JP7617852B2 - タウワクチンの異種投与 - Google Patents

タウワクチンの異種投与 Download PDF

Info

Publication number
JP7617852B2
JP7617852B2 JP2021563196A JP2021563196A JP7617852B2 JP 7617852 B2 JP7617852 B2 JP 7617852B2 JP 2021563196 A JP2021563196 A JP 2021563196A JP 2021563196 A JP2021563196 A JP 2021563196A JP 7617852 B2 JP7617852 B2 JP 7617852B2
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
seq
tau
composition
administering
subject
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
JP2021563196A
Other languages
English (en)
Other versions
JP2022529529A5 (ja
JP2022529529A (ja
Inventor
アン ラムスバーグ，エリザベス
マルコ，ドナタ デ
チャクムカル，アニシュ
サダカ，シャーロット
ゴーズミット，ヤープ
ムース，アンドレアス
ボッシュ，マリア ピルグレン
ヴェリル，マリヤ ヴキチェヴィッチ
ヒックマン，デイビッド
ピオット，ニコラス
ラージ ギミレ，サロージ
Original Assignee
ヤンセン ファーマシューティカルズ，インコーポレーテッド
エーシー イミューン エス．エー．
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by ヤンセン ファーマシューティカルズ，インコーポレーテッド, エーシー イミューン エス．エー． filed Critical ヤンセン ファーマシューティカルズ，インコーポレーテッド
Publication of JP2022529529A publication Critical patent/JP2022529529A/ja
Publication of JP2022529529A5 publication Critical patent/JP2022529529A5/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP7617852B2 publication Critical patent/JP7617852B2/ja
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4711—Alzheimer's disease; Amyloid plaque core protein
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0007—Nervous system antigens; Prions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/6415—Toxins or lectins, e.g. clostridial toxins or Pseudomonas exotoxins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/646—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent the entire peptide or protein drug conjugate elicits an immune response, e.g. conjugate vaccines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6905—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion
    • A61K47/6911—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion the form being a liposome
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Synthetic bilayered vehicles, e.g. liposomes or liposomes with cholesterol as the only non-phosphatidyl surfactant
    • A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes or liposomes coated or grafted with polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55516—Proteins; Peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55561—CpG containing adjuvants; Oligonucleotide containing adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55572—Lipopolysaccharides; Lipid A; Monophosphoryl lipid A
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
    • A61K2039/575—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2 humoral response
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6018—Lipids, e.g. in lipopeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6031—Proteins
    • A61K2039/6068—Other bacterial proteins, e.g. OMP
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/62—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the link between antigen and carrier
    • A61K2039/627—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the link between antigen and carrier characterised by the linker

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Description

本発明は医学分野のものである。本発明は、特に、タウペプチドを含有するプライム用リポソーム性組成物および免疫原性担体とコンジュゲートさせたタウペプチドを含むブースト用コンジュゲート組成物を用いて、神経変性疾患、障害、または状態を患っている対象においてタウタンパク質に対する免疫応答を誘導する方法に関する。
アルツハイマー病（ＡＤ）は、世界中で推定４４００万人が冒されている進行性衰弱性神経変性疾患である（Alzheimers.net）。診療所において現在利用可能なＡＤ治療は臨床症状の進行を遅らせることを目的とするが、疾患の根底にある病原性プロセスを標的としない。残念ながら、これらの治療は最小限にしか有効でなく、したがって、追加の防止的および治療的手段を開発および試験する緊急の必要性が存在する。
アルツハイマー病の特徴的な病態は、凝集したアミロイドベータタンパク質を含む細胞外溶菌斑、および高リン酸化タウタンパク質の細胞内「もつれ」または凝集の蓄積である。これらのタンパク質の蓄積をもたらす分子学的事象の特徴づけは不十分である。アミロイドでは、アミロイド前駆体タンパク質の異常切断が、アミノ酸１～４２を含む、凝集する傾向のある断片の蓄積をもたらすと仮定されている。タウでは、キナーゼ、ホスファターゼのどちらか、または両方の調節不全が、タウの異常リン酸化をもたらすと仮定されている。タウは、高リン酸化された後、微小管と有効に結合してそれを安定化する能力を失い、その代わりに患部ニューロンの細胞質に蓄積される。未結合かつ高リン酸化のタウが最初のオリゴマー、その後により高次の凝集体を形成すると考えられ、その存在は、おそらくは正常な軸索輸送の中断を介して、それが形成されるニューロンの機能に負の影響を与えると推定される。
先進国では、アルツハイマー病または他の認知症性タウオパチーを診断された個体は、一般的にコリンエステラーゼ阻害剤（たとえばＡｒｉｃｅｐｔ（登録商標））またはメマンチン（たとえばＮａｍｅｎｄａ（商標））を用いて処置する。これらの薬物は、合理的に良好な耐用性を示すが、有効性が非常に控えめである。たとえば、Ａｒｉｃｅｐｔ（登録商標）は、処置した個体の約５０％において症状の悪化を６～１２カ月遅延させる。残りの処置は非薬理学的であり、患者の認知能力が低下するについて、その日々の日常課題の管理を可能にすることに焦点を当てている。
いくつかの公開された研究（Asuni AA et al,. J Neurosci. 2007 Aug 22;27(34):9115-29、Theunis C et al., PLoS One. 2013; 8(8): e72301、Kontsekova E et al., Alzheimers Res Ther. 2014 Aug 1;6(4):44）は、タウペプチドを含有する活性ワクチンが、マウスまたはラットにおいて抗タウ免疫応答を誘導することができる、げっ歯類の脳における病理学的タウ凝集体の蓄積を低下させることができる、およびアルツハイマー病の動物モデルにおいて認知低下の進行速度を低下させることができることを実証している。病理学的タウタンパク質に対する活性ワクチンは、アルツハイマー病を有するヒト患者において免疫原性であることが示されている（Novak P et al., Lancet Neurology 2017, 16:123-134）。国際公開２０１０／１１５８４３号パンフレットおよび国際公開２０１９／０８４１１８号パンフレットは、タンパク質タウの主要な病理学的ホスホエピトープを模倣する抗原性ホスホペプチド、ならびにアルツハイマー病を含めたタウオパチーの処置における治療的および診断的使用のための関連組成物を記載している。しかし、現在、タウ媒介性疾患の発症を防止するために認可された有効なワクチンは、依然として市場に存在しない。疾患が始まった後にその経過を妨害または遅らせるための有効な薬物も、市場に存在しない。したがって、これらの疾患を防止することができる新しい防止手段（たとえばワクチン）の同定が差し迫って必要とされている。
驚くべきことに、そのそれぞれがタウホスホペプチドを含むリポソーム組成物およびコンジュゲート組成物を用いた異種ワクチン接種がタウホスホペプチド特異的抗体のエピトープカバレッジ（epitope coverage）を増加させたことが、本発明において発見された。加えて、プライム用リポソーム組成物を用いた異種ワクチン接種がプライム用コンジュゲート組成物を用いたそれよりも強力な免疫応答を誘導したことが見出された。
一般的な一態様では、本発明は、それを必要としている対象、好ましくは神経変性障害を患っている対象において、タウタンパク質に対する免疫応答を誘導する、好ましくはリン酸化タウおよび濃縮対らせん状細線維（ｅＰＨＦ）のうちの少なくとも１つに対する抗体を誘導する方法であって、
（ｉ）対象に、
ａ．第１のタウホスホペプチドと、
ｂ．ヘルパーＴ細胞エピトープと、
ｃ．脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと、
ｄ．トール様受容体４リガンドを含有するアジュバントと
を含み、
タウホスホペプチドがリポソームの表面上に提示されている、免疫学的有効量のリポソームを含み、薬学的に許容される担体をさらに含む、プライム用組成物を投与することと、
（ｉｉ）対象に、第２のタウホスホペプチドと、リンカーを介してそれとコンジュゲートさせた免疫原性担体とを含み、式（Ｉ）の構造：
または式（ＩＩ）の構造：
［式中、
ｘは、０～１０、好ましくは２～６、最も好ましくは３の整数であり、
ｎは、３～１５、好ましくは３～１２の整数であり、
タウペプチドは、第２のタウホスホペプチドを表し、
担体は、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、破傷風トキソイド、ＣＲＭ１９７、および髄膜炎菌（N. meningitidis）由来の外膜タンパク質混合物（ＯＭＰ）、またはその誘導体からなる群から選択される免疫原性担体を表す。］
を有する、免疫学的有効量のコンジュゲートを含み、
薬学的に許容される担体をさらに含む、第１のブースト用組成物を投与することと
を含み、
第１のタウホスホペプチドおよび第２のタウホスホペプチドが、それぞれ独立して、配列番号１～配列番号３および配列番号５～配列番号１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、方法に関する。
特定の実施形態では、リポソームは、
ａ．配列番号２７～配列番号２９および配列番号３１～配列番号３８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する第１のタウホスホペプチドと、
ｂ．配列番号３９～配列番号４４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するヘルパーＴ細胞エピトープ、好ましくは、配列番号１３～配列番号１７からなる群から選択されるアミノ酸配列からなるヘルパーＴ細胞エピトープと、
ｃ．配列番号１８～配列番号２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列を有し、１つまたは複数のホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含み、リンカーを介して少なくとも１つのコレステロールと共有結合している、脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと
ｄ．モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬＡ）と
を含み、
コンジュゲートは、リンカーを介してＣＲＭ１９７とコンジュゲートさせた、配列番号２７～配列番号２９および配列番号３１～配列番号３８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する第２のタウホスホペプチドを含む。
特定の実施形態では、コンジュゲートは、以下の構造：
［式中、ｎは、３～７の整数である。］
を有する。
本発明の一実施形態によれば、それを必要としている対象においてリン酸化タウおよび濃縮対らせん状細線維（ｅＰＨＦ）のうちの少なくとも１つに対する抗体を誘導する方法は、
（ｉ）対象に、
ａ．配列番号２７～配列番号２９および配列番号３１～配列番号３８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する第１のタウホスホペプチドと、
ｂ．配列番号３９～配列番号４４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するヘルパーＴ細胞エピトープ、好ましくは、配列番号１３～配列番号１７からなる群から選択されるアミノ酸配列からなるヘルパーＴ細胞エピトープと、
ｃ．配列番号１８～配列番号２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列を有し、１つまたは複数のホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含み、リンカーを介して少なくとも１つのコレステロールと共有結合している、脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと
ｄ．モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬＡ）と
を含み、第１のタウホスホペプチドがリポソームの表面上に提示されている、免疫学的有効量のリポソームを含み、薬学的に許容される担体をさらに含む、プライム用組成物を投与することと、
（ｉｉ）対象に、第２のタウホスホペプチドと、リンカーを介してそれとコンジュゲートさせた免疫原性担体とを含み、以下の構造：
［式中、ｎは、３～７の整数である。］
を有する免疫学的有効量のコンジュゲートを含み、薬学的に許容される担体をさらに含む、第１のブースト用組成物を投与することと
を含む。
本出願の別の実施形態によれば、それを必要としている対象においてリン酸化タウおよび濃縮対らせん状細線維（ｅＰＨＦ）のうちの少なくとも１つに対する抗体を誘導する方法は、
（ｉ）対象に、
（１）配列番号２８のアミノ酸配列を有する第１のタウホスホペプチドと、
（２）モノホスホリルヘキサ－アシル脂質Ａ、３－脱アシルを含むトール様受容体４作用剤と、
（３）配列番号３９のアミノ酸配列を含むヘルパーＴ細胞エピトープと、
（４）配列番号１８のヌクレオチド配列を含む脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと、
（５）１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホリル－３’－ｒａｃ－グリセロール（ＤＭＰＧ）、およびコレステロールからなる群から選択される少なくとも１つの脂質と
を含み、第１のタウホスホペプチドがリポソームの表面上に提示されている、免疫学的有効量のリポソームを含み、薬学的に許容される担体をさらに含む、プライム用組成物を投与することと、
（ｉｉ）対象に、第２のタウホスホペプチドと、リンカーを介してそれとコンジュゲートさせた免疫原性担体とを含み、以下の構造：
［式中、ｎは、３～７の整数である。］
を有する免疫学的有効量のコンジュゲートを含み、薬学的に許容される担体をさらに含む、第１のブースト用組成物を投与することと
を含む。
特定の実施形態では、方法は、第１のブースト用組成物の初回投与後、第１のブースト用組成物を対象に少なくとも１回投与することをさらに含む。
特定の実施形態では、方法は、対象に免疫学的有効量のリポソームと薬学的に許容される担体とを含む第２のブースト用組成物を投与することをさらに含む。第２のブースト用組成物は、第１のブースト用組成物の初回投与の前または後に投与することができる。
特定の実施形態では、方法は、第２のブースト用組成物の初回投与後、第２のブースト用組成物を対象に少なくとも１回投与することをさらに含む。
本出願の一実施形態によれば、それを必要としている対象においてリン酸化タウおよび濃縮対らせん状細線維（ｅＰＨＦ）のうちの少なくとも１つに対する抗体を誘導する方法は、
（ｉ）対象に、
（１）配列番号２８のアミノ酸配列を有する第１のタウホスホペプチドと、
（２）モノホスホリルヘキサ－アシル脂質Ａ、３－脱アシルを含むトール様受容体４作用剤と、
（３）配列番号３９のアミノ酸配列を含むヘルパーＴ細胞エピトープと、
（４）配列番号１８のヌクレオチド配列を含む脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと、
（５）１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホリル－３’－ｒａｃ－グリセロール（ＤＭＰＧ）、およびコレステロールからなる群から選択される少なくとも１つの脂質と
を含み、第１のタウホスホペプチドがリポソームの表面上に提示されている、免疫学的有効量のリポソームを含み、薬学的に許容される担体をさらに含む、プライム用組成物を投与することと、
（ｉｉ）対象に、第２のタウホスホペプチドと、リンカーを介してそれとコンジュゲートさせた免疫原性担体とを含み、以下の構造：
［式中、ｎは、３～７の整数である。］
を有する免疫学的有効量のコンジュゲートを含み、薬学的に許容される担体をさらに含む、第１のブースト用組成物を投与することと、
（ｉｉｉ）対象に、第１のブースト用組成物、または免疫学的有効量のリポソームと薬学的に許容される担体とを含む第２のブースト用組成物を投与することと
を含む。
特定の実施形態では、ステップ（ｉｉ）はステップ（ｉｉｉ）の前に実施される。
他の実施形態では、ステップ（ｉｉ）はステップ（ｉｉｉ）の後に実施される。
特定の実施形態では、方法は、免疫応答をブーストするために、対象に第１のブースト用組成物を少なくとも２回投与することを含む。
特定の実施形態では、方法は、免疫応答をブーストするために、対象に第２のブースト用組成物を少なくとも１回投与することを含む。
特定の実施形態では、第１のブースト用組成物は、プライム用組成物が投与された約２７～３２日後に投与される。好ましくは、方法は、プライム用組成物が最初に投与された約８２～８７日後に第１のブースト用組成物を再投与することをさらに含み、任意選択で、プライム用組成物が投与された約１６７～１７２日後に第２のブースト用組成物を投与することをさらに含む。
特定の実施形態では、第１のブースト用組成物は、プライム用組成物が投与された約８２～８７日後に投与される。好ましくは、方法は、プライム用組成物が投与された約２７～３２日後に第２のブースト用組成物を投与することをさらに含み、任意選択で、プライム用組成物が投与された約１６７～１７２日後に第１のブースト用組成物を再投与することをさらに含む。
特定の実施形態では、免疫学的有効量のリポソームは、１用量あたり約２５ｎｍｏｌｅ～約７５０ｎｍｏｌｅの第１のタウホスホペプチド、たとえば１用量あたり約２９．７ｎｍｏｌｅ～約７４２．５ｎｍｏｌｅ、好ましくは１用量あたり約９０ｎｍｏｌｅ～約７１５ｎｍｏｌｅ、たとえば約８９．１ｎｍｏｌｅ～約７１２．８ｎｍｏｌｅ、または１用量あたり約９０ｎｍｏｌｅ～約５３５ｎｍｏｌｅ、たとえば１用量あたり約８９．１ｎｍｏｌｅ～約５３４．６ｎｍｏｌｅ、または１用量あたり約９０ｎｍｏｌｅ～約２７５ｎｍｏｌｅ、たとえば１用量あたり約８９．１ｎｍｏｌｅ～約２６７．３ｎｍｏｌｅの第１のタウホスホペプチドを含有し、第１のタウホスホペプチドはリポソームの表面上に提示されている。一実施形態では、有効量のリポソームは、１用量あたり約２６５～約２７５ｎｍｏｌｅ、たとえば１用量あたり約２６５、約２６６、約２６７、約２６８、約２６９、約２７０、約２７１、約２７２、約２７３、約２７４、もしくは約２７５ｎｍｏｌｅ、またはそれらの間の任意の値、たとえば１用量あたり約２６７．３ｎｍｏｌｅの量の第１のタウホスホペプチドを含む。別の実施形態では、免疫学的有効量のリポソームは、１用量あたり約５３０～約５４０ｎｍｏｌｅ、たとえば１用量あたり約５３０、約５３１、約５３２、約５３３、約５３４、約５３５、約５３６、約５３７、約５３８、約５３９、もしくは約５４０ｎｍｏｌｅ、またはそれらの間の任意の値、たとえば１用量あたり約５３４．６ｎｍｏｌｅの量の第１のタウホスホペプチドを含有する。別の実施形態では、有効量のリポソームは、１用量あたり約７１０～約７２０ｎｍｏｌｅ、たとえば１用量あたり約７１０、約７１１、約７１２、約７１３、約７１４、約７１５、約７１６、約７１７、約７１８、約７１９、もしくは約７２０ｎｍｏｌｅ、またはそれらの間の任意の値、たとえば１用量あたり約７１２．８ｎｍｏｌｅの量の第１のタウホスホペプチドを含む。
特定の実施形態では、第１のタウホスホペプチドは、配列番号２７～配列番号２９および配列番号３１～配列番号３８からなる群から選択されるアミノ酸配列からなり、好ましくは配列番号２８のアミノ酸配列からなる。一実施形態では、免疫学的有効量のリポソームは、配列番号２８のアミノ酸配列からなるテトラパルミトイル化タウホスホペプチドを含有し、テトラパルミトイル化タウホスホペプチドは、リポソームの表面上に提示されており、１用量あたり約２９．７ｎｍｏｌｅ～約７４２．５ｎｍｏｌｅに対応する１用量あたり約１００μｇ～約２５００μｇ、好ましくは１用量あたり約８９．１ｎｍｏｌｅ～約７１２．８ｎｍｏｌｅに対応する１用量あたり約３００μｇ～約２４００μｇ、たとえば１用量あたり約８９．１ｎｍｏｌｅ、約２６７．３ｎｍｏｌｅ、約５３４．６ｎｍｏｌｅ、または約７１２．８ｎｍｏｌｅに対応する１用量あたり約３００μｇ、約９００μｇ、約１８００μｇ、または約２４００μｇの量で投与される。
特定の実施形態では、免疫学的有効量のリポソームは、１用量あたり約２ｎｍｏｌｅ～約１１０ｎｍｏｌｅ、たとえば１用量あたり約４．０２ｎｍｏｌｅ～約１００．４４ｎｍｏｌｅ、または１用量あたり約４ｎｍｏｌｅ～約７５ｎｍｏｌｅ、たとえば１用量あたり約４．０２ｎｍｏｌｅ～約７２．３２ｎｍｏｌｅ、または１用量あたり約１０ｎｍｏｌｅ～約１０５ｎｍｏｌｅ、たとえば１用量あたり約１２．０６ｎｍｏｌｅ～約１００．４４ｎｍｏｌｅ、または１用量あたり約７０～約１０５ｎｍｏｌｅ、たとえば１用量あたり約７２．３２ｎｍｏｌｅ～約１００．４４ｎｍｏｌｅの量のヘルパーＴ細胞エピトープを含む。特定の実施形態では、有効量のリポソームは、約２ｎｍｏｌｅ～約１１０ｎｍｏｌｅ、たとえば約１２．０６ｎｍｏｌｅ～約１００．４４ｎｍｏｌｅの量の、好ましくは配列番号１３のアミノ酸配列からなるＴ５０ヘルパーＴ細胞エピトープであるヘルパーＴ細胞エピトープを含む。
本発明はまた、神経変性障害を患っている対象においてタウタンパク質に対する免疫応答の誘導において使用するための、またはそれを必要としている対象において神経変性疾患もしくは障害の処置もしくは防止において使用するための、本発明のリポソームおよびコンジュゲートのキットなどのワクチン組合せ物に関する。
本発明はまた、神経変性障害を患っている対象においてタウタンパク質に対する免疫応答を誘導するための、またはそれを必要としている対象において神経変性疾患もしくは障害を処置もしくは防止するための医薬の製造における、本発明のリポソームおよびコンジュゲートのワクチン組合せ物の使用に関する。
本発明のさらなる態様、特長、および利点は、以下の発明を実施するための形態および特許請求の範囲を読むことによってより良好に理解されるであろう。
前述の概要および以下の本出願の好ましい実施形態の詳述は、添付の図面と併せて読んだ際により良好に理解されるであろう。しかし、本出願は図面中に示すこれらの詳細な実施形態に限定されないことを理解されたい。
図１Ａ～１Ｃは、配列番号２のホスホペプチドおよび配列番号４のペプチドを網羅する短い８量体重複ペプチドに関するエピトープマッピングＥＬＩＳＡによって決定した、同種Ａ－Ａ（図１Ａ）もしくはＢ－Ｂ（図１Ｂ）ワクチン接種、または異種Ａ－Ｂ（図１Ｃ）ワクチン接種によって誘導された抗体のエピトープ認識プロファイルを示す図である。 図２は、配列番号２のホスホペプチドおよび配列番号４のペプチドを網羅する短い８量体重複ペプチドに関するエピトープマッピングＥＬＩＳＡによって決定した、異種Ａ－Ｂ－Ｂワクチン接種後に誘導された抗体のエピトープ認識プロファイル（１６２日目）を異種Ａ－Ｂ－Ｂ－Ａワクチン接種後に誘導されたもの（１９０日目）と比較して示す図であり、Ａは、アジュバントとしてのＴＬＲ４リガンドおよび脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと、配列番号２８に対応する、１８００ｕｇ／用量の配列番号２の酢酸テトラパルミトイル化（acetate tetrapalmitoylated）リン酸化タウペプチドと、カプセル封入されたＴ５０ヘルパーＴ細胞エピトープとを含むリポソームワクチンであり、Ｂは、リンカーを介して配列番号２のリン酸化タウペプチドとコンジュゲートさせた１５ｕｇ／用量のＣＲＭ１９７を含有するコンジュゲートワクチンであり、コンジュゲートワクチンはミョウバンおよびＣｐＧオリゴヌクレオチドと共に同時注射した。 図３は、異種ワクチン接種（Ａ－Ｂ－Ｂ－Ａ、Ａ－Ａ－Ｂ－Ｂ、もしくはＢ－Ｂ－Ａ－Ａ、ここで、Ａは、アジュバントとしてのＴＬＲ４リガンドおよび脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと、１８００ｕｇ／用量の配列番号２の酢酸テトラパルミトイル化リン酸化タウペプチドと、カプセル封入されたＴ５０ヘルパーＴ細胞エピトープとを含むリポソームワクチンであり、Ｂは、リンカーを介して配列番号２のリン酸化タウペプチドとコンジュゲートさせた１５ｕｇ／用量のＣＲＭ１９７を含有するコンジュゲートワクチンであり、コンジュゲートワクチンはミョウバンおよびＣｐＧオリゴヌクレオチドと共に同時注射した）、または同種ワクチン接種（Ａ－Ａ－Ａ－Ａ）後の１９０日目にアルツハイマー病患者の死後脳から単離した濃縮対らせん状細線維（ｅＰＨＦ）に特異的なＩｇＧ力価を示す図であり、Ａ－Ａ－Ａ－Ａに対する倍率変化がプロットされている。 図４Ａは、データがエンドポイント力価（ＥＰＴ）として提示されている、ＥＬＩＳＡによって測定した、同種（Ａ－Ａ－Ａ）ならびに異種（Ａ－Ａ－ＢおよびＡ－Ｂ－Ｂ）免疫化レジメン後の１０６日目のアカゲザルにおける配列番号２の配列を有するホスホペプチド（Ｔ３．５）に特異的なＩｇＧ力価を示す図であり、図４Ｂは、任意単位（ＡＵ）／ｍＬとして提示されている、同種（Ａ－Ａ－Ａ）ならびに異種（Ａ－Ａ－ＢおよびＡ－Ｂ－Ｂ）免疫化レジメン後の１０６日目のアカゲザルにおけるｅＰＨＦに特異的なＩｇＧ力価を示す図である。 図５は、限定的コーティング条件でのｅＰＨＦとの結合によって測定した、同種Ａ－Ａ－Ａ－Ａレジメンによって誘導されたものと比較した、異種レジメンＡ－Ｂ－Ｂ－Ａ（図５Ａ）およびＡ－Ａ－Ｂ－Ｂ（図５Ｂ）によって誘導されたｅＰＨＦ特異的ＩｇＧ抗体の品質を示す図であり、ＡＵ／ｍＬで表され、ｅＰＨＦの限定的コーティングに関してＭＳＤによって測定したｅＰＨＦ特異的ＩｇＧ力価がプロットされている。 図６は、異種ワクチン接種（Ａ－Ｂ－Ｂ－Ａ、Ａ－Ａ－Ｂ－Ｂ、またはＢ－Ｂ－Ａ－Ａ、ここで、Ａは、アジュバントとしてのＴＬＲ４リガンドおよび脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと、１８００μｇ／用量の配列番号２の酢酸テトラパルミトイル化リン酸化タウペプチドと、カプセル封入されたＴ５０ヘルパーＴ細胞エピトープとを含むリポソームワクチンであり、Ｂは、リンカーを介して配列番号２のリン酸化タウペプチドとコンジュゲートさせた１５μｇ／用量のＣＲＭ１９７を含有し、ミョウバンおよびＣｐＧオリゴヌクレオチドと共に同時注射したコンジュゲートワクチンである）に従った最初の免疫化後の１８３日目のアカゲザルの脳脊髄液（ＣＳＦ）における、Ｎ末端をビオチン標識した配列番号２の配列を有するホスホペプチドに特異的なＩｇＧ力価を示す図であり、同種ワクチン接種Ａ－Ａ－Ａ－Ａに対する倍率変化がプロットされている。 図７は、ＥＬＩＳＡによって測定した、同種（Ａ－Ａ－Ａ－Ａ）ならびに異種（Ａ－Ａ－Ｂ－ＢおよびＡ－Ｂ－Ｂ－Ａ）免疫化に従った最初の免疫化後の１９０日目のアカゲザルにおける、配列番号２の配列を有するホスホペプチド（Ｔ３．５）に特異的なＩｇＧ力価のＴ５０ペプチドに特異的なＩｇＧ力価に対する比を示す図である。統計分析はマン－ホイットニー検定を使用して行った。（＊＊ｐ＜０．００１）。
様々な刊行物、論文、および特許が背景技術および明細書全体にわたって引用または記載されており、これらの参考文献のそれぞれが、その全体で本明細書中に参考として組み込まれている。本明細書中に含められた文書、行為、材料、装置、論文などの議論は、本発明のコンテクストを提供する目的のものである。そのような議論は、これらの事項の任意のものまたは全体が、開示または特許請求されている任意の発明に関して従来技術の一部を形成することを承認するものではない。
別段に定義しない限りは、本明細書中で使用するすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する分野の技術者に一般的に理解されるものと同じ意味を有する。そうでない場合は、本明細書中で使用する特定の用語は本明細書中に記載する意味を有する。
本明細書および添付の特許請求の範囲中で使用する単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、および「その（ｔｈ）」には、コンテクストにより明らかにそうでないと指示されない限り、複数形の指示対象が含まれることに注意する必要がある。
別段に記述しない限りは、本明細書中に記載の濃度または濃度範囲などの任意の数値は、すべての場合において用語「約」によって修飾されるとして理解されるものである。したがって、数値には、典型的には言及した値の±１０％が含まれる。たとえば、１ｍｇ／ｍＬの濃度には０．９ｍｇ／ｍＬ～１．１ｍｇ／ｍＬが含まれる。同様に、１％～１０％（ｗ／ｖ）の濃度範囲には０．９％（ｗ／ｖ）～１１％（ｗ／ｖ）が含まれる。本明細書中で使用する数値範囲の使用は、コンテクストにより明らかにそうでないと指示されない限り、すべての可能な部分範囲、その範囲内にあるすべての個々の数値（そのような範囲内にある整数が含まれる）、および値の分数が明白に含まれる。
別段に指定しない限りは、一連の要素に先行する用語「少なくとも」とは、その一連にあるすべての要素をいうと理解されるものである。当業者は、本明細書中に記載の本発明の具体的な実施形態の多くの均等物を理解する、または日常的な実験以上のものを使用せずにそれを確認できるであろう。そのような均等物は本発明によって包含されることを意図する。
本明細書中で使用する用語「含むこと」、「含む」、「含まれること」、「含まれる」、「有すること」、「有する」、「含有すること」、もしくは「含有する」、またはその任意の他の変形は、記述した整数または整数群の包含を暗示するが、任意の他の整数または整数群の排除を暗示せず、また、非排他的または開放型であることを意図すると理解されるものとする。たとえば、要素のリストを含む組成物、混合物、プロセス、方法、論文、または器具は、必ずしもそれらの要素のみに限定されず、明白に列挙されていない、またはそのような組成物、混合物、プロセス、方法、論文、もしくは器具に固有でない他の要素も含まれることができる。さらに、反対のことが明白に記述されていない限りは、「または」とは、排他的なまたはではなく、包括的なまたはをいう。たとえば、条件１または２は、以下のうちの任意の１つによって満たされる：１が真である（または存在する）かつ２が偽である（または存在しない）、１が偽である（または存在しない）かつ２が真である（または存在する）、および１および２がどちらも真である（または存在する）。
当業者には理解されるであろうことに、好ましい発明の構成要素の寸法または特徴に言及する場合に本明細書中で使用する用語「約」、「約」、「一般に」、「実質的に」、および同様の用語は、記載した寸法／特徴が厳密な境界またはパラメーターではなく、機能的に同じまたは同様である、それからの軽微な変形を排除しないことを示すことを理解されたい。最小限でも、数値パラメーターが含まれるそのような言及には、当分野において認められている数学的および工業的原理（たとえば、丸め、測定誤差または他の系統誤差、製作公差など）を使用して、最小有効数字を変化させない変形が含まれるであろう。
本出願の実施形態によれば、有効量のリポソームは、１用量あたり約２５ｎｍｏｌｅ～約７５０ｎｍｏｌｅ、たとえば１用量あたり約２９．７ｎｍｏｌｅ～約７４２．５ｎｍｏｌｅの量のタウホスホペプチド、好ましくは１用量あたり約９０ｎｍｏｌｅ～約７１５ｎｍｏｌｅ、たとえば約８９．１ｎｍｏｌｅ～約７１２．８ｎｍｏｌｅ、または１用量あたり約９０ｎｍｏｌｅ～約５３５ｎｍｏｌｅ、たとえば１用量あたり約８９．１ｎｍｏｌｅ～約５３４．６ｎｍｏｌｅ、または１用量あたり約９０ｎｍｏｌｅ～約２７５ｎｍｏｌｅ、たとえば１用量あたり約８９．１ｎｍｏｌｅ～約２６７．３ｎｍｏｌｅの、配列番号１～３または５～１２のうちの１つのアミノ酸配列を含むタウホスホペプチドを含む。好ましくは、タウホスホペプチドは配列番号２７～配列番号３８のうちの１つのアミノ酸配列からなる。より好ましくは、タウホスホペプチドは配列番号２８のアミノ酸配列からなる。一実施形態では、有効量のリポソームは、トール様受容体４作用剤と、約２９．７ｎｍｏｌｅ～約７４２．５ｎｍｏｌｅ、好ましくは約８９．１ｎｍｏｌｅ～約７１２．８ｎｍｏｌｅに対応する１用量あたり約１００μｇ～約２５００μｇ、好ましくは約３００μｇ～約２４００μｇの量の配列番号２８のアミノ酸配列からなるテトラパルミトイル化タウホスホペプチドとを含む。
本出願の実施形態によれば、有効量のリポソームは、１用量あたり約１００μｇ～約２５００μｇ、約３００μｇ～約２４００μｇ、約３００μｇ～約１８００μｇ、または約３００μｇ～約９００μｇ、たとえば１用量あたり約１００μｇ、約１５０μｇ、約２００μｇ、約２５０μｇ、約３００μｇ、約４００μｇ、約５００μｇ、約６００μｇ、約７００μｇ、約８００μｇ、約９００μｇ、約１０００μｇ、約１１００μｇ、約１２００μｇ、約１３００μｇ、約１４００μｇ、約１５００μｇ、約１６００μｇ、約１７００μｇ、約１８００μｇ、約１９００μｇ、約２０００μｇ、約２１００μｇ、約２２００μｇ、約２３００μｇ、約２４００μｇ、もしくは約２５００μｇ、またはそれらの間の任意の値の量のタウホスホペプチド、たとえば配列番号１～３または５～１２のうちの１つのアミノ酸配列を含むタウホスホペプチド、好ましくは配列番号２７～配列番号３８のうちの１つ、より好ましくは配列番号２８のアミノ酸配列からなるタウホスホペプチドを含む。
特定の実施形態では、有効量のリポソームは、１用量あたり約３０μｇ～約９００μｇ、好ましくは約１００μｇ～約５８５μｇの量のトール様受容体４作用剤を含む。特定の実施形態では、有効量のリポソームは、１用量あたり約３０μｇ、約５０μｇ、約１００μｇ、約１５０μｇ、約２００μｇ、約２５０μｇ、約３００μｇ、約３３０μｇ、約３６０μｇ、約３９０μｇ、約４２０μｇ、約４５０μｇ、約４８０μｇ、約５００μｇ、約５２０μｇ、約５４０μｇ、約５６０μｇ、約５８０μｇ、約６００μｇ、約７００μｇ、約８００μｇ、または約９００μｇの量のトール様受容体作用剤のモノホスホリルヘキサ－アシル脂質Ａ、３－脱アシルを含む。
特定の実施形態では、有効量のリポソームは、１用量あたり約５０μｇ～約１２５０μｇ、好ましくは約１５０μｇ～約８００μｇの量の脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む。たとえば、有効量のリポソームは、１用量あたり約５０μｇ、約１００μｇ、約１５０μｇ、約２００μｇ、約２５０μｇ、約３００μｇ、約３５０μｇ、約４００μｇ、約４５０μｇ、約５００μｇ、約５５０μｇ、約６００μｇ、約６５０μｇ、約７００μｇ、約７５０μｇ、約８００μｇ、約８５０μｇ、約９００μｇ、約９５０μｇ、約１０００μｇ、約１０５０μｇ、約１１００μｇ、約１２００μｇ、または約１２５０μｇの量の脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドを含むことができる。特定の実施形態では、有効量のリポソームは、１用量あたり約５０μｇ～約１２５０μｇ、好ましくは約１５０μｇ～約８００μｇの量の配列番号１８のヌクレオチド配列からなるＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む。
本出願の実施形態によれば、タウホスホペプチドはリポソームの表面上に提示されている。
本明細書中で使用するコンジュゲートの免疫学的有効量は、コンジュゲート中の第２のタウホスホペプチドとコンジュゲートさせた免疫原性担体の量によって定義される。たとえば、１５μｇのコンジュゲートとは、タウホスホペプチドとコンジュゲートさせた１５μｇの免疫原性担体を含有するコンジュゲート組成物をいう。１つまたは複数のタウホスホペプチドは１つの免疫原性担体とコンジュゲートさせることができる。
本出願の実施形態によれば、コンジュゲートの有効量は、臨床経験などの、本開示に鑑みて当分野で知られている方法を使用して決定することができる。
タウホスホペプチドは配列番号１～３または５～１２のうちの１つのアミノ酸配列を含む。好ましくは、リポソーム上に存在するタウホスホペプチドは、配列番号２７～配列番号２９および配列番号３１～配列番号３８のうちの１つのアミノ酸配列からなる。より好ましくは、リポソーム上に存在するタウホスホペプチドは、配列番号２８のアミノ酸配列からなる。好ましくは、コンジュゲート中に存在するタウホスホペプチドは、配列番号１～３または５～１２のうちの１つ、好ましくは配列番号２のアミノ酸配列からなる。
微小管関連タンパク質タウ、ＭＡＰＴ、神経原線維のもつれタンパク質、対らせん状細線維－タウ、ＰＨＦ－タウ、ＭＡＰＴＬ、ＭＴＢＴ１としても知られる、本明細書中で使用する用語「タウ」または「タウタンパク質」、複数のアイソフォームを有する、豊富な中枢および末梢神経系のタンパク質をいう。ヒト中枢神経系（ＣＮＳ）では、選択的スプライシングが原因で、３５２～４４１個のアミノ酸の長さの大きさの範囲の、６個の主要なタウアイソフォームが存在する（Hanger et al., Trends Mol Med. 15:112-9, 2009）。タウの例には、それだけには限定されないが、４つの反復および２つの挿入を有する、４４１個のアミノ酸の最も長いタウアイソフォーム（４Ｒ２Ｎ）、ならびに３つの反復を有し、挿入なしの、３５２個のアミノ酸の長さの最も短い（胎児）アイソフォーム（３Ｒ０Ｎ）などの、ＣＮＳ中のタウアイソフォームが含まれる。また、タウの例には、３００個の追加の残基（エクソン４ａ）を含有する、末梢神経中で発現される「ビッグタウ（big tau）」アイソフォームも含まれる。Friedhoff et al., Biochimica et Biophysica Acta 1502 (2000) 122-132。タウの例には、６７６２個のヌクレオチドの長さのｍＲＮＡ転写物（ＮＭ＿０１６８３５．４）によってコードされている、７５８個のアミノ酸の長さのタンパク質であるヒトビッグタウ、またはそのアイソフォームが含まれる。例示したヒトビッグタウのアミノ酸配列はＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿０５８５１９．３に表されている。本明細書中で使用する用語「タウ」には、（カニクイ（cynomolgous）ザル（Macaca Fascicularis））または（チンパンジー（Pan troglodytes））などのヒト以外の種からのタウの相同体が含まれる。本明細書中で使用する用語「タウ」には、完全長野生型タウの突然変異、たとえば、点突然変異、断片、挿入、欠失、およびスプライス変異体を含むタンパク質が含まれる。また、用語「タウ」には、タウアミノ酸配列の翻訳後修飾も包含される。翻訳後修飾には、それだけには限定されないがリン酸化が含まれる。
本明細書中で使用する用語「リン酸化タウ」とは、少なくとも１つのリン酸化残基を含有するタウタンパク質またはその断片もしくはペプチドをいう。
本明細書中で使用する用語「濃縮対らせん状細線維」または「ｅＰＨＦ」とは、対らせん状細線維においてタウタンパク質が濃縮されている調製物をいう。ＰＨＦはアルツハイマー病の神経原線維のもつれの顕著な成分である。
本明細書中で使用する用語「ペプチド」または「ポリペプチド」とは、ペプチド結合によって連結された、アミノ酸残基から構成されるポリマー、関連する天然に存在する構造的変異体、およびその合成の天然に存在しない類似体をいう。この用語は、任意の大きさ、構造、または機能のペプチドをいう。典型的には、ペプチドは少なくとも３個のアミノ酸の長さである。ペプチドは、天然に存在する、組換え、もしくは合成のもの、またはその任意の組合せであることができる。合成ペプチドは、たとえば自動ポリペプチド合成機を使用して合成することができる。タウペプチドの例には、約５～約３０個のアミノ酸の長さ、好ましくは約１０～約２５個のアミノ酸の長さ、より好ましくは約１６～約２１個のアミノ酸の長さのタウタンパク質の任意のペプチドが含まれる。本開示では、ペプチドをＮからＣ末端に標準の３文字または１文字のアミノ酸略記を使用して列挙し、リン酸残基を「ｐ」で示す。本発明において有用なタウペプチドの例には、それだけには限定されないが、配列番号１～１２のいずれかのアミノ酸配列を含むタウペプチド、または配列番号１～１２のいずれかのアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一であるアミノ酸配列を有するタウペプチドが含まれる。
本明細書中で使用する用語「ホスホペプチド」または「ホスホエピトープ」とは、１つまたは複数のアミノ酸残基でリン酸化されたペプチドをいう。タウホスホペプチドの例には、１つまたは複数のリン酸化されたアミノ酸残基を含む任意のタウペプチドが含まれる。本発明において有用なタウホスホペプチドの例には、それだけには限定されないが、配列番号１～３もしくは５～１２のいずれかのアミノ酸配列を含むタウホスホペプチド、または配列番号１～３もしくは５～１２のいずれかのアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一であるアミノ酸配列を有するタウホスホペプチドが含まれる。
本発明のタウペプチドは、固相ペプチド合成または組換え発現系によって合成することができる。自動ペプチド合成機は、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（カリフォルニア州Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ）などの数々の供給業者から販売されている。組換え発現系には、大腸菌（E. coli）などの細菌、酵母、昆虫細胞、または哺乳動物細胞などを含むことができる。組換え発現のための手順は、Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (C.S.H.P. Press, NY 2d ed., 1989)によって記載されている。
タウはヒト「自己」タンパク質である。このことは、原則的に、タウに特異的な受容体を保有するすべてのリンパ球は、発生の間に消失している（中枢性寛容）、または末梢性寛容機構によって不応性とされているはずであることを意味する。この問題は、自己または「変更された自己」タンパク質（たとえば腫瘍抗原）に対するワクチンの開発における顕著な障害であることが判明している。
抗原（自己または感染性）に対する高品質の抗体の生成は、抗体を産生するＢリンパ球だけでなく、ＣＤ４＋Ｔ「ヘルパー」リンパ球の作用も必要とする。ＣＤ４＋Ｔ細胞は重大な生存および成熟シグナルをＢリンパ球に提供し、ＣＤ４＋Ｔ細胞欠乏動物は免疫抑制が深刻である。また、ＣＤ４＋Ｔ細胞は寛容機構の影響を受けやすく、強力な抗自己（たとえば抗タウ）抗体応答を生じることのさらなる障害は、タウ反応性ＣＤ４＋Ｔ細胞がヒト／動物レパートリーにおいて希少または存在しない可能性も高いことである。
理論に束縛されることを望まず、いかなる様式でも本発明の範囲を限定しないが、この問題は本発明のワクチン組成物によって回避されると考えられている。
一実施形態では、ＨＬＡ ＤＲ（ヒト白血球抗原－抗原Ｄ関連）分子のほとんどまたは全部と結合することができるＴ細胞エピトープも含む、タウペプチドを含むリポソームを生成する。その後、Ｔ細胞エピトープはＣＤ４＋Ｔ細胞を活性化させることができ、必須の成熟および生存シグナルをタウ特異的Ｂ細胞に提供する。別の実施形態では、タウペプチドと担体タンパク質とのコンジュゲートを生成し、これは強力なヘルパーＴ細胞応答を生じる。本実施形態では、担体に特異的なＴ細胞が生存および成熟シグナルを自己反応性Ｂ細胞に提供する、「非連結認識」を使用する。したがって、タウ特異的Ｂ細胞は、親和性成熟、免疫グロブリンクラススイッチを始動させ、長期的な記憶プールを確立するために重大なシグナルを受け取る。タウリポソームおよびタウコンジュゲートを使用して、同種または異種の免疫化スキームにおいて、プライムおよび／またはブーストにおいてリポソームまたはコンジュゲートのいずれかを用いて、タウ抗原に対する高品質な抗体を生成することができる。
リポソーム
リポソームは、本出願において、プライム用組成物、および任意選択でブースト用組成物に使用される。本発明の方法において有用なリポソームは、
タウペプチド、好ましくはタウホスホペプチドであるタウペプチドと、
ヘルパーＴ細胞エピトープと
を含み、タウペプチドはリポソームの表面上に提示されている。
本発明の実施形態によるリポソームは、本明細書中、「改善リポソーム」、「改善リポソームワクチン」または「本発明の実施形態によるリポソームワクチン」または「タウリポソーム」または「最適化リポソームワクチン」または「第二世代リポソーム」とも呼ばれる。
本明細書中で使用する用語「リポソーム」とは、一般に、高い脂質含有量を有する材料、たとえば、リン脂質、コレステロールから作られる脂質小胞をいう。これらの小胞の脂質は、一般に、脂質二重層の形態で組織化されている。脂質二重層は、一般に、脂質二重層の複数のタマネギ様の殻の間に散在しており多重膜脂質小胞（ＭＬＶ）を形成しているか、または非晶質中心腔内に含有されている、体積をカプセル封入している。非晶質中心腔を有する脂質小胞は単層脂質小胞である、すなわち、腔を取り囲む単一の末梢二重層を有するものである。大型単層膜ベシクル（ＬＵＶ）は、一般に、１００ｎｍ～数マイクロメートル、たとえば１００～２００ｎｍ以上の直径を有する一方で、小型単層脂質小胞（ＳＵＶ）は、一般に、１００ｎｍ未満、たとえば２０～１００ｎｍ、典型的には１５～３０ｎｍの直径を有する。
特定の実施形態によれば、リポソームは１つまたは複数のタウペプチドを含む。特定の実施形態によれば、リポソーム中のタウペプチドは同じまたは異なり得る。
当業者に知られている任意の適切なタウペプチドを、本開示に鑑みて本発明において使用することができる。特定の実施形態によれば、タウペプチドのうちの１つまたは複数は、配列番号１～１２のうちの１つのアミノ酸配列を含む。他の実施形態では、タウペプチドのうちの１つまたは複数は、配列番号１～１２のうちの１つのアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一であるアミノ酸配列を含み、ここで、アミノ酸残基はどれもリン酸化されていない、または１つもしくは複数のアミノ酸残基がリン酸化されている。
特定の実施形態によれば、タウペプチドのうちの１つまたは複数はタウホスホペプチドである。特定の実施形態によれば、１つまたは複数のタウホスホペプチドは、配列番号１～３もしくは５～１２のうちの１つのアミノ酸配列、または配列番号１～３もしくは５～１２のうちの１つのアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一であるアミノ酸配列を含み、ここで、示したアミノ酸残基のうちの１つまたは複数はリン酸化されている。好ましくは、タウホスホペプチドは配列番号１～３のうちの１つのアミノ酸配列を含む。タウペプチドはＣ末端がアミド化され得る。
本出願の実施形態によれば、タウペプチドはリポソームの表面上に提示されている。タウペプチド、好ましくはタウホスホペプチドは、本開示に鑑みて当分野で知られている方法を使用して、リポソームの表面上に提示させることができる。たとえば、その内容が本明細書中に参考として組み込まれている米国特許第８，６４７，６３１号明細書および第９，６８７，４４７号明細書中の関連開示を参照されたい。特定の実施形態によれば、ホスホペプチドを含めた１つまたは複数のタウペプチドは、タウペプチドがリポソームの表面上に提示されることを可能にする、パルミトイル化またはドデシル修飾などの１つまたは複数の修飾をさらに含む。修飾を容易にするために、Ｌｙｓ、Ｃｙｓ、または場合によってはＳｅｒもしくはＴｈｒなどの追加のアミノ酸残基をタウペプチドに付加することができる。脂質アンカーの位置が、ペプチド配列の様々なコンホメーションを誘導することが報告されている（Hickman et al., J. Biol. Chem. vol. 286, NO. 16, pp. 13966-13976, April 22, 2011）。理論に束縛されることを望まないが、両末端に疎水性部分を付加することが、タウペプチドの病理学的ベータシートコンホメーションを増加させ得ると考えられている。したがって、１つまたは複数のタウペプチドは、両末端に疎水性部分をさらに含む。修飾されたタウペプチドはＣ末端がアミド化され得る。好ましくは、リポソームの表面上に提示されたタウペプチドは、配列番号２７～配列番号３８のうちの１つアミノ酸配列からなる。より好ましくは、ペプチドは、配列番号２７～配列番号２９または配列番号３１～配列番号３８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するタウホスホペプチドである。
本明細書中で使用する用語「ヘルパーＴ細胞エピトープ」とは、ヘルパーＴ細胞による認識が可能なエピトープを含むポリペプチドをいう。ヘルパーＴ細胞エピトープの例には、それだけには限定されないが、破傷風トキソイド（たとえば、Ｐ２およびＰ３０エピトープ、それぞれＴ２およびＴ３０とも呼ばれる）、Ｂ型肝炎表面抗原、コレラ毒素Ｂ、トキソイド、ジフテリアトキソイド、麻疹ウイルスＦタンパク質、トラコーマクラミジア（Chlamydia trachomatis）主要外膜タンパク質、熱帯熱マラリア原虫（Plasmodium falciparum）スポロゾイト周辺（circumsporozite）Ｔ、熱帯熱マラリア原虫（P. falciparum）ＣＳ抗原、マンソン住血吸虫（Schistosoma mansoni）トリオースリン酸イソメラーゼ、百日咳菌（Bordetella pertussis）、破傷風菌（Clostridium tetani）、パーツサリア・トラキサリナ（Pertusaria trachythallina）、大腸菌（Escherichia coli）ＴｒａＴ、およびインフルエンザウイルス赤血球凝集素（ＨＡ）が含まれる。
当業者に知られている任意の適切なヘルパーＴ細胞エピトープを、本開示に鑑みて本発明において使用することができる。特定の実施形態によれば、ヘルパーＴ細胞エピトープは、配列番号２３～配列番号２６からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列を含む。好ましくは、ヘルパーＴ細胞エピトープは、１つまたは複数のアミノ酸、たとえば、Ｖａｌ（Ｖ）、Ａｌａ（Ａ）、Ａｒｇ（Ｒ）、Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、Ｌｙｓ（Ｋ）を含むペプチドリンカーなどのリンカーを介して一緒に融合された、配列番号２３～配列番号２６のアミノ酸配列のうちの２つ以上を含む。リンカーの長さは変動することができ、好ましくは１～５個のアミノ酸である。好ましくは、ヘルパーＴ細胞エピトープは、ＶＶＲ、ＧＳ、ＲＲ、ＲＫからなる群から選択される１つまたは複数のリンカーを介して一緒に融合された、配列番号２３～配列番号２６のアミノ酸配列のうちの３つ以上を含む。ヘルパーＴ細胞エピトープはそのＣ末端がアミド化され得る。
本出願の実施形態によれば、ヘルパーＴ細胞エピトープは、たとえば共有結合した疎水性部分によって繋留させて、リポソーム表面上に取り込ませることができ、ここで、前記疎水性部分は、アルキル基、脂肪酸、トリグリセリド、ジグリセリド、ステロイド、スフィンゴ脂質、糖脂質、またはリン脂質、特にアルキル基または脂肪酸、特に少なくとも３個の炭素原子、特に少なくとも４個の炭素原子、特に少なくとも６個の炭素原子、特に少なくとも８個の炭素原子、特に少なくとも１２個の炭素原子、特に少なくとも１６個の炭素原子の炭素主鎖を有するものである。本発明の一実施形態では、疎水性部分はパルミチン酸である。あるいは、ヘルパーＴ細胞エピトープはリポソーム内にカプセル封入させることができる。特定の実施形態によれば、ヘルパーＴ細胞エピトープはリポソーム内にカプセル封入されている。
ヘルパーＴ細胞エピトープは、本開示に鑑みて当分野で知られている方法を使用して、リポソーム中のその所望の位置を修飾することができる。特定の実施形態によれば、本発明において有用なヘルパーＴ細胞エピトープは、配列番号３９～配列番号４４のうちの１つのアミノ酸配列を含む。好ましくは、ヘルパーＴ細胞エピトープは、配列番号１３～配列番号１７からなる群から選択されるアミノ酸配列からなる。
特定の実施形態によれば、リポソームは、タウペプチドとヘルパーＴ細胞エピトープとを１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、または６：１の重量比で含む。
一実施形態では、リポソームは、トール様受容体リガンドを含む少なくとも１つのアジュバントをさらに含む。したがって、別の一般的な態様では、本発明は、
タウペプチド、好ましくはタウホスホペプチドと、
ヘルパーＴ細胞エピトープと、
ｉ．トール様受容体９リガンド、および
トール様受容体４リガンド
のうちの少なくとも１つと
を含む、リポソームに関する。
本明細書中で使用する用語「トール様受容体」または「ＴＬＲ」とは、自然免疫応答において主要な役割を果たすパターン認識受容体（ＰＲＲ）タンパク質のクラスをいう。ＴＬＲは、細菌、真菌、寄生生物、およびウイルスなどの微生物病原体からの病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）を認識し、これは宿主分子とは区別することができる。ＴＬＲは、典型的には二量体として機能する膜貫通タンパク質であり、抗原提示樹状細胞および食作用マクロファージを含めた自然免疫応答に関与する細胞によって発現される。少なくとも１０個のヒトＴＬＲファミリーメンバー、すなわちＴＬＲ１～ＴＬＲ１０、ならびに少なくとも１２個のネズミＴＬＲファミリーメンバー、すなわちＴＬＲ１～ＴＬＲ９およびＴＬＲ１１～ＴＬＲ１３が存在し、これらは、それが認識する抗原の種類が異なる。たとえば、ＴＬＲ４は、多くのグラム陰性細菌中に存在する構成要素であるリポ多糖（ＬＰＳ）、ならびに低密度リポタンパク質、ベータ－デフェンシン、および熱ショックタンパク質などのウイルスのタンパク質、多糖、および内在性タンパク質を認識し、ＴＬＲ９は、原核ゲノムでは豊富であるが脊椎動物ゲノムでは希少である、非メチル化シトシン－リン酸－グアニン（ＣｐＧ）一本鎖または二本鎖ジヌクレオチドによって活性化される、ヌクレオチド感知ＴＬＲである。ＴＬＲの活性化は、Ｉ型インターフェロン（ＩＦＮ）、炎症性サイトカイン、およびケモカインの産生、ならびに免疫応答の誘導をもたらす、一連のシグナル伝達事象をもたらす。最終的に、この炎症は適応免疫系も活性化し、その後、浸潤病原体および感染細胞の排除をもたらす。
本明細書中で使用する用語「リガンド」とは、生体分子（たとえば受容体）と複合体を形成して生物学的目的を果たす分子をいう。特定の実施形態によれば、トール様受容体リガンドはトール様受容体作用剤である。
本明細書中で使用する用語「作用剤」とは、１つまたは複数のＴＬＲと結合し、受容体媒介性の応答を誘導する分子をいう。たとえば、作用剤は、受容体の活性を誘導、刺激、増加、活性化、促進、増強、またはアップレギュレートすることができる。そのような活性は「作用活性」という。たとえば、ＴＬＲ４またはＴＬＲ９作用剤は、結合した受容体を介して細胞シグナル伝達を活性化または増加することができる。作用剤には、それだけには限定されないが、核酸、小分子、タンパク質、炭水化物、脂質、または受容体と結合もしくは相互作用する任意の他の分子が含まれる。作用剤は、天然受容体リガンドの活性を模倣することができる。作用剤は、受容体によって認識されることができるように、配列、コンホメーション、電荷、または他の特徴に関してこれら天然受容体リガンドと相同的であることができる。この認識は、細胞が、天然受容体リガンドが存在していた場合と同じ様式で作用剤の存在に反応するような、細胞内での生理的および／または生化学的な変化をもたらすことができる。特定の実施形態によれば、トール様受容体作用剤はトール様受容体４作用剤およびトール様受容体９作用剤のうちの少なくとも１つである。
本明細書中で使用する用語「トール様受容体４作用剤」とは、ＴＬＲ４の作用剤として役割を果たす任意の化合物をいう。当業者に知られている任意の適切なトール様受容体４作用剤を、本開示に鑑みて本発明において使用することができる。本発明において有用なトール様受容体４リガンドの例には、それだけには限定されないがモノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬＡ）を含めたＴＬＲ４作用剤が含まれる。本明細書中で使用する用語「モノホスホリル脂質Ａ」または「ＭＰＬＡ」とは、グラム陰性細菌リポ多糖（ＬＰＳ）内毒素の生物活性部分である、脂質Ａの修飾された形態をいう。ＭＰＬＡは、免疫賦活活性を維持しつつも、ＬＰＳより毒性が低い。ワクチンアジュバントとしては、ＭＰＬＡはワクチン抗原に対する細胞応答および液性応答をどちらも刺激する。ＭＰＬＡの例には、それだけには限定されないが、３－Ｏ－脱アシル－４’－モノホスホリル脂質Ａ、モノホスホリルヘキサ－アシル脂質Ａ、３－脱アシル、モノホスホリル３－脱アシル脂質Ａ、および構造的に関連するその変異体が含まれる。本発明において有用なＭＰＬＡは、当分野で知られている方法を使用して、または、Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ（米国アラバマ州Ａｌａｂａｓｔｅｒ）の３Ｄ－（６－アシル）ＰＨＡＤ（登録商標）、ＰＨＡＤ（登録商標）、ＰＨＡＤ（登録商標）－５０４、３Ｄ－ＰＨＡＤ（登録商標）、もしくは様々な商業的供給源のＭＰＬ（商標）などの商業的供給源から得ることができる。特定の実施形態によれば、トール様受容体４作用剤はＭＰＬＡである。
本明細書中で使用する用語「トール様受容体９作用剤」とは、ＴＬＲ９の作用剤として作用する任意の化合物をいう。当業者に知られている任意の適切なトール様受容体９作用剤を、本開示に鑑みて本発明において使用することができる。本発明において有用なトール様受容体９リガンドの例には、それだけには限定されないがＣｐＧオリゴヌクレオチドを含めたＴＬＲ９作用剤が含まれる。
本明細書中で使用する用語「ＣｐＧオリゴヌクレオチド」、「ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド」、または「ＣｐＧ ＯＤＮ」とは、少なくとも１つのＣｐＧモチーフを含むオリゴヌクレオチドをいう。本明細書中で使用する「オリゴヌクレオチド」、「オリゴデオキシヌクレオチド」、または「ＯＤＮ」とは、複数の連結したヌクレオチド単位から形成されたポリヌクレオチドをいう。そのようなオリゴヌクレオチドは、既存の核酸源から得ることができるか、または合成方法によって生成することができる。本明細書中で使用する用語「ＣｐＧモチーフ」とは、リン酸結合またはリン酸ジエステル主鎖もしくは他のヌクレオチド間結合によって連結された非メチル化シトシン－リン酸－グアニン（ＣｐＧ）ジヌクレオチド（すなわち、シトシン（Ｃ）次いでグアニン（Ｇ））を含有するヌクレオチド配列をいう。
特定の実施形態によれば、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは脂質付加されている、すなわち脂質部分とコンジュゲートされている（共有結合している）。
本明細書中で使用する「脂質部分」とは、親油性構造を含有する部分をいう。アルキル基、脂肪酸、トリグリセリド、ジグリセリド、ステロイド、スフィンゴ脂質、糖脂質、またはリン脂質、特にコレステロールなどのステロールまたは脂肪酸などの脂質部分は、核酸などの高親水性分子に付着した場合に、血漿タンパク質の結合、結果的には親水性分子の循環半減期を実質的に増強させることができる。さらに、リポタンパク質などの特定の血漿タンパク質との結合は、対応するリポタンパク質受容体（たとえば、ＬＤＬ受容体、ＨＤＬ受容体、またはスカベンジャー受容体ＳＲ－Ｂ１）を発現する特定の組織中への取り込みを増加させることが示されている。特に、ホスホペプチドおよび／またはＣｐＧオリゴヌクレオチドとコンジュゲートさせた脂質部分は、前記ペプチドおよび／またはオリゴヌクレオチドが疎水性部分を介してリポソームの膜内に繋留されることを可能にする。
特定の実施形態によれば、本開示に鑑みて、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは任意の適切なヌクレオチド間結合を含むことができる。
本明細書中で使用する用語「ヌクレオチド間結合」とは、隣接するヌクレオシド間のリン原子と荷電基または中性基からなる、２つのヌクレオチドをその糖を介して結合させる化学結合をいう。ヌクレオチド間結合の例には、リン酸ジエステル（ｐｏ）、ホスホロチオエート（ｐｓ）、ホスホロジチオエート（ｐｓ２）、メチルホスホネート（ｍｐ）、およびメチルホスホロチオエート（ｒｐ）が含まれる。ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、メチルホスホネート、およびメチルホスホロチオエートは安定化ヌクレオチド間結合である一方で、リン酸ジエステルは天然に存在するヌクレオチド間結合である。オリゴヌクレオチドホスホロチオエートは、典型的にはＲｐおよびＳｐホスホロチオエート結合のランダムなラセミ混合物として合成される。
当業者に知られている任意の適切なＣｐＧオリゴヌクレオチドを、本開示に鑑みて本発明において使用することができる。そのようなＣｐＧオリゴヌクレオチドの例には、それだけには限定されないが、ＣｐＧ２００６（ＣｐＧ７９０９としても知られる）、ＣｐＧ１０１８、ＣｐＧ２３９５、ＣｐＧ２２１６、ＣｐＧ１８２６、またはＣｐＧ２３３６が含まれる。
本開示に鑑みて当分野で知られている方法を使用して、ＣｐＧオリゴヌクレオチドに脂質付加することができる。一部の実施形態では、ＣｐＧオリゴヌクレオチドの３’末端は、任意選択でＰＥＧリンカーを介して、リン酸結合を介してコレステロール分子と共有結合している。また、他の親油性部分もＣｐＧオリゴヌクレオチドの３’末端と共有結合することができる。たとえば、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、任意選択でＰＥＧリンカーを介して、リポソームからのリン脂質と同じ長さの脂質アンカー、すなわち、１本のパルミチン酸鎖（Ｐａｌ－ＯＨもしくは類似のものを使用、カップリング用に活性化）または２本のパルミチン酸（たとえば１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－（スクシニル）もしくは類似のものを使用、カップリング用に活性化）と共有結合することができる。たとえば、その内容が本明細書中に参考として組み込まれている米国特許第７，７４１，２９７号明細書中の関連開示を参照されたい。ＰＥＧの長さは、たとえば１～５個のＰＥＧ単位で変動することができる。
他のリンカーも、ＣｐＧオリゴヌクレオチドを親油性部分（コレステロール分子など）と共有結合させるために使用することができ、その例には、それだけには限定されないが３～１２個の炭素を有するアルキルスペーサーが含まれる。オリゴヌクレオチド化学に適合性のある短いリンカーがアミノジオールとして必要である。一部の実施形態では、共有結合にリンカーを使用しない。たとえば、その関連開示が本明細書中に参考として組み込まれているRies et al., “Convenient synthesis and application of versatile nucleic acid lipid membrane anchors in the assembly and fusion of liposomes, Org. Biomol. Chem., 2015, 13, 9673を参照されたい。
特定の実施形態によれば、本発明において有用な脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、配列番号１８～配列番号２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、ヌクレオチド配列は、１つまたは複数のホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含んでおり、リンカーを介して少なくとも１つのコレステロールと共有結合している。任意の適切なリンカーを使用してＣｐＧオリゴヌクレオチドをコレステロール分子と共有結合させることができる。好ましくは、リンカーはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む。
特定の実施形態によれば、リポソームは、
タウホスホペプチドと、
ヘルパーＴ細胞エピトープと、
脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと、
トール様受容体４リガンドと
を含み、タウホスホペプチドはリポソームの表面上に提示されており、ヘルパーＴ細胞エピトープはリポソーム内にカプセル封入されている。
特定の実施形態によれば、リポソームは、
配列番号２７～配列番号２９または配列番号３１～配列番号３８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するタウペプチドと、
配列番号３９～配列番号４４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するヘルパーＴ細胞エピトープ、好ましくは、配列番号１３～配列番号１７からなる群から選択されるアミノ酸配列からなるヘルパーＴ細胞エピトープと、
配列番号１８～配列番号２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列を有し、１つまたは複数のホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含み、リンカーを介して少なくとも１つのコレステロールと共有結合している、脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと
モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬＡ）と
を含む。
特定の実施形態によれば、リポソームは、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホリル－３’－ｒａｃ－グリセロール（ＤＭＰＧ）、およびコレステロールからなる群から選択される１つまたは複数の脂質をさらに含む。
特定の実施形態によれば、リポソームは緩衝液をさらに含む。当業者に知られている任意の適切な緩衝液を、本開示に鑑みて本発明において使用することができる。一実施形態では、リポソームはリン酸緩衝生理食塩水を含む。特定の実施形態によれば、緩衝液はヒスチジンおよびスクロースを含む。
特定の実施形態によれば、リポソームは、ＤＭＰＣ、ＤＭＰＧ、コレステロール、タウホスホペプチド、およびヘルパーＴ細胞エピトープを９：１：７：０．０７：０．０４のモル比で含む。
本発明のリポソームは、本開示に鑑みて当分野で知られている方法を使用して作製することができる。
本出願の例示的なリポソームは、タウペプチドのそれぞれの末端で２つのパルミチン酸を介してリポソームの表面上に提示されているタウテトラパルミトイル化ホスホペプチド（ｐタウペプチドＴ３、配列番号２８）と、脂質付加ＣｐＧ（アジュバントＣｐＧ７９０９－Ｃｈｏｌ）を含む、共有結合しているコレステロールを介してリポソーム膜内に取り込まれているＴＬＲ－９リガンドと、膜内に取り込まれているＴＬＲ－４リガンド（アジュバント３Ｄ－（６－アシル）ＰＨＡＤ（登録商標））と、カプセル封入されたヘルパーＴ細胞エピトープ（ＰＡＮ－ＤＲ結合剤Ｔ５０）とを含む。
コンジュゲート
コンジュゲートは本出願のブースト用組成物に使用される。本発明の方法において有用なコンジュゲートは、タウペプチド、好ましくはタウホスホペプチドと、それとコンジュゲートさせた免疫原性担体とを含む。
特定の態様によれば、コンジュゲートは、以下の構造：
または式（ＩＩ）の構造：
［式中、
ｘは、０～１０の整数であり、
ｎは、２～１５、好ましくは３～１１の整数であり、
担体は、免疫原性担体を表し、
タウペプチドは、タウホスホペプチドを表す。］
を有する。
特定の実施形態によれば、ｘは、１～１０、２～９、２～８、２～７、２～６、２～５、２～４、または２～３の整数である。特定の実施形態によれば、ｘは３である。
特定の実施形態によれば、ｎは、２～１５、３～１１、３～９、３～８、または３～７である。
特定の実施形態によれば、コンジュゲートは１つまたは複数のタウペプチドを含む。特定の実施形態によれば、コンジュゲートのタウペプチドは同じまたは異なり得る。
特定の実施形態によれば、任意の適切なタウペプチドを、本開示に鑑みて本発明において使用することができる。特定の実施形態によれば、タウペプチドのうちの１つまたは複数は、配列番号１～１２のうちの１つのアミノ酸配列、または配列番号１～１２のうちの１つのアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一であるアミノ酸配列を含み、ここで、アミノ酸残基のうちの０個、１個、または複数がリン酸化されている。
特定の実施形態によれば、タウペプチドのうちの１つまたは複数はタウホスホペプチドである。特定の実施形態によれば、１つまたは複数のタウホスホペプチドは、配列番号１～３もしくは５～１２のうちの１つのアミノ酸配列、または配列番号１～３もしくは５～１２のうちの１つのアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一であるアミノ酸配列を含み、ここで、示したアミノ酸残基のうちの１つまたは複数はリン酸化されている。
特定の実施形態によれば、タウホスホペプチドは配列番号１～３のうちの１つのアミノ酸配列からなる。
本明細書中で使用する用語「免疫原性担体」とは、タウペプチドとカップリングさせることができる免疫原性物質をいう。タウペプチドとカップリングされた免疫原性部分は、免疫応答を誘導し、タウペプチドと特異的に結合することができる抗体の産生を誘発することができる。免疫原性部分は、外来物として認識され、したがって宿主から免疫応答を誘発させる、タンパク質、ポリペプチド、糖タンパク質、複合多糖、粒子、核酸、ポリヌクレオチドなどを含めた作動可能な部分である。当業者に知られている任意の適切な免疫原性担体を、本開示に鑑みて本発明において使用することができる。特定の実施形態によれば、免疫原性担体は、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、破傷風トキソイド、ＣＲＭ１９７（ジフテリア毒素の無毒性形態）、髄膜炎菌（N. meningitidis）由来の外膜タンパク質混合物（ＯＭＰ）、またはその誘導体である。特定の実施形態によれば、免疫原性担体はＫＬＨまたはＣＲＭ１９７である。
特定の実施形態によれば、タウペプチドはリンカーを介して担体とコンジュゲートしている。本明細書中で使用する用語「リンカー」とは、免疫原性担体をタウペプチドと結合させる化学部分をいう。当業者に知られている任意の適切なリンカーを、本開示に鑑みて本発明において使用することができる。リンカーは、たとえば、単一共有結合、置換もしくは非置換のアルキル、置換もしくは非置換のヘテロアルキル部分、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）リンカー、ペプチドリンカー、糖に基づくリンカー、ジスルフィド結合もしくはプロテアーゼ切断部位などの切断可能なリンカー、アミノ酸、またはその組合せであることができる。リンカーの例は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、スクシンイミジル３－（ブロモアセトアミド）プロピオネート（ＳＢＡＰ）、ｍ－マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）のうちの１つまたは複数、Ｃｙｓ、Ｌｙｓ、または場合によってはＳｅｒもしくはＴｈｒなどの１つまたは複数のアミノ酸、あるいはその組合せを含むことができる。
特定の実施形態によれば、リンカーは、（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ｘ－システイン－アセトアミドプロピオンアミドまたはｍ－マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル－システイン－（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ｘを含む［式中、ｘは、０～１０の整数、たとえば、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。］。
特定の実施形態によれば、担体はリンカーを介してタウペプチドのＮ末端と共有結合している。
他の特定の実施形態によれば、担体はリンカーを介してタウペプチドのＣ末端と共有結合している。
特定の実施形態によれば、コンジュゲートは、以下の構造：
［式中、ｎは、２～１５、好ましくは３～１１、より好ましくは３～７の整数である。］
を有する。
本発明のコンジュゲートは、本開示に鑑みて当分野で知られている方法によって作製することができる。たとえば、上記コンジュゲートは、スクシンイミジル－３－（ブロモアセトアミド）プロピオネート（ＳＢＡＰ）：
をＣＲＭ１９７のアミノ基と反応させてアミド結合を形成させることによって、形成することができる。続いて、このＣＲＭ１９７前駆体を、そのＮ末端またはそのＣ末端で遊離求核性チオール基を有するＰＥＧ－システインリンカーとコンジュゲートしているタウペプチド（たとえば配列番号２のリン酸化タウペプチド）と反応させて、タウホスホペプチドコンジュゲートを形成することができる。
本出願の一実施形態による例示的なコンジュゲートは、担体タンパク質ＣＲＭ１９７と共有結合している複数のタウホスホペプチド（ｐタウペプチドＴ３．７６）を含む。
医薬組成物
リポソームおよびコンジュゲートは、医薬組成物中で対象に投与する。医薬組成物とは、それぞれ薬学的に許容される担体と一緒になった、治療有効量のリポソームを含む組成物または治療有効量の本発明のコンジュゲートを含む組成物である。薬学的に許容される担体には、当分野で知られている賦形剤および／または担体が含まれる（Remington's Pharmaceutical Science (15th ed.), Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1980を参照）。医薬組成物の好ましい配合は、意図する投与様式および治療的適用に依存する。組成物には、動物またはヒト投与のための医薬組成物を配合するために一般的に使用されるビヒクルとして定義される、薬学的に許容される無毒性の担体または希釈剤が含まれることができる。希釈剤は、組合せの生物活性に影響を与えないように選択する。そのような希釈剤の例は、蒸留水、生理的リン酸緩衝食塩水、リンゲル液、デキストロース溶液、およびハンクス液である。さらに、医薬組成物または配合物には、他の担体、アジュバント、または無毒性の非治療的な非免疫原性の安定化剤なども含まれ得る。担体、賦形剤、または希釈剤の特徴は特定の適用の投与経路、たとえば、筋肉内、皮下、経口、皮内、皮膚、粘膜内（たとえば腸）、鼻腔内、または腹腔内経路に依存することが理解されよう。好ましくは、医薬組成物に含まれる薬学的に許容される担体は筋肉内投与に適切である。
医薬組成物は、当分野で周知の方法によってプライム用組成物またはブースト用組成物などのワクチン（「免疫原性組成物」とも呼ばれる）として配合することができる。
医薬組成物は、同じ免疫原性タウペプチドの混合物を含有することができる。あるいは、医薬組成物は、本発明の異なる免疫原性タウペプチドの混合物を含有することができる。
神経疾患に対するワクチンに関連する別の問題は、有効性を保証するために並外れて高い抗体価が必要な可能性があることである。これは、ワクチンの標的抗原が脳内に位置しているからである。脳は、血液脳関門（ＢＢＢ）と呼ばれる特殊な細胞構造によって循環から分離されている。ＢＢＢは、循環から脳内への物質の通過を制限する。これにより、毒素、微生物などが中枢神経系内に入ることが防止される。また、ＢＢＢは、免疫媒介物質（抗体など）の、脳を取り囲む間質液および脳脊髄液内への効率的な侵入を防止するという、潜在的により望ましくない効果も有する。
全身循環中に存在する抗体の約０．１％がＢＢＢを横断して脳に入る。このことは、ＣＮＳ抗原を標的とするワクチンによって誘導される全身性力価が、脳内で有効となるためには、最小有効力価よりも少なくとも１０００倍高くなければならないことを意味する。
特定の実施形態によれば、本発明の医薬組成物はしたがって１つまたは複数の適切なアジュバントをさらに含む。したがって、リポソームまたはコンジュゲート中に存在する本発明のタウペプチドは、対象において所望の免疫応答を達成するために適切なアジュバントと組み合わせて投与することができる。適切なアジュバントは、本発明のリポソームまたはコンジュゲートの投与の前、後、またはそれと同時に投与することができる。好ましいアジュバントは、応答の定性的形態に影響を与える免疫原のコンホメーション変化を引き起こさずに、本来備わっている免疫原に対する応答を増大させる。アジュバントの例は、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、および硫酸アルミニウムなどのアルミニウム塩（ミョウバン）である。アジュバントの他の例には、ＣｐＧ２００６（ＣｐＧ７９０９としても知られる）、ＣｐＧ１０１８、ＣｐＧ２３９５、ＣｐＧ２２１６、ＣｐＧ１８２６、またはＣｐＧ２３３６などのＣｐＧが含まれる。そのようなアジュバントは、ＭＰＬＡクラス（３脱－Ｏ－アシル化モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ（商標））、モノホスホリルヘキサ－アシル脂質Ａ、３－脱アシル合成（３Ｄ－（６－アシル）ＰＨＡＤ（登録商標））、ＰＨＡＤ（商標）、ＰＨＡＤ（登録商標）－５０４、３Ｄ－ＰＨＡＤ（登録商標）脂質Ａ、ポリグルタミン酸またはポリリシンなどのポリマーまたは単量体のアミノ酸等の、他の特定の免疫賦活剤を用いてまたは用いずに使用することができる。そのようなアジュバントは、ムラミルペプチド（たとえば、Ｎ－アセチルムラミル－Ｌ－スレオニル－Ｄ－イソグルタミン（ｔｈｒ－ＭＤＰ）、Ｎ－アセチル－ノルムラミル－Ｌ－アラニル－Ｄ－イソグルタミン（ｎｏｒ－ＭＤＰ）、Ｎ－アセチルムラミル－Ｌ－アラニル－Ｄ－イソグルタミニル－Ｌ－アラニン－２－（１’－２’ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ヒドロキシホスホリルオキシ）－エチルアミン（ＭＴＰ－ＰＥ）、Ｎ－アセチルグルコサミニル－Ｎ－アセチルムラミル－Ｌ－Ａｌ－Ｄ－イソグル－Ｌ－Ａｌａ－ジパルミトキシプロピルアミド（ＤＴＰ－ＤＰＰ）Ｔｈｅｒａｍｉｄｅ（商標））、または他の細菌細胞壁構成要素などの、他の特定の免疫賦活剤を用いてまたは用いずに使用することができる。水中油乳濁液には、５％のスクアレン、０．５％のＴｗｅｅｎ８０、および０．５％のＳｐａｎ８５を含有する（任意選択で様々な量のＭＴＰ－ＰＥを含有する）ＭＦ５９（微小流動化装置を使用してサブミクロン粒子へと配合）（国際公開第９０／１４８３７号パンフレット参照）、１０％のスクアレン、０．４％のＴｗｅｅｎ８０、５％のプルロニックブロックポリマーＬ１２１、およびｔｈｒ－ＭＤＰを含有するＳＡＦ（サブミクロン乳濁液へと微小流動化またはボルテックスしてより大きな粒径の乳濁液を生成するかのいずれか）、Ｒｉｂｉ（商標）アジュバント系（ＲＡＳ）（Ｒｉｂｉ ＩｍｍｕｎｏＣｈｅｍ、モンタナ州Ｈａｍｉｌｔｏｎ）０．２％のＴｗｅｅｎ８０、ならびに、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ（商標））、トレハロースジミコレート（ＴＤＭ）、および細胞壁骨格（ＣＷＳ）、好ましくはＭＰＬ（商標）＋ＣＷＳ（Ｄｅｔｏｘ（商標））からなる群から選択される１つまたは複数の細菌細胞壁構成要素が含まれる。他のアジュバントには、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）、ならびにインターロイキン（ＩＬ－１、ＩＬ－２、およびＩＬ－１２）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ）、および腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）などのサイトカインが含まれる。
本明細書中で使用する用語「治療有効量」とは、対象において所望の生物学的または医薬的応答を誘発する、活性成分または構成要素の量をいう。治療有効量は、記述した目的に関連して、経験的にかつルーチン的な様式で決定することができる。たとえば、最適な用量範囲の同定を助けるために、ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイを任意選択で用いることができる。特定の有効用量の選択は、処置または防止する疾患、関与する症状、患者の体重、患者の免疫状態、および当業者に知られている他の要因を含めたいくつかの要因の考慮に基づいて、当業者によって（たとえば臨床治験を介して）決定することができる。また、配合物中で用いる正確な用量も投与経路および疾患の重症度に依存し、従事者の判断およびそれぞれの患者の状況に従って決定されるべきである。有効用量は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたは動物モデル試験系から導き出された用量応答曲線から外挿することができる。
特定の実施形態では、「治療有効量」とは、それを必要としている対象において所望の免疫効果または免疫応答を誘導するために十分な組成物の量を意味する「免疫学的有効量」である。一実施形態では、免疫原的有効量とは、それを必要としている対象において免疫応答を誘導するために十分な量を意味する。別の実施形態では、免疫原的有効量とは、それを必要としている対象において免疫を引き起こす、たとえば、神経変性疾患、障害、または状態に対する治療効果をもたらすために十分な量を意味する。免疫原的有効量は、様々な要因、たとえば、対象の体調、年齢、体重、健康状態などに応じて変動する可能性がある。免疫原的有効量は、本開示に鑑みて当業者によって容易に決定することができる。
一実施形態では、免疫原性組成物は、ブースト用組成物の投与の前に投与される、免疫応答をプライムするために使用されるプライム用組成物である。本発明の実施形態によれば、プライム用組成物は、本明細書中に記載の免疫学的有効量のリポソームを含む。本発明の実施形態によれば、免疫原性組成物は、プライム用組成物の投与の後に投与される、免疫応答をブーストするために使用されるブースト用組成物である。本発明の実施形態によれば、ブースト用組成物は、本明細書中に記載の免疫学的有効量のコンジュゲートを含む。本出願の実施形態によれば、本明細書中に記載の免疫学的有効量のリポソームを含む免疫原性組成物は、免疫応答をプライムするためのプライム用組成物および免疫応答をブーストするためのブースト用組成物のどちらとしても使用することができる。プライム用組成物は１つまたは複数のブースト用組成物と組み合わせて使用することができる。ブースト用組成物は２回以上投与することができる。
２つ以上の治療を対象に投与するコンテクストにおいて本明細書中で使用する用語「組み合わせて」とは、複数の治療薬の使用をいう。用語「組み合わせて」の使用は、治療薬を対象に投与する順序を制限しない。たとえば、第１の治療薬（たとえば本明細書中に記載のリポソーム組成物）を、第２の治療薬（たとえば本明細書中に記載のコンジュゲート組成物）を対象に投与する前（たとえば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、１６時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、１２週間、もしくはそれよりも前）、それと同時に、またはそれに続いて（たとえば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、１６時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、１２週間、もしくはそれよりも後）に投与することができる。
本発明の医薬組成物は、当分野で周知の方法によって配合することができる。組成物中のそれぞれの構成要素の最適な比は、本開示に鑑みて当業者に周知の技法によって決定することができる。
特定の実施形態では、医薬組成物は、本明細書中に記載のリポソーム、ならびにヒスチジンもしくはグリシンなどの１つもしくは複数のアミノ酸を含む緩衝液、および／またはグルコースもしくはスクロースなどの１つもしくは複数の炭水化物を含む。
他の実施形態では、医薬組成物は、本明細書中に記載のコンジュゲート、ならびにヒスチジンもしくはグリシンなどの１つもしくは複数のアミノ酸を含む緩衝液、グルコースもしくはスクロースなどの１つもしくは複数の炭水化物、および／またはポリソルベート８０、ポリソルベート２０などの界面活性剤を含む。
使用方法
本発明は、タウペプチドを含有するリポソームワクチンおよび免疫原性担体とコンジュゲートさせたタウペプチドを含むコンジュゲートワクチンを使用して、神経変性障害を患っている対象においてタウタンパク質に対する免疫応答をプライムおよびブーストする方法を提供する。
一般的な一態様では、神経変性障害を患っている対象においてタウタンパク質に対する免疫応答を誘導する方法は、
対象に、
第１のタウホスホペプチドと、
ヘルパーＴ細胞エピトープと、
脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと、
トール様受容体４リガンドを含有するアジュバントと
を含み、タウホスホペプチドがリポソームの表面上に提示されている、免疫学的有効量のリポソームを含み、薬学的に許容される担体をさらに含む、プライム用組成物を投与することと、
対象に、第２のタウホスホペプチドと、リンカーを介してそれとコンジュゲートさせた免疫原性担体とを含み、式（Ｉ）の構造を：
または式（ＩＩ）の構造：
［式中、
ｘは、０～１０、好ましくは２～６、最も好ましくは３の整数であり、
ｎは、３～１５、好ましくは３～１２の整数であり、
担体は、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、破傷風トキソイド、ＣＲＭ１９７、および髄膜炎菌（N. meningitidis）由来の外膜タンパク質混合物（ＯＭＰ）、またはその誘導体からなる群から選択される免疫原性担体を表し、
タウペプチドは、第２のタウホスホペプチドを表す。］
を有する、免疫学的有効量のコンジュゲートを含み、
薬学的に許容される担体をさらに含む、第１のブースト用組成物を投与することと
を含み、
第１のタウホスホペプチドおよび第２のタウホスホペプチドは、それぞれ独立して、配列番号１～配列番号３および配列番号５～配列番号１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。
特定の実施形態では、免疫学的有効量のコンジュゲートは、１つまたは複数のアジュバント、たとえば本明細書中に記載のものと一緒に投与される。一実施形態では、免疫学的有効量のコンジュゲートは、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、および硫酸アルミニウムなどの１つもしくは複数のアルミニウム塩（ミョウバン）、ならびに／またはＣｐＧ２００６（ＣｐＧ７９０９としても知られる）、ＣｐＧ１０１８、ＣｐＧ２３９５、ＣｐＧ２２１６、ＣｐＧ１８２６、もしくはＣｐＧ２３３６などの１つまたは複数のＣｐＧと投与される。
特定の実施形態では、第１のタウホスホペプチドおよび第２のタウホスホペプチドは同一である。他の実施形態では、第１のタウホスホペプチドおよび第２のタウホスホペプチドは異なる、好ましくはそれらは少なくとも１つの共通のエピトープを共有する。
特定の実施形態では、方法は、対象に免疫原性有効量のリポソームを含む第２のブースト用組成物を投与することをさらに含む。
特定の態様によれば、免疫応答はリン酸化タウタンパク質、好ましくはｅＰＨＦに対する抗体によって誘導される。
特定の実施形態では、第１のブースト用組成物は、プライム用組成物が投与された約２７～３２日後、たとえば、約２７、２８、２９、３０、３１、または３２日後に投与される。特定の実施形態では、第１のブースト用組成物は、プライム用組成物が投与された約８２～８７日後、たとえば、約８２、８３、８４、８５、８６、または８７日後に再投与される。特定の実施形態では、免疫原性有効量のリポソームを含む第２のブースト用組成物は、プライム用組成物が投与された約１６７～１７２日後、たとえば、約１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、または１７２日後に投与される。
特定の実施形態では、第１のブースト用組成物は、プライム用組成物が投与された約８２～８７日後、たとえば、約８２、８３、８４、８５、８６、または８７日後に投与される。特定の実施形態では、第２のブースト用組成物は、プライム用組成物が投与された約２７～３２日後、たとえば約２７、２８、２９、３０、３１、または３２日後に投与される。特定の実施形態では、第１のブースト用組成物は、プライム用組成物が投与された約１６７～１７２日後、たとえば、約１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、または１７２日後に再投与される。
当業者は、本明細書中の教示および臨床経験に基づいて、プライム用およびブースト用組成物の的確なタイミング、その投与回数、その用量などを変更することができる。
本明細書中に記載のプライマーおよびブースト用組成物のいずれも、神経変性障害を患っている対象においてタウタンパク質に対する免疫応答を誘導する方法において使用することができる。本発明の方法において使用することができるプライム用組成物、ブースト用組成物、リポソーム、および／またはコンジュゲートなどの実施形態は、上記および実例としての以下の実施例において詳細に議論される。
本明細書中で使用する用語「誘導する」および「刺激する」ならびにその変形は、細胞活性のいかなる量の測定可能な増加をいう。免疫応答の誘導には、たとえば、免疫細胞集団の活性化、増殖、もしくは成熟、サイトカイン産生の増加、および／または増加した免疫機能の別の指標が含まれることができる。特定の実施形態では、免疫応答の誘導には、Ｂ細胞の増殖の増加、抗原特異的抗体の産生、抗原特異的Ｔ細胞の増殖の増加、樹状細胞抗原提示の改善、ならびに／または特定のサイトカイン、ケモカイン、および共刺激マーカーの発現の増加が含まれることができる。
動物またはヒト生物への投与の際に抗タウ免疫応答を誘導または刺激する能力は、当分野において標準的である様々なアッセイを使用してｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏのどちらかで評価することができる。免疫応答の開始および活性化を評価するために利用可能な技法の一般的な説明には、たとえばColigan et al. (1992 and 1994, Current Protocols in Immunology; ed. J Wiley & Sons Inc, National Institute of Health)を参照されたい。細胞性免疫の測定は、当分野で容易に知られている方法によって、たとえば、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞に由来するものを含めた活性化されたエフェクター細胞によって分泌されたサイトカインプロファイルの測定によって（たとえば、ＥＬＩＳＰＯＴによるＩＬ－４またはＩＦＮガンマ産生細胞の定量）、免疫エフェクター細胞の活性化状態の決定によって（たとえば、古典的な［３Ｈ］チミジン取り込みによるＴ細胞増殖アッセイ）、感作された対象において抗原特異的Ｔリンパ球をアッセイすることによって（たとえば、細胞毒性アッセイにおけるペプチド特異的溶解など）、行うことができる。
細胞応答および／または液性応答を刺激する能力は、対象からの生体試料（たとえば、血液、血漿、血清、ＰＢＭＣ、尿、唾液、糞便、ＣＳＦ、またはリンパ液）を、医薬組成物中で投与した免疫原性タウペプチドに向けられた抗体の存在について試験することによって、決定することができる（たとえばHarlow, 1989, Antibodies, Cold Spring Harbor Pressを参照）。たとえば、免疫原を提供する組成物の投与に応答して産生された抗体の力価は、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、Ｍｅｓｏｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）、ドットブロット、ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル、ＥＬＩＳＰＯＴ、または抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）アッセイによって測定することができる。
本発明は、タウペプチドを含有するリポソームワクチンおよび免疫原性担体とコンジュゲートさせたタウペプチドを含むコンジュゲートワクチンを使用して、それを必要としている対象において神経変性疾患または障害を処置または防止する方法を提供する。
当業者は、本明細書中の教示および臨床経験に基づいて、ブースト用組成物、プライム用およびブースト用組成物の的確なタイミング、その投与回数、その用量などを変更することができる。
本明細書中に記載のプライマーおよびブースト用組成物のいずれも、それを必要としている対象において神経変性疾患または障害を処置または防止する方法において使用することができる。本発明の方法において使用することができるプライム用組成物、ブースト用組成物、リポソーム、および／またはコンジュゲートなどの実施形態は、上記および実例としての以下の実施例において詳細に議論される。
本明細書中で使用する用語「対象」とは、動物をいう。特定の実施形態によれば、対象は、非霊長類（たとえば、ラクダ、ロバ、シマウマ、ウシ、ブタ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、ネコ、イヌ、ラット、ウサギ、モルモット、もしくはマウス）または霊長類（たとえば、サル、チンパンジー、もしくはヒト）を含めた哺乳動物である。特定の実施形態によれば、対象はヒトである。
本明細書中で使用する用語「処置する」、「処置すること」、および「処置」はすべて、神経変性疾患、障害、または状態に関連する少なくとも１つの測定可能な物理的パラメーターの寛解または逆転をいうことを意図し、これらは必ずしも対象において識別可能である必要はないが、対象において識別可能であることができる。また、用語「処置する」、「処置すること」、および「処置」は、疾患、障害、または状態の回帰を引き起こすこと、進行を防止すること、または進行を少なくとも遅らせることもいうことができる。特定の実施形態では、「処置する」、「処置すること」、および「処置」とは、神経変性疾患、障害、または状態に関連する１つまたは複数の症状の軽減、発生もしくは発症の防止、または持続期間の短縮をいう。特定の実施形態では、「処置する」、「処置すること」、および「処置」とは、疾患、障害、または状態の再発の防止をいう。特定の実施形態では、「処置する」、「処置すること」、および「処置」とは、疾患、障害、または状態を有する対象の生存の増加をいう。特定の実施形態では、「処置する」、「処置すること」、および「処置」とは、対象における疾患、障害、または状態の排除をいう。
特定の実施形態によれば、治療有効量とは、以下の効果のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、またはそれより多くを達成するために十分な治療薬の量をいう：（ｉ）処置する疾患、障害、もしくは状態、またはそれに関連する症状の重症度の軽減または寛解、（ｉｉ）処置する疾患、障害、もしくは状態、またはそれに関連する症状の持続期間の短縮、（ｉｉｉ）処置する疾患、障害、もしくは状態、またはそれに関連する症状の進行の防止、（ｉｖ）処置する疾患、障害、もしくは状態、またはそれに関連する症状の回帰を引き起こすこと、（ｖ）処置する疾患、障害、もしくは状態、またはそれに関連する症状の発生または発症の防止、（ｖｉ）処置する疾患、障害、もしくは状態、またはそれに関連する症状の再発の防止、（ｖｉｉ）処置する疾患、障害、もしくは状態、またはそれに関連する症状を有する対象の入院の短縮、（ｖｉｉｉ）処置する疾患、障害、もしくは状態、またはそれに関連する症状を有する対象の入院の長さの短縮、（ｉｘ）処置する疾患、障害、もしくは状態、またはそれに関連する症状を有する対象の生存の増加、（ｘｉ）対象における処置する疾患、障害、もしくは状態、またはそれに関連する症状の阻害または軽減、および／あるいは（ｘｉｉ）別の治療薬の予防的または治療的効果の増強または改善。
本明細書中で使用する「神経変性疾患、障害、または状態」には、本開示に鑑みて当業者に知られている任意の神経変性疾患、障害、または状態が含まれる。神経変性疾患、障害、または状態の例には、タウオパチーと呼ばれるタウ関連の疾患、障害、または状態などの、神経原線維病変の形成によって引き起こされるまたはそれに関連する神経変性疾患または障害が含まれる。特定の実施形態によれば、神経変性疾患、障害、または状態には、それだけには限定されないが、アルツハイマー病、パーキンソン病、クロイツフェルト－ヤコブ病、拳闘家認知症、ダウン症候群、ゲルストマン－ストロイスラー－シャインカー病、封入体筋炎、プリオンタンパク質脳アミロイド血管症、外傷性脳傷害、筋萎縮性側索硬化症、グアムのパーキンソン認知症複合、神経原線維のもつれを伴う非グアム型運動ニューロン疾患、嗜銀顆粒性認知症、大脳皮質基底核変性症、レビー認知症、筋萎縮性側索硬化症、石灰化を伴うびまん性の神経原線維のもつれ、前頭側頭型認知症、好ましくは１７番染色体に連鎖するパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、前頭側頭葉認知症、ハレルフォルデン－スパッツ病、多系統萎縮症、ニーマン－ピック病Ｃ型、ピック病、進行性皮質下グリオーシス、進行性核上性麻痺、亜急性硬化性汎脳炎、もつれのみの認知症、脳炎後パーキンソニズム、筋緊張性ジストロフィー、慢性外傷性脳障害（ＣＴＥ）、脳血管症、またはレビー小体認知症（ＬＢＤ）を含めた、タウおよびアミロイド病理の共存を示す疾患または障害のうちの任意のものが含まれる。特定の実施形態によれば、神経変性疾患、障害、または状態はアルツハイマー病または別のタウオパチーである。
アルツハイマー病の臨床経過は、認知および機能の障害の進行パターンに基づいて複数の段階に分けることができる。段階は、たとえばＮＩＡ－ＡＡ診断基準を含む当分野で知られている評価尺度を使用して定義することができる。たとえば、そのそれぞれの内容全体が本明細書中に参照として組み込まれているDubois et al., Alzheimer's & Dementia 12 (2016) 292-323、Dubois et al., Lancet Neurol 2014; 13: 614-29、Jack et al., Alzheimer's & Dementia 14 (2018) 535-562を参照。
好ましい実施形態によれば、神経変性疾患、障害、または状態は、早期アルツハイマー病、アルツハイマー病に起因する軽度認知機能障害（ＭＣＩ）、軽度アルツハイマー病、または軽度から中等度のアルツハイマー病である。
一部の実施形態では、処置を必要としている対象は、脳においてアミロイド陽性であるが、顕著な認知機能障害をまだ示していない。脳におけるアミロイド沈着は、ＰＥＴスキャン、免疫沈降質量分析、または他の方法などの当分野で知られている方法を使用して検出することができる。
また、本発明は、対象の脳からのタウ凝集体の排除を促進するために有効な条件下で、対象に本発明の一実施形態による医薬組成物を投与することを含む、対象の脳からのタウ凝集体の排除を促進する方法も提供する。特定の実施形態によれば、タウ凝集体は神経原線維のもつれまたはその病理学的タウ前駆体である。
また、本発明は、対象におけるタウ病理に関連する行動性表現型の進行を遅延させるために有効な条件下で、対象に本発明の一実施形態による医薬組成物を投与することを含む、対象におけるタウ病理に関連する行動性表現型の進行を遅延させる方法も提供する。
本発明の好ましい実施形態では、本発明の一実施形態による医薬組成物の投与を介したタウペプチドの投与は、対象においてタウペプチドおよびタウの病理学的形態に対する活性免疫応答を誘導し、したがって、関連するタウ凝集体の排除を容易にする、タウ病理に関連する行動の進行を遅延させる、および／または根底にあるタウオパチーを処置する。本発明のこの態様によれば、免疫応答は、タウペプチドに対して向けられた液性（抗体媒介性）応答およびＴ細胞エピトープまたは免疫原性担体に対して向けられた細胞（抗原特異的Ｔ細胞またはその分泌産物によって媒介）応答の有益な発生を含む。
本明細書中で使用する、タウ病理に関連する行動性表現型には、それだけには限定されないが、認知機能障害、早期人格変化および脱抑制、アパシー、無為、無言症、失行症、固執、常同動作／行動、口愛過度、混乱、連続課題の計画または構築不能、利己的／無感覚、反社会的特質、共感欠如、口ごもり、頻繁な錯誤的な誤りを伴うが理解は比較的保たれている失文法的な発話、理解障害および字句発見欠損症、緩徐進行性歩行不安定症、後方突進、すくみ、頻繁な転倒、レボドパ不応性軸性硬直、核上性中止麻痺、矩形波眼球運動、ゆっくりとした垂直サッケード、仮性球麻痺、肢失行症、ジストニア、皮質性感覚消失、および振戦が含まれる。
本発明の方法を実施するにあたって、本発明の免疫原性ペプチドまたは抗体を投与する前に、アルツハイマー病もしくは他のタウオパチーに罹患しているもしくは罹患する危険性にある対象、脳内にタウ凝集体を有する対象、またはもつれ関連の行動性表現型を示している対象を選択することが好ましい。処置に従順な対象には、疾患の危険性にあるが症状を示していない個体、および現在症状を示している患者が含まれる。アルツハイマー病の場合、事実上誰もがアルツハイマー病を罹患する危険性にある。したがって、本方法は、対象患者の危険性のいかなる評価も必要とせずに、一般集団に予防的に投与することができる。本方法は、既知のアルツハイマー病の遺伝的リスクを有する個体に特に有用である。そのような個体には、疾患を経験した親族を有する者、および遺伝子または生化学的マーカーの分析によってその危険性が決定されている者が含まれる。
無症候性の患者では、処置を任意の年齢（たとえば、１０、２０、３０歳）で開始することができる。しかし、通常は、患者が４０、５０、６０、または７０歳に達するまで処置を開始する必要はない。処置は、典型的には、一定期間にわたる複数回の投薬を伴う。処置は、抗体、または治療剤に対する活性化されたＴ細胞もしくはＢ細胞の応答を、経時的にアッセイすることによってモニタリングすることができる。応答が減少した場合はブースター用量を指示している。
予防的適用では、タウペプチドを含有する医薬組成物を、アルツハイマー病または他のタウオパチーに罹患しやすい、または他の様式でその危険性がある患者に、疾患の生化学的、組織学的および／または行動学的症状、疾患の発生中に提示されるその合併症および中間病理学的表現型を含めた危険性を排除もしくは低下させる、重症度を軽くする、または疾患の発症を遅延させるために十分な量で投与する。治療的適用では、タウペプチドを含有する医薬組成物を、そのような疾患が疑われる、または既にそれに罹患している患者に、疾患の発生におけるその合併症および中間病理学的表現型を含めた疾患の症状（生化学的、組織学的、および／または、行動学的）を治癒する、または少なくとも部分的に停止するために十分な量で、投与する。
神経変性疾患、障害、または状態を防止および／または処置するために有効な用量の本発明の医薬組成物は、投与様式、標的部位、患者の生理的状態、投与した他の医薬品、および処置が予防的であるか治療的であるかを含めた、多くの様々な要因に応じて変動する。医薬組成物の量はアジュバントも投与するかどうかに依存し、アジュバントの非存在下ではより高用量が必要となる。本発明による方法では、対象はプライム用組成物を少なくとも１回、およびブースト用組成物を少なくとも１回投与される。それぞれのプライム用およびブースト用組成物中の抗原は、いかに多数のブースト用組成物を用いようとも、同一である必要はないが、抗原決定基を共有するまたは互いに実質的に類似であるべきである。
当業者には、プライムおよびブースト用の投与のレジメンは、投与後の測定した免疫応答に基づいて調整できることが容易に理解されよう。たとえば、ブースト用組成物は、一般に、プライム用組成物の投与の数週間または数カ月後、たとえば、プライム用組成物の投与の約２週間後、または約３週間後、または約４週間後、または約８週間後、または約１２週間後、または約１６週間後、または約２０週間後、または約２４週間後、または約２６週間後、または約２８週間後、または約３０週間後、または約３２週間後、または約３６週間後、または約１～２年後に投与する。
医薬組成物は、予防的および／または治療的処置のために、非経口、局所、静脈内、経口、皮下、動脈内、頭蓋内、腹腔内、皮内、鼻腔内、または筋肉内の手段によって投与することができる。免疫原性剤の最も典型的な投与経路は皮下または筋肉内注射である。この後者の種類の注射は、最も典型的には腕または脚の筋肉内に行われる。
組成物は、所望する場合は、活性成分を含有する１つまたは複数の単位剤形を含有することができる、キット、パック、またはディスペンサーで提示することができる。キットは、たとえば、ブリスターパックなどの金属またはプラスチックの箔を含むことができる。キット、パック、またはディスペンサーには投与の指示書を添付することができる。
特定の実施形態によれば、キットは、本発明の一実施形態によるリポソームを含む医薬組成物および本発明の一実施形態によるコンジュゲートを含む医薬組成物を含む。
実施形態
また、本発明は、以下の非限定的な実施形態も提供する。
実施形態１は、神経変性障害を患っている対象において、タウタンパク質に対する免疫応答を誘導する、好ましくはタウホスホペプチドおよび／またはｅＰＨＦに対する抗体を誘導する方法であって、
対象に、
ａ．第１のタウペプチドと、
ｂ．ヘルパーＴ細胞エピトープと
を含み、タウペプチドがリポソームの表面上に提示されている、免疫学的有効量のリポソームと、薬学的に許容される担体とを含むプライム用組成物を投与することと、
対象に、第２のタウホスホペプチドと、リンカーを介してそれとコンジュゲートさせた免疫原性担体とを含み、式（Ｉ）の構造：
または式（ＩＩ）の構造：
［式中、
ｘは、０～１０、好ましくは２～６、最も好ましくは３の整数であり、
ｎは、３～１５、好ましくは３～１２の整数であり、
担体は、免疫原性担体を表し、好ましくは免疫原性担体は、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、破傷風トキソイド、ＣＲＭ１９７、および髄膜炎菌（N. meningitidis）由来の外膜タンパク質混合物（ＯＭＰ）、またはその誘導体からなる群から選択され、
タウペプチドは、第２のタウホスホペプチドを表す。］
を有する、免疫学的有効量のコンジュゲートを含み、
薬学的に許容される担体をさらに含む、第１のブースト用組成物を投与することと
を含む、方法である。
実施形態２は、リポソームのタウペプチドがタウホスホペプチドである、実施形態１に記載の方法である。
実施形態３は、リポソームがトール様受容体リガンドをさらに含む、実施形態１または２に記載の方法である。
実施形態４は、トール様受容体リガンドがトール様受容体４リガンドおよびトール様受容体９リガンドのうちの少なくとも１つを含む、実施形態３に記載の方法である。
実施形態５は、トール様受容体リガンドがトール様受容体４リガンドである、実施形態３または４に記載の方法である。
実施形態６は、トール様受容体４リガンドがモノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬＡ）を含む、実施形態５に記載の方法である。
実施形態７は、トール様受容体リガンドがトール様受容体９リガンドである、実施形態３または４に記載の方法である。
実施形態８は、トール様受容体９リガンドが脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む、実施形態７に記載の方法である。
実施形態９は、プライム用組成物が、
ａ．タウペプチドと、
ｂ．ヘルパーＴ細胞エピトープと、
ｃ．ｉ．トール様受容体９リガンド、および
ｉｉ．トール様受容体４リガンド
のうちの少なくとも１つと
を含む免疫学的有効量のリポソームを含む、実施形態１に記載の方法である。
実施形態１０は、タウペプチドがタウホスホペプチドである、実施形態９に記載の方法である。
実施形態１１は、トール様受容体９リガンドが脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドである、実施形態９または１０に記載の方法である。
実施形態１２は、トール様受容体４リガンドおよびトール様受容体９リガンドを含む、実施形態９から１１のいずれかに記載の方法である。
実施形態１３は、トール様受容体４リガンドがモノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬＡ）を含む、実施形態１２に記載の方法である。
実施形態１４は、プライム用組成物が、
タウホスホペプチドと、
ヘルパーＴ細胞エピトープと、
脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと、
トール様受容体４リガンドを含有するアジュバントと
を含む免疫学的有効量のリポソームを含み、
タウホスホペプチドがリポソームの表面上に提示されている、実施形態１に記載の方法である。
実施形態１５は、トール様受容体４リガンドがモノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬＡ）を含む、実施形態１４に記載の方法である。
実施形態１６は、ヘルパーＴ細胞エピトープがリポソーム内にカプセル封入されている、実施形態１から１５のいずれかに記載の方法である。
実施形態１６ａは、ヘルパーＴ細胞エピトープがリポソームの膜内に取り込まれている、実施形態１から１５のいずれかに記載の方法である。
実施形態１６ｂは、ヘルパーＴ細胞エピトープがリポソームの表面上に提示されている、実施形態１から１５のいずれかに記載の方法である。
実施形態１７は、プライム用組成物が、
タウホスホペプチドと、
ヘルパーＴ細胞エピトープと、
脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと、
モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬＡ）と
を含む免疫学的有効量のリポソームを含み、
タウホスホペプチドがリポソームの表面上に提示されており、
Ｔ細胞エピトープがリポソーム内にカプセル封入されている、
実施形態１から１６ｂに記載の方法である。
実施形態１７ａは、ＭＰＬＡが３－Ｏ－脱アシル－４’－モノホスホリル脂質Ａ、好ましくはＭＰＬ（商標）である、実施形態１７に記載の方法である。
実施形態１７ｂは、ＭＰＬＡがモノホスホリルヘキサ－アシル脂質Ａ、３－脱アシル、好ましくは３Ｄ－（６－アシル）ＰＨＡＤ（登録商標）である、実施形態１７に記載の方法である。
実施形態１７ｃは、ＭＰＬＡがモノホスホリル３－脱アシル脂質Ａ、好ましくは３Ｄ－ＰＨＡＤ（登録商標）である、実施形態１７に記載の方法である。
実施形態１８は、プライム用組成物のリポソーム組成物が、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホリル－３’－ｒａｃ－グリセロール（ＤＭＰＧ）、およびコレステロールからなる群から選択される１つまたは複数の脂質をさらに含む、実施形態１から１７ｃのいずれかに記載の方法である。
実施形態１９は、リポソームのタウペプチドが、配列番号１～配列番号１２からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１～配列番号１２からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、もしくは９５％同一であるアミノ酸配列を有する、実施形態１から１８のいずれかに記載の方法である。
実施形態１９－１は、リポソームのタウペプチドが、配列番号１～３および５～１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むホスホペプチドである、実施形態１９に記載の方法である。
実施形態１９－２は、リポソームのタウホスホペプチドが配列番号１のアミノ酸配列を含む、実施形態１９－１に記載の方法である。
実施形態１９－３は、リポソームのタウホスホペプチドが配列番号２のアミノ酸配列を含む、実施形態１９－１に記載の方法である。
実施形態１９－４は、リポソームのタウホスホペプチドが配列番号３のアミノ酸配列を含む、実施形態１９－１に記載の方法である。
実施形態１９ａは、アミノ酸配列が、タウペプチドがリポソームの表面上に提示されることを可能にする１つまたは複数の修飾をさらに含む、実施形態１９、１９－１、１９－２、１９－３、および１９－４のいずれか一項に記載の方法である。
実施形態１９ｂは、１つまたは複数の修飾が、パルミトイル化およびドデシル修飾のうちの少なくとも１つを含む、実施形態１９ａに記載の方法である。
実施形態１９ｃは、リポソームのタウペプチドがそのＮ末端で１つまたは複数の修飾によって修飾されている、実施形態１９ａまたは１９ｂに記載の方法である。
実施形態１９ｄは、リポソームのタウペプチドがそのＣ末端で１つまたは複数の修飾によって修飾されている、実施形態１９ａから１９ｃのいずれかに記載の方法である。
実施形態１９ｅは、リポソームのタウペプチドがそのＮ末端およびＣ末端の両方でパルミトイル化されている、実施形態１９ｄに記載の方法である。
実施形態１９ｆは、リポソームのタウペプチドが、１つまたは複数の修飾を容易にするための１つまたは複数の追加のアミノ酸をさらに含む、実施形態１９ａから１９ｅのいずれかに記載の方法である。
実施形態１９ｇは、１つまたは複数の追加のアミノ酸が、Ｌｙｓ、Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、およびＴｈｒからなる群から選択される、実施形態１９ｆに記載の方法である。
実施形態１９ｈは、リポソームのタウペプチドがそのＣ末端でアミド化されている、実施形態１９から１９ｇのいずれかに記載の方法である。
実施形態１９ｉは、リポソームのタウペプチドが配列番号２７～配列番号３８からなる群から選択されるアミノ酸配列からなる、実施形態１９から１９ｈのいずれかに記載の方法である。
実施形態１９ｊは、リポソームのタウペプチドが配列番号２７のアミノ酸配列からなる、実施形態１９から１９ｉのいずれかに記載の方法である。
実施形態１９ｋは、リポソームのタウペプチドが配列番号２８のアミノ酸配列からなる、実施形態１９から１９ｉのいずれかに記載の方法である。
実施形態１９ｌは、リポソームのタウペプチドが配列番号２９のアミノ酸配列からなる、実施形態１９から１９ｉのいずれかに記載の方法である。
実施形態２０は、リポソームのヘルパーＴ細胞エピトープが、配列番号２３～配列番号２６からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列を含む、実施形態１から１９ｌのいずれかに記載の方法である。
実施形態２０ａは、ヘルパーＴ細胞エピトープが、配列番号２３～配列番号２６からなる群から選択される少なくとも２つのアミノ酸配列を含む、実施形態２０に記載の方法である。
実施形態２０ｂは、ヘルパーＴ細胞エピトープが、配列番号２３～配列番号２６からなる群から選択される少なくとも３つのアミノ酸配列を含む、実施形態２０に記載の方法である。
実施形態２０ｃは、ヘルパーＴ細胞エピトープが、配列番号２３～配列番号２６の４つのアミノ酸配列を含む、実施形態２０に記載の方法である。
実施形態２０ｄは、配列番号２３～配列番号２６からなる群から選択される２つ以上のアミノ酸配列がリンカーによって共有結合されている、実施形態２０ａから２０ｃのいずれかに記載の方法である。
実施形態２０ｅは、リンカーが、Ｖａｌ（Ｖ）、Ａｌａ（Ａ）、Ａｒｇ（Ｒ）、Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、Ｌｙｓ（Ｋ）からなる群から選択される１つまたは複数のアミノ酸を含む、実施形態２０ｄに記載の方法である。
実施形態２０ｆは、リンカーが、ＶＶＲ、ＧＳ、ＲＲ、およびＲＫからなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態２０ｅに記載の方法である。
実施形態２０ｇは、ヘルパーＴ細胞エピトープがそのＣ末端でアミド化されている、実施形態２０から２０ｆのいずれかに記載の方法である。
実施形態２０ｈは、ヘルパーＴ細胞エピトープが、ヘルパーＴ細胞エピトープの意図する位置に応じて、リポソームの膜内への挿入、リポソームの表面上での提示、またはリポソーム内へのカプセル封入のために修飾されている、実施形態２０から２０ｇのいずれかに記載の方法である。
実施形態２０ｉは、ヘルパーＴ細胞エピトープが配列番号１３～配列番号１７からなる群から選択されるアミノ酸配列からなる、実施形態２０から２０ｈのいずれかに記載の方法である。
実施形態２０ｊは、タウペプチドとヘルパーＴ細胞エピトープとを６：１の重量比で含む、実施形態１から２０ｉのいずれかに記載の方法である。
実施形態２０ｋは、タウペプチドとヘルパーＴ細胞エピトープとを５：１の重量比で含む、実施形態１から２０ｉのいずれかに記載の方法である。
実施形態２０ｌは、タウペプチドとヘルパーＴ細胞エピトープとを４：１の重量比で含む、実施形態１から２０ｉのいずれかに記載の方法である。
実施形態２０ｍは、タウペプチドとヘルパーＴ細胞エピトープとを３：１の重量比で含む、実施形態１から２０ｉのいずれかに記載の方法である。
実施形態２０ｎは、タウペプチドとヘルパーＴ細胞エピトープとを２：１の重量比で含む、実施形態１から２０ｉのいずれかに記載の方法である。
実施形態２０ｏは、タウペプチドとヘルパーＴ細胞エピトープとを１：１の重量比で含む、実施形態１から２０ｉのいずれかに記載の方法である。
実施形態２１は、脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドが配列番号１８～配列番号２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、実施形態１から２０ｏのいずれかに記載の方法である。
実施形態２１ａは、ＣｐＧオリゴヌクレオチドが１つまたは複数のホスホロチオエートヌクレオチド間結合を有する、実施形態２１に記載の方法である。
実施形態２１ｂは、ＣｐＧオリゴヌクレオチドがすべてホスホロチオエートヌクレオチド間結合を有する、実施形態２１ａに記載の方法である。
実施形態２１ｃは、脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドが、リンカーを介して少なくとも１つの親油性基と共有結合しているＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む、実施形態２１から２１ｂのいずれかに記載の方法である。
実施形態２１ｄは、リンカーが（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ｎを含む［式中、ｎは０～１０の整数である。］、実施形態２１ｃに記載の方法である。
実施形態２１ｅは、リンカーが３～１２個の炭素を有するアルキルスペーサーを含む、実施形態２１ｃに記載の方法である。
実施形態２１ｆは、少なくとも１つの親油性基がコレステロールである、実施形態２１から２１ｅのいずれかに記載の方法である。
実施形態２１ｇは、脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドが、（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ｎ［式中、ｎは３～５の整数である。］を含むリンカーを介してコレステロール分子と共有結合している配列番号１８または配列番号１９のヌクレオチド配列を含む、実施形態２１から２１ｆのいずれかに記載の方法である。
実施形態２２は、神経変性障害を患っている対象においてタウタンパク質に対する免疫応答を誘導する方法であって、
対象に、
配列番号２７～配列番号２９および配列番号３１～配列番号３８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する第１のタウホスホペプチドと、
配列番号３９～配列番号４４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するヘルパーＴ細胞エピトープ、好ましくは、配列番号１３～配列番号１７からなる群から選択されるアミノ酸配列からなるヘルパーＴ細胞エピトープと、
配列番号１８～配列番号２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列を有し、１つまたは複数のホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含み、リンカーを介して少なくとも１つのコレステロールと共有結合している、脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと
モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬＡ）と
を含む免疫学的有効量のリポソームと、
薬学的に許容される担体とを含むプライム用組成物を投与することと、
対象に、第２のタウホスホペプチドと、リンカーを介してそれとコンジュゲートさせた免疫原性担体とを含み、式（Ｉ）の構造：
または式（ＩＩ）の構造：
［式中、
ｘは、０～１０、好ましくは２～６、最も好ましくは３の整数であり、
ｎは、３～１５、好ましくは３～１２の整数であり、
担体は、免疫原性担体を表し、
タウペプチドは、第２のタウホスホペプチドを表す。］
を有する、免疫学的有効量のコンジュゲートと、
薬学的に許容される担体とを含む第１のブースト用組成物を投与することと
を含む、方法である。
実施形態２２ａは、リポソームが、
ａ．配列番号２７、配列番号２８、または配列番号２９のアミノ酸配列からなる第１のタウホスホペプチドと、
ｂ．配列番号１３のアミノ酸配列からなるヘルパーＴ細胞エピトープと、
ｃ．（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ｎ［式中、ｎは３～７の整数である。］を含むリンカーを介してコレステロールと共有結合している配列番号１８または配列番号１９のヌクレオチド配列からなる脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと
ｄ．モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬＡ）と
を含む、実施形態２２に記載の方法である。
実施形態２２ｂは、ＭＰＬＡが３－Ｏ－脱アシル－４’－モノホスホリル脂質Ａ、好ましくはＭＰＬ（商標）である、実施形態２２または２２ａに記載の方法である。
実施形態２２ｃは、ＭＰＬＡがモノホスホリルヘキサ－アシル脂質Ａ、３－脱アシル、好ましくは３Ｄ－（６－アシル）ＰＨＡＤ（登録商標）である、実施形態２２または２２ａに記載の方法である。
実施形態２２ｄは、ＭＰＬＡが好ましくは３Ｄ－ＰＨＡＤ（登録商標）である、実施形態２２または２２ａに記載の方法である。
実施形態２３は、ヘルパーＴ細胞エピトープがリポソーム内にカプセル封入されている、実施形態２２から２２ｄのいずれかに記載の方法である。
実施形態２４は、ｘが２～６の整数である、実施形態１から２３のいずれか一つに記載の方法である。
実施形態２５は、ｘが３である、実施形態１から２４のいずれか一つに記載の方法である。
実施形態２６は、ｎが３～７である、実施形態１から２５のいずれかに記載のコンジュゲートである。
実施形態２７は、担体が、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、破傷風トキソイド、ＣＲＭ１９７、および髄膜炎菌（N. meningitidis）由来の外膜タンパク質混合物（ＯＭＰ）、またはその誘導体からなる群から選択される免疫原性担体である、実施形態１から２６のいずれかに記載の方法である。
実施形態２８は、コンジュゲートの第２のタウホスホペプチドが、配列番号１～配列番号３および配列番号５～配列番号１２からなる群から選択されるアミノ酸配列からなる、実施形態１から２７のいずれかに記載の方法である。
実施形態２８ａは、リポソームの第１のタウホスホペプチドおよびコンジュゲートの第２のタウホスホペプチドが同一である、実施形態２８に記載の方法である。
実施形態２８ｂは、リポソームの第１のタウホスホペプチドおよびコンジュゲートの第２のタウホスホペプチドが異なる、実施形態２８に記載の方法である。
実施形態２８ｃは、リポソームの第１のタウホスホペプチドおよびコンジュゲートの第２のタウホスホペプチドが少なくとも１つの共通のエピトープを共有する、実施形態２８ｂに記載の方法である。
実施形態２９は、第２のタウホスホペプチドが、配列番号１、配列番号２、または配列番号３のアミノ酸配列からなる、実施形態２８から２８ｃのいずれか一つに記載の方法である。
実施形態３０は、担体がＣＲＭ１９７である、実施形態１から２９のいずれかに記載の方法である。
実施形態３１は、コンジュゲートが、以下の構造：
［式中、ｎは、３～７である。］
を有する、実施形態１から３０のいずれか一つに記載の方法である。
実施形態３２は、以下の構造：
［式中、
タウペプチドは、配列番号１、配列番号２、または配列番号３からなり、
ｘは、０～１０の整数であり、
ｎは、２～１５の整数であり、
タウペプチドは、タウホスホペプチドを表し、
ＫＬＨは、キーホールリンペットヘモシアニンを表す。］
を有する、実施形態１から２９のいずれか一つに記載のコンジュゲートである。
実施形態３３は、対象に免疫原性有効量のリポソームを含む第２のブースト用組成物を投与することをさらに含む、実施形態１から３２のいずれかに記載の方法である。
実施形態３３ａは、プライム用組成物、第１のブースト用組成物、および／または第２のブースト用組成物がアジュバントをさらに含む、実施形態３３に記載の方法である。
実施形態３３ｂは、アジュバントがＴＬＲ－４リガンドおよびＴＬＲ－９リガンドのうちの少なくとも１つを含む、実施形態３３ａに記載の方法である。
実施形態３４は、第１のブースト用組成物が、プライム用組成物が最初に投与された約２７～３２日後、好ましくは約２９日後に投与される、実施形態１から３３ｂのいずれかに記載の方法である。
実施形態３５は、プライム用組成物が最初に投与された約８２～８７日後、好ましくは約８５日後に第１のブースト用組成物を再投与することをさらに含む、実施形態３４に記載の方法である。
実施形態３６は、プライム用組成物が最初に投与された約１６７～１７２日後、好ましくは約１６９日後に第２のブースト用組成物を投与することをさらに含む、実施形態３５に記載の方法である。
実施形態３７は、第１のブースト用組成物が、プライム用組成物が最初に投与された約８２～８７日後、好ましくは約８５日後に投与される、実施形態１から３３ｂのいずれかに記載の方法である。
実施形態３８は、プライム用組成物が最初に投与された約２７～３２日後、好ましくは約２９日後に第２のブースト用組成物を投与することをさらに含む、実施形態３７に記載の方法である。
実施形態３９は、プライム用組成物が最初に投与された約１６７～１７２日後、好ましくは約１６９日後に第１のブースト用組成物を再投与することをさらに含む、実施形態３５に記載の方法である。
実施形態４０は、それを必要としている対象において神経変性疾患または障害を処置または防止する方法であって、
対象に、
配列番号２７～配列番号２９および配列番号３１～配列番号３８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する第１のタウホスホペプチドと、
配列番号３９～配列番号４４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するヘルパーＴ細胞エピトープ、好ましくは、配列番号１３～配列番号１７からなる群から選択されるアミノ酸配列からなるヘルパーＴ細胞エピトープと、
配列番号１８～配列番号２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列を有し、１つまたは複数のホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含み、リンカーを介して少なくとも１つのコレステロールと共有結合している、脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと
モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬＡ）と
を含み、タウホスホペプチドがリポソームの表面上に提示されている、免疫学的有効量のリポソームと、薬学的に許容される担体とを含むプライム用組成物を投与することと、
対象に、タウホスホペプチドと、リンカーを介してそれとコンジュゲートさせた免疫原性担体とを含み、以下の構造：
［式中、ｎは、３～７の整数である。］
を有する、免疫学的有効量のコンジュゲートと、
薬学的に許容される担体とを含む第１のブースト用組成物を投与することと
を含む、方法である。
実施形態４１は、第１のブースト用組成物が、プライム用組成物が最初に投与された約２７～３２日後、好ましくは約２９日後に投与される、実施形態４０に記載の方法である。
実施形態４２は、プライム用組成物が最初に投与された約８２～８７日後、好ましくは約８５日後に第１のブースト用組成物を再投与することをさらに含む、実施形態４１に記載の方法である。
実施形態４３は、プライム用組成物が最初に投与された約１６７～１７２日後、好ましくは約１６９日後に免疫原性有効量のリポソームを含む第２のブースト用組成物を投与することをさらに含む、実施形態４２に記載の方法である。
実施形態４４は、第１のブースト用組成物が、プライム用組成物が最初に投与された約８２～８７日後、好ましくは約８５日後に投与される、実施形態４０に記載の方法である。
実施形態４５は、プライム用組成物が最初に投与された約２７～３２日後、好ましくは約２９日後に免疫原性有効量のリポソームを含む第２のブースト用組成物を投与することをさらに含む、実施形態４４に記載の方法である。
実施形態４６は、プライム用組成物が最初に投与された約１６７～１７２日後、好ましくは約１６９日後に第１のブースト用組成物を再投与することをさらに含む、実施形態４５に記載の方法である。
実施形態４６ａは、免疫学的有効量のコンジュゲートが１つまたは複数のアジュバントと一緒に投与される、実施形態１から４６のいずれか一つに記載の方法である。
実施形態４６ｂは、アジュバントが、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、および硫酸アルミニウムなどのアルミニウム塩を含む、実施形態４６ａに記載の方法である。
実施形態４６ｃは、アジュバントが、ＣｐＧ２００６（ＣｐＧ７９０９としても知られる）、ＣｐＧ１０１８、ＣｐＧ２３９５、ＣｐＧ２２１６、ＣｐＧ１８２６、またはＣｐＧ２３３６などのＣｐＧを含む、実施形態４６ａまたは４６ｂに記載の方法である。
実施形態４６ｄは、免疫学的有効量のコンジュゲートが、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、および硫酸アルミニウムなどのアルミニウム塩、ならびにＣｐＧ２００６（ＣｐＧ７９０９としても知られる）、ＣｐＧ１０１８、ＣｐＧ２３９５、ＣｐＧ２２１６、ＣｐＧ１８２６、またはＣｐＧ２３３６などのＣｐＧと一緒に投与される、実施形態４６ｃに記載の方法である。
実施形態４６ｅは、免疫学的有効量のコンジュゲートが、リン酸アルミニウムおよびＣｐＧ１０１８と一緒に投与される、実施形態４６ｄに記載の方法である。
実施形態４６ｆは、免疫学的有効量のコンジュゲートが、水酸化アルミニウムおよびＣｐＧ７９０９と一緒に投与される、実施形態４６ｄに記載の方法である。
実施形態４６ｇは、免疫学的有効量のコンジュゲートが、硫酸アルミニウムおよびＣｐＧ２３９５と一緒に投与される、実施形態４６ｄに記載の方法である。
実施形態４６ｈは、免疫学的有効量のコンジュゲートが、水酸化アルミニウムおよびＣｐＧ１８２６と一緒に投与される、実施形態４６ｄに記載の方法である。
実施形態４７は、神経変性疾患または障害が、神経原線維病変の形成によって引き起こされる、またはそれに関連している、実施形態１から４６ｈのいずれかに記載の方法である。
実施形態４８は、神経変性疾患または障害が、アルツハイマー病、パーキンソン病、クロイツフェルト－ヤコブ病、拳闘家認知症、ダウン症候群、ゲルストマン－ストロイスラー－シャインカー病、封入体筋炎、プリオンタンパク質脳アミロイド血管症、外傷性脳傷害、筋萎縮性側索硬化症、グアムのパーキンソン認知症複合、神経原線維のもつれを伴う非グアム型運動ニューロン疾患、嗜銀顆粒性認知症、大脳皮質基底核変性症、レビー認知症、筋萎縮性側索硬化症、石灰化を伴うびまん性の神経原線維のもつれ、前頭側頭型認知症、好ましくは１７番染色体に連鎖するパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、前頭側頭葉認知症、ハレルフォルデン（Hallevorden）－スパッツ病、多系統萎縮症、ニーマン－ピック病Ｃ型、ピック病、進行性皮質下グリオーシス、進行性核上性麻痺、亜急性硬化性汎脳炎、もつれのみの認知症、脳炎後パーキンソニズム、筋緊張性ジストロフィー、慢性外傷性脳障害（ＣＴＥ）、脳血管症、またはレビー小体認知症（ＬＢＤ）である、実施形態１から４７のいずれかに記載の方法である。
実施形態４９は、神経変性疾患または障害が、アルツハイマー病、パーキンソン病、ダウン症候群、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、前頭側頭型認知症と１７番染色体に連鎖するパーキンソニズム（ＦＴＤＰ－１７）、ピック病、およびＰＡＲＴ（原発性加齢関連タウオパチー）、大脳皮質基底核変性症、レビー認知症、筋萎縮性側索硬化症、筋緊張性ジストロフィー（disphasy）、慢性外傷性脳障害（ＣＴＥ）、脳血管症、またはレビー小体認知症（ＬＢＤ）である、実施形態１から４８のいずれかに記載の方法である。
実施形態５０は、神経変性疾患または障害が、アルツハイマー病、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、前頭側頭型認知症と１７番染色体に連鎖するパーキンソニズム（ＦＴＤＰ－１７）、またはピック病、およびＰＡＲＴ（原発性加齢関連タウオパチー）である、実施形態１から４９のいずれかに記載の方法である。
実施形態５１は、神経変性疾患または障害が、アルツハイマー病、パーキンソン病、ダウン症候群、前頭側頭型認知症と１７番染色体に連鎖するパーキンソニズム（ＦＴＤＰ－１７）、大脳皮質基底核変性症、レビー認知症、筋萎縮性側索硬化症、筋緊張性ジストロフィー（disphasy）、慢性外傷性脳障害（ＣＴＥ）、脳血管症、またはレビー小体認知症（ＬＢＤ）である、実施形態１から５０のいずれかに記載の方法である。
実施形態５１ａは、神経変性疾患または障害が、早期アルツハイマー病、アルツハイマー病に起因する軽度認知機能障害（ＭＣＩ）、軽度アルツハイマー病、または軽度から中等度のアルツハイマー病である、実施形態１から５１のいずれかに記載の方法である。
実施形態５２は、実施形態１から５１ａのいずれかにおいて使用されるプライム用組成物と第１のブースト用組成物とを含むキットなどの組合せ物である。
実施形態５３は、免疫学的有効量のリポソームが、１用量あたり約２５ｎｍｏｌｅ～約７５０ｎｍｏｌｅ、好ましくは１用量あたり約９０ｎｍｏｌｅ～約７１５ｎｍｏｌｅまたは１用量あたり約９０ｎｍｏｌｅ～約５３５ｎｍｏｌｅ、たとえば１用量あたり約２５ｎｍｏｌｅ、約３０ｎｍｏｌｅ、約３５ｎｍｏｌｅ、約４０ｎｍｏｌｅ、約４５ｎｍｏｌｅ、約５０ｎｍｏｌｅ、約５５ｎｍｏｌｅ、約６０ｎｍｏｌｅ、約６５ｎｍｏｌｅ、約７０ｎｍｏｌｅ、約７５ｎｍｏｌｅ、約８０ｎｍｏｌｅ、約８５ｎｍｏｌｅ、約９０ｎｍｏｌｅ、約９５ｎｍｏｌｅ、約１００ｎｍｏｌｅ、約１２５ｎｍｏｌｅ、約１５０ｎｍｏｌｅ、約１７５ｎｍｏｌｅ、約２００ｎｍｏｌｅ、約２２５ｎｍｏｌｅ、約２５０ｎｍｏｌｅ、約２７５ｎｍｏｌｅ、約３００ｎｍｏｌｅ、約３２５ｎｍｏｌｅ、約３５０ｎｍｏｌｅ、約３７５ｎｍｏｌｅ、約４００ｎｍｏｌｅ、約４２５ｎｍｏｌｅ、約４５０ｎｍｏｌｅ、約４７５ｎｍｏｌｅ、約５００ｎｍｏｌｅ、約５２５ｎｍｏｌｅ、約５５０ｎｍｏｌｅ、約５７５ｎｍｏｌｅ、約６００ｎｍｏｌｅ、約６２５ｎｍｏｌｅ、約６５０ｎｍｏｌｅ、約６７５ｎｍｏｌｅ、約７００ｎｍｏｌｅ、約７２５ｎｍｏｌｅ、約７５０ｎｍｏｌｅ、またはそれらの間の任意の値の第１のタウホスホペプチドを含有する、実施形態１から５１ａのいずれか一つに記載の方法、または実施形態５２に記載の組合せ物である。
実施形態５３ａは、免疫学的有効量のリポソームが、１用量あたり約２５ｎｍｏｌｅ～約７５０ｎｍｏｌｅ、たとえば１用量あたり約２９．７ｎｍｏｌｅ～約７４２．５ｎｍｏｌｅ、好ましくは１用量あたり約９０ｎｍｏｌｅ～約７１５ｎｍｏｌｅ、たとえば１用量あたり約８９．１ｎｍｏｌｅ～約７１２．８ｎｍｏｌｅ、または１用量あたり約９０ｎｍｏｌｅ～約５３５ｎｍｏｌｅ、たとえば１用量あたり約８９．１ｎｍｏｌｅ～約５３４．６ｎｍｏｌｅ、または１用量あたり約９０ｎｍｏｌｅ～約２６８ｎｍｏｌｅ、たとえば１用量あたり約８９．１ｎｍｏｌｅ～約２６７．３ｎｍｏｌｅの第１のタウホスホペプチドを含有する、実施形態１から５１ａのいずれか一つに記載の方法、または実施形態５２に記載の組合せ物である。
実施形態５３ｂは、免疫学的有効量のリポソームが、１用量あたり約１００μｇ～約２５００μｇ、好ましくは約３００μｇ～約２４００μｇ、たとえば、約１００μｇ、約１５０μｇ、約２００μｇ、約２５０μｇ、約３００μｇ、約４００μｇ、約５００μｇ、約６００μｇ、約７００μｇ、約８００μｇ、約９００μｇ、約１０００μｇ、約１１００μｇ、約１２００μｇ、約１３００μｇ、約１４００μｇ、約１５００μｇ、約１６００μｇ、約１７００μｇ、約１８００μｇ、約１９００μｇ、約２０００μｇ、約２１００μｇ、約２２００μｇ、約２３００μｇ、約２４００μｇ、約２５００μｇ、またはそれらの間の任意の値の第１のタウホスホペプチドを含有する、実施形態５３または５３ａに記載の方法または組合せ物である。
実施形態５３ｃは、第１のタウホスホペプチドが配列番号２７～配列番号３８のうちの１つのアミノ酸配列からなる、実施形態５３から５３ｂのいずれか一つに記載の方法または組合せ物である。
実施形態５３ｄは、第１のタウホスホペプチドが配列番号２８のアミノ酸配列からなる、実施形態５３ｃに記載の方法または組合せ物である。
実施形態５４は、第２のタウホスホペプチドが配列番号１～３または５～１２のアミノ酸配列からなる、実施形態５３から５３ｄのいずれか一つに記載の方法または組合せ物である。
実施形態５４ａは、第２のタウホスホペプチドが配列番号１、２、または３のアミノ酸配列からなる、実施形態５４に記載の方法または組合せ物である。
[実施例１]
リポソームワクチンの調製
対照リポソームワクチンの調製（エタノール注入技法）
対照リポソームワクチンを、エタノール（ＥｔＯＨ）注入技法、次いで押出し成形によって生成した。最初に、ＤＭＰＣ（Ｌｉｐｏｉｄ ＧｍｂＨ、ドイツＬｕｄｗｉｇｓｈａｆｅｎ）、ＤＭＰＧ（Ｌｉｐｏｉｄ ＧｍｂＨ、ドイツＬｕｄｗｉｇｓｈａｆｅｎ）、コレステロール（Ｄｉｓｈｍａｎ、オランダ）、およびＭＰＬＡ（Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ、米国アラバマ州）を、９：１：７：０．０５のモル比で、ＥｔＯＨおよびｔｅｒｔ－ブタノール（ｔ－ＢｕＯＨ）の２０：１（Ｖ／Ｖ）混合物中に６０℃で可溶化した。１０％のＥｔＯＨ濃度を維持するために脂質／エタノール溶液をリン酸緩衝液生理食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ７．４に６０℃で希釈し、多重膜リポソーム小胞（ＭＬＶ）の形成がもたらされた。その後、ＥｍｕｌｓｉＦｌｅｘ－Ｃ５（Ａｖｅｓｔｉｎ、カナダ）を使用して、ＭＬＶを０．０８μｍの孔径を有する直列の３枚のポリカーボネートフィルター（Ｗｈａｔｍａｎ）を通した、５回の連続した押出し成形に供した。生じたリポソームをＰＢＳ、ｐＨ７．４で希釈し、６０℃まで加熱して、タウペプチドを添加する前のリポソーム溶液が得られた。
本明細書中以降、医薬品有効成分（ＡＰＩ）と呼ぶ、配列番号２８に対応する、配列番号２の酢酸テトラパルミトイル化（acetate tetrapalmitoylated）リン酸化タウペプチド（Ｂａｃｈｅｍ ＡＧ、スイス）を、１ｍｇ／ｍＬの濃度の２．０％のオクチルβ－Ｄ－グルコピラノシド（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、米国）を含むＰＢＳ、ｐＨ１１．４に溶かし、ペプチド溶液を６０℃でリポソーム溶液内に注入し、次いで、３０分間、６０℃で撹拌した。濃縮は、標的最終体積までの限外濾過によって行い、緩衝液交換は、ダイアフィルトレーション中にＰＢＳ、ｐＨ７．４を用いて１０回実施した。その後、ＡＰＩがリポソームの表面上に提示された生じたリポソームを、２枚の直列の０．２μｍのポリカーボネートシリンジフィルターを通すことによって滅菌濾過し、最終産物を５℃で保存した。
リポソームＺおよびＺ＋ワクチンの調製
１２００μｇ／ｍｌの最終ＡＰＩ濃度および１２００μｇ／ｍｌの最終Ｔ５０濃度を有するリポソームＺ＋ワクチンは、エタノール注入技法、次いで押出し成形によって生成し、４００μｇ／ｍｌの最終ＡＰＩ濃度および１００μｇ／ｍｌの最終Ｔ５０濃度を有するリポソームＺワクチンは、脂質薄層技術、次いでホモジナイゼーションおよび押出し成形によって生成した。
脂質薄層技法によるリポソームＺワクチンの調製
リポソームＺワクチンは、脂質薄層技術、次いでホモジナイゼーションおよび押出し成形によって生成した。最初に、ＤＭＰＣ（Ｌｉｐｏｉｄ ＧｍｂＨ、ドイツＬｕｄｗｉｇｓｈａｆｅｎ）、ＤＭＰＧ（Ｌｉｐｏｉｄ ＧｍｂＨ、ドイツＬｕｄｗｉｇｓｈａｆｅｎ）、コレステロール（Ｄｉｓｈｍａｎ、オランダ）、およびモノホスホリルヘキサ－アシル脂質Ａ３－脱アシル合成（３Ｄ－（６－アシル）ＰＨＡＤ（登録商標））（Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ、米国アラバマ州）を、９：１：７：０．０５のモル比でＥｔＯＨに６０℃で可溶化した。エタノールを真空下のｒｏｔａｖａｐｏｒで蒸発させて、脂質薄層が得られた。
脂質フィルムを、０．１５ｍｇ／ｍＬのＴ５０ペプチド（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ＆Ｅｌｅｐｈａｎｔｓ、ドイツ）を含有するＰＢＳ、ｐＨ７．４、５％のＤＭＳＯ（すべてＳｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を用いて再水和させた。試料を１５分間穏やかに撹拌し、脂質薄層を溶かすためにさらに激しくボルテックスした。生じた多重膜小胞を１０回の凍結解凍サイクル（液体Ｎ２および３７℃での水浴）に供し、ホモジナイゼーション、次いで０．０８μｍの孔径を有するポリカーボネート膜（Ｗｈａｔｍａｎ、英国）を通した連続押出し成形に供した。ホモジナイゼーションおよび押出し成形ステップはどちらもＥｍｕｌｓｉＦｌｅｘ－Ｃ５（Ａｖｅｓｔｉｎ、カナダ）にて行った。カプセル封入されたＴ５０ペプチドを有する押出し成形したリポソームを限外濾過によって濃縮し、ダイアフィルトレーションによって緩衝液をＰＢＳ、ｐＨ７．４に交換した。生じたリポソームをＰＢＳ、ｐＨ７．４で希釈し、６０℃まで加熱して、タウペプチドおよびアジュバントを添加する前のリポソーム溶液が得られた。
ＣｐＧ２００６－コレステロール（ＣｐＧ２００６－Ｃｈｏｌ）（Ｍｉｃｒｏｓｙｎｔｈ、スイス）は、すべてのヌクレオチド間結合をチオホスフェートとして有しており、５’末端が、ＰＥＧスペーサーによってリン酸結合を介してコレステロール分子で修飾されている、ＤＮＡオリゴヌクレオチドである。ＣｐＧ２００６－コレステロール（ＣｐＧ２００６－Ｃｈｏｌ）（Ｍｉｃｒｏｓｙｎｔｈ、スイス）をＰＢＳ、ｐＨ７．４に１ｍｇ／ｍＬで溶かし、リポソーム溶液内に注入し、次いで１５分間インキュベーションした後に、ＡＰＩを挿入した。
ＡＰＩ（Ｂａｃｈｅｍ ＡＧ、スイス）を、１ｍｇ／ｍＬの濃度の２％のオクチルβ－Ｄ－グルコピラノシド（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、米国）を含むＰＢＳ、ｐＨ１１．４に溶かし、ペプチド溶液を６０℃でリポソーム溶液内に注入し、次いで、３０分間、６０℃で撹拌した。濃縮は限外濾過によって行って標的値（リポソームＺでは４００μｇ／ｍｌのＡＰＩおよび１００μｇ／ｍｌのＴ５０）を得て、緩衝液交換は、ダイアフィルトレーション中にＰＢＳ、ｐＨ７．４を用いて１０回実施した。その後、ＡＰＩがリポソームの表面上に提示された生じたリポソームを、０．２μｍのポリカーボネートシリンジフィルターを通すことによって滅菌濾過し、最終産物を５℃で保存した。
エタノール注入によるリポソームＺ＋ワクチンの調製
リポソームＺ＋ワクチンは、エタノール注入に基づくプロセスを使用して生成した。最初に、ＤＭＰＣ（Ｌｉｐｏｉｄ ＧｍｂＨ、ドイツＬｕｄｗｉｇｓｈａｆｅｎ）、ＤＭＰＧ（Ｌｉｐｏｉｄ ＧｍｂＨ、ドイツＬｕｄｗｉｇｓｈａｆｅｎ）、コレステロール（Ｄｉｓｈｍａｎ、オランダ）、および３Ｄ－（６－アシル）ＰＨＡＤ（登録商標）（Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ、米国アラバマ州）を、約９：１：７：０．０４のモル比でＥｔＯＨに６０℃で可溶化した。Ｔ５０ペプチド（Ｂａｃｈｅｍ ＡＧ、スイス）を１０ｍＭのＨｉｓ／２７０ｍＭのスクロース（ｐＨ５．８～６．０）に溶かした。その後、脂質エタノール溶液を、Ｔ５０ペプチドを含有する溶液内に注入し、１５分間穏やかに撹拌して、多重膜小胞（ＭＬＶ）が生じた。ＭＬＶを、ホモジナイゼーション（リポソームＺ＋では６回）、次いで０．０８μｍの孔径を有するポリカーボネート膜（Ｗｈａｔｍａｎ、英国）を通した連続押出し成形（リポソームＺ＋では５回）に供した。リポソームＺ＋では、ホモジナイゼーションおよび押出し成形ステップはどちらもＥｍｕｌｓｉＦｌｅｘ－Ｃ５（Ａｖｅｓｔｉｎ、カナダ）にて行った。押出し成形したリポソームを限外濾過によって濃縮し、ダイアフィルトレーションによって緩衝液を２０ｍＭのＨｉｓ／１４５ｍＭのＮａＣＬ、ｐＨ７．４に交換した。カプセル封入されたＴ５０ペプチドを有する生じたリポソームを２０ｍＭのＨｉｓ／１４５ｍＭのＮａＣＬ、ｐＨ７．４で希釈し、６０℃まで加熱して、ＡＰＩおよびアジュバントを添加する前のリポソーム溶液が得られた。
ＣｐＧ２００６－Ｃｈｏｌ（リポソームＺ＋ではＭｉｃｒｏｓｙｎｔｈ、スイス）を１ｍｇ／ｍＬの２０ｍＭのＨｉｓ／１４５ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．４に溶かし、リポソーム溶液内に注入し、次いで１５分間インキュベーションした後に、ＡＰＩを挿入した。
ＡＰＩ（Ｂａｃｈｅｍ ＡＧ、スイス）を、１ｍｇ／ｍＬの濃度の１％のオクチルβ－Ｄ－グルコピラノシド（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、米国）と共に炭酸緩衝液、ｐＨ１０．２に溶かし、ペプチド溶液を６０℃でリポソームＺ＋溶液内に注入し、次いで、３０分間、６０℃で撹拌した。Ｔ－Ｌｉｎｅ Ｍｉｘｉｎｇを使用してペプチド溶液を６０℃でリポソームＺ＋溶液内に混合し、次いで、３０分間、６０℃で撹拌した。濃縮は限外濾過によって行って標的値（リポソームＺ＋では１２００μｇ／ｍｌのＡＰＩおよび１２００μｇ／ｍｌのＴ５０）を得て、緩衝液交換は、ダイアフィルトレーション中に１０ｍＭのＨｉｓ／２７０ｍＭのスクロース、ｐＨ６．５を用いて１０回実施した。その後、ＡＰＩがリポソームの表面上に提示された生じたＺ＋リポソームを、０．２μｍのポリカーボネートシリンジ／カプセルフィルターを通すことによって滅菌濾過し、最終産物を５℃で保存した。
[実施例２]
コンジュゲートワクチンの調製
ペプチドおよびアジュバント
この研究において使用したリン酸化タウペプチド（配列番号２）は合成によって生成し（Ｐｅｐｓｃａｎ、オランダ）、ホスホ残基を合成中に付加した。リンカーを介してＣＲＭ担体と共有結合している配列番号２のアミノ酸配列を有するリン酸化タウペプチドを含むコンジュゲートは、本明細書中でコンジュゲートＸと呼ばれる。
ワクチンペプチドを、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）－システイン－アセトアミドプロピオンアミドリンカーを介して、担体タンパク質ＣＲＭ１９７とコンジュゲートさせた。配列番号２のアミノ酸配列を有するリン酸化タウペプチドは合成によって生成し（Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ ＳＡＳ）、ホスホ残基およびＰＥＧ３スペーサーを合成中に付加した。コンジュゲートＸは、担体タンパク質ＣＲＭ１９７を、スクシンイミジル３－（ブロモアセトアミド）プロピオネート（ＳＢＡＰ）リンカーを介して、ペプチドのＮ末端のシステインとコンジュゲートさせることによって製造した。ＮＨＳエステル反応化学を介してＳＢＡＰをＣＲＭ１９７タンパク質第一級アミン（－ＮＨ２）とライゲーションさせた。過剰なＳＢＡＰリンカーは限外濾過およびダイアフィルトレーション（ＵＦ／ＤＦ）を使用して除去した。ＣＲＭ１９７－ＳＢＡＰ中間体をリン酸化タウペプチドとコンジュゲートさせ、反応が完了した後、過剰量のＬ－シスチンを加えて反応をクエンチすることで、コンジュゲーション反応を停止させた。粗ＣＲＭ１９７－ペプチドコンジュゲート生成物をＣａｐｔｏ Ｑ ＩｍｐＲｅｓ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）クロマトグラフィーカラムを使用して精製し、塩均一濃度方法を使用して溶出させた。その後、ＵＦ／ＤＦを使用して、精製したＣＲＭ１９７－ペプチド生成物を、２０ｍＭのトリス、２５０ｍＭのスクロースなどのトリスおよびスクロースを含有する緩衝液、ｐＨ８．１中で配合した。１０％のポリソルベート８０（ＰＳ８０）ストック緩衝液などのＰＳ８０ストック緩衝液を加えて０．０１％のＰＳ８０の最終濃度に到達させることによって、ＣＲＭ１９７－タウペプチド原薬（ＤＳ）ストック溶液を生成した。溶液は濾過の前に十分に混合した。注射前、ストック溶液を、ＰＢＳおよびＣｐＧ／ミョウバンでたとえば０．８ｍｇ／ｍＬのＣＲＭ１９７－タウペプチドの第１の濃度まで希釈し、その後、注射のためにＰＢＳおよびＣｐＧ／ミョウバンで３０ｕｇ／ｍＬのＣＲＭ１９７－タウペプチドの最終濃度までさらに希釈した。実施例３～７の場合、ＣＲＭ１９７－タウペプチドストック溶液を、１０ｍＭのＰＢＳ（ｐＨ７．３）中３．１ｍｇ／ｍＬの濃度に保持し、ＰＢＳ中でさらに希釈して、所望の作用濃度に到達させた。その後、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、ミョウバン、およびＰＢＳを加えてＣＲＭ１９７－タウペプチドに基づいて３０ｕｇ／ｍＬの最終濃度に到達させ、最終配合物を十分に混合した後に、注射を行った。
活性ワクチンを用いてＣＮＳ抗原を標的とすることにおける１つの懸念事項は、非特異的またはオフターゲット炎症が望まない神経病理学的変化を引き起こし得るというものである。このことを調査するために、コンジュゲート組成物を用いて免疫化したマウスからの全脳を採取し、染色して、血管周囲または他の細胞浸潤物を可視化した。免疫化した動物のいずれも、神経炎症、細胞浸潤、または他の望ましくない神経病理学的変化のいかなる徴候も有さなかった（データ示さず）。このことは、ワクチン誘導抗体、およびワクチン接種に対する自然免疫応答がマウスにおいて神経病理学的変化を引き起こさなかったことを示唆した。
以下の実施例は、異なるワクチンレジメンによって誘導される免疫応答の異なる態様を示す。
[実施例３]
異種ワクチン接種はアカゲザルにおいてタウホスホペプチド特異的抗体のエピトープカバレッジを増加させる
すべての動物実験は認可されており、動物実験に関する現地の規制に従って行った。アカゲザルマカク（Macaca mulatta）は、Ｋｕｎｍｉｎｇ Ｂｉｏｍｅｄ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｌｔｄ、中国、Ｙｕｎｎａｎ Ｙｉｎｍｏｒｅ Ｂｉｏ－Ｔｅｃｈ Ｃｏ． ＬＴＤ、中国、およびＹｕｎｎａｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｉｍａｔｅｓ Ｉｎｃ．、中国から入手した。動物は免疫化の開始時に２～５歳であり、最小体重は２．５ｋｇであった。処置の開始前、およびそれ以降は週に１回、詳細な臨床検査を行った。さらに、マカクを日に２回観察し、臨床的徴候を記録した。
リポソームワクチン、たとえばリポソームＺまたはリポソームＺ＋（どちらも、配列番号２のテトラパルミトイル化リン酸化タウペプチド、３Ｄ－（６－アシル）ＰＨＡＤ（登録商標）、脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドＣｐＧ２００６、およびＴ細胞ペプチドＴ５０を含有する）は、本出願全体にわたって「Ａ」と呼ばれる一方で、コンジュゲートワクチン、たとえばコンジュゲートＸ（ＣＲＭ１９７と連結させた配列番号２のリン酸化タウペプチド）は、本出願全体にわたって「Ｂ」と呼ばれる。
アカゲザルマカクの群（ｎ＝３匹の雄および３匹の雌／群）を、１および２９日目に、ｉ）１８００ｕｇの配列番号２の酢酸テトラパルミトイル化リン酸化タウペプチド／用量のリポソームＺワクチン（レジメンＡ－Ａ）、ｉｉ）１５ｕｇ／用量のコンジュゲートＸワクチン（レジメンＢ－Ｂ）、またはｉｉｉ）１日目に１８００ｕｇの配列番号２の酢酸テトラパルミトイル化リン酸化タウペプチド／用量のリポソームＺワクチン、次いで２９日目に１５ｕｇ／用量のコンジュゲートＸワクチン（レジメンＡ－Ｂ）を用いて、皮下で免疫化した。抗体のエピトープ認識プロファイルは、２回目の免疫化（５０日目）の３時間後に、１つのアミノ酸をシフトしたＮ末端ビオチン標識した８量体ペプチドのライブラリー、およびカバーする配列番号２のホスホタウペプチドの全配列、ならびに配列番号４の配列（ＶＹＫＳＰＶＶＳＧＤＴＳＰＲＨＬ、配列番号２の非リン酸化ペプチド）を使用して、エピトープマッピングＥＬＩＳＡによって決定した。
図１Ａ～１Ｃは、リポソームワクチンおよびコンジュゲートワクチンが配列番号２の同じリン酸化タウペプチドを含有するにもかかわらず、リポソームワクチン（リポソームＺ）を用いて免疫化したサルは、ペプチドのＮ末端部分とほとんど結合したＩｇＧ抗体を生じた一方で（Ａ－Ａレジメン、図１Ａ）、コンジュゲートワクチン（コンジュゲートＸ）を用いて免疫化したサルは、ペプチドのＣ末端部分とほとんど結合したＩｇＧ抗体を生じた（Ｂ－Ｂレジメン、図１Ｂ）ことを示す。異種レジメンは、ペプチドのＮ末端部分およびＣ末端部分の両方と結合した抗体を誘導し（Ａ－Ｂレジメン、図１Ｃ）、したがって誘導された抗体のエピトープカバレッジを増加させた。さらに、リポソームワクチン（リポソームＺ）を用いて免疫化したサルにおいて誘導されたＩｇＧ抗体は、非リン酸化ライブラリーと結合しなかった一方で、コンジュゲートワクチン（コンジュゲートＸ）を用いて免疫化したサルにおいて誘導されたＩｇＧ抗体は、非リン酸化８量体ペプチドも認識した。異種レジメン（Ａ－Ｂ）を用いて免疫化したサルにおいて誘導されたＩｇＧ抗体は、中間の非リン酸化ライブラリーとの結合を示した。
[実施例４]
リポソームワクチンを用いたブーストはアカゲザルにおいて「リポソーム様」エピトーププロファイルへの移行を誘導した（Ａ－Ｂ－Ｂ－Ａレジメン）
アカゲザルマカクの群（ｎ＝３匹の雄および３匹の雌／群）を、１日目に１８００ｕｇの配列番号２の酢酸テトラパルミトイル化リン酸化タウペプチド／用量のリポソームＺワクチン、２９および８５日目に１５ｕｇ／用量のコンジュゲートＸワクチン、ならびに１６９日目に再び１８００ｕｇの配列番号２の酢酸テトラパルミトイル化リン酸化タウペプチド／用量のリポソームＺワクチン（レジメンＡ－Ｂ－Ｂ－Ａ）を用いて、皮下で免疫化した。誘導された抗体のエピトープ認識プロファイルは、リポソームワクチンを用いた最後のブーストの１週間前（１６２日目、Ａ－Ｂ－Ｂレジメン）および３週間後（１９０日目、Ａ－Ｂ－Ｂ－Ａレジメン）にエピトープマッピングＥＬＩＳＡによって、実施例３に記載するように決定した。図２は、リポソームを用いたプライミングおよびコンジュゲートワクチンを用いたブーストは、Ｎ末端ＩｇＧ抗体およびＣ末端ＩｇＧ抗体の組合せを誘導した一方で（Ａ－Ｂ－Ｂレジメン）、リポソームワクチンを用いた最後のブーストは、アカゲザルにおいて「リポソーム様」エピトーププロファイルへの移行をもたらした（Ａ－Ｂ－Ｂ－Ａレジメン）ことを示す。データは、本明細書中に記載の新規抗タウワクチンの異種ワクチン接種戦略を使用した抗タウ抗体応答の誘導における高い柔軟性を示す。
要約すると、アカゲザルにおける研究は、ワクチン、すなわちリポソームＺおよびコンジュゲートＸを使用する連続免疫化スケジュールを用いた異種ワクチン接種が、ｐタウおよびＡＤ患者の脳から抽出した病理学的タウに対する抗体価を誘導するだけでなく、両方の第二世代ワクチンにおいて使用される抗原性配列内の誘導される抗体のエピトープカバレッジを増加させもすることを示した。
[実施例５]
リポソームおよびコンジュゲートワクチンを用いた異種ワクチン接種はアカゲザルマカクの血清におけるｅＰＨＦ特異的ＩｇＧ力価および脳脊髄液（ＣＳＦ）におけるタウホスホペプチドに特異的なＩｇＧ抗体を誘導した
成体のアカゲザルマカク（ｎ＝３匹の雄および３匹の雌／群）を、ｉ）１、２９、８５、および１６９日目に１８００ｕｇの配列番号２の酢酸テトラパルミトイル化リン酸化タウペプチド／用量のリポソームＺワクチン（レジメンＡ－Ａ－Ａ－Ａ）、ｉｉ）１、２９、８５、および１６９日目に１８００ｕｇの配列番号２の酢酸テトラパルミトイル化リン酸化タウペプチド／用量のリポソームＺ＋ワクチン（レジメンＡ－Ａ－Ａ－Ａ）、ｉｉｉ）１日目に１８００ｕｇの配列番号２の酢酸テトラパルミトイル化リン酸化タウペプチド／用量のリポソームＺワクチン、２９および８５日目にミョウバンおよびＣｐＧオリゴヌクレオチドＣｐＧ２００６と共に同時注射した１５ｕｇ／用量のコンジュゲートＸワクチン、ならびに１６９日目に１８００ｕｇの配列番号２の酢酸テトラパルミトイル化リン酸化タウペプチド／用量のリポソームＺワクチン（レジメンＡ－Ｂ－Ｂ－Ａ）、ｉｖ）１および２９日目に１８００ｕｇの配列番号２の酢酸テトラパルミトイル化リン酸化タウペプチド／用量のリポソームＺ＋ワクチン、ならびに８５および１６９日目に１５ｕｇ／用量のコンジュゲートＸワクチン（レジメンＡ－Ａ－Ｂ－Ｂ）、またはｖ）１および２９日目に１５ｕｇ／用量のコンジュゲートＸワクチン、ならびに８５および１６９日目に１８００ｕｇの配列番号２の酢酸テトラパルミトイル化リン酸化タウペプチド／用量のリポソームＺ＋ワクチン（レジメンＢ－Ｂ－Ａ－Ａ）を用いて、皮下または筋肉内で免疫化した。出血を１９０日目に行い、血清を単離した。
濃縮対らせん状細線維（ｅＰＨＦ）の調製物は、組織学的に確認されたＡＤ対象の死後脳組織から、不溶性タウのサルコシル抽出によって、ＧｒｅｅｎｂｅｒｇおよびＤａｖｉｅｓの改変方法（Greenberg and Davies, 1991, Proc Natl Acad Sci U S A, 87(15):5827-31）を使用して得た。ｅＰＨＦに特異的な抗体価はＭｅｓｏｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）プラットフォームおよびコーティング抗原としてのｅＰＨＦを使用して評価した。免疫化したサルからの血清をアッセイ緩衝液（ＰＢＳ、０．０５％のＴｗｅｅｎ２０、１％の脱脂乳）中で連続希釈し、９６ウェルＭＳＤプレートに適用した。２時間インキュベーションした後、試料を除去し、プレートをＰＢＳＴ（ＰＢＳ、０．０５％のＴｗｅｅｎ２０）で洗浄した。スルホタグ標識した抗ヒト／サルＩｇＧ抗体を使用して抗体を検出し、次いで、１％のパラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）中の固定ステップの後にＲｅａｄ Ｂｕｆｆｅｒ Ｔを加えた。Ｓｅｃｔｏｒ Ｉｍａｇｅｒ（ＭＳＤ）を使用してプレートを分析した。すべての試料は８つの２倍段階希釈液で実行し、それぞれのプレートに陽性および陰性の対照試料を含めた。任意単位（ＡＵ）／ｍＬで表した抗体価をそれぞれの個々のサルについて計算した。それぞれの各リポソーム性組成物に対するＡ－Ａ－Ａ－Ａを用いて得た力価の幾何平均に対する倍率変化を、それぞれのサルおよび１群あたりの幾何平均について表す。
配列番号２のリン酸化タウペプチドに特異的な抗体価はＭＳＤプラットフォームを使用して評価した。事前にＰＢＳ中１％のＢｌｏｃｋｅｒ Ａで飽和したＧｏｌｄ小スポットストレプトアビジン９６ウェルプレート（ＭＳＤ）を、配列のＮ末端をビオチン標識した配列番号２のリン酸化タウペプチドでコーティングした。免疫化したサルからのＣＳＦをアッセイ緩衝液（ＰＢＳ、０．０５％のＴｗｅｅｎ２０、１％のＢｌｏｃｋｅｒ Ａ）中で連続希釈し、９６ウェルＭＳＤプレートに適用した。２時間インキュベーションした後、試料を除去し、プレートをＰＢＳＴ（ＰＢＳ、０．０５％のＴｗｅｅｎ２０）で洗浄した。スルホタグ標識した抗ヒト／サルＩｇＧ抗体を使用して抗体を検出した後にＲｅａｄ Ｂｕｆｆｅｒ Ｔを加えた。Ｓｅｃｔｏｒ Ｉｍａｇｅｒ（ＭＳＤ）を使用してプレートを分析した。すべての試料は８つの２倍段階希釈液で実行し、それぞれのプレートに陽性および陰性の対照試料を含めた。ＡＵ／ｍＬで表した抗体価をそれぞれの個々のサルについて計算した。それぞれの各リポソーム性組成物に対するＡ－Ａ－Ａ－Ａを用いて得た力価の幾何平均に対する倍率変化を、それぞれのサルおよび１群あたりの幾何平均について表す。高赤血球数を有する試料を分析から除去して、血液汚染に起因する抗体価のあらゆる偏りを回避した。
図３に提示するように、異種レジメンＡ－Ｂ－Ｂ－ＡおよびＡ－Ａ－Ｂ－Ｂ（Ａは、カプセル封入されたＴ５０と、ＴＬＲ４リガンドと、脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドとを有するリポソームワクチン（配列番号２の酢酸テトラパルミトイル化リン酸化タウペプチドを有する）であり、Ｂは、ミョウバンおよびＣｐＧオリゴヌクレオチドと共に同時注射したコンジュゲートワクチン（ＣＲＭ１９７と連結させた配列番号２のホスホペプチド）である）を投与したサルは、同種処置（Ａ－Ａ－Ａ－Ａ）を投与したサルと同等かまたはそれよりも高いｅＰＨＦ特異的力価を１９０日目（４回目の注射の３週間後）に示した（倍率変化≧１）。
しかし、異種レジメンＢ－Ｂ－Ａ－Ａを注射したすべてのサルは、同種処置（Ａ－Ａ－Ａ－Ａ）を投与したサルよりも低いｅＰＨＦ特異的力価を示した（倍率変化≦１）。
図６は、１８３日目（４回目の注射の２週間後）のこれらのサルの脳脊髄液におけるＩｇＧ抗体応答をモニタリングした場合に類似した結論が得られたことを示す。異種レジメンＡ－Ｂ－Ｂ－ＡおよびＡ－Ａ－Ｂ－Ｂ（Ａは、配列番号２の酢酸テトラパルミトイル化リン酸化タウペプチドと、カプセル封入されたＴ５０（ＴＬＲ４リガンド）と、脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドとを有するリポソームワクチンであり、Ｂは、ミョウバンおよびＣｐＧオリゴヌクレオチドと共に同時注射したコンジュゲートワクチン（ＣＲＭ１９７と連結させた配列番号２のホスホペプチド）である）を投与したサルは、同種処置（Ａ－Ａ－Ａ－Ａ）を投与したサルよりも全体的に高い、配列番号２のリン酸化タウペプチドに特異的なＩｇＧ力価を示した（倍率変化≧１）。しかし、異種レジメンＢ－Ｂ－Ａ－Ａを注射したすべてのサルは、同種処置（Ａ－Ａ－Ａ－Ａ）を投与したサルよりも低い、配列番号２のリン酸化タウペプチドに特異的なＩｇＧ力価を示した（倍率変化≦１）。
全体的に、この研究の結果は、全身および局所（ＣＳＦにおける）抗体応答に関して、リポソームワクチンをプライム用組成物として用いる異種レジメンが、コンジュゲートワクチンをプライム用組成物として用いるレジメンと比較してより高いｐタウ特異的ＩｇＧ力価を誘導したことを示す。
[実施例６]
プライマーリポソームワクチンを用いた異種ワクチン接種はアカゲザルにおいて同種レジメンよりも高いタウホスホペプチドおよびｅＰＨＦに特異的なＩｇＧ力価を誘導した
成体のアカゲザルマカク（ｎ＝３匹の雄および３匹の雌／群）を、ｉ）１、２９、および８５日目に１８００ｕｇの配列番号２の酢酸テトラパルミトイル化リン酸化タウペプチド／用量のリポソームＺワクチン（レジメンＡ－Ａ－Ａ）、ｉｉ）１８００ｕｇの配列番号２の酢酸テトラパルミトイル化リン酸化タウペプチド／用量のリポソームＺ＋ワクチン（レジメンＡ－Ａ－Ａ）、ｉｉｉ）１日目に１８００ｕｇの配列番号２の酢酸テトラパルミトイル化リン酸化タウペプチド／用量のリポソームＺワクチン、ならびに２９および８５日目に１５ｕｇ／用量のコンジュゲートＸワクチン（レジメンＡ－Ｂ－Ｂ）、またはｉｖ）１および２９日目に１８００ｕｇの配列番号２の酢酸テトラパルミトイル化リン酸化タウペプチド／用量のリポソームＺ＋ワクチン、ならびに８５日目に１５ｕｇ／用量のコンジュゲートＸワクチン（レジメンＡ－Ａ－Ｂ）を用いて、皮下または筋肉内で免疫化した。出血を１０６日目に行い、血清を単離した。
ホスホタウペプチド特異的ＩｇＧ抗体価は、配列番号２のリン酸化タウペプチドをコーティング抗原として使用して、ＥＬＩＳＡによって決定した。免疫化したサルからの血清をアッセイ緩衝液（ＰＢＳ、０．０５％のＴｗｅｅｎ２０、１％のＢＳＡ）中で連続希釈し、事前に関連ペプチドでコーティングした９６ウェルプレートに適用した。２時間インキュベーションした後、試料を除去し、プレートをＰＢＳＴ（ＰＢＳ、０．０５％のＴｗｅｅｎ２０）で洗浄した。抗体は、ＨＲＰとコンジュゲートさせた抗サルＩｇＧ、次いでＡＢＴＳ基質（Ｒｏｃｈｅ）を使用して検出した。すべての試料は８つの２倍段階希釈液で実行し、それぞれのプレートに陽性および陰性の対照試料を含めた。データは、個々のエンドポイント力価（肯定応答を誘導する最後の血清希釈率）として、１群あたりの幾何平均と共に表した。チューキーの多重比較を用いる一元配置ＡＮＯＶＡ検定を統計分析のために使用した。
ｅＰＨＦに特異的な抗体価はＭＳＤプラットフォームを使用して評価した。事前にＰＢＳ中１％のＢＳＡで飽和したＧｏｌｄ小スポットストレプトアビジン９６ウェルプレート（ＭＳＤ）を、ビオチン標識した抗タウ捕捉抗体（ＨＴ７－ビオチン、ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）でコーティングした後、アルツハイマー病患者の脳から単離したｅＰＨＦと共にインキュベーションした。１時間インキュベーションした後、プレートをＰＢＳＴで洗浄し、血清の段階希釈液を加え、２時間インキュベートした。スルホタグ標識した抗ヒト／サルＩｇＧ抗体を使用して結合抗体を検出し、次いで、１％のＰＦＡ中の固定ステップの後にＲｅａｄ Ｂｕｆｆｅｒ Ｔを加えた。Ｓｅｃｔｏｒ Ｉｍａｇｅｒ（ＭＳＤ）を使用してプレートを分析した。すべての試料は８つの２倍段階希釈液で実行し、それぞれのプレートに陽性および陰性の対照試料を含めた。結果は、それぞれの個々のサルについてＡＵ／ｍＬで、１群あたりの幾何平均と共に表した。１０６日目でのｅＰＨＦ特異的抗体価を表す。チューキーの多重比較を用いる一元配置ＡＮＯＶＡ検定を統計分析のために使用した。
図４Ａは、異種レジメンＡ－Ａ－ＢおよびＡ－Ｂ－Ｂがアカゲザルにおいて同種レジメンＡ－Ａ－Ａよりも統計学的に有意に高いレベルのホスホタウペプチドに特異的なＩｇＧ抗体を誘導したことを示す。
図４Ｂは、異種レジメンＡ－Ａ－Ｂは、アカゲザルにおいて同種レジメンＡ－Ａ－Ａよりも統計学的に有意に高いレベルのｅＰＨＦ特異的ＩｇＧ抗体を誘導した一方で、Ａ－Ｂ－Ｂは、アカゲザルにおいて同種レジメンＡ－Ａ－Ａよりも高いレベルのｅＰＨＦ特異的ＩｇＧ力価へ向かう傾向を示したことを示す。
全体的に、データは、リポソームワクチン（Ａ）をプライム用組成物として用いる異種免疫化レジメンが、同種レジメンＡ－Ａ－Ａよりも高い、配列番号２のリン酸化タウペプチドおよびｅＰＨＦに対する抗体の力価を誘導したことを示す。
[実施例７]
異種レジメンによって誘導されるｅＰＨＦ特異的ＩｇＧ抗体の品質はアカゲザルにおいて同種レジメンによって誘導されるものと同等かまたはそれよりも良好である
成体のアカゲザルマカク（ｎ＝３匹の雄および３匹の雌／群）を、ｉ）１、２９、８５、および１６９日目に１８００ｕｇの配列番号２の酢酸テトラパルミトイル化リン酸化タウペプチド／用量のリポソームＺワクチン（レジメンＡ－Ａ－Ａ－Ａ）、もしくはｉｉ）１日目に１８００ｕｇの配列番号２の酢酸テトラパルミトイル化リン酸化タウペプチド／用量のリポソームＺワクチン、２９および８５日目に１５ｕｇ／用量のコンジュゲートＸワクチン、ならびに１６９日目に１８００ｕｇの配列番号２の酢酸テトラパルミトイル化リン酸化タウペプチド／用量のリポソームＺワクチン（レジメンＡ－Ｂ－Ｂ－Ａ）を用いて、皮下で、またはｉｉｉ）１、２９、８５、および１６９日目に１８００ｕｇの配列番号２の酢酸テトラパルミトイル化リン酸化タウペプチド／用量のリポソームＺ＋ワクチン（レジメンＡ－Ａ－Ａ－Ａ）、もしくはｉｖ）１および２９日目に１８００ｕｇの配列番号２の酢酸テトラパルミトイル化リン酸化タウペプチド／用量のリポソームＺ＋ワクチン、ならびに８５および１６９日目に１５ｕｇ／用量のコンジュゲートＸワクチン（レジメンＡ－Ａ－Ｂ－Ｂ）を用いて、筋肉内で免疫化した。出血を１９０日目に行い、血清を単離した。
濃縮対らせん状細線維（ｅＰＨＦ）に特異的な抗体の品質は、ＭＳＤプラットフォームを使用して、低コーティング濃度のｅＰＨＦとの結合（本明細書中で限定的コーティング条件下とも呼ばれる）として評価した。免疫化したサルからの血清をアッセイ緩衝液（ＰＢＳ、０．０５％のＴｗｅｅｎ２０、１％の脱脂乳）中で連続希釈し、９６ウェルＭＳＤプレートに適用した。２時間インキュベーションした後、試料を除去し、プレートをＰＢＳＴ（ＰＢＳ、０．０５％のＴｗｅｅｎ２０）で洗浄した。スルホタグ標識した抗ヒト／サルＩｇＧ抗体を使用して抗体を検出し、次いで、１％のＰＦＡ中の固定ステップの後にＲｅａｄ Ｂｕｆｆｅｒ Ｔを加えた。Ｓｅｃｔｏｒ Ｉｍａｇｅｒ（ＭＳＤ）を使用してプレートを分析した。すべての試料は８つの２倍段階希釈液で実行し、それぞれのプレートに陽性および陰性の対照試料を含めた。ＡＵ／ｍＬで表した抗体価をそれぞれの個々のサルについて計算した。
ホスホタウペプチド特異的ＩｇＧ抗体価は、配列番号２のリン酸化タウペプチドをコーティング抗原として使用して、ＥＬＩＳＡによって決定した。免疫化したサルからの血清をアッセイ緩衝液（ＰＢＳ、０．０５％のＴｗｅｅｎ２０、１％のＢＳＡ）中で連続希釈し、事前に関連ペプチドでコーティングした９６ウェルプレートに適用した。２時間インキュベーションした後、試料を除去し、プレートをＰＢＳＴ（ＰＢＳ、０．０５％のＴｗｅｅｎ２０）で洗浄した。抗体は、ＨＲＰとコンジュゲートさせた抗サルＩｇＧ、次いでＡＢＴＳ基質（Ｒｏｃｈｅ）を使用して検出した。すべての試料は８つの２倍段階希釈液で実行し、それぞれのプレートに陽性および陰性の対照試料を含めた。データは、個々のエンドポイント力価（肯定応答を誘導する最後の血清希釈率）として、１群あたりの幾何平均と共に表した。
汎Ｔ細胞エピトープ（Ｔ５０）特異的ＩｇＧ抗体価は、Ｔ５０ペプチドをコーティング抗原として使用して、ＥＬＩＳＡによって決定した。免疫化したサルからの血清をアッセイ緩衝液（ＰＢＳ、０．０５％のＴｗｅｅｎ２０、１％の脱脂乳）中で連続希釈し、事前に関連ペプチドでコーティングした９６ウェルプレートに適用した。２時間インキュベーションした後、試料を除去し、プレートをＰＢＳＴ（ＰＢＳ、０．０５％のＴｗｅｅｎ２０）で洗浄した。抗体は、ＨＲＰとコンジュゲートさせた抗サルＩｇＧ、次いでＡＢＴＳ基質（Ｒｏｃｈｅ）を使用して検出した。すべての試料は８つの２倍段階希釈液で実行し、それぞれのプレートに陽性および陰性の対照試料を含めた。データは、個々のエンドポイント力価（肯定応答を誘導する最後の血清希釈率）として、１群あたりの幾何平均と共に表した。
ホスホタウペプチド特異的ＩｇＧ抗体価と汎Ｔ細胞エピトープ（Ｔ５０）特異的ＩｇＧ抗体価との間の倍率変化を、それぞれのサルおよび１群あたりの幾何平均について表す。マン－ホイットニー検定を統計分析のために使用した。
図５Ａおよび５Ｂは、高結合能を有する抗体を反映する、限定的コーティング条件下でのｅＰＨＦ特異的ＩｇＧ力価を示す。図５Ａは、Ａ－Ｂ－Ｂ－ＡレジメンはＡ－Ａ－Ａ－Ａレジメンよりもわずかに高い抗体価を誘導した一方で、Ａ－Ａ－Ｂ－Ｂは同等のＩｇＧ力価を誘導したことを示す。さらに、図３に示すように、異種レジメンＡ－Ｂ－Ｂ－ＡおよびＡ－Ａ－Ｂ－Ｂは、リポソームワクチン単独を用いた同種レジメン（Ａ－Ａ－Ａ－Ａレジメン）と比較して全体的に同等かまたはより高いｅＰＨＦ特異的抗体価を誘導した（倍率変化≧１）。全体的に、データは、異種ワクチン接種によって誘導されるｅＰＨＦ特異的抗体の品質がアカゲザルにおいて同種Ａ－Ａ－Ａ－Ａワクチン接種レジメンによって誘導される抗体の品質と同等かまたはそれよりも良好であることを示唆する。
理論に拘束されることを望まないが、本出願による異種レジメンはＣＤ４ Ｔ細胞応答を多様化すると考えられている。胚中心の限定的な空間のために、同じＣＤ４ヘルパーエピトープ／タンパク質（たとえば破傷風）を用いて免疫化し続ける場合、破傷風特異的ＢおよびＴ細胞はタウ特異的Ｂ細胞を胚中心の外へ押し出す。他方、２種類のＣＤ４刺激を交互に行う場合、タウ特異的Ｂ細胞（破傷風またはジフテリア特異的Ｔ細胞からの支援も受けている）はそれらをより良好に利用することができる。本発明において、Ａ－Ａ－Ａ－Ａレジメンを使用した場合、Ｔ５０ヘルパーペプチドに対する抗体の力価が大きく増加したことが観察された。ＡおよびＢの異種レジメンを使用した場合、Ｔ５０ヘルパーペプチドに対する抗体の力価はそれよりもはるかに低かった。図７は、配列番号２のリン酸化タウペプチドに対して向けられたＩｇＧ抗体価とＴ５０ペプチドに対して向けられたＩｇＧ抗体価との間の比が、異種レジメン（Ａ－Ｂ－Ｂ－ＡおよびＡ－Ａ－Ｂ－Ｂ）において、それぞれの同種レジメン（Ａ－Ａ－Ａ－Ａ）と比較してより高かったことを示す。これは、ＣＤ４ Ｔ細胞応答の多様性の反映であり、Ｔ５０特異的Ｂ細胞応答が抗ｐタウ応答を完全には支配していないことも実証する。
本明細書中に記載した実施例および実施形態は例示を目的としたものに過ぎず、上に記載した実施形態を、その広い発明概念から逸脱することなく変更できることが理解される。したがって、本発明は、開示される特定の実施形態に限定されるのではなく、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の趣旨および範囲内の修正を網羅することが意図されていると理解される。
［配列表］
配列番号１－ホスホタウペプチド（７．１）
ＧＤＲＳＧＹＳ［ｐＳ］ＰＧ［ｐＳ］ＰＧ［ｐＴ］ＰＧＳＲＳＲＴ
配列番号２－ホスホタウペプチド（Ｔ３．５）
ＶＹＫ［ｐＳ］ＰＶＶＳＧＤＴ［ｐＳ］ＰＲＨＬ
配列番号３－ホスホタウペプチド（２２．１）
ＳＳＴＧＳＩＤＭＶＤ［ｐＳ］ＰＱＬＡ［ｐＴ］ＬＡ
配列番号４－タウペプチド
ＶＹＫＳＰＶＶＳＧＤＴＳＰＲＨＬ
配列番号５－ホスホタウペプチド
ＲＥＮＡＫＡＫＴＤＨＧＡＥＩＶＹＫ［ｐＳ］ＰＶＶＳＧＤＴ［ｐＳ］ＰＲＨＬ
配列番号６－ホスホタウペプチド
ＲＱＥＦＥＶＭＥＤＨＡＧＴ［ｐＹ］ＧＬ
配列番号７－ホスホタウペプチド
ＰＧＳＲＳＲ［ｐＴ］Ｐ［ｐＳ］ＬＰＴＰＰＴＲ
配列番号８－ホスホタウペプチド
ＧＹＳＳＰＧ［ｐＳ］ＰＧ［ｐＴ］ＰＧＳＲＳＲ
配列番号９－ホスホタウペプチド
ＧＤＴ［ｐＳ］ＰＲＨＬ［ｐＳ］ＮＶＳＳＴＧＳＩＤ
配列番号１０－ホスホタウペプチド
ＰＧ［ｐＳ］ＰＧ［ｐＴ］ＰＧＳＲＳＲ［ｐＴ］Ｐ［ｐＳ］ＬＰ
配列番号１１－ホスホタウペプチド
ＨＬ［ｐＳ］ＮＶＳＳＴＧＳＩＤ
配列番号１２－ホスホタウペプチド
ＶＳＧＤＴ［ｐＳ］ＰＲＨＬ
配列番号１３－Ｔ５０ Ｔ細胞エピトープ
ＡＫＦＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡＶＶＲＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬＶＶＲＦＮＮＦＴＶＳＦＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥ－ＮＨ２
配列番号１４－Ｔ４６ Ｔ細胞エピトープ
ＡＫＦＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡＧＳＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬＧＳＦＮＮＦＴＶＳＦＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥＫ（Ｐａｌ）Ｋ（Ｐａｌ）－ＮＨ２
配列番号１５－Ｔ４８ヘルパーＴ細胞エピトープ
ＡＫＦＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡＧＳＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬＧＳＦＮＮＦＴＶＳＦＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥＧＳＬＩＮＳＴＫＩＹＳＹＦＰＳＶＩＳＫＶＮＱ－ＮＨ２
配列番号１６－Ｔ５１ヘルパーＴ細胞エピトープ
ＡＫＦＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡＲＲＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬＲＲＦＮＮＦＴＶＳＦＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥ－ＮＨ２
配列番号１７－Ｔ５２ヘルパーＴ細胞エピトープ
ＡＫＦＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡＲＫＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬＲＫＦＮＮＦＴＶＳＦＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥ－ＮＨ２
配列番号１８－ＣｐＧ２００６（ＣｐＧ７９０９としても知られる）
５’－ｔｃｇｔｃｇｔｔｔｔｇｔｃｇｔｔｔｔｇｔｃｇｔｔ－３’
ただし、小文字はホスホロチオエート（ｐｓ）ヌクレオチド間結合を意味する
配列番号１９－ＣｐＧ１０１８
５’－ｔｇａｃｔｇｔｇａａｃｇｔｔｃｇａｇａｔｇａ－３’
ただし、小文字はホスホロチオエートヌクレオチド間結合を意味する
配列番号２０－ＣｐＧ２３９５
５’－ｔｃｇｔｃｇｔｔｔｔｃｇｇｃｇｃｇｃｇｃｃｇ－３’
ただし、小文字はホスホロチオエートヌクレオチド間結合を意味する
配列番号２１－ＣｐＧ２２１６
５’－ｇｇＧＧＧＡＣＧＡＴＣＧＴＣｇｇｇｇｇｇ－３’
ただし、小文字はホスホロチオエートヌクレオチド間結合を意味し、大文字はリン酸ジエステル（ｐｏ）結合を意味する
配列番号２２－ＣｐＧ２３３６
５’－ｇｇｇＧＡＣＧＡＣＧＴＣＧＴＧｇｇｇｇｇｇ －３’、
ただし、小文字はホスホロチオエートヌクレオチド間結合を意味し、大文字はリン酸ジエステル結合を意味する
配列番号２３－Ｐａｎ ＤＲエピトープ（ＰＡＤＲＥ）ペプチド
ＡＫＦＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡ
配列番号２４－Ｐ２
ＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬ
配列番号２５－Ｐ３０
ＦＮＮＦＴＶＳＦＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥ
配列番号２６－ＴＴ５８６～６０５
ＬＩＮＳＴＫＩＹＳＹＦＰＳＶＩＳＫＶＮＱ
配列番号２７－パルミトイル化ホスホタウペプチド（パルミトイル化７．１）
Ｋ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）ＧＤＲＳＧＹＳ［ｐＳ］ＰＧ［ｐＳ］ＰＧ［ｐＴ］ＰＧＳＲＳＲＴＫ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）
配列番号２８－パルミトイル化ホスホタウペプチド（Ｔ３、パルミトイル化Ｔ３．５、パルミトイル化された配列番号２）
Ｋ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）ＶＹＫ［ｐＳ］ＰＶＶＳＧＤＴ［ｐＳ］ＰＲＨＬＫ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）
配列番号２９－パルミトイル化ホスホタウペプチド（パルミトイル化２２．１）
Ｋ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）ＳＳＴＧＳＩＤＭＶＤ［ｐＳ］ＰＱＬＡ［ｐＴ］ＬＡＫ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）
配列番号３０－パルミトイル化タウペプチド
Ｋ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）ＶＹＫＳＰＶＶＳＧＤＴＳＰＲＨＬＫ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）
配列番号３１－パルミトイル化ホスホタウペプチド
Ｋ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）ＲＥＮＡＫＡＫＴＤＨＧＡＥＩＶＹＫ［ｐＳ］ＰＶＶＳＧＤＴ［ｐＳ］ＰＲＨＬＫ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）
配列番号３２－パルミトイル化ホスホタウペプチド
Ｋ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）ＲＱＥＦＥＶＭＥＤＨＡＧＴ［ｐＹ］ＧＬＫ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）
配列番号３３－パルミトイル化ホスホタウペプチド
Ｋ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）ＰＧＳＲＳＲ［ｐＴ］Ｐ［ｐＳ］ＬＰＴＰＰＴＲＫ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）
配列番号３４－パルミトイル化ホスホタウペプチド
Ｋ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）ＧＹＳＳＰＧ［ｐＳ］ＰＧ［ｐＴ］ＰＧＳＲＳＲＫ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）
配列番号３５－パルミトイル化ホスホタウペプチド
Ｋ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）ＧＤＴ［ｐＳ］ＰＲＨＬ［ｐＳ］ＮＶＳＳＴＧＳＩＤＫ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）
配列番号３６－パルミトイル化ホスホタウペプチド
Ｋ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）ＰＧ［ｐＳ］ＰＧ［ｐＴ］ＰＧＳＲＳＲ［ｐＴ］Ｐ［ｐＳ］ＬＰＫ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）
配列番号３７－パルミトイル化ホスホタウペプチド
Ｋ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）ＨＬ［ｐＳ］ＮＶＳＳＴＧＳＩＤＫ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）
配列番号３８－パルミトイル化ホスホタウペプチド
Ｋ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）ＶＳＧＤＴ［ｐＳ］ＰＲＨＬＫ（ｐａｌ）Ｋ（ｐａｌ）
配列番号３９－Ｃ末端アミドなしのＴ５０
ＡＫＦＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡＶＶＲＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬＶＶＲＦＮＮＦＴＶＳＦＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥ
配列番号４０－Ｃ末端の－Ｌｙｓ（Ｐａｌ）－Ｌｙｓ（Ｐａｌ）－ＮＨ２なしのＴ４６
ＡＫＦＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡＧＳＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬＧＳＦＮＮＦＴＶＳＦＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥ
配列番号４１－Ｃ末端アミドなしのＴ４８
ＡＫＦＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡＧＳＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬＧＳＦＮＮＦＴＶＳＦＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥＧＳＬＩＮＳＴＫＩＹＳＹＦＰＳＶＩＳＫＶＮＱ
配列番号４２－Ｃ末端アミドなしのＴ５１
ＡＫＦＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡＲＲＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬＲＲＦＮＮＦＴＶＳＦＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥ
配列番号４３－Ｃ末端アミドなしのＴ５２
ＡＫＦＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡＲＫＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬＲＫＦＮＮＦＴＶＳＦＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥ
配列番号４４－Ｔ５７（５６、５７）
ＡＫＦＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡＶＶＲＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬＶＶＲＦＮＮＦＴＶＳＦＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥ－Ｋ（Ｐａｌ）Ｋ（Ｐａｌ）－ＮＨ２
参考文献
以下に、本願の当初の特許請求の範囲に記載の発明を列挙する。
［発明１］
それを必要としている対象においてリン酸化タウおよび濃縮対らせん状細線維（ｅＰＨＦ）のうちの少なくとも１つに対する抗体を誘導する方法であって、
（ｉ）前記対象に、
ａ．第１のタウホスホペプチドと、
ｂ．ヘルパーＴ細胞エピトープと、
ｃ．脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと、
ｄ．トール様受容体４リガンドを含有するアジュバントと
を含み、前記タウホスホペプチドがリポソームの表面上に提示されている、免疫学的有効量の前記リポソームを含み、薬学的に許容される担体をさらに含む、プライム用組成物を投与することと、
（ｉｉ）前記対象に、第２のタウホスホペプチドと、リンカーを介してそれとコンジュゲートさせた免疫原性担体とを含み、式（Ｉ）の構造：
または式（ＩＩ）の構造：
［式中、
ｘは、０～１０、好ましくは２～６、最も好ましくは３の整数であり、
ｎは、３～１５、好ましくは３～１２の整数であり、
タウペプチドは、前記第２のタウホスホペプチドを表し、
担体は、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、破傷風トキソイド、ＣＲＭ１９７、および髄膜炎菌（N. meningitidis）由来の外膜タンパク質混合物（ＯＭＰ）、またはその誘導体からなる群から選択される前記免疫原性担体を表す。］
を有する、免疫学的有効量のコンジュゲートを含み、
薬学的に許容される担体をさらに含む、第１のブースト用組成物を投与することと
を含み、
前記第１のタウホスホペプチドおよび前記第２のタウホスホペプチドが、それぞれ独立して、配列番号１～配列番号３および配列番号５～配列番号１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、前記方法。
［発明２］
前記リポソームが、
ａ．配列番号２７～配列番号２９および配列番号３１～配列番号３８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する前記第１のタウホスホペプチドと、
ｂ．配列番号３９～配列番号４４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する前記ヘルパーＴ細胞エピトープ、好ましくは、配列番号１３～配列番号１７からなる群から選択されるアミノ酸配列からなる前記ヘルパーＴ細胞エピトープと、
ｃ．配列番号１８～配列番号２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列を有し、１つまたは複数のホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含み、リンカーを介して少なくとも１つのコレステロールと共有結合している、前記脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと
ｄ．モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬＡ）と
を含み、
前記コンジュゲートが、前記リンカーを介してＣＲＭ１９７とコンジュゲートさせた、配列番号１～配列番号３または配列番号５～配列番号１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する前記第２のタウホスホペプチドを含む、発明１に記載の方法。
［発明３］
前記コンジュゲートが、以下の構造：
［式中、ｎは、３～７の整数である。］
を有する、発明１または２に記載の方法。
［発明４］
それを必要としている対象においてリン酸化タウおよび濃縮対らせん状細線維（ｅＰＨＦ）のうちの少なくとも１つに対する抗体を誘導する方法であって、
（ｉ）前記対象に、
ａ．配列番号２７～配列番号２９または配列番号３１～配列番号３８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する第１のタウホスホペプチドと、
ｂ．配列番号３９～配列番号４４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するヘルパーＴ細胞エピトープ、好ましくは、配列番号１３～配列番号１７からなる群から選択されるアミノ酸配列からなるヘルパーＴ細胞エピトープと、
ｃ．配列番号１８～配列番号２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列を有し、１つまたは複数のホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含み、リンカーを介して少なくとも１つのコレステロールと共有結合している、脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと
ｄ．モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬＡ）と
を含み、前記第１のタウホスホペプチドがリポソームの表面上に提示されている、免疫学的有効量の前記リポソームを含み、薬学的に許容される担体をさらに含む、プライム用組成物を投与することと、
（ｉｉ）前記対象に、第２のタウホスホペプチドと、リンカーを介してそれとコンジュゲートさせた免疫原性担体とを含み、以下の構造：
［式中、ｎは、３～７の整数である。］
を有する免疫学的有効量のコンジュゲートを含み、薬学的に許容される担体をさらに含む、第１のブースト用組成物を投与することと
を含む、前記方法。
［発明５］
それを必要としている対象においてリン酸化タウおよび濃縮対らせん状細線維（ｅＰＨＦ）のうちの少なくとも１つに対する抗体を誘導する方法であって、
（ｉ）前記対象に、
（１）配列番号２８のアミノ酸配列を有する第１のタウホスホペプチドと、
（２）モノホスホリルヘキサ－アシル脂質Ａ、３－脱アシルを含むトール様受容体４作用剤と、
（３）配列番号３９のアミノ酸配列を含むヘルパーＴ細胞エピトープと、
（４）配列番号１８のヌクレオチド配列を含む脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと、
（５）１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホリル－３’－ｒａｃ－グリセロール（ＤＭＰＧ）、およびコレステロールからなる群から選択される少なくとも１つの脂質と
を含み、前記第１のタウホスホペプチドがリポソームの表面上に提示されている、免疫学的有効量の前記リポソームを含み、薬学的に許容される担体をさらに含む、プライム用組成物を投与することと、
（ｉｉ）前記対象に、第２のタウホスホペプチドと、リンカーを介してそれとコンジュゲートさせた免疫原性担体とを含み、以下の構造：
［式中、ｎは、３～７の整数である。］
を有する免疫学的有効量のコンジュゲートを含み、薬学的に許容される担体をさらに含む、第１のブースト用組成物を投与することと
を含む、前記方法。
［発明６］
前記第１のブースト用組成物の初回投与後、前記第１のブースト用組成物を前記対象に少なくとも１回投与することをさらに含む、発明１～５のいずれか一つに記載の方法。
［発明７］
前記対象に免疫学的有効量の前記リポソームと薬学的に許容される担体とを含む第２のブースト用組成物を投与することをさらに含む、発明１～６のいずれか一つに記載の方法。
［発明８］
前記第２のブースト用組成物の初回投与後、前記対象に前記第２のブースト用組成物を少なくとも１回投与することをさらに含む、発明７に記載の方法。
［発明９］
それを必要としている対象においてリン酸化タウおよび濃縮対らせん状細線維（ｅＰＨＦ）のうちの少なくとも１つに対する抗体を誘導する方法であって、
（ｉ）前記対象に、
（１）配列番号２８のアミノ酸配列を有する第１のタウホスホペプチドと、
（２）モノホスホリルヘキサ－アシル脂質Ａ、３－脱アシルを含むトール様受容体４作用剤と、
（３）配列番号３９のアミノ酸配列を含むヘルパーＴ細胞エピトープと、
（４）配列番号１８のヌクレオチド配列を含む脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと、
（５）１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホリル－３’－ｒａｃ－グリセロール（ＤＭＰＧ）、およびコレステロールからなる群から選択される少なくとも１つの脂質と
を含み、前記第１のタウホスホペプチドがリポソームの表面上に提示されている、免疫学的有効量の前記リポソームを含み、薬学的に許容される担体をさらに含む、プライム用組成物を投与することと、
（ｉｉ）前記対象に、第２のタウホスホペプチドと、リンカーを介してそれとコンジュゲートさせた免疫原性担体とを含み、以下の構造：
［式中、ｎは、３～７の整数である。］
を有する免疫学的有効量のコンジュゲートを含み、薬学的に許容される担体をさらに含む、第１のブースト用組成物を投与することと、
（ｉｉｉ）前記対象に、前記第１のブースト用組成物、または免疫学的有効量の前記リポソームと薬学的に許容される担体とを含む第２のブースト用組成物を投与することと
を含む、前記方法。
［発明１０］
（ｉｉ）が（ｉｉｉ）の前に実施される、発明９に記載の方法。
［発明１１］
（ｉｉ）が（ｉｉｉ）の後に実施される、発明９に記載の方法。
［発明１２］
前記第１のブースト用組成物の初回投与後、前記第１のブースト用組成物を前記対象に少なくとも１回投与することをさらに含む、発明９～１１のいずれか一つに記載の方法。
［発明１３］
前記第２のブースト用組成物を前記対象に少なくとも１回投与することを含む、発明９～１２のいずれか一つに記載の方法。
［発明１４］
前記対象が、神経原線維病変の形成によって引き起こされるまたはそれに関連する神経変性疾患または障害の処置を必要としている、発明１～１３のいずれか一つに記載の方法。
［発明１５］
前記神経変性疾患または障害が、アルツハイマー病、パーキンソン病、クロイツフェルト－ヤコブ病、拳闘家認知症、ダウン症候群、ゲルストマン－ストロイスラー－シャインカー病、封入体筋炎、プリオンタンパク質脳アミロイド血管症、外傷性脳傷害、筋萎縮性側索硬化症、グアムのパーキンソン認知症複合、神経原線維のもつれを伴う非グアム型運動ニューロン疾患、嗜銀顆粒性認知症、大脳皮質基底核変性症、レビー認知症、筋萎縮性側索硬化症、石灰化を伴うびまん性の神経原線維のもつれ、１７番染色体に連鎖するパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、ハレルフォルデン－スパッツ病、多系統萎縮症、ニーマン－ピック病Ｃ型、ピック病、進行性皮質下グリオーシス、進行性核上性麻痺、亜急性硬化性汎脳炎、もつれのみの認知症、脳炎後パーキンソニズム、筋緊張性ジストロフィー、慢性外傷性脳障害（ＣＴＥ）、脳血管症、またはレビー小体認知症（ＬＢＤ）である、発明１４に記載の方法。
［発明１６］
前記対象が、アルツハイマー病、好ましくは早期アルツハイマー病、アルツハイマー病に起因する軽度認知機能障害（ＭＣＩ）、または軽度から中等度のアルツハイマー病の処置を必要としている、発明１５に記載の方法。
［発明１７］
前記免疫学的有効量の前記リポソームが、１用量あたり約２５ｎｍｏｌｅ～約７５０ｎｍｏｌｅ、好ましくは１用量あたり約９０ｎｍｏｌｅ～約７１５ｎｍｏｌｅまたは１用量あたり約９０ｎｍｏｌｅ～約５３５ｎｍｏｌｅの量の前記第１のタウホスホペプチドを含む、発明１～１６のいずれか一つに記載の方法。
［発明１８］
前記免疫学的有効量の前記リポソームが、１用量あたり約１００μｇ～約２５００μｇ、好ましくは約３００μｇ～約２４００μｇ、たとえば、約１００μｇ、約１５０μｇ、約２００μｇ、約２５０μｇ、約３００μｇ、約４００μｇ、約５００μｇ、約６００μｇ、約７００μｇ、約８００μｇ、約９００μｇ、約１０００μｇ、約１１００μｇ、約１２００μｇ、約１３００μｇ、約１４００μｇ、約１５００μｇ、約１６００μｇ、約１７００μｇ、約１８００μｇ、約１９００μｇ、約２０００μｇ、約２１００μｇ、約２２００μｇ、約２３００μｇ、約２４００μｇ、約２５００μｇ、またはそれらの間の任意の値の量の前記第１のタウホスホペプチドを含む、発明１～１７のいずれか一つに記載の方法。

Claims (23)

  1. それを必要としている対象においてリン酸化タウおよび濃縮対らせん状細線維（ｅＰＨＦ）のうちの少なくとも１つに対する抗体を誘導する方法に使用するための、プライム用組成物であって、前記方法は、
    （ｉ）前記対象に、
    ａ．第１のタウホスホペプチドと、
    ｂ．配列番号３９～配列番号４４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するヘルパーＴ細胞エピトープと、
    ｃ．配列番号１８～配列番号２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列を有する脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと、
    ｄ．トール様受容体４リガンドを含有するアジュバントと
    を含み、前記タウホスホペプチドがリポソームの表面上に提示されている、免疫学的有効量の前記リポソームを含み、薬学的に許容される担体をさらに含む、前記プライム用組成物を投与することと、
    （ｉｉ）前記対象に、第２のタウホスホペプチドと、リンカーを介してそれとコンジュゲートさせた免疫原性担体とを含み、式（Ｉ）の構造：
    または式（ＩＩ）の構造：
    ［式中、
    ｘは、０～１０の整数であり、
    ｎは、３～１５の整数であり、
    タウペプチドは、前記第２のタウホスホペプチドを表し、
    担体は、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、破傷風トキソイド、ＣＲＭ１９７、および髄膜炎菌（N. meningitidis）由来の外膜タンパク質混合物（ＯＭＰ）、またはその誘導体からなる群から選択される前記免疫原性担体を表す。］
    を有する、免疫学的有効量のコンジュゲートを含み、
    薬学的に許容される担体をさらに含む、第１のブースト用組成物を投与することと
    を含み、
    前記第１のタウホスホペプチドおよび前記第２のタウホスホペプチドが、それぞれ独立して、配列番号２、５、９及び１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、前記プライム用組成物。
  2. それを必要としている対象においてリン酸化タウおよび濃縮対らせん状細線維（ｅＰＨＦ）のうちの少なくとも１つに対する抗体を誘導する方法に使用するための、第１のブースト用組成物であって、前記方法は、
    （ｉ）前記対象に、
    ａ．第１のタウホスホペプチドと、
    ｂ．配列番号３９～配列番号４４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するヘルパーＴ細胞エピトープと、
    ｃ．配列番号１８～配列番号２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列を有する脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと、
    ｄ．トール様受容体４リガンドを含有するアジュバントと
    を含み、前記タウホスホペプチドがリポソームの表面上に提示されている、免疫学的有効量の前記リポソームを含み、薬学的に許容される担体をさらに含む、プライム用組成物を投与することと、
    （ｉｉ）前記対象に、第２のタウホスホペプチドと、リンカーを介してそれとコンジュゲートさせた免疫原性担体とを含み、式（Ｉ）の構造：
    または式（ＩＩ）の構造：
    ［式中、
    ｘは、０～１０の整数であり、
    ｎは、３～１５の整数であり、
    タウペプチドは、前記第２のタウホスホペプチドを表し、
    担体は、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、破傷風トキソイド、ＣＲＭ１９７、および髄膜炎菌（N. meningitidis）由来の外膜タンパク質混合物（ＯＭＰ）、またはその誘導体からなる群から選択される前記免疫原性担体を表す。］
    を有する、免疫学的有効量のコンジュゲートを含み、
    薬学的に許容される担体をさらに含む、前記第１のブースト用組成物を投与することとを含み、
    前記第１のタウホスホペプチドおよび前記第２のタウホスホペプチドが、それぞれ独立して、配列番号２、５、９及び１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、前記第１のブースト用組成物。
  3. それを必要としている対象においてリン酸化タウおよび濃縮対らせん状細線維（ｅＰＨＦ）のうちの少なくとも１つに対する抗体を誘導する方法に使用するための、プライム用組成物及び第１のブースト用組成物の組合せ組成物であって、前記方法は、
    （ｉ）前記対象に、
    ａ．第１のタウホスホペプチドと、
    ｂ．配列番号３９～配列番号４４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するヘルパーＴ細胞エピトープと、
    ｃ．配列番号１８～配列番号２２からなる群から選択される脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと、
    ｄ．トール様受容体４リガンドを含有するアジュバントと
    を含み、前記タウホスホペプチドがリポソームの表面上に提示されている、免疫学的有効量の前記リポソームを含み、薬学的に許容される担体をさらに含む、前記プライム用組成物を投与することと、
    （ｉｉ）前記対象に、第２のタウホスホペプチドと、リンカーを介してそれとコンジュゲートさせた免疫原性担体とを含み、式（Ｉ）の構造：
    または式（ＩＩ）の構造：
    ［式中、
    ｘは、０～１０の整数であり、
    ｎは、３～１５の整数であり、
    タウペプチドは、前記第２のタウホスホペプチドを表し、
    担体は、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、破傷風トキソイド、ＣＲＭ１９７、および髄膜炎菌（N. meningitidis）由来の外膜タンパク質混合物（ＯＭＰ）、またはその誘導体からなる群から選択される前記免疫原性担体を表す。］
    を有する、免疫学的有効量のコンジュゲートを含み、
    薬学的に許容される担体をさらに含む、前記第１のブースト用組成物を投与することとを含み、
    前記第１のタウホスホペプチドおよび前記第２のタウホスホペプチドが、それぞれ独立して、配列番号２、５、９及び１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、前記プライム用組成物及び第１のブースト用組成物の組合せ組成物。
  4. ｘは２～６の整数であり、ｎは３～１２の整数である、請求項１～３のいずれか一項に記載の、プライミング組成物、第１のブースト組成物、又は組合せ組成物。
  5. ｘは３である、請求項１～３のいずれか一項に記載の、プライミング組成物、第１のブースト組成物、又は組合せ組成物。
  6. 前記リポソームが、
    ａ．配列番号２８、３１、３５及び３８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する前記第１のタウホスホペプチドと、
    ｂ．配列番号１３～配列番号１７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する前記ヘルパーＴ細胞エピトープと、
    ｃ．配列番号１８～配列番号２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列を有し、１つまたは複数のホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含み、リンカーを介して少なくとも１つのコレステロールと共有結合している、前記脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと
    ｄ．モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬＡ）と
    を含み、
    前記コンジュゲートが、前記リンカーを介してＣＲＭ１９７とコンジュゲートさせた、配列番号２、５、９及び１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する前記第２のタウホスホペプチドを含む、
    請求項１～５のいずれか一項に記載の、プライム用組成物、第１のブースト用組成物、又は組合せ組成物。
  7. 前記コンジュゲートが、以下の構造：
    ［式中、ｎは、３～７の整数である。］
    を有する、請求項６に記載のプライム用組成物、第１のブースト用組成物、又は組合せ組成物。
  8. それを必要としている対象においてリン酸化タウおよび濃縮対らせん状細線維（ｅＰＨＦ）のうちの少なくとも１つに対する抗体を誘導する方法に使用するための、プライム用組成物であって、前記方法は、
    （ｉ）前記対象に、
    ａ．配列番号２８、３１、３５及び３８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する第１のタウホスホペプチドと、
    ｂ．配列番号３９～配列番号４４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するヘルパーＴ細胞エピトープと、
    ｃ．配列番号１８～配列番号２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列を有し、１つまたは複数のホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含み、リンカーを介して少なくとも１つのコレステロールと共有結合している、脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと
    ｄ．モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬＡ）と
    を含み、前記第１のタウホスホペプチドがリポソームの表面上に提示されている、免疫学的有効量の前記リポソームを含み、薬学的に許容される担体をさらに含む、前記プライム用組成物を投与することと、
    （ｉｉ）前記対象に、第２のタウホスホペプチドと、リンカーを介してそれとコンジュゲートさせた免疫原性担体とを含み、以下の構造：
    ［式中、ｎは、３～７の整数である。］
    を有する免疫学的有効量のコンジュゲートを含み、薬学的に許容される担体をさらに含む、第１のブースト用組成物を投与することと
    を含む、前記プライム用組成物。
  9. それを必要としている対象においてリン酸化タウおよび濃縮対らせん状細線維（ｅＰＨＦ）のうちの少なくとも１つに対する抗体を誘導する方法に使用するための、第１のブースト用組成物であって、前記方法は、
    （ｉ）前記対象に、
    ａ．配列番号２８、３１、３５及び３８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する第１のタウホスホペプチドと、
    ｂ．配列番号３９～配列番号４４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するヘルパーＴ細胞エピトープと、
    ｃ．配列番号１８～配列番号２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列を有し、１つまたは複数のホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含み、リンカーを介して少なくとも１つのコレステロールと共有結合している、脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと
    ｄ．モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬＡ）と
    を含み、前記第１のタウホスホペプチドがリポソームの表面上に提示されている、免疫学的有効量の前記リポソームを含み、薬学的に許容される担体をさらに含む、プライム用組成物を投与することと、
    （ｉｉ）前記対象に、第２のタウホスホペプチドと、リンカーを介してそれとコンジュゲートさせた免疫原性担体とを含み、以下の構造：
    ［式中、ｎは、３～７の整数である。］
    を有する免疫学的有効量のコンジュゲートを含み、薬学的に許容される担体をさらに含む、前記第１のブースト用組成物を投与することと
    を含む、前記第１のブースト用組成物。
  10. それを必要としている対象においてリン酸化タウおよび濃縮対らせん状細線維（ｅＰＨＦ）のうちの少なくとも１つに対する抗体を誘導する方法に使用するための、プライム用組成物及び第１のブースト用組成物の組合せ組成物であって、前記方法は、
    （ｉ）前記対象に、
    ａ．配列番号２８、３１、３５及び３８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する第１のタウホスホペプチドと、
    ｂ．配列番号３９～配列番号４４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するヘルパーＴ細胞エピトープと、
    ｃ．配列番号１８～配列番号２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列を有し、１つまたは複数のホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含み、リンカーを介して少なくとも１つのコレステロールと共有結合している、脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと
    ｄ．モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬＡ）と
    を含み、前記第１のタウホスホペプチドがリポソームの表面上に提示されている、免疫学的有効量の前記リポソームを含み、薬学的に許容される担体をさらに含む、前記プライム用組成物を投与することと、
    （ｉｉ）前記対象に、第２のタウホスホペプチドと、リンカーを介してそれとコンジュゲートさせた免疫原性担体とを含み、以下の構造：
    ［式中、ｎは、３～７の整数である。］
    を有する免疫学的有効量のコンジュゲートを含み、薬学的に許容される担体をさらに含む、前記第１のブースト用組成物を投与することと
    を含む、前記プライム用組成物及び第１のブースト用組成物の組合せ組成物。
  11. 前記ヘルパーＴ細胞エピトープが、配列番号１３～配列番号１７からなる群から選択されるアミノ酸配列からなる、請求項８～１０のいずれか一項に記載のプライム用組成物、第１のブースト用組成物、又は組合せ組成物。
  12. それを必要としている対象においてリン酸化タウおよび濃縮対らせん状細線維（ｅＰＨＦ）のうちの少なくとも１つに対する抗体を誘導する方法に使用するための、プライム用組成物であって、前記方法は、
    （ｉ）前記対象に、
    （１）配列番号２８のアミノ酸配列を有する第１のタウホスホペプチドと、
    （２）モノホスホリルヘキサ－アシル脂質Ａ、３－脱アシルを含むトール様受容体４作用剤と、
    （３）配列番号３９のアミノ酸配列を含むヘルパーＴ細胞エピトープと、
    （４）配列番号１８のヌクレオチド配列を含む脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと、
    （５）１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホリル－３’－ｒａｃ－グリセロール（ＤＭＰＧ）、およびコレステロールからなる群から選択される少なくとも１つの脂質と
    を含み、前記第１のタウホスホペプチドがリポソームの表面上に提示されている、免疫学的有効量の前記リポソームを含み、薬学的に許容される担体をさらに含む、前記プライム用組成物を投与することと、
    （ｉｉ）前記対象に、第２のタウホスホペプチドと、リンカーを介してそれとコンジュゲートさせた免疫原性担体とを含み、以下の構造：
    ［式中、ｎは、３～７の整数である。］
    を有する免疫学的有効量のコンジュゲートを含み、薬学的に許容される担体をさらに含む、第１のブースト用組成物を投与することと
    を含む、前記プライム用組成物。
  13. それを必要としている対象においてリン酸化タウおよび濃縮対らせん状細線維（ｅＰＨＦ）のうちの少なくとも１つに対する抗体を誘導する方法に使用するための、第１のブースト用組成物であって、前記方法は、
    （ｉ）前記対象に、
    （１）配列番号２８のアミノ酸配列を有する第１のタウホスホペプチドと、
    （２）モノホスホリルヘキサ－アシル脂質Ａ、３－脱アシルを含むトール様受容体４作用剤と、
    （３）配列番号３９のアミノ酸配列を含むヘルパーＴ細胞エピトープと、
    （４）配列番号１８のヌクレオチド配列を含む脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと、
    （５）１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホリル－３’－ｒａｃ－グリセロール（ＤＭＰＧ）、およびコレステロールからなる群から選択される少なくとも１つの脂質と
    を含み、前記第１のタウホスホペプチドがリポソームの表面上に提示されている、免疫学的有効量の前記リポソームを含み、薬学的に許容される担体をさらに含む、プライム用組成物を投与することと、
    （ｉｉ）前記対象に、第２のタウホスホペプチドと、リンカーを介してそれとコンジュゲートさせた免疫原性担体とを含み、以下の構造：
    ［式中、ｎは、３～７の整数である。］
    を有する免疫学的有効量のコンジュゲートを含み、薬学的に許容される担体をさらに含む、前記第１のブースト用組成物を投与することと
    を含む、前記第１のブースト用組成物。
  14. それを必要としている対象においてリン酸化タウおよび濃縮対らせん状細線維（ｅＰＨＦ）のうちの少なくとも１つに対する抗体を誘導する方法に使用するための、プライム用組成物及び第１のブースト用組成物の組合せ組成物であって、前記方法は、
    （ｉ）前記対象に、
    （１）配列番号２８のアミノ酸配列を有する第１のタウホスホペプチドと、
    （２）モノホスホリルヘキサ－アシル脂質Ａ、３－脱アシルを含むトール様受容体４作用剤と、
    （３）配列番号３９のアミノ酸配列を含むヘルパーＴ細胞エピトープと、
    （４）配列番号１８のヌクレオチド配列を含む脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと、
    （５）１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホリル－３’－ｒａｃ－グリセロール（ＤＭＰＧ）、およびコレステロールからなる群から選択される少なくとも１つの脂質と
    を含み、前記第１のタウホスホペプチドがリポソームの表面上に提示されている、免疫学的有効量の前記リポソームを含み、薬学的に許容される担体をさらに含む、前記プライム用組成物を投与することと、
    （ｉｉ）前記対象に、第２のタウホスホペプチドと、リンカーを介してそれとコンジュゲートさせた免疫原性担体とを含み、以下の構造：
    ［式中、ｎは、３～７の整数である。］
    を有する免疫学的有効量のコンジュゲートを含み、薬学的に許容される担体をさらに含む、前記第１のブースト用組成物を投与することと
    を含む、前記プライム用組成物及び第１のブースト用組成物の組合せ組成物。
  15. 前記方法が、
    （ａ）前記第１のブースト用組成物の初回投与後、前記第１のブースト用組成物を前記対象に少なくとも１回投与すること；及び／又は
    （ｂ）前記対象に免疫学的有効量の前記リポソームと薬学的に許容される担体とを含む第２のブースト用組成物を投与すること
    をさらに含み、
    前記方法は、
    前記対象に免疫学的有効量の前記リポソームと薬学的に許容される担体とを含む第２のブースト用組成物を投与することをさらに含む、
    請求項１～３、８～１０及び１２～１４のいずれか一項に記載の、プライム用組成物、第１のブースト用組成物、又は組合せ組成物。
  16. それを必要としている対象においてリン酸化タウおよび濃縮対らせん状細線維（ｅＰＨＦ）のうちの少なくとも１つに対する抗体を誘導する方法に使用するための、プライム用組成物であって、前記方法は、
    （ｉ）前記対象に、
    （１）配列番号２８のアミノ酸配列を有する第１のタウホスホペプチドと、
    （２）モノホスホリルヘキサ－アシル脂質Ａ、３－脱アシルを含むトール様受容体４作用剤と、
    （３）配列番号３９のアミノ酸配列を含むヘルパーＴ細胞エピトープと、
    （４）配列番号１８のヌクレオチド配列を含む脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと、
    （５）１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホリル－３’－ｒａｃ－グリセロール（ＤＭＰＧ）、およびコレステロールからなる群から選択される少なくとも１つの脂質と
    を含み、前記第１のタウホスホペプチドがリポソームの表面上に提示されている、免疫学的有効量の前記リポソームを含み、薬学的に許容される担体をさらに含む、前記プライム用組成物を投与することと、
    （ｉｉ）前記対象に、第２のタウホスホペプチドと、リンカーを介してそれとコンジュゲートさせた免疫原性担体とを含み、以下の構造：
    ［式中、ｎは、３～７の整数である。］
    を有する免疫学的有効量のコンジュゲートを含み、薬学的に許容される担体をさらに含む、第１のブースト用組成物を投与することと、
    （ｉｉｉ）前記対象に、前記第１のブースト用組成物、または免疫学的有効量の前記リポソームと薬学的に許容される担体とを含む第２のブースト用組成物を投与することと
    を含む、前記プライム用組成物。
  17. それを必要としている対象においてリン酸化タウおよび濃縮対らせん状細線維（ｅＰＨＦ）のうちの少なくとも１つに対する抗体を誘導する方法に使用するための、第１のブースト用組成物であって、前記方法は、
    （ｉ）前記対象に、
    （１）配列番号２８のアミノ酸配列を有する第１のタウホスホペプチドと、
    （２）モノホスホリルヘキサ－アシル脂質Ａ、３－脱アシルを含むトール様受容体４作用剤と、
    （３）配列番号３９のアミノ酸配列を含むヘルパーＴ細胞エピトープと、
    （４）配列番号１８のヌクレオチド配列を含む脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと、
    （５）１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホリル－３’－ｒａｃ－グリセロール（ＤＭＰＧ）、およびコレステロールからなる群から選択される少なくとも１つの脂質と
    を含み、前記第１のタウホスホペプチドがリポソームの表面上に提示されている、免疫学的有効量の前記リポソームを含み、薬学的に許容される担体をさらに含む、プライム用組成物を投与することと、
    （ｉｉ）前記対象に、第２のタウホスホペプチドと、リンカーを介してそれとコンジュゲートさせた免疫原性担体とを含み、以下の構造：
    ［式中、ｎは、３～７の整数である。］
    を有する免疫学的有効量のコンジュゲートを含み、薬学的に許容される担体をさらに含む、前記第１のブースト用組成物を投与することと、
    （ｉｉｉ）前記対象に、前記第１のブースト用組成物、または免疫学的有効量の前記リポソームと薬学的に許容される担体とを含む第２のブースト用組成物を投与することとを含む、前記第１のブースト用組成物。
  18. それを必要としている対象においてリン酸化タウおよび濃縮対らせん状細線維（ｅＰＨＦ）のうちの少なくとも１つに対する抗体を誘導する方法に使用するための、プライム用組成物及び第１のブースト用組成物の組合せ組成物であって、前記方法は、
    （ｉ）前記対象に、
    （１）配列番号２８のアミノ酸配列を有する第１のタウホスホペプチドと、
    （２）モノホスホリルヘキサ－アシル脂質Ａ、３－脱アシルを含むトール様受容体４作用剤と、
    （３）配列番号３９のアミノ酸配列を含むヘルパーＴ細胞エピトープと、
    （４）配列番号１８のヌクレオチド配列を含む脂質付加ＣｐＧオリゴヌクレオチドと、
    （５）１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホリル－３’－ｒａｃ－グリセロール（ＤＭＰＧ）、およびコレステロールからなる群から選択される少なくとも１つの脂質と
    を含み、前記第１のタウホスホペプチドがリポソームの表面上に提示されている、免疫学的有効量の前記リポソームを含み、薬学的に許容される担体をさらに含む、前記プライム用組成物を投与することと、
    （ｉｉ）前記対象に、第２のタウホスホペプチドと、リンカーを介してそれとコンジュゲートさせた免疫原性担体とを含み、以下の構造：
    ［式中、ｎは、３～７の整数である。］
    を有する免疫学的有効量のコンジュゲートを含み、薬学的に許容される担体をさらに含む、前記第１のブースト用組成物を投与することと、
    （ｉｉｉ）前記対象に、前記第１のブースト用組成物、または免疫学的有効量の前記リポソームと薬学的に許容される担体とを含む第２のブースト用組成物を投与することとを含む、前記プライム用組成物及び第１のブースト用組成物の組合せ組成物。
  19. （ａ）（ｉｉ）が（ｉｉｉ）の前に実施される；又は
    （ｂ）（ｉｉ）が（ｉｉｉ）の後に実施される、
    請求項１６～１８のいずれか一項に記載の、プライム用組成物、第１のブースト用組成物、又は組合せ組成物。
  20. （ａ）前記第１のブースト用組成物の初回投与後、前記第１のブースト用組成物を前記対象に少なくとも１回投与すること；及び／又は
    （ｂ）前記第２のブースト用組成物を前記対象に少なくとも１回投与すること
    をさらに含む、請求項１６～１８のいずれか一項に記載の、プライム用組成物、第１のブースト用組成物、又は組合せ組成物。
  21. 前記対象が、神経原線維病変の形成によって引き起こされるまたはそれに関連する神経変性疾患または障害の処置を必要としており、
    前記神経変性疾患または障害が、アルツハイマー病、パーキンソン病、クロイツフェルト－ヤコブ病、拳闘家認知症、ダウン症候群、ゲルストマン－ストロイスラー－シャインカー病、封入体筋炎、プリオンタンパク質脳アミロイド血管症、外傷性脳傷害、筋萎縮性側索硬化症、グアムのパーキンソン認知症複合、神経原線維のもつれを伴う非グアム型運動ニューロン疾患、嗜銀顆粒性認知症、大脳皮質基底核変性症、レビー認知症、筋萎縮性側索硬化症、石灰化を伴うびまん性の神経原線維のもつれ、１７番染色体に連鎖するパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、ハレルフォルデン－スパッツ病、多系統萎縮症、ニーマン－ピック病Ｃ型、ピック病、進行性皮質下グリオーシス、進行性核上性麻痺、亜急性硬化性汎脳炎、もつれのみの認知症、脳炎後パーキンソニズム、筋緊張性ジストロフィー、慢性外傷性脳障害（ＣＴＥ）、脳血管症、またはレビー小体認知症（ＬＢＤ）である、
    請求項１～３、８～１０、１２～１４及び１６～１８のいずれか一項に記載の、プライム用組成物、第１のブースト用組成物、又は組合せ組成物。
  22. 前記対象が、アルツハイマー病、早期アルツハイマー病、アルツハイマー病に起因する軽度認知機能障害（ＭＣＩ）、または軽度から中等度のアルツハイマー病の処置を必要としている、請求項２１に記載の、プライム用組成物、第１のブースト用組成物、又は組合せ組成物。
  23. （ａ）免疫学的有効量の前記リポソームが、１用量あたり約２５ｎｍｏｌｅ～約７５０ｎｍｏｌｅ、１用量あたり約９０ｎｍｏｌｅ～約７１５ｎｍｏｌｅまたは１用量あたり約９０ｎｍｏｌｅ～約５３５ｎｍｏｌｅの量の前記第１のタウホスホペプチドを含む；及び／又は
    （ｂ）免疫学的有効量の前記リポソームが、１用量あたり約１００μｇ～約２５００μｇ、約３００μｇ～約２４００μｇ、約１００μｇ、約１５０μｇ、約２００μｇ、約２５０μｇ、約３００μｇ、約４００μｇ、約５００μｇ、約６００μｇ、約７００μｇ、約８００μｇ、約９００μｇ、約１０００μｇ、約１１００μｇ、約１２００μｇ、約１３００μｇ、約１４００μｇ、約１５００μｇ、約１６００μｇ、約１７００μｇ、約１８００μｇ、約１９００μｇ、約２０００μｇ、約２１００μｇ、約２２００μｇ、約２３００μｇ、約２４００μｇ、約２５００μｇ、またはそれらの間の任意の値の量の前記第１のタウホスホペプチドを含む、
    請求項１～３、８～１０、１２～１４及び１６～１８のいずれか一項に記載の、プライム用組成物、第１のブースト用組成物、又は組合せ組成物。
JP2021563196A 2019-04-24 2020-04-23 タウワクチンの異種投与 Active JP7617852B2 (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201962837987P 2019-04-24 2019-04-24
US62/837,987 2019-04-24
PCT/US2020/029477 WO2020219646A1 (en) 2019-04-24 2020-04-23 Heterologous administration of tau vaccines

Publications (3)

Publication Number Publication Date
JP2022529529A JP2022529529A (ja) 2022-06-22
JP2022529529A5 JP2022529529A5 (ja) 2023-09-04
JP7617852B2 true JP7617852B2 (ja) 2025-01-20

Family

ID=72921263

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2021563196A Active JP7617852B2 (ja) 2019-04-24 2020-04-23 タウワクチンの異種投与

Country Status (18)

Country Link
US (2) US11591377B2 (ja)
EP (1) EP3965817A4 (ja)
JP (1) JP7617852B2 (ja)
KR (1) KR20220005033A (ja)
CN (1) CN114173812A (ja)
AU (1) AU2020262899A1 (ja)
BR (1) BR112021021213A2 (ja)
CA (1) CA3137884A1 (ja)
EA (1) EA202192891A1 (ja)
IL (1) IL287486A (ja)
JO (1) JOP20210284A1 (ja)
MA (1) MA55902A (ja)
MX (1) MX2021012994A (ja)
PH (1) PH12021552683A1 (ja)
SG (1) SG11202111770RA (ja)
TW (1) TW202110478A (ja)
WO (1) WO2020219646A1 (ja)
ZA (1) ZA202108168B (ja)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111201030B (zh) 2017-07-25 2024-11-01 真和制药有限公司 通过阻断tim-3和其配体的相互作用治疗癌症
CN111787942B (zh) 2017-10-25 2024-03-29 杨森制药公司 磷酸化Tau肽的组合物及其用途
WO2020160156A2 (en) 2019-01-30 2020-08-06 Immutics, Inc. Anti-gal3 antibodies and uses thereof
MY206596A (en) 2019-02-08 2024-12-25 Janssen Pharmaceuticals Inc Method of safe administration of phosphorylated tau peptide vaccine
US20230181749A1 (en) * 2020-05-20 2023-06-15 Bicycle TX Limited Bicyclic peptide ligands specific for nectin-4 and uses thereof
EP4157338A4 (en) 2020-05-26 2024-11-13 TrueBinding, Inc. METHOD FOR TREATING INFLAMMATORY DISEASES BY GALECTIN-3 BLOCKING
CA3228878A1 (en) * 2021-08-12 2023-02-16 Andrea Pfeifer Liposomes containing phosphorylated tau peptides for inducing sustained immune responses
JP2024538615A (ja) * 2021-09-29 2024-10-23 ヤンセン ファーマシューティカルズ，インコーポレーテッド タウホスホペプチドコンジュゲートの安全な投与の方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2012522754A (ja) 2009-04-03 2012-09-27 エーシー イミューン ソシエテ アノニム 薬学的組成物
JP2014503475A (ja) 2010-10-26 2014-02-13 エーシー イミューン ソシエテ アノニム 疎水性部分によって修飾されたペプチドを含むリポソームベースの構築物

Family Cites Families (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5811310A (en) 1986-09-30 1998-09-22 Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva Univ. The Alz-50 monoclonal antibody and diagnostic assay for alzheimer's disease
CA2017507C (en) 1989-05-25 1996-11-12 Gary Van Nest Adjuvant formulation comprising a submicron oil droplet emulsion
US7408027B1 (en) 1991-12-06 2008-08-05 Max-Planck-Gesellschaft Zur Forderung Der Wissenchaften Tools for the diagnosis and treatment of Alzheimer's disease
WO1994013795A1 (en) 1992-12-14 1994-06-23 N.V. Innogenetics S.A. Monoclonal antibodies directed against the microtubule-associated protein tau, hybridomas secreting these antibodies, antigen recognition by these monoclonal antibodies and their applications
US7427392B1 (en) 1994-11-14 2008-09-23 Elan Pharmaceuticals, Inc. Methods for aiding in the diagnosis of alzheimer's disease by measuring amyloid-β peptide (x-≧41) and tau
US20020086009A1 (en) 1996-03-13 2002-07-04 Koichi Ishiguro Anti-phosphorylated tau protein antibodies and methods for detecting alzheimer`s disease with the use of the same
AU5508798A (en) 1996-11-19 1998-06-10 Trustees Of The University Of Pennsylvania, The Diagnostic and therapeutic reagents for alzheimer's disease
JP2004503747A (ja) 2000-07-11 2004-02-05 モレキュラー　ジェリアトリクス　コーポレイション 結合物質の同定するための試薬と方法
WO2003066649A1 (en) 2002-02-04 2003-08-14 Biomira Inc. Immunostimulatory, covalently lipidated oligonucleotides
ATE514707T1 (de) 2002-04-19 2011-07-15 Univ Toronto Immunologisches verfahren und zusammensetzungen für die behandlung der krankheit von alzheimer
US8663650B2 (en) 2003-02-21 2014-03-04 Ac Immune Sa Methods and compositions comprising supramolecular constructs
US20050261475A1 (en) 2004-02-13 2005-11-24 Harvard Medical School Solid-phase capture-release-tag methods for phosphoproteomic analyses
US7238788B2 (en) 2004-02-18 2007-07-03 University Of Iowa Foundation Antibodies to phosphorylated tau, methods of making and methods of use
KR101152557B1 (ko) 2005-12-12 2012-09-07 에이씨 이뮨 에스.에이. 치료 백신
WO2007068105A1 (en) 2005-12-12 2007-06-21 Robarts Research Institute Method of diagnosing amyotrophic lateral sclerosis
US8012936B2 (en) 2006-03-29 2011-09-06 New York University Tau fragments for immunotherapy
WO2008140639A2 (en) 2007-02-08 2008-11-20 Oligomerix, Inc. Biomarkers and assays for alzheimer's disease
CN101965365A (zh) 2007-10-19 2011-02-02 伊缪纳斯制药株式会社 能够特异性结合Aβ寡聚体的抗体及其应用
HUE055739T2 (hu) * 2009-03-18 2021-12-28 Ac Immune Sa Eljárás terápiás alkalmazásra
CN106390107B (zh) 2009-06-10 2019-12-31 纽约大学 病理tau蛋白的免疫靶向
JP2013500326A (ja) 2009-07-30 2013-01-07 ファイザー バクシーンズ エルエルシー 抗原性タウペプチドおよびその使用
WO2012020124A1 (en) 2010-08-12 2012-02-16 Ac Immune S.A. Vaccine engineering
ME03008B (me) * 2011-09-19 2018-10-20 Axon Neuroscience Se Terapija na osnovu proteina i dijagnoza patologije u којој posreduje tau u alcнajмerovoj bolesti
JP2017512751A (ja) * 2014-02-14 2017-05-25 アイピエリアン，インコーポレイティド タウペプチド、抗タウ抗体、およびそれらの使用方法
BR112016029579A2 (pt) 2014-06-26 2017-08-22 Janssen Vaccines & Prevention Bv anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno que se ligam especificamente à proteína tau associada a microtúbulos
NZ775762A (en) * 2015-06-05 2025-02-28 Genentech Inc Anti-tau antibodies and methods of use
UA128383C2 (uk) * 2016-12-07 2024-07-03 Дженентек, Інк. Антитіло до тау-білка та спосіб його застосування
CN111787942B (zh) 2017-10-25 2024-03-29 杨森制药公司 磷酸化Tau肽的组合物及其用途
EP3706795A4 (en) 2017-11-09 2021-10-13 Pinteon Therapeutics Inc. METHODS AND COMPOSITIONS FOR GENERATING AND USING HUMANIZED CONFORMATION SPECIFIC PHOSPHORYLATED TAU ANTIBODIES

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2012522754A (ja) 2009-04-03 2012-09-27 エーシー イミューン ソシエテ アノニム 薬学的組成物
JP2014503475A (ja) 2010-10-26 2014-02-13 エーシー イミューン ソシエテ アノニム 疎水性部分によって修飾されたペプチドを含むリポソームベースの構築物

Also Published As

Publication number Publication date
ZA202108168B (en) 2022-09-28
CN114173812A (zh) 2022-03-11
WO2020219646A1 (en) 2020-10-29
KR20220005033A (ko) 2022-01-12
JP2022529529A (ja) 2022-06-22
MX2021012994A (es) 2022-03-04
US11591377B2 (en) 2023-02-28
US20230257433A1 (en) 2023-08-17
EP3965817A1 (en) 2022-03-16
MA55902A (fr) 2022-03-16
EP3965817A4 (en) 2023-11-22
JOP20210284A1 (ar) 2023-01-30
US20200339643A1 (en) 2020-10-29
BR112021021213A2 (pt) 2021-12-21
EA202192891A1 (ru) 2022-02-04
AU2020262899A1 (en) 2021-11-18
IL287486A (en) 2021-12-01
TW202110478A (zh) 2021-03-16
PH12021552683A1 (en) 2022-03-21
SG11202111770RA (en) 2021-11-29
CA3137884A1 (en) 2020-10-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20250326806A1 (en) Compositions of Phosphorylated Tau Peptides and Uses Thereof
JP7617852B2 (ja) タウワクチンの異種投与
WO2020163730A2 (en) Method of safe administration of phosphorylated tau peptide vaccine
US20250134973A1 (en) Liposomes Containing Phosphorylated Tau Peptides for Inducing Sustained Immune Responses
HK40105209A (zh) 磷酸化tau肽的组合物及其用途
HK40039870A (en) Compositions of phosphorylated tau peptides and uses thereof
EA044254B1 (ru) Композиции фосфорилированных тау-пептидов и их применения
HK40039870B (zh) 磷酸化Tau肽的组合物及其用途

Legal Events

Date Code Title Description
A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20230424

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20230424

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20230818

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20240618

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20240918

TRDD Decision of grant or rejection written
A01 Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01

Effective date: 20241224

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20250107

R150 Certificate of patent or registration of utility model

Ref document number: 7617852

Country of ref document: JP

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150