を有するアルキル基（「Ｃ１～Ｃ２０アルキル」）、１～１０個の炭素原子を有するアルキル基（「Ｃ１～Ｃ１０」アルキル）、１～８個の炭素原子を有するアルキル基（「Ｃ１～Ｃ８アルキル」）、１～６個の炭素原子を有するアルキル基（「Ｃ１～Ｃ６アルキル」）、２～６個の炭素原子を有するアルキル基（「Ｃ２～Ｃ６アルキル」）、又は１～４個の炭素原子を有するアルキル基（「Ｃ１～Ｃ４アルキル」）である。アルキル基の例としては、限定はされないが、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、ｔ－ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチルなどの基、そのホモログ及び異性体、例えば、ｎ－ペンチル、ｎ－ヘキシル、ｎ－ヘプチル、ｎ－オクチルが挙げられる。
[0072] 「アルケニル」は、本明細書で使用されるとき、オレフィン不飽和部位を少なくとも１つ有する（即ち、式Ｃ＝Ｃの部分を少なくとも１つ有する）不飽和直鎖状（即ち、分岐していない）又は分岐鎖状一価炭化水素鎖又はこれらの組み合わせを指す。詳細なアルケニル基は、指定される数の炭素原子を有するもの、例えば、２～２０個の炭素原子を有するアルケニル基（「Ｃ２～Ｃ２０アルケニル」）、２～１０個の炭素原子を有するアルケニル基（「Ｃ２～Ｃ１０」アルケニル）、２～８個の炭素原子を有するアルケニル基（「Ｃ２～Ｃ８アルケニル」）、２～６個の炭素原子を有するアルケニル基（「Ｃ２～Ｃ６アルケニル」）、又は２～４個の炭素原子を有するアルケニル基（「Ｃ２～Ｃ４アルケニル」）である。アルケニル基は、「シス」又は「トランス」配置であることができ、又はそれに代えて、「Ｅ」又は「Ｚ」配置であることができる。アルケニル基の例としては、限定はされないが、エテニル（又はビニル）、プロパ－１－エニル、プロパ－２－エニル（又はアリル）、２－メチルプロパ－１－エニル、ブタ－１－エニル、ブタ－２－エニル、ブタ－３－エニル、ブタ－１，３－ジエニル、２－メチルブタ－１，３－ジエニルなどの基、そのホモログ、及び異性体が挙げられる。
[0073] 「アルキニル」は、本明細書で使用されるとき、アセチレン不飽和部位を少なくとも１つ有する（即ち、式Ｃ≡Ｃの部分を少なくとも１つ有する）不飽和直鎖状（即ち、分岐していない）又は分岐鎖状一価炭化水素鎖又はこれらの組み合わせを指す。詳細なアルキニル基は、指定される数の炭素原子を有するもの、例えば、２～２０個の炭素原子を有するアルキニル基（「Ｃ２～Ｃ２０アルキニル」）、２～１０個の炭素原子を有するアルキニル基（「Ｃ２～Ｃ１０アルキニル」）、２～８個の炭素原子を有するアルキニル基（「Ｃ２～Ｃ８アルキニル」）、２～６個の炭素原子を有するアルキニル基（「Ｃ２～Ｃ６アルキニル」）、又は２～４個の炭素原子を有するアルキニル基（「Ｃ２～Ｃ４アルキニル」）である。アルキニル基の例としては、限定はされないが、エチニル（又はアセチレニル）、プロパ－１－イニル、プロパ－２－イニル（又はプロパルギル）、ブタ－１－イニル、ブタ－２－イニル、ブタ－３－イニルなどの基、そのホモログ、及び異性体が挙げられる。
[0074] 「アルキレン」は、本明細書で使用されるとき、アルキルと同じだが、二価を呈する残基を指す。詳細なアルキレン基は、１～６個の炭素原子（「Ｃ１～Ｃ６アルキレン」）、１～５個の炭素原子（「Ｃ１～Ｃ５アルキレン」）、１～４個の炭素原子（「Ｃ１～Ｃ４アルキレン」）、又は１～３個の炭素原子（「Ｃ１～Ｃ３アルキレン」）を有するものである。アルキレン基の例としては、限定はされないが、メチレン（－ＣＨ２－）、エチレン（－ＣＨ２ＣＨ２－）、プロピレン（－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－）、ブチレン（－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－）などの基が挙げられる。
[0075] 「シクロアルキル」は、本明細書で使用されるとき、非芳香族飽和又は不飽和環状一価炭化水素構造を指す。詳細なシクロアルキル基は、指定される数の環状炭素原子（即ち、環炭素原子）炭素原子を有するもの、例えば、３～１２個の環状炭素原子を有するシクロアルキル基（「Ｃ３～Ｃ１２シクロアルキル」）である。詳細なシクロアルキルは、３～８個の環状炭素原子を有する環状炭化水素（「Ｃ３～Ｃ８シクロアルキル」）、又は３～６個の環状炭素原子を有する環状炭化水素（「Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル」）である。シクロアルキルは、シクロヘキシルなど、１個の環からなってもよく、又はアダマンチルなど、複数の環からなってもよいが、但し、芳香族（例えば、アリール）基は除外するものとする。２個以上の環を含むシクロアルキルは、縮合、スピロ、又は架橋、又はこれらの組み合わせであってもよい。シクロアルキル基の例としては、限定はされないが、シクロプロピル
Figure 0007587528000016
、シクロブチル
Figure 0007587528000017
、シクロペンチル
Figure 0007587528000018
、シクロヘキシル
Figure 0007587528000019
、１－シクロヘキセニル、３－シクロヘキセニル、シクロヘプチル
Figure 0007587528000020
、ノルボルニルなど挙げられる。
[0076] 「シクロアルキレン」は、本明細書で使用されるとき、シクロアルキルと同じだが、二価（即ち、一価であるのと対照的に）を呈する残基を指す。詳細なシクロアルキレン基は、３～１２個の環状炭素原子を有するもの（「Ｃ３～Ｃ１２シクロアルキレン」）、３～８個の環状炭素原子を有するもの（「Ｃ３～Ｃ８シクロアルキレン」）、又は３～６個の環状炭素原子を有するもの（「Ｃ３～Ｃ６シクロアルキレン」）である。シクロアルキレン基の例としては、限定はされないが、シクロプロピレン
Figure 0007587528000021
、シクロブチレン
Figure 0007587528000022
、シクロペンチレン
Figure 0007587528000023
、シクロへキシレン
Figure 0007587528000024
、１，２－シクロヘキセニレン、１，３－シクロヘキセニレン、１，４－シクロヘキセニレン、シクロヘプチレン
Figure 0007587528000025
、ノルボルニレンなどが挙げられる。
[0077] 「アリール」は、本明細書で使用されるとき、単一の環（例えば、フェニル）、又は複数の縮合した環（例えば、ナフチル又はアントリル）であって、そのうちの１つ以上が芳香族でなくてもよい縮合環を有する芳香族炭素環式基を指す。詳細なアリール基は、６～１４個の環状炭素原子（即ち、環炭素原子）を有するもの（「Ｃ６～Ｃ１４アリール」）である。少なくとも１個の環が非芳香族である２個以上の環を有するアリール基は、芳香環位又は非芳香環位のいずれでも親構造に結び付き得る。一つの変形例では、少なくとも１個の環が非芳香族である２個以上の環を有するアリール基は、芳香環位で親構造に結び付いている。アリールの例としては、限定はされないが、フェニル、ナフチル、１－ナフチル、２－ナフチル、１，２，３，４－テトラヒドロナフタレン－６－イル
Figure 0007587528000026
などの基が挙げられる。
[0078] 「カルボシクリル」又は「炭素環式」は、シクロヘキシル、フェニル、１，２－ジヒドロナフチルなど、全ての環員が炭素原子である芳香族又は非芳香族一価環状基を指す。
[0079] 「アリーレン」は、本明細書で使用されるとき、アリールと同じだが、二価を呈する残基を指す。詳細なアリーレン基は、６～１４個の環状炭素原子を有するもの（「Ｃ６～Ｃ１４アリーレン」）である。アリーレンの例としては、限定はされないが、フェニレン、ｏ－フェニレン（即ち、１，２－フェニレン）、ｍ－フェニレン（即ち、１，３－フェニレン）、ｐ－フェニレン（即ち、１，４－フェニレン）、ナフチレン、１，２－ナフチレン、１，３－ナフチレン、１，４－ナフチレン、２，７－ナフチレン、２，６－ナフチレンなどの基が挙げられる。
[0080] 「ヘテロアリール」は、本明細書で使用されるとき、１～１４個の環状炭素原子と、限定はされないが、窒素、酸素、及び硫黄などのヘテロ原子を含めた、少なくとも１個の環状ヘテロ原子とを有する不飽和芳香族環状基を指す。ヘテロアリール基は、単一の環（例えば、ピリジル又はイミダゾリル）又は複数の縮合した環（例えば、インドリジニル、インドリル、又はキノリニル）であって、そのうちの少なくとも１個が芳香族である縮合環を有し得る。詳細なヘテロアリール基は、１～１２個の環状炭素原子と、窒素（Ｎ）、酸素（Ｏ）、及び硫黄（Ｓ）からなる群から独立に選択される１～６個の環状ヘテロ原子とを有する５～１４員環（「５～１４員環ヘテロアリール」）；１～８個の環状炭素原子と、窒素、酸素、及び硫黄からなる群から独立に選択される１～４個の環状ヘテロ原子とを有する５～１０員環（「５～１０員環ヘテロアリール」）；又は１～５個の環状炭素原子と、窒素、酸素、及び硫黄からなる群から独立に選択される１～４個の環状ヘテロ原子とを有する５員、６員、又は７員環（「５～７員環ヘテロアリール」）である。一つの変形例では、ヘテロアリールは、１～６個の環状炭素原子と、窒素、酸素、及び硫黄からなる群から独立に選択される１～４個の環状ヘテロ原子とを有する単環式芳香族５員、６員、又は７員環を含む。別の変形例において、ヘテロアリールには、１～１２個の環状炭素原子と、窒素、酸素、及び硫黄からなる群から独立に選択される１～６個の環状ヘテロ原子とを有する多環式芳香環が含まれる。少なくとも１個の環が非芳香族である２個以上の環を有するヘテロアリール基は、芳香環位又は非芳香環位のいずれでも親構造に結び付き得る。ヘテロアリールの例としては、限定はされないが、ピリジル、ベンズイミダゾリル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾ［ｂ］チエニル、キノリニル、インドリル、ベンゾチアゾリルなどの基が挙げられる。「ヘテロアリール」にはまた、
Figure 0007587528000027
（２，４－ジヒドロ－３Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－オン－２－イル）などの部分であって、芳香族互変異性構造
Figure 0007587528000028
（１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－オール－１－イル）を有するものも含まれる。
[0081] 「ヘテロシクリル」及び「ヘテロ環式基」は、本明細書で使用されるとき、指定されるとおりの数の原子及びヘテロ原子を有するか、又は原子又はヘテロ原子の数が指定されない場合、少なくとも３個の環状原子、１～１４個の環状炭素原子、及び限定はされないが、窒素、酸素、及び硫黄などのヘテロ原子を含めた、少なくとも１個の環状ヘテロ原子を有する非芳香族飽和又は部分不飽和環状基を指す。ヘテロ環式基は、単一の環（例えば、テトラヒドロチオフェニル、オキサゾリジニル）又は複数の縮合した環（例えば、デカヒドロキノリニル、オクタヒドロベンゾ［ｄ］オキサゾリル）を有し得る。複数の縮合した環としては、限定はされないが、二環式、三環式、及び四環式の環、並びに架橋された又はスピロ環状の環系が挙げられる。ヘテロ環式基の例としては、限定はされないが、アジリジニル、アゼチジニル、ピロリジニル、ピペリジニル、オキシラニル、オキセタニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、オキサゾリジニル、ピペラジニル、モルホリニル、ジオキサニル、３，６－ジヒドロ－２Ｈ－ピラニル、２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イミダゾリルなどが挙げられる。
[0082] 「ヘテロアリーレン」は、本明細書で使用されるとき、ヘテロアリールと同じだが、二価を呈する残基を指す。詳細なヘテロアリーレン基は、１～１２個の環状炭素原子と、窒素、酸素、及び硫黄からなる群から独立に選択される１～６個の環状ヘテロ原子とを有する５～１４員環（「５～１４員環ヘテロアリーレン」）；１～８個の環状炭素原子と、窒素、酸素、及び硫黄からなる群から独立に選択される１～４個の環状ヘテロ原子とを有する５～１０員環（「５～１０員環ヘテロアリーレン」）；又は１～５個の環状炭素原子と、窒素、酸素、及び硫黄からなる群から独立に選択される１～４個の環状ヘテロ原子とを有する５員、６員、又は７員環（「５～７員環ヘテロアリーレン」）である。ヘテロアリーレンの例としては、限定はされないが、ピリジレン、ベンズイミダゾリレン、ベンゾトリアゾリレン、ベンゾ［ｂ］チエニレン、キノリニレン、インドリレン、ベンゾチアゾリレンなどの基が挙げられる。
[0083] 「ハロ」又は「ハロゲン」は、原子番号が９～８５の第１７族の元素を指す。ハロ基には、フルオロ（Ｆ）、クロロ（Ｃｌ）、ブロモ（Ｂｒ）、及びヨード（Ｉ）が含まれる。
[0084] 「ハロアルキル」、「ハロアルキレン」、「ハロアリール」、「ハロアリレン」、「ハロヘテロアリール」、及び類似の用語は、少なくとも１つのハロ基で置換されている部分を指す。ハロアルキル部分又は他のハロ置換部分が２つ以上のハロゲンで置換されている場合、それは、結合しているハロゲン部分の数に対応する接頭辞を用いて表現され得る。例えば、ジハロアリール、ジハロアルキル、トリハロアリール、トリハロアルキル等は、２個（「ジ」）又は３個（「トリ」）のハロ基で置換されているアリール及びアルキルを指し、これは、必須ではないが、同じハロであり得る；従って、例えば、ハロアリール基４－クロロ－３－フルオロフェニルは、ジハロアリールの範囲内にある。アルキル基の各水素（Ｈ）がハロ基で置き換えられている一部のハロアルキル基は、「ペルハロアルキル」と称される。詳細なペルハロアルキル基は、トリフルオロアルキル（－ＣＦ３）である。同様に、「ペルハロアルコキシ」は、アルコキシ基のアルキル部分を構成する炭化水素中の各水素（Ｈ）にハロゲンが取って代わるアルコキシ基を指す。ペルハロアルコキシ基の例は、トリフルオロメトキシ（－ＯＣＦ３）である。「ハロアルキル」には、モノハロアルキル、ジハロアルキル、トリハロアルキル、ペルハロアルキル、及びアルキル基上で可能な任意の他の数のハロ置換基が含まれ；及び、ハロアルキレン、ハロアリール、ハロアリレン、ハロヘテロアリールなどの他の基についても同様である。
[0085] 「アミノ」は、基－ＮＨ２を指す。
[0086] 「オキソ」は、基＝Ｏ、即ち、炭素又は別の化学元素に二重結合した酸素原子を指す。
[0087] 「任意選択で置換されている」は、特に指定されない限り、ある基が置換されていないか、又はその基について挙げられる置換基のうちの１個以上（例えば、１、２、３、４、又は５個）（ここで置換基は同じであっても、又は異なってもよい）によって置換されていることを意味する。一実施形態において、任意選択で置換されている基は、置換されていない。一実施形態において、任意選択で置換されている基は、１個の置換基を有する。別の実施形態において、任意選択で置換されている基は、２個の置換基を有する。別の実施形態において、任意選択で置換されている基は、３個の置換基を有する。別の実施形態において、任意選択で置換されている基は、４個の置換基を有する。一部の実施形態において、任意選択で置換されている基は、１～２、１～３、１～４、又は１～５個の置換基を有する。複数の置換基が存在する場合、各置換基は、特に指示がない限り、独立に選ばれる。例えば、基－Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）（Ｃ１～Ｃ４アルキル）の各（Ｃ１～Ｃ４アルキル）置換基は、－Ｎ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）などの基を生じるように、他とは独立に選択され得る。
[0088] 本明細書における開示に加えて、用語「置換されている」はまた、指定される基又はラジカルを修飾して使用されるとき、指定される基又はラジカルの１個以上の水素原子（Ｈ）が、各々、互いに独立に、本明細書に定義するとおりの同じ又は異なる置換基で置き換えられていることも意味し得る。一部の実施形態において、置換されている基は、１、２、３、又は４個の置換基、１、２、又は３個の置換基、１又は２個の置換基、又は１個の置換基を有する。
[0089] 置換基は、特に指示がない限り、指定される基又はラジカル上の任意の化学的に可能な位置に結合し得る。従って、例えば、一実施形態において、－Ｃ１～Ｃ８アルキル－ＯＨには、例えば、－ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ及び－ＣＨ（ＯＨ）－ＣＨ３、及び－ＣＨ２Ｃ（ＯＨ）（ＣＨ３）２などが含まれる。更なる例として、一実施形態において、－Ｃ１～Ｃ６アルキル－ＯＨには、例えば、－ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ及び－ＣＨ（ＯＨ）－ＣＨ３、及び－ＣＨ２Ｃ（ＯＨ）（ＣＨ３）２などが含まれる。更なる例として、一実施形態において、－Ｃ１～Ｃ６アルキル－ＣＮには、例えば、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＮ及び－ＣＨ（ＣＮ）－ＣＨ３、及び－ＣＨ２Ｃ（ＣＮ）（ＣＨ３）２などが含まれる。
[0090] 式中に元素の具体的な同位体が指示されない限り、本開示は、例えば、化合物の重水素化された誘導体（ここではＨが２Ｈ、即ち重水素（Ｄ）であり得る）など、本明細書に開示される化合物のあらゆるアイソトポログを包含する。重水素化された化合物は、薬物動態学的（ＡＤＭＥ）特性の好ましい変化を提供し得る。アイソトポログは、構造中のありとあらゆる位置に同位体による置換を有することができ、又は構造中のありとあらゆる位置に天然の存在量で存在する原子を有することができる。
[0091] 「小分子」は、本明細書で使用されるとき、分子量が１，０００ダルトン以下の化合物を指す。
[0092] 水素原子はまた、フッ素など、近縁のバイオアイソスターで置き換えられてもよく、但し、かかる置き換えによって安定化合物がもたらされるものとする。
[0093] 本開示はまた、本明細書に記載される化合物の任意のエナンチオマー又はジアステレオマー形態、及びシス／トランス又はＥ／Ｚ異性体を含め、ありとあらゆる立体化学形態も包含する。化学構造又は化学名中に立体化学が明示的に指示されない限り、その構造又は化学名は、図示される化合物のあらゆる可能な立体異性体を包含することが意図される。加えて、具体的な立体化学形態が図示される場合、他のあらゆる立体化学形態、並びに一般的な非立体特異的形態及び化合物のラセミ体の、非ラセミ体の、エナンチオ濃縮された、及びスケールミックな混合物が包含されるように、開示される化合物の２つ以上の立体化学形態の任意の比率の混合物を含めた、開示される化合物の任意の比率の混合物もまた記載され、本開示に包含されることが理解される。具体的な立体化学形態を含めた、実質的に純粋な化合物の組成物など、開示される化合物を含む組成物もまた意図される。化合物のラセミ体の、非ラセミ体の、エナンチオ濃縮された、及びスケールミックな混合物が本開示に包含されるように、開示される化合物の２つ以上の立体化学形態の任意の比率の混合物を含む組成物を含め、開示される化合物の任意の比率の混合物を含む組成物もまた、本開示に包含される。分子の１つ又は複数のある部分について立体化学が明示的に指示されるが、分子の１つ又は複数の別の部分については指示されない場合、その構造は、立体化学が明示的に指示されないその１つ又は複数の部分について可能なあらゆる立体異性体を包含することが意図される。本開示はまた、本明細書に記載される化合物のありとあらゆる互変異性形態も包含する。
[0094] 本開示は、本明細書に記載される化合物の全ての塩、並びに化合物のかかる塩の使用方法を包含することが意図される。一実施形態において、化合物の塩は、薬学的に許容可能な塩を含む。薬学的に許容可能な塩は、ヒト及び／又は動物に薬物又は医薬として投与することができ、且つ投与時に、遊離化合物（中性化合物又は非塩化合物）の生物学的活性の少なくとも一部を保持しているような塩である。塩基性化合物の望ましい塩は、当業者に公知の方法により、化合物を酸で処理することによって調製し得る。無機酸の例としては、限定はされないが、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、及びリン酸が挙げられる。有機酸の例としては、限定はされないが、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、スルホン酸、及びサリチル酸が挙げられる。アスパラギン酸塩及びグルタミン酸塩など、アミノ酸との塩基性化合物の塩もまた調製することができる。酸性化合物の望ましい塩は、当業者に公知の方法により、化合物を塩基で処理することによって調製し得る。酸性化合物の無機塩の例としては、限定はされないが、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、及びカルシウム塩など、アルカリ金属塩及びアルカリ土類塩；アンモニウム塩；及びアルミニウム塩が挙げられる。酸性化合物の有機塩の例としては、限定はされないが、プロカイン塩、ジベンジルアミン塩、Ｎ－エチルピペリジン塩、Ｎ，Ｎ’－ジベンジルエチレンジアミン塩、及びトリエチルアミン塩が挙げられる。リジン塩など、アミノ酸との酸性化合物の塩もまた調製することができる。薬学的に許容可能な塩の一覧は、例えば、P. H. Stahl and C. G. Wermuth (eds.)“Handbook of Pharmaceutical Salts, Properties, Selection and Use”Wiley-VCH, 2011 (ISBN: 978-3-90639-051-2)を参照されたい。幾つかの薬学的に許容可能な塩が、Berge, J. Pharm. Sci. 66:1 (1977)にも開示されている。
[0095] 生物学的実施例１、８、及び／又は１２に記載されるとおり、Ｃｂｌ－ｂ阻害についてのＩＣ５０値の測定に用いられるＣｂｌ－ｂ活性アッセイ（Ｃｂｌ－ｂ阻害アッセイ）では、Ｎ末端ビオチン化Ａｖｉタグ付加Ｃｂｌ－ｂ、BODIPY FLタグを付加した蛍光標識阻害薬プローブ（実施例５９）、及びアッセイ緩衝液を含む混合物が使用される。一実施形態において、Ｃｂｌ－ｂの阻害についてのＩＣ５０の測定に用いられるＣｂｌ－ｂ活性アッセイ（Ｃｂｌ－ｂ阻害アッセイ）では、生物学的実施例１、８、及び／又は１２に記載される条件が、０．５ｎＭ Ｃｂｌ－ｂ（「高」最終濃度）で使用される。別の実施形態において、Ｃｂｌ－ｂの阻害についてのＩＣ５０の測定に用いられるＣｂｌ－ｂ活性アッセイ（Ｃｂｌ－ｂ阻害アッセイ）では、生物学的実施例１、８、及び／又は１２に記載される条件が、０．１２５ｎＭ Ｃｂｌ－ｂ（「低」最終濃度）で使用される。
[0096] 明確にするため、個別の実施形態の文脈で記載される本明細書に開示される特定の特徴がまた、単一の実施形態として組み合わせて提供されてもよいことが理解される。逆に、簡潔にするため、単一の実施形態の文脈で記載される本明細書に開示される様々な特徴がまた、個別に、又は任意の好適な部分的組み合わせで提供されてもよい。可変基によって表される化学基に関する実施形態のあらゆる組み合わせが、本開示に具体的に包含されるとともに、あたかも、一つ一つの組み合わせが、安定化合物（即ち、単離し、特徴付け、及び生物学的活性に関して試験することができる化合物）である化合物を包含する限りにおいて、かかる組み合わせが個別に且つ明示的に開示されたかのように本明細書に開示される。加えて、かかる可変基を記載する実施形態に挙げられる化学基の全ての部分的組み合わせもまた、本開示に具体的に包含されるとともに、あたかも、化学基の一つ一つのかかる部分的組み合わせが本明細書に個別に且つ明示的に開示されたかのように本明細書に開示される。
[0097] 本明細書に「～を含む（comprising）」と記載される態様及び実施形態は、「～からなる（consisting of）」及び「～から本質的になる（consisting essentially of）」実施形態を含むことが理解される。
[0098] 本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用されるとき、単数形「ある（a）」、「ある（an）」、及び「その（the）」は、特に指示されない限り、又は文脈から明らかでない限り、複数の指示対象を含む。例えば、「ある」賦形剤とは、１つ以上の賦形剤を含む。
[0099] 「約」値という表現は、その値の９０％～１１０％を包含する。例えば、約５００億個の細胞は、４５０～５５０億個の細胞を指し、５００億個の細胞を含む。例えば、「約１００度」の温度は、約９０度～約１１０度の温度を指す。
[0100] 化合物の数値範囲が与えられるとき、明示的に除外されない限り、その数値限界内にある全ての化合物が、任意の指示される「ａ」及び「ｂ」を含め、包含される。例えば、化合物４１～４３という表現は、化合物４１、４２、及び４３を指す。
ＩＩ．化合物
[0101] 一態様において、式（Ｉ）の化合物
Figure 0007587528000029
又はその互変異性体、その立体異性体（stereisomer）、若しくはその薬学的に許容可能な塩［式中：
Figure 0007587528000030
は、
Figure 0007587528000031
であり；
Ｚ１は、ＣＨ又はＮであり；
Ｚ２は、ＣＨ又はＮであり；
Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、又はＣ１～Ｃ６ハロアルキルであり；
Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキル、又はＣ３～Ｃ６シクロアルキルであり；
Ｒ３は、－ＣＦ３又はシクロプロピルであり；
Ｒ４は、－ＣＦ３又はシクロプロピルであり；
ｎは、０又は１であり；
Ｘは、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキル、又は
Figure 0007587528000032
であり；
Ｒ５は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキル、Ｃ１～Ｃ６アルキル－ＯＨ、又はＣ１～Ｃ６アルキル－ＣＮであり；
Ｒ６は、単環式Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、縮合二環式Ｃ４～Ｃ８シクロアルキル、架橋二環式Ｃ４～Ｃ８シクロアルキル、スピロ二環式Ｃ５～Ｃ８シクロアルキル、又は５～６員環ヘテロシクリルであり、これらの各々は、１～５個のＲ７基によって任意選択で置換されているか；
又はＲ５及びＲ６は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、５～１０員環単環式、縮合二環式、若しくは架橋ヘテロシクリル、又は５～１０員環単環式若しくは二環式ヘテロアリールを形成し、このヘテロシクリル又はヘテロアリールの各々は、Ｎ及びＯからなる群から選択される１～２個の更なるヘテロ原子を任意選択で含み、及びこのヘテロシクリル又はヘテロアリールの各々は、１～５個のＲ８基によって任意選択で置換されており；
各Ｒ７は、独立に、ハロ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキル、Ｃ１～Ｃ６アルキル－ＯＨ、又はＣ１～Ｃ６アルキル－ＣＮであり；
各Ｒ８は、独立に、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキル、Ｃ１～Ｃ６アルキル－ＯＨ、－ＣＮ、Ｃ１～Ｃ６アルキル－ＣＮ、－（Ｃ１～Ｃ６アルキレン）－Ｏ－（Ｃ１～Ｃ６アルキル）、ヒドロキシ、又はハロであるか、
又は同じ炭素原子に結合した２個のＲ８基が、それらが結合している炭素原子と一緒になって、スピロＣ３～Ｃ６シクロアルキル又はスピロ５～６員環ヘテロシクリルを形成し；及び
各Ｒ９は、独立に、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキル、又はＣ１～Ｃ６アルキル－ＯＨである］が提供される。
[0102] 一部の実施形態において、
Figure 0007587528000033
（即ち、環Ａ部分）は、
Figure 0007587528000034
である。一部の実施形態において、Ｚ１は、ＣＨである。他の実施形態において、Ｚ１は、Ｎである。一部の実施形態において、Ｒ３は、－ＣＦ３である。他の実施形態において、Ｒ３は、シクロプロピルである。一部の実施形態において、環Ａ部分は、
Figure 0007587528000035
である。一部の実施形態において、Ｚ２は、ＣＨである。他の実施形態において、Ｚ２は、Ｎである。一部の実施形態において、Ｒ４は、－ＣＦ３である。他の実施形態において、Ｒ４は、シクロプロピルである。一部の実施形態において、環Ａ部分は、
Figure 0007587528000036
からなる群から選択される。一部の実施形態において、環Ａ部分は、
Figure 0007587528000037
である。一部の実施形態において、環Ａ部分は、
Figure 0007587528000038
である。一部の実施形態において、環Ａ部分は、
Figure 0007587528000039
である。一部の実施形態において、環Ａ部分は、
Figure 0007587528000040
である。一部の実施形態において、環Ａ部分は、
Figure 0007587528000041
である。一部の実施形態において、環Ａ部分は、
Figure 0007587528000042
である。一部の実施形態において、環Ａ部分は、
Figure 0007587528000043
である。一部の実施形態において、環Ａ部分は、
Figure 0007587528000044
である。
[0103] 一部の実施形態において、Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、又はＣ１～Ｃ６ハロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ３アルキル、又はＣ１～Ｃ３ハロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ１は、Ｈ、－ＣＨ３、又は－ＣＦ３である。一部の実施形態において、Ｒ１は、Ｈである。
[0104] 一部の実施形態において、Ｒ１は、Ｃ１～Ｃ６アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ１は、Ｃ１～Ｃ３アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ１は、メチル、エチル、ｎ－プロピル、又はイソプロピルである。一部の実施形態において、Ｒ１は、－ＣＨ３である。
[0105] 一部の実施形態において、Ｒ１は、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ１は、１～１３個のハロゲン原子を含有するＣ１～Ｃ６ハロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ１は、１～７個のハロゲン原子を含有するＣ１～Ｃ６ハロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ１は、Ｃ１～Ｃ３ハロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ１は、１～７個のハロゲン原子を含有するＣ１～Ｃ３ハロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ１は、１～５個のハロゲン原子を含有するＣ１～Ｃ２ハロアルキルである。一部の実施形態において、ハロゲン原子は、独立に、クロロ、ブロモ、及びフルオロ原子からなる群から選択される。一部の実施形態において、ハロゲン原子は、独立に、クロロ及びフルオロ原子からなる群から選択される。一部の実施形態において、ハロゲン原子は、全てフルオロ原子である。一部の実施形態において、ハロゲン原子は、クロロ原子とフルオロ原子との組み合わせである。一部の実施形態において、Ｒ１は、－ＣＦ３、－ＣＣｌ３、－ＣＦ２Ｃｌ、－ＣＦＣｌ２、－ＣＨＦ２、－ＣＨ２Ｆ、－ＣＨＣｌ２、－ＣＨ２Ｆ、又は－ＣＨＦＣｌである。一部の実施形態において、Ｒ１は、－ＣＦ３である。
[0106] 一部の実施形態において、Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキル、又はＣ３～Ｃ６シクロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３ハロアルキル、又はＣ３～Ｃ４シクロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ２は、Ｈ、－ＣＨ３、－ＣＦ３、－ＣＨＦ２、－ＣＨ２Ｆ、又はシクロプロピルである。
[0107] 一部の実施形態において、Ｒ２は、Ｈである。
[0108] 一部の実施形態において、Ｒ２は、Ｃ１～Ｃ６アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ２は、Ｃ１～Ｃ３アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ２は、メチル、エチル、ｎ－プロピル、又はイソプロピルである。一部の実施形態において、Ｒ２は、－ＣＨ３である。
[0109] 一部の実施形態において、Ｒ２は、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ２は、１～７個のハロゲン原子を含有するＣ１～Ｃ６ハロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ２は、Ｃ１～Ｃ３ハロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ２は、１～７個のハロゲン原子を含有するＣ１～Ｃ３ハロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ２は、１～５個のハロゲン原子を含有するＣ１～Ｃ２ハロアルキルである。一部の実施形態において、ハロゲン原子は、独立に、クロロ、ブロモ、及びフルオロ原子からなる群から選択される。一部の実施形態において、ハロゲン原子は、独立に、クロロ及びフルオロ原子からなる群から選択される。一部の実施形態において、ハロゲン原子は、全てフルオロ原子である。一部の実施形態において、ハロゲン原子は、クロロ原子とフルオロ原子との組み合わせである。一部の実施形態において、Ｒ２は、－ＣＦ３、－ＣＣｌ３、－ＣＦ２Ｃｌ、－ＣＦＣｌ２、－ＣＨＦ２、－ＣＨ２Ｆ、－ＣＨＣｌ２、－ＣＨ２Ｆ、又は－ＣＨＦＣｌである。一部の実施形態において、Ｒ２は、－ＣＦ３、－ＣＨＦ２、又は－ＣＨ２Ｆである。
[0110] 一部の実施形態において、Ｒ２は、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ２は、Ｃ３～Ｃ５シクロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ２は、Ｃ３～Ｃ４シクロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ２は、シクロプロピル、シクロブチル、又はシクロペンチルである。一部の実施形態において、Ｒ２は、シクロプロピルである。
[0111] 一部の実施形態において、ｎは、１である。一部の実施形態において、ｎは、０である。
[0112] 一部の実施形態において、Ｘは、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキル、又は
Figure 0007587528000045
である。一部の実施形態において、Ｘは、Ｈである。一部の実施形態において、Ｘは、Ｃ１～Ｃ３アルキル又はＣ１～Ｃ３ハロアルキルである。一部の実施形態において、Ｘは、－ＣＨ３又は－ＣＦ３である。
[0113] 一部の実施形態において、Ｘは、Ｃ１～Ｃ６アルキルである。一部の実施形態において、Ｘは、Ｃ１～Ｃ３アルキルである。一部の実施形態において、Ｘは、メチル、エチル、ｎ－プロピル、又はイソプロピルである。一部の実施形態において、Ｘは、－ＣＨ３である。
[0114] 一部の実施形態において、Ｘは、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキルである。一部の実施形態において、Ｘは、１～７個のハロゲン原子を含有するＣ１～Ｃ６ハロアルキルである。一部の実施形態において、Ｘは、Ｃ１～Ｃ３ハロアルキルである。一部の実施形態において、Ｘは、１～７個のハロゲン原子を含有するＣ１～Ｃ３ハロアルキルである。一部の実施形態において、Ｘは、１～５個のハロゲン原子を含有するＣ１～Ｃ２ハロアルキルである。一部の実施形態において、ハロゲン原子は、独立に、クロロ、ブロモ、及びフルオロ原子からなる群から選択される。一部の実施形態において、ハロゲン原子は、独立に、クロロ及びフルオロ原子からなる群から選択される。一部の実施形態において、ハロゲン原子は、全てフルオロ原子である。一部の実施形態において、ハロゲン原子は、クロロ原子とフルオロ原子との組み合わせである。一部の実施形態において、Ｘは、－ＣＦ３、－ＣＣｌ３、－ＣＦ２Ｃｌ、－ＣＦＣｌ２、－ＣＨＦ２、－ＣＨ２Ｆ、－ＣＨＣｌ２、－ＣＨ２Ｆ、又は－ＣＨＦＣｌである。一部の実施形態において、Ｘは、－ＣＦ３である。
[0115] 一部の実施形態において、Ｘは、
Figure 0007587528000046
である。
[0116] 一部の実施形態において、Ｒ５は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキル、Ｃ１～Ｃ６アルキル－ＯＨ、又はＣ１～Ｃ６アルキル－ＣＮである。一部の実施形態において、Ｒ５は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ３アルキル、又はＣ１～Ｃ３ハロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ５は、Ｈ、－ＣＨ３、－ＣＦ３、－ＣＨ２ＣＮ、又は－ＣＨ２ＯＨである。一部の実施形態において、Ｒ５は、Ｈである。
[0117] 一部の実施形態において、Ｒ５は、Ｃ１～Ｃ６アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ５は、Ｃ１～Ｃ３アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ５は、メチル、エチル、ｎ－プロピル、又はイソプロピルである。一部の実施形態において、Ｒ５は、－ＣＨ３である。
[0118] 一部の実施形態において、Ｒ５は、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ５は、１～７個のハロゲン原子を含有するＣ１～Ｃ６ハロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ５は、Ｃ１～Ｃ３ハロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ５は、１～７個のハロゲン原子を含有するＣ１～Ｃ３ハロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ５は、１～５個のハロゲン原子を含有するＣ１～Ｃ２ハロアルキルである。一部の実施形態において、ハロゲン原子は、独立に、クロロ、ブロモ、及びフルオロ原子からなる群から選択される。一部の実施形態において、ハロゲン原子は、独立に、クロロ及びフルオロ原子からなる群から選択される。一部の実施形態において、ハロゲン原子は、全てフルオロ原子である。一部の実施形態において、ハロゲン原子は、クロロ原子とフルオロ原子との組み合わせである。一部の実施形態において、Ｒ５は、－ＣＦ３、－ＣＣｌ３、－ＣＦ２Ｃｌ、－ＣＦＣｌ２、－ＣＨＦ２、－ＣＨ２Ｆ、－ＣＨＣｌ２、－ＣＨ２Ｆ、又は－ＣＨＦＣｌである。一部の実施形態において、Ｒ５は－ＣＦ３である。
[0119] 一部の実施形態において、Ｒ５は、Ｃ１～Ｃ６アルキル－ＯＨである。一部の実施形態において、Ｒ５は、Ｃ１～Ｃ３アルキル－ＯＨである。一部の実施形態において、Ｒ５は、－ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ２ＣＨ２－ＯＨ、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－ＯＨ、又は－Ｃ（ＣＨ３）２－ＯＨである。一部の実施形態において、Ｒ５は、－ＣＨ２ＯＨである。
[0120] 一部の実施形態において、Ｒ５は、Ｃ１～Ｃ６アルキル－ＣＮである。一部の実施形態において、Ｒ５は、Ｃ１～Ｃ３アルキル－ＣＮである。一部の実施形態において、Ｒ５は、－ＣＨ２ＣＮ、－ＣＨ２ＣＨ２－ＣＮ、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－ＣＮ、又は－Ｃ（ＣＨ３）２－ＣＮである。一部の実施形態において、Ｒ５は、－ＣＨ２ＣＮである。
[0121] 一部の実施形態において、Ｒ６は、単環式Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、縮合二環式Ｃ４～Ｃ８シクロアルキル、架橋二環式Ｃ４～Ｃ８シクロアルキル、スピロ二環式Ｃ５～Ｃ８シクロアルキル、又は５～６員環ヘテロシクリルであり、これらの各々は、１～５個のＲ７基によって任意選択で置換されている。
[0122] 一部の実施形態において、Ｒ６は、１～５個のＲ７基によって任意選択で置換されている単環式Ｃ３～Ｃ６シクロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ６は、１～５個のＲ７基によって任意選択で置換されている単環式Ｃ３～Ｃ５シクロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ６は、１～５個のＲ７基によって任意選択で置換されている単環式Ｃ４～Ｃ５シクロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ６は、シクロプロピル、シクロブチル、又はシクロペンチルであり、これらの各々は、１～５個のＲ７基によって任意選択で置換されている。一部の実施形態において、Ｒ６は、シクロブチル又はシクロペンチルであり、これらの各々は、１～５個のＲ７基によって任意選択で置換されている。一部の実施形態において、Ｒ６は、１～５個のＲ７基によって置換されている単環式Ｃ３～Ｃ６シクロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ６は、１個のＲ７基によって置換されている単環式Ｃ３～Ｃ６シクロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ６は、２個のＲ７基によって置換されている単環式Ｃ３～Ｃ６シクロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ６は、３個のＲ７基によって置換されている単環式Ｃ３～Ｃ６シクロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ６は、４個のＲ７基によって置換されている単環式Ｃ３～Ｃ６シクロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ６は、５個のＲ７基によって置換されている単環式Ｃ３～Ｃ６シクロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ６は、非置換単環式Ｃ３～Ｃ６シクロアルキルである。
[0123] 一部の実施形態において、Ｒ６は、１～５個のＲ７基によって任意選択で置換されている縮合二環式Ｃ４～Ｃ８シクロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ６は、１～５個のＲ７基によって任意選択で置換されている縮合二環式Ｃ４～Ｃ７シクロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ６は、１～５個のＲ７基によって任意選択で置換されている縮合二環式Ｃ５～Ｃ８シクロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ６は、１～５個のＲ７基によって置換されている縮合二環式Ｃ４～Ｃ８シクロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ６は、１個のＲ７基によって置換されている縮合二環式Ｃ４～Ｃ８シクロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ６は、２個のＲ７基によって置換されている縮合二環式Ｃ４～Ｃ８シクロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ６は、３個のＲ７基によって置換されている縮合二環式Ｃ４～Ｃ８シクロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ６は、４個のＲ７基によって置換されている縮合二環式Ｃ４～Ｃ８シクロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ６は、５個のＲ７基によって置換されている縮合二環式Ｃ４～Ｃ８シクロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ６は、非置換縮合二環式Ｃ４～Ｃ８シクロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ６は、
Figure 0007587528000047
［式中、－（Ｒ７）０－５は、縮合二環式環系を構成する２つの環のいずれか一方の任意選択の置換を表す］である。一部の実施形態において、縮合二環式環系の両方の環が置換されている。一部の実施形態において、縮合二環式環系の２つの環のうちの一方が置換されており、他方の環は置換されていない。一部の実施形態において、縮合二環式環系の両方の環が置換されていない。
[0124] 一部の実施形態において、Ｒ６は、１～５個のＲ７基によって任意選択で置換されている架橋二環式Ｃ４～Ｃ８シクロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ６は、１～５個のＲ７基によって任意選択で置換されている架橋二環式Ｃ５～Ｃ８シクロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ６は、１～５個のＲ７基によって置換されている架橋二環式Ｃ４～Ｃ８シクロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ６は、１個のＲ７基によって置換されている架橋二環式Ｃ４～Ｃ８シクロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ６は、２個のＲ７基によって置換されている架橋二環式Ｃ４～Ｃ８シクロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ６は、３個のＲ７基によって置換されている架橋二環式Ｃ４～Ｃ８シクロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ６は、４個のＲ７基によって置換されている架橋二環式Ｃ４～Ｃ８シクロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ６は、５個のＲ７基によって置換されている架橋二環式Ｃ４～Ｃ８シクロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ６は、非置換架橋二環式Ｃ４～Ｃ８シクロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ６は、
Figure 0007587528000048
［式中、－（Ｒ７）０－５は、架橋二環式環系を構成する炭素原子のいずれかにおける任意選択の置換を表す］である。一部の実施形態において、架橋二環式Ｃ４～Ｃ８シクロアルキルの架橋部分は、Ｃ１～Ｃ３アルキレンである。一部の実施形態において、架橋二環式Ｃ４～Ｃ８シクロアルキルの架橋部分は、－ＣＨ２－又は－ＣＨ２ＣＨ２－である。一部の実施形態において、架橋二環式Ｃ４～Ｃ８シクロアルキルの架橋部分は、－ＣＨ２－である。
[0125] 一部の実施形態において、Ｒ６は、１～５個のＲ７基によって任意選択で置換されているスピロ二環式Ｃ５～Ｃ８シクロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ６は、１～５個のＲ７基によって任意選択で置換されているスピロ二環式Ｃ６～Ｃ８シクロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ６は、１～５個のＲ７基によって任意選択で置換されているスピロ二環式Ｃ５～Ｃ７シクロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ６は、１～５個のＲ７基によって置換されているスピロ二環式Ｃ５～Ｃ８シクロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ６は、１個のＲ７基によって置換されているスピロ二環式Ｃ５～Ｃ８シクロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ６は、２個のＲ７基によって置換されているスピロ二環式Ｃ５～Ｃ８シクロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ６は、３個のＲ７基によって置換されているスピロ二環式Ｃ５～Ｃ８シクロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ６は、４個のＲ７基によって置換されているスピロ二環式Ｃ５～Ｃ８シクロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ６は、５個のＲ７基によって置換されているスピロ二環式Ｃ５～Ｃ８シクロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ６は、非置換スピロ二環式Ｃ５～Ｃ８シクロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ６は、
Figure 0007587528000049
［式中、－（Ｒ７）０－５は、スピロ二環式環系を構成する２つの環のいずれか一方の任意選択の置換を表す］である。一部の実施形態において、スピロ二環式環系の両方の環が置換されている。一部の実施形態において、スピロ二環式環系の２つの環のうちの一方が置換されており、他方の環は置換されていない。一部の実施形態において、スピロ二環式環系の両方の環が置換されていない。
[0126] 一部の実施形態において、Ｒ６は、１～５個のＲ７基によって任意選択で置換されている５～６員環ヘテロシクリルである。一部の実施形態において、Ｒ６は、１～５個のＲ７基によって置換されている５～６員環ヘテロシクリルである。一部の実施形態において、Ｒ６は、１個のＲ７基によって置換されている５～６員環ヘテロシクリルである。一部の実施形態において、Ｒ６は、２個のＲ７基によって置換されている５～６員環ヘテロシクリルである。一部の実施形態において、Ｒ６は、３個のＲ７基によって置換されている５～６員環ヘテロシクリルである。一部の実施形態において、Ｒ６は、４個のＲ７基によって置換されている５～６員環ヘテロシクリルである。一部の実施形態において、Ｒ６は、５個のＲ７基によって置換されている５～６員環ヘテロシクリルである。一部の実施形態において、Ｒ６は、非置換５～６員環ヘテロシクリルである。一部の実施形態において、５～６員環ヘテロシクリルは、窒素、酸素、及び硫黄からなる群から選択される１～３個のヘテロ原子を含有する。一部の実施形態において、５～６員環ヘテロシクリルは、１個の窒素原子を含有する。一部の実施形態において、５～６員環ヘテロシクリルは、２個の窒素原子を含有する。一部の実施形態において、５～６員環ヘテロシクリルは、１個の酸素原子を含有する。一部の実施形態において、５～６員環ヘテロシクリルは、２個の酸素原子を含有する。一部の実施形態において、５～６員環ヘテロシクリルは、１個の酸素原子及び１個の窒素原子を含有する。一部の実施形態において、５～６員環ヘテロシクリルは、１個の硫黄原子を含有する。一部の実施形態において、５～６員環ヘテロシクリルは、１個の窒素原子及び１個の硫黄原子を含有する。一部の実施形態において、Ｒ６は、テトラヒドロフラニル、ジオキソラニル、ピロリジニル、ピラゾリジニル、ピペリジニル、イソオキサゾリジニル、又はテトラヒドロピラニルであり、これらの各々は、１～５個のＲ７基によって任意選択で置換されている。一部の実施形態において、Ｒ６は、
Figure 0007587528000050
である。
[0127] 一部の実施形態において、Ｒ６は、
Figure 0007587528000051
からなる群から選択される。一部の実施形態において、Ｒ６は、
Figure 0007587528000052
である。一部の実施形態において、Ｒ６は、
Figure 0007587528000053
である。一部の実施形態において、Ｒ６は、
Figure 0007587528000054
である。一部の実施形態において、Ｒ６は、
Figure 0007587528000055
である。一部の実施形態において、Ｒ６は、
Figure 0007587528000056
である。
[0128] 一部の実施形態において、各Ｒ７は、独立に、ハロ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキル、Ｃ１～Ｃ６アルキル－ＯＨ、又はＣ１～Ｃ６アルキル－ＣＮである。一部の実施形態において、各Ｒ７は、独立に、ハロ、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３ハロアルキル、Ｃ１～Ｃ３アルキル－ＯＨ、又はＣ１～Ｃ３アルキル－ＣＮである。一部の実施形態において、各Ｒ７は、独立に、フルオロ、－ＣＨ３、－ＣＦ３、－ＣＨ２ＯＨ、又は－ＣＨ２ＣＮである。
[0129] 一部の実施形態において、Ｒ７は、ハロである。一部の実施形態において、Ｒ７は、クロロ、フルオロ、又はブロモである。一部の実施形態において、Ｒ７は、クロロ又はフルオロである。一部の実施形態において、Ｒ７は、フルオロである。
[0130] 一部の実施形態において、Ｒ７は、Ｃ１～Ｃ６アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ７は、Ｃ１～Ｃ３アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ７は、メチル、エチル、ｎ－プロピル、又はイソプロピルである。一部の実施形態において、Ｒ７は、－ＣＨ３である。
[0131] 一部の実施形態において、Ｒ７は、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ７は、１～７個のハロゲン原子を含有するＣ１～Ｃ６ハロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ７は、Ｃ１～Ｃ３ハロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ７は、１～７個のハロゲン原子を含有するＣ１～Ｃ３ハロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ７は、１～５個のハロゲン原子を含有するＣ１～Ｃ２ハロアルキルである。一部の実施形態において、ハロゲン原子は、独立に、クロロ、ブロモ、及びフルオロ原子からなる群から選択される。一部の実施形態において、ハロゲン原子は、独立に、クロロ及びフルオロ原子からなる群から選択される。一部の実施形態において、ハロゲン原子は、全てフルオロ原子である。一部の実施形態において、ハロゲン原子は、クロロ原子とフルオロ原子との組み合わせである。一部の実施形態において、Ｒ７は、－ＣＦ３、－ＣＣｌ３、－ＣＦ２Ｃｌ、－ＣＦＣｌ２、－ＣＨＦ２、－ＣＨ２Ｆ、－ＣＨＣｌ２、－ＣＨ２Ｆ、又は－ＣＨＦＣｌである。一部の実施形態において、Ｒ７は、－ＣＦ３である。
[0132] 一部の実施形態において、Ｒ７は、Ｃ１～Ｃ６アルキル－ＯＨである。一部の実施形態において、Ｒ７は、Ｃ１～Ｃ３アルキル－ＯＨである。一部の実施形態において、Ｒ７は、－ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ２ＣＨ２－ＯＨ、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－ＯＨ、又は－Ｃ（ＣＨ３）２－ＯＨである。一部の実施形態において、Ｒ７は、－ＣＨ２ＯＨである。
[0133] 一部の実施形態において、Ｒ７は、Ｃ１～Ｃ６アルキル－ＣＮである。一部の実施形態において、Ｒ７は、Ｃ１～Ｃ３アルキル－ＣＮである。一部の実施形態において、Ｒ７は、－ＣＨ２ＣＮ、－ＣＨ２ＣＨ２－ＣＮ、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－ＣＮ、又は－Ｃ（ＣＨ３）２－ＣＮである。一部の実施形態において、Ｒ７は、－ＣＨ２ＣＮである。
[0134] 一部の実施形態において、Ｒ５及びＲ６は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、５～１０員環単環式、縮合二環式、若しくは架橋ヘテロシクリル、又は５～１０員環単環式若しくは二環式ヘテロアリールを形成し、このヘテロシクリル又はヘテロアリールの各々は、Ｎ及びＯからなる群から選択される１～２個の更なるヘテロ原子を任意選択で含み、及びこのヘテロシクリル又はヘテロアリールの各々は、１～５個のＲ８基によって任意選択で置換されている。
[0135] 一部の実施形態において、Ｒ５及びＲ６は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、１～５個のＲ８基によって任意選択で置換されている５～１０員環単環式ヘテロシクリルを形成する。一部の実施形態において、Ｒ５及びＲ６は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、１～５個のＲ８基によって任意選択で置換されている５～８員環単環式ヘテロシクリルを形成する。一部の実施形態において、Ｒ５及びＲ６は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、１～５個のＲ８基によって任意選択で置換されている５～７員環単環式ヘテロシクリルを形成する。一部の実施形態において、５～１０員環単環式ヘテロシクリルは、１～５個のＲ８基によって置換されている。一部の実施形態において、５～１０員環単環式ヘテロシクリルは、１個のＲ８基によって置換されている。一部の実施形態において、５～１０員環単環式ヘテロシクリルは、２個のＲ８基によって置換されている。一部の実施形態において、５～１０員環単環式ヘテロシクリルは、３個のＲ８基によって置換されている。一部の実施形態において、５～１０員環単環式ヘテロシクリルは、４個のＲ８基によって置換されている。一部の実施形態において、５～１０員環単環式ヘテロシクリルは、５個のＲ８基によって置換されている。一部の実施形態において、５～１０員環単環式ヘテロシクリルは、置換されていない。一部の実施形態において、５～１０員環単環式ヘテロシクリルは、任意選択で、Ｎ及びＯからなる群から選択される１～２個の更なるヘテロ原子を含有する。一部の実施形態において、５～１０員環単環式ヘテロシクリルは、１個の窒素原子を含有する。一部の実施形態において、５～１０員環単環式ヘテロシクリルは、１個の窒素原子及び１個の酸素原子を含有する。一部の実施形態において、５～１０員環単環式ヘテロシクリルは、２個の窒素原子を含有する。
[0136] 一部の実施形態において、Ｒ５及びＲ６は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、１～５個のＲ８基によって任意選択で置換されている５～１０員環縮合二環式ヘテロシクリルを形成する。一部の実施形態において、Ｒ５及びＲ６は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、１～５個のＲ８基によって任意選択で置換されている７～１０員環縮合二環式（bicylic）ヘテロシクリルを形成する。一部の実施形態において、５～１０員環縮合二環式（bicylic）ヘテロシクリルは、１～５個のＲ８基によって置換されている。一部の実施形態において、５～１０員環縮合二環式（bicylic）ヘテロシクリルは、１個のＲ８基によって置換されている。一部の実施形態において、５～１０員環縮合二環式（bicylic）ヘテロシクリルは、２個のＲ８基によって置換されている。一部の実施形態において、５～１０員環縮合二環式（bicylic）ヘテロシクリルは、３個のＲ８基によって置換されている。一部の実施形態において、５～１０員環縮合二環式（bicylic）ヘテロシクリルは、４個のＲ８基によって置換されている。一部の実施形態において、５～１０員環縮合二環式（bicylic）ヘテロシクリルは、５個のＲ８基によって置換されている。一部の実施形態において、５～１０員環縮合二環式（bicylic）ヘテロシクリルは、置換されていない。一部の実施形態において、５～１０員環縮合二環式（bicylic）ヘテロシクリルは、任意選択で、Ｎ及びＯからなる群から選択される１～２個の更なるヘテロ原子を含有する。一部の実施形態において、５～１０員環縮合二環式（bicylic）ヘテロシクリルは、１個の窒素原子を含有する。一部の実施形態において、５～１０員環縮合二環式（bicylic）ヘテロシクリルは、１個の窒素原子及び１個の酸素原子を含有する。一部の実施形態において、５～１０員環縮合二環式（bicylic）ヘテロシクリルは、２個の窒素原子を含有する。一部の実施形態において、５～１０員環縮合二環式（bicylic）ヘテロシクリルは、部分不飽和環と縮合した１個の飽和環を含有する。一部の実施形態において、５～１０員環縮合二環式（bicylic）ヘテロシクリルは、第２の飽和環と縮合した１個の飽和環を含有する。一部の実施形態において、５～１０員環縮合二環式（bicylic）ヘテロシクリルは、第２の部分不飽和環と縮合した１個の部分不飽和環を含有する。
[0137] 一部の実施形態において、Ｒ５及びＲ６は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、１～５個のＲ８基によって任意選択で置換されている５～１０員環架橋ヘテロシクリルを形成する。一部の実施形態において、Ｒ５及びＲ６は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、１～５個のＲ８基によって任意選択で置換されている６～１０員環架橋ヘテロシクリルを形成する。一部の実施形態において、Ｒ５及びＲ６は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、１～５個のＲ８基によって任意選択で置換されている６～９員環架橋ヘテロシクリルを形成する。一部の実施形態において、５～１０員環架橋ヘテロシクリルは、１～５個のＲ８基によって置換されている。一部の実施形態において、５～１０員環架橋ヘテロシクリルは、１個のＲ８基によって置換されている。一部の実施形態において、５～１０員環架橋ヘテロシクリルは、２個のＲ８基によって置換されている。一部の実施形態において、５～１０員環架橋ヘテロシクリルは、３個のＲ８基によって置換されている。一部の実施形態において、５～１０員環架橋ヘテロシクリルは、４個のＲ８基によって置換されている。一部の実施形態において、５～１０員環架橋ヘテロシクリルは、５個のＲ８基によって置換されている。一部の実施形態において、５～１０員環架橋ヘテロシクリルは、置換されていない。一部の実施形態において、５～１０員環架橋ヘテロシクリルは、任意選択で、Ｎ及びＯからなる群から選択される１～２個の更なるヘテロ原子を含有する。一部の実施形態において、５～１０員環架橋ヘテロシクリルは、１個の窒素原子を含有する。一部の実施形態において、５～１０員環架橋ヘテロシクリルは、１個の窒素原子及び１個の酸素原子を含有する。一部の実施形態において、５～１０員環架橋ヘテロシクリルは、２個の窒素原子を含有する。一部の実施形態において、５～１０員環架橋ヘテロシクリルの架橋部分は、Ｃ１～Ｃ３アルキレンである。一部の実施形態において、５～１０員環架橋ヘテロシクリルの架橋部分は、－ＣＨ２－である。一部の実施形態において、５～１０員環架橋ヘテロシクリルの架橋部分は、－ＣＨ２ＣＨ２－である。
[0138] 一部の実施形態において、Ｒ５及びＲ６は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、１～５個のＲ８基によって任意選択で置換されている５～１０員環単環式ヘテロアリールを形成する。一部の実施形態において、Ｒ５及びＲ６は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、１～５個のＲ８基によって任意選択で置換されている５～８員環単環式ヘテロアリールを形成する。一部の実施形態において、Ｒ５及びＲ６は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、１～５個のＲ８基によって任意選択で置換されている５～６員環単環式ヘテロアリールを形成する。一部の実施形態において、５～１０員環単環式ヘテロアリールは、１～５個のＲ８基によって置換されている。一部の実施形態において、５～１０員環単環式ヘテロアリールは、１個のＲ８基によって置換されている。一部の実施形態において、５～１０員環単環式ヘテロアリールは、２個のＲ８基によって置換されている。一部の実施形態において、５～１０員環単環式ヘテロアリールは、３個のＲ８基によって置換されている。一部の実施形態において、５～１０員環単環式ヘテロアリールは、４個のＲ８基によって置換されている。一部の実施形態において、５～１０員環単環式ヘテロアリールは、５個のＲ８基によって置換されている。一部の実施形態において、５～１０員環単環式ヘテロアリールは、置換されていない。一部の実施形態において、５～１０員環単環式ヘテロアリールは、任意選択で、Ｎ及びＯからなる群から選択される１～２個の更なるヘテロ原子を含有する。一部の実施形態において、５～１０員環単環式ヘテロアリールは、１個の窒素原子を含有する。一部の実施形態において、５～１０員環単環式ヘテロアリールは、１個の窒素原子及び１個の酸素原子を含有する。一部の実施形態において、５～１０員環単環式ヘテロアリールは、２個の窒素原子を含有する。
[0139] 一部の実施形態において、Ｒ５及びＲ６は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、１～５個のＲ８基によって任意選択で置換されている５～１０員環二環式（bicylic）ヘテロアリールを形成する。一部の実施形態において、Ｒ５及びＲ６は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、１～５個のＲ８基によって任意選択で置換されている６～１０員環二環式ヘテロアリールを形成する。一部の実施形態において、５～１０員環二環式ヘテロアリールは、１～５個のＲ８基によって置換されている。一部の実施形態において、５～１０員環二環式ヘテロアリールは、１個のＲ８基によって置換されている。一部の実施形態において、５～１０員環二環式ヘテロアリールは、２個のＲ８基によって置換されている。一部の実施形態において、５～１０員環二環式ヘテロアリールは、３個のＲ８基によって置換されている。一部の実施形態において、５～１０員環二環式ヘテロアリールは、４個のＲ８基によって置換されている。一部の実施形態において、５～１０員環二環式ヘテロアリールは、５個のＲ８基によって置換されている。一部の実施形態において、５～１０員環二環式ヘテロアリールは、置換されていない。一部の実施形態において、５～１０員環二環式ヘテロアリールは、任意選択で、Ｎ及びＯからなる群から選択される１～２個の更なるヘテロ原子を含有する。一部の実施形態において、５～１０員環二環式ヘテロアリールは、１個の窒素原子を含有する。一部の実施形態において、５～１０員環二環式ヘテロアリールは、１個の窒素原子及び１個の酸素原子を含有する。一部の実施形態において、５～１０員環二環式ヘテロアリールは、２個の窒素原子を含有する。一部の実施形態において、５～１０員環二環式ヘテロアリールは、飽和環と縮合した１個の芳香環を含有する。一部の実施形態において、５～１０員環二環式ヘテロアリールは、第２の芳香環と縮合した１個の芳香環を含有する。一部の実施形態において、５～１０員環二環式ヘテロアリールは、部分不飽和環と縮合した１個の芳香環を含有する。
[0140] 一部の実施形態において、Ｒ５及びＲ６は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、
Figure 0007587528000057
［式中、－（Ｒ８）０－５は、縮合又は架橋二環式環系を構成する２つの環のいずれか一方の任意選択の置換、又は単環式環系の任意の炭素原子を表す］からなる群から選択される部分を形成する。一部の実施形態において、縮合又は架橋二環式環系の両方の環が置換されている。一部の実施形態において、縮合又は架橋二環式環系の２つの環のうちの一方が置換されており、他方の環は置換されていない。一部の実施形態において、縮合又は架橋二環式環系の両方の環が置換されていない。
[0141] 一部の実施形態において、Ｒ５及びＲ６は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、
Figure 0007587528000058
を形成する。一部の実施形態において、Ｒ５及びＲ６は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、
Figure 0007587528000059
を形成する。一部の実施形態において、Ｒ５及びＲ６は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、
Figure 0007587528000060
を形成する。一部の実施形態において、Ｒ５及びＲ６は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、
Figure 0007587528000061
を形成する。一部の実施形態において、Ｒ５及びＲ６は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、
Figure 0007587528000062
を形成する。一部の実施形態において、Ｒ５及びＲ６は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、
Figure 0007587528000063
を形成する。一部の実施形態において、Ｒ５及びＲ６は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、
Figure 0007587528000064
を形成する。一部の実施形態において、Ｒ５及びＲ６は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、
Figure 0007587528000065
を形成する。一部の実施形態において、Ｒ５及びＲ６は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、
Figure 0007587528000066
を形成する。一部の実施形態において、Ｒ５及びＲ６は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、
Figure 0007587528000067
を形成する。
[0142] 一部の実施形態において、各Ｒ８は、独立に、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキル、Ｃ１～Ｃ６アルキル－ＯＨ、－ＣＮ、Ｃ１～Ｃ６アルキル－ＣＮ、－（Ｃ１～Ｃ６アルキレン）－Ｏ－（Ｃ１～Ｃ６アルキル）、ヒドロキシ、又はハロである。一部の実施形態において、各Ｒ８は、独立に、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３ハロアルキル、Ｃ１～Ｃ３アルキル－ＯＨ、－ＣＮ、Ｃ１～Ｃ３アルキル－ＣＮ、－（Ｃ１～Ｃ３アルキレン）－Ｏ－（Ｃ１～Ｃ３アルキル）、ヒドロキシ、又はハロである。一部の実施形態において、各Ｒ８は、独立に、－ＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ３、－ＣＦ３、－ＣＨ２ＯＨ、－ＣＮ、－ＣＨ２ＣＮ、－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ３、ヒドロキシ、又はＦである。
[0143] 一部の実施形態において、Ｒ８は、Ｃ１～Ｃ６アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ８は、Ｃ１～Ｃ３アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ８は、メチル、エチル、ｎ－プロピル、又はイソプロピルである。一部の実施形態において、Ｒ８は、－ＣＨ３又は－ＣＨ２ＣＨ３である。
[0144] 一部の実施形態において、Ｒ８は、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ８は、１～７個のハロゲン原子を含有するＣ１～Ｃ６ハロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ８は、Ｃ１～Ｃ３ハロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ８は、１～７個のハロゲン原子を含有するＣ１～Ｃ３ハロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ８は、１～５個のハロゲン原子を含有するＣ１～Ｃ２ハロアルキルである。一部の実施形態において、ハロゲン原子は、独立に、クロロ、ブロモ、及びフルオロ原子からなる群から選択される。一部の実施形態において、ハロゲン原子は、独立に、クロロ及びフルオロ原子からなる群から選択される。一部の実施形態において、ハロゲン原子は、全てフルオロ原子である。一部の実施形態において、ハロゲン原子は、クロロ原子とフルオロ原子との組み合わせである。一部の実施形態において、Ｒ８は、－ＣＦ３、－ＣＣｌ３、－ＣＦ２Ｃｌ、－ＣＦＣｌ２、－ＣＨＦ２、－ＣＨ２Ｆ、－ＣＨＣｌ２、－ＣＨ２Ｆ、又は－ＣＨＦＣｌである。一部の実施形態において、Ｒ８は、－ＣＦ３である。
[0145] 一部の実施形態において、Ｒ８は、Ｃ１～Ｃ６アルキル－ＯＨである。一部の実施形態において、Ｒ８は、Ｃ１～Ｃ３アルキル－ＯＨである。一部の実施形態において、Ｒ８は、－ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ２ＣＨ２－ＯＨ、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－ＯＨ、又は－Ｃ（ＣＨ３）２－ＯＨである。一部の実施形態において、Ｒ８は、－ＣＨ２ＯＨである。
[0146] 一部の実施形態において、Ｒ８は、－ＣＮである。一部の実施形態において、Ｒ８は、Ｃ１～Ｃ６アルキル－ＣＮである。一部の実施形態において、Ｒ８は、Ｃ１～Ｃ３アルキル－ＣＮである。一部の実施形態において、Ｒ８は、－ＣＨ２ＣＮ、－ＣＨ２ＣＨ２－ＣＮ、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－ＣＮ、又は－Ｃ（ＣＨ３）２－ＣＮである。一部の実施形態において、Ｒ８は、－ＣＨ２ＣＮである。
[0147] 一部の実施形態において、Ｒ８は、－（Ｃ１～Ｃ６アルキレン）－Ｏ－（Ｃ１～Ｃ６アルキル）である。一部の実施形態において、Ｒ８は、－（Ｃ１～Ｃ３アルキレン）－Ｏ－（Ｃ１～Ｃ３アルキル）である。一部の実施形態において、Ｒ８は、－（Ｃ１～Ｃ２アルキレン）－Ｏ－（Ｃ１～Ｃ２アルキル）である。一部の実施形態において、Ｒ８は、－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ３、－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ３、又は－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ３である。一部の実施形態において、Ｒ８は、－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ３である。
[0148] 一部の実施形態において、Ｒ８は、ヒドロキシである。
[0149] 一部の実施形態において、Ｒ８は、ハロである。一部の実施形態において、Ｒ８は、クロロ、フルオロ、又はブロモである。一部の実施形態において、Ｒ８は、クロロ又はフルオロである。一部の実施形態において、Ｒ８は、フルオロである。
[0150] 一部の実施形態において、同じ炭素原子に結合した２個のＲ８基が、それらが結合している炭素原子と一緒になって、スピロＣ３～Ｃ６シクロアルキル又はスピロ５～６員環ヘテロシクリルを形成する。一部の実施形態において、同じ炭素原子に結合した２個のＲ８基が、それらが結合している炭素原子と一緒になって、スピロＣ３～Ｃ４シクロアルキル又はスピロ５～６員環ヘテロシクリルを形成する。一部の実施形態において、同じ炭素原子に結合した２個のＲ８基が、それらが結合している炭素原子と一緒になって、スピロシクロプロピルを形成する。
[0151] 一部の実施形態において、同じ炭素原子に結合した２個のＲ８基が、それらが結合している炭素原子と一緒になって、スピロＣ３～Ｃ６シクロアルキルを形成する。一部の実施形態において、同じ炭素原子に結合した２個のＲ８基が、それらが結合している炭素原子と一緒になって、スピロＣ３～Ｃ５シクロアルキルを形成する。一部の実施形態において、同じ炭素原子に結合した２個のＲ８基が、それらが結合している炭素原子と一緒になって、スピロシクロプロピル、シクロブチル、又はシクロペンチルを形成する。一部の実施形態において、同じ炭素原子に結合した２個のＲ８基が、それらが結合している炭素原子と一緒になって、スピロシクロプロピルを形成する。
[0152] 一部の実施形態において、同じ炭素原子に結合した２個のＲ８基が、それらが結合している炭素原子と一緒になって、スピロ５～６員環ヘテロシクリルを形成する。一部の実施形態において、スピロ５～６員環ヘテロシクリルは、窒素、酸素、及び硫黄からなる群から選択される１～３個のヘテロ原子を含有する。一部の実施形態において、スピロ５～６員環ヘテロシクリルは、１個の窒素原子を含有する。一部の実施形態において、スピロ５～６員環ヘテロシクリルは、２個の窒素原子を含有する。一部の実施形態において、スピロ５～６員環ヘテロシクリルは、１個の酸素原子を含有する。一部の実施形態において、スピロ５～６員環ヘテロシクリルは、２個の酸素原子を含有する。一部の実施形態において、スピロ５～６員環ヘテロシクリルは、１個の窒素原子及び１個の酸素原子を含有する。一部の実施形態において、スピロ５～６員環ヘテロシクリルは、ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、ピペリジニル（piperdinyl）、テトラヒドロピラニル、又はチオラニルである。
[0153] 一部の実施形態において、各Ｒ９は、独立に、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキル、又はＣ１～Ｃ６アルキル－ＯＨである。一部の実施形態において、各Ｒ９は、独立に、Ｈ、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３ハロアルキル、又はＣ１～Ｃ３アルキル－ＯＨである。一部の実施形態において、各Ｒ９は、独立に、Ｈ、－ＣＨ３、－ＣＦ３、又は－ＣＨ２ＯＨである。
[0154] 一部の実施形態において、Ｒ９は、Ｈである。一部の実施形態において、少なくとも一方のＲ９は、Ｈである。一部の実施形態において、一方のＲ９はＨであり、他方のＲ９は、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキル、又はＣ１～Ｃ６アルキル－ＯＨである。一部の実施形態において、一方のＲ９はＨであり、他方のＲ９はＣ１～Ｃ６アルキルである。一部の実施形態において、一方のＲ９はＨであり、他方のＲ９はＣ１～Ｃ６アルキルである。一部の実施形態において、一方のＲ９はＨであり、他方のＲ９は－ＣＨ３である。一部の実施形態において、Ｒ９基は両方とも、Ｈである。
[0155] 一部の実施形態において、Ｒ９は、Ｃ１～Ｃ６アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ９は、Ｃ１～Ｃ３アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ９は、メチル、エチル、ｎ－プロピル、又はイソプロピルである。一部の実施形態において、Ｒ９は、－ＣＨ３である。一部の実施形態において、Ｒ９基は両方とも、独立に、Ｃ１～Ｃ６アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ９基は両方とも、独立に、Ｃ１～Ｃ３アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ９基は両方とも、－ＣＨ３である。
[0156] 一部の実施形態において、Ｒ９は、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ９は、１～７個のハロゲン原子を含有するＣ１～Ｃ６ハロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ９は、Ｃ１～Ｃ３ハロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ９は、１～７個のハロゲン原子を含有するＣ１～Ｃ３ハロアルキルである。一部の実施形態において、Ｒ９は、１～５個のハロゲン原子を含有するＣ１～Ｃ２ハロアルキルである。一部の実施形態において、ハロゲン原子は、独立に、クロロ、ブロモ、及びフルオロ原子からなる群から選択される。一部の実施形態において、ハロゲン原子は、独立に、クロロ及びフルオロ原子からなる群から選択される。一部の実施形態において、ハロゲン原子は、全てフルオロ原子である。一部の実施形態において、ハロゲン原子は、クロロ原子とフルオロ原子との組み合わせである。一部の実施形態において、Ｒ９は、－ＣＦ３、－ＣＣｌ３、－ＣＦ２Ｃｌ、－ＣＦＣｌ２、－ＣＨＦ２、－ＣＨ２Ｆ、－ＣＨＣｌ２、－ＣＨ２Ｆ、又は－ＣＨＦＣｌである。一部の実施形態において、Ｒ９は、－ＣＦ３である。
[0157] 一部の実施形態において、Ｒ９は、Ｃ１～Ｃ６アルキル－ＯＨである。一部の実施形態において、Ｒ９は、Ｃ１～Ｃ３アルキル－ＯＨである。一部の実施形態において、Ｒ９は、－ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ２ＣＨ２－ＯＨ、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－ＯＨ、又は－Ｃ（ＣＨ３）２－ＯＨである。一部の実施形態において、Ｒ９は、－ＣＨ２ＯＨである。
[0158] 一部の実施形態において、式（Ｉ）の化合物、又はその任意の変形例若しくは態様は、式（Ｉ－ａ）について示される立体化学を有する：
Figure 0007587528000068
［式中、Ｒ１、Ｒ２、ｎ、Ｘ、及び環Ａ部分は、式（Ｉ）の化合物について記載されるとおりである］。
[0159] 一部の実施形態において、本化合物は、式（Ｉ－Ａ）又は（Ｉ－Ｂ）の化合物である：
Figure 0007587528000069
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ９、Ｚ１、Ｚ２、及びｎは、式（Ｉ）の化合物について記載されるとおりである］。
[0160] 一部の実施形態において、本化合物は、式（Ｉ－Ｃ）、（Ｉ－Ｄ）、（Ｉ－Ｅ）、（Ｉ－Ｆ）、（Ｉ－Ｇ）、（Ｉ－Ｈ）、（Ｉ－Ｉ）、又は（Ｉ－Ｊ）の化合物である：
Figure 0007587528000070
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ９、及びｎは、式（Ｉ）の化合物について記載されるとおりである］。
[0161] 一部の実施形態において、本化合物は、式（ＩＩ－Ａ）、（ＩＩ－Ｂ）、（ＩＩ－Ｃ）、（ＩＩ－Ｄ）、（ＩＩ－Ｅ）、（ＩＩ－Ｆ）、（ＩＩ－Ｇ）、又は（ＩＩ－Ｈ）の化合物である：
Figure 0007587528000071
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ７、Ｒ９、及びｎは、式（Ｉ）の化合物について記載されるとおりであり、及び
Figure 0007587528000072
は、単環式Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、縮合二環式Ｃ４～Ｃ８シクロアルキル、架橋二環式Ｃ４～Ｃ８シクロアルキル、スピロ二環式Ｃ５～Ｃ８シクロアルキル、又は５～６員環ヘテロシクリルである］。
[0162] 一部の実施形態において、本化合物は、式（ＩＩ－Ａ－１）、（ＩＩ－Ｂ－１）、（ＩＩ－Ｃ－１）、（ＩＩ－Ｄ－１）、（ＩＩ－Ｅ－１）、（ＩＩ－Ｆ－１）、（ＩＩ－Ｇ－１）、又は（ＩＩ－Ｈ－１）の化合物である：
Figure 0007587528000073
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ７、Ｒ９、及びｎは、式（Ｉ）の化合物について記載されるとおりであり、及び
Figure 0007587528000074
は、単環式Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、縮合二環式Ｃ４～Ｃ８シクロアルキル、架橋二環式Ｃ４～Ｃ８シクロアルキル、スピロ二環式Ｃ５～Ｃ８シクロアルキル、又は５～６員環ヘテロシクリルである］。
[0163] 一部の実施形態において、本化合物は、式（ＩＩＩ－Ａ）、（ＩＩＩ－Ｂ）、（ＩＩＩ－Ｃ）、（ＩＩＩ－Ｄ）、（ＩＩＩ－Ｅ）、（ＩＩＩ－Ｆ）、（ＩＩＩ－Ｇ）、又は（ＩＩＩ－Ｈ）の化合物である：
Figure 0007587528000075
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ８、Ｒ９、及びｎは、式（Ｉ）の化合物について記載されるとおりであり、及び
Figure 0007587528000076
は、５～１０員環単環式、縮合二環式、若しくは架橋ヘテロシクリル、又は５～１０員環単環式若しくは二環式ヘテロアリールであり、このヘテロシクリル又はヘテロアリールの各々は、Ｎ及びＯからなる群から選択される１～２個の更なるヘテロ原子を任意選択で含む］。
[0164] 一部の実施形態において、本化合物は、式（ＩＩＩ－Ａ－１）、（ＩＩＩ－Ｂ－１）、（ＩＩＩ－Ｃ－１）、（ＩＩＩ－Ｄ－１）、（ＩＩＩ－Ｅ－１）、（ＩＩＩ－Ｆ－１）、（ＩＩＩ－Ｇ－１）、又は（ＩＩＩ－Ｈ－１）の化合物である：
Figure 0007587528000077
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ８、Ｒ９、及びｎは、式（Ｉ）の化合物について記載されるとおりであり、及び
Figure 0007587528000078
は、５～１０員環単環式、縮合二環式、若しくは架橋ヘテロシクリル、又は５～１０員環単環式若しくは二環式ヘテロアリールであり、このヘテロシクリル又はヘテロアリールの各々は、Ｎ及びＯからなる群から選択される１～２個の更なるヘテロ原子を任意選択で含む］。
[0165] 一部の実施形態において、本化合物は、式（ＩＶ－Ａ）又は（ＩＶ－Ｂ）の化合物である：
Figure 0007587528000079
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｚ１、Ｚ２、及びｎは、式（Ｉ）の化合物について記載されるとおりであり、及びＸは、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、又はＣ１～Ｃ６ハロアルキルである］。一部の実施形態において、Ｘは、Ｈである。一部の実施形態において、Ｘは、Ｃ１～Ｃ６アルキルである。一部の実施形態において、Ｘは、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキルである。
[0166] 一部の実施形態において、本化合物は、式（ＩＶ－Ｃ）、（ＩＶ－Ｄ）、（ＩＶ－Ｅ）、（ＩＶ－Ｆ）、（ＩＶ－Ｇ）、（ＩＶ－Ｈ）、（ＩＶ－Ｉ）、又は（ＩＶ－Ｊ）の化合物である：
Figure 0007587528000080
［式中、Ｒ１、Ｒ２、及びｎは、式（Ｉ）の化合物について記載されるとおりであり、及びＸは、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、又はＣ１～Ｃ６ハロアルキルである］。一部の実施形態において、Ｘは、Ｈである。一部の実施形態において、Ｘは、Ｃ１～Ｃ６アルキルである。一部の実施形態において、Ｘは、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキルである。
[0167] 一部の実施形態において、本化合物は、式（ＩＶ－Ｃ－１）、（ＩＶ－Ｄ－１）、（ＩＶ－Ｅ－１）、（ＩＶ－Ｆ－１）、（ＩＶ－Ｇ－１）、（ＩＶ－Ｈ－１）、（ＩＶ－Ｉ－１）、又は（ＩＶ－Ｊ－１）の化合物である：
Figure 0007587528000081
［式中、Ｒ１、Ｒ２、及びｎは、式（Ｉ）の化合物について記載されるとおりであり、及びＸは、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、又はＣ１～Ｃ６ハロアルキルである］。一部の実施形態において、Ｘは、Ｈである。一部の実施形態において、Ｘは、Ｃ１～Ｃ６アルキルである。一部の実施形態において、Ｘは、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキルである。
[0168] 式（Ｉ）、（Ｉ－ａ）、（Ｉ－Ａ）～（Ｉ－Ｊ）、（ＩＩ－Ａ）～（ＩＩ－Ｈ）、（ＩＩ－Ａ－１）～（ＩＩ－Ｈ－１）、（ＩＩＩ－Ａ）～（ＩＩＩ－Ｈ）、（ＩＩＩ－Ａ－１）～（ＩＩＩ－Ｈ－１）、（ＩＶ－Ａ）～（ＩＶ－Ｊ）、又は（ＩＶ－Ｃ－１）～（ＩＶ－Ｊ－１）の実施形態のいずれにおいても、シアノ基が結合するシクロブチル炭素の絶対立体化学は、（Ｒ）－であり得る（カーン・インゴルド・プレローグ順位則を使用）。式（Ｉ）、（Ｉ－ａ）、（Ｉ－Ａ）～（Ｉ－Ｊ）、（ＩＩ－Ａ）～（ＩＩ－Ｈ）、（ＩＩ－Ａ－１）～（ＩＩ－Ｈ－１）、（ＩＩＩ－Ａ）～（ＩＩＩ－Ｈ）、（ＩＩＩ－Ａ－１）～（ＩＩＩ－Ｈ－１）、（ＩＶ－Ａ）～（ＩＶ－Ｊ）、又は（ＩＶ－Ｃ－１）～（ＩＶ－Ｊ－１）の実施形態のいずれにおいても、シアノ基が結合するシクロブチル炭素の絶対立体化学は、（Ｓ）－であり得る。
Figure 0007587528000082
Figure 0007587528000083
Figure 0007587528000084
Figure 0007587528000085
Figure 0007587528000086
[0169] 一部の実施形態において、表１の化合物番号１～５８から選択される化合物、又はその互変異性体、その立体異性体、若しくはその薬学的に許容可能な塩が提供される。
[0170] 一態様において、本明細書には、本明細書に記載される式（Ｉ）の化合物を調製する方法が提供される。別の態様において、本明細書には、式（Ｉ）の化合物を調製するための中間化合物が提供される。また、本明細書には、アッセイプローブである化合物であって、且つ任意選択で例えば蛍光標識タグが付加されている化合物も提供される。更なる態様において、本明細書には、Ｃｂｌ－ｂの阻害をアッセイする方法が提供される。一つの変形例では、本明細書には、Ｃｂｌ－ｂの阻害をアッセイする方法であって、蛍光標識タグが付加されたアッセイプローブなど、アッセイプローブと共にＣｂｌ－ｂをプレインキュベートすること、続いてＣｂｌ－ｂ／アッセイプローブ混合物を候補化合物に曝露すること、及び次に候補化合物によってアッセイプローブが置換されるかどうか、及びそれがどの程度まで置換されるかを、例えばＦＲＥＴシグナル検出を用いて決定することを含む方法が提供される。
[0171] 本明細書に記載される医薬組成物、方法、又はキットのいずれにおいても、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬は、以下の特許出願に開示される１つ以上のＣｂｌ－ｂ阻害薬から選択することができる：国際公開第２０１９／１４８００５号の化合物１～７１９（その「ａ」及び「ｂ」バリアントを含む）又はそこにある式（Ｉ－Ａ）、式（Ｉ）、式（ＩＩ－Ａ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩＩ－Ａ）、式（ＩＩＩ）、若しくは式（ＩＶ）のうちのいずれかの化合物。国際公開第２０１９／１４８００５号の内容は、全体として参照により本明細書に援用される。
[0172] 一部の実施形態において、本明細書に記載される組成物及び方法における使用のため、表１の化合物６０及び／又は化合物５６、又はその互変異性体、その立体異性体、若しくはその薬学的に許容可能な塩が提供される。
[0173] 一実施形態において、本明細書に開示される方法、医薬組成物、及びキットのための小分子Ｃｂｌ－ｂ阻害薬は、分子量が１，０００ダルトン以下、又は約１，０００ダルトン以下である。別の実施形態において、小分子Ｃｂｌ－ｂ阻害薬は、分子量が９００ダルトン以下、又は約９００ダルトン以下である。別の実施形態において、小分子Ｃｂｌ－ｂ阻害薬は、分子量が８００ダルトン以下、又は約８００ダルトン以下である。別の実施形態において、小分子Ｃｂｌ－ｂ阻害薬は、分子量が７５０ダルトン以下、又は約７５０ダルトン以下である。別の実施形態において、小分子Ｃｂｌ－ｂ阻害薬は、分子量が７００ダルトン以下、又は約７００ダルトン以下である。別の実施形態において、小分子Ｃｂｌ－ｂ阻害薬は、分子量が６５０ダルトン以下、又は約６５０ダルトン以下である。別の実施形態において、小分子Ｃｂｌ－ｂ阻害薬は、分子量が６００ダルトン以下、又は約６００ダルトン以下である。前述の実施形態のいずれについても、小分子Ｃｂｌ－ｂ阻害薬の分子量の下限は、１００ダルトン、２００ダルトン、又は３００ダルトン、又は約１００ダルトン、約２００ダルトン、又は約３００ダルトンであり得る。
[0174] 以下のスキームは、本明細書に開示される化合物を合成する方法を記載する。最終化合物のラセミ混合物など、合成中に生じる立体異性体の混合物は、キラル固定相と組み合わせた超臨界流体クロマトグラフィー、キラルカラムクロマトグラフィーなどの一般的なクロマトグラフィー法、又は当該技術分野において公知の他の方法を用いて、それぞれのエナンチオマーに分離することができる。
Figure 0007587528000087
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｘ、Ｚ１、及びｎは、式（Ｉ）の化合物について定義されるとおりであり；Ｙは、Ｂｒ又はＮＨ２であり；及びＲａ及びＲｂは、好適な保護基である］。
[0175] 一般式Ｉ－９の化合物は、スキームＩに概略的に示すとおり合成した。ボロン酸エステルＩ－１とアルケンＩ－２をロジウム触媒下でカップリングして、エステルＩ－３を得た。ヒドラジド形成（Ｉ－４）、環化、及び脱硫によってトリアゾールを構築して、化合物Ｉ－６を提供した。化合物Ｉ－６（式中、ＹはＮＨ２である）をブロモエステルＩ－８で処理して化合物Ｉ－９を提供し、続いてそれを置換ピペリジンによる還元的アミノ化によって化合物Ｉ－１０に変換した。化合物Ｉ－６（式中、ＹはＢｒである）をパラジウム触媒下にピペリジン誘導体Ｉ－７で処理すると、化合物Ｉ－１０が直接提供された。
Figure 0007587528000088
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｘ、Ｚ２、及びｎは、式（Ｉ）の化合物について定義されるとおりであり；Ｒｂは、好適な保護基であり；及びＹｂは、アルデヒド又はブロモメチルである］。
[0176] スキームＩＩは、一般式ＩＩ－５の化合物の合成を概略的に示す。メチルピリジン又はピリミジンＩＩ－１を酸化させて式ＩＩ－２のアルデヒド又はブロモメチルを提供した。次に置換アミンによる還元的アミノ化又は置換によってアミノ基Ｘを導入して化合物ＩＩ－３を提供し、続いて塩基性条件下でのエステル加水分解により、化合物ＩＩ－４を得た。次にカルボン酸ＩＩ－４をＨＡＴＵ又はＴ３Ｐなどのカップリング試薬でアミンＩ－６とカップリングして、アミドＩＩ－５を得た。
Figure 0007587528000089
［式中、Ｘ、Ｒ３、及びＺ１は、式（Ｉ）の化合物について定義されるとおりである］。
[0177] スキームＩに概略的に示した一般的合成で用いられる一般式Ｉ－５の中間化合物は、スキームＩＩＩのとおりに合成した。アルデヒドＩＩＩ－１を還元的アミノ化によって置換アミンとカップリングして中間体ＩＩＩ－２を提供し、それをアンモニアで処理して式Ｉ－５の化合物を提供した。
[0178] 化合物１２、１８～２１、２５、３１、４９、及び５３～５７は、生物学的実施例１のＣｂｌ－ｂ阻害アッセイで１ｎＭ未満のＩＣ５０値を示し、一実施形態では、本明細書に開示されるとおりの医薬組成物及び方法に使用される。化合物４、１１、１６、１７、２３、３９、４０、４４、及び４８は、生物学的実施例１のＣｂｌ－ｂ阻害アッセイで１ｎＭ以上２ｎＭ未満のＩＣ５０値を示し、一実施形態では、本明細書に開示されるとおりの医薬組成物及び方法に使用される。化合物１、２、５、６、１３～１５、２２、２４、２６～３０、３２～３７、４１～４３、４５、４７、５０、及び５８は、生物学的実施例１のＣｂｌ－ｂ阻害アッセイで２以上５ｎＭ未満のＩＣ５０値を示し、一実施形態では、本明細書に開示されるとおりの医薬組成物及び方法に使用される。化合物７、９、３８、４６、及び５２は、生物学的実施例１のＣｂｌ－ｂ阻害アッセイで５以上２０ｎＭ未満のＩＣ５０値を示し、一実施形態では、本明細書に開示されるとおりの医薬組成物及び方法に使用される。化合物３、８、１０、及び５１は、生物学的実施例１のＣｂｌ－ｂ阻害アッセイで２０ｎＭ以上のＩＣ５０値を示し、一実施形態では、本明細書に開示されるとおりの医薬組成物及び方法に使用される。
[0179] 様々な実施形態において、及び本明細書に更に記載するとおり、本明細書に提供されるとおりの化合物（並びに本明細書に記載される化合物を含む組成物、及び本明細書に記載される化合物又は組成物を使用した方法）は、生物学的実施例１のＣｂｌ－ｂ阻害アッセイによって決定したとき、ＩＣ５０値が１ｎＭ未満、１ｎＭ以上２ｎＭ未満、２ｎＭ以上５ｎＭ未満、５ｎＭ以上２０ｎＭ未満、又は２０ｎＭ以上である。更なる実施形態において、及び本明細書に更に記載するとおり、本明細書に提供されるとおりの化合物（並びに本明細書に記載される化合物を含む組成物、及び本明細書に記載される化合物又は組成物を使用した方法）は、生物学的実施例１のＣｂｌ－ｂ阻害アッセイによって決定したとき、ＩＣ５０値が１ｎＭ未満である。更なる実施形態において、及び本明細書に更に記載するとおり、本明細書に提供されるとおりの化合物（並びに本明細書に記載される化合物を含む組成物、及び本明細書に記載される化合物又は組成物を使用した方法）は、生物学的実施例１のＣｂｌ－ｂ阻害アッセイによって決定したとき、ＩＣ５０値が１ｎＭ以上２ｎＭ未満である。更なる実施形態において、及び本明細書に更に記載するとおり、本明細書に提供されるとおりの化合物（並びに本明細書に記載される化合物を含む組成物、及び本明細書に記載される化合物又は組成物を使用した方法）は、生物学的実施例１のＣｂｌ－ｂ阻害アッセイによって決定したとき、ＩＣ５０値が２ｎＭ以上５ｎＭ未満である。更なる実施形態において、及び本明細書に更に記載するとおり、本明細書に提供されるとおりの化合物（並びに本明細書に記載される化合物を含む組成物、及び本明細書に記載される化合物又は組成物を使用した方法）は、生物学的実施例１のＣｂｌ－ｂ阻害アッセイによって決定したとき、ＩＣ５０値が５ｎＭ以上２０ｎＭ未満である。更なる実施形態において、及び本明細書に更に記載するとおり、本明細書に提供されるとおりの化合物（並びに本明細書に記載される化合物を含む組成物、及び本明細書に記載される化合物又は組成物を使用した方法）は、生物学的実施例１のＣｂｌ－ｂ阻害アッセイによって決定したとき、ＩＣ５０値が２０ｎＭ以上である。
[0180] 抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体で共刺激した免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）からのＩＬ－２分泌について、本明細書に提供されるとおりの化合物（並びに本明細書に記載される化合物を含む組成物）は、１マイクロモル濃度又は０．３マイクロモル濃度の阻害薬濃度で、ベースラインの１５倍以下、１５～２０倍、又は２０倍超の変化を誘導する。
[0181] 抗ＣＤ３抗体で刺激した免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）からのＩＬ－２分泌について、本明細書に提供されるとおりの化合物（並びに本明細書に記載される化合物を含む組成物）は、３マイクロモル濃度又は１マイクロモル濃度の阻害薬濃度で、ベースラインの０．４０倍未満、０．４０～０．８５倍、又は０．８５倍超の変化を誘導する。
[0182] 抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体で共刺激した免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）の細胞表面上のＣＤ２５染色について、本明細書に提供されるとおりの化合物（並びに本明細書に記載される化合物を含む組成物）は、阻害薬濃度１マイクロモル濃度又は０．３マイクロモル濃度で、ベースラインの１．２４倍以下、１．２４～１．３９倍、又は１．３９倍超の変化を誘導する。
[0183] 抗ＣＤ３抗体で刺激した免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）の細胞表面上のＣＤ２５染色について、本明細書に提供されるとおりの化合物（並びに本明細書に記載される化合物を含む組成物）は、３マイクロモル濃度又は１マイクロモル濃度の阻害薬濃度で、ベースラインの１．００倍以下、１．０５～１．１５倍、又は１．１５倍超の変化を誘導する。
ＩＩＩ．方法、医薬品、及び使用
[0184] 本明細書には、有効量の本明細書に記載されるＣｂｌ－ｂ阻害薬又はその組成物と免疫細胞を接触させることによるなどの、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、又はＮＫ細胞）の活性を調節する方法が提供される。また、本明細書において「修飾免疫細胞」と称される、活性が調節された前記免疫細胞を作製するインビトロ方法も提供され、ここで前記修飾免疫細胞は、それを必要としている個体（例えば、癌を有する個体）にエキソビボ方法によって投与することができる。更に、それを必要としている個体（例えば、癌を有する個体）の応答を調節するインビボ方法が提供され、この方法は、有効量の本明細書に記載されるＣｂｌ－ｂ阻害薬又はその組成物の投与を含む。更に、本開示は、個体におけるインビボリンパコンディショニング後に拡大リンパ球集団を作製するインビトロ方法を提供し、ここでリンパコンディショニングは、有効量の本明細書に記載されるＣｂｌ－ｂ阻害薬又はその組成物を個体に投与する結果として起こる。次にその拡大リンパ球集団を個体に投与することができる。次にその拡大リンパ球集団を、癌を有する個体に投与することができる。一部の実施形態において、修飾免疫細胞又は拡大リンパ球集団は、末梢血単核球を含む血液試料又は腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を含む腫瘍生検など、個体から入手された免疫細胞を含む生体試料から作製される。
[0185] 加えて、治療用活性物質としての使用のためのＣｂｌ－ｂ阻害薬が提供される。Ｃｂｌ－ｂ活性に関連する疾患又は病態の処置又は予防における使用のためのＣｂｌ－ｂ阻害薬が提供される。また、癌の処置における使用のためのＣｂｌ－ｂ阻害薬も提供される。更に、Ｃｂｌ－ｂ活性に関連する疾患又は病態の処置又は予防用医薬品の製造におけるＣｂｌ－ｂ阻害薬の使用が提供される。また、癌を処置するための医薬品の製造におけるＣｂｌ－ｂ阻害薬の使用も提供される。更に、本開示は、免疫チェックポイント阻害薬、抗新生物剤、及び放射線治療のうちの１つ以上が関わる癌を処置するための併用治療の一部としてＣｂｌ－ｂ阻害薬を含む処置方法、医薬品、及び使用を提供する。
[0186] 本開示の処置方法、医薬品、及び使用の一部の実施形態において、癌は、リンパ腫、白血病、又は骨髄腫などの血液癌である。本開示の処置方法、医薬品、及び使用の他の実施形態において、癌は、肉腫、癌腫、又は黒色腫などの非血液癌である。
[0187] 血液癌としては、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）などの１つ以上の白血病；限定はされないが、慢性骨髄球性白血病（ＣＭＬ）及び慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）を含めた１つ以上の慢性白血病；限定はされないが、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、小細胞型又は大細胞型濾胞性リンパ腫、悪性リンパ球増殖性病態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁層リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄形成異常及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞新生物、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、及び骨髄性血球細胞の無効な産生（又は異形成）によってまとめられる一群の多様な血液学的病態である「前白血病」を含めた更なる血液癌又は血液学的病態が挙げられるがこれらに限定されない。
[0188] 非血液癌としては、神経芽細胞腫、腎細胞癌、結腸癌、結腸直腸癌、乳癌、扁平上皮癌、黒色腫、胃癌、脳癌、肺癌（例えば、ＮＳＣＬＣ）、膵癌、子宮頸癌、卵巣癌、肝癌、膀胱癌、前立腺癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、副腎癌、及び頭頸部癌が挙げられるがこれらに限定されない。
[0189] 一部の態様において、癌などの疾患又は障害の処置におけるＣｂｌ－ｂ阻害薬の投与の有効性は、腫瘍サイズ又は腫瘍数の減少、及び／又は生存率など、臨床的アウトカムを判定することによって測定される。一部の実施形態において、「癌を処置すること」は、記載されるとおりの固形癌効果判定基準（Response Evaluation Criteria in Solid Tumors：ＲＥＣＩＳＴ第１．１版）に基づき処置レジメンに対する患者の奏効を判定することを含む（例えば、Eisenhauer et al., Eur J Cancer, 45:228-247, 2009；及びNishino et al., Am J Roentgenol, 195: 281-289, 2010を参照されたい）。ＲＥＣＩＳＴ １．１に従い客観的抗腫瘍応答を決定する奏効判定基準には、完全奏効（ＣＲ）；部分奏効（ＰＲ）；病勢進行（ＰＤ）；及び病勢安定（ＳＤ）が含まれる。
Ａ．細胞の単離及び処理
[0190] 本明細書の方法において作製及び使用される免疫細胞（例えば、修飾免疫細胞）の調製及び処理方法が提供される。本明細書で使用されるとき、用語「修飾免疫細胞」は、免疫細胞又は免疫細胞を含む細胞集団であって、前記免疫細胞の活性を調節するため有効量のＣｂｌ－ｂ阻害薬と共に培養し、インキュベートしたもの、及び／又はそれと接触させたものを指す。一部の実施形態において、修飾免疫細胞は、養子免疫治療法との関連などで、免疫治療に使用することができる。
１．試料
[0191] 一部の実施形態において、修飾されることになる免疫細胞又は修飾されることになる免疫細胞を含む細胞集団は、生体試料などの試料、例えば、個体（例えば、ヒト）から入手された又はそれに由来する試料から単離される。一部の実施形態において、免疫細胞を単離する元となる個体は、特定の疾患若しくは病態（例えば、癌）を有する個体又は細胞治療を必要としている個体若しくはそれに対して細胞治療が投与されることになる個体である。個体は、一部の実施形態では、そのために免疫細胞が単離され、処理され、及び／又は修飾される養子細胞治療など、特定の治療介入を必要としているヒトである。従って、個体から単離されたこの細胞が、一部の実施形態では、初代細胞（例えば、初代ヒト細胞）である。本明細書で使用されるとき、用語「初代細胞」は、哺乳類生体液又は組織（例えば、ヒト生体液又は組織）から直接単離された細胞を指す。
[0192] 一部の実施形態において、修飾されることになる免疫細胞は、造血細胞、多能性幹細胞、骨髄系前駆細胞、リンパ系前駆細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、及び／又はＮＫ細胞である。本明細書で使用されるとき、用語「造血細胞」には、造血幹細胞及び造血前駆細胞が含まれる。一部の実施形態において、修飾されることになる免疫細胞は、異種細胞集団中又は異種細胞集団を含む組成物中に存在する。例えば、修飾されることになる免疫細胞は、組織又は器官に由来する分化細胞などの細胞を含む異種細胞集団中に存在する造血細胞であり得る。一部の実施形態において、修飾されることになる免疫細胞は、同種細胞集団中又は同種細胞集団を含む組成物中に存在する。例えば、修飾されることになる免疫細胞は、造血細胞のみを含む同種細胞集団中に存在する造血細胞であり得る。一部の実施形態において、修飾されることになる免疫細胞又は修飾されることになる免疫細胞を含む細胞集団は、１つ以上の免疫細胞サブセットを含む。例えば、１つ以上の免疫細胞サブセットは、ＣＤ４＋細胞、ＣＤ８＋細胞及びそのサブ集団、例えば、機能、活性化状態、成熟度、潜在的分化能、拡大、局在化、持続能、表面マーカープロファイル、サイトカイン分泌プロファイル、及び／又は分化度によって定義されるサブ集団などであり得る。
[0193] 一部の実施形態において、本明細書に記載される生体試料には、個体から直接採取される組織、体液、及び他の試料、並びに分離、遠心、遺伝子操作（例えば、組換えキメラ受容体をコードするウイルスベクターによる形質導入）、洗浄、及び／又はインキュベーションなど、１つ以上の処理ステップから得られる試料が含まれる。生体試料は、生物学的供給源から直接入手される試料又は処理される試料であり得る。生体試料としては、限定はされないが、血液、血漿、血清、脳脊髄液、滑液、尿及び汗などの体液、組織及び臓器試料（例えば、腫瘍を含有する組織又は器官からの試料）が、それに由来する処理された試料を含め、挙げられる。一部の実施形態において、生体試料は、生体体液試料又は生体組織試料である。一部の実施形態において、生体試料は、生体組織試料である。一部の態様において、免疫細胞の由来となる又はそれが単離される元の生体試料は、血液若しくは血液由来試料であるか、又はアフェレーシス若しくは白血球アフェレーシス産物に由来する。
[0194] 例示的生体試料としては、全血、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）、白血球、骨髄、胸腺、組織生検、腫瘍、白血病、リンパ腫、リンパ節、消化管関連リンパ系組織、粘膜関連リンパ系組織、脾臓、他のリンパ系組織、肝臓、肺、胃、腸、結腸、腎臓、膵臓、乳房、骨、前立腺、子宮頸部、精巣、卵巣、扁桃腺、又は他の臓器、及び／又はこれらに由来する細胞が挙げられる。生体試料としては、細胞治療（例えば、養子細胞治療）の文脈では、自己供給源からの試料（即ち、細胞治療を必要としている個体から入手された、又はそれに由来する試料）、及び同種異系供給源からの試料（即ち、細胞治療を必要としている個体以外の個体又は供給源から入手された、又はそれに由来する試料）が挙げられる。
[0195] 一部の実施形態において、修飾されることになる免疫細胞又は修飾されることになる免疫細胞を含む細胞集団は、細胞株（例えば、Ｔ細胞株、Ｂ細胞株、ＮＫ細胞株等）に由来する。一部の実施形態において、修飾されることになる免疫細胞又は修飾されることになる免疫細胞を含む細胞集団は、マウス、ラット、非ヒト霊長類、又はブタからなど、異種供給源から入手される。
２．細胞の処理及び分離
[0196] 一部の実施形態において、修飾されることになる免疫細胞の単離には、１つ以上の調製及び／又は細胞分離ステップが含まれる。１つ以上の細胞分離ステップは、非親和性ベースの分離又は親和性ベースの分離であり得る。例として、非親和性ベースの分離は、修飾されることになる免疫細胞を含む組成物の遠心であり得る。一部の実施形態において、非親和性ベースの分離方法には、赤血球を溶解させることによる末梢血からの白血球の調製及びパーコール又はフィコール勾配による遠心など、密度ベースの細胞分離方法が含まれる。親和性ベースの分離方法は、修飾されることになる免疫細胞を含む組成物を抗体コートビーズと接触させることを含み得る。本明細書で企図される抗体コートビーズとしては、限定はされないが、修飾されることになる免疫細胞の表面に発現するマーカーに結合する抗体でコートされた磁気ビーズ（例えば、Life Technologies、Carlsbad, CAによって市販されているDynabeads（登録商標）、Miltenyi Biotec Inc.、Auburn, CAによって市販されているMACS（登録商標）マイクロビーズ；又はStemcell Technologies、Vancouver, BC, Canadaによって市販されているEasySep（商標）Direct RapidSpheres（商標））が挙げられる。一部の実施形態において、例えば、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋等、１つ以上の表面マーカーが陽性であるか、又は別様にそれを高度に発現する細胞など、Ｔ細胞の特定のサブ集団が、ポジティブ又はネガティブ選択技法によって単離される。ポジティブ選択は、標的細胞（例えば、修飾されることになる免疫細胞）を試薬に結合させて、それを以降の使用のために確保する技法に基づき得る。例えば、ＣＤ３＋であるＴ細胞は、抗ＣＤ３抗体にコンジュゲートした磁気ビーズ（例えば、MACS（登録商標）ＣＤ３ヒトマイクロビーズ）を使用してポジティブ選択することができる。ネガティブ選択は、試薬に結合しなかった標的細胞（例えば、修飾されることになる免疫細胞）を確保する技法に基づき得る。例えば、ネガティブ選択を利用して末梢血単核球（ＰＭＢＣ）から全ヒト初代Ｔ細胞を単離することができ、ここではＰＢＭＣを含む試料中で表面マーカーＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ３４、ＣＤ３６、ＣＤ５６、ＣＤ１２３、及びＣＤ２３５ａに対する抗体のカクテルをインキュベートした後、試料を磁気ビーズに通してこれらの表面マーカーを発現する細胞を除去し、試料中に残った細胞を続く処理のために確保する。一部の実施形態において、修飾されることになる免疫細胞又は免疫細胞を含む細胞集団は、例えば、望ましくない成分を除去し、所望の成分を濃縮し、特定の試薬に感受性のある細胞を溶解させ又は除去するため、１つ以上の試薬の存在下で洗浄され、遠心され、及び／又はインキュベートされる。一部の例において、免疫細胞は、密度、接着特性、サイズ、感受性、及び／又は特定の成分に対する耐性など、１つ以上の特性に基づき分離される。細胞分離ステップでは、特定の細胞が１００％濃縮又は除去される必要はない。一部の実施形態において、特定のタイプの免疫細胞（例えば、ＣＤ４＋ Ｔ細胞）のポジティブ選択又は濃縮とは、かかる細胞の数又は割合を増加させることを指す。一部の実施形態において、ネガティブ選択によるなどの、目的のものでない特定のタイプの細胞の除去、又は枯渇とは、かかる細胞の数又は割合を減少させることを指す。
[0197] 一部の実施形態において、免疫細胞又は免疫細胞を含む細胞集団は、個体の循環血液から、例えば、アフェレーシス又は白血球アフェレーシスによって入手される。一部の態様において、修飾されることになる免疫細胞を含む試料は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、及びＮＫ細胞を含めたリンパ球、並びに単球、顆粒球、赤血球、及び／又は血小板を含有し、一部の態様では、赤血球及び血小板以外の細胞を含有する。
[0198] 一部の実施形態において、個体から採取された血液細胞は洗浄されて、続く処理ステップのため血漿画分が除去され、及び修飾されることになる免疫細胞を含む細胞集団が適切な緩衝液又は培地中に置かれるなどする。一部の実施形態において、修飾されることになる免疫細胞を含む細胞集団は、リン酸緩衝生理食塩水で洗浄される。一部の実施形態において、洗浄溶液はカルシウム及び／又はマグネシウムを含まない。一部の態様において、洗浄ステップは、半自動「フロースルー」遠心機で達成される。一部の態様において、洗浄ステップは、タンジェンシャルフローろ過で達成される。一部の実施形態において、修飾されることになる免疫細胞又は修飾されることになる免疫細胞を含有する細胞集団は、洗浄後、例えば、カルシウム及び／又はマグネシウム不含リン酸緩衝生理食塩水など、種々の好適な緩衝液に再懸濁される。一部の実施形態において、血液細胞試料の成分が除去され、修飾されることになる免疫細胞又は修飾されることになる免疫細胞を含む細胞集団が好適な細胞培養培地に直接再懸濁される。
[0199] 造血細胞を含有する細胞集団を含有する試料（例えば、ＰＢＭＣを含む試料）からの造血細胞など、免疫細胞を処理及び／又は分離する代表的な方法については、本明細書の生物学的実施例２及び生物学的実施例３に記載される。造血細胞、多能性幹細胞、骨髄系前駆細胞、リンパ系前駆細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、及び／又はＮＫ細胞など、免疫細胞を処理及び／又は分離する方法及び技法は、当該技術分野において周知である。例えば、米国特許出願公開第２０１７／００３７３６９号；米国特許出願公開第２０１２／０１４８５５３号；米国特許第６，４６１，６４５号；米国特許第６，３５２，６９４号；及び米国特許第７，７７６，５６２号を参照されたい。
３．インキュベーション及び処置
[0200] 本明細書には、上記に記載される処理及び／又は分離された免疫細胞など、免疫細胞の活性を、有効量の本明細書に記載されるＣｂｌ－ｂ阻害薬とその免疫細胞を接触させることにより調節する方法が提供される。また、本明細書には、免疫細胞（例えば、上記に記載される処理及び／又は分離された免疫細胞）を含有する細胞集団を有効量のＣｂｌ－ｂ阻害薬の存在下で培養して免疫細胞の活性を調節し、それによって修飾免疫細胞を作製することによるなど、本明細書に記載される方法のいずれかによって作製された修飾免疫細胞も提供される。
[0201] 一部の実施形態において、修飾されることになる免疫細胞（例えば、上記に記載される処理及び／又は分離された免疫細胞）は、本明細書に提供されるＣｂｌ－ｂ阻害薬と前記免疫細胞を接触させる前に、好適な培養培地でインキュベート及び／又は培養される。一部の実施形態において、修飾されることになる免疫細胞は、本明細書に提供されるＣｂｌ－ｂ阻害薬と前記免疫細胞を接触させるのと同じ時点で好適な培養培地でインキュベート及び／又は培養される。
[0202] 処理及び／又は分離された、修飾されることになる免疫細胞又は修飾されることになる免疫細胞を含む細胞集団は、インビトロで分化及び／又は拡大させることができる。一部の実施形態において、修飾されることになる免疫細胞は、造血細胞、多能性幹細胞、骨髄系前駆細胞、リンパ系前駆細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、及び／又はＮＫ細胞である。一部の実施形態において、修飾されることになる免疫細胞は、免疫細胞の分化及び／又は拡大前に、本明細書に記載されるＣｂｌ－ｂ阻害薬を含む好適な細胞培養培地でインキュベートされる。一部の実施形態において、修飾されることになる免疫細胞は、免疫細胞の分化及び／又は拡大後に、本明細書に記載されるＣｂｌ－ｂ阻害薬を含む好適な細胞培養培地でインキュベートされる。免疫細胞は、前記免疫細胞の活性を調節するのに有効な量の本明細書に提供されるＣｂｌ－ｂ阻害薬と接触させると、修飾された状態になる（即ち、修飾免疫細胞になる）。一部の実施形態において、修飾されることになる免疫細胞はインビトロで分化及び／又は拡大させず、従ってＣｂｌ－ｂ阻害薬と接触させた修飾免疫細胞と同じ細胞型である。例えば、Ｔ細胞は、Ｔ細胞の分化なしに、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬を含む好適な培地でインキュベートすることができる。他の実施形態において、修飾されることになる免疫細胞はインビトロで分化及び／又は拡大させ、従ってＣｂｌ－ｂ阻害薬と接触させた修飾免疫細胞と異なる細胞型である。例えば、造血細胞は、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬並びに成熟造血細胞への造血細胞の分化をドライブする他の薬剤を含む好適な培地でインキュベートすることができる。従って、本明細書における実施形態の一部の態様において、修飾免疫細胞は、造血細胞、多能性幹細胞、骨髄系前駆細胞、リンパ系前駆細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、及び／又はＮＫ細胞である。免疫細胞を拡大及び／又は分化させる方法は、当該技術分野において周知である。例えば、国際公開第２０１７／０３７０８３号を参照されたい。
[0203] Ｃｂｌ－ｂ阻害薬の有効量とは、参照試料と比較したとき免疫細胞の活性を調節するのに十分なＣｂｌ－ｂ阻害薬の量又は濃度である。参照試料は、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬と接触したことがない免疫細胞であり得る。一部の実施形態において、修飾されることになる免疫細胞を含む組成物（例えば、細胞培養培地）に加えられるＣｂｌ－ｂ阻害薬の濃度は、約１ｐＭ～約１００μＭ、約５ｐＭ～約１００μＭ、約１０ｐＭ～約１００μＭ、約２０ｐＭ～約１００μＭ、約４０ｐＭ～約１００μＭ、約６０ｐＭ～約１００μＭ、約８０ｐＭ～約１００μＭ、約１ｎＭ～約１００μＭ、約３ｎＭ～約１００μＭ、約１０ｎＭ～約１００μＭ、約１５ｎＭ～約１００μＭ、約２０ｎＭ～約１００μＭ、約４０ｎＭ～約１００μＭ、約６０ｎＭ～約１００μＭ、約８０ｎＭ～約１００μＭ、約０．１μＭ～約１００μＭ、約０．１μＭ～約９０μＭ、約０．１μＭ～約８０μＭ、約０．１μＭ～約７０μＭ、約０．１μＭ～約６０μＭ、約０．１μＭ～約５０μＭ、約０．１μＭ～約４０μＭ、約０．１μＭ～約３０μＭ、約０．１μＭ～約２０μＭ、約０．１μＭ～約１０μＭ、約０．２μＭ～約１０μＭ、又は約０．３μＭ～約８μＭである。一部の実施形態において、修飾されることになる免疫細胞を含む組成物（例えば、細胞培養培地）に加えられるＣｂｌ－ｂ阻害薬の濃度は、約１ｐＭ、約２ｐＭ、約３ｐＭ、約４ｐＭ、約５ｐＭ、約１０ｐＭ、約２０ｐＭ、約３０ｐＭ、約４０ｐＭ、約５０ｐＭ、約６０ｐＭ、約７０ｐＭ、約８０ｐＭ、約９０ｐＭ、約１ｎＭ、約３ｎＭ、約５ｎＭ、約１０ｎＭ、約２０ｎＭ、約４０ｎＭ、約５０ｎＭ、約８０ｎＭ、約０．１μＭ、約０．２μＭ、約０．３μＭ、約０．４μＭ、約０．５μＭ、約１μＭ、約５μＭ、約１０μＭ、約１５μＭ、約２０μＭ、約２５μＭ、約３０μＭ、約４０μＭ、約５０μＭ、約６０μＭ、約７０μＭ、約８０μＭ、約９０μＭ、又は約１００μＭである。一部の実施形態において、修飾されることになる免疫細胞を含む組成物（例えば、細胞培養培地）に加えられるＣｂｌ－ｂ阻害薬の濃度は、約０．３μＭ、約１μＭ、又は約４μＭである。一部の実施形態において、修飾されることになる免疫細胞を含む組成物（例えば、細胞培養培地）に加えられるＣｂｌ－ｂ阻害薬の濃度は、約１μＭ又は約８μＭである。
[0204] Ｃｂｌ－ｂ阻害薬の有効量は、参照試料と比較したとき免疫細胞の活性を調節するのに十分な時間にわたって免疫細胞と接触した状態にある。参照試料は、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬と接触したことはないが、免疫細胞及びＣｂｌ－ｂ阻害薬を含む組成物（例えば、細胞培養培地）と同じ長さの時間にわたってインキュベートされる免疫細胞であり得る。一部の実施形態において、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬は、約１分～約１時間、約５分～約１時間、約１０分～約１時間、約１５分～約１時間、約２０分～約１時間、約３０分～約１時間、約４５分～約１時間、約１時間～約２時間、約１時間～約４時間、約１時間～約６時間、約１時間～約８時間、約１時間～約１２時間、約１時間～約２４時間、約２時間～約２４時間、約６時間～約７時間、約６時間～約２４時間、約８時間～約２４時間、約１０時間～約２４時間、約１５時間～約２４時間、約２０時間～約２４時間、約１２時間～約４８時間、約２４時間～約４８時間、又は約３６時間～約４８時間免疫細胞と接触した状態にあり、及び／又はそれと共にインキュベートされる。一部の実施形態において、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬は、約１分、約５分、約１０分、約１５分、約２０分、約３０分、約４０分、約５０分、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１２時間、約１４時間、約１６時間、約１８時間、約２０時間、約２２時間、又は約２４時間免疫細胞と接触した状態にあり、及び／又はそれと共にインキュベートされる。一部の実施形態において、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬は、約１日～約７日、約２日～約７日、約３日～約７日、約４日～約７日、約５日～約７日、又は約６日～約７日間免疫細胞と接触した状態にあり、及び／又はそれと共にインキュベートされる。一部の実施形態において、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬は、約７日～約１４日、約１４日～約２１日、又は約２１日～約２８日間免疫細胞と接触した状態にあり、及び／又はそれと共にインキュベートされる。一部の実施形態において、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬は、約１日、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、約７日、約８日、約９日、約１０日、約１１日、約１２日、約１３日、又は約１４日間免疫細胞と接触した状態にあり、及び／又はそれと共にインキュベートされる。
[0205] 一部の実施形態において、免疫細胞又は免疫細胞を含む細胞集団は、免疫細胞の増殖、拡大、活性化、及び／又は生存を誘導するのに好適な条件下でインキュベートされる。インキュベーション時の好適な条件としては、限定はされないが、細胞培養培地、温度、インキュベーション時間、刺激剤（例えば、抗ＣＤ３及び／又は抗ＣＤ２８抗体）の存在、並びに成長因子、サイトカイン、ケモカイン、及び／又は組換え可溶性受容体など、任意の他の有益な薬剤の存在のうちの１つ以上の使用が挙げられる。
[0206] 一部の実施形態において、免疫細胞の増殖、拡大、活性化、及び／又は生存を誘導するのに好適な条件としては、免疫細胞（例えば、ＮＫ細胞）を活性化させる能力を有する薬剤を含む刺激条件の提供が挙げられる。例えば、Ｔ細胞の増殖、拡大、活性化、及び／又は生存を誘導するのに好適な条件としては、Ｔ細胞における細胞内シグナル伝達を活性化させる能力を有する薬剤を含む刺激条件の提供が挙げられる。Ｔ細胞が完全に活性化するには、概して、本明細書において「ＴＣＲ」と称されるＴ細胞受容体による抗原の認識（シグナル１）並びにＣＤ２８などの共刺激因子の認識（シグナル２）が必要である。一部の態様において、１つ以上の薬剤が、Ｔ細胞におけるＴＣＲ複合体媒介性細胞内シグナル伝達カスケードをオンにし、又は惹起する。例えば、第１の薬剤は、ＴＣＲ複合体の成分に結合してＴ細胞を活性化させることができ、第２の薬剤は、Ｔ細胞の表面上の共刺激分子に結合して、それにより活性化したＴ細胞を刺激することができる。一部の実施形態において、第１の薬剤は、ＣＤ３に特異的に結合することにより、Ｔ細胞のＴＣＲ／ＣＤ３複合体関連シグナルを刺激した（例えば、抗ＣＤ３抗体）。更なる実施形態において、Ｔ細胞の表面上の共刺激分子はＣＤ２８であってもよく、第２の薬剤がＣＤ２８に特異的に結合する（例えば、抗ＣＤ２８抗体）。かかる薬剤としては、限定はされないが、ＴＣＲ複合体成分に特異的なもの（例えば、抗ＣＤ３抗体）及び／又は共刺激受容体に特異的なもの（例えば、抗ＣＤ２８抗体）など、抗体、二価抗体断片、及び結合分子が挙げられる。一部の実施形態において、ＣＤ３に特異的に結合する薬剤は、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ３抗体の二価抗体断片（例えば、（Ｆａｂ）２’断片又は二価ｓｃＦｖ断片）、抗ＣＤ３抗体の一価抗体断片（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆｖ断片、又はｓｃＦｖ断片）、又はＣＤ３結合分子（例えば、アプタマー）である。一部の実施形態において、ＣＤ２８に特異的に結合する薬剤は、抗ＣＤ２８抗体、抗ＣＤ２８抗体の二価抗体断片（例えば、（Ｆａｂ）２’断片又は二価ｓｃＦｖ断片）、抗ＣＤ２８抗体の一価抗体断片（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆｖ断片、又はｓｃＦｖ断片）、及びＣＤ２８結合分子（例えば、アプタマー）である。本明細書に提供される１つ以上の薬剤（例えば、抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体）は、例えば、ビーズなどの固体支持体に結合させるか、又は抗Ｆｃ抗体と架橋させることができる。一部の実施形態において、拡大方法ステップは、培養培地に抗ＣＤ３抗体及び／又は抗ＣＤ２８抗体を加えるステップを更に含み得る。一部の実施形態において、細胞培養培地に加えられる刺激剤としては、限定はされないが、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、及びＩＬ－２１のうちの１つ以上など、１つ以上のサイトカインが挙げられる。例えば、ＩＬ－２は、免疫細胞及び抗ＣＤ３抗体及び／又は抗ＣＤ２８抗体などの薬剤を含む細胞培養培地に少なくとも約１０単位／ｍＬの濃度で加えることができる。
[0207] 一部の実施形態において、Ｔ細胞の増殖、拡大、活性化、及び／又は生存を誘導するのに好適な条件としては、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体を通じた細胞内シグナル伝達を活性化させる能力を有する刺激条件又は薬剤、及び本明細書に記載されるとおりのＣｂｌ－ｂ阻害薬の提供が挙げられる。一部の実施形態において、免疫細胞又は免疫細胞を含む細胞集団は、ＣＤ３に特異的に結合することによってＴ細胞のＴＣＲ／ＣＤ３複合体関連シグナルを刺激する第１の薬剤（例えば、抗ＣＤ３抗体）と共にインキュベートされる。更なる実施形態において、免疫細胞又は免疫細胞を含む細胞集団は、ＣＤ３に特異的に結合することによってＴ細胞のＴＣＲ／ＣＤ３複合体関連シグナルを刺激する第１の薬剤（例えば、抗ＣＤ３抗体）と共に、共刺激分子ＣＤ２８に結合する第２の薬剤（例えば、抗ＣＤ２８抗体）と共に、及び約１ｐＭ～約１００μＭ（例えば、約０．３μＭ、約１μＭ、又は約４μＭ）の濃度のＣｂｌ－ｂ阻害薬と共にインキュベートされる。一部の実施形態において、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬の存在下にあるとき、Ｔ細胞の増殖、拡大、活性化、及び／又は生存を誘導するのに好適な条件は、共刺激分子（例えば、ＣＤ２８）を通じた刺激を必要としない。Ｔ細胞がＣｂｌ－ｂ阻害薬又はその組成物と接触するため、Ｔ細胞が活性化状態に入るための共刺激要件を回避することができる。特定の実施形態において、免疫細胞又は免疫細胞を含む細胞集団は、ＣＤ３に特異的に結合することによってＴ細胞のＴＣＲ／ＣＤ３複合体関連シグナルを刺激する第１の薬剤（例えば、抗ＣＤ３抗体）と共に、及び約０．００１μＭ～約１，０００μＭ、約０．０１μＭ～約１００μＭ、約０．１μＭ～約１０μＭ、又は約０．１μＭ～約５０μＭ（例えば、約１μＭ又は約８μＭ）の濃度のＣｂｌ－ｂ阻害薬と共にインキュベートされる。
[0208] 免疫細胞の活性を調節する方法の一部の実施形態において、免疫細胞はＴ細胞であり、Ｔ細胞の活性を調節することは、Ｔ細胞活性化の増加及び／又はＴ細胞増殖の増加を含む。本明細書の実施形態において企図されるＴ細胞は、抗ＣＤ３抗体など、ＴＣＲ複合体の成分に結合する活性化剤の存在下、並びに抗ＣＤ２８抗体など、共刺激分子に結合する刺激剤の存在下であっても、寛容状態であり得る。一部の実施形態において、Ｔ細胞の活性を調節する方法は、抗ＣＤ２８抗体と組み合わせた抗ＣＤ３抗体の存在下でＴ細胞を有効量のＣｂｌ－ｂ阻害薬又はその組成物と接触させることを含む。一部の実施形態において、Ｔ細胞の活性を調節する方法は、Ｔ細胞を有効量のＣｂｌ－ｂ阻害薬又はその組成物と接触させることを含み、ここでＴ細胞は、抗ＣＤ２８抗体と組み合わせた抗ＣＤ３抗体と予め接触した状態にあったものである。一部の実施形態において、Ｔ細胞の活性の調節（例えば、Ｔ細胞活性化の増加及び／又はＴ細胞増殖の増加）に、共刺激ＣＤ２８分子による刺激は不要である。一部の実施形態において、Ｔ細胞の活性を調節する方法は、抗ＣＤ３抗体単独の存在下でＴ細胞を有効量のＣｂｌ－ｂ阻害薬又はその組成物と接触させることを含む。一部の実施形態において、Ｔ細胞の活性を調節する方法は、Ｔ細胞を有効量のＣｂｌ－ｂ阻害薬又はその組成物と接触させることを含み、ここでＴ細胞は、Ｔ細胞を活性化させる１つ以上の薬剤（例えば、抗ＣＤ３抗体）と予め接触した状態にあったものであり、ここで前記薬剤には、ＣＤ２８共刺激分子を刺激する薬剤（例えば、抗ＣＤ２８抗体）は含まれない。
[0209] 一部の実施形態において、免疫細胞はＴ細胞であり、Ｔ細胞の活性を調節することは、Ｔ細胞活性化の亢進及び／又はＴ細胞増殖の亢進を含む。例えば、本明細書の実施形態において企図されるＴ細胞は、Ｔ細胞を活性化させる薬剤（例えば、抗ＣＤ３抗体）の存在下、及び一部の更なる実施形態では、Ｔ細胞を刺激する薬剤（例えば、抗ＣＤ２８抗体）の存在下にあるときなどに、活性化状態であり得る。Ｔ細胞をＣｂｌ－ｂ阻害薬又はその組成物と接触させると、活性化に要求される閾値が下がり、従って活性化剤（例えば、抗ＣＤ３抗体）及び一部の更なる実施形態では、刺激剤（例えば、抗ＣＤ２８抗体）の存在下にあるＴ細胞の活性化及び／又は増殖が亢進し得る。一部の実施形態において、Ｔ細胞の活性を調節する方法は、抗ＣＤ２８抗体と組み合わせた抗ＣＤ３抗体の存在下でＴ細胞を有効量のＣｂｌ－ｂ阻害薬又はその組成物と接触させることを含む。一部の実施形態において、Ｔ細胞の活性を調節する方法は、Ｔ細胞を有効量のＣｂｌ－ｂ阻害薬又はその組成物と接触させることを含み、ここでＴ細胞は、抗ＣＤ２８抗体と組み合わせた抗ＣＤ３抗体と予め接触した状態にあったものである。一部の実施形態において、Ｔ細胞の活性の調節（例えば、Ｔ細胞活性化の亢進及び／又はＴ細胞増殖の亢進）に、共刺激ＣＤ２８分子による刺激は不要である。一部の実施形態において、Ｔ細胞の活性を調節する方法は、抗ＣＤ３抗体単独の存在下でＴ細胞を有効量のＣｂｌ－ｂ阻害薬又はその組成物と接触させることを含む。一部の実施形態において、Ｔ細胞の活性を調節する方法は、Ｔ細胞を有効量のＣｂｌ－ｂ阻害薬又はその組成物と接触させることを含み、ここでＴ細胞は、Ｔ細胞を活性化させる１つ以上の薬剤（例えば、抗ＣＤ３抗体）と予め接触した状態にあったものである。
[0210] 一部の実施形態において、免疫細胞はＴ細胞であり、Ｔ細胞の活性を調節することは、Ｔ細胞枯渇の低下、Ｔ細胞寛容の低下、及び／又はＴ細胞アネルギーの低下を含めた、Ｔ細胞機能不全の低下を含む。Ｔ細胞機能不全の一般的原理は当該技術分野において周知である（例えば、Schietinger et al., Trends Immunol., 35: 51-60, 2014を参照されたい）。免疫寛容は、免疫系の正常機能の一部である過程である。抗原特異的免疫寛容は、抗原に対する応答性の低下によって特徴付けられ、これは、その抗原に以前曝露したことによって誘導されるものである。特定のリンパ球（例えば、Ｔ細胞）が抗原に遭遇したとき、そのリンパ球は活性化されて、抗原特異的免疫応答につながり得るか、又はそのリンパ球（例えば、Ｔ細胞）は不活性化され、若しくは除去されて、代わりに抗原特異的免疫寛容につながり得る。一部の態様において、寛容は、クローン性アネルギー、末梢性クローン性欠失、Ｔ細胞の抑制、及び／又は他の形態の抗原特異的寛容によって起こり得る。一部の実施形態において、寛容は、アネルギーの誘導の結果として生じ得るか、又はそれによって特徴付けられ得る。一部の態様において、アネルギーは、Ｔ細胞が共刺激の非存在下で抗原に曝露するために生じ得る。共刺激シグナルの非存在下では、ＴＣＲ単独による抗原認識が長引くことが、アネルギー（即ち、機能上の不応答性）につながり得る。アネルギー状態のＴ細胞は、続く抗原チャレンジに難応答性であり得るとともに、他の免疫応答を抑制する能力を有し得る。概して、自然環境では、寛容は、自己抗原に対する非応答性又は非生産的応答性に関わる。しかしながら、ある場合には、「非自己」抗原に対して寛容が誘導され得る。従って、一部の態様において、末梢組織において自己抗原を認識する成熟Ｔ細胞が、続いてそれらの抗原に応答する能力を失うのと同じ機構がまた、癌細胞が発現するものなどの、外来性又は「非自己」抗原に対する不応答性も制御し得る。従って、本明細書の実施形態において企図されるＴ細胞は、ＣＤ２８などの共刺激分子に結合する薬剤など、刺激剤の存在下であっても、寛容状態であり得る。Ｔ細胞を本明細書に提供されるＣｂｌ－ｂ阻害薬又はその組成物と接触させると、Ｔ細胞寛容、Ｔ細胞アネルギー、及び／又はＴ細胞枯渇などのＴ細胞機能不全の側面を回避することができる。一部の実施形態において、Ｔ細胞の活性を調節する方法（例えば、Ｔ細胞寛容を低下させる、Ｔ細胞アネルギーを低下させる、及び／又はＴ細胞枯渇を低下させる方法）は、Ｔ細胞を有効量のＣｂｌ－ｂ阻害薬又はその組成物と接触させることを含む。本明細書における方法の一部の実施形態において、Ｔ細胞の活性を調節すること（例えば、Ｔ細胞寛容を低下させること、Ｔ細胞アネルギーを低下させること、及び／又はＴ細胞枯渇を低下させること）は、抗ＣＤ２８抗体と組み合わせた抗ＣＤ３抗体の存在下でＴ細胞を有効量のＣｂｌ－ｂ阻害薬又はその組成物と接触させることを含む。本明細書における方法の一部の実施形態において、Ｔ細胞の活性を調節する方法（例えば、Ｔ細胞寛容を低下させる、Ｔ細胞アネルギーを低下させる、及び／又はＴ細胞枯渇を低下させる方法）は、Ｔ細胞を有効量のＣｂｌ－ｂ阻害薬又はその組成物と接触させることを含み、ここでＴ細胞は、抗ＣＤ２８抗体と組み合わせた抗ＣＤ３抗体と予め接触した状態にあったものである。一部の実施形態において、Ｔ細胞の活性の調節（例えば、Ｔ細胞寛容の低下、Ｔ細胞アネルギーの低下、及び／又はＴ細胞枯渇の低下）に、共刺激ＣＤ２８分子による刺激は不要である。本明細書における方法の一部の実施形態において、Ｔ細胞の活性を調節する方法（例えば、Ｔ細胞寛容を低下させる、Ｔ細胞アネルギーを低下させる、及び／又はＴ細胞枯渇を低下させる方法）は、抗ＣＤ３抗体単独の存在下でＴ細胞を有効量のＣｂｌ－ｂ阻害薬又はその組成物と接触させることを含む。一部の実施形態において、Ｔ細胞の活性を調節する方法（例えば、Ｔ細胞寛容を低下させる、Ｔ細胞アネルギーを低下させる、及び／又はＴ細胞枯渇を低下させる方法）は、Ｔ細胞を有効量のＣｂｌ－ｂ阻害薬又はその組成物と接触させることを含み、ここでＴ細胞は、抗ＣＤ３抗体など、Ｔ細胞を活性化させる１つ以上の薬剤単独と予め接触した状態にあったものである。
[0211] Ｔ細胞活性化及びＴ細胞寛容は、免疫応答を制御する厳密にコントロールされた過程である。従って、本明細書には、Ｔ細胞の活性を調節する方法が提供され、ここでＴ細胞の活性を調節することは、Ｔ細胞活性化の増加、Ｔ細胞増殖の増加、Ｔ細胞枯渇の低下、及び／又はＴ細胞寛容の低下を含む。一部の実施形態において、Ｔ細胞の活性を調節する方法（例えば、Ｔ細胞活性化の増加、Ｔ細胞増殖の増加、Ｔ細胞枯渇の低下、及び／又はＴ細胞寛容の低下）は、Ｔ細胞を有効量のＣｂｌ－ｂ阻害薬又はその組成物と接触させることを含む。本明細書における方法の一部の実施形態において、Ｔ細胞の活性を調節すること（例えば、Ｔ細胞活性化を増加させること、Ｔ細胞増殖を増加させること、Ｔ細胞枯渇を低下させること、及び／又はＴ細胞寛容を低下させること）は、抗ＣＤ２８抗体と組み合わせた抗ＣＤ３抗体の存在下でＴ細胞を有効量のＣｂｌ－ｂ阻害薬又はその組成物と接触させることを含む。本明細書における方法の一部の実施形態において、Ｔ細胞の活性を調節する方法（例えば、Ｔ細胞活性化を増加させる、Ｔ細胞増殖を増加させる、Ｔ細胞枯渇を低下させる、及び／又はＴ細胞寛容を低下させる方法）は、Ｔ細胞を有効量のＣｂｌ－ｂ阻害薬又はその組成物と接触させることを含み、ここでＴ細胞は、抗ＣＤ２８抗体と組み合わせた抗ＣＤ３抗体と予め接触した状態にあったものである。一部の実施形態において、Ｔ細胞の活性の調節（例えば、Ｔ細胞活性化の増加、Ｔ細胞増殖の増加、Ｔ細胞枯渇の低下、及び／又はＴ細胞寛容の低下）に、共刺激ＣＤ２８分子による刺激は不要である。本明細書における方法の一部の実施形態において、Ｔ細胞の活性を調節する方法（例えば、Ｔ細胞活性化を増加させる、Ｔ細胞増殖を増加させる、Ｔ細胞枯渇を低下させる、及び／又はＴ細胞寛容を低下させる方法）は、抗ＣＤ３抗体単独の存在下でＴ細胞を有効量の本明細書に提供されるＣｂｌ－ｂ阻害薬又はその組成物と接触させることを含む。一部の実施形態において、Ｔ細胞の活性を調節する方法（例えば、Ｔ細胞活性化を増加させる、Ｔ細胞増殖を増加させる、Ｔ細胞枯渇を低下させる、及び／又はＴ細胞寛容を低下させる方法）は、Ｔ細胞を有効量のＣｂｌ－ｂ阻害薬又はその組成物と接触させることを含み、ここでＴ細胞は、Ｔ細胞を活性化させる１つ以上の薬剤（例えば、抗ＣＤ３抗体）と予め接触した状態にあったものである。
[0212] 本明細書における方法の一部の実施形態において、Ｔ細胞活性化の増加は、Ｔ細胞又は活性化したＴ細胞微小環境にある周囲免疫細胞（例えば、骨髄系細胞）からの１つ以上のサイトカインの産生の増加を含む。一部の実施形態において、１つ以上のサイトカインとしては、限定はされないが、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－１３、ＩＬ－１８、ＴＮＦα、及びＧＭ－ＣＳＦが挙げられる。一部の実施形態において、サイトカインは、ＩＬ－２、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦα、及びＧＭ－ＣＳＦのうちの１つ以上である。一部の実施形態において、サイトカインはケモカインである。一部の実施形態において、１つ以上のケモカインとしては、限定はされないが、ＩＰ－１０、エオタキシン、ＧＲＯα、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ－１α、ＭＩＰ－１β、ＭＩＰ－２、ＭＣＰ－１、及びＭＣＰ－３が挙げられる。サイトカインの発現の増加は、ＥＬＩＳＡによって測定することができる。
[0213] 本明細書における方法の一部の実施形態において、Ｔ細胞活性化の増加は、１つ以上のＴ細胞活性化マーカーの細胞表面発現の増加を含む。一部の実施形態において、１つ以上のＴ細胞活性化マーカーとしては、限定はされないが、ＣＤ２５、ＣＤ４４、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ６９、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ４）、ＣＤ１５４、ＣＤ１３７、及びＣＤ２７９が挙げられる。一部の実施形態において、Ｔ細胞活性化マーカーは、ＣＤ２５、ＣＤ６９、及びＣＴＬＡ４のうちの１つ以上である。細胞表面マーカーの発現の増加は、ＦＡＣＳによって測定することができる。
[0214] Ｔ細胞活性化の増加、Ｔ細胞増殖の増加、Ｔ細胞枯渇の低下、及び／又はＴ細胞寛容の低下を実験的に決定するための方法は、当該技術分野において周知である。一部の実施形態では、Ｔ細胞活性化を決定する代表的な方法について、本明細書に提供される生物学的実施例２を参照することができる。一部の実施形態では、Ｔ細胞活性化の増加、Ｔ細胞増殖の増加、Ｔ細胞枯渇の低下、及び／又はＴ細胞寛容の低下を決定する代表的なインビトロ及びインビボ方法について、本明細書に提供される生物学的実施例３を参照することができる。
[0215] 免疫細胞の活性を調節する方法の一部の実施形態において、免疫細胞はＢ細胞であり、Ｂ細胞の活性を調節することは、Ｂ細胞活性化の増加を含む。一部の実施形態において、Ｂ細胞活性化の増加は、１つ以上のＢ細胞活性化マーカーの細胞表面発現の増加を含む。一部の実施形態において、１つ以上のＢ細胞活性化マーカーとしては、限定はされないが、ＣＤ６９、ＣＤ８６、及びＭＨＣクラスＩＩ（例えば、ＨＬＡ－ＤＲ）が挙げられる。一部の実施形態において、Ｂ細胞活性化マーカーはＣＤ６９である。細胞表面マーカーの発現の増加は、ＦＡＣＳによって測定することができる。一部の実施形態において、Ｂ細胞活性化の増加は、ＥＲＫ、ＪＮＫ、及びＳｙｋによって媒介されるものなど、シグナル伝達経路にあるタンパク質の活性化の増加を含む。前記タンパク質の活性化の増加は、当該技術分野で利用可能な抗ホスホ抗体などの試薬を用いたタンパク質のリン酸化レベルの測定によって検出することができる。
[0216] 免疫細胞の活性を調節する方法の一部の実施形態において、免疫細胞はＮＫ細胞であり、ＮＫ細胞の活性を調節することは、ＮＫ細胞活性化の増加を含む。一部の実施形態において、ＮＫ細胞活性化の増加は、１つ以上のサイトカインの分泌を含む。一部の実施形態において、１つ以上のサイトカインとしては、限定はされないが、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦα、及びＭＩＰ－１βが挙げられる。サイトカインの発現の増加は、ＥＬＩＳＡによって測定することができる。一部の実施形態において、ＮＫ細胞活性化の増加は、１つ以上のＮＫ細胞活性化マーカーの細胞表面発現の増加を含む。一部の実施形態において、１つ以上のＮＫ細胞活性化マーカーとしては、限定はされないが、ＣＤ６９、及びＣＤ１０７ａが挙げられる。細胞表面マーカーの発現の増加は、ＦＡＣＳによって測定することができる。一部の実施形態において、ＮＫ細胞活性化の増加は、原発腫瘍細胞を含めた腫瘍細胞などの標的細胞、及びＫ５６２細胞株などの細胞株由来の腫瘍細胞の死滅の増加を含む。
[0217] Ｂ細胞活性化及びＮＫ細胞活性化の増加を実験的に決定するための方法は、当該技術分野において周知である（例えば、Fauriat et al., Blood. 115: 2167-76, 2010；Beano et al., J. Transl. Med., 6:25 2008；Claus et al., J. Immunol. Methods, 341: 154-64, 2009；及びFujisaki et al., Cancer Res. 69: 4010-4017, 2009を参照されたい）。一部の実施形態では、Ｂ細胞活性化を決定する代表的な方法について、本明細書に提供される生物学的実施例３を参照することができる。一部の実施形態では、ＮＫ細胞活性化を決定する代表的な方法について、本明細書に提供される生物学的実施例３を参照することができる。
[0218] Ｔ細胞、Ｂ細胞又はＮＫ細胞などの免疫細胞の活性の調節は、目的のパラメータ（例えば、サイトカイン分泌）のベースライン値を決定することにより測定し得る。例えば、細胞をＣｂｌ－ｂ阻害薬と接触させるインビトロ実験から入手された試料などでは、Ｔ細胞活性化は、前記Ｃｂｌ－ｂ阻害薬と接触させる前又はそれを投与する前に測定してベースライン値を決定することができる。次に前記Ｃｂｌ－ｂ阻害薬と接触させた後又はそれを投与した後のＴ細胞活性化について、参照値を入手する。参照値をベースライン値と比較すると、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬又はその組成物の接触又は投与に起因するＴ細胞活性化の量が決まる。例えば、一部の実施形態において、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）活性化は、ベースライン値と比較したとき試料中で少なくとも０．１倍だけ増加し、ここでベースライン値は、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）をＣｂｌ－ｂ阻害薬又はその組成物と接触させる前に入手される。一部の実施形態において、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）活性化は、ベースライン値の少なくとも約０．１倍、約０．２倍、約０．３倍、約０．４倍、約０．５倍、約０．６倍、約０．７倍、約０．８倍、約０．９倍、約１倍、約２倍、約４倍、約６倍、約８倍、約１０倍、約２０倍、約３０倍、約４０倍、約５０倍、約７５倍、又は約１００倍（例えば、約０．１倍～約１００倍、又は約１倍～約１００倍）だけ増加する。免疫細胞活性化は、サイトカイン分泌の増加、活性化マーカー（例えば、細胞表面マーカー）の細胞表面発現の増加、又は下流シグナル伝達経路にあるタンパク質のリン酸化の増加など、活性化の生物学的マーカーを測定することにより判定し得る。試験下のパラメータ及び免疫細胞が処置される条件について、免疫細胞活性化の指標となるベースライン値に対する倍数を決定することができる。例えば、Ｔ細胞活性化の測定のため、抗ＣＤ２８抗体と組み合わせた抗ＣＤ３抗体で刺激したＴ細胞であって、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬とインキュベートされない細胞からベースライン値を入手することができる。次に、抗ＣＤ２８抗体と組み合わせた抗ＣＤ３抗体で刺激したＴ細胞であって、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬と接触した状態にあったか、又はその状態にあるＴ細胞から参照値を入手する。次に、入手された参照値により、免疫細胞活性化の陽性応答を決定することができる。同様の参照値測定値を入手してベースライン値と比較することにより、Ｔ細胞活性化、Ｔ細胞増殖、Ｔ細胞枯渇、Ｔ細胞寛容、Ｂ細胞活性化及び／又はＮＫ細胞活性化を判定することができる。これらのパラメータの測定値は、当該技術分野において周知の技法、並びに生物学的実施例２及び３に提供される技法を利用して入手することができる。
[0219] 用語「ベースライン」又は「ベースライン値」は、本明細書で使用されるとき、本明細書に開示されるとおりの治療剤（例えば、本明細書に記載されるとおりのＣｂｌ－ｂ阻害薬を含む組成物）の投与前又は治療剤の投与開始時における測定値又は特性を指し得る。ベースライン値を参照値と比較することにより、免疫細胞機能の増加又は減少（例えば、Ｔ細胞活性化を増加させること、Ｔ細胞増殖を増加させること、Ｔ細胞枯渇を低下させること、及び／又はＴ細胞寛容を低下させること）を決定し得る。用語「参照」又は「参照値」は、本明細書で使用されるとき、本明細書に開示されるとおりの治療剤（例えば、本明細書に記載されるとおりのＣｂｌ－ｂ阻害薬を含む組成物）の投与後における測定値又は特性を指し得る。参照値は、実験時間経過中、投薬量レジメン中、若しくは処置サイクル中に１回以上、又は実験時間経過、投薬量レジメン、若しくは処置サイクルの完了時に測定することができる。「参照値」は、絶対値、相対値、上限及び／又は下限のある値、値の範囲、算術平均値、中央値、平均値、又はベースライン値と比較したときの値であってもよい。同様に、「ベースライン値」は、絶対値、相対値、上限及び／又は下限のある値、値の範囲、算術平均値、中央値、平均値、又は参照値と比較したときの値であってもよい。参照値及び／又はベースライン値は、１つの試料（例えば、ある個体から入手された１つの試料）、２つの異なる試料（例えば、異なる２個体から入手された試料）又は一群の試料（例えば、２、３、４、５個体、又はそれ以上の群から入手された試料）から入手することができる。
[0220] 一部の実施形態において、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬の存在下で抗ＣＤ２８抗体と組み合わせた抗ＣＤ３抗体で刺激したＴ細胞によるサイトカイン分泌（例えば、ＩＬ－２分泌）によって測定したときのＴ細胞活性化に関する陽性応答は、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬の非存在下で抗ＣＤ２８抗体と組み合わせた抗ＣＤ３抗体で刺激したＴ細胞から入手されたサイトカイン分泌（例えば、ＩＬ－２分泌）についてのベースライン値の少なくとも２．５倍である。一部の実施形態において、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬の存在下で抗ＣＤ２８抗体と組み合わせた抗ＣＤ３抗体で刺激したＴ細胞による表面マーカー発現（例えば、ＣＤ２５表面マーカー染色）によって測定したときのＴ細胞活性化に関する陽性応答は、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬の非存在下で抗ＣＤ２８抗体と組み合わせた抗ＣＤ３抗体で刺激したＴ細胞から入手された表面マーカー発現（例えば、ＣＤ２５表面マーカー染色）についてのベースライン値の少なくとも１．３倍である。一部の実施形態において、ベースライン値は、抗ＣＤ３抗体単独で刺激したＴ細胞であって、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬とインキュベートされない細胞から入手することができる。一部の実施形態において、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬の存在下で抗ＣＤ３抗体単独で刺激したＴ細胞によるサイトカイン分泌（例えば、ＩＬ－２分泌）によって測定したときのＴ細胞活性化に関する陽性応答は、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬の非存在下で抗ＣＤ３抗体単独で刺激したＴ細胞から入手されたサイトカイン分泌（例えば、ＩＬ－２分泌）についてのベースライン値の少なくとも０．１倍である。一部の実施形態において、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬の存在下で抗ＣＤ３抗体単独で刺激したＴ細胞による表面マーカー発現（例えば、ＣＤ２５表面マーカー染色）によって測定したときのＴ細胞活性化に関する陽性応答は、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬の非存在下で抗ＣＤ３抗体単独で刺激したＴ細胞から入手された表面マーカー発現（例えば、ＣＤ２５表面マーカー染色）についてのベースライン値の少なくとも０．６倍である。
[0221] 一部の態様において、本明細書には、修飾免疫細胞を作製する方法であって、有効量の本明細書に提供されるＣｂｌ－ｂ阻害薬又はその組成物の存在下で免疫細胞を含有する細胞集団を培養して免疫細胞の活性を調節し、それによって修飾免疫細胞を作製することを含む方法が提供される。一部の実施形態において、免疫細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、又はナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である。
[0222] 修飾免疫細胞の作製方法の一部の実施形態において、修飾されることになる免疫細胞は、造血細胞、多能性幹細胞、骨髄系前駆細胞、リンパ系前駆細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、及びＮＫ細胞からなる群から選択される細胞である。一部の実施形態において、本方法は、サイトカインなどの刺激剤又は免疫細胞が発現する活性化タンパク質に結合する抗体（例えば、抗ＣＤ３抗体及び／又は抗ＣＤ２８抗体）と共に免疫細胞を培養することを更に含む。一部の実施形態において、修飾されることになる免疫細胞は、免疫細胞を含有する細胞集団中にあり、ここで細胞集団は、個体からの試料として入手される。一部の実施形態において、修飾されることになる免疫細胞は、免疫細胞を含有する細胞集団中にあり、ここで細胞集団は、個体からの生体試料（例えば、血液試料、骨髄試料等）を培養することによって入手される。一部の実施形態において、免疫細胞は、免疫細胞を含有する細胞集団をＣｂｌ－ｂ阻害薬又はその組成物と接触させることにより修飾され、それによって修飾免疫細胞が作製される。一部の実施形態において、修飾免疫細胞は、造血細胞、多能性幹細胞、骨髄系前駆細胞、リンパ系前駆細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、及びＮＫ細胞からなる群から選択される細胞である。一部の実施形態において、免疫細胞は修飾免疫細胞と同じ細胞型である。例えば、免疫細胞が不活性Ｔ細胞であってもよく、修飾免疫細胞が活性化Ｔ細胞であってもよい。一部の実施形態において、免疫細胞は修飾免疫細胞と異なる細胞型である。例えば、免疫細胞が造血幹細胞であってもよく、修飾免疫細胞が、造血幹細胞から分化したＮＫ細胞であってもよい。修飾免疫細胞を作製する方法の一部の実施形態において、この方法は、修飾免疫細胞を回収することを更に含む。一部の実施形態において、免疫細胞を含有する細胞集団、免疫細胞又は修飾免疫細胞は、個体（例えば、ヒト）からのものである。一部の実施形態において、免疫細胞又は修飾免疫細胞は、それぞれ、ヒト免疫細胞又はヒト修飾免疫細胞である。
[0223] 更に、本明細書には、有効量のＣｂｌ－ｂ阻害薬の存在下で免疫細胞を含有する細胞集団を培養して免疫細胞の活性を調節し、それによって修飾免疫細胞を作製するなど、本明細書に記載される方法のいずれかによって作製された修飾免疫細胞が提供される。
[0224] 一部の実施形態において、本明細書に提供されるＣｂｌ－ｂ阻害薬は、細胞膜透過性である。従って、一部の実施形態において、本明細書に提供される修飾免疫細胞は、修飾免疫細胞の細胞質にあるなどの、本明細書に記載されるＣｂｌ－ｂ阻害薬を含むことができる。
[0225] 一部の態様において、本明細書には、単離修飾免疫細胞が提供され、ここで修飾免疫細胞は、本明細書に記載されるＣｂｌ－ｂ阻害薬又はその組成物と接触させたものであるか、又は接触した状態にあるものである。一部の実施形態において、修飾免疫細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、又はナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である。一部の実施形態において、修飾免疫細胞は、造血細胞、多能性幹細胞、骨髄系前駆細胞、リンパ系前駆細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、又はＮＫ細胞である。
[0226] 単離修飾免疫細胞の一部の実施形態において、修飾免疫細胞はＴ細胞であり、Ｔ細胞は、Ｔ細胞活性化の増加、Ｔ細胞増殖の増加、Ｔ細胞枯渇の低下、及び／又はＴ細胞寛容の低下を呈する。一部の実施形態において、Ｔ細胞活性化の増加は、Ｔ細胞又は活性化したＴ細胞微小環境にある周囲免疫細胞（例えば、骨髄系細胞）からの１つ以上のサイトカインの産生の増加を含む。一部の実施形態において、１つ以上のサイトカインとしては、限定はされないが、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－１３、ＩＬ－１８、ＴＮＦα、及びＧＭ－ＣＳＦが挙げられる。一部の実施形態において、１つ以上のサイトカインは、ＩＬ－２、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦα、及びＧＭ－ＣＳＦからなる群から選択される１つ以上である。一部の実施形態において、サイトカインはケモカインである。一部の実施形態において、１つ以上のケモカインとしては、限定はされないが、ＩＰ－１０、エオタキシン、ＧＲＯα、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ－１α、ＭＩＰ－１β、ＭＩＰ－２、ＭＣＰ－１、及びＭＣＰ－３が挙げられる。一部の実施形態において、Ｔ細胞活性化の増加は、１つ以上のＴ細胞活性化マーカーの細胞表面発現の増加を含む。一部の実施形態において、１つ以上のＴ細胞活性化マーカーとしては、限定はされないが、ＣＤ２５、ＣＤ４４、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ６９、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ４）、ＣＤ１５４、ＣＤ１３７、及びＣＤ２７９が挙げられる。一部の実施形態において、１つ以上のＴ細胞活性化マーカーとしては、限定はされないが、ＣＤ２５、ＣＤ６９、及びＣＴＬＡ４が挙げられる。一部の実施形態において、Ｔ細胞活性化マーカーは、ＣＤ２５及び／又はＣＤ６９である。一部の実施形態において、Ｔ細胞は、抗ＣＤ３抗体と接触した状態にあったか、又はその状態にある。一部の実施形態において、Ｔ細胞は、抗ＣＤ２８抗体と組み合わせた抗ＣＤ３抗体と接触した状態にあったか、又はその状態にある。
[0227] 単離修飾免疫細胞の一部の実施形態において、修飾免疫細胞はＮＫ細胞であり、ＮＫ細胞は、ＮＫ細胞活性化の増加を呈する。一部の実施形態において、ＮＫ細胞活性化の増加は、１つ以上のサイトカイン（例えば、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦα、及び／又はＭＩＰ－１β）の分泌の増加を含む。一部の実施形態において、ＮＫ細胞活性化の増加は、１つ以上のＮＫ細胞活性化マーカー（例えば、ＣＤ６９及び／又はＣＤ１０７ａ）の細胞表面発現の増加を含む。
[0228] 単離修飾免疫細胞の一部の実施形態において、修飾免疫細胞はＢ細胞であり、Ｂ細胞は、Ｂ細胞活性化の増加を呈する。一部の実施形態において、Ｂ細胞活性化の増加は、１つ以上のＢ細胞活性化マーカー（例えば、ＣＤ６９、ＣＤ８６、及び／又はＨＬＡ－ＤＲ）の細胞表面発現の増加を含む。
[0229] 本明細書に提供される方法又は修飾免疫細胞の任意の実施形態の一部において、免疫細胞又は修飾免疫細胞は哺乳類細胞（例えば、ヒト細胞）である。一部の実施形態において、免疫細胞又は修飾免疫細胞はヒト細胞である。
[0230] 一部の態様において、インキュベーションは、米国特許第６，０４０，１７７号；Klebanoff et al., J Immunother., 35: 651-660, 2012；Terakura et al., Blood, 119: 72-82, 2012；及びWang et al., J Immunother., 35:689-701, 2012に記載されるものなどの技法に従い行われる。
[0231] 本明細書に提供される修飾されることになる免疫細胞又は修飾免疫細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）など、組換えキメラ受容体を発現するように操作することができる。一部の実施形態において、ＣＡＲは、そのＮ末端からＣ末端に、細胞外リガンド結合ドメイン、膜貫通ドメイン、細胞内共刺激ドメイン、及び活性化細胞質シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態において、ＣＡＲは、そのＮ末端からＣ末端に、細胞外リガンド結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び活性化細胞質シグナル伝達ドメインを含む。免疫細胞は、本明細書に提供されるＣｂｌ－ｂ阻害薬との接触前、接触中、又は接触後に、組換えキメラ受容体（例えば、ＣＡＲ）を発現するように操作することができる。一部の実施形態において、修飾されることになる免疫細胞は、Ｔ細胞（例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞又はＣＤ８＋Ｔ細胞）である。更なる実施形態において、Ｔ細胞は、ＣＡＲなどの組換えキメラ受容体を含む。一部の実施形態において、修飾免疫細胞は、修飾されたＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞又はＣＤ８＋Ｔ細胞）である。更なる実施形態において、修飾されたＴ細胞は、ＣＡＲなどの組換えキメラ受容体を含む。組換えキメラ受容体を発現する免疫細胞の作製方法は、組換えキメラ受容体（例えば、ＣＡＲ）をコードする核酸をベクター（例えば、ウイルスベクター）によって免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）に導入することによるなど、当該技術分野において周知である。例えば、国際公開第２０１７／０９６３２９号及び米国特許出願公開第２０１７／０２０４３７２号を参照されたい。
[0232] 詳細には、本開示は、拡大リンパ球集団を作製する方法であって、（ａ）癌を有する個体からリンパ球を含む生体試料を入手することであって、個体が、単剤治療として、又は併用治療の一部として有効量のＣｂｌ－ｂ阻害薬の投与を受けたことがあるか、又は受けているところであること、及び（ｂ）少なくとも１つのＴ細胞成長因子を含む細胞培養培地でリンパ球を培養して拡大リンパ球集団を作製することを含む方法を提供する。一部の実施形態において、リンパ球は腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）である。一部の実施形態において、リンパ球は、癌を有する哺乳類対象の腫瘍から単離された、又は単離されるＴＩＬである。他の実施形態において、リンパ球は末梢血単核球（ＰＢＭＣ）である。一部の実施形態において、少なくとも１つのＴ細胞成長因子は、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、及びＩＬ－２１からなる群のうちの１つ以上を含み、任意選択で少なくとも１つのＴ細胞成長因子はＩＬ－２を含む。一部の実施形態において、細胞培養培地は、抗ＣＤ３抗体、又は抗ＣＤ３抗体と抗ＣＤ２８抗体との両方を更に含む。一部の実施形態において、細胞培養培地は、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬を更に含む。一部の実施形態において、細胞培養培地は、照射フィーダー細胞を更に含む。一部の実施形態において、個体はヒト患者である。また、本明細書には、前述の方法によって作製された拡大ＴＩＬ集団と、生理学的に許容可能な緩衝液とを含む組成物も提供される。
[0233] 一部の実施形態において、修飾されることになる免疫細胞又は修飾された免疫細胞（即ち、修飾免疫細胞）の単離及び処理方法は、単離、インキュベーション（例えば、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬とのインキュベーション）、及び／又は操作（例えば、免疫細胞への組換えキメラ受容体をコードする核酸の導入）の前又はその後のいずれかに、細胞を凍結する（例えば、凍結保存する）ステップを含む。当該技術分野において公知の種々の凍結溶液及びパラメータを用いることができる。
Ｂ．養子細胞治療
[0234] 本明細書に記載される方法によって作製される拡大リンパ球集団などの修飾免疫細胞又はその組成物は、癌を有する個体など、それを必要としている個体の処置方法において、治療剤として使用することができる。かかる処置方法には、養子細胞治療が含まれる。一部の実施形態において、この処置方法は、個体から細胞を単離すること、それを本明細書に記載されるとおり調製、処理、培養、及び／又は操作すること、及びそれを同じ個体に再導入することを、凍結保存の前又はその後に含む。一部の実施形態において、この処置方法は、個体から細胞を単離すること、それを本明細書に記載されるとおり調製、処理、培養、及び／又は操作すること、及びそれを別の個体に再導入することを、凍結保存の前又はその後に含む。
[0235] 従って、一部の態様において、本明細書には、個体の免疫応答を調節する方法であって、それを必要としている個体（例えば、Ｔ細胞機能不全障害を有する個体）に有効量の本明細書に記載される修飾免疫細胞又はその組成物を投与することを含む方法が提供される。一部の実施形態において、個体は癌を有する。一部の実施形態において、本明細書には、Ｃｂｌ－ｂ活性の阻害に応答性の癌を処置する方法であって、Ｃｂｌ－ｂ活性の阻害に応答性の癌を有する個体に有効量の本明細書に記載される修飾免疫細胞又はその組成物を投与することを含む方法が提供される。一部の実施形態において、本明細書には、異常細胞増殖を阻害する方法であって、有効量の本明細書に記載される修飾免疫細胞又はその組成物をそれを必要としている個体に投与することを含む方法が提供される。用語「異常細胞増殖」は、本明細書で使用されるとき、過形成又は癌細胞増殖を含む。癌細胞は、リンパ腫、白血病、又は骨髄腫などの血液癌に由来し得る。他の実施形態において、癌細胞は、肉腫、癌腫、又は黒色腫などの非血液癌に由来し得る。
[0236] 特定の実施形態において、癌又はＴ細胞機能不全障害を有する個体など、処置を必要としている個体には、本明細書に提供される修飾免疫細胞を含む組成物が、約１００万～約１０００億細胞、例えば、１００万～約５００億細胞などの範囲（例えば、約５００万細胞、約２５００万細胞、約５億細胞、約１０億細胞、約５０億細胞、約２００億細胞、約３００億細胞、約４００億細胞、又は前述の値のうちのいずれか２つによって定義される範囲）、例えば、約１０００万～約１０００億細胞など（例えば、約２０００万細胞、約３０００万細胞、約４０００万細胞、約６０００万細胞、約７０００万細胞、約８０００万細胞、約９０００万細胞、約１００億細胞、約２５０億細胞、約５００億細胞、約７５０億細胞、約９００億細胞、又は前述の値のうちのいずれか２つによって定義される範囲）、及びある場合には、約１億細胞～約５００億細胞（例えば、約１億２０００万細胞、約２億５０００万細胞、約３億５０００万細胞、約４億５０００万細胞、約６億５０００万細胞、約８億細胞、約９億細胞、約３０億細胞、約３００億細胞、約４５０億細胞）又はこれらの範囲の間にある任意の値で投与される。
[0237] 修飾免疫細胞及びその組成物は、標準的な投与技法、製剤、及び／又は装置を用いて投与される。シリンジ及びバイアルなど、組成物の保存及び投与用の製剤及び装置が提供される。修飾免疫細胞を含む製剤又は医薬組成物には、静脈内、腹腔内、皮下、又は筋肉内投与用のものが含まれる。一部の実施形態において、修飾免疫細胞は、非経口的に投与される。本明細書で使用されるとき、用語「非経口」には、限定はされないが、静脈内、筋肉内、皮下、及び腹腔内投与が含まれる。一部の実施形態において、細胞集団は、静脈内、腹腔内、又は皮下注射による末梢全身送達を用いて対象に投与される。修飾免疫細胞の組成物は、滅菌液体製剤、例えば、等張性水溶液、懸濁液、エマルション、分散液、又は粘稠性組成物として提供することができ、これらは、一部の態様では、選択のｐＨに緩衝されてもよい。粘稠性組成物は、特定の組織との接触時間が長くなるように適切な粘度範囲内に製剤化することができる。液状又は粘稠性組成物は、担体を含むことができ、担体は、例えば、水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコール）及びこれらの好適な混合物を含有する溶媒又は分散媒であり得る。滅菌注射用溶液は、滅菌水、生理食塩水、グルコース、デキストロースなどの好適な担体、希釈剤、又は賦形剤と混和するなどして、溶媒中に修飾免疫細胞を配合することによって調製し得る。
[0238] 一部の実施形態において、修飾免疫細胞は、１つ以上の追加の治療剤と共に、又は別の治療介入に関連して、同じ時点で、或いは任意の順序で逐次的に共投与される。例えば、本開示の一部の治療レジメンでは、修飾免疫細胞とＣｂｌ－ｂ阻害薬との両方が、それを必要としている哺乳類対象に投与され、ここでＣｂｌ－ｂ阻害薬は、式（Ｉ）、（Ｉ－ａ）、（Ｉ－Ａ）～（Ｉ－Ｊ）、（ＩＩ－Ａ）～（ＩＩ－Ｈ）、（ＩＩ－Ａ－１）～（ＩＩ－Ｈ－１）、（ＩＩＩ－Ａ）～（ＩＩＩ－Ｈ）、（ＩＩＩ－Ａ－１）～（ＩＩＩ－Ｈ－１）、（ＩＶ－Ａ）～（ＩＶ－Ｊ）、又は（ＩＶ－Ｃ－１）～（ＩＶ－Ｊ－１）の化合物、又はその任意の変形例である。従って、一部の実施形態において、治療レジメンは、養子細胞治療と化学治療との両方を含む。
[0239] 修飾免疫細胞が個体（例えば、ヒト）に投与された後、当該技術分野において公知の方法によって修飾免疫細胞集団の生物学的活性を測定することができる。判定すべきパラメータとしては、インビボ（例えば、イメージングによる）又はエキソビボ（例えば、ＥＬＩＳＡ又はフローサイトメトリーによる）での、抗原に対する修飾免疫細胞又は他の免疫細胞の特異的結合が挙げられる。一部の実施形態において、修飾免疫細胞が標的細胞を破壊する能力は、細胞傷害性アッセイを用いて測定することができる（例えば、Kochenderfer et al., J. Immunotherapy, 32: 689-702, 2009；及びHerman et al., J. Immunological Methods, 285: 25-40, 2004を参照されたい）。一部の実施形態において、修飾免疫細胞の生物学的活性はまた、ＩＬ－２及びＩＦＮγなど、特定のサイトカインの発現及び／又は分泌をアッセイすることによっても測定し得る。
Ｃ．Ｃｂｌ－ｂ阻害薬の投与
[0240] 一部の態様において、個体における免疫応答の調節、疾患又は病態（例えば、癌及び／又は異常細胞増殖）の処置及び／又はＣｂｌ－ｂ活性の阻害のため、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬又はその組成物を個体に直接投与することができる。Ｃｂｌ－ｂ阻害薬は、表１の化合物、その互変異性体、その立体異性体、又はその薬学的に許容可能な塩であり得る。
[0241] 一部の実施形態において、本明細書には、免疫応答を調節する方法であって、個体の免疫応答を調節するため有効量の本明細書に提供されるＣｂｌ－ｂ阻害薬又はその組成物を個体に投与することを含む方法が提供される。一部の実施形態において、個体は、本明細書に記載される血液癌又は非血液癌などの癌を有する。
[0242] 一部の実施形態において、本明細書には、Ｃｂｌ－ｂ活性の阻害に応答性の癌を処置する方法であって、Ｃｂｌ－ｂ活性の阻害に応答性の癌を処置するため有効量の本明細書に提供されるＣｂｌ－ｂ阻害薬又はその組成物を個体に投与することを含む方法が提供される。一部の実施形態において、癌は、本明細書に記載されるものなどの血液癌又は非血液癌である。
[0243] 一部の実施形態において、本明細書には、異常細胞増殖（例えば、過形成）を阻害する方法であって、個体の異常細胞増殖を阻害するため有効量の本明細書に提供されるＣｂｌ－ｂ阻害薬又はその組成物を個体に投与することを含む方法が提供される。
[0244] 一部の実施形態において、本明細書には、Ｃｂｌ－ｂ活性を阻害する方法であって、個体のＣｂｌ－ｂ活性を阻害するため有効量の本明細書に提供されるＣｂｌ－ｂ阻害薬又はその組成物を個体に投与することを含む方法が提供される。
[0245] 一部の実施形態では、それを必要としている個体（例えば、Ｔ細胞機能不全障害を有する個体）の免疫応答の調節、個体（例えば、癌及び／又は異常細胞増殖を有する個体）の疾患又は病態の処置及び／又は個体のＣｂｌ－ｂ活性の阻害などにおいて、活性薬剤の適切な投薬量は、上記に定義するとおりの、処置しようとする病態、疾患、又は障害のタイプ、病態、疾患、又は障害の重症度及び経過、薬剤が予防目的で投与されるのか、それとも治療目的で投与されるのか、先行治療、対象の病歴及びＣｂｌ－ｂ阻害薬に対する応答、及び主治医の裁量に依存することになる。
[0246] Ｃｂｌ－ｂ阻害薬又はその組成物は、好適には、１回で、又は一連の処置にわたって個体に投与される。一部の実施形態において、処置は、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬又はその組成物の複数回の投与を含み、ここで投与間の間隔は様々であり得る。例えば、１回目の投与と２回目の投与との間の間隔が約１ヵ月であり、続く投与間の間隔が約３ヵ月である。一部の実施形態において、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬は均一用量で投与される。一部の実施形態において、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬は、個体の体重を基準とした一定用量（例えば、ｍｇ／ｋｇ）で個体に投与される。
[0247] 本開示の一部の態様において、癌は血液癌である。例えば、血液癌は、リンパ腫、白血病、又は骨髄腫であり得る。本開示の他の態様において、癌は非血液癌である。詳細には、非血液癌は、癌腫、肉腫、又は黒色腫であり得る。
[0248] 一部の実施形態において、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬は、１つ以上の追加の治療剤と共に、又は別の治療介入に関連して、同じ時点で、或いは任意の順序で逐次的に共投与される。例えば、本開示の一部の治療レジメンでは、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬と修飾免疫細胞との両方が、それを必要としている哺乳類対象に投与され、ここでＣｂｌ－ｂ阻害薬は、式（Ｉ）、（Ｉ－ａ）、（Ｉ－Ａ）～（Ｉ－Ｊ）、（ＩＩ－Ａ）～（ＩＩ－Ｈ）、（ＩＩ－Ａ－１）～（ＩＩ－Ｈ－１）、（ＩＩＩ－Ａ）～（ＩＩＩ－Ｈ）、（ＩＩＩ－Ａ－１）～（ＩＩＩ－Ｈ－１）、（ＩＶ－Ａ）～（ＩＶ－Ｊ）、又は（ＩＶ－Ｃ－１）～（ＩＶ－Ｊ－１）の化合物、又はその任意の変形例である。Ｃｂｌ－ｂ阻害薬は、表１の化合物、その互変異性体、その立体異性体、又はその薬学的に許容可能な塩であり得る。従って、一部の実施形態において、治療レジメンは、養子細胞治療と化学治療との両方を含む。
[0249] 一部の実施形態において、本明細書の方法（例えば、個体の免疫応答を調節する方法）におけるＣｂｌ－ｂ阻害薬投与の有効性は、処置下の個体から単離された試料（例えば、血液試料）中に存在する免疫細胞の生物学的活性を測定することによって判定し得る。例えば、細胞傷害性アッセイにおいて、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬による処置後の個体から単離された免疫細胞が標的細胞を破壊する能力を測定して、処置の有効性を判定してもよい。一部の実施形態において、試料（例えば、血液試料）中に存在する免疫細胞の生物学的活性は、ＩＬ－２及びＩＦＮγなど、特定のサイトカインの発現及び／又は分泌をアッセイすることにより測定し得る。
[0250] 本開示は、癌を処置する方法であって、癌を有する個体に有効量のＣｂｌ－ｂ阻害薬を投与すること、及び個体に有効量の追加の治療剤を投与することを含む方法を提供する。また、癌を有する個体を処置する方法であって、個体に有効量のＣｂｌ－ｂ阻害薬を投与すること；及び個体に有効量の追加の治療剤を投与することを含む方法も提供される。加えて、本開示は、抗癌免疫応答を増加させる方法であって、癌を有する個体に有効量のＣｂｌ－ｂ阻害薬を投与すること、及び個体に有効量の追加の治療剤を投与することを含む方法を提供する。更に、癌を処置する方法であって、癌を有する個体に有効量のＣｂｌ－ｂ阻害薬を投与することを含む方法が提供され、ここで個体は、有効量の追加の治療剤の投与を受けたことがあるか、又は受けているところである。
[0251] 前段落の方法の一部の実施形態において、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬と追加の治療剤とは、いずれの順序であれ連続的に投与される。本明細書で使用されるとき、用語「連続的に」、「順次に」、及び「逐次的に」は、追加の治療剤後のＣｂｌ－ｂ阻害薬の投与、又はＣｂｌ－ｂ阻害薬後の追加の治療剤の投与を指す。例えば、連続投与には、導入相（一次治療）の間の追加の治療剤の非存在下におけるＣｂｌ－ｂ阻害薬の投与と、それに続く追加の治療剤の投与を含む導入後処置相が関わり得る。本方法は、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬又は追加の治療剤の投与を含む維持相を更に含み得る。或いは、連続投与には、導入相（一次治療）の間のＣｂｌ－ｂ阻害薬の非存在下における追加の治療剤の投与と、それに続くＣｂｌ－ｂ阻害薬の投与を含む導入後処置相が関わり得る。本方法は、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬又は追加の治療剤の投与を含む維持相を更に含み得る。
[0252] 併用治療法の一部の実施形態において、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬と追加の治療剤とは同時に投与される。本明細書で使用されるとき、用語「同時に」、「同じ時点で」、及び「並行して」は、同じ来診の間又は同じ処置相の間におけるＣｂｌ－ｂ阻害薬と追加の治療剤との投与を指す。例えば、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬及び追加の治療剤の両方が、導入相、処置相、及び維持相のうちの１つ以上の間に投与され得る。しかしながら、同時投与とは、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬と追加の治療剤とが単一の製剤又は医薬組成物中に一緒に存在すること、又はＣｂｌ－ｂ阻害薬と追加の治療剤とが正確に同じ時間に投与されることを要求するものではない。
１．Ｃｂｌ－ｂ阻害薬と免疫チェックポイント阻害薬とを含む併用治療
[0253] 本開示の併用治療法の一部の実施形態において、追加の治療剤は、免疫チェックポイント阻害薬を含む。癌を処置するための本開示の併用治療法の一部の実施形態において、追加の治療剤は、免疫チェックポイント阻害薬を含む。用語「免疫チェックポイント」は、免疫細胞の活性化を防ぐシグナル伝達経路を指し、一方、用語「免疫チェックポイント阻害薬」は、免疫チェックポイントを妨げて免疫細胞の活性化にかかるブレーキを取り除く化合物を指す。一部の実施形態において、免疫チェックポイント阻害薬は、少なくとも１つの抑制性チェックポイント分子の拮抗薬である。一部の実施形態において、抑制性チェックポイント分子は、ＰＤ－１（ＣＤ２７９）、ＰＤ－Ｌ１（ＣＤ２７４）、ＣＴＬＡ－４（ＣＤ１２５）、ＬＡＧ３（ＣＤ２２３）、ＰＶＲ（ＣＤ１５５）、ＰＶＲＬ２（ＣＤ１１２）、ＰＶＲＬ３（ＣＤ１１３）、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３（ＣＤ３６６）、及びＶＩＳＴＡからなる群から選択される。一部の実施形態において、免疫チェックポイント阻害薬は、ＰＤ－１（ＣＤ２７９）、ＰＤ－Ｌ１（ＣＤ２７４）、及びＣＴＬＡ－４（ＣＤ１５２）からなる群から選択される少なくとも１つの抑制性チェックポイント分子の拮抗薬である。
[0254] ＰＤ－１は、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１）を指す。本開示の処置方法、医薬品、及び使用に好適なＰＤ－１拮抗薬としては、癌細胞又は抗原提示細胞上に発現するＰＤ－Ｌ１が、リンパ球（Ｔ細胞、Ｂ細胞、及び／又はＮＫ細胞）上に発現するＰＤ－１に結合するのを遮断する任意の化学的化合物又は生物学的分子が挙げられる。ＰＤ－１及びそのリガンドの別称又は同義語には、ＰＤ－１に対するＣＤ２７９、ＰＤＣＤ１、ＰＤ１、及びＳＬＥＢ２；及びプログラム細胞死１リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）に対するＣＤ２７４、ＰＤＣＤ１Ｌ１、ＰＤＬ１、Ｂ７Ｈ１、Ｂ７－４、及びＢ７－Ｈが含まれる。ヒト対象が処置下にある一部の実施形態において、ＰＤ－１拮抗薬は、ヒトＰＤ－Ｌ１がヒトＰＤ－１に結合するのを遮断する。成熟形態のヒトＰＤ－１のアミノ酸配列は、ＮＣＢＩ遺伝子座番号ＮＰ＿００５００９に残基２１～２８８として掲載されている。成熟形態のヒトＰＤ－Ｌ１のアミノ酸配列は、ＮＣＢＩ遺伝子座番号ＮＰ＿０５４８６２に残基１９～２９０として掲載されている。
[0255] ＣＴＬＡ－４は、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４を指す。本開示の処置方法、医薬品、及び使用に好適なＣＴＬＡ－４拮抗薬としては、リンパ球（Ｔ細胞、Ｂ細胞、及び／又はＮＫ細胞）上に発現するＣＴＬＡ－４が、抗原提示細胞上に発現するリガンド（ＣＤ８０及び／又はＣＤ８６）に結合するのを遮断する任意の化学的化合物又は生物学的分子が挙げられる。ＣＴＬＡ－４の別称又は同義語には、ＣＤ１５２、ＣＴＬＡ４、ＡＬＰＳ５、ＣＥＬＩＡＣ３、ＧＲＤ４、ＧＳＥ、及びＩＤＤＭ１２が含まれる。ヒト対象が処置下にある一部の実施形態において、ＣＴＬＡ－４拮抗薬は、ヒトＣＴＬＡ－４がヒトリガンドに結合するのを遮断する。成熟形態のヒトＣＴＬＡ－４のアミノ酸配列は、ＮＣＢＩ遺伝子座番号ＮＰ＿００５２０５に残基３６～２２３として掲載されている。
[0256] ＬＡＧ３は、リンパ球活性化遺伝子３タンパク質を指す。本開示の処置方法、医薬品、及び使用に好適なＬＡＧ３拮抗薬としては、リンパ球（Ｔ細胞、Ｂ細胞、及び／又はＮＫ細胞）上に発現するＬＡＧ３が、抗原提示細胞上に発現するリガンド（ＭＨＣクラスＩＩ）に結合するのを遮断する任意の化学的化合物又は生物学的分子が挙げられる。ＬＡＧ３は、別名ＣＤ２２３である。ヒト対象が処置下にある一部の実施形態において、ＬＡＧ３拮抗薬は、ヒトＬＡＧ３がヒトリガンドに結合するのを遮断する。成熟形態のヒトＬＡＧ３のアミノ酸配列は、ＮＣＢＩ遺伝子座番号ＮＰ＿００２２７７に残基２３～５２５として掲載されている。
[0257] ＰＶＲは、ポリオウイルス受容体を指す。本開示の処置方法、医薬品、及び使用に好適なＰＶＲ拮抗薬としては、癌細胞又は抗原提示細胞上に発現するＰＶＲが、リンパ球（Ｔ細胞、Ｂ細胞、及び／又はＮＫ細胞）上に発現するＴＩＧＩＴに結合するのを遮断する任意の化学的化合物又は生物学的分子が挙げられる。ＰＶＲの別称又は同義語には、ＣＤ１５５、ＰＶＳ、ＨＶＥＤ、ＮＥＣＬ５、ネクチン様タンパク質５、及びＴＡＧＥ４が含まれる。ヒト対象が処置下にある一部の実施形態において、ＰＶＲ拮抗薬は、ヒトＰＶＲがヒトＴＩＧＩＴに結合するのを遮断する。ヒトＰＶＲには複数のアイソフォームがある。ヒトＰＶＲのαアイソフォームのアミノ酸配列は、ＮＣＢＩ遺伝子座番号ＮＰ＿００６４９６に掲載されている。ヒトＰＶＲのβアイソフォームのアミノ酸配列は、ＮＣＢＩ遺伝子座番号ＮＰ＿００１１２９２４０に掲載されている。ヒトＰＶＲのγアイソフォームのアミノ酸配列は、ＮＣＢＩ遺伝子座番号ＮＰ＿００１１２９２４１に掲載されている。ヒトＰＶＲのδアイソフォームのアミノ酸配列は、ＮＣＢＩ遺伝子座番号ＮＰ＿００１１２９２４２に掲載されている。
[0258] ＰＶＲＬ２は、ポリオウイルス受容体関連２を指す。本開示の処置方法、医薬品、及び使用に好適なＰＶＲＬ２拮抗薬としては、癌細胞又は抗原提示細胞上に発現するＰＶＲＬ２が、リンパ球（Ｔ細胞、Ｂ細胞、及び／又はＮＫ細胞）上に発現するＴＩＧＩＴに結合するのを遮断する任意の化学的化合物又は生物学的分子が挙げられる。ＰＶＲＬ２の別称又は同義語には、ＣＤ１１２、ＮＥＣＴＩＮ２、ＨＶＥＢ、ヘルペスウイルス侵入メディエーターＢ、ＰＲＲ２、及びＰＶＲＲ２が含まれる。ヒト対象が処置下にある一部の実施形態において、ＰＶＲＬ２拮抗薬は、ヒトＰＶＲＬ２がヒトＴＩＧＩＴに結合するのを遮断する。ヒトＰＶＲＬ２のαアイソフォームのアミノ酸配列は、ＮＣＢＩ遺伝子座番号ＮＰ＿００２８４７に掲載されている。ヒトＰＶＲＬ２のδアイソフォームのアミノ酸配列は、ＮＣＢＩ遺伝子座番号ＮＰ＿００１０３６１８９に掲載されている。
[0259] ＰＶＲＬ３は、ポリオウイルス受容体関連３を指す。本開示の処置方法、医薬品、及び使用に好適なＰＶＲＬ３拮抗薬としては、癌細胞又は抗原提示細胞上に発現するＰＶＲＬ３が、リンパ球（Ｔ細胞、Ｂ細胞、及び／又はＮＫ細胞）上に発現するＴＩＧＩＴに結合するのを遮断する任意の化学的化合物又は生物学的分子が挙げられる。ＰＶＲＬ３の別称又は同義語には、ＣＤ１１３、ＮＥＣＴＩＮ３、ＰＲＲ３、及びＰＶＲＲ３が含まれる。ヒト対象が処置下にある一部の実施形態において、ＰＶＲＬ３拮抗薬は、ヒトＰＶＲＬ３がヒトＴＩＧＩＴに結合するのを遮断する。ヒトＰＶＲＬ３のアイソフォーム１のアミノ酸配列は、ＮＣＢＩ遺伝子座番号ＮＰ＿０５６２９５に掲載されている。ヒトＰＶＲＬ３のアイソフォーム２のアミノ酸配列は、ＮＣＢＩ遺伝子座番号ＮＰ＿００１２３０２１５に掲載されている。ヒトＰＶＲＬ３のアイソフォーム３のアミノ酸配列は、ＮＣＢＩ遺伝子座番号ＮＰ＿００１２３０２１７に掲載されている。
[0260] ＴＩＧＩＴは、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体タンパク質を指す。本開示の処置方法、医薬品、及び使用に好適なＴＩＧＩＴ拮抗薬としては、リンパ球（Ｔ細胞、Ｂ細胞、又はＮＫ細胞）上に発現するＴＩＧＩＴが、癌細胞又は抗原提示細胞上に発現するリガンド（ＣＤ１１２、ＣＤ１１３、及び／又はＣＤ１５５）に結合するのを遮断する任意の化学的化合物又は生物学的分子が挙げられる。ＴＩＧＩＴの別称又は同義語には、ＶＳＩＧ９、Ｖ－ｓｅｔ及び免疫グロブリンドメイン含有９、ＶＳＴＭ３、Ｖ－ｓｅｔ及び膜貫通ドメイン含有３、及びワシントン大学細胞接着分子（ＷＵＣＡＭ）が含まれる。ヒト対象が処置下にある一部の実施形態において、ＴＩＧＩＴ拮抗薬は、ヒトＴＩＧＩＴがヒトリガンドに結合するのを遮断する。成熟形態のヒトＴＩＧＩＴのアミノ酸配列は、ＮＣＢＩ遺伝子座番号ＮＰ＿７７６１６０に残基２２～２４４として掲載されている。
[0261] ＴＩＭ３は、Ｔ細胞免疫グロブリン及びムチンドメイン含有３タンパク質を指す。本開示の処置方法、医薬品、及び使用に好適なＴＩＭ３拮抗薬としては、リンパ球（Ｔ細胞、Ｂ細胞、又はＮＫ細胞）上に発現するＴＩＭ３が、抗原提示細胞上に発現するリガンド（ガレクチン－９ホスファチジルセリン）に結合するのを遮断する任意の化学的化合物又は生物学的分子が挙げられる。ＴＩＭ３の別称又は同義語には、ＣＤ３６６、ＨＡＶＣＲ２、Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体２、ＫＩＭ３、及びＳＰＴＣＬが含まれる。ヒト対象が処置下にある一部の実施形態において、ＴＩＭ３拮抗薬は、ヒトＴＩＭ３がヒトリガンドに結合するのを遮断する。成熟形態のヒトＴＩＭ３のアミノ酸配列は、ＮＣＢＩ遺伝子座番号ＮＰ＿１１６１７１に残基２２～３０１として掲載されている。
[0262] ＶＩＳＴＡは、Ｖ－ドメインＩｇ Ｔ細胞活性化サプレッサーを指す。本開示の処置方法、医薬品、及び使用に好適なＶＩＳＴＡ拮抗薬としては、リンパ球（Ｔ細胞、Ｂ細胞、及び／又はＮＫ細胞）上に発現するＶＩＳＴＡが、癌細胞又は抗原提示細胞上に発現するリガンドに結合するのを遮断する任意の化学的化合物又は生物学的分子が挙げられる。ＶＩＳＴＡの別称又は同義語には、ＶＳＩＲ、Ｖ－ｓｅｔ免疫調節受容体、ＰＤ－１Ｈ、Ｂ７Ｈ５、ＧＩ２４、ＰＰ２１３５、ＳＩＳＰ１、及びＤｉｅｓ１が含まれる。ヒト対象が処置下にある一部の実施形態において、ＶＩＳＴＡ拮抗薬は、ヒトＶＩＳＴＡがヒトリガンドに結合するのを遮断する。成熟形態のヒトＶＩＳＴＡのアミノ酸配列は、ＮＣＢＩ遺伝子座番号ＮＰ＿０７１４３６に残基３３～３１１として掲載されている。
[0263] 免疫チェックポイント阻害薬は、生物学的分子であってもよい。例えば、免疫チェックポイント阻害薬は、抗体又はその抗原結合断片を含み得る。抗体又は断片は、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）、例えば、ヒト抗体、ヒト化抗体、又はキメラ抗体であってもよく、ヒト定常領域を含み得る。一部の実施形態において、ヒト定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４定常領域からなる群から選択され、特定の実施形態では、ヒト定常領域はＩｇＧ１又はＩｇＧ４定常領域である。一部の実施形態において、抗体又は断片は二重特異性抗体である。一部の実施形態において、抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、及びＦｖ断片からなる群のうちの１つを含む。
[0264] 一部の実施形態において、少なくとも１つの抑制性チェックポイント分子は、ＰＤ－１を含む。一部の実施形態において、免疫チェックポイント阻害薬は、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、セミプリマブ、及びそのバイオシミラーからなる群から選択される。一実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、ペンブロリズマブ（Merck & Co.によりKEYTRUDA（登録商標）として市販されているＭＫ－３４７５）である。一実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、ニボルマブ（ＢＭＳ－９３６５５８又はＭＤＸ－１１０６、Bristol-Myers SquibbによりOPDIVO（登録商標）として市販されている）である。一実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、セミプリマブ（ＲＥＧＮ２８１０、Regeneron）である。一部の実施形態において、免疫チェックポイント阻害薬は、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、又はセミプリマブの変異体である。
[0265] 一部の実施形態において、少なくとも１つの抑制性チェックポイント分子は、ＰＤ－Ｌ１を含む。一部の実施形態において、免疫チェックポイント阻害薬は、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、及びそのバイオシミラーからなる群から選択される。一実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、アテゾリズマブ（Genentech, Inc.によりTECENTRIQ（登録商標）として市販されている）である。一実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、アベルマブ（EMD Serono, Inc.及びPfizer, Inc.によりBAVENCIO（登録商標）として市販されている）である。一実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、デュルバルマブ（AstraZenecaによりIMFINZI（登録商標）として市販されているＭＥＤＩ４７３６）である。一部の実施形態において、免疫チェックポイント阻害薬は、アテゾリズマブ、アベルマブ、又はデュルバルマブの変異体である。
[0266] 一部の実施形態において、少なくとも１つの抑制性チェックポイント分子は、ＣＴＬＡ－４である。一部の実施形態において、免疫チェックポイント阻害薬は、イピリムマブ、トレメリムマブ、及びそのバイオシミラーからなる群から選択される。一実施形態において、抗ＣＴＬＡ４抗体は、イピリムマブ（ＭＤＸ－０１０又はＢＭＳ－７３４０１６、Bristol-Myers SquibbによりYERVOY（登録商標）として市販されている）である。一実施形態において、抗ＣＴＬＡ４抗体は、トレメリムマブ（AstraZenecaによって開発されたチシリムマブ、ＣＰ－６７５，２０６）である。一部の実施形態において、免疫チェックポイント阻害薬は、イピリムマブ、又はトレメリムマブの変異体である。
[0267] 一部の実施形態において、モノクローナル抗体は、軽鎖ＣＤＲの外側にある位置に３、２、又は１個の保存的アミノ酸置換を有し、及び／又は重鎖ＣＤＲの外側にある位置に６、５、４、３、２、又は１個の保存的アミノ酸置換を有することを除き（例えば、変異体位置は、フレームワーク領域又は定常領域に位置する）、「参照」抗体にあるものと同一の重鎖及び軽鎖配列を含む「変異体」抗体である。換言すれば、参照抗体と変異体抗体とは、同一のＣＤＲ配列を含むが、それぞれ、その完全長軽鎖及び重鎖配列中の３個以下又は６個以下の他の位置に保存的アミノ酸置換を有するため、互いに異なる。変異体抗体は、以下の特性：抑制性チェックポイント分子に対する結合親和性及び抑制性チェックポイント分子のそのリガンドへの結合を遮断する能力の点では参照抗体と実質的に同じである。
[0268] 他の実施形態において、免疫チェックポイント阻害薬は、免疫グロブリン分子のＦｃ領域などの定常領域に融合した、そのリガンドのうちの１つの抑制性チェックポイント分子結合ドメインを含むイムノアドヘシンを含み得る。
[0269] 本明細書で使用されるとき、用語「バイオシミラー」は、類似しているが、連邦医薬品局（Federal Drug Administration）（ＦＤＡ）が承認した先発製剤と安全性及び有効性の点で臨床的に有意味な違いのないバイオ製剤を指す。例えば、バイオシミラー製剤と先発製剤との間には、臨床的に不活性な成分の点で違い（例えば、製剤の賦形剤の違い、グリコシル化の僅かな違い等）があり得る。臨床的に有意味な特性は、薬物動態学的及び薬力学的研究を通じて判定することができる。一部の実施形態において、バイオシミラー製剤は、ＦＤＡが決定するとき互換性のある製剤である。
２．Ｃｂｌ－ｂ阻害薬と抗新生物剤とを含む併用治療
[0270] 本開示の併用治療法の一部の実施形態において、追加の治療剤は、抗新生物剤を含む。癌を処置するための本明細書における併用治療法の一部の実施形態において、追加の治療剤は、抗新生物剤を含む。本明細書で使用されるとき、用語「抗新生物剤（anti-neoplastic agent）」及び「抗新生物剤（antineoplastic agent）」は、世界保健機関（World Health Organization）によって開発された解剖治療化学分類法（Anatomical Therapeutic Chemical Classification System：ＡＴＣ）コードＬ０１に基づき分類される治療剤を指す。一部の実施形態において、抗新生物剤は、細胞傷害性抗生物質（ＡＴＣコードＬ０１Ｄ）、植物性アルカロイド（ＡＴＣコードＬ０１Ｃ）、代謝拮抗薬（ＡＴＣコードＬ０１Ｂ）、アルキル化剤（ＡＴＣコードＬ０１Ａ）、及び他の抗新生物剤（ＡＴＣコードＬ０１Ｘ）からなる群のうちの１つに分類される。一部の実施形態において、抗新生物剤は、生物学的分子とは対照的に、小分子薬物（例えば、癌化学治療剤）である。
[0271] 細胞傷害性抗生物質は、本開示の処置方法、医薬品及び使用に好適な抗新生物剤である。一部の実施形態において、細胞傷害性抗生物質は、イクサベピロン、マイトマイシン、プリカマイシン、ブレオマイシン、ピクサントロン、アムルビシン、バルルビシン、ピラルビシン、ミトキサントロン、イダルビシン、ゾルビシン、アクラルビシン、エピルビシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、及びダクチノマイシンからなる群から選択される。
[0272] 植物性アルカロイドは、本開示の処置方法、医薬品、及び使用に好適な抗新生物剤である。一部の実施形態において、植物性アルカロイドは、トラベクテジン、カバジタキセル、パクリタキセルポリグルメックス、ドセタキセル、パクリタキセル、デメコルシン、テニポシド、エトポシド、ビンタフォリド、ビンフルニン、ビノレルビン、ビンデシン、ビンクリスチン、及びビンブラスチンからなる群から選択される。
[0273] 代謝拮抗薬は、本開示の処置方法、医薬品、及び使用に好適な抗新生物剤である。一部の実施形態において、代謝拮抗薬は、ピリミジン類似体、プリン類似体、又は葉酸類似体である。一部の実施形態において、代謝拮抗薬は、フロクスウリジン、トリフルリジン、テガフール、フルオロウラシル、デシタビン、アザシチジン、カペシタビン、ゲムシタビン、カルモフール、テガフール、フルオロウラシル、シタラビン、ネララビン、クロファラビン、フルダラビン、クラドリビン、チオグアニン、メルカプトプリン、プララトレキサート、ペメトレキセド、ラルチトレキセド、及びメトトレキサートからなる群から選択される。
[0274] アルキル化剤は、本開示の処置方法、医薬品、及び使用に好適な抗新生物剤である。一部の実施形態において、アルキル化剤は、ダカルバジン、テモゾロミド、ピポブロマン、ミトブロニトール、エトグルシド、ウラシルマスタード、ラニムスチン、ニムスチン、フォテムスチン、ストレプトゾシン、セムスチン、ロムスチン、カルムスチン、カルボコン、トリアジコン、チオテパ、マンノスルファン、トレオスルファン、ブスルファン、ベンダムスチン、プレドニムスチン、トロホスファミド、イホスファミド、メクロレタミン、メルファラン、クロラムブシル、及びシクロホスファミドからなる群から選択される。
[0275] 他の実施形態において、抗新生物剤は、白金化合物（ＡＴＣコードＬ０１ＸＡ）、メチルヒドラジン（ＡＴＣコードＬ０１ＸＢ）、増感剤（ＡＴＣコードＬ０１ＸＤ）、プロテインキナーゼ阻害薬（ＡＴＣコードＬ０１ＸＥ）、及び他の薬剤（ＡＴＣコードＬ０１ＸＡ）からなる群から選択される他の抗新生物剤を含む。
[0276] 白金化合物は、本開示の処置方法、医薬品、及び使用に好適な抗新生物剤である。一部の実施形態において、白金化合物は、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、サトラプラチン、及びポリプラチレンからなる群から選択される。
３．Ｃｂｌ－ｂ阻害薬と放射線治療とを含む併用治療
[0277] 本開示は、癌を処置する方法であって、癌を有する個体に有効量のＣｂｌ－ｂ阻害薬を投与すること、及び個体に有効量の放射線治療を投与することを含む方法を提供する。また、癌を有する個体を処置する方法であって、個体に有効量のＣｂｌ－ｂを投与すること、及び個体に有効量の放射線治療を投与することを含む方法も提供される。加えて、本開示は、抗癌免疫応答を増加させる方法であって、癌を有する個体に有効量のＣｂｌ－ｂ阻害薬を投与すること、及び個体に有効量の放射線治療を投与することを含む方法を提供する。更に、癌を処置する方法であって、癌を有する個体に有効量のＣｂｌ－ｂ阻害薬を投与することを含む方法が提供され、ここで個体は、有効量の放射線治療の投与を受けたことがあるか、又は受けているところである。
[0278] 一部の実施形態において、放射線治療は、外部ビーム放射線治療である。他の実施形態において、放射線治療は、内部放射線治療である。一部の実施形態において、放射線治療は、アブレーション放射線治療である。
[0279] 一部の実施形態において、本開示の併用治療レジメンは、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬、放射線治療、及び免疫チェックポイント阻害薬と抗新生物剤との一方又は両方の投与を含む。
[0280] 本明細書には、癌の処置方法であって、癌を有する個体に、有効量のＣｂｌ－ｂ阻害薬と、有効量の癌ワクチンとを含む併用治療を投与することを含む方法が提供される。また、癌を処置するための癌ワクチンと組み合わせた使用のためのＣｂｌ－ｂ阻害薬を含む医薬品、及び癌の処置における使用のためのＣｂｌ－ｂ阻害薬と癌ワクチンとの両方を含む医薬品も提供される。更に、癌ワクチンと組み合わせて投与されるとき個体の癌を処置するための医薬品の製造におけるＣｂｌ－ｂ阻害薬の使用が提供される。更に、癌を処置するための１つ又は複数の医薬品の製造におけるＣｂｌ－ｂ阻害薬及び癌ワクチンの使用が提供される。一部の実施形態において、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬は「小分子」である。
[0281] また、本明細書には、癌の処置方法であって、癌を有する個体に、有効量のＣｂｌ－ｂ阻害薬と、有効量の腫瘍溶解性ウイルスとを含む併用治療を投与することを含む方法も提供される。また、癌を処置するための腫瘍溶解性ウイルスと組み合わせた使用のためのＣｂｌ－ｂ阻害薬を含む医薬品、及び癌の処置における使用のためのＣｂｌ－ｂ阻害薬と腫瘍溶解性ウイルスとの両方を含む医薬品も提供される。更に、腫瘍溶解性ウイルスと組み合わせて投与されるとき個体の癌を処置するための医薬品の製造におけるＣｂｌ－ｂ阻害薬の使用が提供される。更に、癌を処置するための１つ又は複数の医薬品の製造におけるＣｂｌ－ｂ阻害薬及び腫瘍溶解性ウイルスの使用が提供される。一部の実施形態において、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬は「小分子」である。
[0282] 本開示の処置方法、医薬品及び使用の一部の実施形態において、癌は、リンパ腫、白血病又は骨髄腫などの血液癌である。本開示の処置方法、医薬品及び使用の他の実施形態において、癌は、肉腫、癌腫、又は黒色腫などの非血液癌である。
[0283] 血液癌としては、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）などの１つ以上の白血病；限定はされないが、慢性骨髄球性白血病（ＣＭＬ）及び慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）を含めた１つ以上の慢性白血病；限定はされないが、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、小細胞型又は大細胞型濾胞性リンパ腫、悪性リンパ球増殖性病態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁層リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄形成異常及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞新生物、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、及び骨髄性血球細胞の無効な産生（又は異形成）によってまとめられる一群の多様な血液学的病態である「前白血病」を含めた更なる血液癌又は血液学的病態が挙げられるがこれらに限定されない。
[0284] 非血液癌としては、神経芽細胞腫、腎細胞癌、結腸癌、結腸直腸癌、乳癌、扁平上皮癌、黒色腫、胃癌、脳癌、肺癌（例えば、ＮＳＣＬＣ）、膵癌、子宮頸癌、卵巣癌、肝癌、膀胱癌、前立腺癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、副腎癌、及び頭頸部癌が挙げられるがこれらに限定されない。
[0285] 一部の態様において、癌の処置におけるＣｂｌ－ｂ阻害薬などの活性化閾値低減物質又は共刺激要件低減物質の投与の有効性は、腫瘍サイズ又は腫瘍数の減少、及び／又は生存率など、臨床的アウトカムを判定することによって測定される。一部の実施形態において、「癌を処置すること」は、記載されるとおりの固形癌効果判定基準（Response Evaluation Criteria in Solid Tumors：ＲＥＣＩＳＴ第１．１版）に基づき処置レジメンに対する患者の奏効を判定することを含む（例えば、Eisenhauer et al., Eur J Cancer, 45:228-247, 2009；及びNishino et al., Am J Roentgenol, 195: 281-289, 2010を参照されたい）。ＲＥＣＩＳＴ １．１に従い客観的抗腫瘍応答を決定する奏効判定基準には、完全奏効（ＣＲ）；部分奏効（ＰＲ）；病勢進行（ＰＤ）；及び病勢安定（ＳＤ）が含まれる。
[0286] また、本明細書には、癌の処置方法であって、癌を有する個体に、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、及び／又はＮＫ細胞）の活性化閾値を低下させる有効量の薬剤（活性化閾値低減物質）と、有効量の癌ワクチンとを含む併用治療を投与することを含む方法も提供される。また、癌を処置するための癌ワクチンと組み合わせた使用のための活性化閾値低減物質を含む医薬品、及び癌の処置における使用のための活性化閾値低減物質と癌ワクチンとの両方を含む医薬品も提供される。更に、癌ワクチンと組み合わせて投与されるとき個体の癌を処置するための医薬品の製造における活性化閾値低減物質の使用が提供される。更に、癌を処置するための１つ又は複数の医薬品の製造における活性化閾値低減物質及び癌ワクチンの使用が提供される。
[0287] また、本明細書には、癌の処置方法であって、癌を有する個体に、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、及び／又はＮＫ細胞）の活性化閾値を低下させる有効量の薬剤（活性化閾値低減物質）と、有効量の腫瘍溶解性ウイルスとを含む併用治療を投与することを含む方法も提供される。また、癌を処置するための腫瘍溶解性ウイルスと組み合わせた使用のための活性化閾値低減物質を含む医薬品、及び癌の処置における使用のための活性化閾値低減物質と腫瘍溶解性ウイルスとの両方を含む医薬品も提供される。更に、腫瘍溶解性ウイルスと組み合わせて投与されるとき個体の癌を処置するための医薬品の製造における活性化閾値低減物質の使用が提供される。更に、癌を処置するための１つ又は複数の医薬品の製造における活性化閾値低減物質及び腫瘍溶解性ウイルスの使用が提供される。
[0288] 一部の実施形態において、活性化閾値を低下させる薬剤（活性化閾値低減物質）は、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、及び／又はＮＫ細胞）の共刺激要件を低減する薬剤（共刺激要件低減物質）である。一部の実施形態において、活性化閾値を低下させる薬剤（活性化閾値低減物質）は、腫瘍免疫監視を促進する薬剤である。一部の実施形態において、活性化閾値を低下させる薬剤（活性化閾値低減物質）は、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬である。一部の実施形態において、共刺激要件を低減する薬剤は、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬である。一部の実施形態において、腫瘍免疫監視を促進する薬剤は、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬である。
[0289] 一部の実施形態において、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬などの活性化閾値低減物質は、Ｔ細胞活性化及び／又はＴ細胞増殖を増加させる能力を有する。一部の実施形態において、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬などの活性化閾値低減物質は、Ｔ細胞枯渇、Ｔ細胞寛容、及び／又はＴ細胞アネルギーを低下させる能力を有する。
[0290] 一部の実施形態において、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬などの活性化閾値低減物質は、Ｔ細胞又は活性化したＴ細胞微小環境にある周囲免疫細胞（例えば、骨髄系細胞）による１つ以上のサイトカインの産生を増加させる能力を有する。一部の実施形態において、１つ以上のサイトカインとしては、限定はされないが、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－１３、ＩＬ－１８、ＴＮＦα、及びＧＭ－ＣＳＦが挙げられる。一部の実施形態において、サイトカインは、ＩＬ－２、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦα、及びＧＭ－ＣＳＦのうちの１つ以上である。一部の実施形態において、サイトカインはケモカインである。一部の実施形態において、１つ以上のケモカインとしては、限定はされないが、ＩＰ－１０、エオタキシン、ＧＲＯα、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ－１α、ＭＩＰ－１β、ＭＩＰ－２、ＭＣＰ－１、及びＭＣＰ－３が挙げられる。サイトカインの発現の増加は、ＥＬＩＳＡによって測定することができる。
[0291] 一部の実施形態において、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬などの活性化閾値低減物質は、１つ以上のＴ細胞活性化マーカーの細胞表面発現を増加させる能力を有する。一部の実施形態において、１つ以上のＴ細胞活性化マーカーとしては、限定はされないが、ＣＤ２５、ＣＤ４４、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ６９、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ４）、ＣＤ１５４、ＣＤ１３７、及びＣＤ２７９が挙げられる。一部の実施形態において、Ｔ細胞活性化マーカーは、ＣＤ２５、ＣＤ６９、及びＣＴＬＡ４のうちの１つ以上である。細胞表面マーカーの発現の増加は、ＦＡＣＳによって測定することができる。
[0292] Ｔ細胞活性化の増加、Ｔ細胞増殖の増加、Ｔ細胞枯渇の低下、及び／又はＴ細胞寛容の低下を実験的に決定するための方法は、当該技術分野において周知である。一部の実施形態では、Ｔ細胞活性化を決定する代表的な方法について、本明細書に提供される生物学的実施例９及び／又は生物学的実施例１３を参照することができる。一部の実施形態では、Ｔ細胞活性化の増加、Ｔ細胞増殖の増加、Ｔ細胞枯渇の低下、及び／又はＴ細胞寛容の低下を決定する代表的なインビトロ及びインビボ方法について、生物学的実施例１０及び／又は生物学的実施例１４を参照することができる。
[0293] 一部の実施形態において、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬などの活性化閾値低減物質は、Ｂ細胞活性化を増加させる能力を有する。一部の実施形態において、Ｂ細胞活性化の増加は、１つ以上のＢ細胞活性化マーカーの細胞表面発現の増加を含む。一部の実施形態において、１つ以上のＢ細胞活性化マーカーとしては、限定はされないが、ＣＤ６９、ＣＤ８６、及びＭＨＣクラスＩＩ（例えば、ＨＬＡ－ＤＲ）が挙げられる。一部の実施形態において、Ｂ細胞活性化マーカーはＣＤ６９である。細胞表面マーカーの発現の増加は、ＦＡＣＳによって測定することができる。一部の実施形態において、Ｂ細胞活性化の増加は、ＥＲＫ、ＪＮＫ、及びＳｙｋによって媒介されるものなど、シグナル伝達経路にあるタンパク質の活性化の増加を含む。タンパク質の活性化の増加は、当該技術分野で利用可能な抗ホスホ抗体など、試薬を用いたタンパク質のリン酸化レベルの測定によって検出することができる。
[0294] 一部の実施形態において、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬などの活性化閾値低減物質は、ＮＫ細胞活性化を増加させる能力を有する。一部の実施形態において、ＮＫ細胞活性化の増加は、１つ以上のサイトカインの分泌を含む。一部の実施形態において、１つ以上のサイトカインとしては、限定はされないが、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦα、及びＭＩＰ－１βが挙げられる。サイトカインの発現の増加は、ＥＬＩＳＡによって測定することができる。一部の実施形態において、ＮＫ細胞活性化の増加は、１つ以上のＮＫ細胞活性化マーカーの細胞表面発現の増加を含む。一部の実施形態において、１つ以上のＮＫ細胞活性化マーカーとしては、限定はされないが、ＣＤ６９、及びＣＤ１０７ａが挙げられる。細胞表面マーカーの発現の増加は、ＦＡＣＳによって測定することができる。一部の実施形態において、ＮＫ細胞活性化の増加は、原発腫瘍細胞を含めた腫瘍細胞などの標的細胞、及びＫ５６２細胞株など、細胞株由来の腫瘍細胞の死滅の増加を含む。
[0295] Ｂ細胞活性化及びＮＫ細胞活性化の増加を実験的に決定するための方法は、当該技術分野において周知である。一部の実施形態では、Ｂ細胞活性化を決定する代表的な方法について、生物学的実施例１０及び／又は生物学的実施例１４を参照することができる。一部の実施形態では、ＮＫ細胞活性化を決定する代表的な方法について、生物学的実施例１０及び／又は生物学的実施例１４を参照することができる。
[0296] Ｔ細胞、Ｂ細胞、又はＮＫ細胞などの免疫細胞の活性の調節は、目的のパラメータ（例えば、サイトカイン分泌）のベースライン値を決定することにより測定し得る。例えば、細胞をＣｂｌ－ｂ阻害薬と接触させるインビトロ実験から入手された試料などでは、Ｔ細胞活性化は、前記Ｃｂｌ－ｂ阻害薬と接触させる前又はそれを投与する前に測定してベースライン値を決定することができる。次に前記Ｃｂｌ－ｂ阻害薬と接触させた後又はそれを投与した後のＴ細胞活性化について、参照値を入手する。参照値をベースライン値と比較すると、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬又はその組成物の接触又は投与に起因するＴ細胞活性化の量が決まる。例えば、一部の実施形態において、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）活性化は、ベースライン値と比較したとき試料中で少なくとも０．１倍だけ増加し、ここでベースライン値は、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）をＣｂｌ－ｂ阻害薬又はその組成物と接触させる前に入手される。一部の実施形態において、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）活性化は、ベースライン値の約０．１倍、約０．２倍、約０．３倍、約０．４倍、約０．５倍、約０．６倍、約０．７倍、約０．８倍、約０．９倍、約１倍、約２倍、約４倍、約６倍、約８倍、約１０倍、約２０倍、約３０倍以上約５０倍以下だけ増加する。免疫細胞活性化は、サイトカイン分泌の増加、活性化マーカー（例えば、細胞表面マーカー）の細胞表面発現の増加、又は下流シグナル伝達経路にあるタンパク質のリン酸化の増加など、活性化の生物学的マーカーを測定することにより判定し得る。試験下のパラメータ及び免疫細胞が処置された条件について、免疫細胞活性化の指標となるベースライン値に対する倍数を決定することができる。例えば、Ｔ細胞活性化の測定のため、抗ＣＤ２８抗体と組み合わせた抗ＣＤ３抗体で刺激したＴ細胞であって、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬とインキュベートされない細胞からベースライン値を入手することができる。次に、抗ＣＤ２８抗体と組み合わせた抗ＣＤ３抗体で刺激したＴ細胞であって、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬と接触した状態にあったか、又はその状態にあるＴ細胞から参照値を入手する。次に、入手された参照値により、免疫細胞活性化の陽性応答を決定することができる。同様の参照値測定値を入手してベースライン値と比較することにより、Ｔ細胞活性化、Ｔ細胞増殖、Ｔ細胞枯渇、Ｔ細胞寛容、Ｂ細胞活性化及び／又はＮＫ細胞活性化を判定することができる。これらのパラメータの測定値は、当該技術分野において周知の技法、並びに生物学的実施例９、１０、１３、及び１４に提供される技法を利用して入手することができる。
[0297] 用語「ベースライン」又は「ベースライン値」は、本明細書で使用されるとき、本明細書に開示されるとおりの治療剤（例えば、本明細書に記載されるとおりのＣｂｌ－ｂ阻害薬を含む組成物）の投与前又は治療剤の投与開始時における測定値又は特性を指し得る。ベースライン値を参照値と比較することにより、免疫細胞機能の増加又は減少（例えば、Ｔ細胞活性化を増加させること、Ｔ細胞増殖を増加させること、Ｔ細胞枯渇を低下させること、及び／又はＴ細胞寛容を低下させること）を決定し得る。用語「参照」又は「参照値」は、本明細書で使用されるとき、本明細書に開示されるとおりの治療剤（例えば、本明細書に記載されるとおりのＣｂｌ－ｂ阻害薬を含む組成物）の投与後における測定値又は特性を指し得る。参照値は、実験時間経過中、投薬量レジメン中、若しくは処置サイクル中に１回以上、又は実験時間経過、投薬量レジメン、若しくは処置サイクルの完了時に測定することができる。「参照値」は、絶対値、相対値、上限及び／又は下限のある値、値の範囲、算術平均値、中央値、平均値、又はベースライン値と比較したときの値であってもよい。同様に、「ベースライン値」は、絶対値、相対値、上限及び／又は下限のある値、値の範囲、算術平均値、中央値、平均値、又は参照値と比較したときの値であってもよい。参照値及び／又はベースライン値は、１つの試料（例えば、ある個体から入手された１つの試料）、２つの異なる試料（例えば、異なる２個体から入手された試料）又は一群の試料（例えば、２、３、４、５個体又はそれ以上の群から入手された試料）から入手することができる。
[0298] 一部の実施形態において、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬の存在下で抗ＣＤ２８抗体と組み合わせた抗ＣＤ３抗体で刺激したＴ細胞によるサイトカイン分泌（例えば、ＩＬ－２分泌）によって測定したときのＴ細胞活性化に関する陽性応答は、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬の非存在下で抗ＣＤ２８抗体と組み合わせた抗ＣＤ３抗体で刺激したＴ細胞から入手されたサイトカイン分泌（例えば、ＩＬ－２分泌）についてのベースライン値の少なくとも２．５倍である。一部の実施形態において、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬の存在下で抗ＣＤ２８抗体と組み合わせた抗ＣＤ３抗体で刺激したＴ細胞による表面マーカー発現（例えば、ＣＤ２５表面マーカー染色）によって測定したときのＴ細胞活性化に関する陽性応答は、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬の非存在下で抗ＣＤ２８抗体と組み合わせた抗ＣＤ３抗体で刺激したＴ細胞から入手された表面マーカー発現（例えば、ＣＤ２５表面マーカー染色）についてのベースライン値の少なくとも１．３倍である。一部の実施形態において、ベースライン値は、抗ＣＤ３抗体単独で刺激したＴ細胞であって、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬とインキュベートされない細胞から入手することができる。一部の実施形態において、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬の存在下で抗ＣＤ３抗体単独で刺激したＴ細胞によるサイトカイン分泌（例えば、ＩＬ－２分泌）によって測定したときのＴ細胞活性化に関する陽性応答は、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬の非存在下で抗ＣＤ３抗体単独で刺激したＴ細胞から入手されたサイトカイン分泌（例えば、ＩＬ－２分泌）についてのベースライン値の少なくとも０．１倍である。一部の実施形態において、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬の存在下で抗ＣＤ３抗体単独で刺激したＴ細胞による表面マーカー発現（例えば、ＣＤ２５表面マーカー染色）によって測定したときのＴ細胞活性化に関する陽性応答は、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬の非存在下で抗ＣＤ３抗体単独で刺激したＴ細胞から入手された表面マーカー発現（例えば、ＣＤ２５表面マーカー染色）についてのベースライン値の少なくとも０．６倍である。
[0299] 本開示は、癌を処置する方法であって、癌を有する個体に有効量のＣｂｌ－ｂ阻害薬を投与すること、及び個体に有効量の癌ワクチンを投与することを含む方法を提供する。また、癌を有する個体を処置する方法であって、個体に有効量のＣｂｌ－ｂ阻害薬を投与すること；及び個体に有効量の癌ワクチンを投与することを含む方法も提供される。加えて、本開示は、抗癌免疫応答を増加させる方法であって、癌を有する個体に有効量のＣｂｌ－ｂ阻害薬を投与すること、及び個体に有効量の癌ワクチンを投与することを含む方法を提供する。更に、癌を処置する方法であって、癌を有する個体に有効量のＣｂｌ－ｂ阻害薬を投与することを含む方法が提供され、ここで個体は、有効量の癌ワクチンの投与を受けたことがあるか、又は受けているところである。
[0300] 加えて、本開示は、癌を処置する方法であって、癌を有する個体に有効量のＣｂｌ－ｂ阻害薬を投与すること、及び個体に有効量の腫瘍溶解性ウイルスを投与することを含む方法を提供する。また、癌を有する個体を処置する方法であって、個体に有効量のＣｂｌ－ｂ阻害薬を投与すること；及び個体に有効量の腫瘍溶解性ウイルスを投与することを含む方法も提供される。加えて、本開示は、抗癌免疫応答を増加させる方法であって、癌を有する個体に有効量のＣｂｌ－ｂ阻害薬を投与すること、及び個体に有効量の腫瘍溶解性ウイルスを投与することを含む方法を提供する。更に、癌を処置する方法であって、癌を有する個体に有効量のＣｂｌ－ｂ阻害薬を投与することを含む方法が提供され、ここで個体は、有効量の腫瘍溶解性ウイルスの投与を受けたことがあるか、又は受けているところである。
[0301] 前段落の方法の一部の実施形態において、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬と癌ワクチンとは、いずれの順序であれ連続的に投与される。特定の実施形態において、本明細書で使用されるとき、用語「連続的に」、「順次」、及び「逐次的に」は、癌ワクチン後のＣｂｌ－ｂ阻害薬の投与、又はＣｂｌ－ｂ阻害薬後の癌ワクチンの投与を指す。例えば、連続投与には、導入相（一次治療）の間の癌ワクチンの非存在下におけるＣｂｌ－ｂ阻害薬の投与と、それに続く癌ワクチンとＣｂｌ－ｂ阻害薬との両方の投与を含む導入後処置相が関わり得る。本方法は、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬の投与又は更なる用量の癌ワクチンの投与を含む維持相を更に含み得る。或いは、連続投与には、導入相（一次治療）の間のＣｂｌ－ｂ阻害薬の非存在下における癌ワクチンの投与と、それに続くＣｂｌ－ｂ阻害薬の投与を含む導入後処置相が関わり得る。本方法は、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬又は更なる用量の癌ワクチンの投与を含む維持相を更に含み得る。
[0302] 前段落の方法の一部の実施形態において、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬と腫瘍溶解性ウイルスとは、いずれの順序であれ連続的に投与される。特定の実施形態において、本明細書で使用されるとき、用語「連続的に」、「順次」、及び「逐次的に」は、腫瘍溶解性ウイルス後のＣｂｌ－ｂ阻害薬の投与、又はＣｂｌ－ｂ阻害薬後の腫瘍溶解性ウイルスの投与を指す。例えば、連続投与には、導入相（一次治療）の間の腫瘍溶解性ウイルスの非存在下におけるＣｂｌ－ｂ阻害薬の投与と、それに続く腫瘍溶解性ウイルスとＣｂｌ－ｂ阻害薬との両方の投与を含む導入後処置相が関わり得る。本方法は、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬の投与又は更なる用量の腫瘍溶解性ウイルスの投与を含む維持相を更に含み得る。或いは、連続投与には、導入相（一次治療）の間のＣｂｌ－ｂ阻害薬の非存在下における腫瘍溶解性ウイルスの投与と、それに続くＣｂｌ－ｂ阻害薬の投与を含む導入後処置相が関わり得る。本方法は、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬又は更なる用量の腫瘍溶解性ウイルスの投与を含む維持相を更に含み得る。
[0303] 併用治療法の一部の実施形態において、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬と癌ワクチンとは同時に投与される。特定の実施形態において、本明細書で使用されるとき、用語「同時に」、「同じ時点で」、及び「並行して」は、同じ来診の間又は同じ処置相の間におけるＣｂｌ－ｂ阻害薬と癌ワクチンとの投与を指す。例えば、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬及び癌ワクチンの両方が、導入相、処置相、及び維持相のうちの１つ以上の間に投与され得る。しかしながら、同時投与とは、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬と癌ワクチンとが単一の製剤又は医薬組成物中に一緒に存在すること、又はＣｂｌ－ｂ阻害薬と癌ワクチンとが正確に同じ時間に投与されることを要求するものではない。
[0304] 併用治療法の一部の実施形態において、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬と腫瘍溶解性ウイルスとは同時に投与される。特定の実施形態において、本明細書で使用されるとき、用語「同時に」、「同じ時点で」、及び「並行して」は、同じ来診の間又は同じ処置相の間におけるＣｂｌ－ｂ阻害薬と腫瘍溶解性ウイルスとの投与を指す。例えば、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬及び腫瘍溶解性ウイルスの両方が、導入相、処置相、及び維持相のうちの１つ以上の間に投与され得る。しかしながら、同時投与とは、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬と腫瘍溶解性ウイルスとが単一の製剤又は医薬組成物中に一緒に存在すること、又はＣｂｌ－ｂ阻害薬と腫瘍溶解性ウイルスとが正確に同じ時間に投与されることを要求するものではない。
[0305] 一部の態様において、処置は、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬又はその組成物の複数回の投与を含み、ここで投与間の間隔は様々であり得る。一部の実施形態において、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬は、個体に対して均一用量（例えば、ｍｇ／成人又はｍｇ／小児）で投与される。一部の実施形態において、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬は、個体の体重を基準とした一定用量（例えば、ｍｇ／ｋｇ）で個体に投与される。
[0306] 一部の実施形態において、本明細書に開示される併用治療の有効性は、処置下の個体から単離された試料中に存在する免疫細胞の生物学的活性を測定することによって判定し得る。例えば、細胞傷害性アッセイを用いた、処置後の個体から単離される免疫細胞が標的細胞を破壊する能力を用いて、処置の有効性を判定することができる。一部の実施形態において、試料中に存在する免疫細胞の生物学的活性は、ＩＬ－２及びＩＦＮγなど、特定のサイトカインの発現及び／又は分泌をアッセイすることにより測定し得る。
[0307] 用語「癌ワクチン」は、本明細書で使用されるとき、特に指定されない限り、癌を有する個体に癌の処置（及び任意選択で癌の再発の予防）を目的として投与されることになる「治療用癌ワクチン」を指す。対照的に、「予防用癌ワクチン」（予防法的癌ワクチン）は、癌を有しない個体に癌の予防又は個体の癌発症リスクの低減を目的として投与されることになる。予防用癌ワクチンの例は、扁平上皮癌の予防用のヒトパピローマウイルスワクチン及び肝細胞癌の予防用のＢ型肝炎ウイルスワクチンである。癌ワクチンは、薬学的に許容可能な賦形剤、及び腫瘍特異抗原又は腫瘍関連抗原などの少なくとも１つの腫瘍抗原を含む免疫原性組成物である。
[0308] 本明細書で使用されるとき、用語「腫瘍溶解性ウイルス」及び「ＯＶ」は、癌細胞に感染して、それを死滅させるウイルスを指す。癌細胞死は、直接的な細胞溶解と、抗腫瘍免疫の誘導との両方の結果である。一部の実施形態において、「腫瘍溶解性ウイルス」は複製コンピテントウイルスであり、これは癌細胞で選択的に複製するものである。他の実施形態において、「腫瘍溶解性ウイルス」は複製欠損ウイルスであり、これは腫瘍溶解性ウイルスの遺伝子操作又は不活性化（例えば、紫外線照射又は加熱）のいずれかの結果として癌細胞で複製しないものである。
[0309] 一部の実施形態において、腫瘍抗原は、同じタイプの多くの癌に共通する「共通腫瘍抗原」を含む。共通腫瘍抗原の非限定的な例は、乳癌抗原ＨＥＲ２、前立腺癌抗原ＰＡＰ及びＰＳＡ、及び黒色腫抗原ＭＡＲＴ－１及びＭＡＧＥである。他の実施形態において、腫瘍抗原は、腫瘍特異的ＤＮＡ改変（例えば、体細胞突然変異）の結果として生じる「ネオ抗原」を含む。このように、ネオ抗原は、典型的には、正常な哺乳類ゲノムに存在しないアミノ酸配列を有する（Schumacher and Schreiber, Science, 348: 69-74, 2015）。ネオ抗原の非限定的な例は、ＢＲＡＦ Ｖ６００Ｅ、ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ、ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｖ、ＰＩＫ３ＣＡ Ｈ１０４７Ｒ、及びＰＩＣ３ＣＡ Ｅ５４５Ｋである。現在、腫瘍特異的ネオ抗原データベース（ＴＳＮＡｄｂ）が無料公開されている（Wu et al., Genomics Proteomics Bioinformatics 16: 276-282, 2018）。
[0310] Ｃｂｌ－ｂ阻害薬などの活性化閾値低減物質を含む併用治療の一部としての癌ワクチンに含めるためのネオ抗原の同定には、種々の技法が好適である。例えば、ネオ抗原は、個体から入手された腫瘍生検からのＤＮＡの単離、ＤＮＡのシーケンシング、及び配列のコンピューター分析により１つ以上のネオ抗原を同定することを含む方法で同定することができる（Aldous and Dong, Bioorg Med Chem, 26: 2842-2849, 2018）。一部の実施形態において、コンピューター分析には、腫瘍の細胞が発現する少なくとも１つのＨＬＡアレルに結合すると予想される８～１１アミノ酸長のペプチドであって、少なくとも１つのミスセンス突然変異を含むペプチドを同定することが関わる（Wu et al., Genomics Proteomics Bioinformatics 16: 276-282, 2018）。癌ワクチンにネオ抗原を含めると、寛容の克服及び自己免疫リスクの低減に有利になるものと思われる。
[0311] 本開示の方法、医薬品、及び使用における使用に好適な癌ワクチンプラットフォームとしては、限定はされないが、合成ペプチド、組換えタンパク質、核酸（ＤＮＡ又はｍＲＮＡ）、微生物ベクター、腫瘍細胞、及び抗原提示細胞が挙げられる（例えば、DeMaria and Bilusic, Hematol Oncol Cin North Am, 33: 199-214, 2019；及びMaeng and Berzofsky, F1000Research 2019, 8(F1000 Faculty Rev): 654, 2019を参照されたい）。
[0312] 一部の実施形態において、癌ワクチンの腫瘍抗原は、少なくとも１つの合成ペプチド又は組換えタンパク質を含む。一部の実施形態において、合成ペプチドは少なくとも８アミノ酸長であり、特定の実施形態では、８０アミノ酸長未満である。一部の実施形態において、腫瘍抗原は複数の合成ペプチドを含み、又は腫瘍抗原は、２、３個、又はそれ以上のエピトープのアミノ酸配列を含む合成ペプチド又は組換えタンパク質を含む。「エピトープ」は、抗原の中で抗体又はＢ細胞受容体が結合する一部分であるか、又は腫瘍細胞又は樹状細胞などの細胞の表面上にある主要組織適合遺伝子複合体分子（ＭＨＣクラスＩ又はクラスＩＩ）によってＴ細胞受容体の結合のため提示される一部分である。一部の実施形態において、エピトープは、腫瘍抗原配列の隣接するアミノ酸で構成される「線状エピトープ」である（一次構造）。一部の実施形態において、エピトープは、腫瘍抗原の非隣接アミノ酸で構成される「立体エピトープ」である（三次構造）。一部の実施形態において、腫瘍抗原は、１つ又は複数の線状エピトープと１つ又は複数の立体エピトープとの両方を含む組換えタンパク質を含む。
[0313] 一部の実施形態において、腫瘍抗原は、ＤＮＡ又はｍＲＮＡ分子によってコードされる。一部の実施形態において、腫瘍抗原は、微生物ベクターの核酸によってコードされ、又は別の言い方をすれば、癌ワクチンは微生物ベクターを含む。一部の実施形態において、微生物ベクターは、生菌弱毒化微生物ベクターである。一実施形態において、生菌弱毒化微生物ベクターは、Organon USA, Inc.（Roseland, NJ）によって市販されているTICE（登録商標）ＢＣＧ、ウシ型結核菌（Mycobacterium bovis）のカルメット・ゲラン桿菌（ＢＣＧ）株の生菌培養製剤である。TICE（登録商標）ＢＣＧは、連邦医薬品局（Federal Drug Administration）（ＦＤＡ）によって滅菌生理食塩水（例えば、薬学的に許容可能な賦形剤）で再構成時に膀胱内使用が承認されており、膀胱上皮内癌の処置及び予防、並びに経尿道的切除術後の原発期又は再発期Ｔａ及び／又はＴ１乳頭腫瘍の予防に適応されている。
[0314] 一部の実施形態において、微生物ベクターは、組換えウイルスベクター又は組換え細菌ベクターなど、組換え微生物ベクターである。本開示の併用治療における使用に好適な組換えウイルスベクターとしては、限定はされないが、レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ポックスウイルス、及びヘルペスウイルスが挙げられる（Chulpanova et al., Biomedicines, 6: 94, 2018）。一部の実施形態において、微生物ベクターは、組換え細菌ベクターである。本開示の併用治療における使用に好適な組換え細菌ベクターとしては、限定はされないが、クロストリジウム属（Clostridium）（ノービイ菌（C. novyi））、リステリア属（Listeria）（例えば、リステリア菌（L. monocytogenes））、シュードモナス属（Pseudomonas）（例えば、緑膿菌（P. aeruginosa））、及びサルモネラ属（Salmonella）（ネズミチフス菌（S. typhimurium））が挙げられる（Toussant et al., Expert Rev Vaccines, 12: 1139-1154, 2013）。
[0315] 一部の実施形態において、癌ワクチンは、合成ペプチド又は組換えタンパク質などの腫瘍抗原と接触した抗原提示細胞（ＡＰＣ）を含む。一部の実施形態において、ＡＰＣには、腫瘍抗原をコードする核酸がトランスフェクトされる。一部の実施形態において、ＡＰＣには、サイトカインをコードする核酸がトランスフェクトされる。一部の実施形態において、ＡＰＣは、樹状細胞又は間葉系幹細胞を含む。一実施形態において、癌ワクチンは、Dendreon Corp.（Seattle, WA）によって市販されているPROVENGE（登録商標）（シプロイセルＴ）である。PROVENGE（登録商標）は、乳酸加リンゲル液（例えば、薬学的に許容可能な賦形剤）と、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子に連結された前立腺酸性ホスファターゼからなるＰＡＰ－ＧＭ－ＣＳＦ融合タンパク質で活性化された末梢血単核球（ＰＢＭＣ）とを含む。PROVENGE（登録商標）は、連邦医薬品局（Federal Drug Administration）（ＦＤＡ）によって無症候性又は最小限の症候性の転移性前立腺癌の処置用に静脈内注入が承認されている。
[0316] 一部の実施形態において、癌ワクチンは、死滅腫瘍細胞を含む。一部の実施形態において、癌ワクチンは、腫瘍細胞ライセートを含む。一部の実施形態において、癌ワクチンは、腫瘍細胞ライセートと接触させたＡＰＣを含む。
[0317] 本開示の方法、医薬品及び使用における使用に好適な癌ワクチンのアジュバントとしては、限定はされないが、ＦＤＡ承認済み認可製剤のアジュバントが挙げられる。詳細には、現行のＦＤＡ承認済み認可製剤のアジュバントは、アルミニウム塩、モノホスホリルリピドＡ、水中油型エマルション（例えば、水中スクアレン型エマルションＭＦ５９又はＡＳ０３）、サポニン、及びＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチドを含む。
[0318] 本開示の方法、医薬品、及び使用における使用に好適な腫瘍溶解性ウイルスとしては、限定はされないが、アデノウイルス、コクサッキーウイルス、エコーウイルス、鶏痘ウイルス、単純ヘルペスウイルス、マラバウイルス、麻疹ウイルス、粘液腫ウイルス、ニューカッスル病ウイルス、パルボウイルス、ポリオウイルス、レトロウイルス、レオウイルス、セネカバレーウイルス、セムリキ森林（Semiliki Forest）ウイルス、ワクシニアウイルス、及び水疱性口内炎ウイルスが挙げられる（例えば、Russell and Peng, Chin Clin Oncol, 7: 16, 2018；及びSivanandam et al., Molecular Therapy Oncolytics, 13: 93-106を参照されたい）。
[0319] 一部の実施形態において、腫瘍溶解性ウイルスは、遺伝子操作されていない（非組換えウイルス）。一部の実施形態において、非組換えウイルスは、エコーウイルス（例えば、Rigvir）、ニューカッスル病ウイルス、パルボウイルス、レオウイルス、又はセネカバレーウイルスである。
[0320] 一部の実施形態において、腫瘍溶解性ウイルスは、１つ以上の遺伝子欠失、１つ以上の遺伝子挿入、又は１つ以上の遺伝子欠失及び１つ以上の遺伝子挿入を含むように遺伝子操作された組換えウイルスである。一部の実施形態において、組換えウイルスは、宿主細胞の特異性及び／又は腫瘍細胞の細胞傷害性を改変するように遺伝子操作されている。一部の実施形態において、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、宿主細胞の応答（例えば、抗ウイルス応答）を抑制するタンパク質をコードする１つ以上のウイルス遺伝子の機能的欠失、及び／又は宿主細胞の応答（例えば、抗腫瘍応答）を促進するタンパク質をコードする１つ以上のトランス遺伝子の挿入によって遺伝子操作されている（例えば、Guo et al., Frontiers in Immunology, 8: Article 555, 2017；及びLin et al., Oncology Letters, 15: 4053-4060, 2018を参照されたい）。一部の実施形態において、組換えウイルスは、蛍光タンパク質などの検出可能なマーカーをコードするトランス遺伝子の挿入によって更に操作される。望ましい抗腫瘍応答には、自然免疫応答及び適応免疫応答の一方又は両方が含まれる。
[0321] 一部の実施形態において、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、組換え型の単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、例えばＨＳＶ １型などである。一実施形態において、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、タリモジーン・ラハーパレプベック又はＴ－ＶＥＣとしても知られる、Amgen Inc.（Thousand Oaks, CA）によって市販されているIMLYGIC（登録商標）である。IMLYGIC（登録商標）は、ＩＣＰ３４．５及びＩＣＰ４７遺伝子の機能的欠失、並びにヒト顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）をコードする核酸の挿入を含む組換えＨＳＶ－１である。IMLYGIC（登録商標）は、連邦医薬品局（Federal Drug Administration）（ＦＤＡ）によって再発性黒色腫患者の切除不能な皮膚、皮下、及び結節性病変の病巣内注射（腫瘍内投与）による局所処置に承認されている。加えて、IMLYGIC（登録商標）は、欧州医薬品庁（European Medicines Agency）（ＥＭＡ）によって、限局転移性又は遠隔転移性（ステージＩＩＩＢ、ＩＩＩＣ又はＩＶＭ１ａ）の切除不能黒色腫を有する成人の処置に承認されている。詳細には、ＥＭＡ承認済み製剤は、可視の、触知可能な又は超音波誘導によって検出可能な皮膚、皮下、及び／又は結節性病変部への病巣内注射（腫瘍内投与）によって投与されることになる。
[0322] 一部の実施形態において、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、組換え型のアデノウイルス、例えば血清型５型アデノウイルスなどである。一実施形態において、組換えアデノウイルスは、Oncorine（Ｈ１０１）、旧称Onyx-015である。Oncorineは、ウイルスＥ１Ｂ－５５ｋ及びウイルスＥ３遺伝子の不活性化（機能的欠失）によって操作された血清型５型アデノウイルスである。Oncorineは、中華人民共和国国家食品薬品監督管理局（Chinese State Food and Drug Administration）によって化学治療（抗新生物剤治療）と組み合わせた頭頸部癌の処置に承認されている。
[0323] 一部の実施形態において、組換え腫瘍溶解性ウイルスは、組換えポックスウイルスである。一部の実施形態において、ポックスウイルスは、ワクシニアウイルス又は鶏痘ウイルスである。一部の実施形態において、ワクシニアウイルスは、改変ワクシニアアンカラである。一部の実施形態において、組換えワクシニアウイルスは、宿主細胞の応答（例えば、抗ウイルス応答）を抑制するタンパク質をコードする１つ以上のウイルス遺伝子の機能的欠失、及び／又は宿主細胞の応答（例えば、抗腫瘍応答）を促進するタンパク質をコードする１つ以上のトランス遺伝子の挿入によって遺伝子操作されている（例えば、Guo et al., Journal of ImmunoTherapy of Cancer, 7: 6, 2019を参照されたい）。一実施形態において、組換えワクシニアウイルスは、ペクサスチモジェン・デバシレプベック（pexastimogene devacirepvec）及びＪＸ－５９４としても知られるＰｅｘａ－Ｖｅｃであり、これは、ウイルスチミジンキナーゼ遺伝子の不活性化（機能的欠失）、及びヒトＧＭ－ＣＳＦ及びβ－ガラクトシダーゼをコードするトランス遺伝子の挿入によって操作されたワクシニアウイルスである（Heo et al., Nat Med, 19: 329-336, 2013）。別の実施形態において、組換えワクシニアウイルスは、ウイルスチミジンキナーゼ及びワクシニア成長因子遺伝子の機能的欠失、並びにケモカインＣＸＣＬ１１をコードするトランス遺伝子の挿入を含む（例えば、Liu et al., OncoImmunology, 5: 3, e1091554, 2016；及びLiu et al., Nature Communications, 8: 14754, 2017を参照されたい）。
[0324] 本開示の併用治療の更なる実施形態は、少なくとも１つの追加の治療剤を含む。一部の実施形態において、少なくとも１つの追加の治療剤は、免疫チェックポイント阻害薬、化学治療（抗新生物剤）、放射線治療、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。
[0325] 一部の実施形態において、免疫チェックポイント阻害薬は、少なくとも１つの抑制性免疫チェックポイント分子の拮抗薬である。一部の実施形態において、少なくとも１つの抑制性免疫チェックポイント分子は、ＰＤ－１（ＣＤ２７９）、ＰＤ－Ｌ１（ＣＤ２７４）、及びＣＴＬＡ４（ＣＤ１５２）からなる群から選択される。免疫チェックポイント阻害薬は、治療用生物学的製剤であり得る。例えば、免疫チェックポイント阻害薬は、抗体又はその抗原結合断片を含み得る。抗体又は断片は、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）、ヒト抗体、ヒト化抗体、又はキメラ抗体であってもよく、ヒト定常領域を含み得る。一部の実施形態において、ヒト定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４定常領域からなる群から選択され、特定の実施形態では、ヒト定常領域は、ＩｇＧ１又はＩｇＧ４定常領域である。一部の実施形態において、抗体又は断片は二重特異性抗体である。一部の実施形態において、抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、及びＦｖ断片からなる群のうちの１つを含む。
[0326] 一部の実施形態において、化学治療は、少なくとも１つの抗新生物剤（即ち、ＷＨＯ ＡＴＣコードＬ０１）を含む。一部の実施形態において、少なくとも１つの抗新生物剤は、細胞傷害性抗生物質、植物性アルカロイド、代謝拮抗薬、及びアルキル化剤、他の抗新生物剤、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。化学治療に関連して使用されるとき、抗新生物剤は、「治療用生物学的製剤」とは対照的に、「薬物」である。
[0327] 一部の実施形態において、放射線治療は、外部ビーム放射線治療である。他の実施形態において、放射線治療は、内部放射線治療である。一部の実施形態において、放射線治療は、アブレーション放射線治療である。
[0328] 本明細書で使用されるとき、用語「バイオシミラー」は、類似しているが、連邦医薬品局（Federal Drug Administration）（ＦＤＡ）が承認した先発製剤と安全性及び有効性の点で臨床的に有意味な違いのないバイオ製剤を指す。例えば、バイオシミラー製剤と先発製剤との間には、臨床的に不活性な成分の点で違い（例えば、製剤の賦形剤の違い、グリコシル化の僅かな違い等）があり得る。臨床的に有意味な特性は、薬物動態学的及び薬力学的研究を通じて判定することができる。一部の実施形態において、バイオシミラー製剤は、ＦＤＡが決定するとき互換性のある製剤である。一部の実施形態において、癌ワクチンは、ＦＤＡ承認済み製剤のバイオシミラーである。
ＩＶ．組成物、製剤及び投与経路
[0329] 本開示には、本明細書に開示される化合物のいずれか、又はその塩、又はその溶媒和物の医薬組成物が包含される。従って、本開示は、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬であって、式（Ｉ）、（Ｉ－ａ）、（Ｉ－Ａ）～（Ｉ－Ｊ）、（ＩＩ－Ａ）～（ＩＩ－Ｈ）、（ＩＩ－Ａ－１）～（ＩＩ－Ｈ－１）、（ＩＩＩ－Ａ）～（ＩＩＩ－Ｈ）、（ＩＩＩ－Ａ－１）～（ＩＩＩ－Ｈ－１）、（ＩＶ－Ａ）～（ＩＶ－Ｊ）、又は（ＩＶ－Ｃ－１）～（ＩＶ－Ｊ－１）の化合物、又は本明細書に開示されるその任意の変形例、又はその薬学的に許容可能な塩若しくは溶媒和物、又はその互変異性体、又はその立体異性体若しくは立体異性体の混合物であるＣｂｌ－Ｂ阻害薬と、薬学的に許容可能な媒体又は薬学的に許容可能な担体など、薬学的に許容可能な賦形剤とを含む医薬組成物を含む。一部の実施形態において、本化合物は、表１の化合物番号１～５８から選択される化合物、又はその薬学的に許容可能な塩若しくは溶媒和物、又はその互変異性体、又はその立体異性体若しくは立体異性体の混合物である。一態様において、薬学的に許容可能な塩は、無機酸又は有機酸と形成される塩など、酸付加塩である。
[0330] 本明細書に開示される化合物及び組成物は、疾患又は障害の処置に十分なレベルの化合物を提供するであろう任意の好適な形態及び任意の好適な経路によって投与されてもよい。一部の実施形態において、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬及び／又は追加の治療剤は、経腸投与によって投与される。一部の実施形態において、経腸投与は経口投与である。他の実施形態において、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬及び／又は追加の治療剤は、非経口投与によって投与される。一部の実施形態において、非経口投与は腫瘍内注射である。一部の実施形態において、非経口投与は、静脈内、腹腔内、及び皮下からなる群から選択される経路によるものである。
[0331] 好適な投与経路としては、経口投与、経腸投与、非経口投与であって、皮下注射、静脈内注射、動脈内注射、筋肉内注射、胸骨内注射、腹腔内注射、病巣内注射、関節内注射、腫瘍内注射、又は点滴法を含むものが挙げられる。化合物及び組成物はまた、舌下に、粘膜投与により、頬側投与により、皮下に、脊髄投与により、硬膜外投与により、脳室への投与により、吸入により（例えば、ミスト又はスプレーとして）、経鼻投与、膣内投与、直腸投与、局所投与、又は経皮投与、又は徐放性若しくは持続放出性機構により投与することもできる。化合物及び組成物は、必要に応じて従来の薬学的に許容可能な担体、賦形剤、アジュバント、及び媒体を含有する単位投薬量製剤で投与することができる。化合物及び組成物は、特異的な又は罹患している臓器又は組織に直接投与されてもよい。化合物は、薬学的に許容可能な担体、賦形剤、アジュバント、及び媒体と混合して、所望の投与経路に適切な組成物を形成することができる。一部の実施形態において、化合物は、抗原及びアジュバントの一方又は両方と混合することができる。一部の実施形態において、抗原は癌抗原である。
[0332] 本明細書に開示される特定の実施形態、特に、注射又はその他の、本明細書に挙げられる経路を含むが、本明細書に記載される任意の他の投与経路（経口、腸内、胃内など）もまた含む非経口投与に製剤が使用される実施形態において、本方法に使用される製剤及び調合剤は無菌である。無菌医薬製剤は、当業者に公知の医薬品グレードの滅菌規格（米国薬局方第７９７章、第１０７２章、及び第１２１１章；カリフォルニア州企業・職業法（California Business & Professions Code）第４１２７．７章；カリフォルニア州規則集（California Code of Regulations）第１６条第１７５１章、連邦規則集（Code of Federal Regulations）第２１条第２１１章）に従い化合物化され、又は製造される。「無菌」製剤はアセプティックであり、又はいかなる生菌微生物及びその芽胞も含まない、若しくは本質的に含まない。医薬製剤の滅菌方法の例としては、限定はされないが、滅菌ろ過膜による滅菌ろ過、ガンマ線などの放射線の照射、及び加熱滅菌が挙げられる。
[0333] 経口投与は、その実行し易さ及び患者コンプライアンスの点で有利である。患者が嚥下困難を有する場合、腸内投与を達成するため、補給チューブ、補給シリンジ、又は胃瘻造設による薬の導入を利用することができる。活性化合物、及び存在する場合に、他の共投与される薬剤は、補給チューブ、補給シリンジ、又は胃瘻造設による投与用の製剤に好適な任意の他の薬学的に許容可能な賦形剤で経腸投与することができる。
[0334] 静脈内投与もまた、有利には、化合物又は組成物を血流へと可能な限り早く送達するため、及び胃腸管から吸収する必要をなくすために用いることができる。
[0335] 本明細書における使用のための記載される化合物及び組成物は、固体形態で、液体形態で、エアロゾル形態で、又は錠剤、丸薬、カプレット、カプセル（硬ゼラチンカプセル又は軟弾性ゼラチンカプセルなど）、粉末混合物、顆粒、注射液、溶液、坐薬、浣腸、洗腸、エマルション、分散液、食品プレミックス、カシェ剤、トローチ剤、ロゼンジ剤、ガム、軟膏、パップ剤（湿布）、ペースト、散剤、包帯、クリーム、パッチ、エアロゾル（例えば、鼻腔内スプレー又はインへラー）、ゲル、懸濁液（例えば、水性又は非水性液体懸濁物、水中油型エマルション又は油中水型液体エマルション）、エリキシル剤の形態で、又は投与経路に好適な他の形態で投与することができる。化合物及び組成物はまた、リポソーム製剤で投与することもできる。化合物はまた、プロドラッグとして投与することもでき、ここでプロドラッグは、処置対象の体内で治療上有効な形態へと転換を受ける。
[0336] 加えて、医薬製剤は、保存剤、可溶化剤、安定剤、再湿潤剤、乳化剤、甘味料、色素、調整剤、及び浸透圧調整用の塩、緩衝剤、コーティング剤、又は抗酸化剤を含有し得る。本化合物を含む製剤はまた、有益な治療特性を有する他の物質も含有し得る。医薬製剤は、公知の製薬方法によって調製されてもよい。更なる製剤及び投与方法が、当該技術分野において公知である。好適な製剤については、例えば、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott Williams & Wilkins, 21st ed. (2005)（これは参照により本明細書に援用される）を参照することができる。
[0337] 好適な分散剤又は湿潤剤及び懸濁剤を使用する当該技術分野において公知の方法に従い、注射用製剤、例えば、滅菌注射用水性又は油性懸濁液が製剤化されてもよい。滅菌注射用製剤はまた、非経口的に許容可能な希釈剤又は溶媒中の、例えば、プロピレングリコール中の溶液としての滅菌注射用溶液又は懸濁液であってもよい。用いられ得る許容可能な媒体及び溶媒の中には、水、生理食塩水、リンゲル溶液、及び等張食塩水がある。加えて、無菌固定油が、溶媒又は懸濁媒として従来用いられている。この目的では、合成モノグリセリド又はジグリセリドを含めた任意の無刺激固定油が用いられてもよい。加えて、注射液の調製においては、オレイン酸などの脂肪酸が使用されてもよい。
[0338] 経口投与用の固形剤形には、カプセル、錠剤、丸薬、散剤、及び顆粒が含まれ得る。かかる固形剤形では、活性化合物は、スクロース、ラクトース、タルク、又はデンプンなどの少なくとも１つの不活性希釈剤と混合されてもよい。かかる剤形はまた、不活性希釈剤以外の追加的な賦形剤物質、例えば、ステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤も含み得る。カプセル、錠剤、及び丸薬の場合には、こうした剤形はまた、緩衝剤も含み得る。錠剤及び丸薬は、加えて、腸溶性コーティングを伴い調製することができる。軟シェルのゲルカプセルに許容可能な賦形剤は、例えば、植物油、ワックス、脂肪、半固体及び液体ポリオール類などである。
[0339] 経口投与用の液体剤形としては、水など、当該技術分野で一般的に使用される不活性希釈剤を含有する薬学的に許容可能なエマルション、溶液、懸濁液、シロップ剤、及びエリキシル剤を挙げることができる。かかる組成物はまた、湿潤剤、乳化剤及び懸濁剤、シクロデキストリン、並びに甘味剤、香味剤、及び芳香剤などの追加的な薬剤も含み得る。或いは、化合物はまた、好適な場合、ニートな形態で投与されてもよい。
[0340] 化合物及び組成物はまた、リポソームの形態で投与することもできる。当該技術分野において公知のとおり、リポソームは、概してリン脂質又は他の脂質物質に由来する。リポソームは、水性媒体中に分散した一枚膜又は多重膜含水液晶によって形成される。リポソームの形成能を有する任意の生理学的に許容可能且つ代謝可能な脂質を使用することができる。リポソーム形態の本組成物は、本明細書に開示されるとおりの化合物に加えて、安定剤、保存剤、賦形剤などを含有し得る。有用な脂質としては、天然及び合成の両方の、リン脂質及びホスファチジルコリン類（レシチン類）が挙げられる。リポソームの形成方法は、当該技術分野において公知である。例えば、Gregoriadis, G. Ed., Liposome Technology, Third Edition: Liposome Technology: Liposome Preparation and Related Techniques, CRC Press, Boca Raton, Florida (2006)；及びPrescott, Ed., Methods in Cell Biology, Volume XIV, Academic Press, New York, N.W., p. 33 et seq (1976)を参照されたい。
[0341] 単一の剤形を作製するために担体材料と組み合わせ得る活性成分の量は、その活性成分が投与されることになる患者及び詳細な投与様式に応じて変わり得る。しかしながら、任意の特定の患者に対する具体的な用量レベルが、利用される具体的な化合物；患者の年齢、体重、体面積、ボディ・マス・インデックス（ＢＭＩ）、全般的な健康、性別、及び食事；用いられる投与時間及び投与経路；排泄速度；及びもしあれば、用いられる薬物の組み合わせを含めた種々の要因に依存することになる点は理解されるであろう。化合物は、単位投薬量製剤で投与することができる。選ばれた医薬単位投薬量は、患者、対象、又は個体において十分な濃度の薬物を提供するように製造され、投与される。
[0342] 本明細書に記載されるとおりの使用のための化合物は、単独の医薬活性薬剤として投与されてもよいが、それはまた、１つ以上の他の薬剤と組み合わせて使用することもできる。本明細書に記載されるとおりの使用のための化合物と組み合わせて追加の活性薬剤が使用されるとき、追加の活性薬剤は、概して、Physicians’Desk Reference (PDR) 71st Edition (2017)（これは参照により本明細書に援用される）に指示されるとおりの治療量、又は当業者に公知であろうとおりの、若しくは患者毎に実験的に決定されるとおりのかかる治療的に有用な量で用いられ得る。
[0343] 本明細書に開示される化合物及び組成物の２つ以上の組み合わせもまた使用することができる。２つ以上の化合物又は組成物は、投与直前に一緒に混合し、一緒に投与することができる。２つ以上の化合物又は組成物は、同じ投与経路又は異なる投与経路のいずれによっても、同じ時点で投与することができる。２つ以上の化合物又は組成物は、同じ投与経路又は異なる投与経路のいずれによっても、連続的に投与することができる。一実施形態において、キット形態には、化合物又は組成物の混合物、同じ時点で投与される別個の化合物又は組成物、又は連続的に投与される別個の化合物又は組成物のいずれかとしての投与に関する印刷された又は電子形式の説明書と共に、２つ以上の化合物又は組成物が個別の化合物又は組成物として含まれ得る。３つ以上の化合物又は組成物が投与される場合、それらは、化合物又は組成物の混合物として投与するか、同じ時点で投与される別個の化合物又は組成物として投与するか、連続的に投与される別個の化合物又は組成物として投与するか、２つ以上が同じ時点で投与され、残りがその同じ時点での投与の前又はその後に連続的に投与され得る別個の化合物又は組成物として投与するか、又は混合投与、同じ時点での投与、及び連続投与の任意の他の可能な組み合わせで投与することができる。
[0344] 本明細書に開示されるとおりの化合物は、一態様において、精製された形態であってもよく、本明細書には、精製された形態の化合物を含む組成物が開示される。実質的に純粋な化合物の組成物など、本明細書に開示されるとおりの化合物又はその塩を含む組成物が提供される。一部の実施形態において、本明細書に開示されるとおりの化合物又はその塩を含む組成物は、実質的に純粋な形態である。一つの変形例では、「実質的に純粋」は、不純物を３５％以下しか含有しない組成物を意図し、ここで不純物とは、その組成物中にある投与しようとする当該の化合物（又は化合物の組み合わせが使用される場合には、複数の化合物）、又はその化合物（又は組み合わせが使用される場合には、複数の化合物）の塩若しくは溶媒和物以外の化合物を意味する。任意の追加される媒体、担体、又は賦形剤の重量は、かかる計算から除かれ、及び追加される媒体、担体、又は賦形剤は、不純物とは見なされない。例えば、表１の化合物から選択される実質的に純粋な化合物の組成物は、不純物を３５％以下しか含有しない組成物を指し、ここで不純物とは、当該の化合物又はその塩若しくは溶媒和物以外の化合物を意味する。一つの変形例では、実質的に純粋な化合物又はその塩若しくは溶媒和物の組成物が提供され、この組成物は、不純物を２５％以下しか含有しない。別の変形例において、実質的に純粋な化合物又はその塩若しくは溶媒和物の組成物が提供され、この組成物は、不純物を２０％以下しか含有しない。なおも別の変形例において、実質的に純粋な化合物又はその塩若しくは溶媒和物の組成物が提供され、この組成物は、不純物を１０％以下しか含有しない。更なる変形例において、実質的に純粋な化合物又はその塩若しくは溶媒和物の組成物が提供され、この組成物は、不純物を５％以下しか含有しない。別の変形例において、実質的に純粋な化合物又はその塩若しくは溶媒和物の組成物が提供され、この組成物は、不純物を３％以下しか含有しない。なおも別の変形例において、実質的に純粋な化合物又はその塩若しくは溶媒和物の組成物が提供され、この組成物は、不純物を１％以下しか含有しない。更なる変形例において、実質的に純粋な化合物又はその塩若しくは溶媒和物の組成物が提供され、この組成物は、不純物を０．５％以下しか含有しない。更なる他の変形例において、実質的に純粋な化合物の組成物とは、その組成物が不純物を１５％以下、１０％以下、５％以下、３％以下、又は１％以下しか含有しないことを意味する。不純物は、所望の立体化学形態と異なる立体化学形態の化合物であり得る。例えば、実質的に純粋な（Ｓ）－化合物の組成物とは、その組成物が（Ｒ）－形態の化合物を１５％以下、１０％以下、５％以下、３％以下、又は１％以下しか含有しないことを意味する。或いは、本明細書で使用されるとき、「鏡像体過剰率（ｅｅ）」は、例えば単一の不斉中心を含むキラル物質の純度を記述する無次元モル比を指す。例えば、鏡像体過剰率が０であれば、ラセミ体を示す（例えば、エナンチオマーの５０：５０混合物、又は一方のエナンチオマーが他方と比べて過剰でない）。更なる例として、鏡像体過剰率が９９であれば、立体的にほぼ純粋なエナンチオマー化合物を示す（即ち、一方のエナンチオマーが他方と比べて大過剰である）。パーセンテージ鏡像体過剰率、（Ｒ）－化合物＞（Ｓ）－化合物の場合、％ｅｅ＝（［（Ｒ）－化合物］－［（Ｓ）－化合物］）／（［（Ｒ）－化合物］＋［（Ｓ）－化合物］）×１００；又は（Ｓ）－化合物＞（Ｒ）－化合物の場合、％ｅｅ＝（［（Ｓ）－化合物］－［（Ｒ）－化合物］）／（［（Ｓ）－化合物］＋［（Ｒ）－化合物］）×１００。更に、本明細書で使用されるとき、「ジアステレオマー過剰率（ｄｅ）」は、２つ以上の不斉中心を含むキラル物質の純度を記述する無次元モル比を指す。例えば、ジアステレオマー過剰率が０であれば、ジアステレオ異性体の等モル混合物を示す。更なる例として、ジアステレオマー過剰率が９９であれば、立体的にほぼ純粋なジアステレオマー化合物を示す（即ち、１つのジアステレオマーが他と比べて大過剰である）。ジアステレオマー過剰率は、ｅｅと同様の方法で計算し得る。当業者であれば理解するであろうとおり、ｄｅは通常、パーセントｄｅ（％ｄｅ）として報告される。％ｄｅは、％ｅｅと同じように計算し得る。
[0345] 一部の態様において、本明細書には、本明細書に記載されるもの又は本明細書に開示される方法によって作製されるものなどの修飾免疫細胞を含有する細胞集団を含む組成物が提供される。一部の実施形態において、本組成物は、本明細書に記載されるＣｂｌ－ｂ阻害薬又はその組成物と接触した状態にあったか、又は接触した状態にある修飾免疫細胞を含有する細胞集団を含む。一部の実施形態において、修飾免疫細胞は、抗ＣＤ３抗体単独と接触した状態にあったか、又はその状態にある。一部の実施形態において、修飾免疫細胞は、抗ＣＤ２８抗体と組み合わせた抗ＣＤ３抗体と接触した状態にあったか、又はその状態にある。本明細書に記載される修飾免疫細胞を含有する細胞集団を含む提供される組成物は、薬学的に許容可能な賦形剤を更に含み得る。
[0346] 一部の態様において、本明細書にはまた、免疫細胞を含有する細胞集団と本明細書に記載されるＣｂｌ－ｂ阻害薬とを含む細胞培養組成物も提供される。一部の実施形態において、免疫細胞は、ヒト免疫細胞である。一部の実施形態において、免疫細胞は、造血細胞、多能性幹細胞、骨髄系前駆細胞、リンパ系前駆細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、及びＮＫ細胞からなる群から選択される細胞である。一部の実施形態において、細胞培養組成物は、抗ＣＤ３抗体を更に含む。一部の実施形態において、細胞培養組成物は、抗ＣＤ２８抗体と組み合わせた抗ＣＤ３抗体を更に含む。免疫細胞を含有する細胞組成物の培養方法は、当該技術分野において周知であり、本明細書で企図される。
[0347] 本明細書に記載されるとおりの修飾免疫細胞又は組成物、例えば、修飾免疫細胞を含有する細胞集団を含む組成物又は医薬組成物は、好適な容器内に提供することができる。好適な容器としては、例えば、ボトル、バイアル（例えば、デュアルチャンババイアル）、シリンジ（例えば、シングル又はデュアルチャンバシリンジ）、バッグ（例えば、ＩＶバッグ）、及びチューブ（例えば、試験管）が挙げられる。容器は、ガラス又はプラスチックなど、種々の材料で形成されてもよい。
[0348] 一部の実施形態において、本明細書に記載されるとおりの修飾免疫細胞を含有する細胞集団を含む組成物（例えば、細胞培養組成物）は、培養ベッセル内に提供される。本明細書に提供されるとおりの培養ベッセルとしては、限定はされないが、チューブ（例えば、試験管）、ディッシュ（例えば、組織培養皿）、バッグ、マルチウェルプレート（例えば、６ウェル組織培養プレート）、及びフラスコ（例えば、細胞培養フラスコ）が挙げられる。
[0349] また、本明細書に記載されるいずれかの使用のための本明細書に記載されるとおりの組成物も提供される。一部の実施形態において、本明細書に記載されるとおりの組成物は、Ｃｂｌ－ｂ活性に関連する疾患又は病態の処置又は予防用医薬品を調製するためのものである。一部の実施形態において、本明細書に記載されるとおりの組成物は、癌の処置用医薬品を調製するためのものである。
[0350] 癌ワクチンと組み合わせた使用のための、本明細書に開示される化合物のいずれか、又はその塩若しくは溶媒和物の医薬組成物が、この開示に包含される。従って、本開示は、癌ワクチンと組み合わせた使用のためのＣｂｌ－ｂ阻害薬を含む医薬組成物を含み、ここでＣｂｌ－ｂ阻害薬は、国際公開第２０１９／１４８００５号の１～７１９の化合物（その「ａ」及び「ｂ」バリアントを含む）、又はそこに開示される式（Ｉ－Ａ）、式（Ｉ）、式（ＩＩ－Ａ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩＩ－Ａ）、式（ＩＩＩ）、又は式（ＩＶ）のいずれかの化合物、又はその任意の変形例、又はその薬学的に許容可能な塩若しくは溶媒和物、又はその互変異性体、又はその立体異性体若しくは立体異性体の混合物である。
[0351] 加えて、腫瘍溶解性ウイルスと組み合わせた使用のための、本明細書に開示される化合物のいずれか、又はその塩若しくは溶媒和物の医薬組成物が、この開示に包含される。従って、本開示は、腫瘍溶解性ウイルスと組み合わせた使用のためのＣｂｌ－ｂ阻害薬を含む医薬組成物を含み、ここでＣｂｌ－ｂ阻害薬は、国際公開第２０１９／１４８００５号の１～７１９の化合物（その「ａ」及び「ｂ」バリアントを含む）、又はそこに開示される式（Ｉ－Ａ）、式（Ｉ）、式（ＩＩ－Ａ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩＩ－Ａ）、式（ＩＩＩ）、又は式（ＩＶ）のいずれかの化合物、又はその任意の変形例、又はその薬学的に許容可能な塩若しくは溶媒和物、又はその互変異性体、又はその立体異性体若しくは立体異性体の混合物である。本組成物は、薬学的に許容可能な媒体又は薬学的に許容可能な担体など、薬学的に許容可能な賦形剤を更に含むことができる。一部の実施形態において、本医薬組成物は、小分子Ｃｂｌ－ｂ阻害薬と癌ワクチンとの両方を含む。一部の実施形態において、本化合物は、表１の化合物６０及び／又は化合物５６から選択される化合物、又はその薬学的に許容可能な塩若しくは溶媒和物、又はその互変異性体、又はその立体異性体若しくは立体異性体の混合物である。加えて、一部の実施形態において、本医薬組成物は、小分子Ｃｂｌ－ｂ阻害薬と腫瘍溶解性ウイルスとの両方を含む。一部の実施形態において、本化合物は、表１の化合物６０及び／又は化合物５６から選択される化合物、又はその薬学的に許容可能な塩若しくは溶媒和物、又はその互変異性体、又はその立体異性体若しくは立体異性体の混合物である。一部の実施形態において、本化合物は、以下の特許出願に開示されるＣｂｌ－ｂ阻害薬から選択される化合物：米国仮特許出願第６２／８４９，７２２号の化合物１～５８又はそこにある式（Ｉ）の化合物；米国仮特許出願第６２／８８０，４３７号の化合物１～５８又はそこにある式（Ｉ）の化合物；又はその任意の変形例、又はその薬学的に許容可能な塩若しくは溶媒和物、又はその互変異性体、又はその立体異性体若しくは立体異性体の混合物である。
[0352] 一態様において、薬学的に許容可能な塩は、無機酸又は有機酸と形成される塩など、酸付加塩である。
[0353] 本明細書に開示される化合物、ワクチン、及び組成物は、疾患又は障害の処置に十分なレベルの化合物、ワクチン、又は組成物を提供するであろう任意の好適な形態及び任意の好適な経路によって投与されてもよい。一部の実施形態において、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬及び／又は癌ワクチンは、経腸投与によって投与される。本明細書に開示される化合物、腫瘍溶解性ウイルス、及び組成物は、疾患又は障害の処置に十分なレベルの化合物、腫瘍溶解性ウイルス、又は組成物を提供するであろう任意の好適な形態及び任意の好適な経路によって投与されてもよい。一部の実施形態において、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬及び／又は腫瘍溶解性ウイルスは、経腸投与によって投与される。一部の実施形態において、経腸投与は経口投与である。他の実施形態において、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬及び／又は癌ワクチンは、非経口投与によって投与される。他の実施形態において、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬及び／又は腫瘍溶解性ウイルスは、非経口投与によって投与される。一部の実施形態において、非経口投与は腫瘍内注射である。一部の実施形態において、非経口投与は、静脈内、腹腔内、及び皮下からなる群から選択される経路によるものである。
[0354] 好適な投与経路としては、経口投与、経腸投与、非経口投与であって、皮下注射、静脈内注射、動脈内注射、筋肉内注射、胸骨内注射、腹腔内注射、病巣内注射、関節内注射、腫瘍内注射、又は点滴法を含むものが挙げられる。化合物、ワクチン、及び組成物はまた、舌下に、粘膜投与により、頬側投与により、皮下に、脊髄投与により、硬膜外投与により、脳室への投与により、吸入により（例えば、ミスト又はスプレーとして）、経鼻投与、膣内投与、直腸投与、局所投与、又は経皮投与、又は徐放性若しくは持続放出性機構により投与することもできる。化合物、ワクチン、及び組成物は、必要に応じて従来の薬学的に許容可能な担体、賦形剤、アジュバント、及び媒体を含有する単位投薬量製剤で投与することができる。化合物、ワクチン、及び組成物は、特異的な又は罹患している臓器又は組織に直接投与されてもよい。化合物及び／又はワクチンは、薬学的に許容可能な担体、賦形剤、アジュバント、及び媒体と混合して、所望の投与経路に適切な組成物を形成することができる。化合物、腫瘍溶解性ウイルス、及び組成物はまた、舌下に、粘膜投与により、頬側投与により、皮下に、脊髄投与により、硬膜外投与により、脳室への投与により、吸入により（例えば、ミスト又はスプレーとして）、経鼻投与、膣内投与、直腸投与、局所投与、又は経皮投与、又は徐放性若しくは持続放出性機構により投与することもできる。化合物、腫瘍溶解性ウイルス、及び組成物は、必要に応じて従来の薬学的に許容可能な担体、賦形剤、アジュバント、及び媒体を含有する単位投薬量製剤で投与することができる。化合物、腫瘍溶解性ウイルス、及び組成物は、特異的な又は罹患している臓器又は組織に直接投与されてもよい。化合物及び／又は腫瘍溶解性ウイルスは、薬学的に許容可能な担体、賦形剤、アジュバント、及び媒体と混合して、所望の投与経路に適切な組成物を形成することができる。
[0355] 本明細書に開示される特定の実施形態、特に、注射又はその他の、本明細書に挙げられる経路を含むが、本明細書に記載される任意の他の投与経路（経口、腸内、胃内など）もまた含む非経口投与に製剤が使用される実施形態において、本方法に使用される製剤及び調合剤は、ある種の癌ワクチン中の微生物ベクターの存在を除き、無菌である。かかる調合剤の調製のためには、微生物ベクターと組み合わせる前に、製剤又は調合剤の全ての成分が無菌的な方法で調製される。本明細書に開示される特定の実施形態、特に、注射又はその他の、本明細書に挙げられる経路を含むが、本明細書に記載される任意の他の投与経路（経口、腸内、胃内など）もまた含む非経口投与に製剤が使用される実施形態において、本方法に使用される製剤及び調合剤は、腫瘍溶解性ウイルスの存在を除き、無菌である。かかる調合剤の調製のためには、腫瘍溶解性ウイルスと組み合わせる前に、製剤又は調合剤の全ての成分が無菌的な方法で調製される。無菌医薬製剤は、当業者に公知の医薬品グレードの滅菌規格（米国薬局方第７９７章、第１０７２章、及び第１２１１章；カリフォルニア州企業・職業法（California Business & Professions Code）第４１２７．７章；カリフォルニア州規則集（California Code of Regulations）第１６条第１７５１章、連邦規則集（Code of Federal Regulations）第２１条第２１１章）に従い化合物化され、又は製造される。「無菌」製剤はアセプティックであり、又はいかなる生菌微生物及びその芽胞も含まない、若しくは本質的に含まない。医薬製剤の滅菌方法の例としては、限定はされないが、滅菌ろ過膜による滅菌ろ過、ガンマ線などの放射線の照射、及び加熱滅菌が挙げられる。
[0356] 経口投与は、その実行し易さ及び患者コンプライアンスの点で有利である。患者が嚥下困難を有する場合、腸内投与を達成するため、補給チューブ、補給シリンジ、又は胃瘻造設による薬の導入を利用することができる。活性化合物、ワクチン、又は組成物、及び存在する場合に、他の共投与される薬剤は、補給チューブ、補給シリンジ、又は胃瘻造設による投与用の製剤に好適な任意の他の薬学的に許容可能な賦形剤で経腸投与することができる。活性化合物、腫瘍溶解性ウイルス、又は組成物、及び存在する場合に、他の共投与される薬剤は、補給チューブ、補給シリンジ、又は胃瘻造設による投与用の製剤に好適な任意の他の薬学的に許容可能な賦形剤で経腸投与することができる。
[0357] 静脈内投与もまた、有利には、化合物、ワクチン、又は組成物を血流へと可能な限り早く送達するため、及び胃腸管から吸収する必要をなくすために用いることができる。静脈内投与もまた、有利には、化合物、腫瘍溶解性ウイルス、又は組成物を血流へと可能な限り早く送達するため、及び胃腸管から吸収する必要をなくすために用いることができる。
[0358] 本明細書における使用のための記載される化合物、ワクチン、及び組成物は、固体形態で、液体形態で、エアロゾル形態で、又は錠剤、丸薬、カプレット、カプセル（硬ゼラチンカプセル又は軟弾性ゼラチンカプセルなど）、粉末混合物、顆粒、注射液、溶液、坐薬、浣腸、洗腸、エマルション、分散液、食品プレミックス、カシェ剤、トローチ剤、ロゼンジ剤、ガム、軟膏、パップ剤（湿布）、ペースト、散剤、包帯、クリーム、パッチ、エアロゾル（例えば、鼻腔内スプレー又はインへラー）、ゲル、懸濁液（例えば、水性又は非水性液体懸濁物、水中油型エマルション又は油中水型液体エマルション）、エリキシル剤の形態で、又は投与経路に好適な他の形態で投与することができる。化合物、ワクチン、及び組成物はまた、リポソーム製剤で投与することもできる。本明細書における使用のための記載される化合物、腫瘍溶解性ウイルス、及び組成物は、固体形態で、液体形態で、エアロゾル形態で、又は錠剤、丸薬、カプレット、カプセル（硬ゼラチンカプセル又は軟弾性ゼラチンカプセルなど）、粉末混合物、顆粒、注射液、溶液、坐薬、浣腸、洗腸、エマルション、分散液、食品プレミックス、カシェ剤、トローチ剤、ロゼンジ剤、ガム、軟膏、パップ剤（湿布）、ペースト、散剤、包帯、クリーム、パッチ、エアロゾル（例えば、鼻腔内スプレー又はインへラー）、ゲル、懸濁液（例えば、水性又は非水性液体懸濁物、水中油型エマルション又は油中水型液体エマルション）、エリキシル剤の形態で、又は投与経路に好適な他の形態で投与することができる。化合物、腫瘍溶解性ウイルス、及び組成物はまた、リポソーム製剤で投与することもできる。化合物はまた、プロドラッグとして投与することもでき、ここでプロドラッグは、処置対象の体内で治療上有効な形態へと転換を受ける。
[0359] 加えて、医薬製剤は、保存剤、可溶化剤、安定剤、再湿潤剤、乳化剤、甘味料、色素、調整剤、及び浸透圧調整用の塩、緩衝剤、コーティング剤又は抗酸化剤を含有し得る。本化合物、ワクチン、又は組成物を含む製剤はまた、有益な治療特性を有する他の物質も含有し得る。本化合物、腫瘍溶解性ウイルス、又は組成物を含む製剤はまた、有益な治療特性を有する他の物質も含有し得る。医薬製剤は、公知の製薬方法によって調製されてもよい。更なる製剤及び投与方法が、当該技術分野において公知である。好適な製剤については、例えば、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott Williams & Wilkins, 21st ed. (2005)（これは参照により本明細書に援用される）を参照することができる。
[0360] 好適な分散剤又は湿潤剤及び懸濁剤を使用する当該技術分野において公知の方法に従い、小分子Ｃｂｌ－ｂ阻害薬の注射用製剤、例えば、滅菌注射用水性又は油性懸濁液が製剤化されてもよい。滅菌注射用製剤はまた、非経口的に許容可能な希釈剤又は溶媒中の、例えば、プロピレングリコール中の溶液としての滅菌注射用溶液又は懸濁液であってもよい。用いられ得る許容可能な媒体及び溶媒の中には、水、生理食塩水、リンゲル溶液、及び等張食塩水がある。加えて、無菌固定油が、溶媒又は懸濁媒として従来用いられている。この目的では、合成モノグリセリド又はジグリセリドを含めた任意の無刺激固定油が用いられてもよい。加えて、注射液の調製においては、オレイン酸などの脂肪酸が使用されてもよい。
[0361] 経口投与用の固形剤形には、カプセル、錠剤、丸薬、散剤、及び顆粒が含まれ得る。かかる固形剤形では、活性化合物、ワクチン、又は組成物は、スクロース、ラクトース、タルク、又はデンプンなどの少なくとも１つの不活性希釈剤と混合されてもよい。かかる固形剤形では、活性化合物、腫瘍溶解性ウイルス、又は組成物は、スクロース、ラクトース、タルク、又はデンプンなどの少なくとも１つの不活性希釈剤と混合されてもよい。かかる剤形はまた、不活性希釈剤以外の追加的な賦形剤物質、例えば、ステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤も含み得る。カプセル、錠剤、及び丸薬の場合には、こうした剤形はまた、緩衝剤も含み得る。錠剤及び丸薬は、加えて、腸溶性コーティングを伴い調製することができる。軟シェルのゲルカプセルに許容可能な賦形剤は、例えば、植物油、ワックス、脂肪、半固体及び液体ポリオール類などである。
[0362] 経口投与用の液体剤形としては、水など、当該技術分野で一般的に使用される不活性希釈剤を含有する薬学的に許容可能なエマルション、溶液、懸濁液、シロップ剤、及びエリキシル剤を挙げることができる。かかる組成物はまた、湿潤剤、乳化剤及び懸濁剤、シクロデキストリン、並びに甘味剤、香味剤、及び芳香剤などの追加的な薬剤も含み得る。或いは、化合物はまた、好適な場合、ニートな形態で投与されてもよい。
[0363] 化合物、ワクチン、及び組成物はまた、リポソームの形態で投与することもできる。化合物、腫瘍溶解性ウイルス、及び組成物はまた、リポソームの形態で投与することもできる。当該技術分野において公知のとおり、リポソームは、概してリン脂質又は他の脂質物質に由来する。リポソームは、水性媒体中に分散した一枚膜又は多重膜含水液晶によって形成される。リポソームの形成能を有する任意の生理学的に許容可能且つ代謝可能な脂質を使用することができる。リポソーム形態の本組成物は、本明細書に開示されるとおりの化合物又はワクチンに加えて、安定剤、保存剤、賦形剤などを含有し得る。リポソーム形態の本組成物は、本明細書に開示されるとおりの化合物又は腫瘍溶解性ウイルスに加えて、安定剤、保存剤、賦形剤などを含有し得る。有用な脂質としては、天然及び合成の両方の、リン脂質及びホスファチジルコリン類（レシチン類）が挙げられる。リポソームの形成方法は、当該技術分野において公知である。例えば、Gregoriadis, G. Ed., Liposome Technology, Third Edition: Liposome Technology: Liposome Preparation and Related Techniques, CRC Press, Boca Raton, Florida (2006)；及びPrescott, Ed., Methods in Cell Biology, Volume XIV, Academic Press, New York, N.W., p. 33 et seq (1976)を参照されたい。
[0364] 単一の剤形を作製するために担体材料と組み合わせ得る活性成分の量は、その活性成分が投与されることになる患者及び詳細な投与様式に応じて変わり得る。しかしながら、任意の特定の患者に対する具体的な用量レベルが、用いられる具体的な化合物又はワクチン；患者の年齢、体重、体面積、ボディ・マス・インデックス（ＢＭＩ）、全般的な健康、性別、及び食事；用いられる投与時間及び投与経路；排泄速度；及びもしあれば、用いられる薬物の組み合わせを含めた種々の要因に依存することになる点は理解されるであろう。化合物、ワクチン、及び組成物は、単位投薬量製剤で投与することができる。しかしながら、任意の特定の患者に対する具体的な用量レベルが、用いられる具体的な化合物又は腫瘍溶解性ウイルス；患者の年齢、体重、体面積、ボディ・マス・インデックス（ＢＭＩ）、全般的な健康、性別、及び食事；用いられる投与時間及び投与経路；排泄速度；及びもしあれば、用いられる薬物の組み合わせを含めた種々の要因に依存することになる点は理解されるであろう。化合物、腫瘍溶解性ウイルス、及び組成物は、単位投薬量製剤で投与することができる。選ばれた医薬単位投薬量は、患者、対象、又は個体において十分な濃度の薬物を提供するように製造され、投与される。
[0365] 本明細書に記載されるとおりの使用のための化合物、ワクチン、及び組成物は、単独の医薬活性薬剤として投与されてもよいが、それはまた、１つ以上の他の薬剤と組み合わせて使用することもできる。本明細書に記載されるとおりの使用のための化合物、ワクチン、又は組成物と組み合わせて追加の活性薬剤が使用されるとき、追加の活性薬剤は、概して、Physicians’Desk Reference (PDR) 71st Edition (2017)（これは参照により本明細書に援用される）に指示されるとおりの治療量、又は当業者に公知であろうとおりの、若しくは患者毎に実験的に決定されるとおりのかかる治療的に有用な量で用いられ得る。本明細書に記載されるとおりの使用のための化合物、腫瘍溶解性ウイルス、及び組成物は、単独の医薬活性薬剤として投与されてもよいが、それはまた、１つ以上の他の薬剤と組み合わせて使用することもできる。本明細書に記載されるとおりの使用のための化合物、腫瘍溶解性ウイルス、又は組成物と組み合わせて追加の活性薬剤が使用されるとき、追加の活性薬剤は、概して、Physicians’Desk Reference (PDR) 71st Edition (2017)（これは参照により本明細書に援用される）に指示されるとおりの治療量、又は当業者に公知であろうとおりの、若しくは患者毎に実験的に決定されるとおりのかかる治療的に有用な量で用いられ得る。
[0366] 本明細書に開示される化合物、ワクチン、及び組成物の２つ以上の組み合わせもまた使用することができる。２つ以上の化合物、ワクチン、又は組成物は、投与直前に一緒に混合し、一緒に投与することができる。２つ以上の化合物、ワクチン、又は組成物は、同じ投与経路又は異なる投与経路のいずれによっても、同じ時点で投与することができる。２つ以上の化合物、ワクチン、又は組成物は、同じ投与経路又は異なる投与経路のいずれによっても、連続的に投与することができる。一実施形態において、キット形態には、化合物、ワクチン、若しくは組成物の混合物、同じ時点で投与される別個の化合物、ワクチン、若しくは組成物、又は連続的に投与される別個の化合物、ワクチン、若しくは組成物のいずれかとしての投与に関する印刷された又は電子形式の説明書と共に、２つ以上の化合物、ワクチン、又は組成物が、個別の化合物、ワクチン、又は組成物として含まれ得る。３つ以上の化合物、ワクチン、又は組成物が投与される場合、それらは、化合物、ワクチン、又は組成物の混合物として投与するか、同じ時点で投与される別個の化合物、ワクチン、又は組成物として投与するか、連続的に投与される別個の化合物、ワクチン、又は組成物として投与するか、２つ以上が同じ時点で投与され、残りがその同じ時点での投与の前又はその後に連続的に投与され得る別個の化合物、ワクチン、又は組成物として投与するか、又は混合投与、同じ時点での投与、及び連続投与の任意の他の可能な組み合わせで投与することができる。
[0367] 本明細書に開示される化合物、腫瘍溶解性ウイルス、及び組成物の２つ以上の組み合わせもまた使用することができる。２つ以上の化合物、腫瘍溶解性ウイルス、又は組成物は、投与直前に一緒に混合し、一緒に投与することができる。２つ以上の化合物、腫瘍溶解性ウイルス、又は組成物は、同じ投与経路又は異なる投与経路のいずれによっても、同じ時点で投与することができる。２つ以上の化合物、腫瘍溶解性ウイルス、又は組成物は、同じ投与経路又は異なる投与経路のいずれによっても、連続的に投与することができる。一実施形態において、キット形態には、化合物、腫瘍溶解性ウイルス、若しくは組成物の混合物、同じ時点で投与される別個の化合物、腫瘍溶解性ウイルス、若しくは組成物、又は連続的に投与される別個の化合物、腫瘍溶解性ウイルス、若しくは組成物のいずれかとしての投与に関する印刷された又は電子形式の説明書と共に、２つ以上の化合物、腫瘍溶解性ウイルス、又は組成物が、個別の化合物、腫瘍溶解性ウイルス、又は組成物として含まれ得る。３つ以上の化合物、腫瘍溶解性ウイルス、又は組成物が投与される場合、それらは、化合物、腫瘍溶解性ウイルス、又は組成物の混合物として投与するか、同じ時点で投与される別個の化合物、腫瘍溶解性ウイルス、又は組成物として投与するか、連続的に投与される別個の化合物、腫瘍溶解性ウイルス、又は組成物として投与するか、２つ以上が同じ時点で投与され、残りがその同じ時点での投与の前又はその後に連続的に投与され得る別個の化合物、腫瘍溶解性ウイルス、又は組成物として投与するか、又は混合投与、同じ時点での投与、及び連続投与の任意の他の可能な組み合わせで投与することができる。
[0368] 本明細書に記載される医薬組成物及び方法における使用のための本明細書に開示されるとおりの化合物は、一態様において、精製された形態であってもよく、本明細書には、精製された形態の化合物を含む組成物が開示される。実質的に純粋な化合物の組成物など、本明細書に開示されるとおりの化合物又はその塩を含む組成物が提供される。一部の実施形態において、本明細書に開示されるとおりの化合物又はその塩を含む組成物は、実質的に純粋な形態である。一つの変形例では、「実質的に純粋」は、不純物を３５％以下しか含有しない組成物を意図し、ここで不純物とは、その組成物中にある投与しようとする当該の化合物（又は化合物の組み合わせが使用される場合には、複数の化合物）、又はその化合物（又は組み合わせが使用される場合には、複数の化合物）の塩若しくは溶媒和物以外の化合物を意味する。任意の追加される媒体、担体、又は賦形剤の重量は、かかる計算から除かれ、及び追加される媒体、担体、又は賦形剤は、不純物とは見なされない。例えば、表１の化合物から選択される実質的に純粋な化合物の組成物は、不純物を３５％以下しか含有しない組成物を指し、ここで不純物とは、当該の化合物又はその塩若しくは溶媒和物以外の化合物を意味する。一つの変形例では、実質的に純粋な化合物又はその塩若しくは溶媒和物の組成物が提供され、この組成物は、不純物を２５％以下しか含有しない。別の変形例において、実質的に純粋な化合物又はその塩若しくは溶媒和物の組成物が提供され、この組成物は、不純物を２０％以下しか含有しない。なおも別の変形例において、実質的に純粋な化合物又はその塩若しくは溶媒和物の組成物が提供され、この組成物は、不純物を１０％以下しか含有しない。更なる変形例において、実質的に純粋な化合物又はその塩若しくは溶媒和物の組成物が提供され、この組成物は、不純物を５％以下しか含有しない。別の変形例において、実質的に純粋な化合物又はその塩若しくは溶媒和物の組成物が提供され、この組成物は、不純物を３％以下しか含有しない。なおも別の変形例において、実質的に純粋な化合物又はその塩若しくは溶媒和物の組成物が提供され、この組成物は、不純物を１％以下しか含有しない。更なる変形例において、実質的に純粋な化合物又はその塩若しくは溶媒和物の組成物が提供され、この組成物は、不純物を０．５％以下しか含有しない。更なる他の変形例において、実質的に純粋な化合物の組成物とは、その組成物が不純物を１５％以下、１０％以下、５％以下、３％以下、又は１％以下しか含有しないことを意味する。不純物は、所望の立体化学形態と異なる立体化学形態の化合物であり得る。例えば、実質的に純粋な（Ｓ）－化合物の組成物とは、その組成物が（Ｒ）－形態の化合物を１５％以下、１０％以下、５％以下、３％以下、又は１％以下しか含有しないことを意味する。
[0369] 或いは、本明細書で使用されるとき、「鏡像体過剰率（ｅｅ）」は、例えば単一の不斉中心を含むキラル物質の純度を記述する無次元モル比を指す。例えば、鏡像体過剰率が０であれば、ラセミ体（例えば、エナンチオマーの５０：５０混合物、又は一方のエナンチオマーが他方と比べて過剰でない）を示す。更なる例として、鏡像体過剰率が９９であれば、立体的にほぼ純粋なエナンチオマー化合物（即ち、一方のエナンチオマーが他方と比べて大過剰である）を示す。パーセンテージ鏡像体過剰率、（Ｒ）－化合物＞（Ｓ）－化合物の場合、％ｅｅ＝（［（Ｒ）－化合物］－［（Ｓ）－化合物］）／（［（Ｒ）－化合物］＋［（Ｓ）－化合物］）×１００；又は（Ｓ）－化合物＞（Ｒ）－化合物の場合、％ｅｅ＝（［（Ｓ）－化合物］－［（Ｒ）－化合物］）／（［（Ｓ）－化合物］＋［（Ｒ）－化合物］）×１００。更に、本明細書で使用されるとき、「ジアステレオマー過剰率（ｄｅ）」は、２つ以上の不斉中心を含むキラル物質の純度を記述する無次元モル比を指す。例えば、ジアステレオマー過剰率が０であれば、ジアステレオ異性体の等モル混合物を示す。更なる例として、ジアステレオマー過剰率が９９であれば、立体的にほぼ純粋なジアステレオマー化合物（即ち、１つのジアステレオマーが他と比べて大過剰である）を示す。ジアステレオマー過剰率は、ｅｅと同様の方法で計算し得る。当業者であれば理解するであろうとおり、ｄｅは通常、パーセントｄｅ（％ｄｅ）として報告される。％ｄｅは、％ｅｅと同じように計算し得る。
[0370] 本明細書に開示されるとおりの化合物、ワクチン、又は組成物は、好適な容器内に提供することができる。本明細書に開示されるとおりの化合物、腫瘍溶解性ウイルス、又は組成物は、好適な容器内に提供することができる。好適な容器としては、例えば、ボトル、バイアル（例えば、デュアルチャンババイアル）、シリンジ（例えば、シングル又はデュアルチャンバシリンジ）、バッグ（例えば、ＩＶバッグ）及びチューブ（例えば、試験管）が挙げられる。容器は、ガラス又はプラスチックなど、種々の材料で形成されてもよい。
Ｖ．製品又はキット
[0371] また、本明細書に記載される化合物、医薬組成物、細胞、修飾免疫細胞、細胞集団、細胞組成物、細胞培養物、又は細胞培養組成物のいずれかを含む製品も提供される。本製品は、化合物、医薬組成物、細胞、修飾免疫細胞、細胞集団、細胞組成物、細胞培養物、又は細胞培養組成物に好適な容器又は包装材料を含む。好適な容器の例としては、限定はされないが、ボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶバッグ、又はチューブが挙げられる。細胞、修飾免疫細胞、細胞集団、細胞組成物、細胞培養物、又は細胞培養組成物については、好適な容器は、限定はされないが、チューブ、ディッシュ、バッグ、マルチウェルプレート、又はフラスコを含めた、培養ベッセルであり得る。
[0372] また、本明細書に記載される化合物、医薬組成物、細胞、修飾免疫細胞、細胞集団、細胞組成物、細胞培養物、又は細胞培養組成物のいずれかを含むキットも提供される。本キットは、限定はされないが、ボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶバッグ、又はチューブを含めた、好適な容器又は包装材料内にある化合物、医薬組成物、細胞、修飾免疫細胞、細胞集団、細胞組成物、細胞培養物、又は細胞培養組成物を収容し得る。本キットは、限定はされないが、チューブ、ディッシュ、バッグ、マルチウェルプレート、又はフラスコを含めた、培養ベッセル内にある細胞、修飾免疫細胞、細胞集団、細胞組成物、細胞培養物、又は細胞培養組成物を収容し得る。本キットは、単回用量形態又は複数回用量形態で個体に投与するための化合物、医薬組成物、細胞、修飾免疫細胞、細胞集団、細胞組成物、細胞培養物、又は細胞培養組成物を含むことができる。本キットは、本明細書に開示される方法のいずれかに係る個体への化合物、医薬組成物、細胞、修飾免疫細胞、細胞集団、細胞組成物、細胞培養物、又は細胞培養組成物の投与に関する説明書又は表示を更に含むことができる。本キットは、限定はされないが、針、シリンジ、チューブ材料、又はＩＶバッグを含め、化合物、医薬組成物、細胞、修飾免疫細胞、細胞集団、細胞組成物、細胞培養物、又は細胞培養組成物を個体に投与するための備品を更に含むことができる。本キットは、本明細書に開示される化合物、医薬組成物、細胞、修飾免疫細胞、細胞集団、細胞組成物、細胞培養物、又は細胞培養組成物のいずれかの作製に関する説明書を更に含むことができる。
[0373] また、本明細書に記載される化合物、ワクチン、又は医薬組成物のいずれかを含む製品も提供される。本製品は、化合物、ワクチン、又は医薬組成物に好適な容器又は包装材料を含む。また、本明細書に記載される化合物、腫瘍溶解性ウイルス、又は医薬組成物のいずれかを含む製品も提供される。本製品は、化合物、腫瘍溶解性ウイルス、又は医薬組成物に好適な容器又は包装材料を含む。好適な容器の例としては、限定はされないが、ボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶバッグ又はチューブが挙げられる。
[0374] また、本明細書に記載される化合物、ワクチン、又は医薬組成物のいずれかを含むキットも提供される。本キットは、限定はされないが、ボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶバッグ又はチューブを含めた、好適な容器又は包装材料内にある化合物、ワクチン、又は医薬組成物を収容し得る。本キットは、単回用量形態又は複数回用量形態で個体に投与するための化合物、ワクチン、又は医薬組成物を含むことができる。本キットは、本明細書に開示される方法のいずれかに係る個体への化合物、ワクチン、又は医薬組成物の投与に関する説明書又は表示を更に含むことができる。本キットは、限定はされないが、針、シリンジ、チューブ材料、又はＩＶバッグを含め、化合物、ワクチン、又は医薬組成物を個体に投与するための備品を更に含むことができる。本キットは、本明細書に開示される化合物、ワクチン、又は医薬組成物のいずれかの作製に関する説明書を更に含むことができる。
[0375] また、本明細書に記載される化合物、腫瘍溶解性ウイルス、又は医薬組成物のいずれかを含むキットも提供される。本キットは、限定はされないが、ボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶバッグ又はチューブを含めた、好適な容器又は包装材料内にある化合物、腫瘍溶解性ウイルス、又は医薬組成物を収容し得る。本キットは、単回用量形態又は複数回用量形態で個体に投与するための化合物、腫瘍溶解性ウイルス、又は医薬組成物を含むことができる。本キットは、本明細書に開示される方法のいずれかに係る個体への化合物、腫瘍溶解性ウイルス、又は医薬組成物の投与に関する説明書又は表示を更に含むことができる。本キットは、限定はされないが、針、シリンジ、チューブ材料、又はＩＶバッグを含め、化合物、腫瘍溶解性ウイルス、又は医薬組成物を個体に投与するための備品を更に含むことができる。本キットは、本明細書に開示される化合物、腫瘍溶解性ウイルス、又は医薬組成物のいずれかの作製に関する説明書を更に含むことができる。
[0376] 本開示は、以下の例を参照することにより、更に十分に理解されるであろう。しかしながら、これらの例は、本開示の範囲を限定するものと解釈されてはならない。本明細書に記載される例及び実施形態は例示目的に過ぎず、それらを踏まえた様々な修正又は変更が当業者に想起されてもよく、それらは本願の趣旨及び範囲内及び添付の特許請求の範囲内に包含されることが理解される。
実施例
一般的ワークアップ手順１
[0377] 水溶液を酢酸エチルで２～３回抽出した。合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウム、若しくは無水硫酸マグネシウムで乾燥させるか、又はブライン若しくは飽和塩化アンモニウム水溶液で洗浄した後、乾燥させて、ろ過し、及び真空下で濃縮した。
精製手順
[0378] 調製規模のキラル超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）は、CHIRALPAK AS-H、CHIRALPAK AD-H、又はCHIRALPAK IGなどの様々なCHIRALPAKカラムを使用し、ＣＯ２／ＭｅＯＨ、ＣＯ２／ＥｔＯＨ、又はＣＯ２／（ＭｅＯＨ＋アセトニトリル）などの溶媒系を使用して実施した。
[0379] 調製規模のキラルＨＰＬＣは、CHIRALPAK IA、CHIRAL ART Cellulose-SB、CHIRALPAK IF、及びCHIRALPAK IGなどの様々なCHIRALPAKカラムを使用し、ヘキサン／メタノール、ヘキサン／エタノール、（ヘキサン＋ジクロロメタン）／エタノール、ＭＴＢＥ／メタノール、ＭＴＢＥ／エタノール、及び（ヘキサン－８ｍｍｏｌ／Ｌ ＮＨ３）／メタノール、移動相Ｂ：エタノール及びヘキサン／ＩＰＡなどの溶媒系を使用して実施した。
[0380] 調製規模のＨＰＬＣは、SunFire Prep C18 OBD、XBridge Prep OBD C18、及びXBridge Shield RP18 OBDなどのカラムを使用し、（水－０．１％ギ酸）／アセトニトリル、（水－１０ｍｍｏｌ／Ｌ ＮＨ４ＨＣＯ３）／アセトニトリル、又は（水－１０ｍｍｏｌ／Ｌ ＮＨ４ＨＣＯ３）／アセトニトリルなどの溶媒系を使用して実施した。
[0381] クロマトグラフィーＡとは、ヘキサン又は石油エーテル中ＥｔＯＡｃの混合物で溶出する、典型的にはプレパックカートリッジ内にあるシリカゲルでの精製を指す；クロマトグラフィーＢとは、ＤＣＭ中ＭｅＯＨの混合物での溶出を指す；クロマトグラフィーＣとは、水中アセトニトリルの混合物で溶出する、Ｃ１８逆相シリカゲルの使用を指す；クロマトグラフィーＤとは、エタノール、ＥｔＯＡｃ、及びヘキサンの混合物での溶出を指す。表１に立体化学なしに描かれる化合物は、生物学的実施例中ではラセミ混合物又はジアステレオマー（diasteromeric）混合物として試験した。
[0382] 本実施例で使用される略語には、以下が含まれる：ＨＡＴＵ：１－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム３－オキシドヘキサフルオロリン酸塩；Ｔ３Ｐ：プロピルホスホン酸無水物；キサントホス：４，５－ビス（ジフェニルホスフィノ）－９，９－ジメチルキサンテン；ＮＢＳ：Ｎ－ブロモコハク酸イミド；ＢＰＯ：過酸化ベンゾイル；ＴＨＦ：テトラヒドロフラン；ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル；ＤＣＭ：ジクロロメタン；ＭｅＯＨ：メタノール；ＤＣＥ：１，２－ジクロロエタン；ＴＥＡ：トリエチルアミン；ＤＩＰＥＡ：Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン；及びＤＭＦ：Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミドが挙げられる。
実施例Ａ：２－（ブロモメチル）－５－ホルミル－３－（トリフルオロメチル）安息香酸メチルの合成
Figure 0007587528000090
[0383] ステップ１：３－（メトキシカルボニル）－４－メチル－５－（トリフルオロメチル）安息香酸の合成。ＤＭＦ（２００ｍＬ）中の５－ブロモ－２－メチル－３－（トリフルオロメチル）安息香酸メチル（１８．０ｇ、６０．８ｍｍｏｌ）、シュウ酸（１１．５ｇ、９１．２ｍｍｏｌ）、無水酢酸（９．３ｇ、９１．２ｍｍｏｌ）、及びＤＩＰＥＡ（１１．８ｇ、９１．２ｍｍｏｌ）の脱気した溶液に、Ｐｄ（ＯＡｃ）２（１．４ｇ、６．１ｍｍｏｌ）及びキサントホス（１．８ｇ、３．０ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を窒素下にて１００℃で１６時間撹拌した。ｐＨが約３になるまでＨＣｌ（１Ｍ、３００ｍＬ）を加えることにより反応をクエンチし、続いて一般的ワークアップ手順１を行った。残渣をクロマトグラフィーＣによって精製して、表題化合物を得た（７．５ｇ、４７％）。
[0384] ステップ２：４－（ブロモメチル）－３－（メトキシカルボニル）－５－（トリフルオロメチル）安息香酸の合成。ＣＣｌ４（１６０ｍＬ）中の４－メチル－３－（メトキシカルボニル）－５－（トリフルオロメチル）安息香酸（８ｇ、３０．５ｍｍｏｌ）及びＮＢＳ（８．２ｇ、４６ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＢＰＯ（２．２ｇ、９ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液を８０℃で１６時間撹拌した。混合物を濃縮した。この粗生成物をクロマトグラフィーＢによって精製して、表題化合物を得た（８．０ｇ、７７％）。ＭＳ（ＥＳＩ）計算値（Ｃ１１Ｈ８ＢｒＦ３Ｏ４）［Ｍ－Ｈ］－、３３９．０；実測値、３３９．１。
[0385] ステップ３：２－（ブロモメチル）－５－（ヒドロキシメチル）－３－（トリフルオロメチル）－安息香酸メチルの合成。ＴＨＦ（３０ｍＬ）中の４－（ブロモメチル）－３－（メトキシカルボニル）－５－（トリフルオロメチル）－安息香酸（２．６５ｇ、７．７７ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ボラン（１９．４ｍＬ、１９．４ｍｍｏｌ、ＴＨＦ中１Ｍ）を加えた。この溶液を室温で６時間撹拌した。次にメタノール（１０ｍＬ）を加えることにより反応をクエンチした。混合物を濃縮した。残渣をクロマトグラフィーＡによって精製して、表題化合物を得た（１．４０ｇ、８４％）。
[0386] ステップ４：２－（ブロモメチル）－５－ホルミル－３－（トリフルオロメチル）－安息香酸メチルの合成。ＥｔＯＡｃ（７０ｍＬ）中の２－（ブロモメチル）－５－（ヒドロキシメチル）－３－（トリフルオロメチル）－安息香酸メチル（７．１ｇ、２１．７１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、２－ヨードキシ安息香酸（９．１ｇ、３２．５ｍｍｏｌ）を加えた。この反応物を７０℃で３時間撹拌した。固体をろ過によって除去し、ろ液を真空濃縮した。残渣をクロマトグラフィーＡによって精製して、表題化合物を得た（６．６ｇ、９４％）。
実施例Ｂ：（Ｒ）－６－（（４，４－ジフルオロ－３－メチルピペリジン－１－イル）メチル）－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－１－オンの合成
Figure 0007587528000091
[0387] ＤＣＭ（３００．００ｍＬ）中の（３Ｒ）－４，４－ジフルオロ－３－メチルピペリジン塩酸塩（５．００ｇ、２９．１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＴＥＡ（２４．２ｍＬ、１７５ｍｍｏｌ）及びトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（３７．１ｇ、１７５ｍｍｏｌ）を加えた。この懸濁液を１０分間撹拌し、次に０℃に冷却した後、２０ｍＬのＤＣＭ中の２－（ブロモメチル）－５－ホルミル－３－（トリフルオロメチル）安息香酸メチル（９．４７ｇ、２９．１ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を室温で約１２時間撹拌した。反応を飽和塩化アンモニウムでクエンチし、続いてＤＣＭを使用して一般的ワークアップ手順１を行った。溶媒の除去後、粗残渣をメタノール（１００ｍＬ）に溶解させて、次にこの溶液にアンモニア（メタノール中７Ｎ、１００ｍＬ）を加えた。混合物を室温で１２時間撹拌した。粗製物を濃縮し、クロマトグラフィーＢによって精製して、表題化合物を得た（７．１０ｇ、７０．０％）。
実施例Ｃ：４－シクロプロピル－１－オキソ－２Ｈ，３Ｈ－ピロロ［３，４－ｃ］ピリジン－６－カルバルデヒド
Figure 0007587528000092
[0388] ステップ１：３－アミノ－６－クロロ－２－ヨードピリジン－４－カルボン酸の合成。ＤＭＦ（１．４Ｌ）中の５－アミノ－２－クロロピリジン－４－カルボン酸（１００．０ｇ、５７９．４７ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ－ヨードスクシンイミド（１９５．６ｇ、８６９．２１ｍｍｏｌ）を０～１０℃で少量ずつ加えた。３０分間撹拌した後、得られた混合物を８０℃に加熱し、１６時間撹拌した。水を加えることにより反応混合物をクエンチし、続いて一般的ワークアップ手順１を行うことにより表題化合物を得て（１４０．０ｇ、粗製）、これを精製することなく次のステップで使用した。
[0389] ステップ２：３－アミノ－６－クロロ－２－ヨードピリジン－４－カルボン酸メチルの合成。メタノール（９０．０ｍＬ）及びＤＣＭ（９００ｍＬ）中の３－アミノ－６－クロロ－２－ヨードピリジン－４－カルボン酸（７０．０ｇ、２３４．８０ｍｍｏｌ）の混合物に、ＴＭＳＣＨＮ２（１７６ｍＬ、ヘキサン中２Ｍ）を０℃で滴下して加えた。得られた混合物を室温で１６時間撹拌した。反応が完了したところで、有機溶媒を真空下で除去した。粗残渣を石油エーテル中１５％酢酸エチルでトリチュレートした。固体をろ過によって回収し、乾燥させることにより表題化合物を得て（６５．０ｇ、粗製）、これを精製することなく次のステップで使用した。
[0390] ステップ３：３－アミノ－６－クロロ－２－シクロプロピルピリジン－４－カルボン酸メチルの合成。ジオキサン（１．５Ｌ）中の３－アミノ－６－クロロ－２－ヨードピリジン－４－カルボン酸メチル（４５．０ｇ、１４４．２３ｍｍｏｌ）、シクロプロピルボロン酸（４９．６ｇ、５７６．９２ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（５９．７ｇ、４３２．６９ｍｍｏｌ）、及びＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（１０．５ｇ、１４．４２ｍｍｏｌ）の脱気した混合物をＮ２雰囲気下にて１００℃で１６時間撹拌した。固体をろ去し、ろ液を真空下で濃縮した。粗残渣を酢酸エチル及び水に溶解させて、続いて一般的ワークアップ手順１を行った後、粗製物をクロマトグラフィーＡによって精製して、表題化合物を得た（２２．１ｇ、３ステップで６７％）。
[0391] ステップ４：６－クロロ－２－シクロプロピル－３－ヨードピリジン－４－カルボン酸メチルの合成。ジクロロメタン（１．５Ｌ）中の３－アミノ－６－クロロ－２－シクロプロピルピリジン－４－カルボン酸メチル（２５．０ｇ、１１０．６２ｍｍｏｌ）の混合物に、ｔ－ＢｕＯＮＯ（１７．０ｇ、１６９．００ｍｍｏｌ）及びＢＦ３・Ｅｔ２Ｏ（１９．０ｇ、２６４．７０ｍｍｏｌ）を順次、Ｎ２雰囲気下にて０℃で滴下して加えた。得られた混合物を室温で２時間撹拌した。ヘキサンを加えることにより反応混合物をクエンチした。固体をろ過によって回収し、乾燥させることにより、６－クロロ－２－シクロプロピル－４－（メトキシカルボニル）ピリジン－３－ジアゾニウムテトラフルオロホウ酸塩を得て（３３．４ｇ）、これを水（２５０．０ｍＬ）中のＫＩ（３４．１ｇ、２０５．５２ｍｍｏｌ）の混合物に５０℃で少量ずつ加えた。得られた混合物を５０℃で２時間撹拌した。反応が完了したところで、続いて一般的ワークアップ手順１を行い、得られた残渣をクロマトグラフィーＡによって精製して、表題化合物を得た（２３．０ｇ、２ステップで６２％）。
[0392] ステップ５：６－クロロ－２－シクロプロピル－３－メチルピリジン－４－カルボン酸メチルの合成。ジオキサン（５００ｍＬ）中の６－クロロ－２－シクロプロピル－３－ヨードピリジン－４－カルボン酸メチル（２３．０ｇ、６８．０５ｍｍｏｌ）、メチルボロン酸（１６．３ｇ、２７２．２０ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（４．９ｇ、６．８１ｍｍｏｌ）、及びＫ２ＣＯ３（２８．２ｇ、２０４．１５ｍｍｏｌ）の脱気した混合物をＮ２雰囲気下にて９０℃で１６時間撹拌した。固体をろ去し、ろ液を真空下で濃縮した。粗残渣を酢酸エチル及び水に溶解させて、続いて一般的ワークアップ手順１を行った後、粗製物をクロマトグラフィーＡによって精製して、表題化合物を得た（１２．５ｇ、８３％）。
[0393] ステップ６：３－（ブロモメチル）－６－クロロ－２－シクロプロピルピリジン－４－カルボン酸メチルの合成。ＣＣｌ４（１５０．０ｍＬ）中の６－クロロ－２－シクロプロピル－３－メチルピリジン－４－カルボン酸メチル（１２．５ｇ、５５．５６ｍｍｏｌ）、ＮＢＳ（１９．８ｇ、１１１．１１ｍｍｏｌ）、及びＢＰＯ（４．０ｇ、１６．６７ｍｍｏｌ）の混合物をＮ２雰囲気下にて８０℃で１６時間撹拌した。反応が完了したところで、固体をろ去し、ろ液を真空下で濃縮した。残渣をクロマトグラフィーＡによって精製して、表題化合物を得た（７．８ｇ、５０％）。
[0394] ステップ７：６－クロロ－４－シクロプロピル－２Ｈ，３Ｈ－ピロロ［３，４－ｃ］ピリジン－１－オンの合成。ＮＨ３（ＭｅＯＨ中７Ｍ、８０．０ｍＬ）中の３－（ブロモメチル）－６－クロロ－２－シクロプロピルピリジン－４－カルボン酸メチル（７．８ｇ、２５．８３ｍｍｏｌ）の混合物をＮ２雰囲気下にて室温で１６時間撹拌した。得られた混合物をろ過し、固体を回収し、メタノールで洗浄して、６－クロロ－４－シクロプロピル－２Ｈ，３Ｈ－ピロロ［３，４－ｃ］ピリジン－１－オンを得た（５．０ｇ、９２．１％）。
[0395] ステップ８：４－シクロプロピル－６－エテニル－２Ｈ，３Ｈ－ピロロ［３，４－ｃ］ピリジン－１－オンの合成。ＴＨＦ／水（ｖ／ｖ、１０／１、２２０．０ｍＬ）中の６－クロロ－４－シクロプロピル－２Ｈ，３Ｈ－ピロロ［３，４－ｃ］ピリジン－１－オン（４．３ｇ、４３．９６ｍｍｏｌ）、カリウムビニルトリフルオロボラート（１１．８ｇ、８７．９１ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２・ＣＨ２Ｃｌ２（３．６ｇ、４．３９ｍｍｏｌ）及びＣｓ２ＣＯ３（２０．８ｇ、１３１．８８ｍｍｏｌ）の脱気した混合物をＮ２雰囲気下にて８０℃で４時間撹拌した。反応が完了したところで、溶媒を真空下で除去した。粗残渣を酢酸エチル及び水で溶解させて、続いて一般的ワークアップ手順１を行い、得られた残渣をクロマトグラフィーＢによって精製して、表題化合物を得た（３．５ｇ、８７％）。
[0396] ステップ９：４－シクロプロピル－１－オキソ－２Ｈ，３Ｈ－ピロロ［３，４－ｃ］ピリジン－６－カルバルデヒドの合成。テトラヒドロフラン（５０ｍＬ）及び水（２０ｍＬ）中の４－シクロプロピル－６－エテニル－２Ｈ，３Ｈ－ピロロ［３，４－ｃ］ピリジン－１－オン（３．５ｇ、１７．５０ｍｍｏｌ）及び４－メチルモルホリンＮ－オキシド（６．１ｇ、５２．５０ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃でＫ２ＯＳＯ４・２Ｈ２Ｏ（１２７．４ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を室温で１６時間撹拌した。ＮａＨＳＯ３（１０．２ｇ）を加えることにより反応混合物をクエンチし、室温で１０分間撹拌した。次にこの混合物に水（３００．０ｍＬ）を加え、混合物を酢酸エチルで抽出した。水層を回収して、４－シクロプロピル－６－（１，２－ジヒドロキシエチル）－２Ｈ，３Ｈ－ピロロ［３，４－ｃ］ピリジン－１－オン（３５０ｍＬ）の粗溶液を得た。シリカゲル（６５．６ｇ）を入れた三つ口フラスコに、激しく撹拌しながら水（３２．８ｍＬ）中のＮａＩＯ４（７．５ｇ、３５．００ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して加えた。室温で２０分間撹拌した後、得られた混合物に、激しく撹拌しながら４－シクロプロピル－６－（１，２－ジヒドロキシエチル）－２Ｈ，３Ｈ－ピロロ［３，４－ｃ］ピリジン－１－オンの粗溶液（水中３５０．０ｍＬ）を加えた。得られた混合物を室温で４時間撹拌した。反応が完了したところで、固体をろ去し、ろ液をＤＣＭで抽出した。合わせた有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させて、真空下で濃縮した。残渣をクロマトグラフィーＡによって精製して、表題化合物を得た（１．７ｇ、２ステップで４８％）。
実施例Ｄ：（Ｒ）－４－シクロプロピル－６－（（４，４－ジフルオロ－３－メチルピペリジン－１－イル）メチル）－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－ピロロ［３，４－ｃ］ピリジン－１－オン
Figure 0007587528000093
[0397] ＤＣＭ（１７ｍＬ）中の混合物４－シクロプロピル－１－オキソ－２Ｈ，３Ｈ－ピロロ［３，４－ｃ］ピリジン－６－カルバルデヒド（８４０ｍｇ、４．１６ｍｍｏｌ）、（Ｒ）－４，４－ジフルオロ－３－メチルピペリジン塩酸塩（７８３ｍｇ、４．５７ｍｍｏｌ）、及びＴＥＡ（６３６μＬ、４．５６ｍｍｏｌ）を室温で１０分間撹拌した後、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（９６９ｍｇ、４．５７ｍｍｏｌ）を加えた。１．５時間後、追加のトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（１７７ｍｇ）を加えた。この反応物を一晩撹拌した後、重炭酸ナトリウム水溶液でクエンチし、続いてＤＣＭを使用して一般的ワークアップ手順１を行った。粗材料をクロマトグラフィーＢによって精製し、続くクロマトグラフィーＣにより表題化合物を得た（６２６ｍｇ、４７％）。
実施例Ｅ：（Ｓ）－４－シクロプロピル－６－（（３－メチルピペリジン－１－イル）メチル）－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－ピロロ［３，４－ｃ］ピリジン－１－オン
Figure 0007587528000094
[0398] ＤＣＥ（３４ｍＬ）中の４－シクロプロピル－１－オキソ－２Ｈ，３Ｈ－ピロロ［３，４－ｃ］ピリジン－６－カルバルデヒド（１．０ｇ、４．９５ｍｍｏｌ）、（３Ｓ）－３－メチルピペリジン塩酸塩（８０４ｍｇ、５．９３ｍｍｏｌ）、及びＴＥＡ（０．６９ｍＬ、４．５６ｍｍｏｌ）の溶液を室温で１５分間撹拌した後、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（１．３６ｇ、６．４３ｍｍｏｌ）を加えた。この反応物を一晩撹拌した後、重炭酸ナトリウム水溶液でクエンチし、続いてＤＣＭを使用して一般的ワークアップ手順１を行った。粗材料をクロマトグラフィーＢによって精製して、表題化合物を得た（１．１ｇ、７７％）。
実施例Ｆ：（Ｓ）－４－シクロプロピル－６－（（３－（トリフルオロメチル）ピペリジン－１－イル）メチル）－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－ピロロ［３，４－ｃ］ピリジン－１－オン
Figure 0007587528000095
[0399] ＤＣＥ（３．４ｍＬ）中の溶液４－シクロプロピル－１－オキソ－２Ｈ，３Ｈ－ピロロ［３，４－ｃ］ピリジン－６－カルバルデヒド（１００ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）、（３Ｓ）－３－（トリフルオロメチル）ピペリジン塩酸塩（９４ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）、及びＴＥＡ（０．０６９ｍＬ、０．４９ｍｍｏｌ）を室温で１５分間撹拌した後、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（１３６ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ）を加えた。この反応物を一晩撹拌した後、重炭酸ナトリウム水溶液でクエンチし、続いてＤＣＭを使用して一般的ワークアップ手順１を行った。粗材料をクロマトグラフィーＢによって精製して、表題化合物を得た（９１ｍｇ、５４％）。
実施例Ｇ：（１ｒ，３ｒ）－３－（３－アミノフェニル）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル
Figure 0007587528000096
[0400] ステップ１：２－（３－シアノシクロブチリデン）酢酸メチルの合成。ＴＨＦ（２．５０Ｌ）中のＮａＨ（２０．２ｇ、５０４ｍｍｏｌ、６０．０％純度、１．２０当量）の溶液に、０℃でＴＨＦ（２５０ｍＬ）中の２－（ジメトキシホスホリル）酢酸メチル（８４．３ｇ、４６２ｍｍｏｌ、６６．９ｍＬ、１．１０当量）の溶液を加えた。この混合物を０℃で１時間撹拌した。次に混合物にＴＨＦ（２５０ｍＬ）中の３－オキソシクロブタン－１－カルボニトリル（４０．０ｇ、４２０ｍｍｏｌ、１．００当量）の溶液を加えた。この混合物を２５℃に加温した後、混合物を２５℃で１２時間撹拌した。２つのバッチの反応混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（４．０Ｌ）に注入し、酢酸エチル（４．００Ｌ×２）で抽出した。合わせた有機層をブライン（２．０Ｌ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させて、ろ過し、濃縮した。残渣をクロマトグラフィーＡによって精製して、表題化合物を得た（８１．７ｇ、６４．２％収率）。
[0401] ステップ２：２－（（１ｒ，３ｒ）－１－（３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）フェニル）－３－シアノシクロブチル）酢酸メチル及び２－（（１ｓ，３ｓ）－１－（３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）フェニル）－３－シアノシクロブチル）酢酸メチルの合成。ジオキサン（１．００Ｌ）及びＫＯＨ（１．５０Ｍ、５５０．ｍＬ、１．３０当量）中の２－（３－シアノシクロブチリデン）酢酸メチル（９６．０ｇ、６３５ｍｍｏｌ、１．００当量）の溶液に、２５℃で（３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）フェニル）ボロン酸（２２５ｇ、９５２ｍｍｏｌ、１．５０当量）及び［Ｒｈ（ｃｏｄ）Ｃｌ］２（１５．７ｇ、３１．８ｍｍｏｌ、０．０５当量）を加えた。次にこの混合物を２５℃で１２時間撹拌した。２つのバッチの反応混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（２．００Ｌ）に注入し、続いて一般的ワークアップ手順１を行った。残渣をクロマトグラフィーＡによって精製すると、２－（（１ｒ，３ｒ）－１－（３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）フェニル）－３－シアノシクロブチル）酢酸メチルが初めに溶出した（１３３ｇ、２７．４％収率）。２番目の溶出化合物を逆相クロマトグラフィーによって更に精製して、異性体２－（（１ｓ，３ｓ）－１－（３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）フェニル）－３－シアノシクロブチル）酢酸メチルを得た（１０５ｇ、２９３ｍｍｏｌ、２３．１％収率）。
[0402] ステップ３：２－（（１ｒ，３ｒ）－１－（３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）フェニル）－３－シアノシクロブチル）酢酸の合成。ＴＨＦ（６００ｍＬ）中の２－（（１ｒ，３ｒ）－１－（３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）フェニル）－３－シアノシクロブチル）酢酸メチル（１３３ｇ、３４７ｍｍｏｌ、１．００当量）の溶液に、２５℃でＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（１８．２ｇ、４３４ｍｍｏｌ、１．２５当量）、及びＭｅＯＨ（１２０ｍＬ）及びＨ２Ｏ（２４０ｍＬ）を加えた。次にこの混合物を２５℃で１２時間撹拌した。反応混合物を真空下２５℃で濃縮した。次に混合物を０．５Ｎ ＨＣｌでｐＨ＝３～４に調整して沈殿物を生じさせ、それをろ過によって回収し、真空下で乾燥させた。このろ過ケーキを酢酸エチル（１．５０Ｌ）に溶解させて、混合物を乾燥させ、ろ過し、濃縮して、表題化合物を得た（１１０ｇ、粗製）。
[0403] ステップ４：（３－（（１ｒ，３ｒ）－３－シアノ－１－（（５－メルカプト－４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブチル）フェニル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチルの合成。ＤＭＦ（３５０ｍＬ）及びＤＩＰＥＡ（２８．９ｇ、２２３ｍｍｏｌ、３９．０ｍＬ、１．００当量）中の２－（（１ｒ，３ｒ）－１－（３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）フェニル）－３－シアノシクロブチル）酢酸（７８．０ｇ、２２３ｍｍｏｌ、１．００当量）及びＮ－メチルヒドラジンカルボチオアミド（３５．３ｇ、３３５ｍｍｏｌ、１．５０当量）の溶液に、２５℃でＨＡＴＵ（１１０ｇ、２９１ｍｍｏｌ、１．３０当量）を加えた。次にこの混合物を２５℃で４時間撹拌した。この混合物に、２５℃でＮａＯＨ（１．００Ｍ、４７０ｍＬ、２．１０当量）を加えた。次に混合物を５０℃に加熱し、５０℃で１２時間撹拌した。混合物を２５℃に冷却した後、反応混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（１．３０Ｌ）に注入した。固体が沈殿し、それをろ過によって回収し、ろ過ケーキを真空下で乾燥させた。このろ過ケーキを酢酸エチル（１．００Ｌ）に溶解させて、混合物を乾燥させ、ろ過し、濃縮して、表題化合物を得た（１００ｇ、粗製）。
[0404] ステップ５：（３－（（１ｒ，３ｒ）－３－シアノ－１－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブチル）フェニル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチルの合成。ＤＣＭ（１．００Ｌ）及び酢酸（２３３ｇ、３．８９ｍｏｌ、２２２ｍＬ、１４．０当量）中の（３－（（１ｒ，３ｒ）－３－シアノ－１－（（５－メルカプト－４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブチル）フェニル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（１２２ｇ、２７７ｍｍｏｌ、１．００当量）の溶液に、０℃でＨ２Ｏ２（７８．８ｇ、６９４ｍｍｏｌ、６６．８ｍＬ、３０．０％純度、２．５０当量）を加えた。次に反応混合物を３０℃で２時間撹拌した。この反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（２．００Ｌ）に注入し、ＤＣＭ（５００ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（６００ｍＬ）で洗浄した。次に有機層を乾燥させて、ろ過し、濃縮した。残渣をクロマトグラフィーＢによって精製して、表題化合物を得た（８３．０ｇ、７８．９％収率）。
[0405] ステップ６：（１ｒ，３ｒ）－３－（３－アミノフェニル）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリルの合成。ＤＣＭ（５００ｍＬ）中の（３－（（１ｒ，３ｒ）－３－シアノ－１－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブチル）フェニル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（５０．０ｇ、１３２ｍｍｏｌ、１．００当量）の溶液に、２５℃でＴＭＳＩ（１０６ｇ、５２８ｍｍｏｌ、７１．９ｍＬ、４．００当量）を加えた。次にこの混合物を２５℃で２時間撹拌した。この反応混合物に水（３００ｍＬ）を加えた。水相を分離し、飽和Ｎａ２ＣＯ３溶液でｐＨ＝７～８に調整し、ＤＣＭ：メタノール＝１０：１（５００ｍＬ×５）で抽出した。合わせた有機層を乾燥させて、ろ過し、濃縮した。残渣をクロマトグラフィーＢによって精製して、表題化合物を得た（１０．５ｇ、３８．６ｍｍｏｌ、２９．２％収率）。
実施例Ｈ：（１ｒ，３ｒ）－３－（３－アミノフェニル）－１－メチル－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル
Figure 0007587528000097
[0406] ステップ１：２－（３－シアノ－３－メチルシクロブチリデン）酢酸メチルの合成。１－メチル－３－オキソシクロブタン－１－カルボニトリル（２．５ｇ、２２．９ｍｍｏｌ）を使用して、実施例Ｇ、ステップ１と同様に反応を行い、表題化合物（３．５ｇ、８３％）を生成した。
[0407] ステップ２：２－［（ｔｒａｎｓ）－１－（３－［（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ］フェニル）－３－シアノ－３－メチルシクロブチル］酢酸メチルの合成。１－メチル－３－オキソシクロブタン－１－カルボニトリル（３．５ｇ、２１．２ｍｍｏｌ）を使用して、実施例Ｇ、ステップ２と同様に反応を行い、表題化合物（１．１ｇ、１５％）を２番目の溶出異性体として生成した。
[0408] ステップ３：２－（（１ｒ，３ｒ）－１－（３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）フェニル）－３－シアノ－３－メチルシクロブチル）酢酸の合成。２－［（ｔｒａｎｓ）－１－（３－［（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ］フェニル）－３－シアノ－３－メチルシクロブチル］酢酸メチル（１．１ｇ、３．１ｍｍｏｌ）を使用して、実施例Ｇ、ステップ３と同様に反応を行った。混合物を濃縮乾固させることにより反応物をワークアップした後、水（５０ｍＬ）を加え、この溶液を１Ｎ ＨＣｌ（３．８ｍＬ）でｐＨ約５に達するように酸性化し、続く一般的ワークアップ手順１により表題化合物を得た（１．０５ｇ、３．１ｍｍｏｌ）。
[0409] ステップ４：（３－（（１ｒ，３ｒ）－３－シアノ－１－（（５－メルカプト－４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）－３－メチルシクロブチル）フェニル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチルの合成。２－（（１ｒ，３ｒ）－１－（３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）フェニル）－３－シアノ－３－メチルシクロブチル）酢酸（１．０５ｇ、３．１ｍｍｏｌ）を使用して、実施例Ｇ、ステップ４と同様に反応を行い、表題化合物を得た（１．２ｇ、９１％）。
[0410] ステップ５：（３－（（１ｒ，３ｒ）－３－シアノ－３－メチル－１－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブチル）フェニル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチルの合成。（３－（（１ｒ，３ｒ）－３－シアノ－１－（（５－メルカプト－４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）－３－メチルシクロブチル）フェニル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（６４０ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）を使用して、実施例Ｇ、ステップ５と同様に反応を行い、表題化合物（４４０ｍｇ、７５％）を生成した。
[0411] ステップ６：（１ｒ，３ｒ）－３－（３－アミノフェニル）－１－メチル－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリルの合成。（３－（（１ｒ，３ｒ）－３－シアノ－３－メチル－１－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブチル）フェニル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（４４０ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）を使用して、実施例Ｇ、ステップ６と同様に反応を行い、表題化合物（２９０ｍｇ、８９％）を生成した。
実施例Ｉ：（１ｒ，３ｒ）－３－（３－ブロモフェニル）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル
Figure 0007587528000098
[0412] （１ｒ，３ｒ）－３－（３－ブロモフェニル）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル。アセトニトリル（４．５ｍＬ）中の実施例Ｇ（１００ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）及びＣｕＢｒ２（１６７ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）の撹拌した懸濁液に、亜硝酸ｔ－ブチル（６７μＬ、０．５６ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。この反応物を１時間撹拌した後、容積が半分になるまで濃縮し、ＮＨ４ＯＨ（約６Ｍ、１５ｍＬ）でクエンチし、続いて一般的ワークアップ手順１を行い、クロマトグラフィーＢによって精製して、表題化合物（６０％収率）を提供した。
実施例１：Ｎ－（３－（（１ｒ，３ｒ）－３－シアノ－１－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブチル）フェニル）－２－シクロプロピル－６－メチルピリミジン－４－カルボキサミド
Figure 0007587528000099
[0413] アセトニトリル（１．６ｍＬ）中の実施例Ｇ（５３ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）、Ｎ－メチルモルホリン（６５μＬ、０．５９ｍｍｏｌ）、及び２－シクロプロピル－６－メチルピリミジン－４－カルボン酸（３５ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）の溶液に、１－プロパンホスホン酸無水物溶液（ＤＭＦ中５０％、０．１４ｍＬ、０．２５ｍｍｏｌ）を加えた。この反応物を室温で一晩撹拌した後、０．５Ｎ ＨＣｌ水溶液（５ｍＬ）及び水（５ｍＬ）を加えた。続いて水溶液のｐＨを約７に保ちながら一般的ワークアップ手順１を行い、合わせた有機分を乾燥させて、ろ過した。クロマトグラフィーＢにより、表題化合物を得た（１１ｍｇ、１５％）。ＬＣＭＳ：Ｃ２４Ｈ２５Ｎ７Ｏ理論値４２７．２、実測値４２８．４［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ９．９０（ｓ，１Ｈ），７．８７（ｓ，１Ｈ），７．８０－７．７０（ｍ，２Ｈ），７．４０（ｔ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．２９（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），６．７９（ｄｄｄ，Ｊ＝７．７，１．９，１．０Ｈｚ，１Ｈ），３．２９（ｓ，２Ｈ），３．１５－３．０８（ｍ，１Ｈ），２．９７－２．８４（ｍ，４Ｈ），２．７７（ｓ，３Ｈ），２．５３（ｓ，３Ｈ），２．３２（ｔｔ，Ｊ＝８．０，４．７Ｈｚ，１Ｈ），１．１９（ｔｔ，Ｊ＝５．７，３．０Ｈｚ，２Ｈ），１．１２（ｄｔ，Ｊ＝８．１，３．０Ｈｚ，２Ｈ）．
実施例２：Ｎ－（３－（（１ｓ，３ｓ）－３－シアノ－１－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブチル）フェニル）－２－シクロプロピル－６－メチルピリミジン－４－カルボキサミド
Figure 0007587528000100
[0414] 実施例Ｇ、ステップ３～６からの反応と、続く実施例Ｇ、ステップ２からの２－（（１ｓ，３ｓ）－１－（３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）フェニル）－３－シアノシクロブチル）酢酸メチルを使用した実施例１からのアミド形成を実施して、逆相ＨＰＬＣ後に表題化合物（２０ｍｇ、５５％）を得ることにより、表題化合物を入手した。ＬＣＭＳ：Ｃ２４Ｈ２５Ｎ７Ｏ理論値４２７．２、実測値４２８．４［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ９．９０（ｓ，１Ｈ），８．７１（ｓ，１Ｈ），７．８３（ｓ，１Ｈ），７．７８－７．６７（ｍ，１Ｈ），７．３９（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．２９（ｔ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｄｔ，Ｊ＝８．０，１．３Ｈｚ，１Ｈ），３．６１（ｐ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），３．４８（ｓ，２Ｈ），３．１１－２．９７（ｍ，２Ｈ），２．９０（ｓ，３Ｈ），２．８０（ｔｄ，Ｊ＝９．４，２．６Ｈｚ，２Ｈ），２．６１（ｓ，３Ｈ），２．４０（ｔｔ，Ｊ＝８．１，４．７Ｈｚ，１Ｈ），１．２９（ｔｔ，Ｊ＝５．９，３．１Ｈｚ，２Ｈ），１．２２（ｄｔ，Ｊ＝８．１，３．１Ｈｚ，２Ｈ）．
実施例３：（１ｒ，３ｒ）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）－３－（３－（１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）シクロブタン－１－カルボニトリル
Figure 0007587528000101
[0415] 実施例Ｇ（３１ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）が入ったバイアルに、アセトニトリル（１．０ｍＬ）及び２－（ブロモメチル）－３－（トリフルオロメチル）安息香酸メチル（３５ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）を入れた。硝酸銀（２６ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を水（０．５ｍＬ）に溶解させて滴下して加え、この反応物を室温で一晩撹拌した。固形重炭酸塩を加えてｐＨを約８に調整し、続いてブライン（１ｍＬ）を加えた。反応物をろ過し、ろ液をＤＣＭ：イソプロパノール（９：１、３×１５ｍＬ）で抽出し、合わせた有機分を乾燥させて、ろ過した後、逆相ＨＰＬＣ精製（１０分間にわたる０．１％ＴＦＡ含有水中１０～９５％ＭｅＣＮグラジエント）により、表題化合物（６．４ｍｇ、１２％）を生じさせた。ＬＣＭＳ：Ｃ２４Ｈ２０Ｆ３Ｎ５Ｏ理論値４５１．２、実測値４５２．３［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ８．１３（ｓ，１Ｈ），８．０５（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．９５（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．８４（ｄｄｄ，Ｊ＝８．１，２．２，０．９Ｈｚ，１Ｈ），７．７３（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．４７（ｔ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），７．３７（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．９２－６．８６（ｍ，１Ｈ），５．０１（ｓ，２Ｈ），３．４１（ｓ，２Ｈ），３．１６－３．０７（ｍ，１Ｈ），２．９６（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，４Ｈ），２．８３（ｄ，Ｊ＝１３．４Ｈｚ，５Ｈ）．
実施例４：（１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－（（５－アザスピロ［２．４］ヘプタン－５－イル）メチル）－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル
Figure 0007587528000102
[0416] ステップ１：（１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－ホルミル－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリルの合成。実施例Ｇ（１３６ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）及び２－（ブロモメチル）－５－ホルミル－３－（トリフルオロメチル）安息香酸メチル（１６６ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）を使用して、実施例３と同様に環化反応を行うことにより粗表題化合物を得て（２４０ｍｇ、９８％）、これを精製することなく使用した。
[0417] ステップ２：（１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－（（５－アザスピロ［２．４］ヘプタン－５－イル）メチル）－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリルの合成。ＤＣＥ（０．４２ｍＬ）中の（１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－ホルミル－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル（５０ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）、５－アザスピロ［２．４］ヘプタン塩酸塩（２１ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）、及びＴＥＡ（１４．６μＬ、０．１０ｍｍｏｌ）の溶液を１５分間撹拌した後、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（３３ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）を加えた。この反応物を一晩撹拌した後、重炭酸ナトリウム水溶液でクエンチし、続いてＤＣＭを使用して一般的ワークアップ手順１を行った。粗材料をクロマトグラフィーＢによって精製し、続くクロマトグラフィーＣにより表題化合物を得た（１０ｍｇ、１７％）。ＬＣＭＳ：Ｃ３１Ｈ３１Ｆ３Ｎ６Ｏ理論値５６０．３、実測値５６１．４［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ８．００（ｓ，１Ｈ），７．９４（ｓ，１Ｈ），７．８９（ｓ，１Ｈ），７．８８－７．８３（ｍ，１Ｈ），７．４３（ｔ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３７（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８８（ｄｄｄ，Ｊ＝７．７，１．８，０．９Ｈｚ，１Ｈ），４．９８（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，２Ｈ），３．８１（ｓ，２Ｈ），３．３４（ｓ，２Ｈ），３．２１－３．１０（ｍ，１Ｈ），３．０４－２．９０（ｍ，４Ｈ），２．７７（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，５Ｈ），２．５２（ｓ，２Ｈ），１．８３（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），０．５５（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，４Ｈ）．
実施例５：（１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－（（２－エチル－１，４－オキサゼパン－４－イル）メチル）－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル
Figure 0007587528000103
[0418] （１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－ホルミル－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－１－メチル－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル（６０ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）及び２－エチル－１，４－オキサゼパン（３２ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）を使用して、実施例１３と同様に還元的アミノ化を行い、クロマトグラフィーＣ後に表題化合物を得た（２９ｍｇ、３９％）。ＬＣＭＳ：Ｃ３２Ｈ３５Ｆ３Ｎ６Ｏ２理論値５９２．３、実測値５９３．５［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ８．０３（ｓ，１Ｈ），７．９７（ｓ，１Ｈ），７．９３－７．８４（ｍ，２Ｈ），７．４４（ｔ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），７．３７（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．９１－６．８２（ｍ，１Ｈ），４．９９（ｓ，２Ｈ），３．９４－３．７９（ｍ，３Ｈ），３．７９－３．６７（ｍ，１Ｈ），３．５０（ｔｄｄ，Ｊ＝７．７，５．０，２．４Ｈｚ，１Ｈ），３．３４（ｓ，２Ｈ），３．２２－３．０７（ｍ，１Ｈ），３．０３－２．９１（ｍ，４Ｈ），２．８８－２．７２（ｍ，５Ｈ），２．６４（ｄｄｄ，Ｊ＝１２．８，９．０，３．９Ｈｚ，１Ｈ），２．４２（ｄｄ，Ｊ＝１３．３，８．９Ｈｚ，１Ｈ），１．９６－１．８５（ｍ，１Ｈ），１．８６－１．７６（ｍ，１Ｈ），１．４５－１．２６（ｍ，２Ｈ），０．８６（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ）．
実施例６：（１ｒ，３ｒ）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）－３－（３－（６－（（（Ｒ）－２－メチルモルホリノ）メチル）－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）シクロブタン－１－カルボニトリル
Figure 0007587528000104
[0419] （１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－ホルミル－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル（３５ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）及び（２Ｒ）－２－メチルモルホリン（２２ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）を使用して、実施例１４、ステップ２と同様に還元的アミノ化を行い、０．１％ＴＦＡ添加剤を使用したクロマトグラフィーＣ後に表題化合物を得た。生成物を含有する画分を濃縮し、ＤＣＭに溶解させて、重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄した。有機層を乾燥させて、濃縮することにより、生成物を得た（１５ｍｇ、３６％）。ＬＣＭＳ：Ｃ３０Ｈ３１Ｆ５Ｎ６Ｏ２理論値５６４．２、実測値５６５．５［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ８．０１（ｓ，１Ｈ），７．９８－７．８３（ｍ，３Ｈ），７．４３（ｔ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３７（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８８（ｄｄｄ，Ｊ＝７．８，１．８，０．９Ｈｚ，１Ｈ），４．９９（ｓ，２Ｈ），３．８１（ｄｄｄ，Ｊ＝１１．３，３．４，１．６Ｈｚ，１Ｈ），３．６８（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，２Ｈ），３．６１（ｄｄｔ，Ｊ＝１１．５，９．３，２．４Ｈｚ，２Ｈ），３．３４（ｓ，２Ｈ），３．２１－３．０８（ｍ，１Ｈ），３．０４－２．９０（ｍ，４Ｈ），２．７３（ｄｔ，Ｊ＝１１．２，２．０Ｈｚ，１Ｈ），２．６６（ｄｄ，Ｊ＝１１．２，２．１Ｈｚ，１Ｈ），１．８７（ｄｄ，Ｊ＝１１．３，９．８Ｈｚ，１Ｈ），１．０９（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，３Ｈ）．
実施例７：（１ｒ，３ｒ）－１－メチル－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）－３－（３－（６－（（（Ｒ）－２－メチルモルホリノ）メチル）－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）シクロブタン－１－カルボニトリル
Figure 0007587528000105
[0420] ステップ１．（１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－ホルミル－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－１－メチル－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリルの合成。実施例Ｈ（２３４ｍｇ、０．８３ｍｍｏｌ）及び２－（ブロモメチル）－５－ホルミル－３－（トリフルオロメチル）安息香酸メチル（２７０ｍｇ、０．８３ｍｍｏｌ）を使用して、実施例３と同様に反応を行い、クロマトグラフィーＢ後に表題化合物を生成した（２００ｍｇ、４９％）。
[0421] ステップ２．（１ｒ，３ｒ）－１－メチル－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）－３－（３－（６－（（（Ｒ）－２－メチルモルホリノ）メチル）－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）シクロブタン－１－カルボニトリルの合成。（１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－ホルミル－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－１－メチル－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル（５３ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）及び（２Ｒ）－２－メチルモルホリン塩酸塩（２２ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）を使用して、実施例４、ステップ２と同様に還元的アミノ化を行い、クロマトグラフィーＣ後に表題化合物を得た（１９ｍｇ、３１％）。ＬＣＭＳ：Ｃ３１Ｈ３３Ｆ３Ｎ６Ｏ２理論値５７８．３、実測値５７９．５［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ８．０２（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，１Ｈ），７．９８－７．８３（ｍ，３Ｈ），７．５１（ｑ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），７．４０（ｔ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），６．９８（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），５．０１（ｓ，２Ｈ），３．８８－３．７６（ｍ，１Ｈ），３．７４－３．５４（ｍ，４Ｈ），３．２０（ｄ，Ｊ＝３．３Ｈｚ，２Ｈ），３．１６－３．０４（ｍ，２Ｈ），２．８８（ｄｔ，Ｊ＝１１．６，２．７Ｈｚ，２Ｈ），２．８１－２．７０（ｍ，４Ｈ），２．６６（ｄｔ，Ｊ＝１１．５，２．０Ｈｚ，１Ｈ），１．８７（ｔ，Ｊ＝１０．６Ｈｚ，１Ｈ），１．６６（ｄ，Ｊ＝１．３Ｈｚ，３Ｈ），１．０９（ｄｄ，Ｊ＝６．４，１．４Ｈｚ，３Ｈ）．
実施例８：Ｎ－（３－（（１ｒ，３ｒ）－３－シアノ－３－メチル－１－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブチル）フェニル）－２－シクロプロピル－６－メチルピリミジン－４－カルボキサミド
Figure 0007587528000106
[0422] 実施例Ｈ（４７ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を使用して、実施例１と同様に反応を行い、クロマトグラフィーＣ後に表題化合物を生じさせた（４５ｍｇ、６１％）。ＬＣＭＳ：Ｃ２５Ｈ２７Ｎ７Ｏ理論値４４１．２、実測値４４２．４［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １０．４２（ｓ，１Ｈ），８．１８（ｓ，１Ｈ），７．８３（ｄｄ，Ｊ＝８．１，２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．７２（ｓ，１Ｈ），７．５９（ｔ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），７．３０（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），６．８１（ｄｄ，Ｊ＝７．８，１．７Ｈｚ，１Ｈ），３．１６（ｓ，２Ｈ），３．０１－２．８９（ｍ，２Ｈ），２．７８（ｄ，Ｊ＝１８．０Ｈｚ，５Ｈ），２．５２（ｓ，３Ｈ），２．３４（ｔｔ，Ｊ＝８．１，４．７Ｈｚ，１Ｈ），１．５８（ｓ，３Ｈ），１．２１－１．０１（ｍ，４Ｈ）．
実施例９：（１Ｓ，３ｓ）－１－メチル－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）－３－（３－（６－（（（Ｒ）－２－メチルモルホリノ）メチル）－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）シクロブタン－１－カルボニトリル
Figure 0007587528000107
[0423] 実施例Ｈ、ステップ２から単離された初めに溶出した異性体を使用して、実施例Ｈ、ステップ３～６と同様に表題化合物を合成した。ステップ６の後、実施例１と同様に反応を行い、クロマトグラフィーＣ後、表題化合物を提供した（２７ｍｇ、３８％）。ＬＣＭＳ：Ｃ３１Ｈ３３Ｆ３Ｎ６Ｏ２理論値５７８．３、実測値５７９．５［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ８．１６（ｓ，１Ｈ），８．００（ｓ，１Ｈ），７．９５（ｓ，１Ｈ），７．８８－７．８０（ｍ，１Ｈ），７．３７－７．２７（ｍ，２Ｈ），６．６８（ｄｄ，Ｊ＝７．８，１．７Ｈｚ，１Ｈ），５．０９（ｓ，２Ｈ），３．８０－３．６２（ｍ，３Ｈ），３．６２－３．４６（ｍ，２Ｈ），３．２６－３．１７（ｍ，２Ｈ），２．７５－２．５５（ｍ，８Ｈ），２．１１（ｔｄ，Ｊ＝１１．４，３．４Ｈｚ，１Ｈ），１．８１（ｔ，Ｊ＝１０．５Ｈｚ，１Ｈ），１．４１（ｓ，３Ｈ），１．０４（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，３Ｈ）．
実施例１０：（１Ｓ，３ｓ）－１－メチル－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）－３－（３－（６－（（（Ｒ）－２－メチルモルホリノ）メチル）－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）シクロブタン－１－カルボニトリル
Figure 0007587528000108
[0424] 実施例Ｈ、ステップ２からの初めに溶出した異性体を使用して、実施例７と同様に表題化合物を合成した。ＬＣＭＳ：Ｃ３１Ｈ３３Ｆ３Ｎ６Ｏ２理論値５７８．３、実測値５７９．５［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ８．１６（ｓ，１Ｈ），８．００（ｓ，１Ｈ），７．９５（ｓ，１Ｈ），７．８８－７．８０（ｍ，１Ｈ），７．３７－７．２７（ｍ，２Ｈ），６．６８（ｄｄ，Ｊ＝７．８，１．７Ｈｚ，１Ｈ），５．０９（ｓ，２Ｈ），３．８０－３．６２（ｍ，３Ｈ），３．６２－３．４６（ｍ，２Ｈ），３．２６－３．１７（ｍ，２Ｈ），２．７５－２．５５（ｍ，８Ｈ），２．１１（ｔｄ，Ｊ＝１１．４，３．４Ｈｚ，１Ｈ），１．８１（ｔ，Ｊ＝１０．５Ｈｚ，１Ｈ），１．４１（ｓ，３Ｈ），１．０４（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，３Ｈ）．
実施例１１：（１Ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－（（（Ｒ）－４，４－ジフルオロ－３－メチルピペリジン－１－イル）メチル）－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル
Figure 0007587528000109
[0425] ジオキサン（０．７２ｍＬ）中の実施例Ｉ（７０ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）、（Ｒ）－６－（（４，４－ジフルオロ－３－メチルピペリジン－１－イル）メチル）－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－１－オン（７４ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）、Ｃｓ２ＣＯ３（１５２ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）、キサントホス（２５ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）、及びＰｄ（ＯＡｃ）２（４．７ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）の混合物を１２０℃で１時間加熱した。この混合物をセライト上で直接濃縮し、クロマトグラフィーＣを用いて精製して、表題化合物を得た（３５ｍｇ、２７％）。ＬＣＭＳ：Ｃ３１Ｈ３１Ｆ５Ｎ６Ｏ理論値５９８．２、実測値５９９．４［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ７．９９（ｓ，１Ｈ），７．９１（ｓ，１Ｈ），７．８６（ｓ，１Ｈ），７．８４（ｄｄ，Ｊ＝８．２，２．２Ｈｚ，１Ｈ），７．４１（ｔ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｄｔ，Ｊ＝７．８，１．２Ｈｚ，１Ｈ），４．９６（ｓ，２Ｈ），３．７１（ｓ，２Ｈ），３．３５－３．２６（ｍ，２Ｈ），３．２０－３．０７（ｍ，１Ｈ），３．０１－２．８５（ｍ，４Ｈ），２．８３－２．６４（ｍ，５Ｈ），２．３７（ｔ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ，１Ｈ），２．１４－１．９７（ｍ，４Ｈ），０．９７（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，３Ｈ）．
実施例１２：（１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－（（（６，６－ジフルオロビシクロ［３．１．０］ヘキサン－３－イル）アミノ）メチル）－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル
Figure 0007587528000110
[0426] （１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－ホルミル－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－１－メチル－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル（３５ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）及び６，６－ジフルオロビシクロ［３．１．０］ヘキサン－３－アミン塩酸塩（２５ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を使用して、実施例４、ステップ２と同様に還元的アミノ化を行い、クロマトグラフィーＣ後に表題化合物を得た。ＬＣＭＳ：Ｃ３１Ｈ２９Ｆ５Ｎ６Ｏ理論値５９６．２、実測値５９７．５［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ８．００（ｓ，１Ｈ），７．９３（ｓ，１Ｈ），７．８６（ｓ，１Ｈ），７．８４（ｄｄ，Ｊ＝８．２，２．２Ｈｚ，１Ｈ），７．４０（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ），４．９５（ｓ，２Ｈ），３．９３（ｓ，２Ｈ），３．３１（ｓ，２Ｈ），３．２１－３．０７（ｍ，２Ｈ），２．９８－２．９１（ｍ，４Ｈ），２．７５（ｓ，３Ｈ），２．２６（ｄｄ，Ｊ＝１３．５，７．２Ｈｚ，２Ｈ），２．０６－２．０２（ｍ，２Ｈ），１．９０－１．７９（ｍ，３Ｈ）．
実施例１３：（１ｒ，３ｒ）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）－３－（３－（６－（（４－メチルアゼパン－１－イル）メチル）－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）シクロブタン－１－カルボニトリル
Figure 0007587528000111
[0427] ＤＣＥ（０．７１ｍＬ）中の（１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－ホルミル－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル（５０ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）、４－メチルアゼパン（２４ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）、及び酢酸（６μＬ、０．１０ｍｍｏｌ）の混合物を１５分間撹拌した後、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（３０ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）を加えた。この反応物を一晩撹拌した後、重炭酸ナトリウム水溶液でクエンチし、続いてＤＣＭを使用して一般的ワークアップ手順１を行った。粗材料をクロマトグラフィーＣによって精製して、表題化合物を得た（２９ｍｇ、４７％）。ＬＣＭＳ：Ｃ３２Ｈ３５Ｆ３Ｎ６Ｏ理論値５７６．３、実測値５７７．５［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ７．９９（ｓ，１Ｈ），７．９３（ｓ，１Ｈ），７．８６（ｓ，１Ｈ），７．８４（ｄｄ，Ｊ＝８．２，２．２Ｈｚ，１Ｈ），７．４１（ｔ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｄｔ，Ｊ＝７．８，１．２Ｈｚ，１Ｈ），４．９５（ｓ，２Ｈ），３．７８（ｓ，２Ｈ），３．３１（ｓ，２Ｈ），３．１９－３．０８（ｍ，１Ｈ），２．９７－２．９０（ｍ，４Ｈ），２．７５（ｓ，３Ｈ），２．７１－２．５３（ｍ，５Ｈ），１．７７－１．５０（ｍ，３Ｈ），１．４０－１．２９（ｍ，２Ｈ），０．９３（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ）．
実施例１４：（１Ｒ，３ｒ）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）－３－（３－（１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）－６－（（（Ｓ）－３－（トリフルオロメチル）ピペリジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）シクロブタン－１－カルボニトリル
Figure 0007587528000112
[0428] （１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－ホルミル－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－１－メチル－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル（３５ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）及び（３Ｓ）－３－（トリフルオロメチル）ピペリジン塩酸塩（２１ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）を使用して、実施例４、ステップ２と同様に還元的アミノ化を行い、クロマトグラフィーＣ後に表題化合物を得た（１９ｍｇ、４１％）。ＬＣＭＳ：Ｃ３１Ｈ３０Ｆ６Ｎ６Ｏ理論値６１６．２、実測値６１７．５［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ７．９８（ｓ，１Ｈ），７．９０（ｓ，１Ｈ），７．８６（ｓ，１Ｈ），７．８４（ｄｄ，Ｊ＝７．９，１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．４１（ｔ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８８－６．８２（ｍ，１Ｈ），４．９６（ｓ，２Ｈ），３．７１（ｓ，２Ｈ），３．３１（ｓ，２Ｈ），３．１７－３．０９（ｍ，１Ｈ），２．９９－２．８８（ｍ，５Ｈ），２．８２（ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，１Ｈ），２．７５（ｓ，３Ｈ），２．４７（ｔ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ，１Ｈ），２．１１－２．００（ｍ，３Ｈ），１．７５（ｄ，Ｊ＝１３．６Ｈｚ，１Ｈ），１．６３－１．５２（ｍ，１Ｈ），１．３２（ｑｄ，Ｊ＝１２．５，４．３Ｈｚ，１Ｈ）．
実施例１５：（１Ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－（（（２Ｒ，６Ｓ）－２，６－ジメチルモルホリノ）メチル）－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル
Figure 0007587528000113
[0429] （１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－ホルミル－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－１－メチル－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル（４０ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）及びｃｉｓ－２，６－ジメチルモルホリン（２０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を使用して、実施例１３と同様に還元的アミノ化を行い、クロマトグラフィーＣ後に表題化合物を得た（２０ｍｇ、４１％）。ＬＣＭＳ：Ｃ２９Ｈ３０Ｆ３Ｎ７Ｏ２理論値５６５．２、実測値５６５．５［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ８．１１（ｓ，１Ｈ），８．０５－７．９３（ｍ，３Ｈ），７．８９（ｓ，１Ｈ），７．７４（ｓ，１Ｈ），７．５２（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．２１（ｄｔ，Ｊ＝７．７，１．２Ｈｚ，１Ｈ），５．０４（ｓ，２Ｈ），３．９０（ｓ，３Ｈ），３．６８－３．５８（ｍ，４Ｈ），３．３６（ｓ，３Ｈ），２．６９（ｄｔ，Ｊ＝１０．５，１．９Ｈｚ，２Ｈ），１．７６（ｔ，Ｊ＝１０．７Ｈｚ，２Ｈ），１．０６（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，６Ｈ）．
実施例１６：（１Ｓ，３ｒ）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）－３－（３－（１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）－６－（（（Ｓ）－２－（トリフルオロメチル）モルホリノ）メチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）シクロブタン－１－カルボニトリル
Figure 0007587528000114
[0430] （１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－ホルミル－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－１－メチル－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル（３０ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）及び（２Ｓ）－３－（トリフルオロメチル）モルホリン塩酸塩（１８ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）を使用して、実施例１４、ステップ２と同様に還元的アミノ化を行い、クロマトグラフィーＣ後に表題化合物を得た（１９ｍｇ、４１％）。ＬＣＭＳ：Ｃ３１Ｈ２８Ｆ６Ｎ６Ｏ２理論値６１８．２、実測値６１９．５［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ８．０４（ｓ，１Ｈ），７．９５（ｓ，１Ｈ），７．９１－７．８４（ｍ，２Ｈ），７．４３（ｔ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３７（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８９（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），５．００（ｓ，２Ｈ），４．１７－４．０６（ｍ，１Ｈ），４．０３－３．９４（ｍ，１Ｈ），３．７８（ｓ，２Ｈ），３．７２（ｔｄ，Ｊ＝１１．４，２．５Ｈｚ，１Ｈ），３．３４（ｓ，２Ｈ），３．２１－３．０９（ｍ，１Ｈ），３．０５－２．８８（ｍ，５Ｈ），２．７８（ｓ，３Ｈ），２．７２（ｄ，Ｊ＝１１．９Ｈｚ，１Ｈ），２．３７－２．２４（ｍ，２Ｈ）．
実施例１７：（１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－（（４，４－ジフルオロアゼパン－１－イル）メチル）－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル
Figure 0007587528000115
[0431] （１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－ホルミル－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－１－メチル－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル（３０ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）及び４，４－ジフルオロアゼパン塩酸塩（１６ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）を使用して、実施例１４、ステップ２と同様に還元的アミノ化を行い、クロマトグラフィーＣ後に表題化合物を得た（２３ｍｇ、５８％）。ＬＣＭＳ：Ｃ３１Ｈ３１Ｆ５Ｎ６Ｏ理論値５９８．２、実測値５９９．５［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ７．９９（ｓ，１Ｈ），７．９３（ｓ，１Ｈ），７．８６（ｓ，１Ｈ），７．８４（ｄｄ，Ｊ＝８．１，２．２Ｈｚ，１Ｈ），７．４１（ｓ，１Ｈ），７．３４（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），４．９６（ｓ，２Ｈ），３．８１（ｓ，２Ｈ），３．３１（ｓ，２Ｈ），３．１８－３．０７（ｍ，１Ｈ），２．９９－２．８９（ｍ，４Ｈ），２．７５（ｓ，３Ｈ），２．７１（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ），２．６９－２．６１（ｍ，２Ｈ），２．２４－２．１４（ｍ，３Ｈ），１．７９－１．７０（ｍ，３Ｈ）．
実施例１８：（１Ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－（（（３Ｓ，５Ｒ）－３，５－ジメチルピペリジン－１－イル）メチル）－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル
Figure 0007587528000116
[0432] （１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－ホルミル－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－１－メチル－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル（３０ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）及び（３Ｒ，５Ｓ）－３，５－ジメチルピペリジン（１０ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）を使用して、実施例１３と同様に還元的アミノ化を行い、クロマトグラフィーＣ後に表題化合物を得た（１８ｍｇ、５０％）。ＬＣＭＳ：Ｃ３２Ｈ３５Ｆ３Ｎ６Ｏ理論値５７６．３、実測値５７７．６［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ７．９６（ｓ，１Ｈ），７．９０－７．８１（ｍ，３Ｈ），７．４１（ｔ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｄｔ，Ｊ＝８．０，１．１Ｈｚ，１Ｈ），４．９６（ｓ，２Ｈ），３．６３（ｓ，２Ｈ），３．３１（ｓ，２Ｈ），３．１７－３．０７（ｍ，１Ｈ），３．０２－２．８９（ｍ，４Ｈ），２．８１－２．７１（ｍ，５Ｈ），１．７５－１．５９（ｍ，３Ｈ），１．５４（ｔ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，２Ｈ），０．８３（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，６Ｈ），０．５４（ｑ，Ｊ＝１１．８Ｈｚ，１Ｈ）．
実施例１９：（１Ｒ，３ｒ）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）－３－（３－（６－（（（Ｓ）－３－メチルピペリジン－１－イル）メチル）－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）シクロブタン－１－カルボニトリル
Figure 0007587528000117
[0433] （１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－ホルミル－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－１－メチル－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル（５０ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）及び（３Ｓ）－３－メチルピペリジン塩酸塩（２５ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を使用して、実施例４、ステップ２と同様に還元的アミノ化を行い、クロマトグラフィー後に表題化合物を得た（３９ｍｇ、６６％）。ＬＣＭＳ：Ｃ３１Ｈ３３Ｆ３Ｎ６Ｏ理論値５６２．３、実測値５６３．６［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ７．９６（ｓ，１Ｈ），７．８９（ｓ，１Ｈ），７．８６（ｓ，１Ｈ），７．８４（ｄｄ，Ｊ＝８．２，２．１Ｈｚ，１Ｈ），７．４０（ｔ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｄｔ，Ｊ＝７．８，１．４Ｈｚ，１Ｈ），４．９５（ｓ，２Ｈ），３．６２（ｓ，２Ｈ），３．３１（ｓ，２Ｈ），３．１８－３．０９（ｍ，１Ｈ），３．００－２．８９（ｍ，４Ｈ），２．８１－２．６６（ｍ，５Ｈ），１．７３－１．４６（ｍ，６Ｈ），０．９６－０．８７（ｍ，１Ｈ），０．８４（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，３Ｈ）．
実施例２０：（１Ｒ３ｒ）－３－（３－（６－（（（（Ｓ）－３，３－ジフルオロシクロペンチル）アミノ）メチル）－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル
Figure 0007587528000118
[0434] （１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－ホルミル－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－１－メチル－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル（１５０ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）及び（１Ｓ）－３，３－ジフルオロシクロペンタン－１－アミン塩酸塩（６１ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）を使用して、実施例４、ステップ２と同様に還元的アミノ化を行い、クロマトグラフィーＣ後に表題化合物を得た（７９ｍｇ、４１％）。ＬＣＭＳ：Ｃ３０Ｈ２９Ｆ５Ｎ６Ｏ理論値５８４．２、実測値５８５．５［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ８．００（ｓ，１Ｈ），７．９２（ｓ，１Ｈ），７．８６（ｓ，１Ｈ），７．８４（ｄｄ，Ｊ＝８．３，２．２Ｈｚ，１Ｈ），７．４０（ｔ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｄｔ，Ｊ＝７．８，１．２Ｈｚ，１Ｈ），４．９５（ｓ，２Ｈ），３．９１（ｓ，２Ｈ），３．３５－３．２４（ｍ，３Ｈ），３．１７－３．０８（ｍ，１Ｈ），２．９９－２．８９（ｍ，４Ｈ），２．７５（ｓ，３Ｈ），２．４３－２．３０（ｍ，１Ｈ），２．２９－２．１７（ｍ，１Ｈ），２．１０－１．９６（ｍ，４Ｈ），１．６８－１．５７（ｍ，１Ｈ）．
実施例２１：（１Ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－（（（（Ｒ）－３，３－ジフルオロシクロペンチル）アミノ）メチル）－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル
Figure 0007587528000119
[0435] （１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－ホルミル－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－１－メチル－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル（１５０ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）及び（１Ｒ）－３，３－ジフルオロシクロペンタン－１－アミン塩酸塩（６１ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）を使用して、実施例４、ステップ２と同様に還元的アミノ化を行い、クロマトグラフィーＣ後に表題化合物を得た（７０ｍｇ、３７％）。ＬＣＭＳ：Ｃ３０Ｈ２９Ｆ５Ｎ６Ｏ理論値５８４．２、実測値５８５．５［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ８．００（ｓ，１Ｈ），７．９２（ｓ，１Ｈ），７．８６（ｓ，１Ｈ），７．８４（ｄｄ，Ｊ＝８．３，２．２Ｈｚ，１Ｈ），７．４０（ｔ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｄｔ，Ｊ＝７．８，１．２Ｈｚ，１Ｈ），４．９５（ｓ，２Ｈ），３．９１（ｓ，２Ｈ），３．３５－３．２４（ｍ，３Ｈ），３．１７－３．０８（ｍ，１Ｈ），２．９９－２．８９（ｍ，４Ｈ），２．７５（ｓ，３Ｈ），２．４３－２．３０（ｍ，１Ｈ），２．２９－２．１７（ｍ，１Ｈ），２．１０－１．９６（ｍ，４Ｈ），１．６８－１．５７（ｍ，１Ｈ）．
実施例２２：（１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－（（（３，３－ジフルオロシクロブチル）（メチル）アミノ）メチル）－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル
Figure 0007587528000120
[0436] （１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－ホルミル－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－１－メチル－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル（３０ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）及び３，３－ジフルオロ－Ｎ－メチルシクロブタン－１－アミン塩酸塩（１５ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）を使用して、実施例４、ステップ２と同様に還元的アミノ化を行い、クロマトグラフィーＣ後に表題化合物を得た（１７ｍｇ、４７％）。ＬＣＭＳ：Ｃ３０Ｈ２９Ｆ５Ｎ６Ｏ理論値５８４．２、実測値５８５．５［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ７．９８（ｓ，１Ｈ），７．９０（ｓ，１Ｈ），７．８９－７．８１（ｍ，２Ｈ），７．４０（ｔ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８６（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），４．９６（ｓ，２Ｈ），３．５９（ｓ，２Ｈ），３．３１（ｓ，２Ｈ），３．１８－３．０８（ｍ，１Ｈ），３．０１－２．８７（ｍ，５Ｈ），２．７９－２．６８（ｍ，５Ｈ），２．５７－２．４３（ｍ，２Ｈ），２．０４（ｓ，３Ｈ）．
実施例２３：（１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－（（（１，１－ジフルオロスピロ［２．３］ヘキサン－５－イル）アミノ）メチル）－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル
Figure 0007587528000121
[0437] （１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－ホルミル－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－１－メチル－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル（３５ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）及び１，１－ジフルオロスピロ［２．３］ヘキサン－５－アミン塩酸塩（２５ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を使用して、実施例４、ステップ２と同様に還元的アミノ化を行い、クロマトグラフィーＣ後に表題化合物を得た（６ｍｇ、１３％）。ＬＣＭＳ：Ｃ３１Ｈ２９Ｆ５Ｎ６Ｏ理論値５９６．２、実測値５９７．５［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ８．００（ｓ，１Ｈ），７．９４（ｓ，１Ｈ），７．９０－７．８１（ｍ，２Ｈ），７．４１（ｔ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），４．９５（ｓ，２Ｈ），３．８９（ｓ，２Ｈ），３．４６（ｄｐ，Ｊ＝７４．４，７．２Ｈｚ，１Ｈ），３．３１（ｓ，２Ｈ），３．１９－３．０５（ｍ，１Ｈ），３．００－２．８７（ｍ，５Ｈ），２．７５（ｓ，３Ｈ），２．４５－２．３７（ｍ，１Ｈ），２．２８－２．１９（ｍ，２Ｈ），１．２６（ｄｔ，Ｊ＝２２．２，８．４Ｈｚ，３Ｈ）．
実施例２４：（１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－（（（５，５－ジメチルテトラヒドロフラン－３－イル）アミノ）メチル）－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル
Figure 0007587528000122
[0438] （１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－ホルミル－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－１－メチル－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル（３５ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）及び５，５－ジメチルオキソラン－３－アミン（１６ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を使用して、実施例１３と同様に還元的アミノ化を行い、クロマトグラフィーＣ後に表題化合物を得た（３ｍｇ、６％）。ＬＣＭＳ：Ｃ３１Ｈ３３Ｆ３Ｎ６Ｏ２理論値５７８．３、実測値５７９．５［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ８．００（ｓ，１Ｈ），７．９２（ｓ，１Ｈ），７．８６（ｓ，１Ｈ），７．８４（ｄｄ，Ｊ＝８．３，２．２Ｈｚ，１Ｈ），７．４０（ｔ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），４．９５（ｓ，２Ｈ），３．９４－３．８４（ｍ，３Ｈ），３．５４（ｄｄ，Ｊ＝８．８，５．６Ｈｚ，１Ｈ），３．４８－３．４０（ｍ，１Ｈ），３．３１（ｓ，２Ｈ），３．１６－３．０９（ｍ，１Ｈ），２．９８－２．９２（ｍ，４Ｈ），２．７５（ｓ，３Ｈ），２．５０（ｓ，１Ｈ），２．０２（ｄｄ，Ｊ＝１２．５，７．６Ｈｚ，１Ｈ），１．５８（ｄｄ，Ｊ＝１２．５，６．１Ｈｚ，１Ｈ），１．２８（ｓ，３Ｈ），１．１５（ｓ，３Ｈ）．
実施例２５：（１ｒ，３ｒ）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）－３－（３－（６－（（３－メチルアゼパン－１－イル）メチル）－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）シクロブタン－１－カルボニトリル
Figure 0007587528000123
[0439] （１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－ホルミル－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－１－メチル－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル（５０ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）及び３－メチルアゼパン塩酸塩（４７ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）を使用して、実施例４、ステップ２と同様に還元的アミノ化を行い、クロマトグラフィーＣ後に表題化合物を得た（２７ｍｇ、４２％）。ＬＣＭＳ：Ｃ３２Ｈ３５Ｆ３Ｎ６Ｏ理論値５７６．３、実測値５７７．５［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ７．９９（ｓ，１Ｈ），７．９４（ｓ，１Ｈ），７．８６（ｓ，１Ｈ），７．８４（ｄｄ，Ｊ＝８．０，２．３Ｈｚ，２Ｈ），７．４１（ｔ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｄｔ，Ｊ＝７．８，１．３Ｈｚ，１Ｈ），４．９５（ｓ，２Ｈ），３．８０（ｓ，２Ｈ），３．３１（ｓ，２Ｈ），３．１８－３．０４（ｍ，１Ｈ），３．００－２．８９（ｍ，４Ｈ），２．８３－２．６２（ｍ，５Ｈ），２．６２－２．５３（ｍ，１Ｈ），２．３２（ｄｄ，Ｊ＝１３．１，９．０Ｈｚ，１Ｈ），１．７６－１．４６（ｍ，５Ｈ），１．３４－１．２４（ｍ，１Ｈ），０．８０（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ）．
実施例２６：（１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－（（３－フルオロ－３－メチルアゼパン－１－イル）メチル）－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル
Figure 0007587528000124
[0440] （１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－ホルミル－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－１－メチル－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル（５０ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）及び３－フルオロ－３－メチルアゼパン（２７ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）を使用して、実施例１３と同様に還元的アミノ化を行い、クロマトグラフィーＣ後に表題化合物を得た（２９ｍｇ、４６％）。ＬＣＭＳ：Ｃ３２Ｈ３４Ｆ４Ｎ６Ｏ理論値５９４．３、実測値５９５．５［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ８．０１（ｓ，１Ｈ），７．９７（ｓ，１Ｈ），７．８６（ｓ，１Ｈ），７．８４（ｄｄ，Ｊ＝８．２，２．２Ｈｚ，１Ｈ），７．４１（ｔ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｄｔ，Ｊ＝７．９，１．４Ｈｚ，１Ｈ），４．９６（ｓ，２Ｈ），３．９１－３．８１（ｍ，２Ｈ），３．３１（ｓ，２Ｈ），３．１７－３．０８（ｍ，１Ｈ），３．０２－２．８３（ｍ，５Ｈ），２．８０－２．６０（ｍ，６Ｈ），１．８８－１．６６（ｍ，４Ｈ），１．６５－１．５４（ｍ，１Ｈ），１．４７－１．３９（ｍ，１Ｈ），１．２２（ｄ，Ｊ＝２１．５Ｈｚ，３Ｈ）．
実施例２７：（１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－（（７，７－ジフルオロ－３－アザビシクロ［４．１．０］ヘプタン－３－イル）メチル）－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル
Figure 0007587528000125
[0441] （１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－ホルミル－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－１－メチル－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル（３５ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）及び７，７－ジフルオロ－３－アザビシクロ［４．１．０］ヘプタン塩酸塩（１９ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）を使用して、実施例４、ステップ２と同様に還元的アミノ化を行い、クロマトグラフィーＣ後に表題化合物を得た（２２ｍｇ、４９％）。ＬＣＭＳ：Ｃ３１Ｈ２９Ｆ５Ｎ６Ｏ理論値５９６．２、実測値５９７．５［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ７．９６（ｓ，１Ｈ），７．８９（ｓ，１Ｈ），７．８６（ｓ，１Ｈ），７．８４（ｄｄ，Ｊ＝８．０，２．１Ｈｚ，１Ｈ），７．４１（ｔ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｄｔ，Ｊ＝７．７，１．３Ｈｚ，１Ｈ），４．９６（ｓ，２Ｈ），３．６９－３．５５（ｍ，２Ｈ），３．３１（ｓ，２Ｈ），３．１８－３．０７（ｍ，１Ｈ），３．００－２．９０（ｍ，４Ｈ），２．８０－２．７１（ｍ，４Ｈ），２．６２（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ），２．３４－２．２５（ｍ，１Ｈ），２．２５－２．１８（ｍ，１Ｈ），２．０１－１．９５（ｍ，１Ｈ），１．８３－１．６８（ｍ，３Ｈ）．
実施例２８：（１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－（（７，８－ジヒドロ－１，６－ナフチリジン－６（５Ｈ）－イル）メチル）－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル
Figure 0007587528000126
[0442] （１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－ホルミル－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－１－メチル－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル（３５ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）及び５，６，７，８－テトラヒドロ－１，６－ナフチリジン二塩酸塩（２３ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）を使用して、実施例４、ステップ２と同様に還元的アミノ化を行い、クロマトグラフィーＣ後に表題化合物を得た（１２ｍｇ、２６％）。ＬＣＭＳ：Ｃ３３Ｈ３０Ｆ３Ｎ７Ｏ理論値５９７．２、実測値５９８．５［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ８．３５（ｄｄ，Ｊ＝４．８，１．６Ｈｚ，１Ｈ），８．０４（ｓ，１Ｈ），７．９７（ｓ，１Ｈ），７．８７（ｓ，１Ｈ），７．８５（ｄｄ，Ｊ＝８．０，２．２Ｈｚ，１Ｈ），７．４１（ｔ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３８－７．３２（ｍ，２Ｈ），７．０９（ｄｄ，Ｊ＝７．８，４．８Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），４．９８（ｓ，２Ｈ），３．８８（ｓ，２Ｈ），３．６６（ｓ，２Ｈ），３．３１（ｓ，２Ｈ），３．１８－３．０８（ｍ，１Ｈ），３．０１－２．８３（ｍ，８Ｈ），２．７５（ｓ，３Ｈ）．
実施例２９：（１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－（（１，４－オキサゼパン－４－イル）メチル）－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル
Figure 0007587528000127
[0443] （１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－ホルミル－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－１－メチル－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル（３５ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）及び１，４－オキサゼパン塩酸塩（２０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を使用して、実施例４、ステップ２と同様に還元的アミノ化を行い、クロマトグラフィーＣ後に表題化合物を得た（２２ｍｇ、５１％）。ＬＣＭＳ：Ｃ３１Ｈ２９Ｆ５Ｎ６Ｏ理論値５６４．２、実測値５６５．５［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ８．００（ｓ，１Ｈ），７．９３（ｓ，１Ｈ），７．８６（ｓ，１Ｈ），７．８４（ｄｄ，Ｊ＝８．２，２．２Ｈｚ，１Ｈ），７．４１（ｔ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），４．９６（ｓ，２Ｈ），３．８３（ｓ，２Ｈ），３．７６（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．６９－３．６４（ｍ，２Ｈ），３．３１（ｓ，２Ｈ），３．１３（ｔｔ，Ｊ＝９．６，７．１Ｈｚ，１Ｈ），２．９９－２．９２（ｍ，４Ｈ），２．７５（ｓ，３Ｈ），２．７３－２．６７（ｍ，４Ｈ），１．８９－１．８５（ｍ，２Ｈ）．
実施例３０：（１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－（（５－オキサ－８－アザスピロ［２．６］ノナン－８－イル）メチル）－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル
Figure 0007587528000128
[0444] （１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－ホルミル－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－１－メチル－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル（６２ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）及び５－オキサ－８－アザスピロ［２．６］ノナン（４９ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）を使用して、実施例１３と同様に還元的アミノ化を行い、クロマトグラフィーＣ後に表題化合物を得た（３８ｍｇ、５０％）。ＬＣＭＳ：Ｃ３２Ｈ３３Ｆ３Ｎ６Ｏ２理論値５９０．３、実測値５９１．５［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ７．９９（ｓ，１Ｈ），７．９４（ｓ，１Ｈ），７．８６（ｓ，１Ｈ），７．８４（ｄｄ，Ｊ＝８．１，２．２Ｈｚ，１Ｈ），７．４１（ｔ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｄｔ，Ｊ＝７．７，１．１Ｈｚ，１Ｈ），４．９５（ｓ，２Ｈ），３．８２（ｓ，２Ｈ），３．８０－３．７３（ｍ，２Ｈ），３．５２（ｓ，２Ｈ），３．３１（ｓ，２Ｈ），３．１３（ｔｔ，Ｊ＝９．４，６．９Ｈｚ，１Ｈ），３．０１－２．８８（ｍ，４Ｈ），２．８３－２．７７（ｍ，２Ｈ），２．７５（ｓ，３Ｈ），２．５４（ｓ，２Ｈ），０．４４（ｄ，Ｊ＝９．９Ｈｚ，４Ｈ）．
実施例３１：（１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－（（（３，３－ジメチルシクロペンチル）アミノ）メチル）－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル
Figure 0007587528000129
[0445] （１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－ホルミル－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－１－メチル－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル（５０ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）及び３，３－ジメチルシクロペンタン－１－アミン塩酸塩（２７ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を使用して、実施例４、ステップ２と同様に還元的アミノ化を行い、クロマトグラフィーＣ後に表題化合物を得た（３４ｍｇ、３７％）。ＬＣＭＳ：Ｃ３２Ｈ３５Ｆ３Ｎ６Ｏ理論値５７６．３、実測値５７７．５［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ８．０１（ｓ，１Ｈ），７．９４（ｓ，１Ｈ），７．９１－７．８４（ｍ，２Ｈ），７．４３（ｔ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３７（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８８（ｄｄ，Ｊ＝７．７，１．４Ｈｚ，１Ｈ），４．９８（ｓ，２Ｈ），３．９１（ｓ，２Ｈ），３．３４（ｓ，２Ｈ），３．２４（ｐ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），３．２１－３．０９（ｍ，１Ｈ），３．０３－２．９０（ｍ，４Ｈ），２．７８（ｓ，３Ｈ），２．０２－１．９９（ｍ，１Ｈ），１．７７（ｄｄ，Ｊ＝１２．６，７．３Ｈｚ，１Ｈ），１．６１－１．４５（ｍ，２Ｈ），１．４５－１．３５（ｍ，１Ｈ），１．２６（ｄｄ，Ｊ＝１２．６，７．５Ｈｚ，１Ｈ），１．１０（ｓ，３Ｈ），０．９９（ｓ，３Ｈ）．
実施例３２：（１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－（（（３，３－ジフルオロシクロペンチル）（メチル）アミノ）メチル）－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル
Figure 0007587528000130
[0446] （１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－ホルミル－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－１－メチル－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル（７５ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）及び３，３－ジフルオロ－Ｎ－メチルシクロペンタン－１－アミン塩酸塩（４７ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）を使用して、実施例４、ステップ２と同様に還元的アミノ化を行い、クロマトグラフィーＣ後に表題化合物を得た（３４ｍｇ、３７％）。ＬＣＭＳ：Ｃ３１Ｈ３１Ｆ５Ｎ６Ｏ理論値５９８．２、実測値５９９．５［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ８．００（ｓ，１Ｈ），７．９２（ｓ，１Ｈ），７．８９（ｓ，１Ｈ），７．８７（ｄｄｄ，Ｊ＝８．２，２．３，０．９Ｈｚ，１Ｈ），７．４３（ｔ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３７（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８８（ｄｔ，Ｊ＝７．８，１．３Ｈｚ，１Ｈ），４．９９（ｓ，２Ｈ），３．７１（ｄｄ，Ｊ＝１７，１４Ｈｚ，２Ｈ），３．３４（ｓ，２Ｈ），３．２０－３．１２（ｍ，２Ｈ），３．０２－２．９２（ｍ，４Ｈ），２．７８（ｓ，３Ｈ），２．４８－２．３５（ｍ，１Ｈ），２．３０－２．２０（ｍ，１Ｈ），２．１５（ｓ，３Ｈ），２．１５－１．９９（ｍ，３Ｈ），１．８７－１．７５（ｍ，１Ｈ）．
実施例３３：（１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－（（２－メチル－１，４－オキサゼパン－４－イル）メチル）－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル
Figure 0007587528000131
[0447] （１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－ホルミル－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－１－メチル－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル（７５ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）及び２－メチル－１，４－オキサゼパン（３６ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）を使用して、実施例１３と同様に還元的アミノ化を行い、クロマトグラフィーＣ後に表題化合物を得た（５５ｍｇ、５８％）。ＬＣＭＳ：Ｃ３１Ｈ３３Ｆ３Ｎ６Ｏ２理論値５７８．３、実測値５７９．５［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ８．００（ｓ，１Ｈ），７．９４（ｓ，１Ｈ），７．８６（ｓ，１Ｈ），７．８４（ｄｄ，Ｊ＝８．２，２．２Ｈｚ，１Ｈ），７．４１（ｔ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），４．９６（ｓ，２Ｈ），３．８４－３．７７（ｍ，３Ｈ），３．７７－３．６８（ｍ，２Ｈ），３．３１（ｓ，２Ｈ），３．１６－３．０８（ｍ，１Ｈ），２．９９－２．９０（ｍ，４Ｈ），２．８３－２．７３（ｍ，５Ｈ），２．６１（ｄｄｄ，Ｊ＝１２．９，８．８，４．３Ｈｚ，１Ｈ），２．３９（ｄｄ，Ｊ＝１３．４，８．９Ｈｚ，１Ｈ），１．８２－１．７５（ｍ，２Ｈ），１．０１（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，３Ｈ）．
実施例３４：（１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－（（２，７－ジメチル－１，４－オキサゼパン－４－イル）メチル）－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル
Figure 0007587528000132
[0448] （１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－ホルミル－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－１－メチル－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル（１００ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）及び２，７－ジメチル－１，４－オキサゼパン（４０ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）を使用して、実施例１３と同様に還元的アミノ化を行い、クロマトグラフィーＣ後に表題化合物を得た（５２ｍｇ、３９％）。ＬＣＭＳ：Ｃ３２Ｈ３５Ｆ３Ｎ６Ｏ２理論値５９２．３、実測値５９３．５［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ８．００（ｓ，１Ｈ），７．９３（ｓ，１Ｈ），７．８６（ｓ，１Ｈ），７．８４（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．４１（ｓ，１Ｈ），７．３４（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），４．９６（ｓ，２Ｈ），３．９９－３．８７（ｍ，１Ｈ），３．８３－３．７１（ｍ，３Ｈ），３．３１（ｓ，２Ｈ），３．１３（ｐ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），３．０２－２．８９（ｍ，５Ｈ），２．８０－２．６０（ｍ，７Ｈ），２．３６（ｄｄ，Ｊ＝１３．０，８．９Ｈｚ，１Ｈ），１．５６（ｄｄｄ，Ｊ＝１４．０，１１．３，６．３Ｈｚ，１Ｈ），１．１０（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，３Ｈ），１．０１（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，３Ｈ）．
実施例３５：（１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－（（６－メチル－１，４－オキサゼパン－４－イル）メチル）－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル
Figure 0007587528000133
[0449] （１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－ホルミル－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－１－メチル－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル（５０ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）及び６－メチル－１，４－オキサゼパン（１８ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）を使用して、実施例１３と同様に還元的アミノ化を行い、クロマトグラフィーＣ後に表題化合物を得た（１６ｍｇ、２６％）。ＬＣＭＳ：Ｃ３１Ｈ３３Ｆ３Ｎ６Ｏ２理論値５７８．３、実測値５７９．５［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ８．０３（ｓ，１Ｈ），７．９８（ｓ，１Ｈ），７．８９（ｓ，１Ｈ），７．８７（ｄｄ，Ｊ＝８．１，２．２Ｈｚ，１Ｈ），７．４４（ｔ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３７（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８８（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），４．９９（ｓ，２Ｈ），３．８６（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，２Ｈ），３．８２（ｄｄ，Ｊ＝１１．９，５．１Ｈｚ，１Ｈ），３．７５（ｄｄｄ，Ｊ＝１２．４，７．８，３．３Ｈｚ，１Ｈ），３．６３（ｄｄｄ，Ｊ＝１２．４，５．５，３．４Ｈｚ，１Ｈ），３．３９（ｄｄ，Ｊ＝１２．０，８．４Ｈｚ，１Ｈ），３．３４（ｓ，２Ｈ），３．２０－３．１２（ｍ，１Ｈ），３．０３－２．９３（ｍ，４Ｈ），２．８２－２．７４（ｍ，６Ｈ），２．６８（ｄｄｄ，Ｊ＝１３．４，７．８，３．４Ｈｚ，１Ｈ），２．４５（ｄｄ，Ｊ＝１２．９，８．１Ｈｚ，１Ｈ），０．８０（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ）．
実施例３６：（１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－（（７－メチル－１，４－オキサゼパン－４－イル）メチル）－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル
Figure 0007587528000134
[0450] （１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－ホルミル－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－１－メチル－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル（５０ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）及び７－メチル－１，４－オキサゼパン（１８ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）を使用して、実施例１３と同様に還元的アミノ化を行い、クロマトグラフィーＣ後に表題化合物を得た（２６ｍｇ、４１％）。ＬＣＭＳ：Ｃ３１Ｈ３３Ｆ３Ｎ６Ｏ２理論値５７８．３、実測値５７９．５［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ７．９９（ｓ，１Ｈ），７．９２（ｓ，１Ｈ），７．８６（ｓ，１Ｈ），７．８４（ｄｄ，Ｊ＝７．９，２．２Ｈｚ，１Ｈ），７．４０（ｔ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），４．９６（ｓ，２Ｈ），３．９３－３．８５（ｍ，１Ｈ），３．８２－３．７４（ｍ，３Ｈ），３．６０－３．５２（ｍ，１Ｈ），３．３１（ｓ，２Ｈ），３．１７－３．０８（ｍ，１Ｈ），２．９９－２．９１（ｍ，４Ｈ），２．８１－２．５８（ｍ，８Ｈ），１．７２－１．６２（ｍ，１Ｈ），１．１１（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，３Ｈ）．
実施例３７：（１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－（（９－オキサ－３－アザビシクロ［４．２．１］ノナン－３－イル）メチル）－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル
Figure 0007587528000135
[0451] （１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－ホルミル－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－１－メチル－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル（６２ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）及び９－オキサ－３－アザビシクロ［４．２．１］ノナン（２５ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を使用して、実施例１３と同様に還元的アミノ化を行い、クロマトグラフィーＣ後に表題化合物を得た（２７ｍｇ、３５％）。ＬＣＭＳ：Ｃ３２Ｈ３３Ｆ３Ｎ６Ｏ２理論値５９０．３、実測値５９１．５［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ８．０１（ｓ，１Ｈ），７．９７（ｓ，１Ｈ），７．８６（ｓ，１Ｈ），７．８４（ｄｄ，Ｊ＝８．０，１．６Ｈｚ，１Ｈ），７．４２（ｔ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３８－７．３０（ｍ，１Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），４．９６（ｓ，２Ｈ），４．３９（ｔ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），４．２３（ｄｄｄ，Ｊ＝７．５，５．１，２．６Ｈｚ，１Ｈ），３．７６（ｓ，２Ｈ），３．３１（ｓ，２Ｈ），３．１８－３．０８（ｍ，１Ｈ），３．００－２．９１（ｍ，４Ｈ），２．７５（ｓ，３Ｈ），２．６６（ｄｄｔ，Ｊ＝１３．１，６．１，２．３Ｈｚ，１Ｈ），２．５７（ｄｔ，Ｊ＝１２．１，１．９Ｈｚ，１Ｈ），２．５０（ｄｄｄ，Ｊ＝１３．２，１１．６，４．５Ｈｚ，１Ｈ），２．４１（ｄｄ，Ｊ＝１２．２，２．８Ｈｚ，１Ｈ），２．１２－２．０７（ｍ，１Ｈ），１．９３－１．８２（ｍ，４Ｈ），１．５７－１．４６（ｍ，１Ｈ）．
実施例３８：（１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－（（６－オキサ－３－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）メチル）－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル
Figure 0007587528000136
[0452] （１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－ホルミル－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－１－メチル－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル（４４ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）及び６－オキサ－３－アザビシクロ［３．２．１］オクタン塩酸塩（２８ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を使用して、実施例４、ステップ２と同様に還元的アミノ化を行い、クロマトグラフィーＣ後に表題化合物を得た（２３ｍｇ、４４％）。ＬＣＭＳ：Ｃ３２Ｈ３３Ｆ３Ｎ６Ｏ２理論値５７６．２、実測値５７７．５［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ７．９８（ｓ，１Ｈ），７．９０（ｓ，１Ｈ），７．８７（ｓ，１Ｈ），７．８４（ｄｄ，Ｊ＝８．２，２．２Ｈｚ，１Ｈ），７．４１（ｔ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），４．９５（ｓ，２Ｈ），４．１５（ｔ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，１Ｈ），４．０１（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），３．７１（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，３Ｈ），３．３１（ｓ，２Ｈ），３．１６－３．０９（ｍ，１Ｈ），３．０１－２．８９（ｍ，４Ｈ），２．７９（ｄｄ，Ｊ＝１０．０，４．９Ｈｚ，２Ｈ），２．７５（ｓ，３Ｈ），２．４０（ｑ，Ｊ＝４．３Ｈｚ，１Ｈ），２．３２（ｄ，Ｊ＝１０．５Ｈｚ，１Ｈ），２．１１－２．０６（ｍ，２Ｈ），１．６１（ｄ，Ｊ＝１０．９Ｈｚ，１Ｈ）．
実施例３９：（１ｒ，３ｒ）－３－（３－（４－シクロプロピル－６－（（（３，３－ジフルオロシクロペンチル）アミノ）メチル）－１－オキソ－１，３－ジヒドロ－２Ｈ－ピロロ［３，４－ｃ］ピリジン－２－イル）フェニル）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル
Figure 0007587528000137
[0453] ステップ１：４－シクロプロピル－６－（（（３，３－ジフルオロシクロペンチル）アミノ）メチル）－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－ピロロ［３，４－ｃ］ピリジン－１－オンの合成。４－シクロプロピル－１－オキソ－２Ｈ，３Ｈ－ピロロ［３，４－ｃ］ピリジン－６－カルバルデヒド（５０ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）及び３，３－ジフルオロシクロペンタン－１－アミン塩酸塩（３９ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）を使用して、実施例Ｅと同様に表題化合物を合成した。一般的ワークアップ手順１及びクロマトグラフィーＢの後、表題化合物を入手した（５２ｍｇ、６８％）。
[0454] ステップ２：（１ｒ，３ｒ）－３－（３－（４－シクロプロピル－６－（（（３，３－ジフルオロシクロペンチル）アミノ）メチル）－１－オキソ－１，３－ジヒドロ－２Ｈ－ピロロ［３，４－ｃ］ピリジン－２－イル）フェニル）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリルの合成。４－シクロプロピル－６－（（（３，３－ジフルオロシクロペンチル）アミノ）メチル）－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－ピロロ［３，４－ｃ］ピリジン－１－オン（４６ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）、及び実施例Ｉ（５０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を使用して、実施例１１と同様に表題化合物を合成し、続くクロマトグラフィーＣにより表題化合物を得た（１５ｍｇ、１６％）。ＬＣＭＳ：Ｃ３１Ｈ３３Ｆ２Ｎ７Ｏ理論値５５７．３、実測値５５８．５［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ７．９２－７．８１（ｍ，２Ｈ），７．４７－７．３９（ｍ，２Ｈ），７．３９－７．３１（ｍ，１Ｈ），６．８７（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），４．９０（ｓ，２Ｈ），３．８４（ｓ，２Ｈ），３．３１（ｓ，２Ｈ），３．２９－３．２３（ｍ，１Ｈ），３．１９－３．０６（ｍ，１Ｈ），３．０２－２．８９（ｍ，５Ｈ），２．７６（ｓ，３Ｈ），２．４０－２．２６（ｍ，１Ｈ），２．２７－２．１７（ｍ，１Ｈ），２．０６－１．９６（ｍ，２Ｈ）１．６７－１．５６（ｍ，２Ｈ），１．２１－１．１１（ｍ，２Ｈ），１．１４－１．０４（ｍ，２Ｈ）．
実施例４０：（１ｒ，３ｒ）－３－（３－（４－シクロプロピル－６－（（（Ｓ）－３－メチルピペリジン－１－イル）メチル）－１－オキソ－１，３－ジヒドロ－２Ｈ－ピロロ［３，４－ｃ］ピリジン－２－イル）フェニル）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル
Figure 0007587528000138
[0455] （Ｓ）－４－シクロプロピル－６－（（３－メチルピペリジン－１－イル）メチル）－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－ピロロ［３，４－ｃ］ピリジン－１－オン（実施例Ｅ、８６ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）、及び実施例Ｉ（１００ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）を使用して、実施例１１と同様に表題化合物を合成し、続くクロマトグラフィーＣにより表題化合物を得た（３８ｍｇ、２１％）。ＬＣＭＳ：Ｃ３２Ｈ３７Ｎ７Ｏ理論値５３５．３、実測値５３６．５［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ７．９４－７．８９（ｍ，２Ｈ），７．５３（ｓ，１Ｈ），７．４５（ｔ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３８（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．９０（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），４．９４（ｓ，２Ｈ），３．６２（ｓ，２Ｈ），３．３４（ｓ，２Ｈ），３．２５－３．０８（ｍ，１Ｈ），３．０８－２．９０（ｍ，５Ｈ），２．８３－２．７４（ｍ，５Ｈ），１．７６－１．５２（ｍ，６Ｈ），１．１８－１．０４（ｍ，４Ｈ），０．９７－０．８８（ｍ，１Ｈ），０．８７（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，３Ｈ）．
実施例４１：（１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－（（２－（ヒドロキシメチル）－１，４－オキサゼパン－４－イル）メチル）－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル
Figure 0007587528000139
[0456] （１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－ホルミル－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－１－メチル－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル（４０ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）及び１，４－オキサゼパン－２－イルメタノール塩酸塩（２１ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）を使用して、実施例４、ステップ２と同様に還元的アミノ化を行い、クロマトグラフィーＣ後に表題化合物を得た（２６ｍｇ、５２％）。ＬＣＭＳ：Ｃ３１Ｈ３３Ｆ３Ｎ６Ｏ３理論値５９４．３、実測値５９５．５［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ８．０３（ｓ，１Ｈ），７．９６（ｓ，１Ｈ），７．９１－７．８４（ｍ，２Ｈ），７．４４（ｔ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３７（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８８（ｄｔ，Ｊ＝７．６，１．１Ｈｚ，１Ｈ），４．９９（ｓ，２Ｈ），３．９４－３．８３（ｍ，３Ｈ），３．７９（ｄｄｄ，Ｊ＝１１．８，６．８，４．６Ｈｚ，１Ｈ），３．６７（ｄｔｄ，Ｊ＝８．４，５．８，２．４Ｈｚ，１Ｈ），３．４２（ｄｄｄ，Ｊ＝１０．８，６．４，４．３Ｈｚ，１Ｈ），３．３７－３．２６（ｍ，３Ｈ），３．１６（ｄｑ，Ｊ＝９．７，７．０Ｈｚ，１Ｈ），３．０５－２．９１（ｍ，５Ｈ），２．９１－２．８６（ｍ，１Ｈ），２．８６－２．７１（ｍ，５Ｈ），２．６６（ｄｄｄ，Ｊ＝１２．５，８．６，３．６Ｈｚ，１Ｈ），２．４７（ｄｄ，Ｊ＝１３．４，８．５Ｈｚ，１Ｈ）．
実施例４２：（１Ｒ，３ｒ）－３－（３－（４－シクロプロピル－６－（（（Ｒ）－４，４－ジフルオロ－３－メチルピペリジン－１－イル）メチル）－１－オキソ－１，３－ジヒドロ－２Ｈ－ピロロ［３，４－ｃ］ピリジン－２－イル）フェニル）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル
Figure 0007587528000140
[0457] （Ｒ）－４－シクロプロピル－６－（（４，４－ジフルオロ－３－メチルピペリジン－１－イル）メチル）－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－ピロロ［３，４－ｃ］ピリジン－１－オン（実施例Ｄ、８０ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）、及び実施例Ｉ（８２ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）を使用して、実施例１１と同様に表題化合物を合成し、続くクロマトグラフィーＣにより表題化合物を得た（４０ｍｇ、２６％）。ＬＣＭＳ：Ｃ３２Ｈ３５Ｆ２Ｎ７Ｏ理論値５７１．３、実測値５７２．５［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ７．９５－７．８７（ｍ，２Ｈ），７．５５（ｓ，１Ｈ），７．４６（ｔ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３８（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．９１（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），４．９４（ｓ，２Ｈ），３．７２（ｓ，２Ｈ），３．３４（ｓ，２Ｈ），３．２３－３．１１（ｍ，１Ｈ），３．０３－２．９１（ｍ，５Ｈ），２．７９（ｄ，Ｊ＝１０．６Ｈｚ，６Ｈ），２．４８－２．３７（ｍ，１Ｈ），２．１０－２．０１（ｍ，３Ｈ），１．２０－１．０５（ｍ，４Ｈ），１．００（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，３Ｈ）．
実施例４３：（１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－（（６－エチル－１，４－オキサゼパン－４－イル）メチル）－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル
Figure 0007587528000141
[0458] （１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－ホルミル－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－１－メチル－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル（８０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）及び６－エチル－１，４－オキサゼパン（４３ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）を使用して、実施例１３と同様に還元的アミノ化を行い、クロマトグラフィーＣ後に表題化合物を得た（５２ｍｇ、４９％）。ＬＣＭＳ：Ｃ３２Ｈ３５Ｆ３Ｎ６Ｏ２理論値５７６．２、実測値５７７．５［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ８．０３（ｓ，１Ｈ），７．９９（ｓ，１Ｈ），７．８９（ｓ，１Ｈ），７．８９－７．８３（ｍ，１Ｈ），７．４４（ｔ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３７（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８８（ｄｔ，Ｊ＝７．８，１．３Ｈｚ，１Ｈ），４．９９（ｓ，２Ｈ），３．８５（ｑ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，３Ｈ），３．７３（ｄｄｄ，Ｊ＝１２．４，７．６，３．０Ｈｚ，１Ｈ），３．６３（ｄｄｄ，Ｊ＝１２．４，５．８，３．３Ｈｚ，１Ｈ），３．４５（ｄｄ，Ｊ＝１２．０，８．３Ｈｚ，１Ｈ），３．３４（ｓ，２Ｈ），３．２０－３．１１（ｍ，１Ｈ），３．０２－２．９２（ｍ，４Ｈ），２．８３－２．７１（ｍ，５Ｈ），２．６６（ｄｄｄ，Ｊ＝１３．４，７．６，３．３Ｈｚ，１Ｈ），２．４９（ｄｄ，Ｊ＝１３．０，７．７Ｈｚ，１Ｈ），１．８９－１．８７（ｍ，１Ｈ），１．２７－１．１１（ｍ，２Ｈ），０．７９（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３Ｈ）．
実施例４４：（１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－（（６－（ヒドロキシメチル）－１，４－オキサゼパン－４－イル）メチル）－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル
Figure 0007587528000142
[0459] ステップ１：１，４－オキサゼパン－６－イルメタノールトリフルオロ酢酸塩の合成。６－（ヒドロキシメチル）－１，４－オキサゼパン－４－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（２００ｍｇ）のＤＣＭ（４ｍＬ）溶液に、１ｍＬのＴＦＡを加えた。この反応物を室温で１６時間撹拌した後、濃縮し、次のステップで直接使用した。
[0460] ステップ２：（１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－（（６－（ヒドロキシメチル）－１，４－オキサゼパン－４－イル）メチル）－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル。（１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－ホルミル－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－１－メチル－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル（４０ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）及び１，４－オキサゼパン－６－イルメタノールトリフルオロ酢酸塩（４１ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を使用して、実施例４、ステップ２と同様に還元的アミノ化を行い、クロマトグラフィーＣ後に表題化合物を得た（９．７ｍｇ、１９％）。ＬＣＭＳ：Ｃ３１Ｈ３３Ｆ３Ｎ６Ｏ３理論値５９４．３、実測値５９５．５［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ８．０４（ｓ，１Ｈ），７．９７（ｓ，１Ｈ），７．８９（ｓ，１Ｈ），７．８９－７．８５（ｍ，１Ｈ），７．４４（ｔ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３７（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８８（ｄｔ，Ｊ＝７．７，１．３Ｈｚ，１Ｈ），４．９９（ｓ，２Ｈ），３．９１－３．８３（ｍ，３Ｈ），３．７２（ｄｄｄ，Ｊ＝１２．５，７．３，３．１Ｈｚ，１Ｈ），３．６５（ｄｄｄ，Ｊ＝１２．４，５．８，３．２Ｈｚ，１Ｈ），３．５９（ｄｄ，Ｊ＝１２．１，７．５Ｈｚ，１Ｈ），３．４０（ｄｄ，Ｊ＝１０．６，６．４Ｈｚ，１Ｈ），３．３４（ｓ，３Ｈ），３．２１－３．１１（ｍ，１Ｈ），３．００－２．８９（ｍ，４Ｈ），２．８３（ｄｄ，Ｊ＝１３．１，４．６Ｈｚ，１Ｈ），２．８０－２．６３（ｍ，６Ｈ），２．５８（ｄｄ，Ｊ＝１３．０，７．５Ｈｚ，１Ｈ）．
実施例４５：（１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－（（３－（メトキシメチル）アゼパン－１－イル）メチル）－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル
Figure 0007587528000143
[0461] （１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－ホルミル－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－１－メチル－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル（８０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）及び３－（メトキシメチル）アゼパン（４４ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）を使用して、実施例１３と同様に還元的アミノ化を行い、クロマトグラフィーＣ後に表題化合物を得た（３５ｍｇ、３４％）。ＬＣＭＳ：Ｃ３３Ｈ３７Ｆ３Ｎ６Ｏ２理論値６０６．３、実測値６０７．５［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ８．０２（ｓ，１Ｈ），７．９６（ｓ，１Ｈ），７．９２－７．８２（ｍ，２Ｈ），７．４４（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３７（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８８（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），４．９８（ｓ，２Ｈ），３．８２（ｓ，２Ｈ），３．３４（ｓ，２Ｈ），３．２４－３．０３（ｍ，６Ｈ），３．０３－２．８９（ｍ，４Ｈ），２．８４－２．６０（ｍ，７Ｈ），２．４８（ｄｄ，Ｊ＝１３．２，７．９Ｈｚ，１Ｈ），１．７９－１．６９（ｍ，３Ｈ），１．６５－１．５５（ｍ，２Ｈ），１．３８－１．２５（ｍ，１Ｈ）．
実施例４６：（１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－（（６－（メトキシメチル）－１，４－オキサゼパン－４－イル）メチル）－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル
Figure 0007587528000144
[0462] ステップ１：６－（メトキシメチル）－１，４－オキサゼパン－４－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルの合成。０℃で６－（ヒドロキシメチル）－１，４－オキサゼパン－４－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（２７０ｍｇ、１．１７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（４．３ｍＬ）溶液に、水素化ナトリウム（油中６０％分散液、５６ｍｇ、１．４ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を室温で１０分間撹拌した後、ヨウ化メチル（０．１１ｍＬ、１．７５ｍｍｏｌ）を加えた。次に反応物を一晩撹拌した後、水でクエンチし、続いて一般的ワークアップ手順１を行った。この材料をクロマトグラフィーＡを用いて精製して、表題化合物を生じさせた（０．１８８ｇ、６６％）。
[0463] ステップ２：６－（メトキシメチル）－１，４－オキサゼパントリフルオロ酢酸塩の合成。ＤＣＭ（３．６ｍＬ）中の６－（メトキシメチル）－１，４－オキサゼパン－４－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（０．１８５ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）の溶液にトリフルオロ酢酸（０．９ｍＬ）を加え、この反応物を室温で１６時間撹拌した。この時間後、反応物を濃縮し、この材料を精製することなく使用した。
[0464] ステップ３：（１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－（（６－（メトキシメチル）－１，４－オキサゼパン－４－イル）メチル）－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリルの合成。（１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－ホルミル－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－１－メチル－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル（７５ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）及び６－（メトキシメチル）－１，４－オキサゼパントリフルオロ酢酸塩（trifluoroacetic acetate）（６７ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）を使用して、実施例４、ステップ２と同様に還元的アミノ化を行い、クロマトグラフィーＣ後に表題化合物を得た（４５ｍｇ、４６％）。ＬＣＭＳ：Ｃ３２Ｈ３５Ｆ３Ｎ６Ｏ３理論値６０８．３、実測値６０９．５［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ８．０３（ｓ，１Ｈ），７．９８（ｓ，１Ｈ），７．８９（ｓ，１Ｈ），７．８７（ｄｄｄ，Ｊ＝８．１，２．３，０．９Ｈｚ，１Ｈ），７．４４（ｔ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３７（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８８（ｄｔ，Ｊ＝８．０，１．１Ｈｚ，１Ｈ），４．９９（ｓ，２Ｈ），３．８９－３．８０（ｍ，３Ｈ），３．７１（ｄｄｄ，Ｊ＝１２．５，７．２，３．１Ｈｚ，１Ｈ），３．６５（ｄｄｄ，Ｊ＝１２．４，５．９，３．４Ｈｚ，１Ｈ），３．５４（ｄｄ，Ｊ＝１２．１，７．５Ｈｚ，１Ｈ），３．３４（ｓ，２Ｈ），３．２３－３．１１（ｍ，６Ｈ），３．０３－２．９１（ｍ，４Ｈ），２．８１－２．７１（ｍ，５Ｈ），２．６７（ｄｄｄ，Ｊ＝１３．４，７．３，３．４Ｈｚ，１Ｈ），２．５６（ｄｄ，Ｊ＝１３．０，７．３Ｈｚ，１Ｈ），２．２７－２．１８（ｍ，１Ｈ）．
実施例４７：（１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－（（４，４－ジフルオロヘキサヒドロシクロペンタ［ｃ］ピロール－２（１Ｈ）－イル）メチル）－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル
Figure 0007587528000145
[0465] （１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－ホルミル－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－１－メチル－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル（７５ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）及びｃｉｓ－４，４－ジフルオロ－オクタヒドロシクロペンタ［ｃ］ピロール（４６ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）を使用して、実施例１３と同様に還元的アミノ化を行い、クロマトグラフィーＣ後に表題化合物を得た（６１ｍｇ、６１％）。ＬＣＭＳ：Ｃ３２Ｈ３１Ｆ５Ｎ６Ｏ理論値６１０．２、実測値６１１．５［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ８．００（ｓ，１Ｈ），７．９３（ｓ，１Ｈ），７．８９（ｓ，１Ｈ），７．８９－７．８２（ｍ，１Ｈ），７．４５（ｔ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３７（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８７（ｄｔ，Ｊ＝７．８，１．３Ｈｚ，１Ｈ），４．９９（ｓ，２Ｈ），３．８０（ｄ，Ｊ＝１３．８Ｈｚ，１Ｈ），３．７１（ｄ，Ｊ＝１３．８Ｈｚ，１Ｈ），３．３４（ｓ，２Ｈ），３．２３－３．１３（ｍ，１Ｈ），３．０３－２．８６（ｍ，６Ｈ），２．８６－２．６８（ｍ，６Ｈ），２．６３（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ），２．５５（ｄｄ，Ｊ＝９．１，７．１Ｈｚ，１Ｈ），２．４２－２．３３（ｍ，１Ｈ），２．３２－２．２１（ｍ，１Ｈ），１．６２（ｄｄｄ，Ｊ＝１２．３，７．２，３．２Ｈｚ，１Ｈ）．
実施例４８：（１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－（（３－（ヒドロキシメチル）アゼパン－１－イル）メチル）－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル
Figure 0007587528000146
[0466] （１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－ホルミル－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－１－メチル－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル（６０ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）及びアゼパン－３－イルメタノール塩酸塩（３１ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を使用して、実施例４、ステップ２と同様に還元的アミノ化を行い、クロマトグラフィーＣ後に表題化合物を得た（１９ｍｇ、２４％）。ＬＣＭＳ：Ｃ３２Ｈ３５Ｆ３Ｎ６Ｏ２理論値５９２．３、実測値５９３．５［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ８．０３（ｓ，１Ｈ），７．９７（ｓ，１Ｈ），７．９２－７．８３（ｍ，２Ｈ），７．４４（ｔ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），７．３７（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．９２－６．８６（ｍ，１Ｈ），４．９９（ｓ，２Ｈ），３．８４（ｓ，２Ｈ），３．４２－３．３０（ｍ，３Ｈ），３．２５（ｄｄ，Ｊ＝１０．５，７．２Ｈｚ，１Ｈ），３．２２－３．１０（ｍ，１Ｈ），３．０３－２．９４（ｍ，４Ｈ），２．８９－２．７３（ｍ，５Ｈ），２．７３－２．６０（ｍ，２Ｈ），２．５１（ｄｄ，Ｊ＝１３．１，７．９Ｈｚ，１Ｈ），１．７８－１．７１（ｍ，４Ｈ），１．６５－１．５５（ｍ，２Ｈ），１．４１－１．２８（ｍ，１Ｈ）．
実施例４９：（１ｒ，３ｒ）－３－（３－（４－シクロプロピル－１－オキソ－６－（（（Ｓ）－３－（トリフルオロメチル）ピペリジン－１－イル）メチル）－１，３－ジヒドロ－２Ｈ－ピロロ［３，４－ｃ］ピリジン－２－イル）フェニル）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル
Figure 0007587528000147
[0467] 実施例Ｆ（１１２ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）、及び実施例Ｉ（１１０ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）を使用して、実施例１１と同様に表題化合物を合成し、続いて分取ＨＰＬＣを行った。次に溶媒を減圧下で除去し、化合物をAgilent PL-HCO3カートリッジに通すことにより中和して、表題化合物を得た（１９ｍｇ、１０％）。ＬＣＭＳ：Ｃ３２Ｈ３４Ｆ３Ｎ７Ｏ理論値５８９．３、実測値５９０．５［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ７．９３－７．８７（ｍ，２Ｈ），７．５３（ｓ，１Ｈ），７．４５（ｔ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３８（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．９４－６．８７（ｍ，１Ｈ），４．９４（ｓ，２Ｈ），３．７２（ｓ，２Ｈ），３．３４（ｓ，２Ｈ），３．２２－３．１１（ｍ，１Ｈ），３．１１－３．０３（ｍ，１Ｈ），３．０３－２．９２（ｍ，４Ｈ），２．８７（ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，１Ｈ），２．７９（ｓ，３Ｈ），２．５５－２．４３（ｍ，１Ｈ），２．１３－２．０４（ｍ，４Ｈ），１．８０－１．７３（ｍ，１Ｈ），１．６５－１．５４（ｍ，１Ｈ），１．３２（ｑｄ，Ｊ＝１２．４，４．３Ｈｚ，１Ｈ），１．１９－１．０６（ｍ，４Ｈ）．
実施例５０：（１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－（（３，３－ジフルオロアゼパン－１－イル）メチル）－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル
Figure 0007587528000148
[0468] （１ｒ，３ｒ）－３－（３－（６－ホルミル－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－１－メチル－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル（５０ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）及び３，３－ジフルオロアゼパン塩酸塩（３１ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を使用して、実施例４、ステップ２と同様に還元的アミノ化を行い、クロマトグラフィーＣ後に表題化合物を得た（２３ｍｇ、３５％）。ＬＣＭＳ：Ｃ３１Ｈ３１Ｆ５Ｎ６Ｏ理論値５９８．２、実測値５９９．５［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ８．０３（ｓ，１Ｈ），７．９８（ｓ，１Ｈ），７．８９（ｓ，１Ｈ），７．８８－７．８４（ｍ，１Ｈ），７．４４（ｔ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３７（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８８（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），４．９９（ｓ，２Ｈ），３．９４（ｓ，２Ｈ），３．３４（ｓ，２Ｈ），３．１５（ｄｔ，Ｊ＝９．６，６．９Ｈｚ，１Ｈ），３．０７（ｔ，Ｊ＝１４．０Ｈｚ，２Ｈ），３．０２－２．９２（ｍ，４Ｈ），２．８３－２．７２（ｍ，５Ｈ），２．２３－２．０８（ｍ，２Ｈ），１．７９－１．６５（ｍ，４Ｈ）．
実施例５１：［（１ｒ，３ｒ）－３－［３－（６－｛［（３Ｒ）－４，４－ジフルオロ－３－メチルピペリジン－１－イル］メチル｝－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）－３Ｈ－イソインドール－２－イル）フェニル］－３－［（４－メチル－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル］シクロブチル］アセトニトリル
Figure 0007587528000149
[0469] ステップ１：２－［３－（シアノメチル）シクロブチリデン］酢酸メチルの合成。２－（３－オキソシクロブチル）アセトニトリル（２．０ｇ、１８．３ｍｍｏｌ）を使用して、実施例Ｇ、ステップ１と同様に反応を行い、表題化合物を生成した（２．８ｇ、９２％）。
[0470] ステップ２：２－［（１ｒ，３ｒ）－１－｛３－［（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ］フェニル｝－３－（シアノメチル）シクロブチル］酢酸ｃｉｓ－メチルの合成。２－［３－（シアノメチル）シクロブチリデン］酢酸メチル（２．８ｇ、１８．３ｍｍｏｌ）を使用して、実施例Ｇ、ステップ２と同様に反応を行い、クロマトグラフィーＡから初めに溶出する異性体として表題化合物を生成した（２．１ｇ、３５％）。
[0471] ステップ３：２－（（１ｒ，３ｒ）－１－（３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）フェニル）－３－（シアノメチル）シクロブチル）酢酸の合成。２－［（１ｒ，３ｒ）－１－｛３－［（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ］フェニル｝－３－（シアノメチル）シクロブチル］酢酸ｃｉｓ－メチル（２．１ｇ、５．８６ｍｍｏｌ）を使用して、実施例Ｇ、ステップ３と同様に反応を行った。全混合物を濃縮乾固させることにより反応物をワークアップした後、水（５０ｍＬ）を加え、この溶液を１Ｎ ＨＣｌ（３．８ｍＬ）でｐＨ約５に達するように酸性化し、続く一般的ワークアップ手順１により表題化合物を得た（２．０５ｇ、９９％）。
[0472] ステップ４：Ｎ－｛３－［（１ｒ，３ｒ）－３－（シアノメチル）－１－［（４－メチル－５－スルファニル－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル］シクロブチル］フェニル｝カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチルの合成。２－（（１ｒ，３ｒ）－１－（３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）フェニル）－３－（シアノメチル）シクロブチル）酢酸（２．０５ｇ、５．８ｍｍｏｌ）を使用して、実施例Ｇ、ステップ４と同様に反応を行い、表題化合物を得た（０．５ｇ、２０％）。
[0473] ステップ５：Ｎ－｛３－［（１ｒ，３ｒ）－３－（シアノメチル）－１－［（４－メチル－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル］シクロブチル］フェニル｝カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチルの合成。Ｎ－｛３－［（１ｒ，３ｒ）－３－（シアノメチル）－１－［（４－メチル－５－スルファニル－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル］シクロブチル］フェニル｝カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（５６０ｍｇ、１．３５ｍｍｏｌ）を使用して、実施例Ｇ、ステップ５と同様に反応を行い、表題化合物を生成した（１００ｍｇ、１９％）。
[0474] ステップ６：２－（（１ｒ，３ｒ）－３－（３－アミノフェニル）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブチル）アセトニトリルの合成。Ｎ－｛３－［（１ｒ，３ｒ）－３－（シアノメチル）－１－［（４－メチル－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル］シクロブチル］フェニル｝カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（１００ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）を使用して、実施例Ｇ、ステップ６と同様に反応を行い、表題化合物を生成した（８０ｍｇ、９９％）。
[0475] ステップ７：２－［（１ｒ，３ｒ）－３－｛３－［６－ホルミル－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）－３Ｈ－イソインドール－２－イル］フェニル｝－３－［（４－メチル－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル］シクロブチル］アセトニトリルの合成。２－（（１ｒ，３ｒ）－３－（３－アミノフェニル）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブチル）アセトニトリル（８０ｍｇ、０．８３ｍｍｏｌ）及び２－（ブロモメチル）－５－ホルミル－３－（トリフルオロメチル）安息香酸メチル（１０１ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）を使用して、実施例３と同様に反応を行い、クロマトグラフィーＢ後に表題化合物を生成した（６０ｍｇ、４３％）。
[0476] ステップ８：［（１ｒ，３ｒ）－３－［３－（６－｛［（３Ｒ）－４，４－ジフルオロ－３－メチルピペリジン－１－イル］メチル｝－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）－３Ｈ－イソインドール－２－イル）フェニル］－３－［（４－メチル－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル］シクロブチル］アセトニトリルの合成。２－［（１ｒ，３ｒ）－３－｛３－［６－ホルミル－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）－３Ｈ－イソインドール－２－イル］フェニル｝－３－［（４－メチル－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル］シクロブチル］アセトニトリル（２０ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）及び（Ｒ）－４，４－ジフルオロ－３－メチルピペリジン塩酸塩（８．７ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）を使用して、実施例１３と同様に還元的アミノ化を行い、クロマトグラフィーＣ後に表題化合物を得た（４１ｍｇ、１５％）。ＬＣＭＳ：Ｃ３２Ｈ３３Ｆ５Ｎ６Ｏ理論値６１２．３、実測値６１３．５［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ８．０１（ｓ，１Ｈ），７．９３（ｓ，１Ｈ），７．９１－７．７９（ｍ，２Ｈ），７．３３（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．２５（ｔ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），６．７３（ｄｔ，Ｊ＝７．９，１．２Ｈｚ，１Ｈ），４．９７（ｓ，２Ｈ），３．７４（ｓ，２Ｈ），３．２４（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，２Ｈ），３．００－２．８６（ｍ，３Ｈ），２．８６－２．７３（ｍ，２Ｈ），２．６９（ｓ，３Ｈ），２．５８（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ），２．４８－２．２９（ｍ，１Ｈ），２．２５－２．１８（ｍ，４Ｈ），２．１５－２．１０（ｍ，２Ｈ），１．００（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，３Ｈ）．
実施例５２：（（１Ｓ，３ｓ）－３－（３－（６－（（（Ｒ）－４，４－ジフルオロ－３－メチルピペリジン－１－イル）メチル）－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブチル）アセトニトリル
Figure 0007587528000150
[0477] 実施例５１、ステップ２からの２番目に溶出する異性体を使用して、実施例５１、ステップ３～８と同様に表題化合物を合成した。ＬＣＭＳ：Ｃ３２Ｈ３３Ｆ５Ｎ６Ｏ理論値６１２．３、実測値６１３．５［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ８．０２（ｓ，１Ｈ），７．９４（ｓ，１Ｈ），７．９１－７．８２（ｍ，２Ｈ），７．５９（ｔ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３９（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．０５（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ），５．０２（ｓ，２Ｈ），３．７４（ｓ，２Ｈ），３．１７（ｓ，２Ｈ），２．８５－２．７４（ｍ，７Ｈ），２．６９（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，１Ｈ），２．６１（ｓ，２Ｈ），２．５２－２．３１（ｍ，３Ｈ），２．１７－２．１１（ｍ，４Ｈ），１．００（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，３Ｈ）．
実施例５３：４－（（５－アザスピロ［２．４］ヘプタン－５－イル）メチル）－Ｎ－（３－（（１ｒ，３ｒ）－３－シアノ－１－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブチル）フェニル）－６－シクロプロピルピコリンアミド
Figure 0007587528000151
[0478] ステップ１：６－クロロ－４－メチルピコリン酸エチルの合成。ＥｔＯＨ（３００．０ｍＬ）中の６－クロロ－４－メチルピリジン－２－カルボン酸（５０．０ｇ、５８．４８ｍｍｏｌ）の溶液にＨ２ＳＯ４（４．００ｍＬ）を滴下して加えた。得られた混合物を７０℃で１６時間撹拌し、次に真空下で濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃに溶解させて、ＮａＨＣＯ３（飽和水溶液）及び水で逐次洗浄した。合わせた有機相を乾燥させて、ろ過し、濃縮することにより表題化合物を得て（５３．１ｇ、粗製）、これを精製することなく次のステップで使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）計算値（Ｃ９Ｈ１０ＣｌＮＯ２）［Ｍ＋Ｈ］＋、２００．０、実測値、２００．０。
[0479] ステップ２：６－シクロプロピル－４－メチルピコリン酸エチルの合成。ジオキサン（４５０ｍＬ）中の６－クロロ－４－メチルピリジン－２－カルボン酸エチル（３０．０ｇ、０．１５ｍｏｌ）、シクロプロピルボロン酸（２５．０ｇ、０．２９ｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（１７．０ｇ、１４．７１ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（６２．０ｇ、０．４５ｍｍｏｌ）の脱気した溶液をＮ２下にて１００℃で２時間撹拌した。水を加えることにより反応混合物をクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させて、ろ過し、真空下で濃縮した。残渣をクロマトグラフィーＡによって精製して、表題化合物を提供した（２０．１ｇ、６４．８％）。ＭＳ（ＥＳＩ）計算値（Ｃ１２Ｈ１５ＮＯ２）［Ｍ＋Ｈ］＋、２０６．１、実測値、２０６．０。
[0480] ステップ３：６－シクロプロピル－４－ホルミルピリジン－２－カルボン酸エチルの合成。ＨＯＡｃ（１２０ｍＬ）中の６－シクロプロピル－４－メチルピリジン－２－カルボン酸エチル（１４．０ｇ、６８．２１ｍｍｏｌ）及びＡｃ２Ｏ（３１．５ｇ）の混合物に、ＳｅＯ２（１０．５ｇ、９４．８１ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を１２０℃で１６時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、ろ過した。ろ液を真空下で濃縮した。粗残渣をクロマトグラフィーＣによって精製して、表題化合物を得た（９．８ｇ、４６．２％）。ＭＳ（ＥＳＩ）計算値（Ｃ１２Ｈ１３ＮＯ３）［Ｍ＋Ｈ］＋、２２０．１、実測値、２２０．０。
[0481] ステップ４：４－｛５－アザスピロ［２．４］ヘプタン－５－イルメチル｝－６－シクロプロピルピリジン－２－カルボン酸エチルの合成。６－シクロプロピル－４－ホルミルピリジン－２－カルボン酸エチル（３６０ｍｇ、１．６４ｍｍｏｌ）、５－アザスピロ［２．４］ヘプタン塩酸塩（４４０ｍｇ、３．３ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（４６０μＬ、３．３ｍｍｏｌ）、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（５２９ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）、及びＤＣＭ（３．０ｍＬ）の混合物を、密封したバイアル内において、ＬＣＭＳによってアルデヒドの消費が示されるまで４０～５０℃で加熱した。混合物をＭｅＯＨ及びＥｔＯＡｃで希釈し、セライトで濃縮し、クロマトグラフィーＤによって精製して、表題化合物を得た（２５５ｍｇ、５２％）。
[0482] ステップ５：４－（（５－アザスピロ［２．４］ヘプタン－５－イル）メチル）－６－シクロプロピルピコリン酸リチウムの合成。４－｛５－アザスピロ［２．４］ヘプタン－５－イルメチル｝－６－シクロプロピルピリジン－２－カルボン酸エチル（２５０ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ）、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（３５ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ（２ｍＬ）、及び水（１ｍＬ）の混合物を完全になるまで激しく撹拌した。ＴＨＦを減圧下で除去して、表題化合物を得た。
[0483] ステップ６：実施例５３。室温でＤＭＦ（０．５ｍＬ）中の４－（（５－アザスピロ［２．４］ヘプタン－５－イル）メチル）－６－シクロプロピルピコリン酸リチウム（３１ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）、実施例Ｇ（３０ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）、及び４－メチルモルホリン（６４μＬ、０．６ｍｍｏｌ）の溶液に、１－プロパンホスホン酸無水物（０．８１ｍＬ、０．１４ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液を完全になるまで４５～５０℃で加熱した。混合物を水及びアセトニトリルで希釈し、セライトで濃縮し、クロマトグラフィーＣによって精製して、表題化合物を得た（２７ｍｇ、４７％）：１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １０．１１（ｓ，１Ｈ），８．１８（ｓ，１Ｈ），７．８３（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１Ｈ），７．７３（ｄｄ，Ｊ＝８．１，２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４９（ｔ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４３（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１Ｈ），７．２７（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），６．７５－６．６５（ｍ，１Ｈ），３．６７（ｓ，２Ｈ），３．２９－３．１８（ｍ，３Ｈ），２．８６（ｔｄ，Ｊ＝１０．５，９．１，７．３Ｈｚ，４Ｈ），２．８０（ｓ，３Ｈ），２．６８（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），２．２５（ｔｔ，Ｊ＝８．１，４．９Ｈｚ，１Ｈ），１．７７（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），１．１４（ｄｔ，Ｊ＝５．９，３．１Ｈｚ，２Ｈ），１．０４（ｄｔ，Ｊ＝８．３，３．２Ｈｚ，２Ｈ），０．５１（ｄｔ，Ｊ＝８．１，１．９Ｈｚ，４Ｈ）．ＬＣＭＳ：Ｃ３１Ｈ３５Ｎ７Ｏ理論値：５２１、実測値：ｍ／ｚ ５２２［Ｍ＋Ｈ］＋。
実施例５４：Ｎ－（３－（（１ｒ，３Ｒ）－３－シアノ－１－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブチル）フェニル）－６－シクロプロピル－４－（（（３Ｓ，５Ｒ）－３，５－ジメチルピペリジン－１－イル）メチル）ピコリンアミドの合成
Figure 0007587528000152
[0484] ステップ４で（３Ｒ，５Ｓ）－３，５－ジメチルピペリジンを使用する実施例５３の手順に従い、表題化合物を調製した：１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １０．１２（ｓ，１Ｈ），８．１８（ｓ，１Ｈ），７．８２（ｓ，１Ｈ），７．７２（ｄｄ，Ｊ＝８．１，１．９Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｔ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），７．４１（ｓ，１Ｈ），７．２６（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），６．７１（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），３．５２（ｓ，２Ｈ），３．２８（ｓ，２Ｈ），３．２７－３．２０（ｍ，１Ｈ），２．９１－２．８２（ｍ，４Ｈ），２．８０（ｓ，３Ｈ），２．７５－２．６８（ｍ，２Ｈ），２．２４（ｔｔ，Ｊ＝８．３，４．８Ｈｚ，１Ｈ），１．７２－１．５９（ｍ，２Ｈ），１．４９（ｔ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，２Ｈ），１．１４（ｄｔ，Ｊ＝６．０，３．２Ｈｚ，２Ｈ），１．０４（ｄｔ，Ｊ＝８．２，３．３Ｈｚ，２Ｈ），０．８０（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，６Ｈ），０．５０（ｑ，Ｊ＝１１．９Ｈｚ，１Ｈ）；ＬＣＭＳ：Ｃ３２Ｈ３９Ｎ７Ｏ理論値：５３７、実測値：ｍ／ｚ ５３８［Ｍ＋Ｈ］＋。
実施例５５：Ｎ－（３－（（１ｒ，３Ｓ）－３－シアノ－１－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブチル）フェニル）－６－シクロプロピル－４－（（（Ｓ）－３－メチルピペリジン－１－イル）メチル）ピコリンアミドの合成
Figure 0007587528000153
[0485] ステップ４で（３Ｓ）－３－メチルピペリジン塩酸塩を使用する実施例５３の手順に従い、表題化合物を調製した：１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １０．１２（ｓ，１Ｈ），８．１８（ｓ，１Ｈ），７．８２（ｓ，１Ｈ），７．７２（ｄｄ，Ｊ＝８．０，１．９Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），７．４０（ｓ，１Ｈ），７．２６（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），６．７０（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），３．５１（ｓ，２Ｈ），３．２８（ｓ，２Ｈ），３．２６－３．１８（ｍ，１Ｈ），２．９１－２．８２（ｍ，４Ｈ），２．８０（ｓ，３Ｈ），２．６９（ｔ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，２Ｈ），２．２４（ｔｔ，Ｊ＝８．４，４．９Ｈｚ，１Ｈ），１．９５－１．８５（ｍ，１Ｈ），１．７１－１．５５（ｍ，４Ｈ），１．５５－１．４３（ｍ，１Ｈ），１．１４（ｄｔ，Ｊ＝５．８，３．１Ｈｚ，２Ｈ），１．０４（ｄｔ，Ｊ＝８．２，３．２Ｈｚ，２Ｈ），０．８６（ｄ，Ｊ＝１０．６Ｈｚ，１Ｈ），０．８２（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，３Ｈ）；ＬＣＭＳ：Ｃ３１Ｈ３７Ｎ７Ｏ理論値：５２３、実測値：ｍ／ｚ ５２４［Ｍ＋Ｈ］＋。
実施例５６：Ｎ－（３－（（１ｒ，３Ｒ）－３－シアノ－１－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブチル）フェニル）－６－シクロプロピル－４－（（（Ｒ）－２－メチルモルホリノ）メチル）ピコリンアミド
Figure 0007587528000154
[0486] ステップ４で（（２Ｒ）－２－メチルモルホリンを使用する実施例５３の手順に従い、表題化合物を調製した：１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １０．１２（ｓ，１Ｈ），８．１８（ｓ，１Ｈ），７．８４（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１Ｈ），７．７２（ｄｄ，Ｊ＝８．０，２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｔ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），７．４３（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１Ｈ），７．２７（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），６．７４－６．６８（ｍ，１Ｈ），３．７４（ｄｄｄ，Ｊ＝１１．４，３．２，１．５Ｈｚ，１Ｈ），３．５９－３．４８（ｍ，４Ｈ），３．２８（ｓ，２Ｈ），３．２７－３．１９（ｍ，１Ｈ），２．９１－２．８１（ｍ，４Ｈ），２．８０（ｓ，３Ｈ），２．６７（ｄｔ，Ｊ＝１１．０，２．０Ｈｚ，１Ｈ），２．６３－２．５８（ｍ，１Ｈ），２．２４（ｔｔ，Ｊ＝８．４，４．８Ｈｚ，１Ｈ），２．０８（ｔｄ，Ｊ＝１１．２，３．２Ｈｚ，１Ｈ），１．７８（ｔ，Ｊ＝１０．５Ｈｚ，１Ｈ），１．１４（ｄｔ，Ｊ＝５．９，３．１Ｈｚ，２Ｈ），１．０４（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，５Ｈ）；ＬＣＭＳ：Ｃ３０Ｈ３５Ｎ７Ｏ２理論値：５２５、実測値：ｍ／ｚ ５２６［Ｍ＋Ｈ］＋。
実施例５７：Ｎ－（３－（（１ｒ，３Ｒ）－３－シアノ－１－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブチル）フェニル）－２－シクロプロピル－６－（（（Ｒ）－４，４－ジフルオロ－３－メチルピペリジン－１－イル）メチル）ピリミジン－４－カルボキサミド
Figure 0007587528000155
[0487] ステップ１：２－シクロプロピル－６－メチルピリミジン－４－カルボン酸エチルの合成。ＤＭＦ（２００ｍＬ）中の２，４－ジオキソペンタン酸エチル（１０．０ｇ、６３．２９ｍｍｏｌ）及びシクロプロパンカルボキシミドアミド（６．９ｇ、５７．５ｍｍｏｌ）の溶液に、ｐＴｓＯＨ・Ｈ２Ｏ（１．１ｇ、５．８ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液を１００℃で７２時間撹拌した。混合物を室温に冷却し、水で希釈し、続いて一般的ワークアップ手順１を行った。残渣をクロマトグラフィーＡによって精製して、表題化合物を得た（４．８ｇ、４０％）。
[0488] ステップ２：６－（ブロモメチル）－２－シクロプロピルピリミジン－４－カルボン酸エチルの合成。ＨＯＡｃ（５０ｍＬ）中の２－シクロプロピル－６－メチルピリミジン－４－カルボン酸エチル（５．０ｇ、２４．２ｍｍｏｌ）の溶液に、臭素（３．８６ｇ、２４．２ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液を８０℃で１時間撹拌した。溶媒を真空下で除去した。残渣をクロマトグラフィーＡによって精製して、表題化合物を得た（２．０ｇ、３０％）。
[0489] ステップ３：２－シクロプロピル－６－｛［（３Ｒ）－４，４－ジフルオロ－３－メチルピペリジン－１－イル］メチル｝ピリミジン－４－カルボン酸エチルの合成。６－（ブロモメチル）－２－シクロプロピルピリミジン－４－カルボン酸エチル（５０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）、４，４－ジフルオロ－３－メチルピペリジン塩酸塩（３０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．０６１ｍＬ、０．３６ｍｍｏｌ）、及びアセトニトリルの溶液を室温に５時間維持した。混合物を濃縮して、表題化合物を得た。
[0490] ステップ４：２－シクロプロピル－６－｛［（３Ｒ）－４，４－ジフルオロ－３－メチルピペリジン－１－イル］メチル｝ピリミジン－４－カルボン酸リチオの合成。２－シクロプロピル－６－｛［（３Ｒ）－４，４－ジフルオロ－３－メチルピペリジン－１－イル］メチル｝ピリミジン－４－カルボン酸エチル（６１ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（１５ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ（０．５ｍＬ）、及び水（０．２５ｍＬ）の混合物を完全になるまで激しく撹拌した。ＴＨＦを減圧下で除去して、表題化合物を得た。
[0491] ステップ５：実施例５７：実施例５３、ステップ６の手順に従い表題化合物を調製した：１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １０．４３（ｓ，１Ｈ），８．１８（ｓ，１Ｈ），７．８７（ｓ，１Ｈ），７．７８（ｄｄ，Ｊ＝８．２，２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５６（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．２８（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），３．７６－３．６５（ｍ，２Ｈ），３．２８（ｓ，２Ｈ），３．２７－３．２０（ｍ，１Ｈ），２．９０－２．８２（ｍ，４Ｈ），２．８１（ｓ，３Ｈ），２．７８－２．７２（ｍ，２Ｈ），２．４４－２．３１（ｍ，３Ｈ），２．１９－２．０８（ｍ，２Ｈ），２．０４（ｔｄ，Ｊ＝１１．２，４．１Ｈｚ，１Ｈ），２．００－１．９１（ｍ，１Ｈ），１．１７（ｄｔ，Ｊ＝５．４，２．８Ｈｚ，２Ｈ），１．１３（ｄｑ，Ｊ＝８．４，３．１，２．３Ｈｚ，２Ｈ），０．９５（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，３Ｈ）；ＬＣＭＳ：Ｃ３０Ｈ３４Ｆ２Ｎ７Ｏ２理論値：５６０、実測値：ｍ／ｚ ５６１［Ｍ＋Ｈ］＋。
実施例５８：（１Ｒ，３ｒ）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）－３－（３－（６－（２－（（Ｒ）－２－メチルモルホリノ）プロパン－２－イル）－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）シクロブタン－１－カルボニトリル
Figure 0007587528000156
[0492] ステップ１：５－ブロモ－２－メチル－３－（トリフルオロメチル）安息香酸メチルの合成。酢酸（１００ｍＬ）中の２－メチル－３－（トリフルオロメチル）安息香酸メチル（１５ｇ、７３．３４ｍｍｏｌ）の混合物に、ＨＮＯ３（４６ｇ）及び臭素（１２．８ｇ、８０．１０ｍｍｏｌ）を加えた。次に上記の混合物にＡｇＮＯ３（１６．１ｇ、水中２．５Ｍ）を約３０分かけて加えた。この混合物を室温で１６時間撹拌した後、混合物を水で希釈した。続いて一般的ワークアップ手順１を行った。残渣をクロマトグラフィーＡによって精製して、表題化合物を得た（１４．０ｇ、７０％）。
[0493] ステップ２：５－ブロモ－２－（ブロモメチル）－３－（トリフルオロメチル）安息香酸メチルの合成。ＣＣｌ４（１５０ｍＬ）中の５－ブロモ－２－メチル－３－（トリフルオロメチル）安息香酸メチル（１４．０ｇ、４７．１ｍｍｏｌ）、Ｎ－ブロモコハク酸イミド（ＮＢＳ）（１６．８ｇ、９４．４ｍｍｏｌ）、及び過酸化ベンゾイル（ＢＰＯ）（２．３ｇ、８．９ｍｍｏｌ）の混合物を８０℃で５時間撹拌した。次に固体をろ去した。ろ液を濃縮した。残渣を石油エーテル中０～１０％酢酸エチルのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を提供した（１１．２ｇ、６３％）。
[0494] ステップ３：６－ブロモ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－１－オンの合成。テトラヒドロフラン（５０ｍＬ）中の５－ブロモ－２－（ブロモメチル）－３－（トリフルオロメチル）安息香酸メチル（１１．２ｇ、２９．７９ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＮＨ３（メタノール中７Ｍ、５０ｍＬ）を加えた。この混合物を室温で１６時間撹拌した。混合物を濃縮した。残渣を水で希釈した。続いて一般的ワークアップ手順１を行った。標準的なフラッシュクロマトグラフィー精製方法を用いて表題化合物（８．１ｇ、５３％）を入手した。ＭＳ（ＥＳＩ）計算値（Ｃ９Ｈ５ＢｒＦ３ＮＯ）［Ｍ＋Ｈ］＋、２８０．０；実測値、２８０．１。
[0495] ステップ４：６－アセチル－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－１－オンの合成。ジオキサン（１００．０ｍＬ）中の６－ブロモ－４－（トリフルオロメチル）－２，３－ジヒドロイソインドール－１－オン（９．６ｇ、３４ｍｍｏｌ）、トリブチル（１－エトキシエテニル）スタンナン（１８．６ｇ、５１．６ｍｍｏｌ）、及びＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２・ＣＨ２Ｃｌ２（２．８ｇ、３．４ｍｍｏｌ）の混合物を窒素雰囲気下にて１００℃で１６時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去した。得られた混合物を水で希釈し、続いて一般的ワークアップ手順１を行った。ろ過後、ろ液を真空下で濃縮した。次にこの粗残渣にＨＣｌ（１Ｎ、１００．０ｍＬ）及びＴＨＦ（２００．０ｍＬ）を加えた。得られた混合物を窒素雰囲気下にて６０℃で１時間撹拌した。有機溶媒を真空下で除去し、続いて一般的ワークアップ手順１を行った。残渣をクロマトグラフィーＡによって精製して、６－アセチル－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－１－オン（４．２ｇ、５０％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）計算値（Ｃ１１Ｈ８Ｆ３ＮＯ２）［Ｍ＋Ｈ］＋、２４４．１；実測値、２４４．０。
[0496] ステップ５：２－［（２Ｒ）－２－メチルモルホリン－４－イル］－２－［３－オキソ－７－（トリフルオロメチル）－１，２－ジヒドロイソインドール－５－イル］プロパンニトリルの合成。ＴＨＦ（２０．０ｍＬ）中の６－アセチル－４－（トリフルオロメチル）－２，３－ジヒドロイソインドール－１－オン（６５０．０ｍｇ、２．６７ｍｍｏｌ）、（２Ｒ）－２－メチルモルホリン（２７０．４ｍｇ、２．６７ｍｍｏｌ）、及びＴｉ（ＯＥｔ）４（１．２ｇ、５．４ｍｍｏｌ）の溶液を室温で３時間撹拌した。上記の混合物にトリメチルシリルシアニド（３９７．８ｍｇ、４．０１ｍｍｏｌ）を加え、窒素雰囲気下にて６０℃で１６時間撹拌した。続いて一般的ワークアップ手順１を行った。残渣を水中５～５０％アセトニトリルの逆相フラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、２－［（２Ｒ）－２－メチルモルホリン－４－イル］－２－［３－オキソ－７－（トリフルオロメチル）－１，２－ジヒドロイソインドール－５－イル］プロパンニトリル（５５０．０ｍｇ、５８％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）計算値（Ｃ１７Ｈ１８Ｆ３Ｎ３Ｏ２）［Ｍ＋Ｈ］＋、３５４．１；実測値、３５４．０。
[0497] ステップ６：（Ｒ）－６－（２－（２－メチルモルホリノ）プロパン－２－イル）－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－１－オンの合成。ＴＨＦ（２０．０ｍＬ）中の２－［（２Ｒ）－２－メチルモルホリン－４－イル］－２－［３－オキソ－７－（トリフルオロメチル）－１，２－ジヒドロイソインドール－５－イル］プロパンニトリル（５５０．０ｍｇ、１．５５ｍｍｏｌ）の脱気した溶液に、臭化メチルマグネシウム（３１．０ｍＬ、ＴＨＦ中３Ｍ）を－６０℃で滴下して加えた。この反応混合物を室温に加温し、窒素雰囲気下にて２時間撹拌した。反応混合物を０℃で飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液によってクエンチし、続いて一般的ワークアップ手順１を行った。残渣を水中５～５０％アセトニトリルの逆相フラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、（Ｒ）－６－（２－（２－メチルモルホリノ）プロパン－２－イル）－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－１－オンを得た（１３５．３ｍｇ、３３％）。ＭＳ（ＥＳＩ）計算値（Ｃ１７Ｈ２１Ｆ３Ｎ２Ｏ２）［Ｍ＋Ｈ］＋、３４３．２；実測値、３４３．２。
[0498] ステップ７：（１Ｒ，３ｒ）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）－３－（３－（６－（２－（（Ｒ）－２－メチルモルホリノ）プロパン－２－イル）－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）シクロブタン－１－カルボニトリルの合成。（Ｒ）－６－（２－（２－メチルモルホリノ）プロパン－２－イル）－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－１－オン（５３．１ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）及び（１ｒ，３ｒ）－３－（３－ブロモフェニル）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）シクロブタン－１－カルボニトリル（５２．１ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）を使用して、実施例１１と同様に表題化合物を合成して、トリフルオロ酢酸塩として入手される（１Ｒ，３ｒ）－３－（（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）メチル）－３－（３－（６－（２－（（Ｒ）－２－メチルモルホリノ）プロパン－２－イル）－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル）フェニル）シクロブタン－１－カルボニトリルを得た（１３．３ｍｇ、１２％）。ＭＳ（ＥＳＩ）計算値（Ｃ３２Ｈ３５Ｆ３Ｎ６Ｏ２）［Ｍ＋Ｈ］＋、５９３．３；実測値、５９３．７。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ８．１３（ｄ，Ｊ＝３．９Ｈｚ，２Ｈ），７．８４（ｓ，１Ｈ），７．８１（ｄｄ，Ｊ＝８．１，２．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３９（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３１（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８２（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），４．９３（ｓ，２Ｈ），３．７４（ｄｔ，Ｊ＝１１．０，２．４Ｈｚ，１Ｈ），３．６４－３．４６（ｍ，２Ｈ），３．２９（ｓ，２Ｈ），３．１０（ｄｄｄ，Ｊ＝１６．３，９．３，７．０Ｈｚ，１Ｈ），２．９７－２．８３（ｍ，４Ｈ），２．７２（ｓ，３Ｈ），２．５２（ｄｄｔ，Ｊ＝３３．２，１１．４，２．２Ｈｚ，２Ｈ），２．２８（ｔｄ，Ｊ＝１１．２，３．１Ｈｚ，１Ｈ），１．９２（ｐ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），１．３８－１．３２（ｍ，６Ｈ），１．００（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，３Ｈ）．
実施例５９：（Ｒ）－６－シクロプロピル－５－（１７－（５，５－ジフルオロ－７，９－ジメチル－５Ｈ－５λ４，６λ４－ジピロロ［１，２－ｃ：２’，１’－ｆ］［１，３，２］ジアザボリニン－３－イル）－１５－オキソ－５，８，１１－トリオキサ－２，１４－ジアザヘプタデシル）－Ｎ－（３－（１－（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）プロパン－２－イル）フェニル）ピコリンアミド
Figure 0007587528000157
[0499] ステップ１：６－シクロプロピル－５－（ヒドロキシメチル）ピリジン－２－カルボン酸メチルの合成。トルエン（４０ｍＬ）及び水（４ｍＬ）中の６－クロロ－５－（ヒドロキシメチル）ピリジン－２－カルボン酸メチル（Gangadasu, B. et al., Tetrahedron 2006, 62, 8398-8403）（１．０ｇ、５．０ｍｍｏｌ）、カリウムシクロプロピルトリフルオロボラヌイド（２．１ｇ、１４．１ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（７７０ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）及びＫ３ＰＯ４（３．８ｇ、１８．１ｍｍｏｌ）の混合物を窒素下で１００℃に１６時間加熱した。混合物を室温に冷却し、次にろ過した。ろ液を真空下で蒸発させた。残渣をクロマトグラフィーＡによって精製して、表題化合物を得た（８３４．０ｍｇ、８１％）。ＬＣＭＳ：Ｃ１１Ｈ１３ＮＯ３理論値２０７．２、実測値２０７．９［Ｍ＋Ｈ］＋。
[0500] ステップ２：６－シクロプロピル－５－（ヒドロキシメチル）ピリジン－２－カルボン酸の合成。ＴＨＦ（６ｍＬ）及び水（２ｍＬ）中の６－シクロプロピル－５－（ヒドロキシメチル）ピリジン－２－カルボン酸メチル（１７０．０ｍｇ、０．８２ｍｍｏｌ）及びＬｉＯＨ（４５．０ｍｇ、１．８８ｍｍｏｌ）の混合物を室温で３時間撹拌した。混合物のｐＨをＨＣｌ（１Ｎ）で約５に調整した。混合物を真空下で蒸発させて表題化合物を得て（２００．０ｍｇ、粗製）、これを精製することなく使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）計算値（Ｃ１０Ｈ１１ＮＯ３）［Ｍ＋Ｈ］＋、１９４．１、実測値、１９３．９。
[0501] ステップ３：６－シクロプロピル－５－（ヒドロキシメチル）－Ｎ－［３－［（２Ｒ）－１－（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）プロパン－２－イル］フェニル］ピリジン－２－カルボキサミドの合成。ＤＭＦ（３ｍＬ）中の６－シクロプロピル－５－（ヒドロキシメチル）ピリジン－２－カルボン酸（２００．０ｍｇ、粗製）の混合物に、ＤＩＥＡ（１ｍＬ、６．０５ｍｍｏｌ）、３－［（２Ｒ）－１－（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）プロパン－２－イル］アニリン（１７３．６ｍｇ、０．８０ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（８８３．０ｍｇ、２．３２ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を室温で２時間撹拌した。混合物をクロマトグラフィーＣによって精製し、次に分取ＨＰＬＣによって精製して、表題化合物を得た（３１．６ｍｇ、１０％）。ＭＳ（ＥＳＩ）計算値（Ｃ２２Ｈ２５Ｎ５Ｏ２）［Ｍ＋Ｈ］＋、３９２．２、実測値、３９２．２。
[0502] ステップ４：（Ｒ）－６－シクロプロピル－５－ホルミル－Ｎ－（３－（１－（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）プロパン－２－イル）フェニル）ピコリンアミドの合成。塩化メチレン（３０ｍＬ）中の（Ｒ）－６－シクロプロピル－５－（ヒドロキシメチル）－Ｎ－（３－（１－（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）プロパン－２－イル）フェニル）ピコリンアミド（３．１ｇ、７．９ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃でデス・マーチン試薬（４．０ｇ、９．５ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を０℃で１時間撹拌し、次に飽和ＮａＨＣＯ３水溶液を加えることによりクエンチした。水相をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を合わせ、ブラインで洗浄し、乾燥させて、ろ過した。ろ液を濃縮した。残渣をクロマトグラフィーＢによって精製して、表題化合物を得た（１．８ｇ、５８％）。ＭＳ（ＥＳＩ）計算値（Ｃ２２Ｈ２３Ｎ５Ｏ２）［Ｍ＋Ｈ］＋、３９０．２；実測値３９０．２。
[0503] ステップ５．（Ｒ）－５－（１３－アミノ－５，８，１１－トリオキサ－２－アザトリデシル）－６－シクロプロピル－Ｎ－（３－（１－（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）プロパン－２－イル）フェニル）ピコリンアミドの合成。Ｎ－（２－｛２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］エトキシ｝エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（４５ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）（Ｒ）－６－シクロプロピル－５－ホルミル－Ｎ－（３－（１－（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）プロパン－２－イル）フェニル）ピコリンアミド（６０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を含有するＤＣＭ（１．００ｍＬ）溶液に、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（０．０５ｇ、０．２３ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を室温で３時間撹拌した。濃縮後、粗反応混合物を逆相分取ＨＰＬＣ（Waters 5mM CSH C18カラム、５０×５０ｍｍ）によって、０．１％ＴＦＡ含有水中アセトニトリルで溶出して精製した。所望の画分を合わせ、濃縮することにより、（Ｒ）－（１－（２－シクロプロピル－６－（（３－（１－（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）プロパン－２－イル）フェニル）カルバモイル）ピリジン－３－イル）－５，８，１１－トリオキサ－２－アザトリデカン－１３－イル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチルを得て、これを室温でＤＣＭ／ＴＦＡ １：１溶液によって処理した。１時間後、反応物を濃縮して、表題化合物を得た（５１ｍｇ）；ＬＣＭＳ：Ｃ３０Ｈ４３Ｎ７Ｏ４理論値ｍ／ｚ＝５６５、実測値５６６［Ｍ＋Ｈ］＋。
[0504] ステップ６．（Ｒ）－６－シクロプロピル－５－（１７－（５，５－ジフルオロ－７，９－ジメチル－５Ｈ－５ｌ４，６ｌ４－ジピロロ［１，２－ｃ：２’，１’－ｆ］［１，３，２］ジアザボリニン－３－イル）－１５－オキソ－５，８，１１－トリオキサ－２，１４－ジアザヘプタデシル）－Ｎ－（３－（１－（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）プロパン－２－イル）フェニル）ピコリンアミドの合成。ＨＡＴＵ（１７ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）及び３－（５，５－ジフルオロ－７，９－ジメチル－５Ｈ－５λ４，６λ４－ジピロロ［１，２－ｃ：２’，１’－ｆ］［１，３，２］ジアザボリニン－３－イル）プロパン酸（９ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）を含有するＤＭＦ溶液（１ｍＬ）に、トリエチルアミン（０．０１ｍＬ、６．０８ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）を加えた。室温で５分間撹拌した後、５－（１３－アミノ－５，８，１１－トリオキサ－２－アザトリデカン－１－イル）－６－シクロプロピル－Ｎ－｛３－［（２Ｒ）－１－（４－メチル－４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－イル）プロパン－２－イル］フェニル｝ピリジン－２－カルボキサミド（１７ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液を室温で４時間撹拌した。この粗反応混合物を逆相分取ＨＰＬＣによって、０．１％ＴＦＡ含有水中アセトニトリルで溶出して精製することにより、表題化合物を得た。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ ８．００（ｓ，２Ｈ），７．６７（ｔ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５５－７．４５（ｍ，１Ｈ），７．３８（ｓ，１Ｈ），７．３３（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．０５（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），６．９７（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ），４．５７（ｓ，２Ｈ），３．８２（ｄｄ，Ｊ＝５．７，４．２Ｈｚ，２Ｈ），３．６８（ｈｄ，Ｊ＝３．９，２．６Ｈｚ，４Ｈ），３．６５－３．６２（ｍ，３Ｈ），３．６１（ｓ，３Ｈ），３．６０－３．５６（ｍ，２Ｈ），３．４８（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，３Ｈ），３．３９（ｑ，Ｊ＝６．２，５．６Ｈｚ，３Ｈ），３．３４（ｓ，４Ｈ），３．１８（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，３Ｈ），２．５９（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，２Ｈ），２．４７（ｓ，３Ｈ），２．３５（ｔｔ，Ｊ＝８．３，４．７Ｈｚ，１Ｈ），２．２４（ｓ，３Ｈ），１．４６（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ），１．３７－１．２８（ｍ，２Ｈ），１．１９（ｄｔ，Ｊ＝８．２，３．３Ｈｚ，３Ｈ）；ＬＣＭＳ：Ｃ４４Ｈ５６ＢＦ２Ｎ９Ｏ５理論値ｍ／ｚ＝８４０、実測値８４１［Ｍ＋Ｈ］＋。
生物学的実施例
[0505] 以下の略語が適用される：ＡＣＴ（養子細胞治療）；ＡＵＣ（曲線下面積）；Ｃｍｐｄ（化合物）；ＣＰ（細胞増殖）；Ｅ／Ｔ（エフェクター：標的細胞比）；ＩＤ（識別情報）；ＭＦＩ（平均蛍光強度）；ｍｐｋ（ミリグラム毎キログラム）；ＰＢＭＣ（末梢血単核球）；ＴＩＬ（腫瘍浸潤リンパ球）；ＤＰＢＳ（ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水）；及びＵｂ（ユビキチン）。
生物学的実施例１：候補阻害薬によるＣｂｌ－ｂ阻害の評価
[0506] 候補化合物について、Ｃｂｌ－ｂに結合したフルオロフォア標識プローブ（実施例５９）を置換するその能力から明らかなとおりの、それがＥ３ユビキチンタンパク質リガーゼであるＣｂｌ－ｂに結合して阻害する能力を評価した。
材料及び方法
Ｃｂｌ－ｂ置換アッセイ（Ｃｂｌ－ｂ阻害アッセイ）
[0507] 候補化合物の存在下でのＣｂｌ－ｂとフルオロフォア標識プローブの相互作用をモニタすることにより、候補化合物が公知の阻害薬を置換し、それによってＣｂｌ－ｂ活性を阻害する能力を測定した。そのＮ末端にAvitagを含有するＣｂｌ－ｂ（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｑ１３１９１；配列番号１）のトランケート型変異体をBirAビオチンリガーゼと共発現させて、標準プロトコルを用いて精製した（Dou et al., Nature Structural and Molecular Biology, 8: 982-987, 2013；Avidity LLCを参照されたい）。
[0508] Ｃｂｌ－ｂアミノ酸残基３６～４２７：
Figure 0007587528000158
[0509] 蛍光標識阻害薬プローブを合成し、BODIPY FLタグを付加した（実施例５９）。Ｃｂｌ－ｂ置換アッセイの実施は、室温で３８４ウェルプレートにおいて、１０μＬ反応容積として、２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．５、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、０．０１％トリトンＸ－１００、０．０１％ＢＳＡ及び０．５ｍＭ ＴＣＥＰを含有するアッセイ緩衝液中の０．５ｎＭ Ｃｂｌ－ｂ又は０．１２５ｎＭ Ｃｂｌ－ｂ（最終濃度、それぞれ「高」及び「低」と指示される）を１％ＤＭＳＯ（最終濃度）で候補化合物の存在下にて１時間プレインキュベートすることによった。候補化合物の存在下でインキュベートした後、１５０ｎＭ蛍光標識阻害薬プローブ及び２ｎＭストレプトアビジン－テルビウム（Cisbio）（最終濃度）からなる近似ＥＣ４０結合飽和の存在下でプレートを更に１時間インキュベートした。１時間のインキュベーション後、Envisionプレートリーダー（Perkin Elmer）を使用してプレートのＴＲ－ＦＲＥＴシグナルを５２０／６２０ｎＭで読み取った。ＴＲ－ＦＲＥＴシグナルが存在する場合、Ｃｂｌ－ｂからプローブが追い出されておらず、化合物候補に置き換わっていないことを意味した。ＦＲＥＴシグナルが存在しない場合、Ｃｂｌ－ｂからプローブが追い出され、化合物候補に置き換わったことを意味した。
[0510] 化合物をＩＣ５０に関して順位付けして、以下のとおりのビンＡ～Ｅに分けた：Ａは＜１ｎＭを示し；Ｂは１ｎＭ≦ＩＣ５０＜２ｎＭを示し；Ｃは２ｎＭ≦ＩＣ５０＜５ｎＭを示し；Ｄは５ｎＭ≦ＩＣ５０＜２０ｎＭを示し；Ｅは２０ｎＭ≦ＩＣ５０を示す。
Figure 0007587528000159
生物学的実施例２：Ｃｂｌ－ｂ阻害薬によるＴ細胞活性化の評価
[0511] Ｔ細胞及びマウスの両方において、ｃｂｌ－ｂ遺伝子の遺伝子ノックアウトによりＣｂｌ－ｂ機能を喪失させると、Ｔ細胞活性化及びＴ細胞のアネルギー抵抗性のためのＣＤ２８共刺激要件が失われる（Bachmaier et al., Nature, 403: 211-216, 2000；及びJeon et al., Immunity, 21: 167-177, 2004を参照されたい）。本明細書に記載されるＣｂｌ－ｂ阻害薬がＴ細胞を活性化させる能力について評価した。
材料及び方法
初代ヒト全Ｔ細胞活性化の精製及び評価
[0512] １）Ficoll-Paque（商標）（GE Healthcare）を使用して健常ヒトドナーのバフィーコートから末梢血造血細胞を分離することによるか；又は２）LeukoPak供血から直接かのいずれかにより、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を入手した。市販キットによるネガティブ選択を利用して、製造者のプロトコルに従いＰＭＢＣから全ヒト初代Ｔ細胞を単離することにより（Miltenyi Biotec、カタログ番号１３０－０９６－５３５（即ち、表面マーカーＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ３４、ＣＤ３６、ＣＤ５６、ＣＤ１２３、及びＣＤ２３５ａに対する抗体のカクテルをＰＢＭＣとインキュベートした後、試料を磁気ビーズに通して、これらの表面マーカーを発現する細胞を除去した）又はStemcell Technolgies、カタログ番号１７９５１）、フローサイトメトリーによって判定したとき９５％を超えるＣＤ３＋細胞を生じさせた。細胞を３７℃、５％ＣＯ２で一晩静置した。各ウェル１×１０５細胞にＣｂｌ阻害薬を加え、最終ＤＭＳＯ濃度を０．１％未満としてプレートを指示される濃度（表３）で３７℃で５％ＣＯ２にて１時間インキュベートした。抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体で刺激した試料（抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８）について、試験したＣｂｌ－ｂ阻害薬濃度は、１μＭ、及び０．３μＭであった。抗ＣＤ３抗体単独で刺激した試料（抗ＣＤ３）について、試験したＣｂｌ－ｂ阻害薬濃度は、３μＭ、及び１μＭであった。Ｃｂｌ－ｂ阻害薬とのインキュベーション後、プレート結合型抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３）単独又はプレート結合型抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３）と可溶型抗ＣＤ２８抗体（２８．２）（Life Technologies）のいずれかで初代ヒト全Ｔ細胞を刺激した。プレート結合型抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３）を含むプレートを調製するため、９６ウェル丸底組織培養プレートを１００μＬの抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３）によってリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中１０μｇ／ｍＬで、３７℃、５％ＣＯ２にて４時間コートした。プレートをＰＢＳで１回洗浄した後、各ウェルに可溶型抗ＣＤ２８抗体（２８．２）と共に又はそれ無しで細胞を５μｇ／ｍＬの最終濃度で加えた。細胞を４８時間刺激した後、無細胞の上清を回収し、フローサイトメトリーによる表面マーカー判定のため細胞集団を染色した。ＩＬ－２を含めたサイトカイン分泌に関して、ＥＬＩＳＡ（R&D Systems、Peprotech又はLife Technologies）又はLuminexマルチプレックスキット（Procarta Life Technologies）により、製造者のプロトコルに従い上清を分析した。細胞を抗ＣＤ２５抗体（BD Biosciences）で染色して、表面活性化マーカーのレベルを判定した。
結果
[0513] 読み取った情報は、ベースラインに対する変化倍数として報告した。この研究のベースラインは、抗ＣＤ３抗体及び可溶型抗ＣＤ２８抗体で刺激した全ヒトＴ細胞であって、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬とインキュベートしなかった細胞から入手した測定値である（表３）。抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８で刺激したＴ細胞については、ＩＬ－２分泌がベースラインの２．５倍より大きい変化及びＣＤ２５表面染色がベースラインの１．３倍より大きい変化を、有意且つ陽性応答と見なした（表３）。抗ＣＤ３単独で刺激したＴ細胞については、ＩＬ－２分泌がベースラインの０．１倍より大きい変化及びＣＤ２５表面染色がベースラインの０．６倍より大きい変化を、有意且つ陽性応答と見なした（表３）。それらの読取り値に基づき化合物を順位付けして、以下のとおり各ビンに分けた。
[0514] 抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体共刺激でのＩＬ－２分泌について、ビンは以下である：Ｃは１５倍以下を示し、Ｂは１５～２０倍を示し、Ａは２０倍超を示す；
抗ＣＤ３抗体刺激でのＩＬ－２分泌について、ビンは以下である：Ｃは０．４０倍未満を示し、Ｂは０．４０～０．８５倍を示し、Ａは０．８５倍超を示す；
抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体共刺激でのＣＤ２５染色について、ビンは以下である：Ｃは１．２４倍以下を示し、Ｂは１．２４～１．３９倍を示し、Ａは１．３９倍超を示す；及び
抗ＣＤ３抗体刺激でのＣＤ２５染色について、ビンは以下である：Ｃは１．００倍以下を示し、Ｂは１．００～１．１５倍を示し、及びＡは１．１５倍超を示す。
Figure 0007587528000160
Figure 0007587528000161
結論
[0515] Ｃｂｌ－ｂ阻害薬は、抗ＣＤ３抗体単独で刺激するか、又は抗ＣＤ２８抗体と組み合わせて刺激したＴ細胞においてＩＬ－２分泌を亢進させた。表面活性化マーカー、ＣＤ２５の発現は、抗ＣＤ３抗体単独で刺激するか、又は抗ＣＤ２８抗体と組み合わせて刺激したＴ細胞で増加した。これらの結果は、同定されたＣｂｌ－ｂ阻害薬がＴ細胞を活性化させる能力を有すること、及びかかる活性化が抗ＣＤ２８抗体との共刺激を必要としないことを示している。
生物学的実施例３：Ｃｂｌ－ｂ阻害薬の免疫調節効果の評価
[0516] スクリーニングアッセイから同定されたＣｂｌ－ｂ阻害薬は、ＩＬ－２分泌及びＣＤ２５表面活性化マーカーの発現の亢進からも明らかなとおり、インビトロで全ヒトＴ細胞を活性化させる能力を実証した。更なるインビトロ研究を行い、Ｔ細胞による追加的なサイトカイン分泌及びＴ細胞上の表面活性化マーカーの発現を判定した。Ｃｂｌ－ｂ阻害薬がＴ細胞増殖を増加させ、Ｔ細胞枯渇を低下させ、及びＴ細胞アネルギーを低下させる能力など、本明細書に記載されるＣｂｌ－ｂ阻害薬と接触したＴ細胞に対する追加的な免疫調節効果を判定した。本明細書に記載されるものなどのＣｂｌ－ｂ阻害薬がインビボでＴ細胞を活性化させる能力もまた判定した。Ｃｂｌ－ｂ阻害薬がＢ細胞及びＮＫ細胞を活性化させる能力など、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬による他の免疫調節効果も判定した。
初代ヒト全Ｔ細胞活性化の精製及び評価
[0517] １）Ficoll-Paque（商標）（GE Healthcare）を使用して健常ヒトドナーのバフィーコートから末梢血造血細胞を分離することによるか；又は２）LeukoPak供血から直接かのいずれかにより、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を入手した。市販キットによるネガティブ選択を利用して、製造者のプロトコルに従いＰＭＢＣから全ヒト初代Ｔ細胞を単離することにより（Miltenyi Biotec、カタログ番号１３０－０９６－５３５（即ち、表面マーカーＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ３４、ＣＤ３６、ＣＤ５６、ＣＤ１２３、及びＣＤ２３５ａに対する抗体のカクテルをＰＢＭＣとインキュベートした後、試料を磁気ビーズに通して、これらの表面マーカーを発現する細胞を除去した）又はStemcell Technolgies、カタログ番号１７９５１）、フローサイトメトリーによって判定したとき９５％を超えるＣＤ３＋細胞を生じさせた。細胞増殖の測定のため、細胞をCell Trace Violet（Invitrogen）で製造者のプロトコルに従い標識した後、抗ＣＤ３抗体単独、又は抗ＣＤ２８抗体との組み合わせで刺激することにより活性化させた。最終ＤＭＳＯ濃度を０．１％未満としながら、各ウェル１×１０５細胞にＣｂｌ－ｂ阻害薬を複数の濃度（例えば、１０μＭ、１．１１μＭ、又は０．１２３μＭ）で加えた。プレートを５％ＣＯ２にて３７℃で１時間インキュベートした。Ｃｂｌ－ｂ阻害薬とのインキュベーション後、プレート結合型抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３）単独又はプレート結合型抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３）と可溶型抗ＣＤ２８抗体（２８．２）（Life Technologies）のいずれかで初代ヒト全Ｔ細胞を刺激した。プレート結合型抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３）を含むプレートを調製するため、９６ウェル丸底組織培養プレートを１００μＬの抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３）によってリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中１０μｇ／ｍＬで、３７℃、５％ＣＯ２にて４時間コートした。プレートをＰＢＳで洗浄した後、各ウェルに可溶型抗ＣＤ２８抗体（２８．２）と共に又はそれ無しで細胞を５μｇ／ｍＬの最終濃度で加えた。細胞を４８時間刺激した後、無細胞の上清を回収し、フローサイトメトリーによる表面マーカー判定のため細胞集団を染色した。サイトカイン分泌（例えば、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮγ、及びＴＮＦα）に関して、ＥＬＩＳＡ（R&D Systems、Peprotech又はLife Technologies）又はLuminexマルチプレックスキット（Procarta Life Technologies）により、製造者のプロトコルに従い上清を分析した。細胞を抗ＣＤ６９（BD Biosciences）で染色して、表面活性化マーカーのレベルを判定した。増殖はフローサイトメトリーにより測定し、データはFlowJo v7.6.5又はv10で分析した。読み取った情報は、ベースラインに対する変化倍数として報告した。一部の実施形態において、ベースラインは、抗ＣＤ３抗体単独で刺激した全ヒトＴ細胞であって、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬とインキュベートしなかった細胞から入手した測定値であった。一部の実施形態において、ベースラインは、抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体で刺激した全ヒトＴ細胞であって、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬とインキュベートしなかった細胞から入手した測定値であった。
[0518] 同種異系混合リンパ球反応（ＭＬＲ）のコンテクストで、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬が初代ヒトＴ細胞に及ぼす効果もまた評価した。同種異系未熟樹状細胞を以下の条件下で作成した。１）Ficoll-Paque（商標）（GE Healthcare）を使用して健常ヒトドナーのバフィーコートから末梢血造血細胞を分離することによるか；又は２）LeukoPak供血から直接かのいずれかにより、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を入手した。市販キットによるポジティブ選択を利用して、製造者のプロトコルに従いＰＭＢＣから単球を単離することにより（Stemcell Technologies、カタログ番号１７８５８）、フローサイトメトリーによって判定したとき９５％を超えるＣＤ１４＋細胞を生じさせた。単球を３０ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＧＭ－ＣＳＦ及び２０ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＩＬ－４と共に７日間培養して、未熟樹状細胞を作成した。単球及びＴ細胞は、末梢血から新鮮に単離するか、又は凍結ストックから解凍するかのいずれかであった。ヒトＴ細胞を単離し、ＣＦＳＥで標識し、上記に記載されるとおり阻害薬と共にインキュベートした。各ウェル２×１０３同種異系未熟樹状細胞との共培養下にある１×１０５Ｔ細胞に、最終ＤＭＳＯ濃度を０．１％未満としてＣｂｌ－ｂ阻害薬を複数の濃度（例えば、１０μＭ、又は１．１１μＭ）で加え、５％ＣＯ２にて３７℃で５日間インキュベートした。Ｔ細胞の増殖をフローサイトメトリーにより評価した。
[0519] Ｃｂｌ－ｂ阻害薬が、Ｔ細胞活性化の指標となるＴ細胞からのサイトカイン（例えば、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮγ、及びＴＮＦα）の分泌及び／又はＴ細胞上の細胞表面マーカー（例えば、ＣＤ６９）の表面発現を誘導し、又は亢進させる能力を決定する試験を行った。またＣｂｌ－ｂ阻害薬がＴ細胞増殖を誘導し、又は亢進させる能力を決定する試験も行った。共刺激の存在下で、且つ条件がプライミングに最適以下の場合にＣｂｌ－ｂ阻害薬がＴ細胞活性化に及ぼす効果を試験した。
Ｔ細胞枯渇のヒトＴ細胞インビトロモデル
[0520] Ｔ細胞枯渇は、慢性感染症及び癌に応答して細胞のエフェクター応答が不足し、抑制性受容体発現レベルが持続するために、Ｔ細胞機能不全が生じることを特徴とした。Ｔ細胞枯渇のインビトロモデルには、同種異系モデル及び自家モデルが含まれる。自家モデルでは、骨髄系細胞及びＳＥＢ（ブドウ球菌エンテロトキシンＢ、Millipore）を使用して抗ＣＤ３刺激Ｔ細胞を刺激した。１）Ficoll-Paque（商標）（GE Healthcare）を使用して健常ヒトドナーのバフィーコートから末梢血造血細胞を分離することによるか；又は２）LeukoPak供血から直接かのいずれかにより、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を入手した。市販キットによるネガティブ選択を用いて、Stemcell Technologies EasySepヒト単球濃縮キット、ＣＤ１６枯渇なし（カタログ番号１９０５８）で、製造者のプロトコルに従い単球を単離した。５０ｎｇ／ｍＬ組換えヒトＭ－ＣＳＦ（R&D System又はPeprotech）を含有する完全培地（例えば、添加剤不含、１０％ＨＩ ＦＢＳ、１×グルタミン及び１×β－メルカプトエタノール含有ＲＰＭＩ １６４０）で、単離した単球を培養した。細胞は、各ウェルにつき２×１０６細胞で播き（０日目）、５日間培養し、２日目に新鮮培地及びサイトカインを供給した。５日目、１００ｎｇ／ｍＬでＩＦＮγを加え、細胞を一晩インキュベートした。市販キットでネガティブ選択を用いて（Stemcell Technologies EasySepヒトＴ細胞単離キット（カタログ番号１７９５１）による）、製造者のプロトコルに従いＰＢＭＣから同じドナーの初代ヒトＴ細胞を単離した。ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ１９、ＣＤ１４、ＣＤ５６、及びＣＤ３に関するフローサイトメトリー（BD Biosciences）による表面マーカー検出によって純度を確認した。３×１０６細胞／ｍＬのＴ細胞を１０μｇ／ｍＬのプレート結合型抗ＣＤ３抗体（クローンＵＣＨＴ－１）で５日間刺激した。これは、骨髄系細胞の作成と並行して行った。６日目、丸底９６ウェルプレートのウェルに、１ウェル当たり２．５×１０４Ｔ細胞を加え、１ウェル当たり１２．５×１０３骨髄系細胞及びＳＥＢ抗原（０．１μｇ／ｍＬ）を加えた。試験薬剤（例えば、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬化合物）又は対照（例えば、抗ＰＤ１抗体などのチェックポイント中和抗体）を指示濃度（例えば、１０μＭ）でウェルに加えた。細胞を３日間培養した時点で、無細胞の上清を回収し、分泌サイトカイン（例えば、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮγ、及びＩＬ－２）に関して、ＥＬＩＳＡ（R&D Systems、Peprotech又はLife Technologies）又はLuminexマルチプレックスキット（Procarta Life Technologies）により判定した。チェックポイント阻害薬を含む表面マーカー（例えば、ＣＴＬＡ４）のパネルに関してＴ細胞を染色し、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬の効果に関してフローサイトメトリーにより評価した。
[0521] Ｃｂｌ－ｂ阻害薬が骨髄系細胞の存在下で枯渇Ｔ細胞からのサイトカイン（例えば、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮγ、及びＩＬ－２）の分泌（Ｔ細胞枯渇減少の指標となる）を誘導し、又は亢進させる能力を決定する試験を行った。また、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬が枯渇Ｔ細胞の活性化後にチェックポイント調節因子発現レベルに及ぼす効果も試験した。
Ｔ細胞アネルギーのヒトＴ細胞インビトロモデル
[0522] １）Ficoll-Paque（商標）（GE Healthcare）を使用して健常ヒトドナーのバフィーコートから末梢血造血細胞を分離することによるか；又は２）LeukoPak供血から直接かのいずれかにより、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を入手した。市販キットによるネガティブ選択を利用して、製造者のプロトコルに従いＰＢＭＣから全ヒト初代Ｔ細胞を単離することにより（Miltenyi Biotec、カタログ番号１３０－０９６－５３５（即ち、表面マーカーＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ３４、ＣＤ３６、ＣＤ５６、ＣＤ１２３、及びＣＤ２３５ａに対する抗体のカクテルをＰＢＭＣとインキュベートした後、試料を磁気ビーズに通して、これらの表面マーカーを発現する細胞を除去した）又はStemcell Technologies、カタログ番号１７９５１）、フローサイトメトリーにより判定して９５％を超えるＣＤ３＋細胞を生じさせた。固定化した抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３）及び可溶型抗ＣＤ２８抗体（２８．２）で細胞を活性化させて、２日経った時点で細胞を洗浄し、刺激の非存在下で３日間静置させておいた。次にこの細胞をイオノマイシン（Sigma）で１８～２４時間処理してアネルギーを誘導した。２回洗浄して試料からイオノマイシンを除去した後、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬化合物を指示濃度（例えば、１０、１．１１、及び０．３７μＭ）で細胞に加え、１時間インキュベートした。次に細胞を抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体で再チャレンジし、２４時間経った時点で無細胞の上清を回収し、サイトカイン（例えば、ＩＦＮγ）に関してＥＬＩＳＡ（R&D Systems又はPeprotech）又はLuminexマルチプレックスキット（Procarta Life Technologies）によって製造者のプロトコルに従い判定した。
[0523] Ｃｂｌ－ｂ阻害薬が、Ｔ細胞寛容の低下の指標となる、アネルギー状態のＴ細胞からのサイトカイン（例えば、ＩＦＮγ）の分泌を誘導し、又は亢進させる能力を決定する試験を行った。
Ｃｂｌ－ｂ阻害薬のインビボ活性
[0524] Ｃ５７ＢＬ／６又はＢＡＬＢ／ｃなど、適格性の免疫系を有する諸系統のマウスにＣｂｌ－ｂ阻害薬を投与することにより、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬の薬力学的プロファイルを決定する方法を実施した。Ｃｂｌ－ｂ阻害薬を好適な製剤に溶解させて、静脈内（ＩＶ）、腹腔内（ＩＰ）、皮下（ＳＣ）、又は経口（ＰＯ）などの様々な経路のうちの１つにより、薬物動態学及び忍容性に関する先行研究によって情報が得られるとおりの好適な用量レベル及び頻度（例えば、１日２回ＢＩＤ又は１日３回ＴＩＤ）で投与した。Ｃｂｌ－ｂ阻害薬の投与後、ＰＢＳ中の抗ＣＤ３抗体又はその抗原結合断片を動物１個体当たり２μｇ又は１０μｇなどの決められた量でＩＶ又はＩＰなどの経路によって投与することにより、Ｔ細胞及び間接的に他の免疫細胞（例えば、サイトカイン産生による）をインビボで刺激した（Hirsh et al., J. Immunol., 1989；Ferran et al., Eur. J. Immunol., 1990を参照されたい）。追加的な研究対照アームには、媒体製剤単独（即ち、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬及び抗ＣＤ３抗体を含まない製剤）、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬単独を含有する製剤、抗ＣＤ３抗体単独を含有する製剤、ＰＢＳ単独、又はこれらの薬剤の組み合わせで処置されたマウスの群が含まれた。次に、血漿サイトカインレベル及び／又は免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）上の活性化マーカーの発現を分析することにより、免疫活性化レベルを判定した。決められた時点（例えば、８時間又は２４時間）で血液又はリンパ系器官（例えば脾臓）を採取した。当該技術分野において公知の標準方法を用いて血液試料を処理することにより、サイトカインレベルの決定用に血漿を収集した。測定したサイトカインには、ＩＬ－２、ＩＦＮγ、及びＴＮＦαが含まれた。標準方法を用いた免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）のフローサイトメトリー分析用に追加の血液試料及びリンパ系組織を処理して、ＣＤ２５及び／又はＣＤ６９など、細胞型特異的マーカー及び活性化マーカーの発現を決定した。血漿中の相対的サイトカイン濃度、又は免疫細胞上の活性化マーカーの発現レベルを適切な群間で（例えば、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬及び２μｇ抗ＣＤ３抗体で処置したマウスと、媒体及び２μｇ抗ＣＤ３抗体で処置したマウスで）比較することにより、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬投与による免疫刺激の増大を判定した。
[0525] Ｃｂｌ－ｂ阻害薬が、免疫応答の調節の指標となる、抗ＣＤ３抗体で刺激した処置マウスから入手した血中のサイトカイン（例えば、ＩＬ－２、ＩＦＮγ、及びＴＮＦα）のレベルを誘導し、又は亢進させる能力を決定する試験を行った。また、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬が、免疫応答の調節の指標となる、抗ＣＤ３抗体で刺激した処置マウスから単離したＴ細胞上の細胞表面マーカー（例えば、ＣＤ２５及び／又はＣＤ６９）の発現を誘導し、又は亢進させる能力を決定する試験も行った。
Ｂ細胞活性化アッセイ
[0526] １）Ficoll-Paque（商標）（GE Healthcare）を使用して健常ヒトドナーのバフィーコートから末梢血造血細胞を分離することによるか；又は２）LeukoPak供血から直接かのいずれかにより、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を入手した。市販キットによるネガティブ選択を利用して、製造者のプロトコルに従いＰＢＭＣからヒト初代Ｂ細胞を単離することにより（Stemcell Technologies、カタログ番号１７９５４）、フローサイトメトリーにより判定して９５％を超えるＣＤ２０＋細胞を生じさせた。０．５％未満の最終ＤＭＳＯ濃度として、１０μＭ～１ｎＭの範囲の用量にわたるＣｂｌ－ｂ阻害薬を含む９６ウェルプレートに初代ヒトＢ細胞を１ウェル当たり０．７～１×１０５で播き、３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートした。細胞を抗ＩｇＭによって３７℃、５％ＣＯ２で２０時間刺激した。成熟ＣＤ２０＋ＩｇＤ＋Ｂ細胞上の表面活性化マーカーを、抗ＣＤ６９抗体（BD Biosciences）を使用してＦＡＣＳによりモニタした。
[0527] Ｃｂｌ－ｂ阻害薬がＢ細胞上の細胞表面マーカー（例えば、ＣＤ６９）の表面発現（Ｂ細胞活性化の指標となる）を誘導し、又は亢進させる能力を決定する試験を行った。
初代ヒトＮＫ細胞の精製及び活性化
[0528] １）Ficoll-Paque（商標）（GE Healthcare）を使用して健常ヒトドナーのバフィーコートから末梢血造血細胞を分離することによるか；又は２）LeukoPak供血から直接かのいずれかにより、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を入手した。市販キットによるネガティブ選択を利用して、製造者のプロトコルに従いＰＢＭＣから全ヒト初代ＮＫ細胞を単離することにより（Miltenyi Biotec、カタログ番号１３０－０９２－６５７又はStemcell Technologies、カタログ番号１７９５５）、フローサイトメトリーによって判定したとき９２％を超えるＣＤ５６＋、ＣＤ３－細胞を生じさせた。細胞をＩＬ－２（６０ｎｇ／ｍＬ）と共に３７℃、５％ＣＯ２で一晩培養した。最終ＤＭＳＯ濃度を０．１％未満として、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬を特定の濃度（例えば、１０μＭ、１μＭ、又は０．１μＭ）で刺激の１時間前に加え、３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートした。フローサイトメトリーによって測定可能な赤色の核を有するように操作された標的細胞（K562 NucRed）と共にＮＫ細胞を共培養した。K562 NucRed細胞は、Ｋ５６２細胞をIncuCyte NucLight Red Lentivirus試薬（カタログ番号４４７６）で形質導入することにより作製し、５日間選択した。クローン集団を単離し、標準的な組織培養技法を用いて拡大し、ＮＫ細胞死滅アッセイで野生型Ｋ５６２細胞と比較することにより、個々のクローンの妥当性を確認した。指示される比率（例えば、５：１、１：１、又は１：５）のＮＫ（エフェクター細胞）対K562 NucRed（標的細胞）で細胞を６時間混合した。無細胞の上清を回収し、サイトカイン分泌（例えば、ＴＮＦα、ＩＦＮγ、又はＭＩＰ１β）に関してＥＬＩＳＡ又はLuminexマルチプレックスキットによって製造者のプロトコルに従い分析した。ＩＦＮγ分泌は、R&D SystemsのＥＬＩＳＡキット（カタログ番号ＤＹ２８５）を使用して判定し、ＴＮＦα分泌は、R&D SystemsのＥＬＩＳＡキット（カタログ番号ＤＹ２１０）を使用して判定し、及びＭＩＰ１β分泌は、R&D SystemsのＥＬＩＳＡキット（カタログ番号ＤＹ２７１）を使用して判定した。
生物学的実施例４：癌の処置に対する免疫チェックポイント阻害薬と組み合わせたＣｂｌ－ｂ阻害薬の評価
[0529] 腫瘍微小環境は、抗腫瘍免疫応答を回避する機構としてＴ細胞抑制経路を利用する。ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、及びＣＴＬＡ－４の阻害薬など、免疫チェックポイント阻害薬が使用されるようになり、ある種の腫瘍型に対して著しく効果的な、持続性のある応答がもたらされている（Marshall and Djamgoz, Front Oncol, 8:315, 2018）。しかしながら、免疫チェックポイント阻害薬単剤治療に対する応答は普遍的でなく、従って利益を受けるのは、ごく一部の癌患者に限られている（Lv et al., Journal for ImmunoTherapy of Cancer, 7:159, 2019）。本例は、免疫チェックポイント阻害薬とＣｂｌ－ｂ阻害薬とを含む癌の処置に対する併用治療の評価について記載する。
[0530] 端的には、同系腫瘍を成長させることができる適格性の免疫系を有する諸系統のマウス（例えば、Ｃ５７ＢＬ／６又はＢＡＬＢ／ｃ）において、併用治療を試験した。同系マウス腫瘍細胞を皮下注射した：ＢＡＬＢ／ｃマウスにＣＴ２６結腸癌細胞；Ｃ５７ＢＬ／６マウスにＴＣ－１肺癌細胞；又はＣ５７ＢＬ／６マウスにＭＣ－３８結腸癌細胞。腫瘍を成長させて、１００～２００ｍｍ３になった時点で動物を無作為化し、処置を開始した。或いは、処置は、腫瘍細胞移植から１～３日以内に予防的セッティングで投与した。Ｃｂｌ－ｂ阻害薬を好適な製剤に溶解させて、薬物動態学及び忍容性に関する先行研究によって情報が得られるとおりの好適な用量レベル及び頻度で投与した。Ｃｂｌ－ｂ阻害薬製剤は、経口的に（ＰＯ）又は非経口的に（例えば、ＩＶ、ＩＰ、ＳＣ、又は腫瘍内に、各腫瘍につき１～３ヵ所の注射部位で）投与した。免疫チェックポイント阻害薬製剤は、ＩＰ注射で３日毎に（例えば、１、４、及び７日目に）投与した。併用治療を受けた試験マウス群に加えて、本研究には、媒体製剤単独、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬製剤単独、又は免疫チェックポイント阻害薬単独のいずれかを受けた対照マウス群が含まれた。
[0531] 腫瘍成長を測定し試験マウスの腫瘍成長を対照マウスと比較することにより、応答レベルを評価した。腫瘍を採取して腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を分析することにより、免疫活性化レベルを判定した。ＴＩＬ及びリンパ系組織を処理して、標準方法を用いたフローサイトメトリー分析にかけることにより、細胞系統、細胞型特異的マーカーの発現、並びにグランザイムＢ、ＰＤ－１、ＴＩＭ３、及びＬＡＧ３などの活性化マーカーの発現を決定した。試験群及び研究群のマウスにおいて腫瘍中の免疫細胞集団の相対的割合及び免疫細胞上の活性化マーカーの相対的発現レベルを比較することにより、併用治療による抗腫瘍免疫応答の増大を判定した。
生物学的実施例５：癌の処置に対する抗新生物剤と組み合わせたＣｂｌ－ｂ阻害薬の評価
[0532] 化学治療は、腫瘍浸潤リンパ球に正の免疫学的効果を及ぼすことが報告されており（Lazzari et al., Ther Adv Med Oncol, 10:1-12, 2018）、ここでは免疫調節細胞と免疫エフェクター細胞との均衡が予後に影響する。加えて、化学治療は、腫瘍抗原提示の増大によって腫瘍内Ｔ細胞レパートリーを増加させることが企図される。本例は、抗新生物剤とＣｂｌ－ｂ阻害薬とを含む癌の処置に対する併用治療の評価について記載する。
[0533] 端的には、適格性の免疫系を有する諸系統のマウス（例えば、Ｃ５７ＢＬ／６又はＢＡＬＢ／ｃ）において、そこで同系腫瘍を成長させて併用治療を試験した。同系マウス腫瘍細胞を皮下注射した：ＢＡＬＢ／ｃマウスにＣＴ２６結腸癌細胞；又はＣ５７ＢＬ／６マウスにＴＣ－１肺癌細胞。腫瘍を成長させて、約１２０ｍｍ３になった時点で動物を無作為化し、処置を開始した。Ｃｂｌ－ｂ阻害薬を好適な製剤に溶解させて、薬物動態学及び忍容性に関する先行研究によって情報が得られるとおりの好適な用量レベル及び頻度で投与した。Ｃｂｌ－ｂ阻害薬製剤は、経口的に（ＰＯ）又は非経口的に（例えば、ＩＶ、ＩＰ、ＳＣ、又は腫瘍内に、各腫瘍につき１～３ヵ所の注射部位で）投与した。抗新生物剤（例えば、ゲムシタビン及び／又はオキサリプラチン）を３日又は４日に１回、ＩＰ注射によって投与した。併用治療を受けた試験マウス群に加えて、本研究には、媒体製剤単独、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬製剤単独、又は抗新生物剤単独のいずれかを受けた対照マウス群が含まれた。
[0534] 腫瘍成長を測定し、試験マウスの腫瘍成長を対照マウスと比較することにより、応答レベルを評価した。腫瘍を採取して腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を分析することにより、免疫活性化レベルを判定した。ＴＩＬ及びリンパ系組織を処理して、標準方法を用いたフローサイトメトリー分析にかけることにより、細胞系統、細胞型特異的マーカーの発現、並びにグランザイムＢ、ＰＤ－１、ＴＩＭ３、及びＬＡＧ３などの活性化マーカーの発現を決定した。試験群及び研究群のマウスにおいて腫瘍中の免疫細胞集団の相対的割合及び免疫細胞上の活性化マーカーの相対的発現レベルを比較することにより、併用治療による抗腫瘍免疫応答の増大を判定した。
生物学的実施例６：癌の処置に対する放射線治療と組み合わせたＣｂｌ－ｂ阻害薬の評価
[0535] 局所腫瘍を標的とするアブレーション放射線治療は、正常組織への損傷が限られており、及び腫瘍抗原の提示が増加するため、Ｔ細胞受容体レパートリーの多様性を亢進させる能力がある（Lee et al., Blood, 114: 589-595, 2009）。１つの部位での放射線治療が、照射されていない遠隔部位の腫瘍の退縮につながることが報告されている（Ngwa et al., Nat Rev Cancer, 18: 313-322, 2018）。局在的治療のこの全身的作用は「アブスコパル効果」と呼ばれ、これは、放射線治療のコンテクストでは、免疫系が関わると考えられている。本例は、放射線治療とＣｂｌ－ｂ阻害薬とを含む癌の処置に対する併用治療の評価について記載する。
[0536] 端的には、適格性の免疫系を有する諸系統のマウス（例えば、Ｃ５７ＢＬ／６又はＢＡＬＢ／ｃ）において、そこで同系腫瘍を成長させて併用治療を試験した。同系マウス腫瘍細胞を皮下注射した：ＢＡＬＢ／ｃマウスにＣＴ２６結腸癌細胞；又はＣ５７ＢＬ／６マウスにＢ１６－Ｆ１０黒色腫細胞。腫瘍を成長させて、約８０ｍｍ３になった時点で動物を無作為化し、処置を開始した。一部の研究では、アブスコパル効果を判定するため、腫瘍細胞を両方の側腹部に移植し、片方の腫瘍のみを処置した。Ｃｂｌ－ｂ阻害薬を好適な製剤に溶解させて、薬物動態学及び忍容性に関する先行研究によって情報が得られるとおりの好適な用量レベル及び頻度で投与した。Ｃｂｌ－ｂ阻害薬製剤は、経口的に（ＰＯ）又は非経口的に（例えば、ＩＶ、ＩＰ、ＳＣ、又は腫瘍内に、各腫瘍につき１～３ヵ所の注射部位で）投与した。放射線治療は、Ｘ線ベースの焦点ビーム照射器を使用して２０グレイの線量で１回投与した。併用治療を受けた試験マウス群に加えて、本研究には、媒体製剤単独、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬製剤単独、又は放射線治療単独のいずれかを受けた対照マウス群が含まれた。
[0537] 腫瘍成長を測定し、試験マウスの腫瘍成長を対照マウスと比較することにより、応答レベルを評価した。腫瘍を採取して腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を分析することにより、免疫活性化レベルを判定した。ＴＩＬ及びリンパ系組織を処理して、標準方法を用いたフローサイトメトリー分析にかけることにより、細胞系統、細胞型特異的マーカーの発現、並びにグランザイムＢ、ＰＤ－１、ＴＩＭ３、及びＬＡＧ３などの活性化マーカーの発現を決定した。試験群及び研究群のマウスにおいて腫瘍中の免疫細胞集団の相対的割合及び免疫細胞上の活性化マーカーの相対的発現レベルを比較することにより、併用治療による抗腫瘍免疫応答の増大を判定した。
生物学的実施例７：癌の処置に対する養子細胞治療と組み合わせたＣｂｌ－Ｂ阻害薬の評価
[0538] 自己腫瘍特異的Ｔ細胞を利用する養子細胞治療（ＡＣＴ）は、Ｔ細胞が標的細胞を特異的に認識して排除する天然の機能を活かすものである（Hinrichs and Rosenberg, Immunol Rev, 257: 56-71, 2014）。腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の特異性は、突然変異遺伝子の産物に由来するネオ抗原を含め、腫瘍関連抗原を認識するその能力によるものである。本例は、ＡＣＴによる癌の処置に対するエキソビボＴＩＬ拡大培養前のＣｂｌ－ｂ阻害薬によるインビボリンパコンディショニングプログラムの評価について記載する。
[0539] 適格性の免疫系を有する諸系統のマウス（例えば、Ｃ５７ＢＬ／６又はＢＡＬＢ／ｃ）を、その体内で同系腫瘍を成長させて利用した。同系マウス腫瘍細胞を皮下又は静脈内に注射した：ＢＡＬＢ／ｃマウスに４Ｔ１乳癌細胞；ＢＡＬＢ／ｃマウスにＲＥＮＣＡ腎癌細胞；Ｃ５７ＢＬ／６マウスにＢ１６－Ｆ１０黒色腫細胞；Ｃ５７ＢＬ／６マウスに３ＬＬ肺癌細胞；又はＣ５７ＢＬ／６マウスにＭＣ－３８結腸癌細胞。腫瘍を成長させて、約５０～６００ｍｍ３になった時点で動物を無作為化し、処置を開始した。Ｃｂｌ－ｂ阻害薬を好適な製剤に溶解させて、薬物動態学及び忍容性に関する先行研究によって情報が得られるとおりの好適な用量レベル及び頻度で投与した。Ｃｂｌ－ｂ阻害薬製剤は、経口的に（ＰＯ）又は非経口的に（例えば、ＩＶ、ＩＰ、ＳＣ、又は腫瘍内に、各腫瘍につき１～３ヵ所の注射部位で）投与した。腫瘍採取前にＣｂｌ－ｂ阻害薬の投与を受けた試験マウス群に加えて、対照マウス群は、腫瘍採取前に媒体製剤単独の投与を受けるか、又は未処置のままかのいずれかであった。原発腫瘍又は転移のある組織（例えば、肺）のいずれかから腫瘍組織を採取した。組織を細断し、ＴＩＬの拡大に好適な条件下において、１つ以上の外因性Ｔ細胞成長因子（例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、及び／又はＩＬ－２１）が存在する又は存在しない培地で培養した。ＴＩＬの拡大培養は、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬の存在下又は非存在下で行った。拡大したＴＩＬについて、フローサイトメトリー分析により、メモリー、エフェクター、及びステムネスに関するマーカー（例えば、ＣＤ９５、ＴＣＦ７、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ４４等）の発現を測定することによって表現型を判定した。ＴＩＬの拡大の成功後、腫瘍担持マウスにＣｂｌ－ｂ阻害薬の存在下又は非存在下でＴＩＬを注入することにより、リンパコンディショニング及び／又は続くインビボ処置がＴＩＬ生着及び抗腫瘍免疫応答に及ぼす効果を判定した。
[0540] ＡＣＴの抗腫瘍有効性は、腫瘍測定を通じてＴＩＬによる腫瘍成長阻害レベルを決定することにより判定した。
生物学的実施例８：候補阻害薬によるＣｂｌ－ｂ阻害の評価
[0541] 候補化合物について、Ｃｂｌ－ｂに結合したフルオロフォア標識プローブを置換するその能力から明らかなとおりの、それがＥ３ユビキチンタンパク質リガーゼであるＣｂｌ－ｂに結合して阻害する能力を評価した。
材料及び方法
Ｃｂｌ－ｂ置換アッセイ（Ｃｂｌ－ｂ阻害アッセイ）
[0542] 候補化合物の存在下でのＣｂｌ－ｂとフルオロフォア標識プローブの相互作用をモニタすることにより、候補化合物が公知の阻害薬を置換し、それによってＣｂｌ－ｂ活性を阻害する能力を測定した。残基３６～４２７及びそのＮ末端にAvitagを含有するＣｂｌ－ｂ（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｑ１３１９１）のトランケート型変異体をBirAビオチンリガーゼと共発現させて、標準プロトコルを用いて精製した（Dou et al., Nature Structural and Molecular Biology 8: 982-987, 2013；Avidity LLCを参照されたい）。
[0543] 蛍光標識阻害薬プローブを合成し、BODIPY FLタグを付加した。Ｃｂｌ－ｂ置換アッセイの実施は、室温で３８４ウェルプレートにおいて、１０μＬ反応容積として、２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．５、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、０．０１％トリトンＸ－１００、０．０１％ＢＳＡ、及び０．５ｍＭ ＴＣＥＰを含有するアッセイ緩衝液中の０．５ｎＭ Ｃｂｌ－ｂ又は０．１２５ｎＭ Ｃｂｌ－ｂ（最終濃度、それぞれ「高」及び「低」と指示される）を１％ＤＭＳＯ（最終濃度）で候補化合物の存在下にて１時間プレインキュベートすることによった。候補化合物の存在下でインキュベートした後、１５０ｎＭ蛍光標識阻害薬プローブ及び２ｎＭストレプトアビジン－テルビウム（Cisbio）（最終濃度）からなる近似ＥＣ４０結合飽和の存在下でプレートを更に１時間インキュベートした。１時間のインキュベーション後、Envisionプレートリーダー（Perkin Elmer）を使用してプレートのＴＲ－ＦＲＥＴシグナルを５２０／６２０ｎＭで読み取った。ＴＲ－ＦＲＥＴシグナルが存在する場合、Ｃｂｌ－ｂからプローブが追い出されておらず、化合物候補に置き換わっていないことを意味した。ＦＲＥＴシグナルが存在しない場合、Ｃｂｌ－ｂからプローブが追い出され、化合物候補に置き換わったことを意味した。
結果
[0544] Ｃｂｌ－ｂ活性アッセイの得られたデータを標準方法を用いて分析して、試験化合物のＩＣ５０値を決定した。表４では、化合物をＩＣ５０に関して順位付けして、以下のとおりビンに分けた：Ａは１ｎＭ未満を示し；Ｂは１ｎＭ～５ｎＭを示し；及びＣは５ｎＭ超を示す。
Figure 0007587528000162
生物学的実施例９：Ｃｂｌ－ｂ阻害薬によるＴ細胞活性化の評価
[0545] Ｃｂｌ－ｂ阻害薬がＴ細胞を活性化させる能力について評価した。
材料及び方法
初代ヒト全Ｔ細胞活性化の精製及び評価
[0546] １）Ficoll-Paque（商標）（GE Healthcare）を使用して健常ヒトドナーのバフィーコートから末梢血造血細胞を分離することによるか；又は２）LeukoPak供血から直接かのいずれかにより、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を入手した。市販キットによるネガティブ選択を利用して、製造者のプロトコルに従いＰＭＢＣから全ヒト初代Ｔ細胞を単離することにより（Miltenyi Biotec、カタログ番号１３０－０９６－５３５（即ち、表面マーカーＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ３４、ＣＤ３６、ＣＤ５６、ＣＤ１２３、及びＣＤ２３５ａに対する抗体のカクテルをＰＢＭＣとインキュベートした後、試料を磁気ビーズに通して、これらの表面マーカーを発現する細胞を除去した）又はStemcell Technologies、カタログ番号１７９５１）、フローサイトメトリーによって判定したとき９５％を超えるＣＤ３＋細胞を生じさせた。細胞を３７℃、５％ＣＯ２で一晩静置した。各ウェル１×１０５細胞にＣｂｌ阻害薬を加え、最終ＤＭＳＯ濃度を０．１％未満としてプレートを指示される濃度（表５）で３７℃で５％ＣＯ２にて１時間インキュベートした。抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体で刺激した試料（抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８）について、試験したＣｂｌ－ｂ阻害薬濃度は、１μＭ、及び０．３μＭであった。抗ＣＤ３抗体単独で刺激した試料（抗ＣＤ３）について、試験したＣｂｌ－ｂ阻害薬濃度は、３μＭ、及び１μＭであった。Ｃｂｌ－ｂ阻害薬とのインキュベーション後、プレート結合型抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３）単独又はプレート結合型抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３）と可溶型抗ＣＤ２８抗体（２８．２）（Life Technologies）のいずれかで初代ヒト全Ｔ細胞を刺激した。プレート結合型抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３）を含むプレートを調製するため、９６ウェル丸底組織培養プレートを１００μＬの抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３）によってリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中１０μｇ／ｍＬで、３７℃、５％ＣＯ２にて４時間コートした。プレートをＰＢＳで１回洗浄した後、各ウェルに可溶型抗ＣＤ２８抗体（２８．２）と共に又はそれ無しで細胞を５μｇ／ｍＬの最終濃度で加えた。細胞を４８時間刺激した後、無細胞の上清を回収し、フローサイトメトリーによる表面マーカー判定のため細胞集団を染色した。ＩＬ－２を含めたサイトカイン分泌に関して、ＥＬＩＳＡ（R&D Systems、Peprotech又はLife Technologies）又はLuminexマルチプレックスキット（Procarta Life Technologies）により、製造者のプロトコルに従い上清を分析した。細胞を抗ＣＤ２５抗体（BD Biosciences）で染色して、表面活性化マーカーのレベルを判定した。
結果
[0547] 読み取った情報は、ベースラインに対する変化倍数として報告した。この研究のベースラインは、抗ＣＤ３抗体及び可溶型抗ＣＤ２８抗体で刺激した全ヒトＴ細胞であって、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬とインキュベートしなかった細胞から入手した測定値である（表５）。抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８で刺激したＴ細胞については、ＩＬ－２分泌がベースラインの２．５倍より大きい変化及びＣＤ２５表面染色がベースラインの１．３倍より大きい変化を、有意且つ陽性応答と見なした。抗ＣＤ３単独で刺激したＴ細胞については、ＩＬ－２分泌がベースラインの０．１倍より大きい変化及びＣＤ２５表面染色がベースラインの０．６倍より大きい変化を、有意且つ陽性応答と見なした。
[0548] それらの読取り値に基づき化合物を順位付けして、以下のとおり各ビンに分けた：
抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体共刺激でのＩＬ－２分泌について、ビンは以下である：Ｃは１０倍未満を示し、Ｂは１０～１５倍を示し、Ａは１５倍超を示す；
抗ＣＤ３抗体刺激でのＩＬ－２分泌について、ビンは以下である：Ｃは０．３３倍以下を示し、Ｂは０．３４～０．６６倍を示し、Ａは０．６６倍超を示す；
抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体共刺激でのＣＤ２５染色について、ビンは以下である：Ｃは１．２４倍以下を示し、Ｂは１．２５～１．３９倍を示し、Ａは１．３９倍超を示す；及び
抗ＣＤ３抗体刺激でのＣＤ２５染色について、ビンは以下である：Ｃは１．０４倍以下を示し、Ｂは１．０５～１．１４倍を示し、及びＡは１．１４倍超を示す。
Figure 0007587528000163
[0549] Ｃｂｌ－ｂ阻害薬は、抗ＣＤ３抗体単独で刺激するか、又は抗ＣＤ２８抗体と組み合わせて刺激したＴ細胞によるＩＬ－２分泌を亢進させた。抗ＣＤ３抗体単独で刺激したとき、又は抗ＣＤ２８抗体と組み合わせて刺激したとき、Ｔ細胞の表面上のＣＤ２５活性化マーカーの発現は増加した。これらの結果は、同定されたＣｂｌ－ｂ阻害薬がＴ細胞を活性化させる能力を有すること、及びかかる活性化が抗ＣＤ２８抗体との共刺激を必要としないことを示している。
生物学的実施例１０：Ｃｂｌ－ｂ阻害薬の免疫調節効果の評価
[0550] スクリーニングアッセイから同定されたＣｂｌ－ｂ阻害薬は、ＩＬ－２分泌及びＣＤ２５表面活性化マーカーの発現の亢進からも明らかなとおり、インビトロで全ヒトＴ細胞を活性化させる能力を実証した。
[0551] 更なるインビトロ研究を行い、Ｔ細胞による追加的なサイトカイン分泌及びＴ細胞上の表面活性化マーカーの発現を判定した。Ｃｂｌ－ｂ阻害薬がＴ細胞増殖を増加させ、Ｔ細胞枯渇を低下させ、及びＴ細胞アネルギーを低下させる能力など、本明細書に記載されるＣｂｌ－ｂ阻害薬と接触したＴ細胞に対する追加的な免疫調節効果を判定した。本明細書に記載されるものなどのＣｂｌ－ｂ阻害薬がインビボでＴ細胞を活性化させる能力もまた判定した。Ｃｂｌ－ｂ阻害薬がＢ細胞及びＮＫ細胞を活性化させる能力など、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬による他の免疫調節効果も判定した。
初代ヒト全Ｔ細胞活性化の精製及び評価
[0552] １）Ficoll-Paque（商標）（GE Healthcare）を使用して健常ヒトドナーのバフィーコートから末梢血造血細胞を分離することによるか；又は２）LeukoPak供血から直接かのいずれかにより、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を入手した。市販キットによるネガティブ選択を利用して、製造者のプロトコルに従いＰＭＢＣから全ヒト初代Ｔ細胞を単離することにより（Miltenyi Biotec、カタログ番号１３０－０９６－５３５（即ち、表面マーカーＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ３４、ＣＤ３６、ＣＤ５６、ＣＤ１２３、及びＣＤ２３５ａに対する抗体のカクテルをＰＢＭＣとインキュベートした後、試料を磁気ビーズに通して、これらの表面マーカーを発現する細胞を除去した）又はStemcell Technologies、カタログ番号１７９５１）、フローサイトメトリーによって判定したとき９５％を超えるＣＤ３＋細胞を生じさせた。細胞増殖の測定のため、細胞をCell Trace Violet（Invitrogen）で製造者のプロトコルに従い標識した後、抗ＣＤ３抗体単独、又は抗ＣＤ２８抗体との組み合わせで刺激することにより活性化させた。最終ＤＭＳＯ濃度を０．１％未満としながら、各ウェル１×１０５細胞にＣｂｌ－ｂ阻害薬を複数の濃度（例えば、１０μＭ、１．１１μＭ、又は０．１２３μＭ）で加えた。プレートを５％ＣＯ２にて３７℃で１時間インキュベートした。Ｃｂｌ－ｂ阻害薬とのインキュベーション後、プレート結合型抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３）単独又はプレート結合型抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３）と可溶型抗ＣＤ２８抗体（２８．２）（Life Technologies）のいずれかで初代ヒト全Ｔ細胞を刺激した。プレート結合型抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３）を含むプレートを調製するため、９６ウェル丸底組織培養プレートを１００μＬの抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３）によってリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中１０μｇ／ｍＬで、３７℃、５％ＣＯ２にて４時間コートした。プレートをＰＢＳで洗浄した後、各ウェルに可溶型抗ＣＤ２８抗体（２８．２）と共に又はそれ無しで細胞を５μｇ／ｍＬの最終濃度で加えた。細胞を４８時間刺激した後、無細胞の上清を回収し、フローサイトメトリーによる表面マーカー判定のため細胞集団を染色した。サイトカイン分泌（例えば、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮγ、及びＴＮＦα）に関して、ＥＬＩＳＡ（R&D Systems、Peprotech又はLife Technologies）又はLuminexマルチプレックスキット（Procarta Life Technologies）により、製造者のプロトコルに従い上清を分析した。細胞を抗ＣＤ６９（BD Biosciences）で染色して、表面活性化マーカーのレベルを判定した。増殖はフローサイトメトリーにより測定し、データはFlowJo v7.6.5又はv10で分析した。読み取った情報は、ベースラインに対する変化倍数として報告した。一部の実施形態において、ベースラインは、抗ＣＤ３抗体単独で刺激した全ヒトＴ細胞であって、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬とインキュベートしなかった細胞から入手した測定値であった。一部の実施形態において、ベースラインは、抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体で刺激した全ヒトＴ細胞であって、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬とインキュベートしなかった細胞から入手した測定値であった。
[0553] 同種異系混合リンパ球反応（ＭＬＲ）のコンテクストで、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬が初代ヒトＴ細胞に及ぼす効果もまた評価した。同種異系未熟樹状細胞を以下の条件下で作成した。１）Ficoll-Paque（商標）（GE Healthcare）を使用して健常ヒトドナーのバフィーコートから末梢血造血細胞を分離することによるか；又は２）LeukoPak供血から直接かのいずれかにより、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を入手した。市販キットによるポジティブ選択を利用して、製造者のプロトコルに従いＰＭＢＣから単球を単離することにより（StemCells、カタログ番号１７８５８）、フローサイトメトリーによって判定したとき９５％を超えるＣＤ１４＋細胞を生じさせた。単球を３０ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＧＭ－ＣＳＦ及び２０ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＩＬ－４と共に７日間培養して、未熟樹状細胞を作成した。単球及びＴ細胞は、末梢血から新鮮に単離するか、又は凍結ストックから解凍するかのいずれかであった。ヒトＴ細胞を単離し、ＣＦＳＥで標識し、上記に記載されるとおり阻害薬と共にインキュベートした。各ウェル２×１０３同種異系未熟樹状細胞との共培養下にある１×１０５Ｔ細胞に、最終ＤＭＳＯ濃度を０．１％未満としてＣｂｌ－ｂ阻害薬を複数の濃度（例えば、１０μＭ、又は１．１１μＭ）で加え、５％ＣＯ２にて３７℃で５日間インキュベートした。Ｔ細胞の増殖をフローサイトメトリーにより評価した。
[0554] Ｃｂｌ－ｂ阻害薬が、Ｔ細胞活性化の指標となるＴ細胞からのサイトカイン（例えば、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮγ、及びＴＮＦα）の分泌及び／又はＴ細胞上の細胞表面マーカー（例えば、ＣＤ６９）の表面発現を誘導し、又は亢進させる能力を決定する試験を行った。またＣｂｌ－ｂ阻害薬がＴ細胞増殖を誘導し、又は亢進させる能力を決定する試験も行った。共刺激の存在下で、且つ条件がプライミングに最適以下の場合にＣｂｌ－ｂ阻害薬がＴ細胞活性化に及ぼす効果を試験した。
Ｔ細胞枯渇のヒトＴ細胞インビトロモデル
[0555] Ｔ細胞枯渇は、慢性感染症及び癌に応答して細胞のエフェクター応答が不足し、抑制性受容体発現レベルが持続するために、Ｔ細胞機能不全が生じることを特徴とした。Ｔ細胞枯渇のインビトロモデルには、同種異系モデル及び自家モデルが含まれる。自家モデルでは、骨髄系細胞及びＳＥＢ（ブドウ球菌エンテロトキシンＢ、Millipore）を使用して抗ＣＤ３刺激Ｔ細胞を刺激した。１）Ficoll-Paque（商標）（GE Healthcare）を使用して健常ヒトドナーのバフィーコートから末梢血造血細胞を分離することによるか；又は２）LeukoPak供血から直接かのいずれかにより、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を入手した。市販キットによるネガティブ選択を用いて、StemCells EasySepヒト単球濃縮キット、ＣＤ１６枯渇なし（カタログ番号１９０５８）で製造者のプロトコルに従い単球を単離した。５０ｎｇ／ｍＬ組換えヒトＭ－ＣＳＦ（R&D System又はPeprotech）を含有する完全培地（例えば、添加剤不含、１０％ＨＩ ＦＢＳ、１×グルタミン及び１×β－メルカプトエタノール含有ＲＰＭＩ １６４０）で、単離した単球を培養した。細胞は、各ウェルにつき２×１０６細胞で播き（０日目）、５日間培養し、２日目に新鮮培地及びサイトカインを供給した。５日目、１００ｎｇ／ｍＬでＩＦＮγを加え、細胞を一晩インキュベートした。市販キットでネガティブ選択を用いて（Stemcell Technologies EasySepヒトＴ細胞単離キット（カタログ番号１７９５１）による）、製造者のプロトコルに従いＰＢＭＣから同じドナーの初代ヒトＴ細胞を単離した。ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ１９、ＣＤ１４、ＣＤ５６、及びＣＤ３に関するフローサイトメトリー（BD Biosciences）による表面マーカー検出によって純度を確認した。３×１０６細胞／ｍＬのＴ細胞を１０μｇ／ｍＬのプレート結合型抗ＣＤ３抗体（クローンＵＣＨＴ－１）で５日間刺激した。これは、骨髄系細胞の作成と並行して行った。６日目、丸底９６ウェルプレートのウェルに、１ウェル当たり２．５×１０４Ｔ細胞を加え、１ウェル当たり１２．５×１０３骨髄系細胞及びＳＥＢ抗原（０．１μｇ／ｍＬ）を加えた。試験薬剤（例えば、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬化合物）又は対照（例えば、抗ＰＤ１抗体などのチェックポイント中和抗体）を指示濃度（例えば、１０μＭ）でウェルに加えた。細胞を３日間培養した時点で、無細胞の上清を回収し、分泌サイトカイン（例えば、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮγ、及びＩＬ－２）に関して、ＥＬＩＳＡ（R&D Systems、Peprotech又はLife Technologies）又はLuminexマルチプレックスキット（Procarta Life Technologies）により判定した。チェックポイント阻害薬を含む表面マーカー（例えば、ＣＴＬＡ４）のパネルに関してＴ細胞を染色し、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬の効果に関してフローサイトメトリーにより評価した。
[0556] Ｃｂｌ－ｂ阻害薬が骨髄系細胞の存在下で枯渇Ｔ細胞からのサイトカイン（例えば、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮγ、及びＩＬ－２）の分泌（Ｔ細胞枯渇減少の指標となる）を誘導し、又は亢進させる能力を決定する試験を行った。また、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬が枯渇Ｔ細胞の活性化後にチェックポイント調節因子発現レベルに及ぼす効果も試験した。
Ｔ細胞アネルギーのヒトＴ細胞インビトロモデル
[0557] １）Ficoll-Paque（商標）（GE Healthcare）を使用して健常ヒトドナーのバフィーコートから末梢血造血細胞を分離することによるか；又は２）LeukoPak供血から直接かのいずれかにより、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を入手した。市販キットによるネガティブ選択を利用して、製造者のプロトコルに従いＰＢＭＣから全ヒト初代Ｔ細胞を単離することにより（Miltenyi Biotec、カタログ番号１３０－０９６－５３５（即ち、表面マーカーＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ３４、ＣＤ３６、ＣＤ５６、ＣＤ１２３、及びＣＤ２３５ａに対する抗体のカクテルをＰＢＭＣとインキュベートした後、試料を磁気ビーズに通して、これらの表面マーカーを発現する細胞を除去した）又はStemcell Technologies、カタログ番号１７９５１）、フローサイトメトリーにより判定して９５％を超えるＣＤ３＋細胞を生じさせた。固定化した抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３）及び可溶型抗ＣＤ２８抗体（２８．２）で細胞を活性化させて、２日経った時点で細胞を洗浄し、刺激の非存在下で３日間静置させておいた。次にこの細胞をイオノマイシン（Sigma）で１８～２４時間処理してアネルギーを誘導した。２回洗浄して試料からイオノマイシンを除去した後、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬化合物を指示濃度（例えば、１０、１．１１、及び０．３７μＭ）で細胞に加え、１時間インキュベートした。次に細胞を抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体で再チャレンジし、２４時間経った時点で無細胞の上清を回収し、サイトカイン（例えば、ＩＦＮγ）に関してＥＬＩＳＡ（R&D Systems又はPeprotech）又はLuminexマルチプレックスキット（Procarta Life Technologies）によって製造者のプロトコルに従い判定した。
[0558] Ｃｂｌ－ｂ阻害薬が、Ｔ細胞寛容の低下の指標となる、アネルギー状態のＴ細胞からのサイトカイン（例えば、ＩＦＮγ）の分泌を誘導し、又は亢進させる能力を決定する試験を行った。
Ｃｂｌ－ｂ阻害薬のインビボ活性
[0559] Ｃ５７ＢＬ／６又はＢＡＬＢ／ｃなど、適格性の免疫系を有する諸系統のマウスにＣｂｌ－ｂ阻害薬を投与することにより、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬の薬力学的プロファイルを決定する方法を実施した。Ｃｂｌ－ｂ阻害薬を好適な製剤に溶解させて、静脈内（ＩＶ）、腹腔内（ＩＰ）、皮下（ＳＣ）、又は経口（ＰＯ）などの様々な経路のうちの１つにより、薬物動態学及び忍容性に関する先行研究によって情報が得られるとおりの好適な用量レベル及び頻度（例えば、１日２回ＢＩＤ又は１日３回ＴＩＤ）で投与した。Ｃｂｌ－ｂ阻害薬の投与後、ＰＢＳ中の抗ＣＤ３抗体又はその抗原結合断片を動物１個体当たり２μｇ又は１０μｇなどの決められた量でＩＶ又はＩＰなどの経路によって投与することにより、Ｔ細胞及び間接的に他の免疫細胞（例えば、サイトカイン産生による）をインビボで刺激した（Hirsh et al., J. Immunol., 1989；Ferran, et al., Eur. J. Immunol., 1990を参照されたい）。追加的な研究対照アームには、媒体製剤単独（即ち、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬及び抗ＣＤ３抗体を含まない製剤）、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬単独を含有する製剤、抗ＣＤ３抗体単独を含有する製剤、ＰＢＳ単独、又はこれらの薬剤の組み合わせで処置されたマウスの群が含まれた。次に、血漿サイトカインレベル及び／又は免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）上の活性化マーカーの発現を分析することにより、免疫活性化レベルを判定した。決められた時点（例えば、８時間又は２４時間）で血液又はリンパ系器官（例えば脾臓）を採取した。当該技術分野において公知の標準方法を用いて血液試料を処理することにより、サイトカインレベルの決定用に血漿を収集した。測定したサイトカインには、ＩＬ－２、ＩＦＮγ、及びＴＮＦαが含まれた。標準方法を用いた免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）のフローサイトメトリー分析用に追加の血液試料及びリンパ系組織を処理して、ＣＤ２５及び／又はＣＤ６９など、細胞型特異的マーカー及び活性化マーカーの発現を決定した。血漿中の相対的サイトカイン濃度、又は免疫細胞上の活性化マーカーの発現レベルを適切な群間で（例えば、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬及び２μｇ抗ＣＤ３抗体で処置したマウスと、媒体及び２μｇ抗ＣＤ３抗体で処置したマウスで）比較することにより、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬投与による免疫刺激の増大を判定した。
[0560] Ｃｂｌ－ｂ阻害薬が、免疫応答の調節の指標となる、抗ＣＤ３抗体で刺激した処置マウスから入手した血中のサイトカイン（例えば、ＩＬ－２、ＩＦＮγ、及びＴＮＦα）のレベルを誘導し、又は亢進させる能力を決定する試験を行った。また、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬が、免疫応答の調節の指標となる、抗ＣＤ３抗体で刺激した処置マウスから単離したＴ細胞上の細胞表面マーカー（例えば、ＣＤ２５及び／又はＣＤ６９）の発現を誘導し、又は亢進させる能力を決定する試験も行った。
Ｂ細胞活性化アッセイ
[0561] １）Ficoll-Paque（商標）（GE Healthcare）を使用して健常ヒトドナーのバフィーコートから末梢血造血細胞を分離することによるか；又は２）LeukoPak供血から直接かのいずれかにより、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を入手した。市販キットによるネガティブ選択を利用して、製造者のプロトコルに従いＰＢＭＣからヒト初代Ｂ細胞を単離することにより（Stemcell Technologies、カタログ番号１７９５４）、フローサイトメトリーによって判定したとき９５％を超えるＣＤ２０＋細胞を生じさせた。０．５％未満の最終ＤＭＳＯ濃度として、１０μＭ～１ｎＭの範囲の用量にわたるＣｂｌ－ｂ阻害薬を含む９６ウェルプレートに初代ヒトＢ細胞を１ウェル当たり０．７～１×１０５で播き、３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートした。細胞を抗ＩｇＭによって３７℃、５％ＣＯ２で２０時間刺激した。成熟ＣＤ２０＋ＩｇＤ＋Ｂ細胞上の表面活性化マーカーを抗ＣＤ６９抗体（BD Biosciences）を使用してＦＡＣＳによりモニタした。
[0562] Ｃｂｌ－ｂ阻害薬がＢ細胞上の細胞表面マーカー（例えば、ＣＤ６９）の表面発現（Ｂ細胞活性化の指標となる）を誘導し、又は亢進させる能力を決定する試験を行った。
初代ヒトＮＫ細胞の精製及び活性化
[0563] １）Ficoll-Paque（商標）（GE Healthcare）を使用して健常ヒトドナーのバフィーコートから末梢血造血細胞を分離することによるか；又は２）LeukoPak供血から直接かのいずれかにより、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を入手した。市販キットによるネガティブ選択を利用して、製造者のプロトコルに従いＰＢＭＣから全ヒト初代ＮＫ細胞を単離することにより（Miltenyi Biotec、カタログ番号１３０－０９２－６５７又はStemcell Technologies、カタログ番号１７９５５）、フローサイトメトリーによって判定したとき９２％を超えるＣＤ５６＋、ＣＤ３－細胞を生じさせた。細胞をＩＬ－２（６０ｎｇ／ｍＬ）と共に３７℃、５％ＣＯ２で一晩培養した。最終ＤＭＳＯ濃度を０．１％未満として、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬を特定の濃度（例えば、１０μＭ、１μＭ、又は０．１μＭ）で刺激の１時間前に加え、３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートした。フローサイトメトリーによって測定可能な赤色の核を有するように操作された標的細胞（K562 NucRed）と共にＮＫ細胞を共培養した。K562 NucRed細胞は、Ｋ５６２細胞をIncuCyte NucLight Red Lentivirus試薬（カタログ番号４４７６）で形質導入することにより作製し、５日間選択した。クローン集団を単離し、標準的な組織培養技法を用いて拡大し、ＮＫ細胞死滅アッセイで野生型Ｋ５６２細胞と比較することにより、個々のクローンの妥当性を確認した。指示される比率（例えば、５：１、１：１、又は１：５）のＮＫ（エフェクター細胞）対K562 NucRed（標的細胞）で細胞を６時間混合した。無細胞の上清を回収し、サイトカイン分泌（例えば、ＴＮＦα、ＩＦＮγ、又はＭＩＰ１β）に関してＥＬＩＳＡ又はLuminexマルチプレックスキットによって製造者のプロトコルに従い分析した。ＩＦＮγ分泌は、R&D SystemsのＥＬＩＳＡキット（カタログ番号ＤＹ２８５）を使用して判定し、ＴＮＦα分泌は、R&D SystemsのＥＬＩＳＡキット（カタログ番号ＤＹ２１０）を使用して判定し、及びＭＩＰ１β分泌は、R&D SystemsのＥＬＩＳＡキット（カタログ番号ＤＹ２７１）を使用して判定した。
生物学的実施例１１：癌の処置に対する癌ワクチンと組み合わせたＣｂｌ－ｂ阻害薬の評価
[0564] 本例は、癌ワクチンとＣｂｌ－ｂ阻害薬とを含むマウスにおける癌の処置に対する併用治療の評価について記載する。
材料及び方法
[0565] 端的には、同系ＴＣ－１細胞腫瘍を担持するＣ５７ＢＬ／６マウスで併用治療を試験した。ＴＣ－１細胞は、ヒトパピローマウイルス株１６（ＨＰＶ１６）初期タンパク質６及び７（Ｅ６及びＥ７）及び活性化ヒトｃ－Ｈａ－ｒａｓ癌遺伝子がトランスフェクトされた初代マウス肺細胞に由来した（Lin et al., Cancer Research, 56: 21-26, 1996）。２．５×１０４個（第１の研究）又は５．０×１０４個（第２の研究）のいずれかのＴＣ－１細胞（Johns Hopkins Universityから入手した）を各マウスの側腹部中央に皮下注射した。腫瘍を成長させて、５０～１００ｍｍ３になった時点で動物を無作為化し、処置を開始した（０日目）。
[0566] ＨＰＶ１６ Ｅ７癌ワクチン（Shrimali et al., Cancer Immunol Res, 5: 755-766, 2017）は、Ｅ７の残基４９～５７のＣＴＬエピトープのアミノ酸配列（配列番号２として示されるＲＡＨＹＮＩＶＴＦ）を有する１００μｇの合成ペプチドを、ＰＡＤＲＥとして知られるＴｈエピトープのアミノ酸配列（配列番号３として示されるａＫ－Ｃｈａ－ＶＡＡＷＴＬＫＡＡａ、式中、「ａ」はＤ－アラニンであり、及び「Ｃｈａ」はＬ－シクロヘキシルアラニンである）を有する２０μｇの合成ペプチド及びBrenntag Biosector A/Sによって市販されている、精製キラヤサポニンを含有する２０μｇのQuil-A（登録商標）アジュバントと混合したものを含んだ。２及び９日目（＝ＴＣ－１注射後１６日目及び２３日目）にＨＰＶ１６ Ｅ７ワクチン又はダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ）を皮下（ＳＣ）投与した。Ｃｂｌ－ｂ阻害薬を好適な製剤に溶解させて、薬物動態学及び忍容性に関する先行研究によって情報が得られるとおりの好適な用量レベル及び頻度で投与した。初回の研究では、好適な媒体中にあるＣｂｌ－ｂ阻害薬（化合物番号６０）、又は媒体を、０日目（＝ＴＣ－１注射後１４日目）から開始して、１８０ｍｇ／ｋｇの用量で１日２回（ＢＩＤ）、経口（ＰＯ）投与した。更なる研究では、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬製剤は、経口的に（ＰＯ）又は非経口的に（例えば、ＩＶ、ＩＰ、ＳＣ、又は腫瘍内に、各腫瘍につき１～３ヵ所の注射部位で）投与した。併用治療（Ｃｂｌ－ｂ阻害薬製剤＋ＨＰＶ１６ Ｅ７ワクチン）を受けた試験マウス群に加えて、本研究には、媒体製剤＋ＤＰＢＳ、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬製剤＋ＤＰＢＳ、又は媒体製剤＋ＨＰＶ１６ Ｅ７ワクチンを受けた対照マウス群が含まれた。
[0567] ０日目（ＴＣ－１注射後１４日目）に開始して、週２回腫瘍サイズを記録し、これを３３日目～４２日目の間（＝ＴＣ－１注射後４７日目～５６日目の間）に人道的エンドポイントに達するまで、投与期間中を通して継続した。試験マウスと対照マウス（各群１０匹のマウス）の腫瘍成長を比較することにより、応答レベルを評価した。加えて、１０日目（＝ＴＣ－１注射後２４日目）に、試験及び対照マウス（各群６匹のマウス）において腫瘍を採取して腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を分析することにより、免疫活性化レベルを判定した。ＴＩＬを処理して、標準方法を用いたフローサイトメトリー分析にかけることにより、抗原特異性、細胞型特異的マーカーの発現、並びにグランザイムＢ、ＣＤ２５、ＣＤ６９、ＰＤ－１、及びＬＡＧ３などの活性化マーカーの発現を決定した。更なる実験では、ＰＢＭＣ及び／又は脾細胞もまた採取し、処理した。試験群及び研究群のマウスにおいて全又はＥ７特異的（腫瘍抗原特異的）ＣＤ８＋ Ｔ細胞の相対的割合、及び免疫細胞上の活性化マーカーの相対的発現レベルを比較することにより、併用治療による抗腫瘍免疫応答の増大を判定した。
結果
[0568] 表６に示されるとおり、Ｃｂｌ－ｂ阻害を腫瘍ペプチドワクチン接種と組み合わせると、腫瘍ペプチド特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞による腫瘍浸潤が促進された。加えて、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬と腫瘍ペプチドワクチンとを含む併用治療により、腫瘍中の腫瘍ペプチド特異的（Ｅ７＋）及び他の（Ｅ７－）活性化ＣＤ８＋ Ｔ細胞の両方のレベルが上昇した。更に、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬と腫瘍ペプチドワクチンとを含む併用治療により、それぞれの単剤治療（Ｃｂｌ－ｂ阻害薬単独に対して１０例中０例の部分奏効例及び腫瘍ペプチドワクチン単独に対して１０例中３例の部分奏効例）と比べてより多くの部分奏効例（１０例中６例のマウス）が得られた。この実験では、部分奏効例は、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬又は腫瘍ペプチドワクチンの投与を受けなかった対照マウスの腫瘍サイズと比べた腫瘍サイズ（腫瘍容積）の有意な減少によって定義した。
Figure 0007587528000164
生物学的実施例１２：候補阻害薬によるＣｂｌ－ｂ阻害の評価
[0569] 候補化合物について、Ｃｂｌ－ｂに結合したフルオロフォア標識プローブを置換するその能力から明らかなとおりの、それがＥ３ユビキチンタンパク質リガーゼであるＣｂｌ－ｂに結合して阻害する能力を評価した。
材料及び方法
Ｃｂｌ－ｂ置換アッセイ（Ｃｂｌ－ｂ阻害アッセイ）
[0570] 候補化合物の存在下でのＣｂｌ－ｂとフルオロフォア標識プローブの相互作用をモニタすることにより、候補化合物が公知の阻害薬を置換し、それによってＣｂｌ－ｂ活性を阻害する能力を測定した。残基３６～４２７及びそのＮ末端にAvitagを含有するＣｂｌ－ｂ（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｑ１３１９１）のトランケート型変異体をBirAビオチンリガーゼと共発現させて、標準プロトコルを用いて精製した（Dou et al., Nature Structural and Molecular Biology 8: 982-987, 2013；Avidity LLCを参照されたい）。
[0571] 蛍光標識阻害薬プローブを合成し、BODIPY FLタグを付加した。Ｃｂｌ－ｂ置換アッセイの実施は、室温で３８４ウェルプレートにおいて、１０μＬ反応容積として、２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．５、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、０．０１％トリトンＸ－１００、０．０１％ＢＳＡ及び０．５ｍＭ ＴＣＥＰを含有するアッセイ緩衝液中の０．５ｎＭ Ｃｂｌ－ｂ又は０．１２５ｎＭ Ｃｂｌ－ｂ（最終濃度、それぞれ「高」及び「低」と指示される）を１％ＤＭＳＯ（最終濃度）で候補化合物の存在下にて１時間プレインキュベートすることによった。候補化合物の存在下でインキュベートした後、１５０ｎＭ蛍光標識阻害薬プローブ及び２ｎＭストレプトアビジン－テルビウム（Cisbio）（最終濃度）からなる近似ＥＣ４０結合飽和の存在下でプレートを更に１時間インキュベートした。１時間のインキュベーション後、Envisionプレートリーダー（Perkin Elmer）を使用してプレートのＴＲ－ＦＲＥＴシグナルを５２０／６２０ｎＭで読み取った。ＴＲ－ＦＲＥＴシグナルが存在する場合、Ｃｂｌ－ｂからプローブが追い出されておらず、化合物候補に置き換わっていないことを意味した。ＦＲＥＴシグナルが存在しない場合、Ｃｂｌ－ｂからプローブが追い出され、化合物候補に置き換わったことを意味した。
結果
[0572] Ｃｂｌ－ｂ活性アッセイの得られたデータを標準方法を用いて分析して、試験化合物のＩＣ５０値を決定した。表７では、化合物をＩＣ５０に関して順位付けして、以下のとおりビンに分けた：Ａは１ｎＭ未満を示し；及びＢは１ｎＭ～５ｎＭを示し；及びＣは５ｎＭ超を示す。
Figure 0007587528000165
生物学的実施例１３：Ｃｂｌ－ｂ阻害薬によるＴ細胞活性化の評価
[0573] Ｃｂｌ－ｂ阻害薬がＴ細胞を活性化させる能力について評価した。
材料及び方法
初代ヒト全Ｔ細胞活性化の精製及び評価
[0574] １）Ficoll-Paque（商標）（GE Healthcare）を使用して健常ヒトドナーのバフィーコートから末梢血造血細胞を分離することによるか；又は２）LeukoPak供血から直接かのいずれかにより、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を入手した。市販キットによるネガティブ選択を利用して、製造者のプロトコルに従いＰＭＢＣから全ヒト初代Ｔ細胞を単離することにより（Miltenyi Biotec、カタログ番号１３０－０９６－５３５（即ち、表面マーカーＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ３４、ＣＤ３６、ＣＤ５６、ＣＤ１２３、及びＣＤ２３５ａに対する抗体のカクテルをＰＢＭＣとインキュベートした後、試料を磁気ビーズに通して、これらの表面マーカーを発現する細胞を除去した）又はStemcell Technologies、カタログ番号１７９５１）、フローサイトメトリーによって判定したとき９５％を超えるＣＤ３＋細胞を生じさせた。細胞を３７℃、５％ＣＯ２で一晩静置した。各ウェル１×１０５細胞にＣｂｌ阻害薬を加え、最終ＤＭＳＯ濃度を０．１％未満としてプレートを指示される濃度（表８）で３７℃で５％ＣＯ２にて１時間インキュベートした。抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体で刺激した試料（抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８）について、試験したＣｂｌ－ｂ阻害薬濃度は、１μＭ、及び０．３μＭであった。抗ＣＤ３抗体単独で刺激した試料（抗ＣＤ３）について、試験したＣｂｌ－ｂ阻害薬濃度は、３μＭ、及び１μＭであった。Ｃｂｌ－ｂ阻害薬とのインキュベーション後、プレート結合型抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３）単独又はプレート結合型抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３）と可溶型抗ＣＤ２８抗体（２８．２）（Life Technologies）のいずれかで初代ヒト全Ｔ細胞を刺激した。プレート結合型抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３）を含むプレートを調製するため、９６ウェル丸底組織培養プレートを１００μＬの抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３）によってリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中１０μｇ／ｍＬで、３７℃、５％ＣＯ２にて４時間コートした。プレートをＰＢＳで１回洗浄した後、各ウェルに可溶型抗ＣＤ２８抗体（２８．２）と共に又はそれ無しで細胞を５μｇ／ｍＬの最終濃度で加えた。細胞を４８時間刺激した後、無細胞の上清を回収し、フローサイトメトリーによる表面マーカー判定のため細胞集団を染色した。ＩＬ－２を含めたサイトカイン分泌に関して、ＥＬＩＳＡ（R&D Systems、Peprotech又はLife Technologies）又はLuminexマルチプレックスキット（Procarta Life Technologies）により、製造者のプロトコルに従い上清を分析した。細胞を抗ＣＤ２５抗体（BD Biosciences）で染色して、表面活性化マーカーのレベルを判定した。
結果
[0575] 読み取った情報は、ベースラインに対する変化倍数として報告した。この研究のベースラインは、抗ＣＤ３抗体及び可溶型抗ＣＤ２８抗体で刺激した全ヒトＴ細胞であって、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬とインキュベートしなかった細胞から入手した測定値である（表８）。抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８で刺激したＴ細胞については、ＩＬ－２分泌がベースラインの２．５倍より大きい変化及びＣＤ２５表面染色がベースラインの１．３倍より大きい変化を、有意且つ陽性応答と見なした。抗ＣＤ３単独で刺激したＴ細胞については、ＩＬ－２分泌がベースラインの０．１倍より大きい変化及びＣＤ２５表面染色がベースラインの０．６倍より大きい変化を、有意且つ陽性応答と見なした。
[0576] それらの読取り値に基づき化合物を順位付けして、以下のとおり各ビンに分けた：
抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体共刺激でのＩＬ－２分泌について、ビンは以下である：Ｃは１０倍以下を示し、Ｂは１１～１５倍を示し、Ａは１５倍超を示す；
抗ＣＤ３抗体刺激でのＩＬ－２分泌について、ビンは以下である：Ｃは０．３３倍以下を示し、Ｂは０．３４～０．６６倍を示し、Ａは０．６６倍超を示す；
抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体共刺激でのＣＤ２５染色について、ビンは以下である：Ｃは１．２４倍以下を示し、Ｂは１．２５～１．３９倍を示し、Ａは１．３９倍超を示す；及び
抗ＣＤ３抗体刺激でのＣＤ２５染色について、ビンは以下である：Ｃは１．０４倍以下を示し、Ｂは１．０５～１．１４倍を示し、及びＡは１．１４倍超を示す。
Figure 0007587528000166
[0577] Ｃｂｌ－ｂ阻害薬は、抗ＣＤ３抗体単独で刺激するか、又は抗ＣＤ２８抗体と組み合わせて刺激したＴ細胞によるＩＬ－２分泌を亢進させた。抗ＣＤ３抗体単独で刺激したとき、又は抗ＣＤ２８抗体と組み合わせて刺激したとき、Ｔ細胞の表面上のＣＤ２５活性化マーカーの発現は増加した。これらの結果は、同定されたＣｂｌ－ｂ阻害薬がＴ細胞を活性化させる能力を有すること、及びかかる活性化が抗ＣＤ２８抗体との共刺激を必要としないことを示している。
生物学的実施例１４：Ｃｂｌ－ｂ阻害薬の免疫調節効果の評価
[0578] スクリーニングアッセイから同定されたＣｂｌ－ｂ阻害薬は、ＩＬ－２分泌及びＣＤ２５表面活性化マーカーの発現の亢進からも明らかなとおり、インビトロで全ヒトＴ細胞を活性化させる能力を実証した。
[0579] 更なるインビトロ研究を行い、Ｔ細胞による追加的なサイトカイン分泌及びＴ細胞上の表面活性化マーカーの発現を判定した。Ｃｂｌ－ｂ阻害薬がＴ細胞増殖を増加させ、Ｔ細胞枯渇を低下させ、及びＴ細胞アネルギーを低下させる能力など、本明細書に記載されるＣｂｌ－ｂ阻害薬と接触したＴ細胞に対する追加的な免疫調節効果を判定した。本明細書に記載されるものなどのＣｂｌ－ｂ阻害薬がインビボでＴ細胞を活性化させる能力もまた判定した。Ｃｂｌ－ｂ阻害薬がＢ細胞及びＮＫ細胞を活性化させる能力など、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬による他の免疫調節効果も判定した。
初代ヒト全Ｔ細胞活性化の精製及び評価
[0580] １）Ficoll-Paque（商標）（GE Healthcare）を使用して健常ヒトドナーのバフィーコートから末梢血造血細胞を分離することによるか；又は２）LeukoPak供血から直接かのいずれかにより、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を入手した。市販キットによるネガティブ選択を利用して、製造者のプロトコルに従いＰＭＢＣから全ヒト初代Ｔ細胞を単離することにより（Miltenyi Biotec、カタログ番号１３０－０９６－５３５（即ち、表面マーカーＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ３４、ＣＤ３６、ＣＤ５６、ＣＤ１２３、及びＣＤ２３５ａに対する抗体のカクテルをＰＢＭＣとインキュベートした後、試料を磁気ビーズに通して、これらの表面マーカーを発現する細胞を除去した）又はStemcell Technologies、カタログ番号１７９５１）、フローサイトメトリーによって判定したとき９５％を超えるＣＤ３＋細胞を生じさせた。細胞増殖の測定のため、細胞をCell Trace Violet（Invitrogen）で製造者のプロトコルに従い標識した後、抗ＣＤ３抗体単独、又は抗ＣＤ２８抗体との組み合わせで刺激することにより活性化させた。最終ＤＭＳＯ濃度を０．１％未満としながら、各ウェル１×１０５細胞にＣｂｌ－ｂ阻害薬を複数の濃度（例えば、１０μＭ、１．１１μＭ、又は０．１２３μＭ）で加えた。プレートを５％ＣＯ２にて３７℃で１時間インキュベートした。Ｃｂｌ－ｂ阻害薬とのインキュベーション後、プレート結合型抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３）単独又はプレート結合型抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３）と可溶型抗ＣＤ２８抗体（２８．２）（Life Technologies）のいずれかで初代ヒト全Ｔ細胞を刺激した。プレート結合型抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３）を含むプレートを調製するため、９６ウェル丸底組織培養プレートを１００μＬの抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３）によってリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中１０μｇ／ｍＬで、３７℃、５％ＣＯ２にて４時間コートした。プレートをＰＢＳで洗浄した後、各ウェルに可溶型抗ＣＤ２８抗体（２８．２）と共に又はそれ無しで細胞を５μｇ／ｍＬの最終濃度で加えた。細胞を４８時間刺激した後、無細胞の上清を回収し、フローサイトメトリーによる表面マーカー判定のため細胞集団を染色した。サイトカイン分泌（例えば、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮγ、及びＴＮＦα）に関して、ＥＬＩＳＡ（R&D Systems、Peprotech又はLife Technologies）又はLuminexマルチプレックスキット（Procarta Life Technologies）により、製造者のプロトコルに従い上清を分析した。細胞を抗ＣＤ６９（BD Biosciences）で染色して、表面活性化マーカーのレベルを判定した。増殖はフローサイトメトリーにより測定し、データはFlowJo v7.6.5又はv10で分析した。読み取った情報は、ベースラインに対する変化倍数として報告した。一部の実施形態において、ベースラインは、抗ＣＤ３抗体単独で刺激した全ヒトＴ細胞であって、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬とインキュベートしなかった細胞から入手した測定値であった。一部の実施形態において、ベースラインは、抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体で刺激した全ヒトＴ細胞であって、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬とインキュベートしなかった細胞から入手した測定値であった。
[0581] 同種異系混合リンパ球反応（ＭＬＲ）のコンテクストで、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬が初代ヒトＴ細胞に及ぼす効果もまた評価した。同種異系未熟樹状細胞を以下の条件下で作成した。１）Ficoll-Paque（商標）（GE Healthcare）を使用して健常ヒトドナーのバフィーコートから末梢血造血細胞を分離することによるか；又は２）LeukoPak供血から直接かのいずれかにより、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を入手した。市販キットによるポジティブ選択を利用して、製造者のプロトコルに従いＰＭＢＣから単球を単離することにより（StemCells、カタログ番号１７８５８）、フローサイトメトリーによって判定したとき９５％を超えるＣＤ１４＋細胞を生じさせた。単球を３０ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＧＭ－ＣＳＦ及び２０ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＩＬ－４と共に７日間培養して、未熟樹状細胞を作成した。単球及びＴ細胞は、末梢血から新鮮に単離するか、又は凍結ストックから解凍するかのいずれかであった。ヒトＴ細胞を単離し、ＣＦＳＥで標識し、上記に記載されるとおり阻害薬と共にインキュベートした。各ウェル２×１０３同種異系未熟樹状細胞との共培養下にある１×１０５Ｔ細胞に、最終ＤＭＳＯ濃度を０．１％未満としてＣｂｌ－ｂ阻害薬を複数の濃度（例えば、１０μＭ、又は１．１１μＭ）で加え、５％ＣＯ２にて３７℃で５日間インキュベートした。Ｔ細胞の増殖をフローサイトメトリーにより評価した。
[0582] Ｃｂｌ－ｂ阻害薬が、Ｔ細胞活性化の指標となるＴ細胞からのサイトカイン（例えば、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮγ、及びＴＮＦα）の分泌及び／又はＴ細胞上の細胞表面マーカー（例えば、ＣＤ６９）の表面発現を誘導し、又は亢進させる能力を決定する試験を行った。またＣｂｌ－ｂ阻害薬がＴ細胞増殖を誘導し、又は亢進させる能力を決定する試験も行った。共刺激の存在下で、且つ条件がプライミングに最適以下の場合にＣｂｌ－ｂ阻害薬がＴ細胞活性化に及ぼす効果を試験した。
Ｔ細胞枯渇のヒトＴ細胞インビトロモデル
[0583] Ｔ細胞枯渇は、慢性感染症及び癌に応答して細胞のエフェクター応答が不足し、抑制性受容体発現レベルが持続するために、Ｔ細胞機能不全が生じることを特徴とした。Ｔ細胞枯渇のインビトロモデルには、同種異系モデル及び自家モデルが含まれる。自家モデルでは、骨髄系細胞及びＳＥＢ（ブドウ球菌エンテロトキシンＢ、Millipore）を使用して抗ＣＤ３刺激Ｔ細胞を刺激した。１）Ficoll-Paque（商標）（GE Healthcare）を使用して健常ヒトドナーのバフィーコートから末梢血造血細胞を分離することによるか；又は２）LeukoPak供血から直接かのいずれかにより、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を入手した。市販キットによるネガティブ選択を用いて、StemCells EasySepヒト単球濃縮キット、ＣＤ１６枯渇なし（カタログ番号１９０５８）で製造者のプロトコルに従い単球を単離した。５０ｎｇ／ｍＬ組換えヒトＭ－ＣＳＦ（R&D System又はPeprotech）を含有する完全培地（例えば、添加剤不含、１０％ＨＩ ＦＢＳ、１×グルタミン及び１×β－メルカプトエタノール含有ＲＰＭＩ １６４０）で、単離した単球を培養した。細胞は、各ウェルにつき２×１０６細胞で播き（０日目）、５日間培養し、２日目に新鮮培地及びサイトカインを供給した。５日目、１００ｎｇ／ｍＬでＩＦＮγを加え、細胞を一晩インキュベートした。市販キットでネガティブ選択を用いて（Stemcell Technologies EasySepヒトＴ細胞単離キット（カタログ番号１７９５１）による）、製造者のプロトコルに従いＰＢＭＣから同じドナーの初代ヒトＴ細胞を単離した。ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ１９、ＣＤ１４、ＣＤ５６、及びＣＤ３に関するフローサイトメトリー（BD Biosciences）による表面マーカー検出によって純度を確認した。３×１０６細胞／ｍＬのＴ細胞を１０μｇ／ｍＬのプレート結合型抗ＣＤ３抗体（クローンＵＣＨＴ－１）で５日間刺激した。これは、骨髄系細胞の作成と並行して行った。６日目、丸底９６ウェルプレートのウェルに、１ウェル当たり２．５×１０４Ｔ細胞を加え、１ウェル当たり１２．５×１０３骨髄系細胞及びＳＥＢ抗原（０．１μｇ／ｍＬ）を加えた。試験薬剤（例えば、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬化合物）又は対照（例えば、抗ＰＤ１抗体などのチェックポイント中和抗体）を指示濃度（例えば、１０μＭ）でウェルに加えた。細胞を３日間培養した時点で、無細胞の上清を回収し、分泌サイトカイン（例えば、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮγ、及びＩＬ－２）に関して、ＥＬＩＳＡ（R&D Systems、Peprotech又はLife Technologies）又はLuminexマルチプレックスキット（Procarta Life Technologies）により判定した。チェックポイント阻害薬を含む表面マーカー（例えば、ＣＴＬＡ４）のパネルに関してＴ細胞を染色し、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬の効果に関してフローサイトメトリーにより評価した。
[0584] Ｃｂｌ－ｂ阻害薬が骨髄系細胞の存在下で枯渇Ｔ細胞からのサイトカイン（例えば、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮγ、及びＩＬ－２）の分泌（Ｔ細胞枯渇減少の指標となる）を誘導し、又は亢進させる能力を決定する試験を行った。また、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬が枯渇Ｔ細胞の活性化後にチェックポイント調節因子発現レベルに及ぼす効果も試験した。
Ｔ細胞アネルギーのヒトＴ細胞インビトロモデル
[0585] １）Ficoll-Paque（商標）（GE Healthcare）を使用して健常ヒトドナーのバフィーコートから末梢血造血細胞を分離することによるか；又は２）LeukoPak供血から直接かのいずれかにより、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を入手した。市販キットによるネガティブ選択を利用して、製造者のプロトコルに従いＰＢＭＣから全ヒト初代Ｔ細胞を単離することにより（Miltenyi Biotec、カタログ番号１３０－０９６－５３５（即ち、表面マーカーＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ３４、ＣＤ３６、ＣＤ５６、ＣＤ１２３、及びＣＤ２３５ａに対する抗体のカクテルをＰＢＭＣとインキュベートした後、試料を磁気ビーズに通して、これらの表面マーカーを発現する細胞を除去した）又はStemcell Technologies、カタログ番号１７９５１）、フローサイトメトリーによって判定したとき９５％を超えるＣＤ３＋細胞を生じさせた。固定化した抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３）及び可溶型抗ＣＤ２８抗体（２８．２）で細胞を活性化させて、２日経った時点で細胞を洗浄し、刺激の非存在下で３日間静置させておいた。次にこの細胞をイオノマイシン（Sigma）で１８～２４時間処理してアネルギーを誘導した。２回洗浄して試料からイオノマイシンを除去した後、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬化合物を指示濃度（例えば、１０、１．１１、及び０．３７μＭ）で細胞に加え、１時間インキュベートした。次に細胞を抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体で再チャレンジし、２４時間経った時点で無細胞の上清を回収し、サイトカイン（例えば、ＩＦＮγ）に関してＥＬＩＳＡ（R&D Systems又はPeprotech）又はLuminexマルチプレックスキット（Procarta Life Technologies）によって製造者のプロトコルに従い判定した。
[0586] Ｃｂｌ－ｂ阻害薬が、Ｔ細胞寛容の低下の指標となる、アネルギー状態のＴ細胞からのサイトカイン（例えば、ＩＦＮγ）の分泌を誘導し、又は亢進させる能力を決定する試験を行った。
Ｃｂｌ－ｂ阻害薬のインビボ活性
[0587] Ｃ５７ＢＬ／６又はＢＡＬＢ／ｃなど、適格性の免疫系を有する諸系統のマウスにＣｂｌ－ｂ阻害薬を投与することにより、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬の薬力学的プロファイルを決定する方法を実施した。Ｃｂｌ－ｂ阻害薬を好適な製剤に溶解させて、静脈内（ＩＶ）、腹腔内（ＩＰ）、皮下（ＳＣ）、又は経口（ＰＯ）などの様々な経路のうちの１つにより、薬物動態学及び忍容性に関する先行研究によって情報が得られるとおりの好適な用量レベル及び頻度（例えば、１日２回ＢＩＤ又は１日３回ＴＩＤ）で投与した。Ｃｂｌ－ｂ阻害薬の投与後、ＰＢＳ中の抗ＣＤ３抗体又はその抗原結合断片を動物１個体当たり２μｇ又は１０μｇなどの決められた量でＩＶ又はＩＰなどの経路によって投与することにより、Ｔ細胞及び間接的に他の免疫細胞（例えば、サイトカイン産生による）をインビボで刺激した（Hirsh et al., J. Immunol., 1989；Ferran, et al., Eur. J. Immunol., 1990を参照されたい）。追加的な研究対照アームには、媒体製剤単独（即ち、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬及び抗ＣＤ３抗体を含まない製剤）、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬単独を含有する製剤、抗ＣＤ３抗体単独を含有する製剤、ＰＢＳ単独、又はこれらの薬剤の組み合わせで処置されたマウスの群が含まれた。次に、血漿サイトカインレベル及び／又は免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）上の活性化マーカーの発現を分析することにより、免疫活性化レベルを判定した。決められた時点（例えば、８時間又は２４時間）で血液又はリンパ系器官（例えば脾臓）を採取した。当該技術分野において公知の標準方法を用いて血液試料を処理することにより、サイトカインレベルの決定用に血漿を収集した。測定したサイトカインには、ＩＬ－２、ＩＦＮγ、及びＴＮＦαが含まれた。標準方法を用いた免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）のフローサイトメトリー分析用に追加の血液試料及びリンパ系組織を処理して、ＣＤ２５及び／又はＣＤ６９など、細胞型特異的マーカー及び活性化マーカーの発現を決定した。血漿中の相対的サイトカイン濃度、又は免疫細胞上の活性化マーカーの発現レベルを適切な群間で（例えば、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬及び２μｇ抗ＣＤ３抗体で処置したマウスと、媒体及び２μｇ抗ＣＤ３抗体で処置したマウスで）比較することにより、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬投与による免疫刺激の増大を判定した。
[0588] Ｃｂｌ－ｂ阻害薬が、免疫応答の調節の指標となる、抗ＣＤ３抗体で刺激した処置マウスから入手した血中のサイトカイン（例えば、ＩＬ－２、ＩＦＮγ、及びＴＮＦα）のレベルを誘導し、又は亢進させる能力を決定する試験を行った。また、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬が、免疫応答の調節の指標となる、抗ＣＤ３抗体で刺激した処置マウスから単離したＴ細胞上の細胞表面マーカー（例えば、ＣＤ２５及び／又はＣＤ６９）の発現を誘導し、又は亢進させる能力を決定する試験も行った。
Ｂ細胞活性化アッセイ
[0589] １）Ficoll-Paque（商標）（GE Healthcare）を使用して健常ヒトドナーのバフィーコートから末梢血造血細胞を分離することによるか；又は２）LeukoPak供血から直接かのいずれかにより、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を入手した。市販キットによるネガティブ選択を利用して、製造者のプロトコルに従いＰＢＭＣからヒト初代Ｂ細胞を単離することにより（Stemcell Technologies、カタログ番号１７９５４）、フローサイトメトリーによって判定したとき９５％を超えるＣＤ２０＋細胞を生じさせた。０．５％未満の最終ＤＭＳＯ濃度として、１０μＭ～１ｎＭの範囲の用量にわたるＣｂｌ－ｂ阻害薬を含む９６ウェルプレートに初代ヒトＢ細胞を１ウェル当たり０．７～１×１０５で播き、３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートした。細胞を抗ＩｇＭによって３７℃、５％ＣＯ２で２０時間刺激した。成熟ＣＤ２０＋ＩｇＤ＋Ｂ細胞上の表面活性化マーカーを抗ＣＤ６９抗体（BD Biosciences）を使用してＦＡＣＳによりモニタした。
[0590] Ｃｂｌ－ｂ阻害薬がＢ細胞上の細胞表面マーカー（例えば、ＣＤ６９）の表面発現（Ｂ細胞活性化の指標となる）を誘導し、又は亢進させる能力を決定する試験を行った。
初代ヒトＮＫ細胞の精製及び活性化
[0591] １）Ficoll-Paque（商標）（GE Healthcare）を使用して健常ヒトドナーのバフィーコートから末梢血造血細胞を分離することによるか；又は２）LeukoPak供血から直接かのいずれかにより、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を入手した。市販キットによるネガティブ選択を利用して、製造者のプロトコルに従いＰＢＭＣから全ヒト初代ＮＫ細胞を単離することにより（Miltenyi Biotec、カタログ番号１３０－０９２－６５７又はStemcell Technologies、カタログ番号１７９５５）、フローサイトメトリーによって判定したとき９２％を超えるＣＤ５６＋、ＣＤ３－細胞を生じさせた。細胞をＩＬ－２（６０ｎｇ／ｍＬ）と共に３７℃、５％ＣＯ２で一晩培養した。最終ＤＭＳＯ濃度を０．１％未満として、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬を特定の濃度（例えば、１０μＭ、１μＭ、又は０．１μＭ）で刺激の１時間前に加え、３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートした。フローサイトメトリーによって測定可能な赤色の核を有するように操作された標的細胞（K562 NucRed）と共にＮＫ細胞を共培養した。K562 NucRed細胞は、Ｋ５６２細胞をIncuCyte NucLight Red Lentivirus試薬（カタログ番号４４７６）で形質導入することにより作製し、５日間選択した。クローン集団を単離し、標準的な組織培養技法を用いて拡大し、ＮＫ細胞死滅アッセイで野生型Ｋ５６２細胞と比較することにより、個々のクローンの妥当性を確認した。指示される比率（例えば、５：１、１：１、又は１：５）のＮＫ（エフェクター細胞）対K562 NucRed（標的細胞）で細胞を６時間混合した。無細胞の上清を回収し、サイトカイン分泌（例えば、ＴＮＦα、ＩＦＮγ、又はＭＩＰ１β）に関してＥＬＩＳＡ又はLuminexマルチプレックスキットによって製造者のプロトコルに従い分析した。ＩＦＮγ分泌は、R&D SystemsのＥＬＩＳＡキット（カタログ番号ＤＹ２８５）を使用して判定し、ＴＮＦα分泌は、R&D SystemsのＥＬＩＳＡキット（カタログ番号ＤＹ２１０）を使用して判定し、及びＭＩＰ１β分泌は、R&D SystemsのＥＬＩＳＡキット（カタログ番号ＤＹ２７１）を使用して判定した。
生物学的実施例１５：癌の処置に対する腫瘍溶解性ウイルスと組み合わせたＣｂｌ－ｂ阻害薬の評価
[0592] 腫瘍溶解性ウイルスは、癌細胞に優先的に感染してそれを死滅させ、宿主抗腫瘍免疫応答を刺激する。本例は、マウスにおける癌の処置に対する腫瘍溶解性ウイルスとＣｂｌ－ｂ阻害薬とを含む併用治療の評価について記載する。
材料及び方法
[0593] 端的には、同系ＭＣ－３８細胞腫瘍を担持するＣ５７ＢＬ／６マウスで併用治療を試験した。ＭＣ－３８細胞は、ジメチルヒドラジンの皮下注射によって誘導したマウス腺癌に由来した（Cameron et al., J Exp Med, 171: 249-263, 1990）。ＭＣ－３８細胞は、皮下又は腹腔内に注射した。腫瘍を成長させて、約５～７日経った時点で動物を無作為化し、処置を開始した。
[0594] ワクシニアウイルスなどの腫瘍溶解性ウイルスを、約１０８～１０９プラーク形成単位（plague forming unit）の用量で腹腔内投与した（Puhlmann et al., Cancer Gene Therapy, 7: 66-73, 2000）。Ｃｂｌ－ｂ阻害薬を好適な製剤に溶解させて、薬物動態学及び忍容性に関する先行研究によって情報が得られるとおりの好適な用量レベル及び頻度で投与した。初回の研究では、好適な媒体中のＣｂｌ－ｂ阻害薬、又は媒体単独を、０日目（＝ＭＣ－３８注射後５～７日目）から開始して、１８０ｍｇ／ｋｇの用量で１日２回（ＢＩＤ）、経口（ＰＯ）投与した。更なる研究では、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬製剤は、経口的に（ＰＯ）又は非経口的に（例えば、ＩＶ、ＩＰ、ＳＣ、又は腫瘍内に、各腫瘍につき１～３ヵ所の注射部位で）投与した。併用治療（Ｃｂｌ－ｂ阻害薬製剤＋腫瘍溶解性ウイルス）を受けた試験マウス群に加えて、本研究には、媒体製剤＋ＤＰＢＳ、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬製剤＋ＤＰＢＳ、又は媒体製剤＋腫瘍溶解性ウイルスを受けた対照マウス群が含まれた。
[0595] 腫瘍成長を測定し、試験マウスの腫瘍成長を対照マウスと比較することにより、応答レベルを評価した。加えて、腫瘍を採取して腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を分析することにより、免疫活性化レベルを判定した。更なる実験では、ＰＢＭＣ又は脾細胞もまた採取した。ＴＩＬ及び任意選択で他のリンパ球試料を処理して、標準方法を用いたフローサイトメトリー分析にかけることにより、抗原特異性、細胞型特異的マーカーの発現、並びにグランザイムＢ、ＣＤ２５、ＣＤ６９、ＰＤ－１、及びＬＡＧ３などの活性化マーカーの発現を決定した。試験群及び研究群のマウスにおいて腫瘍中の免疫細胞集団の相対的割合及び免疫細胞上の活性化マーカーの相対的発現レベルを比較することにより、併用治療による抗腫瘍免疫応答の増大を判定した。
[0596] 本明細書で識別情報の引用によって言及される全ての刊行物、特許、特許出願、及び公開特許出願の開示は、全体として本明細書によって参照によりここに援用される。
[0597] 前述の開示の態様は、理解を明確にするため図解及び例を用いて幾らか詳細に記載されているが、当業者には、特定の変更及び修正が行われ得ることは明らかである。従って、記載及び例は、本開示の範囲を限定するものと解釈されてはならない。

Claims (51)

  1. 式（Ｉ）の化合物

    又はその互変異性体、その立体異性体、若しくはその薬学的に許容可能な塩［式中、

    は、

    であり；
    Ｚ１は、ＣＨ又は窒素であり；
    Ｚ２は、ＣＨ又は窒素であり；
    Ｒ１は、水素、Ｃ１～Ｃ６アルキル、又はＣ１～Ｃ６ハロアルキルであり；
    Ｒ２は、水素、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキル、又はＣ３～Ｃ６シクロアルキルであり；
    Ｒ３は、－ＣＦ３又はシクロプロピルであり；
    Ｒ４は、－ＣＦ３又はシクロプロピルであり；
    Ｘは、水素、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキル、又は

    であり；
    Ｒ５は、水素、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキル、Ｃ１～Ｃ６アルキル－ＯＨ、又はＣ１～Ｃ６アルキル－ＣＮであり；
    Ｒ６は、単環式Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、縮合二環式Ｃ４～Ｃ８シクロアルキル、架橋二環式Ｃ４～Ｃ８シクロアルキル、スピロ二環式Ｃ５～Ｃ８シクロアルキル、又は５～６員環ヘテロシクリルであり、これらの各々は、１～５個のＲ７基によって任意選択で置換されているか；
    又はＲ５及びＲ６は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、５～１０員環単環式、縮合二環式、若しくは架橋ヘテロシクリル、又は５～１０員環単環式若しくは二環式ヘテロアリールを形成し、このヘテロシクリル又はヘテロアリールの各々は、窒素及び酸素からなる群から選択される１～２個の更なるヘテロ原子を任意選択で含み、及びこのヘテロシクリル又はヘテロアリールの各々は、１～５個のＲ８基によって任意選択で置換されており；
    各Ｒ７は、独立に、ハロ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキル、Ｃ１～Ｃ６アルキル－ＯＨ、又はＣ１～Ｃ６アルキル－ＣＮであり；
    各Ｒ８は、独立に、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキル、Ｃ１～Ｃ６アルキル－ＯＨ、－ＣＮ、Ｃ１～Ｃ６アルキル－ＣＮ、－（Ｃ１～Ｃ６アルキレン）－Ｏ－（Ｃ１～Ｃ６アルキル）、ヒドロキシ、又はハロであるか、
    又は同じ炭素原子に結合した２個のＲ８基が、それらが結合している前記炭素原子と一緒になって、スピロＣ３～Ｃ６シクロアルキル又はスピロ５～６員環ヘテロシクリルを形成し；
    各Ｒ９は、独立に、水素、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキル、又はＣ１～Ｃ６アルキル－ＯＨであり；及び
    ｎは、０又は１である］。

  2. が、

    である、又は
    前記化５が前記化６であって、Ｚ１がＣＨである、又は

    が、

    である、又は
    前記化５が前記化６であって、Ｚ１が窒素である、又は

    が、

    である、又は

    が、

    である、又は
    前記化１１が前記化１２であって、Ｚ２がＣＨである、又は

    が、

    である、又は
    前記化１１が前記化１２であって、Ｚ２が窒素である、又は

    が、

    である、
    請求項１に記載の化合物。
  3. Ｒ１が、水素、Ｃ１～Ｃ３アルキル、若しくはＣ１～Ｃ３ハロアルキルである、又は
    Ｒ１が、水素、－ＣＨ３、若しくは－ＣＦ３である、
    請求項１又は２に記載の化合物。
  4. Ｒ２が、水素、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３ハロアルキル、若しくはＣ３～Ｃ４シクロアルキルである、又は
    Ｒ２が、水素、－ＣＨ３、－ＣＦ３、－ＣＨＦ２、－ＣＨ２Ｆ、若しくはシクロプロピルである、
    請求項１～３のいずれか一項に記載の化合物。
  5. ｎが０又は１である、請求項１～４のいずれか一項に記載の化合物。
  6. Ｘが水素である、又は
    Ｘが、Ｃ１～Ｃ３アルキル若しくはＣ１～Ｃ３ハロアルキルである、又は
    Ｘが、－ＣＨ３若しくは－ＣＦ３である、又は
    Ｘが、

    である、
    請求項１～５のいずれか一項に記載の化合物。
  7. Ｒ５が、水素、Ｃ１～Ｃ３アルキル、若しくはＣ１～Ｃ３ハロアルキルである、又は
    Ｒ５が、水素、－ＣＨ３、－ＣＦ３、－ＣＨ２ＣＮ、若しくは－ＣＨ２ＯＨである、又は
    Ｒ６が、単環式Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、縮合二環式Ｃ４～Ｃ８シクロアルキル、架橋二環式Ｃ４～Ｃ８シクロアルキル、スピロ二環式Ｃ５～Ｃ８シクロアルキル、若しくは５～６員環ヘテロシクリルであり、これらの各々が、１～５個のＲ７基によって任意選択で置換されている、又は
    Ｒ６が、

    からなる群から選択される、又は
    Ｒ６が、前記１～５個のＲ７基を有するいずれかであって、各Ｒ７が、独立に、ハロ、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３ハロアルキル、Ｃ１～Ｃ３アルキル－ＯＨ、若しくはＣ１～Ｃ３アルキル－ＣＮである、又は
    Ｒ６が、前記１～５個のＲ７基を有するいずれかであって、各Ｒ７が、独立に、フルオロ、－ＣＨ３、－ＣＦ３、－ＣＨ２ＯＨ、若しくは－ＣＨ２ＣＮである、又は
    Ｒ５及びＲ６が、それらが結合している窒素原子と一緒になって、５～１０員環単環式、縮合二環式、若しくは架橋ヘテロシクリル、又は５～１０員環単環式若しくは二環式ヘテロアリールを形成し、このヘテロシクリル又はヘテロアリールの各々が、窒素及び酸素からなる群から選択される１～２個の更なるヘテロ原子を任意選択で含み、及びこのヘテロシクリル又はヘテロアリールの各々が、１～５個のＲ８基によって任意選択で置換されている、又は
    Ｒ５及びＲ６が、それらが結合している窒素原子と一緒になって、

    からなる群から選択される部分を形成する、又は
    Ｒ５及びＲ６が、それらが結合している窒素原子と一緒になって、前記ヘテロシクリル又は前記ヘテロアリールを形成し、このヘテロシクリル又はヘテロアリールの各々が、窒素及び酸素からなる群から選択される１～２個の更なるヘテロ原子を任意選択で含み、及びこのヘテロシクリル又はヘテロアリールの各々が、前記１～５個のＲ８基を有するいずれかであって、各Ｒ８が、独立に、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３ハロアルキル、Ｃ１～Ｃ３アルキル－ＯＨ、－ＣＮ、Ｃ１～Ｃ３アルキル－ＣＮ、－（Ｃ１～Ｃ３アルキレン）－Ｏ－（Ｃ１～Ｃ３アルキル）、ヒドロキシ、若しくはハロであるか、又は、同じ炭素原子に結合した２個のＲ８基が、それらが結合している前記炭素原子と一緒になって、スピロＣ３～Ｃ４シクロアルキル若しくはスピロ５～６員環ヘテロシクリルを形成する、又は
    Ｒ５及びＲ６が、それらが結合している窒素原子と一緒になって、前記ヘテロシクリル又は前記ヘテロアリールを形成し、このヘテロシクリル又はヘテロアリールの各々が、窒素及び酸素からなる群から選択される１～２個の更なるヘテロ原子を任意選択で含み、及びこのヘテロシクリル又はヘテロアリールの各々が、前記１～５個のＲ８基を有するいずれかであって、各Ｒ８が、独立に、－ＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ３、－ＣＦ３、－ＣＨ２ＯＨ、－ＣＮ、－ＣＨ２ＣＮ、－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ３、ヒドロキシ、若しくはフッ素であるか、又は、同じ炭素原子に結合した２個のＲ８基が、それらが結合している前記炭素原子と一緒になって、スピロシクロプロピルを形成する、又は
    各Ｒ９が、独立に、水素、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ３ハロアルキル、若しくはＣ１～Ｃ３アルキル－ＯＨである、又は
    各Ｒ９が、独立に、水素、－ＣＨ３、－ＣＦ３、若しくは－ＣＨ２ＯＨである、
    請求項６に記載の化合物。
  8. 表１～表４に記載の実施例番号１～５８の化合物から選択される、請求項１に記載の化合物。



  9. 請求項１～８のいずれか一項に記載の化合物と、薬学的に許容可能な賦形剤とを含む医薬組成物。
  10. インビトロ又はエキソビボにおける免疫細胞の活性を調節する方法であって、前記免疫細胞を有効量のＣｂｌ－ｂ阻害薬と接触させて前記免疫細胞の活性を調節することを含み、前記Ｃｂｌ－ｂ阻害薬が、請求項１～８のいずれか一項に記載の化合物であって、
    前記免疫細胞が、Ｔ細胞、Ｂ細胞、若しくはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む、又は
    前記免疫細胞が、哺乳類対象の血液試料から単離されたものであるか、若しくは単離されるものである、又は
    前記免疫細胞が、癌を有する哺乳類対象の腫瘍から単離された、若しくは単離される腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）である、又は
    （１）前記免疫細胞がＴ細胞を含み、前記Ｔ細胞の活性を調節することが、Ｔ細胞活性化の増加、Ｔ細胞増殖の増加、Ｔ細胞枯渇の低下、及びＴ細胞寛容の低下のうちの１つ以上を含む、又は
    （２）前記（１）の場合であって、前記Ｔ細胞活性化の増加が、サイトカイン産生の増加を含む、及び／又は
    （３）前記（２）の場合であって、前記サイトカインが、ＩＬ－２、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦα、及びＧＭ－ＣＳＦからなる群から選択される１つ以上を含む、及び／又は
    （４）前記（１）又は（２）の場合であって、前記Ｔ細胞活性化の増加が、１つ以上のＴ細胞活性化マーカーの細胞表面発現の増加を含む、及び／又は
    （５）前記（４）の場合であって、前記Ｔ細胞活性化マーカーが、ＣＤ２５、ＣＤ６９、及びＣＴＬＡ４からなる群から選択される１つ以上を含む、及び／又は
    （６）前記（１）～（５）のいずれかの場合であって、前記Ｔ細胞が、単独の、若しくは抗ＣＤ２８抗体と組み合わせた抗ＣＤ３抗体と接触した状態にあったか、若しくはその状態にある、及び／又は
    （７）前記（１）～（５）のいずれかの場合であって、単独の、若しくは抗ＣＤ３抗体及び／若しくは抗ＣＤ２８抗体と組み合わせたＩＬ－２と共に前記免疫細胞を培養することを更に含む、又は
    （８）前記免疫細胞がＮＫ細胞を含み、ＮＫ細胞の活性を調節することが、ＮＫ細胞活性化の増加を含む、及び／又は
    （９）前記（８）の場合であって、前記ＮＫ細胞活性化の増加が、サイトカイン産生の増加を含む、及び／又は
    （１０）前記（９）の場合であって、前記サイトカインが、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦα、及びＭＩＰ１βからなる群から選択される１つ以上を含む、又は
    前記免疫細胞がＢ細胞を含み、Ｂ細胞の活性を調節することが、Ｂ細胞活性化の増加を含み、任意選択でＢ細胞活性化の増加が、ＣＤ６９発現の増加を含む、及び／又は
    前記免疫細胞がヒト免疫細胞である、及び／又は
    前記免疫細胞が組換えキメラ受容体を含み、任意選択で前記組換えキメラ受容体がキメラ抗原受容体である、
    方法。
  11. 修飾免疫細胞を作製する方法であって、有効量のＣｂｌ－ｂ阻害薬の存在下で免疫細胞を含有する細胞集団を培養して前記免疫細胞の活性を調節し、それによって前記修飾免疫細胞を作製することを含み、前記Ｃｂｌ－ｂ阻害薬が、請求項１～８のいずれか一項に記載の化合物である、方法。
  12. 単独の、若しくは抗ＣＤ２８抗体と組み合わせた抗ＣＤ３抗体と共に前記免疫細胞を培養することを更に含む、又は
    単独の、若しくは抗ＣＤ３抗体及び／若しくは抗ＣＤ２８抗体と組み合わせたＩＬ－２と共に前記免疫細胞を培養することを更に含む、又は
    前記修飾免疫細胞を回収することを更に含む、
    請求項１１に記載の方法。
  13. 前記免疫細胞が、哺乳類対象の血液試料から単離されたものであるか、若しくは単離されるものであり、若しくは前記免疫細胞が、癌を有する哺乳類対象の腫瘍から単離された、若しくは単離される腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）である、又は
    前記免疫細胞が、造血細胞、多能性幹細胞、骨髄系前駆細胞、リンパ系前駆細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、及びＮＫ細胞からなる群から選択される細胞である、又は
    前記修飾免疫細胞が、造血細胞、多能性幹細胞、骨髄系前駆細胞、リンパ系前駆細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、及びＮＫ細胞からなる群から選択される細胞である、又は
    前記免疫細胞が腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）である、又は
    前記免疫細胞がヒト免疫細胞である、又は
    前記免疫細胞若しくは修飾免疫細胞が組換えキメラ受容体を含む、又は
    前記免疫細胞若しくは修飾免疫細胞が組換えキメラ受容体を含み、前記組換えキメラ受容体がキメラ抗原受容体である、
    請求項１１又は１２に記載の方法。
  14. Ｃｂｌ－ｂ活性に関連する疾患又は病態の処置又は予防用医薬品の製造におけるＣｂｌ－ｂ阻害薬の使用であって、前記Ｃｂｌ－ｂ阻害薬が、請求項１～８のいずれか一項に記載の化合物である、使用。
  15. 癌を処置するための医薬品の製造におけるＣｂｌ－ｂ阻害薬の使用であって、前記Ｃｂｌ－ｂ阻害薬が、請求項１～８のいずれか一項に記載の化合物である、使用。
  16. Ｃｂｌ－ｂ活性に関連する疾患又は病態の処置又は予防における使用のためのＣｂｌ－ｂ阻害薬であって、請求項１～８のいずれか一項に記載の化合物である、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬。
  17. 癌の処置における使用のためのＣｂｌ－ｂ阻害薬であって、請求項１～８のいずれか一項に記載の化合物である、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬。
  18. 有効量の追加の治療剤と組み合わせて癌の処置に使用される、請求項１～８のいずれか一項に記載の化合物である、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬。
  19. 前記Ｃｂｌ－ｂ阻害薬と前記追加の治療剤とが、いずれの順序であれ連続的に投与される、又は
    前記Ｃｂｌ－ｂ阻害薬と前記追加の治療剤とが同時に投与される、
    請求項１８に記載のＣｂｌ－ｂ阻害薬。
  20. 前記追加の治療剤が、免疫チェックポイント阻害薬を含む、又は
    前記追加の治療剤が、抗新生物剤を含む、
    請求項１８又は１９に記載のＣｂｌ－ｂ阻害薬。
  21. 前記免疫チェックポイント阻害薬が、ＰＤ－１（ＣＤ２７９）、ＰＤ－Ｌ１（ＣＤ２７４）、ＣＴＬＡ－４（ＣＤ１２５）、ＬＡＧ３（ＣＤ２２３）、ＰＶＲ（ＣＤ１５５）、ＰＶＲＬ２（ＣＤ１１２）、ＰＶＲＬ３（ＣＤ１１３）、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３（ＣＤ３６６）、及びＶＩＳＴＡからなる群から選択される少なくとも１つの抑制性チェックポイント分子の拮抗薬である、又は
    （ｉ）前記免疫チェックポイント阻害薬が、ＰＤ－１（ＣＤ２７９）、ＰＤ－Ｌ１（ＣＤ２７４）、及びＣＴＬＡ－４（ＣＤ１５２）からなる群から選択される少なくとも１つの抑制性チェックポイント分子の拮抗薬である、又は
    前記（ｉ）の場合であって、前記少なくとも１つの抑制性チェックポイント分子がＰＤ－１を含み、任意選択で前記免疫チェックポイント阻害薬が、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、セミプリマブ、及びそのバイオシミラーからなる群から選択される、又は
    前記（ｉ）の場合であって、前記少なくとも１つの抑制性チェックポイント分子がＰＤ－Ｌ１を含み、任意選択で前記免疫チェックポイント阻害薬が、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、及びそのバイオシミラーからなる群から選択される、又は
    前記（ｉ）の場合であって、前記少なくとも１つの抑制性チェックポイント分子がＣＴＬＡ－４を含み、任意選択で前記免疫チェックポイント阻害薬が、イピリムマブ、トレメリムマブ、及びそのバイオシミラーからなる群から選択される、又は
    前記免疫チェックポイント阻害薬が抗体若しくはその抗原結合断片を含み、任意選択で前記抗体若しくは断片がヒト若しくはヒト化である、又は
    前記抗新生物剤が、細胞傷害性抗生物質、植物性アルカロイド、代謝拮抗薬、アルキル化剤、及び他の抗新生物剤からなる群のうちの１つに分類される、又は
    前記抗新生物剤が細胞傷害性抗生物質を含み、任意選択で前記細胞傷害性抗生物質が、イクサベピロン、マイトマイシン、プリカマイシン、ブレオマイシン、ピクサントロン、アムルビシン、バルルビシン、ピラルビシン、ミトキサントロン、イダルビシン、ゾルビシン、アクラルビシン、エピルビシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、及びダクチノマイシンからなる群から選択される、又は
    前記抗新生物剤が植物性アルカロイドを含み、任意選択で前記植物性アルカロイドが、トラベクテジン、カバジタキセル、パクリタキセルポリグルメックス、ドセタキセル、パクリタキセル、デメコルシン、テニポシド、エトポシド、ビンタフォリド、ビンフルニン、ビノレルビン、ビンデシン、ビンクリスチン、及びビンブラスチンからなる群から選択される、又は
    前記抗新生物剤が代謝拮抗薬を含み、任意選択で前記代謝拮抗薬が、ピリミジン類似体、プリン類似体、若しくは葉酸類似体であり、任意選択で前記代謝拮抗薬が、フロクスウリジン、トリフルリジン、テガフール、フルオロウラシル、デシタビン、アザシチジン、カペシタビン、ゲムシタビン、カルモフール、テガフール、フルオロウラシル、シタラビン、ネララビン、クロファラビン、フルダラビン、クラドリビン、チオグアニン、メルカプトプリン、プララトレキサート、ペメトレキセド、ラルチトレキセド、及びメトトレキサートからなる群から選択される、又は
    前記抗新生物剤がアルキル化剤を含み、任意選択で前記アルキル化剤が、ダカルバジン、テモゾロミド、ピポブロマン、ミトブロニトール、エトグルシド、ウラシルマスタード、ラニムスチン、ニムスチン、フォテムスチン、ストレプトゾシン、セムスチン、ロムスチン、カルムスチン、カルボコン、トリアジコン、チオテパ、マンノスルファン、トレオスルファン、ブスルファン、ベンダムスチン、プレドニムスチン、トロホスファミド、イホスファミド、メクロレタミン、メルファラン、クロラムブシル、及びシクロホスファミドからなる群から選択される、又は
    前記抗新生物剤が、白金化合物、プロテインキナーゼ阻害薬、及び他の薬剤からなる群から選択される他の抗新生物剤を含む、又は
    前記抗新生物剤が白金化合物を含み、任意選択で前記白金化合物が、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、サトラプラチン、及びポリプラチレンからなる群から選択される、又は
    前記抗新生物剤がプロテインキナーゼ阻害薬を含む、又は
    前記抗新生物剤が他の薬剤を含む、
    請求項２０に記載のＣｂｌ－ｂ阻害薬。
  22. 有効量の放射線治療と組み合わせて癌の処置に使用される、請求項１～８のいずれか一項に記載の化合物である、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬。
  23. 前記放射線治療が外部ビーム放射線治療である、又は
    前記放射線治療が内部放射線治療である、
    請求項２２に記載のＣｂｌ－ｂ阻害薬。
  24. 前記Ｃｂｌ－ｂ阻害薬が経腸投与によって投与され、任意選択で前記経腸投与が経口投与である、又は
    前記Ｃｂｌ－ｂ阻害薬が非経口投与によって投与され、任意選択で前記非経口投与が腫瘍内注射であるか、若しくは前記非経口投与が、静脈内、腹腔内、及び皮下からなる群から選択される経路によるものである、
    請求項１８～２３のいずれか一項に記載のＣｂｌ－ｂ阻害薬。
  25. 前記癌が血液癌である、又は
    前記癌が血液癌であり、前記血液癌が、リンパ腫、白血病、若しくは骨髄腫である、又は
    前記癌が非血液癌である、又は
    前記癌が非血液癌であり、前記非血液癌が、癌腫、肉腫、若しくは黒色腫である、
    請求項１８～２４のいずれか一項に記載のＣｂｌ－ｂ阻害薬。
  26. 拡大腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）集団を作製する方法であって、
    （ａ）請求項１８～２５のいずれか一項に記載のＣｂｌ－ｂ阻害薬により処置された個体からＴＩＬを含む生体試料を入手すること、及び
    （ｂ）少なくとも１つのＴ細胞成長因子を含む細胞培養培地で前記ＴＩＬを培養して拡大ＴＩＬ集団を作製すること
    を含む方法。
  27. 前記少なくとも１つのＴ細胞成長因子がＩＬ－２を含む、請求項２６に記載の方法。
  28. 前記細胞培養培地が、抗ＣＤ３抗体、又は抗ＣＤ３抗体と抗ＣＤ２８抗体との両方を更に含む、又は
    前記細胞培養培地が、前記Ｃｂｌ－ｂ阻害薬を更に含む、又は
    前記細胞培養培地が、照射フィーダー細胞を更に含む、
    請求項２６又は２７に記載の方法。
  29. 請求項２６～２８のいずれか一項に記載の方法によって作製された前記拡大ＴＩＬ集団と、生理学的に許容可能な緩衝液とを含む組成物。
  30. 拡大腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）集団を作製する方法であって、
    （ａ）有効量のＣｂｌ－ｂ阻害薬の投与を受けたことがあるか、又は受けているところである癌を有する個体からＴＩＬを含む生体試料を入手することであって、前記Ｃｂｌ－ｂ阻害薬が、請求項１～８のいずれか一項に記載の化合物であること；及び
    （ｂ）少なくとも１つのＴ細胞成長因子を含む細胞培養培地で前記ＴＩＬを培養して拡大ＴＩＬ集団を作製すること
    を含む方法。
  31. 前記哺乳類対象の前記癌が非血液癌であり、任意選択で前記非血液癌が、肉腫、癌腫、又は黒色腫である、及び／又は前記哺乳類対象がヒトである、請求項１０に記載の方法。
  32. 有効量のワクチンの投与と、有効量のＣｂｌ－ｂ阻害薬の投与とを含む免疫化することに使用される、前記Ｃｂｌ－ｂ阻害薬が請求項１～８のいずれか一項に記載の化合物である、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬。
  33. 前記免疫化することが、癌を処置することであって、
    前記ワクチンが治療用癌ワクチンである、
    請求項３２に記載のＣｂｌ－ｂ阻害薬。
  34. 前記Ｃｂｌ－ｂ阻害薬と前記癌ワクチンとが連続的に投与される、又は
    前記Ｃｂｌ－ｂ阻害薬と前記癌ワクチンとが同時に投与される、
    請求項３３に記載のＣｂｌ－ｂ阻害薬。
  35. 前記癌ワクチンが、少なくとも１つの腫瘍抗原と薬学的に許容可能な賦形剤とを含む免疫原性組成物であり、
    任意選択で前記少なくとも１つの腫瘍抗原が、少なくとも１つの合成ペプチド若しくは組換えタンパク質を含む、又は
    任意選択で前記免疫原性組成物がアジュバントを更に含む、又は
    任意選択で前記アジュバントが、アルミニウム塩、スクアレン、及びサポニンからなる群からの１つ以上の成分を含む、又は
    任意選択で前記免疫原性組成物が抗原提示細胞（ＡＰＣ）を更に含み、任意選択で前記ＡＰＣが樹状細胞であり、任意選択で前記癌ワクチンがPROVENGEである、又は
    任意選択で前記癌ワクチンが微生物ベクターを含み、任意選択で前記微生物ベクターがTICE-BCGである、又は
    任意選択で前記微生物ベクターが組換えウイルスベクター若しくは組換え細菌ベクターである、又は
    任意選択で前記癌ワクチンが、死滅癌細胞若しくは癌細胞ライセートを含む、
    請求項３３又は３４に記載のＣｂｌ－ｂ阻害薬。
  36. 有効量の腫瘍溶解性ウイルスの投与と、有効量のＣｂｌ－ｂ阻害薬の投与とを含む癌の治療に使用される、前記Ｃｂｌ－ｂ阻害薬が請求項１～８のいずれか一項に記載の化合物である、Ｃｂｌ－ｂ阻害薬。
  37. 前記Ｃｂｌ－ｂ阻害薬と前記腫瘍溶解性ウイルスとが連続的に投与される、又は
    前記Ｃｂｌ－ｂ阻害薬と前記腫瘍溶解性ウイルスとが同時に投与される、
    請求項３６に記載のＣｂｌ－ｂ阻害薬。
  38. 前記腫瘍溶解性ウイルスが、アデノウイルス、コクサッキーウイルス、エコーウイルス、鶏痘ウイルス、単純ヘルペスウイルス、マラバウイルス、麻疹ウイルス、粘液腫ウイルス、ニューカッスル病ウイルス、パルボウイルス、ポリオウイルス、レトロウイルス、レオウイルス、セネカバレーウイルス、セムリキ森林（Semiliki Forest）ウイルス、ワクシニアウイルス、及び水疱性口内炎ウイルスからなる群から選択されるウイルスである、又は
    前記腫瘍溶解性ウイルスが、少なくとも１つのウイルス遺伝子の機能的欠失、及び少なくとも１つのトランス遺伝子の挿入の一方若しくは両方を含む組換えウイルスである、又は
    任意選択で前記組換えウイルスが、少なくとも１つのウイルス遺伝子の機能的欠失及び少なくとも１つのトランス遺伝子の挿入を含む、又は
    任意選択で前記トランス遺伝子が、ヒト顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）をコードする、又は
    前記腫瘍溶解性ウイルスが、トランスジェニック血清型５型アデノウイルスである、又は
    前記腫瘍溶解性ウイルスがトランスジェニック単純ヘルペスウイルス１型（ＨＳＶ－１）であり、任意選択で前記トランスジェニックＨＳＶ－１が、タリモジーン・ラハーパレプベックである、又は
    前記腫瘍溶解性ウイルスがトランスジェニックワクシニアウイルスであり、任意選択で前記トランスジェニックワクシニアウイルスが、ペクサスチモジェン・デバシレプベック（pexastimogene devacirepvec）である、又は
    前記腫瘍溶解性ウイルスが非組換え腫瘍溶解性ウイルスであり、任意選択で前記非組換え腫瘍溶解性ウイルスが、エコーウイルス、ニューカッスル病ウイルス、パルボウイルス、レオウイルス、及びセネカバレーウイルスからなる群から選択されるウイルスである、
    請求項３６又は３７に記載のＣｂｌ－ｂ阻害薬。
  39. 前記癌が血液癌である、又は
    前記癌が血液癌であり、前記血液癌が、リンパ腫、白血病、又は骨髄腫である、又は
    前記癌が非血液癌である、又は
    前記癌が非血液癌であり、前記非血液癌が、癌腫、肉腫、又は黒色腫である、
    請求項３３～３８のいずれか一項に記載のＣｂｌ－ｂ阻害薬。
  40. 免疫細胞の活性化閾値を低下させる能力を有する有効量の薬剤の投与と、有効量の治療用癌ワクチンの投与又は有効量の腫瘍溶解性ウイルスの投与とを含む癌の治療に使用される、前記薬剤が請求項１～８のいずれか一項に記載の化合物である、薬剤。
  41. 前記薬剤が、免疫細胞の共刺激要件を低減する能力を更に有する、又は
    前記薬剤が、腫瘍免疫監視を促進する能力を更に有する、又は
    前記薬剤が小分子Ｃｂｌ－ｂ阻害薬である、
    請求項４０に記載の薬剤。
  42. 癌ワクチンと小分子Ｃｂｌ－ｂ阻害薬とを含む医薬組成物であって、前記Ｃｂｌ－ｂ阻害薬が請求項１～８のいずれか一項に記載の化合物であり、任意選択で、薬学的に許容可能な賦形剤を更に含む組成物。
  43. 腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を作製するのに使用するための、請求項９に記載の医薬組成物。
  44. Ｃｂｌ－ｂ活性に関連する疾患又は病態を治療又は予防するための医薬品の製造における、請求項１０に記載の免疫細胞の使用。
  45. 癌を治療するための医薬品の製造における、請求項１０に記載の免疫細胞の使用。
  46. Ｃｂｌ－ｂ活性に関連する疾患又は病態の治療又は予防に使用するための、請求項１０に記載の免疫細胞。
  47. 癌の治療に使用するための、請求項１０に記載の免疫細胞。
  48. Ｃｂｌ－ｂ活性に関連する疾患又は病態を治療又は予防するための医薬品の製造における、請求項１１に記載の修飾免疫細胞の使用。
  49. 癌を治療するための医薬品の製造における、請求項１１に記載の修飾免疫細胞の使用。
  50. Ｃｂｌ－ｂ活性に関連する疾患又は病態の治療又は予防に使用するための、請求項１１に記載の修飾免疫細胞。
  51. 癌の治療に使用するための、請求項１１に記載の修飾免疫細胞。
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