JP7634477B2 - 高純度ステビオールグリコシド - Google Patents

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Description

（配列表）
２０１８年１１月２７日に作成され、１５キロバイトのデータを有し、本明細書と同時に提出される「３９２２７＿８０ＰＲＯＶ＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」というタイトルのテキストファイルは、これにより、その全体が参照により本出願に組み込まれる。
（発明の分野）
本発明は、高純度ステビオールグリコシド組成物などの、ステビオールグリコシドを含む組成物を調製するためのプロセスに関する。
高甘味度甘味料は、スクロースの甘味レベルよりも何倍も高い甘味レベルを有する。それらは、本質的にノンカロリーであり、ダイエット及び低カロリーの、食品及び飲料を含む製品において一般的に使用される。高甘味度甘味料は、血糖反応を誘発せず、したがって糖尿病患者、及び炭水化物の摂取量についての制御に関心を持つ他の人をターゲットとする製品における使用に適している。
ステビオールグリコシドは、南米の特定の地域に自生するキク科（Asteraceae family）（キク科（Compositae family））の多年生低木である、Ｓｔｅｖｉａ ｒｅｂａｕｄｉａｎａ Ｂｅｒｔｏｎｉの葉に見出される化合物のクラスである。これらは、Ｃ１３及びＣ１９の位置の炭水化物残基の存在によって異なる、単一の塩基、ステビオールによって構造的に特徴付けられる。これらは、Ｓｔｅｖｉａの葉に蓄積し、総乾燥重量の約１０％～２０％を構成する。乾燥重量基準で、Ｓｔｅｖｉａの葉に見出される４種の主要なグリコシドとして、典型的には、ステビオシド（９．１％）、レバウジオシドＡ（３．８％）、レバウジオシドＣ（０．６～１．０％）、及びズルコシドＡ（０．３％）が挙げられる。他の既知のステビオールグリコシドとしては、レバウジオシドＢ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ及びＭ、ステビオールビオシド、並びにルブソシドが挙げられる。
Ｓｔｅｖｉａ ｒｅｂａｕｄｉａｎａからステビオールグリコシドを調製するための方法が知られているが、これらの方法の多くは、商業的に使用に適していない。
したがって、高純度ステビオールグリコシド組成物などの、ステビオールグリコシドを含む組成物を調製するための簡単、効率的、かつ経済的な方法が、依然として必要とされている。
以下の出願は、これにより、その全体が参照により本出願に組み込まれる。２０１８年４月１０日に出願された国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０２６９２０号、２０１８年３月１６日に出願された米国特許仮出願第６２／６４４，０６５号、及び２０１８年３月１７日に出願された米国特許仮出願第６２／６４４，４０７号。
本明細書で使用するとき、略語「ｒｅｂ」は、「レバウジオシド（rebaudioside）」を指す。両方の用語は、同じ意味を有し、互換的に使用され得る。
本明細書で使用するとき、「バイオ触媒作用（biocatalysis）」又は「バイオ触媒の（biocatalytic）」は、酵素などの天然の若しくは遺伝子操作されたバイオ触媒、又は１種以上の酵素を含む細胞であって、有機化合物の単一若しくは複数ステップの化学変換が可能なものの使用を指す。バイオ触媒作用プロセスとしては、発酵、生合成、生物学的変換、及び生体内変化プロセスが挙げられる。単離された酵素及び全細胞のバイオ触媒作用の方法の両方が、当該技術分野において既知である。バイオ触媒タンパク質酵素は、天然に存在するものであり得、又は組換えタンパク質であり得る。
本明細書で使用するとき、用語「ステビオールグリコシド」は、天然に存在するステビオールグリコシド、例えば、ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシド、ステビオールビオシドＤ、ルブソシド、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、レバウジオシドＢ、ステビオシド、レバウジオシドＧ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＥ２、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＩ、レバウジオシドＡＭ、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＭ、レバウジオシドＭ４、レバウジオシド１ａ、レバウジオシド１ｂ、レバウジオシド１ｃ、レバウジオシド１ｄ、レバウジオシド１ｅ、レバウジオシド１ｆ、レバウジオシド１ｇ、レバウジオシド１ｈ、レバウジオシド１ｉ、レバウジオシド１ｊ、レバウジオシド１ｋ、レバウジオシド１ｌ、レバウジオシド１ｍ、レバウジオシド１ｎ、レバウジオシド２ａ、合成ステビオールグリコシド、例えば、酵素的にグリコシル化されたステビオールグリコシド、及びこれらの組み合わせを含むがこれらに限定されない、ステビオールのグリコシドを指す。
本明細書で使用するとき、用語「ＳｖＧ７」は、任意の天然に存在するステビオールグリコシド又は任意の合成ステビオールグリコシドを指し、酵素的にグリコシル化されたステビオールグリコシド及びこれらの組み合わせを含み、具体的には、共有結合した７つのグルコース残基を有するステビオールを含む分子であって、ｒｅｂ １ａ、ｒｅｂ １ｂ、ｒｅｂ １ｃ、ｒｅｂ １ｄ、ｒｅｂ １ｅ、ｒｅｂ １ｆ、ｒｅｂ １ｇ、ｒｅｂ １ｈ、ｒｅｂ １ｉ、ｒｅｂ １ｊ、ｒｅｂ １ｋ、ｒｅｂ １ｌ、ｒｅｂ １ｍ、ｒｅｂ １ｎ、及び／又はｒｅｂ ２ａを含むがこれらに限定されないものである。ＳｖＧ７は、共有結合した７つのグルコース残基を有する単一のステビオールグリコシド、又は共有結合した７つのグルコース残基を有するステビオールグリコシドの混合物を指す場合がある。
本発明は、有機基質を含む出発組成物を微生物細胞及び／又は酵素調製物と接触させることによって標的ステビオールグリコシドを含む組成物を調製し、それによって標的ステビオールグリコシドを含む組成物を製造するための、プロセスを提供する。
出発組成物は、少なくとも１つの炭素原子を含む任意の有機化合物であり得る。一実施形態では、出発組成物は、ステビオールグリコシド、ポリオール又は糖アルコール、様々な炭水化物からなる群から選択される。
標的ステビオールグリコシドは、任意のステビオールグリコシドであり得る。一実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシド、ステビオールビオシドＤ、ルブソシド、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、レバウジオシドＢ、ステビオシド、レバウジオシドＧ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＥ２、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＩ、レバウジオシドＡＭ、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＭ、レバウジオシドＭ４、レバウジオシド１ａ、レバウジオシド１ｂ、レバウジオシド１ｃ、レバウジオシド１ｄ、レバウジオシド１ｅ、レバウジオシド１ｆ、レバウジオシド１ｇ、レバウジオシド１ｈ、レバウジオシド１ｉ、レバウジオシド１ｊ、レバウジオシド１ｋ、レバウジオシド１ｌ、レバウジオシド１ｍ、レバウジオシド１ｎ、レバウジオシド２ａ、ＳｖＧ７、又は合成ステビオールグリコシドである。
一実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、レバウジオシド１ａである。
一実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、レバウジオシド１ｂである。
一実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、レバウジオシド１ｃである。
一実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、レバウジオシド１ｄである。
一実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、レバウジオシド１ｅである。
一実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、レバウジオシド１ｆである。
一実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、レバウジオシド１ｇである。
一実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、レバウジオシド１ｈである。
一実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、レバウジオシド１ｉである。
一実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、レバウジオシド１ｊである。
一実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、レバウジオシド１ｋである。
一実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、レバウジオシド１ｌである。
一実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、レバウジオシド１ｍである。
一実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、レバウジオシド１ｎである。
一実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、レバウジオシド２ａである。
一実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、レバウジオシドＭ４である。
一実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、ＳｖＧ７である。
いくつかの好ましい実施形態では、１種以上の酵素を含む酵素調製物、又は１種以上の酵素を含む微生物細胞であって、出発組成物を標的ステビオールグリコシドに変換することができるものが使用される。酵素は、表面上及び／又は細胞内部に位置することができる。酵素調製物は、全細胞懸濁液、粗溶解物の形態で、又は精製酵素として提供することができる。酵素調製物は、遊離形態であり得、又は無機若しくは有機材料で作製された固体の支持体に固定化され得る。
いくつかの実施形態では、微生物細胞は、出発組成物を標的ステビオールグリコシドに変換するために、必要な酵素及びそれをコードする遺伝子を含む。したがって、本発明はまた、有機基質を含む出発組成物を、少なくとも１種の酵素を含む微生物細胞であって、出発組成物を標的ステビオールグリコシドに変換することができるものと接触させることによって標的ステビオールグリコシドを含む組成物を調製し、それによって少なくとも１種の標的ステビオールグリコシドを含む培地を製造するための、プロセスも提供する。
出発組成物を標的ステビオールグリコシドに変換するのに必要な酵素としては、ステビオール生合成酵素、ＮＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼ（NDP-glucosyltransferase、ＮＧＴ）、ＡＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼ（ADP-glucosyltransferase、ＡＧＴ）、ＣＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼ（CDP-glucosyltransferase、ＣＧＴ）、ＧＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼ（GDP-glucosyltransferase、ＧＧＴ）、ＴＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼ（TDP-glucosyltransferase、ＴＤＰ）、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼ（UDP-glucosyltransferase、ＵＧＴ）並びに／又はＮＤＰ－再利用酵素（recycling enzyme）、ＡＤＰ－再利用酵素、ＣＤＰ－再利用酵素、ＧＤＰ－再利用酵素、ＴＤＰ－再利用酵素、及び／若しくはＵＤＰ－再利用酵素が挙げられる。
一実施形態では、ステビオール生合成酵素としては、メバロン酸（mevalonate、ＭＶＡ）経路酵素が挙げられる。
別の実施形態では、ステビオール生合成酵素としては、非メバロン酸２－Ｃ－メチル－Ｄ－エリトリトール－４－リン酸経路（ＭＥＰ／ＤＯＸＰ）酵素が挙げられる。
一実施形態では、ステビオール生合成酵素は、ゲラニルゲラニル二リン酸シンターゼ、コパリル二リン酸シンターゼ、カウレンシンターゼ、カウレンオキシダーゼ、カウレン酸１３－ヒドロキシラーゼ（ＫＡＨ）、ステビオールシンセターゼ、デオキシキシルロース５－リン酸シンターゼ（ＤＸＳ）、Ｄ－１－デオキシキシルロース５－リン酸レダクトイソメラーゼ（ＤＸＲ）、４－ジホスホシチジル－２－Ｃ－メチル－Ｄ－エリトリトールシンターゼ（ＣＭＳ）、４－ジホスホシチジル－２－Ｃ－メチル－Ｄ－エリトリトールキナーゼ（ＣＭＫ）、４－ジホスホシチジル－２－Ｃ－メチル－Ｄ－エリトリトール２，４－シクロ二リン酸シンターゼ（ＭＣＳ）、ｌ－ヒドロキシ－２－メチル－２（Ｅ）－ブテニル４－二リン酸シンターゼ（ＨＤＳ）、ｌ－ヒドロキシ－２－メチル－２（Ｅ）－ブテニル４－二リン酸レダクターゼ（ＨＤＲ）、アセトアセチル－ＣｏＡチオラーゼ、切断型ＨＭＧ－ＣｏＡレダクターゼ、メバロン酸キナーゼ、ホスホメバロン酸キナーゼ、メバロン酸ピロリン酸デカルボキシラーゼ、シトクロムＰ４５０レダクターゼなどを含む群から選択される。
ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオール及び／又はステビオールグリコシド基質に少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、標的ステビオールグリコシドを提供することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼであり得る。
以下で使用するとき、用語「ＳｕＳｙ＿ＡＴ」は、別段明記しない限り、実施例１に記載される通りのアミノ酸配列「配列番号１」を有するスクロースシンターゼ、又は配列番号１ポリペプチドに対してかなりの（＞８５％、＞８６％、＞８７％、＞８８％、＞８９％、＞９０％、＞９１％、＞９２％、＞９３％、＞９４％、＞９５％、＞９６％、＞９７％、＞９８％、＞９９％）アミノ酸配列同一性を有するポリペプチド、更にはこれらのポリペプチドをコードする単離された核酸分子を指す。
以下で使用するとき、用語「ＵＧＴＳｌ２」は、別段明記しない限り、実施例１に記載される通りのアミノ酸配列「配列番号２」を有するＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼ、又は配列番号２ポリペプチドに対してかなりの（＞８５％、＞８６％、＞８７％、＞８８％、＞８９％、＞９０％、＞９１％、＞９２％、＞９３％、＞９４％、＞９５％、＞９６％、＞９７％、＞９８％、＞９９％）アミノ酸配列同一性を有するポリペプチド、更にはこれらのポリペプチドをコードする単離された核酸分子を指す。
以下で使用するとき、用語「ＵＧＴ７６Ｇ１」は、別段明記しない限り、実施例１に記載される通りのアミノ酸配列「配列番号３」を有するＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼ、又は配列番号３ポリペプチドに対してかなりの（＞８５％、＞８６％、＞８７％、＞８８％、＞８９％、＞９０％、＞９１％、＞９２％、＞９３％、＞９４％、＞９５％、＞９６％、＞９７％、＞９８％、＞９９％）アミノ酸配列同一性を有するポリペプチド、更にはこれらのポリペプチドをコードする単離された核酸分子を指す。
一実施形態では、ステビオール生合成酵素及びＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、微生物細胞内で産生される。微生物細胞は、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｐ．、Ｐｉｃｈｉａ ｓｐ．、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．、Ｙａｒｒｏｗｉａ ｓｐ．などであってもよい。別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、合成される。
一実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１、ＵＧＴ８５Ｃ２、ＵＧＴ７６Ｇ１、ＵＧＴ９１Ｄ２、ＵＧＴＳｌ２、ＥＵＧＴ１１及びこれらのポリペプチドに対してかなりの（＞８５％、＞８６％、＞８７％、＞８８％、＞８９％、＞９０％、＞９１％、＞９２％、＞９３％、＞９４％、＞９５％、＞９６％、＞９７％、＞９８％、＞９９％）アミノ酸配列同一性を有するＵＧＴ、更にはこれらのＵＧＴをコードする単離された核酸分子を含む群から選択される。
一実施形態では、ステビオール生合成酵素、ＵＧＴ、及びＵＤＰ－グルコース再利用システムは、１つの微生物（微生物細胞）中に存在する。微生物は、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｐ．、Ｐｉｃｈｉａ ｓｐ．、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．、Ｙａｒｒｏｗｉａ ｓｐ．であってもよい。
一実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオール又はＣ１３に－ＯＨ官能基を有する任意の出発ステビオールグリコシドに、少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、Ｃ１３に－Ｏ－グルコースβ－グルコピラノシドグリコシド結合を有する標的ステビオールグリコシドを与えることができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ８５Ｃ２、又はＵＧＴ８５Ｃ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオール又はＣ１９に－ＣＯＯＨ官能基を有する任意の出発ステビオールグリコシドに、少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、Ｃ１９に－ＣＯＯ－グルコースβ－グルコピラノシドグリコシド結合を有する標的ステビオールグリコシドを与えることができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１、又はＵＧＴ７４Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、任意の出発ステビオールグリコシドのＣ１９側の任意の既存のグルコースに、少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、新たに形成されるグリコシド結合において少なくとも１つのβ１→２グルコピラノシドグリコシド結合を有する少なくとも１つの追加のグルコースを伴う標的ステビオールグリコシドを与えることができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、任意の出発ステビオールグリコシドのＣ１９側の任意の既存のグルコースに、少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、新たに形成される結合であるグリコシド結合において少なくとも１つのβ１→３グルコピラノシドグリコシド結合を有する少なくとも１つの追加のグルコースを伴う標的ステビオールグリコシドを与えることができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、任意の出発ステビオールグリコシドのＣ１９側の任意の既存のグルコースに、少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、新たに形成されるグリコシド結合において少なくとも１つのβ１→４グルコピラノシドグリコシド結合を有する少なくとも１つの追加のグルコースを伴う標的ステビオールグリコシドを与えることができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、任意の出発ステビオールグリコシドのＣ１９側の任意の既存のグルコースに、少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、新たに形成されるグリコシド結合において少なくとも１つのβ１→６グルコピラノシドグリコシド結合を有する少なくとも１つの追加のグルコースを伴う標的ステビオールグリコシドを与えることができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、任意の出発ステビオールグリコシドのＣ１３側の任意の既存のグルコースに、少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、新たに形成されるグリコシド結合において少なくとも１つのβ１→２グルコピラノシドグリコシド結合を有する少なくとも１つの追加のグルコースを伴う標的ステビオールグリコシドを与えることができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、任意の出発ステビオールグリコシドのＣ１３側の任意の既存のグルコースに、少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、新たに形成される結合であるグリコシド結合において少なくとも１つのβ１→３グルコピラノシドグリコシド結合を有する少なくとも１つの追加のグルコースを伴う標的ステビオールグリコシドを与えることができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、任意の出発ステビオールグリコシドのＣ１３側の任意の既存のグルコースに、少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、新たに形成されるグリコシド結合において少なくとも１つのβ１→４グルコピラノシドグリコシド結合を有する少なくとも１つの追加のグルコースを伴う標的ステビオールグリコシドを与えることができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、任意の出発ステビオールグリコシドのＣ１３側の任意の既存のグルコースに、少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、新たに形成されるグリコシド結合において少なくとも１つのβ１→６グルコピラノシドグリコシド結合を有する少なくとも１つの追加のグルコースを伴う標的ステビオールグリコシドを与えることができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
一実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオールに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、ステビオールモノシドを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ８５Ｃ２、又はＵＧＴ８５Ｃ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴ、若しくはＵＧＴ８５Ｃ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオールに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、ステビオールモノシドＡを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１、又はＵＧＴ７４Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオールモノシドに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、ステビオールビオシドを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオールモノシドに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、ステビオールビオシドＤを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオールモノシドに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、ルブソシドを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１、又はＵＧＴ７４Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
一実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオールモノシドＡに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、ルブソシドを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ８５Ｃ２、又はＵＧＴ８５Ｃ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴ、若しくはＵＧＴ８５Ｃ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオールモノシドＡに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、ステビオールビオシドＡを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオールモノシドＡに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、ステビオールビオシドＢを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオールビオシドに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＢを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオールビオシドに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、ステビオシドを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１、又はＵＧＴ７４Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオールビオシドＤに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＢを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオールビオシドＤに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＧを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１、又はＵＧＴ７４Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ルブソシドに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、ステビオシドを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ルブソシドに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＧを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ルブソシドに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、ステビオシドＡを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ルブソシドに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、ステビオシドＢを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
一実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオールビオシドＡに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、ステビオシドＡを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ８５Ｃ２、又はＵＧＴ８５Ｃ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴ、若しくはＵＧＴ８５Ｃ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオールビオシドＡに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、ステビオシドＣを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
一実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオールビオシドＢに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、ステビオシドＢを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ８５Ｃ２、又はＵＧＴ８５Ｃ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴ、若しくはＵＧＴ８５Ｃ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオールビオシドＢに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、ステビオシドＣを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＢに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＡを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１、又はＵＧＴ７４Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオシドに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＡを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオシドに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＥを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオシドに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＥ２を形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＧに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＡを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＧに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＥ４を形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＧに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＥ６を形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオシドＡに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＥを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオシドＡに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＥ４を形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオシドＡに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＥ３を形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオシドＢに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＥ２を形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオシドＢに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＥ６を形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオシドＢに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＥ３を形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
一実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオールビオシドＣに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＥ３を形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ８５Ｃ２、又はＵＧＴ８５Ｃ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴ、若しくはＵＧＴ８５Ｃ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＡに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＤを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＡに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＩを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＥに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＤを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＥに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＡＭを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＥ２に少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＩを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＥ２に少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＡＭを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＥ４に少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＤを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＥ４に少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＤ７を形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＥ６に少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＩを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＥ６に少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＤ７を形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＥ３に少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＡＭを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＥ３に少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＤ７を形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＤに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＭを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＩに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＭを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＡＭに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＭを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＡＭに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＭ４を形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＤ７に少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＭを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＭに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシド１ａを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＭに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシド１ｂを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＭに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシド１ｃを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＭに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシド１ｄを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＭに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシド１ｅを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＭに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシド１ｆを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＭに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシド１ｇを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＭに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシド１ｈを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＭに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシド１ｉを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＭに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシド１ｊを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＭに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシド１ｋを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＭに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシド１ｌを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＭに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシド１ｍを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＭに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシド１ｎを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＭ４に少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシド２ａを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
任意選択的に、本発明の方法は、ＵＤＰ－グルコースを提供するためにＵＤＰを再利用することを更に含む。一実施形態では、方法は、ステビオール及び／又はステビオールグリコシド基質の標的ステビオールグリコシドへの生体変換が触媒量のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼ及びＵＤＰ－グルコースを使用して行われるように、再利用触媒及び再利用基質を提供することによってＵＤＰを再利用することを含む。
一実施形態では、再利用触媒は、スクロースシンターゼＳｕＳｙ＿Ａｔ、又はＳｕＳｙ＿Ａｔとの＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するスクロースシンターゼである。
一実施形態では、ＵＤＰ－グルコース再利用触媒のための再利用基質は、スクロースである。
任意選択的に、本発明の方法は、受容体である標的ステビオールグリコシド分子を修飾するために糖供与体としてオリゴ糖又は多糖を使用する、トランスグリコシダーゼの使用を更に含む。非限定的な例としては、シクロデキストリングリコシルトランスフェラーゼ（ＣＧＴａｓｅ）、フルクトフラノシダーゼ、アミラーゼ、サッカラーゼ、グルコスクラーゼ、β－ｈ－フルクトシダーゼ、β－フルクトシダーゼ、スクラーゼ、フルクトシルインベルターゼ、アルカリ性インベルターゼ、酸性インベルターゼ、フルクトフラノシダーゼが挙げられる。いくつかの実施形態では、グルコース、及びグルコース以外の糖であってフルクトース、キシロース、ラムノース、アラビノース、デオキシグルコース、ガラクトースを含むがこれらに限定されないものが、受容体である標的ステビオールグリコシドに転移される。一実施形態では、受容体であるステビオールグリコシドは、レバウジオシド１ａ、レバウジオシド１ｂ、レバウジオシド１ｃ、レバウジオシド１ｄ、レバウジオシド１ｅ、レバウジオシド１ｆ、レバウジオシド１ｇ、レバウジオシド１ｈ、レバウジオシド１ｉ、レバウジオシド１ｊ、レバウジオシド１ｋ、レバウジオシド１ｌ、レバウジオシド１ｍ、及び／又はレバウジオシド１ｎである。別の実施形態では、受容体であるステビオールグリコシドは、レバウジオシド２ａである。別の実施形態では、受容体であるステビオールグリコシドは、レバウジオシドＭ４である。別の実施形態では、受容体であるステビオールグリコシドは、ＳｖＧ７である。
任意選択的に、本発明の方法は、標的ステビオールグリコシドを培地から分離して、高純度標的ステビオールグリコシド組成物を提供することを更に含む。標的ステビオールグリコシドは、例えば結晶化、膜による分離、遠心分離、抽出、クロマトグラフィ分離、又はこのような方法の組み合わせなどの、少なくとも１つの好適な方法によって分離することができる。
一実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、微生物内で産生され得る。別の実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、培地中で分泌され得る。別の一実施形態では、放出されたステビオールグリコシドは、培地から連続的に取り出され得る。更に別の実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、変換反応の完了後に分離される。
一実施形態では、分離によって、無水ベースで約８０重量％を超える標的ステビオールグリコシドを含む組成物、すなわち、高純度ステビオールグリコシド組成物が生成される。別の実施形態では、分離によって、約９０重量％を超える標的ステビオールグリコシドを含む組成物が生成される。特定の実施形態では、組成物は、約９５重量％を超える標的ステビオールグリコシドを含む。他の実施形態では、組成物は、約９９重量％を超える標的ステビオールグリコシドを含む。
標的ステビオールグリコシドは、水和物、溶媒和物、無水物、又はこれらの組み合わせを含む、任意の多形又は無定形の形態であり得る。
精製された標的ステビオールグリコシドは、甘味料、風味調整剤、調整特性を有する風味料、及び／又は発泡抑制剤として消費製品に使用することができる。好適な消費者製品としては、食品、飲料、医薬組成物、タバコ製品、栄養補助組成物、口腔衛生組成物、及び化粧品組成物が挙げられるが、これらに限定されない。
ＳｖＧ７ステビオールグリコシドであるレバウジオシド１ａの化学構造を示す図である。 ＳｖＧ７ステビオールグリコシドであるレバウジオシド１ｂの化学構造を示す図である。 ＳｖＧ７ステビオールグリコシドであるレバウジオシド１ｃの化学構造を示す図である。 ＳｖＧ７ステビオールグリコシドであるレバウジオシド１ｄの化学構造を示す図である。 ＳｖＧ７ステビオールグリコシドであるレバウジオシド１ｅの化学構造を示す図である。 ＳｖＧ７ステビオールグリコシドであるレバウジオシド１ｆの化学構造を示す図である。 ＳｖＧ７ステビオールグリコシドであるレバウジオシド１ｇの化学構造を示す図である。 ＳｖＧ７ステビオールグリコシドであるレバウジオシド１ｈの化学構造を示す図である。 ＳｖＧ７ステビオールグリコシドであるレバウジオシド１ｉの化学構造を示す図である。 ＳｖＧ７ステビオールグリコシドであるレバウジオシド１ｊの化学構造を示す図である。 ＳｖＧ７ステビオールグリコシドであるレバウジオシド１ｋの化学構造を示す図である。 ＳｖＧ７ステビオールグリコシドであるレバウジオシド１ｌの化学構造を示す図である。 ＳｖＧ７ステビオールグリコシドであるレバウジオシド１ｍの化学構造を示す図である。 ＳｖＧ７ステビオールグリコシドであるレバウジオシド１ｎの化学構造を示す図である。 ＳｖＧ７ステビオールグリコシドであるレバウジオシド２ａの化学構造を示す図である。 レバウジオシドＭ４の化学構造を示す図である。 レバウジオシド１ａ、レバウジオシド１ｂ、レバウジオシド１ｃ、レバウジオシド１ｄ、レバウジオシド１ｅ、レバウジオシド１ｆ、レバウジオシド１ｇ、レバウジオシド１ｈ、レバウジオシド１ｉ、レバウジオシド１ｊ、レバウジオシド１ｋ、レバウジオシド１ｌ、レバウジオシド１ｍ、レバウジオシド１ｎ、レバウジオシド２ａ、レバウジオシドＭ４及び様々なステビオールグリコシドを、ステビオール及び様々な中間ステビオールグリコシドから生成する経路を示す図である。 レバウジオシド１ａ、レバウジオシド１ｂ、レバウジオシド１ｃ、レバウジオシド１ｄ、レバウジオシド１ｅ、レバウジオシド１ｆ、レバウジオシド１ｇ、レバウジオシド１ｈ、レバウジオシド１ｉ、レバウジオシド１ｊ、レバウジオシド１ｋ、レバウジオシド１ｌ、レバウジオシド１ｍ、レバウジオシド１ｎ、レバウジオシド２ａ、レバウジオシドＭ４及び様々なステビオールグリコシドを、ステビオール及び様々な中間ステビオールグリコシドから生成する経路を示す図である。 レバウジオシド１ａ、レバウジオシド１ｂ、レバウジオシド１ｃ、レバウジオシド１ｄ、レバウジオシド１ｅ、レバウジオシド１ｆ、レバウジオシド１ｇ、レバウジオシド１ｈ、レバウジオシド１ｉ、レバウジオシド１ｊ、レバウジオシド１ｋ、レバウジオシド１ｌ、レバウジオシド１ｍ、レバウジオシド１ｎ、レバウジオシド２ａ、レバウジオシドＭ４及び様々なステビオールグリコシドを、ステビオール及び様々な中間ステビオールグリコシドから生成する経路を示す図である。 レバウジオシド１ａ、レバウジオシド１ｂ、レバウジオシド１ｃ、レバウジオシド１ｄ、レバウジオシド１ｅ、レバウジオシド１ｆ、レバウジオシド１ｇ、レバウジオシド１ｈ、レバウジオシド１ｉ、レバウジオシド１ｊ、レバウジオシド１ｋ、レバウジオシド１ｌ、レバウジオシド１ｍ、レバウジオシド１ｎ、レバウジオシド２ａ、レバウジオシドＭ４及び様々なステビオールグリコシドを、ステビオール及び様々な中間ステビオールグリコシドから生成する経路を示す図である。 レバウジオシド１ａ、レバウジオシド１ｂ、レバウジオシド１ｃ、レバウジオシド１ｄ、レバウジオシド１ｅ、レバウジオシド１ｆ、レバウジオシド１ｇ、レバウジオシド１ｈ、レバウジオシド１ｉ、レバウジオシド１ｊ、レバウジオシド１ｋ、レバウジオシド１ｌ、レバウジオシド１ｍ、レバウジオシド１ｎ、レバウジオシド２ａ、レバウジオシドＭ４及び様々なステビオールグリコシドを、ステビオール及び様々な中間ステビオールグリコシドから生成する経路を示す図である。 レバウジオシド１ａ、レバウジオシド１ｂ、レバウジオシド１ｃ、レバウジオシド１ｄ、レバウジオシド１ｅ、レバウジオシド１ｆ、レバウジオシド１ｇ、レバウジオシド１ｈ、レバウジオシド１ｉ、レバウジオシド１ｊ、レバウジオシド１ｋ、レバウジオシド１ｌ、レバウジオシド１ｍ、レバウジオシド１ｎ、レバウジオシド２ａ、レバウジオシドＭ４及び様々なステビオールグリコシドを、ステビオール及び様々な中間ステビオールグリコシドから生成する経路を示す図である。 レバウジオシド１ａ、レバウジオシド１ｂ、レバウジオシド１ｃ、レバウジオシド１ｄ、レバウジオシド１ｅ、レバウジオシド１ｆ、レバウジオシド１ｇ、レバウジオシド１ｈ、レバウジオシド１ｉ、レバウジオシド１ｊ、レバウジオシド１ｋ、レバウジオシド１ｌ、レバウジオシド１ｍ、レバウジオシド１ｎ、レバウジオシド２ａ、レバウジオシドＭ４及び様々なステビオールグリコシドを、ステビオール及び様々な中間ステビオールグリコシドから生成する経路を示す図である。 レバウジオシド１ａ、レバウジオシド１ｂ、レバウジオシド１ｃ、レバウジオシド１ｄ、レバウジオシド１ｅ、レバウジオシド１ｆ、レバウジオシド１ｇ、レバウジオシド１ｈ、レバウジオシド１ｉ、レバウジオシド１ｊ、レバウジオシド１ｋ、レバウジオシド１ｌ、レバウジオシド１ｍ、レバウジオシド１ｎ、レバウジオシド２ａ、レバウジオシドＭ４及び様々なステビオールグリコシドを、ステビオール及び様々な中間ステビオールグリコシドから生成する経路を示す図である。 レバウジオシド１ａ、レバウジオシド１ｂ、レバウジオシド１ｃ、レバウジオシド１ｄ、レバウジオシド１ｅ、レバウジオシド１ｆ、レバウジオシド１ｇ、レバウジオシド１ｈ、レバウジオシド１ｉ、レバウジオシド１ｊ、レバウジオシド１ｋ、レバウジオシド１ｌ、レバウジオシド１ｍ、レバウジオシド１ｎ、レバウジオシド２ａ、レバウジオシドＭ４及び様々なステビオールグリコシドを、ステビオール及び様々な中間ステビオールグリコシドから生成する経路を示す図である。 レバウジオシド１ａ、レバウジオシド１ｂ、レバウジオシド１ｃ、レバウジオシド１ｄ、レバウジオシド１ｅ、レバウジオシド１ｆ、レバウジオシド１ｇ、レバウジオシド１ｈ、レバウジオシド１ｉ、レバウジオシド１ｊ、レバウジオシド１ｋ、レバウジオシド１ｌ、レバウジオシド１ｍ、レバウジオシド１ｎ、レバウジオシド２ａ、レバウジオシドＭ４及び様々なステビオールグリコシドを、ステビオール及び様々な中間ステビオールグリコシドから生成する経路を示す図である。 レバウジオシド１ａ、レバウジオシド１ｂ、レバウジオシド１ｃ、レバウジオシド１ｄ、レバウジオシド１ｅ、レバウジオシド１ｆ、レバウジオシド１ｇ、レバウジオシド１ｈ、レバウジオシド１ｉ、レバウジオシド１ｊ、レバウジオシド１ｋ、レバウジオシド１ｌ、レバウジオシド１ｍ、レバウジオシド１ｎ、レバウジオシド２ａ、レバウジオシドＭ４及び様々なステビオールグリコシドを、ステビオール及び様々な中間ステビオールグリコシドから生成する経路を示す図である。 酵素ＵＧＴＳｌ２及びＵＧＴ７６Ｇ１を使用した、バイオ触媒によるレバウジオシド１ａのレバウジオシドＡからの生成、並びにスクロースシンターゼＳｕＳｙ＿Ａｔを介した、ＵＤＰ－グルコースへのＵＤＰの付随する再利用を示す図である。 酵素ＵＧＴＳｌ２及びＵＧＴ７６Ｇ１を使用した、バイオ触媒によるレバウジオシド１ｂのレバウジオシドＡからの生成、並びにスクロースシンターゼＳｕＳｙ＿Ａｔを介した、ＵＤＰ－グルコースへのＵＤＰの付随する再利用を示す図である。 酵素ＵＧＴＳｌ２及びＵＧＴ７６Ｇ１を使用した、バイオ触媒によるレバウジオシド１ｃのレバウジオシドＡからの生成、並びにスクロースシンターゼＳｕＳｙ＿Ａｔを介した、ＵＤＰ－グルコースへのＵＤＰの付随する再利用を示す図である。 酵素ＵＧＴＳｌ２及びＵＧＴ７６Ｇ１を使用した、バイオ触媒によるレバウジオシド１ｄのレバウジオシドＡからの生成、並びにスクロースシンターゼＳｕＳｙ＿Ａｔを介した、ＵＤＰ－グルコースへのＵＤＰの付随する再利用を示す図である。 酵素ＵＧＴＳｌ２及びＵＧＴ７６Ｇ１を使用した、バイオ触媒によるレバウジオシド１ｅのレバウジオシドＡからの生成、並びにスクロースシンターゼＳｕＳｙ＿Ａｔを介した、ＵＤＰ－グルコースへのＵＤＰの付随する再利用を示す図である。 酵素ＵＧＴＳｌ２及びＵＧＴ７６Ｇ１を使用した、バイオ触媒によるレバウジオシド１ｆのレバウジオシドＡからの生成、並びにスクロースシンターゼＳｕＳｙ＿Ａｔを介した、ＵＤＰ－グルコースへのＵＤＰの付随する再利用を示す図である。 酵素ＵＧＴＳｌ２及びＵＧＴ７６Ｇ１を使用した、バイオ触媒によるレバウジオシド１ｇのレバウジオシドＡからの生成、並びにスクロースシンターゼＳｕＳｙ＿Ａｔを介した、ＵＤＰ－グルコースへのＵＤＰの付随する再利用を示す図である。 酵素ＵＧＴＳｌ２及びＵＧＴ７６Ｇ１を使用した、バイオ触媒によるレバウジオシド１ｈのレバウジオシドＡからの生成、並びにスクロースシンターゼＳｕＳｙ＿Ａｔを介した、ＵＤＰ－グルコースへのＵＤＰの付随する再利用を示す図である。 酵素ＵＧＴＳｌ２及びＵＧＴ７６Ｇ１を使用した、バイオ触媒によるレバウジオシド１ｉのレバウジオシドＡからの生成、並びにスクロースシンターゼＳｕＳｙ＿Ａｔを介した、ＵＤＰ－グルコースへのＵＤＰの付随する再利用を示す図である。 酵素ＵＧＴＳｌ２及びＵＧＴ７６Ｇ１を使用した、バイオ触媒によるレバウジオシド１ｊのレバウジオシドＡからの生成、並びにスクロースシンターゼＳｕＳｙ＿Ａｔを介した、ＵＤＰ－グルコースへのＵＤＰの付随する再利用を示す図である。 酵素ＵＧＴＳｌ２及びＵＧＴ７６Ｇ１を使用した、バイオ触媒によるレバウジオシド１ｋのレバウジオシドＡからの生成、並びにスクロースシンターゼＳｕＳｙ＿Ａｔを介した、ＵＤＰ－グルコースへのＵＤＰの付随する再利用を示す図である。 酵素ＵＧＴＳｌ２及びＵＧＴ７６Ｇ１を使用した、バイオ触媒によるレバウジオシド１ｌのレバウジオシドＡからの生成、並びにスクロースシンターゼＳｕＳｙ＿Ａｔを介した、ＵＤＰ－グルコースへのＵＤＰの付随する再利用を示す図である。 酵素ＵＧＴＳｌ２及びＵＧＴ７６Ｇ１を使用した、バイオ触媒によるレバウジオシド１ｍのレバウジオシドＡからの生成、並びにスクロースシンターゼＳｕＳｙ＿Ａｔを介した、ＵＤＰ－グルコースへのＵＤＰの付随する再利用を示す図である。 酵素ＵＧＴＳｌ２及びＵＧＴ７６Ｇ１を使用した、バイオ触媒によるレバウジオシド１ｎのレバウジオシドＡからの生成、並びにスクロースシンターゼＳｕＳｙ＿Ａｔを介した、ＵＤＰ－グルコースへのＵＤＰの付随する再利用を示す図である。 酵素ＵＧＴＳｌ２及びＵＧＴ７６Ｇ１を使用した、バイオ触媒によるレバウジオシド２ａのステビオシドからの生成、並びにスクロースシンターゼＳｕＳｙ＿Ａｔを介した、ＵＤＰ－グルコースへのＵＤＰの付随する再利用を示す図である。 酵素ＵＧＴＳｌ２及びＵＧＴ７６Ｇ１を使用した、バイオ触媒によるレバウジオシドＭ４のステビオシドからの生成、並びにスクロースシンターゼＳｕＳｙ＿Ａｔを介した、ＵＤＰ－グルコースへのＵＤＰの付随する再利用を示す図である。 酵素ＵＧＴＳｌ２及びＵＧＴ７６Ｇ１を使用した、バイオ触媒によるレバウジオシド２ａのレバウジオシドＡＭからの生成、並びにスクロースシンターゼＳｕＳｙ＿Ａｔを介した、ＵＤＰ－グルコースへのＵＤＰの付随する再利用を示す図である。 酵素ＵＧＴＳｌ２及びＵＧＴ７６Ｇ１を使用した、バイオ触媒によるレバウジオシドＭ４のレバウジオシドＡＭからの生成、並びにスクロースシンターゼＳｕＳｙ＿Ａｔを介した、ＵＤＰ－グルコースへのＵＤＰの付随する再利用を示す図である。 酵素ＵＧＴＳｌ２及びＵＧＴ７６Ｇ１を使用した、バイオ触媒によるレバウジオシド２ａのレバウジオシドＭ４からの生成、並びにスクロースシンターゼＳｕＳｙ＿Ａｔを介した、ＵＤＰ－グルコースへのＵＤＰの付随する再利用を示す図である。 ステビオシドのＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である。保持時間２０．９５８分でのピークは、ステビオシドに対応する。保持時間２０．７２５分でのピークは、レバウジオシドＡに対応する。３２．９２５分におけるピークは、レバウジオシドＢに対応する。３３．９３０分におけるピークは、ステビオールビオシドに対応する。 バイオ触媒によるＳｖＧ７分子のステビオシドからの生成の、生成物のＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である。６．４５９分におけるピークは、レバウジオシド２ａに対応する。９．８２５分におけるピークは、レバウジオシドＡＭに対応する。１３．８４５分におけるピークは、レバウジオシドＭに対応する。３２．９７４分におけるピークは、レバウジオシドＢに対応する。３３．９７９分におけるピークは、ステビオールビオシドに対応する。 ＨＰＬＣによる精製後のレバウジオシド２ａのＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である。保持時間６．２６１分でのピークは、レバウジオシド２ａに対応する。 レバウジオシド２ａの１Ｈ ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ、ピリジン－ｄ５）を示す図である。 レバウジオシド２ａのＨＳＱＣスペクトル（５００ＭＨｚ、ピリジン－ｄ５）を示す図である。 レバウジオシド２ａのＨ，Ｈ ＣＯＳＹスペクトル（５００ＭＨｚ、ピリジン－ｄ５）を示す図である。 レバウジオシド２ａのＨＭＢＣスペクトル（５００ＭＨｚ、ピリジン－ｄ５）を示す図である。 レバウジオシド２ａのＨＳＱＣ－ＴＯＣＳＹスペクトル（５００ＭＨｚ、ピリジン－ｄ５）を示す図である。 レバウジオシド２ａの１Ｄ－ＮＯＥＳＹスペクトル（５００ＭＨｚ、ピリジン－ｄ５）を示す図である。 レバウジオシド２ａのＬＣクロマトグラムを示す図である。 レバウジオシド２ａの質量スペクトルを示す図である。
本発明は、有機基質を含む出発組成物を微生物細胞及び／又は酵素調製物と接触させることによって標的ステビオールグリコシドを含む組成物を調製し、それによって標的ステビオールグリコシドを含む組成物を製造するための、プロセスを提供する。
本発明の１つの目的は、多様な出発組成物から、標的ステビオールグリコシド、特にステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシド、ステビオールビオシドＤ、ルブソシド、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、レバウジオシドＢ、ステビオシド、レバウジオシドＧ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＥ２、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＩ、レバウジオシドＡＭ、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＭ、レバウジオシドＭ４、レバウジオシド１ａ、レバウジオシド１ｂ、レバウジオシド１ｃ、レバウジオシド１ｄ、レバウジオシド１ｅ、レバウジオシド１ｆ、レバウジオシド１ｇ、レバウジオシド１ｈ、レバウジオシド１ｉ、レバウジオシド１ｊ、レバウジオシド１ｋ、レバウジオシド１ｌ、レバウジオシド１ｍ、レバウジオシド１ｎ、レバウジオシド２ａ、及び／若しくはＳｖＧ７又は合成ステビオールグリコシドを調製する効率的なバイオ触媒による方法を提供することである。
出発組成物
本明細書で使用するとき、「出発組成物」は、少なくとも１つの炭素原子を含む１種以上の有機化合物を含有する任意の組成物（一般に水溶液）を指す。
一実施形態では、出発組成物は、ステビオール、ステビオールグリコシド、ポリオール、及び多様な炭水化物からなる群から選択される。
出発組成物であるステビオールグリコシドは、ステビオール、ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシド、ステビオールビオシドＤ、ルブソシド、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、レバウジオシドＢ、ステビオシド、レバウジオシドＧ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＥ２、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＩ、レバウジオシドＡＭ、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＭ、及び／若しくはレバウジオシドＭ４、又はＳｔｅｖｉａ ｒｅｂａｕｄｉａｎａ植物において生じるステビオールの他のグリコシド、合成ステビオールグリコシド、例えば、酵素的にグリコシル化されたステビオールグリコシド、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択される。
一実施形態では、出発組成物は、ステビオールである。
別の実施形態では、出発組成物であるステビオールグリコシドは、ステビオールモノシドである。
更に別の実施形態では、出発組成物であるステビオールグリコシドは、ステビオールモノシドＡである。
別の実施形態では、出発組成物であるステビオールグリコシドは、ステビオールビオシドである。
別の実施形態では、出発組成物であるステビオールグリコシドは、ステビオールビオシドＤである。
別の実施形態では、出発組成物であるステビオールグリコシドは、ルブソシドである。
別の実施形態では、出発組成物であるステビオールグリコシドは、ルブソシドである。
別の実施形態では、出発組成物であるステビオールグリコシドは、ステビオールビオシドＡである。
別の実施形態では、出発組成物であるステビオールグリコシドは、ステビオールビオシドＢである。
別の実施形態では、出発組成物であるステビオールグリコシドは、レバウジオシドＢである。
別の実施形態では、出発組成物であるステビオールグリコシドは、ステビオシドである。
別の実施形態では、出発組成物であるステビオールグリコシドは、レバウジオシドＧである。
別の実施形態では、出発組成物であるステビオールグリコシドは、ステビオシドＡである。
別の実施形態では、出発組成物であるステビオールグリコシドは、ステビオシドＢである。
別の実施形態では、出発組成物であるステビオールグリコシドは、ステビオシドＣである。
別の実施形態では、出発組成物であるステビオールグリコシドは、レバウジオシドＡである。
別の実施形態では、出発組成物であるステビオールグリコシドは、レバウジオシドＥである。
別の実施形態では、出発組成物であるステビオールグリコシドは、レバウジオシドＥ２である。
別の実施形態では、出発組成物であるステビオールグリコシドは、レバウジオシドＥ４である。
別の実施形態では、出発組成物であるステビオールグリコシドは、レバウジオシドＥ６である。
別の実施形態では、出発組成物であるステビオールグリコシドは、レバウジオシドＥ３である。
別の実施形態では、出発組成物であるステビオールグリコシドは、レバウジオシドＤである。
別の実施形態では、出発組成物であるステビオールグリコシドは、レバウジオシドＩである。
別の実施形態では、出発組成物であるステビオールグリコシドは、レバウジオシドＡＭである。
別の実施形態では、出発組成物であるステビオールグリコシドは、レバウジオシドＤ７である。
別の実施形態では、出発組成物であるステビオールグリコシドは、レバウジオシドＭである。
別の実施形態では、出発組成物であるステビオールグリコシドは、レバウジオシドＭ４である。
用語「ポリオール」は、２個以上のヒドロキシル基を含有する分子を指す。ポリオールは、それぞれ２個、３個、及び４個のヒドロキシル基を含有するジオール、トリオール、又はテトラオールであってもよい。ポリオールはまた、それぞれ５個、６個、又は７個のヒドロキシル基を含有するペンタオール、ヘキサオール、ヘプタオールなどの、５個以上のヒドロキシル基を含有してもよい。加えて、ポリオールはまた、糖アルコール、多価アルコール、又は炭水化物の還元形態であるポリアルコールであってもよく、カルボニル基（アルデヒド又はケトン、還元糖）は、第一級又は第二級ヒドロキシル基に還元されている。ポリオールの例としては、エリトリトール、マルチトール、マンニトール、ソルビトール、ラクチトール、キシリトール、イノシトール、イソマルト、プロピレングリコール、グリセロール、トレイトール、ガラクチトール、水素添加イソマルツロース、還元イソマルトオリゴ糖、還元キシロオリゴ糖、還元ゲンチオオリゴ糖、還元マルトースシロップ、還元グルコースシロップ、水素化デンプン加水分解物、ポリグリシトール及び糖アルコール、又は還元可能な任意の他の炭水化物が挙げられるが、これらに限定されない。
用語「炭水化物」は、一般式（ＣＨ２Ｏ）ｎ（式中、ｎは、３～３０である）、並びにそれらのオリゴマー及びポリマーの、複数のヒドロキシル基で置換されたアルデヒド化合物又はケトン化合物を指す。更に、本発明の炭水化物は、１つ以上の位置で置換又は脱酸素化され得る。本明細書で使用するとき、炭水化物は、非修飾炭水化物、炭水化物誘導体、置換炭水化物、及び修飾炭水化物を包含する。本明細書で使用するとき、語句「炭水化物誘導体」、「置換炭水化物」、及び「修飾炭水化物」は、同義である。修飾炭水化物は、少なくとも１個の原子が付加、除去、若しくは置換された任意の炭水化物、又はこれらの組み合わせを意味する。したがって、炭水化物誘導体又は置換炭水化物としては、置換及び非置換単糖、二糖、オリゴ糖、及び多糖が挙げられる。炭水化物誘導体又は置換炭水化物は、炭水化物誘導体若しくは置換炭水化物官能基が、甘味料組成物の甘味を向上させるように機能する場合、任意選択的に、任意の対応するＣ位で脱酸素化することができ、かつ／あるいは、水素、ハロゲン、ハロアルキル、カルボキシル、アシル、アシルオキシ、アミノ、アミド、カルボキシル誘導体、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、アルコキシ、アリールオキシ、ニトロ、シアノ、スルホ、メルカプト、イミノ、スルホニル、スルフェニル、スルフィニル、スルファモイル、カルボアルコキシ、カルボキシアミド、ホスホニル、ホスフィニル、ホスホリル、ホスフィノ、チオエステル、チオエーテル、オキシイミノ、ヒドラジノ、カルバミル、ホスホ、ホスホナト、又は任意の他の可能な官能基などの１つ以上の部分により置換することができる。
本発明に従って使用してもよい炭水化物の例としては、タガトース、トレハロース、ガラクトース、ラムノース、様々なシクロデキストリン、環状オリゴ糖、様々な種類のマルトデキストリン、デキストラン、スクロース、グルコース、リブロース、フルクトース、トレオース、アラビノース、キシロース、リキソース、アロース、アルトロース、マンノース、イドース、ラクトース、マルトース、転化糖、イソトレハロース、ネオトレハロース、イソマルツロース、エリトロース、デオキシリボース、グロース、イドース、タロース、エリトルロース、キシルロース、プシコース、ツラノース、セロビオース、アミロペクチン、グルコサミン、マンノサミン、フコース、グルクロン酸、グルコン酸、グルコノラクトン、アベクオース、ガラクトサミン、ビートオリゴ糖、イソマルトオリゴ糖（イソマルトース、イソマルトトリオース、パノースなど）、キシロオリゴ糖（キシロトリオース、キシロビオースなど）、キシロ末端オリゴ糖、ゲンチオオリゴ糖（ゲンチオビオース、ゲンチオトリオース、ゲンチオテトラオースなど）、ソルボース、ニゲロオリゴ糖、パラチノースオリゴ糖、フラクトオリゴ糖（ケストース、ニストースなど）、マルトテトラオール、マルトトリオール、マルトオリゴ糖（マルトトリオース、マルトテトラオース、マルトペンタオース、マルトヘキサオース、マルトヘプタオースなど）、デンプン、イヌリン、イヌロオリゴ糖、ラクツロース、メリビオース、ラフィノース、リボース、高フルクトースコーンシロップなどの異性化液体糖、カップリング糖、及び大豆オリゴ糖が挙げられるが、これらに限定されない。加えて、炭水化物は、本明細書で使用するとき、Ｄ－配置又はＬ－配置のいずれかであってもよい。
出発組成物は、合成であるか又は（部分的に若しくは完全に）精製されてもよく、市販されているか又は調製されてもよい。
一実施形態では、出発組成物はグリセロールである。
別の実施形態では、出発組成物はグルコースである。
別の実施形態では、出発組成物はラムノースである。
なお別の実施形態では、出発組成物はスクロースである。
更に別の実施形態では、出発組成物はデンプンである。
別の実施形態では、出発組成物はマルトデキストリンである。
更に別の実施形態では、出発組成物はセルロースである。
なお別の実施形態では、出発組成物はアミロースである。
出発組成物の有機化合物（複数可）は、本明細書に記載されるように、標的ステビオールグリコシド（複数可）の生成のための基質（複数可）として機能する。
標的ステビオールグリコシド
本方法の標的ステビオールグリコシドは、本明細書に開示されるプロセスによって調製することができる任意のステビオールグリコシドであり得る。一実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシド、ステビオールビオシドＤ、ルブソシド、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、レバウジオシドＢ、ステビオシド、レバウジオシドＧ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＥ２、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＩ、レバウジオシドＡＭ、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＭ、レバウジオシドＭ４、レバウジオシド１ａ、レバウジオシド１ｂ、レバウジオシド１ｃ、レバウジオシド１ｄ、レバウジオシド１ｅ、レバウジオシド１ｆ、レバウジオシド１ｇ、レバウジオシド１ｈ、レバウジオシド１ｉ、レバウジオシド１ｊ、レバウジオシド１ｋ、レバウジオシド１ｌ、レバウジオシド１ｍ、レバウジオシド１ｎ、レバウジオシド２ａ、ＳｖＧ７、又はＳｔｅｖｉａ ｒｅｂａｕｄｉａｎａ植物において生じるステビオールの他のグリコシド、合成ステビオールグリコシド、例えば、酵素的にグリコシル化されたステビオールグリコシド、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。
一実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、ステビオールモノシドである。
別の実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、ステビオールモノシドＡである。
別の実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、ステビオールビオシドである。
別の実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、ステビオールビオシドＤである。
別の実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、ルブソシドである。
別の実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、ステビオールビオシドＡである。
別の実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、ステビオールビオシドＢである。
別の実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、レバウジオシドＢである。
別の実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、ステビオシドである。
別の実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、レバウジオシドＧである。
別の実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、ステビオシドＡである。
別の実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、ステビオシドＢである。
別の実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、ステビオシドＣである。
別の実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、レバウジオシドＡである。
別の実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、レバウジオシドＥである。
別の実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、レバウジオシドＥ２である。
別の実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、レバウジオシドＥ４である。
別の実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、レバウジオシドＥ６である。
別の実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、レバウジオシドＥ３である。
別の実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、レバウジオシドＤである。
別の実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、レバウジオシドＩである。
別の実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、レバウジオシドＡＭである。
別の実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、レバウジオシドＤ７である。
別の実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、レバウジオシドＭである。
別の実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、レバウジオシドＭ４である。
別の実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、レバウジオシド１ａである。
別の実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、レバウジオシド１ｂである。
別の実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、レバウジオシド１ｃである。
別の実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、レバウジオシド１ｄである。
別の実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、レバウジオシド１ｅである。
別の実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、レバウジオシド１ｆである。
別の実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、レバウジオシド１ｇである。
別の実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、レバウジオシド１ｈである。
別の実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、レバウジオシド１ｉである。
別の実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、レバウジオシド１ｊである。
別の実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、レバウジオシド１ｋである。
別の実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、レバウジオシド１ｌである。
別の実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、レバウジオシド１ｍである。
別の実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、レバウジオシド１ｎである。
別の実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、レバウジオシド２ａである。
別の実施形態では、標的ステビオールグリコシドは、ＳｖＧ７である。
標的ステビオールグリコシドは、水和物、溶媒和物、無水物、又はこれらの組み合わせを含む、任意の多形又は無定形の形態であり得る。
一実施形態では、本発明は、ステビオールモノシドの生成のためのバイオ触媒プロセスである。
一実施形態では、本発明は、ステビオールモノシドＡの生成のためのバイオ触媒プロセスである。
一実施形態では、本発明は、ステビオールビオシドの生成のためのバイオ触媒プロセスである。
一実施形態では、本発明は、ステビオールビオシドＤの生成のためのバイオ触媒プロセスである。
一実施形態では、本発明は、ルブソシドの生成のためのバイオ触媒プロセスである。
一実施形態では、本発明は、ステビオールビオシドＡの生成のためのバイオ触媒プロセスである。
一実施形態では、本発明は、ステビオールビオシドＢの生成のためのバイオ触媒プロセスである。
一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＢの生成のためのバイオ触媒プロセスである。
一実施形態では、本発明は、ステビオシドの生成のためのバイオ触媒プロセスである。
一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＧの生成のためのバイオ触媒プロセスである。
一実施形態では、本発明は、ステビオシドＡの生成のためのバイオ触媒プロセスである。
一実施形態では、本発明は、ステビオシドＢの生成のためのバイオ触媒プロセスである。
一実施形態では、本発明は、ステビオシドＣの生成のためのバイオ触媒プロセスである。
一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＡの生成のためのバイオ触媒プロセスである。
一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＥの生成のためのバイオ触媒プロセスである。
一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＥ２の生成のためのバイオ触媒プロセスである。
一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＥ４の生成のためのバイオ触媒プロセスである。
一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＥ６の生成のためのバイオ触媒プロセスである。
一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＥ３の生成のためのバイオ触媒プロセスである。
一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＤの生成のためのバイオ触媒プロセスである。
一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＩの生成のためのバイオ触媒プロセスである。
一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＡＭの生成のためのバイオ触媒プロセスである。
一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＤ７の生成のためのバイオ触媒プロセスである。
一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＥ３の生成のためのバイオ触媒プロセスである。
一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＭの生成のためのバイオ触媒プロセスである。
一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＭ４の生成のためのバイオ触媒プロセスである。
一実施形態では、本発明は、レバウジオシド１ａの生成のためのバイオ触媒プロセスである。
一実施形態では、本発明は、レバウジオシド１ｂの生成のためのバイオ触媒プロセスである。
一実施形態では、本発明は、レバウジオシド１ｃの生成のためのバイオ触媒プロセスである。
一実施形態では、本発明は、レバウジオシド１ｄの生成のためのバイオ触媒プロセスである。
一実施形態では、本発明は、レバウジオシド１ｅの生成のためのバイオ触媒プロセスである。
一実施形態では、本発明は、レバウジオシド１ｆの生成のためのバイオ触媒プロセスである。
一実施形態では、本発明は、レバウジオシド１ｇの生成のためのバイオ触媒プロセスである。
一実施形態では、本発明は、レバウジオシド１ｈの生成のためのバイオ触媒プロセスである。
一実施形態では、本発明は、レバウジオシド１ｉの生成のためのバイオ触媒プロセスである。
一実施形態では、本発明は、レバウジオシド１ｊの生成のためのバイオ触媒プロセスである。
一実施形態では、本発明は、レバウジオシド１ｋの生成のためのバイオ触媒プロセスである。
一実施形態では、本発明は、レバウジオシド１ｌの生成のためのバイオ触媒プロセスである。
一実施形態では、本発明は、レバウジオシド１ｍの生成のためのバイオ触媒プロセスである。
一実施形態では、本発明は、レバウジオシド１ｎの生成のためのバイオ触媒プロセスである。
一実施形態では、本発明は、レバウジオシド２ａの生成のためのバイオ触媒プロセスである。
一実施形態では、本発明は、ＳｖＧ７の生成のためのバイオ触媒プロセスである。
特定の実施形態において、本発明は、レバウジオシドＡ及びＵＤＰ－グルコースを含む出発組成物からレバウジオシド１ａの生成のためのバイオ触媒プロセスを提供する。
特定の実施形態において、本発明は、レバウジオシドＡ及びＵＤＰ－グルコースを含む出発組成物からレバウジオシド１ｂの生成のためのバイオ触媒プロセスを提供する。
特定の実施形態において、本発明は、レバウジオシドＡ及びＵＤＰ－グルコースを含む出発組成物からレバウジオシド１ｃの生成のためのバイオ触媒プロセスを提供する。
特定の実施形態において、本発明は、レバウジオシドＡ及びＵＤＰ－グルコースを含む出発組成物からレバウジオシド１ｄの生成のためのバイオ触媒プロセスを提供する。
特定の実施形態において、本発明は、レバウジオシドＡ及びＵＤＰ－グルコースを含む出発組成物からレバウジオシド１ｅの生成のためのバイオ触媒プロセスを提供する。
特定の実施形態において、本発明は、レバウジオシドＡ及びＵＤＰ－グルコースを含む出発組成物からレバウジオシド１ｆの生成のためのバイオ触媒プロセスを提供する。
特定の実施形態において、本発明は、レバウジオシドＡ及びＵＤＰ－グルコースを含む出発組成物からレバウジオシド１ｇの生成のためのバイオ触媒プロセスを提供する。
特定の実施形態において、本発明は、レバウジオシドＡ及びＵＤＰ－グルコースを含む出発組成物からレバウジオシド１ｈの生成のためのバイオ触媒プロセスを提供する。
特定の実施形態において、本発明は、レバウジオシドＡ及びＵＤＰ－グルコースを含む出発組成物からレバウジオシド１ｉの生成のためのバイオ触媒プロセスを提供する。
特定の実施形態において、本発明は、レバウジオシドＡ及びＵＤＰ－グルコースを含む出発組成物からレバウジオシド１ｊの生成のためのバイオ触媒プロセスを提供する。
特定の実施形態において、本発明は、レバウジオシドＡ及びＵＤＰ－グルコースを含む出発組成物からレバウジオシド１ｋの生成のためのバイオ触媒プロセスを提供する。
特定の実施形態において、本発明は、レバウジオシドＡ及びＵＤＰ－グルコースを含む出発組成物からレバウジオシド１ｌの生成のためのバイオ触媒プロセスを提供する。
特定の実施形態において、本発明は、レバウジオシドＡ及びＵＤＰ－グルコースを含む出発組成物からレバウジオシド１ｍの生成のためのバイオ触媒プロセスを提供する。
特定の実施形態において、本発明は、レバウジオシドＡ及びＵＤＰ－グルコースを含む出発組成物からレバウジオシド１ｎの生成のためのバイオ触媒プロセスを提供する。
特定の実施形態において、本発明は、ステビオシド及びＵＤＰ－グルコースを含む出発組成物からレバウジオシド２ａの生成のためのバイオ触媒プロセスを提供する。
特定の実施形態において、本発明は、ステビオシド及びＵＤＰ－グルコースを含む出発組成物からレバウジオシドＭ４の生成のためのバイオ触媒プロセスを提供する。
特定の実施形態において、本発明は、レバウジオシドＡＭ及びＵＤＰ－グルコースを含む出発組成物からレバウジオシド２ａの生成のためのバイオ触媒プロセスを提供する。
特定の実施形態において、本発明は、レバウジオシドＡＭ及びＵＤＰ－グルコースを含む出発組成物からレバウジオシドＭ４の生成のためのバイオ触媒プロセスを提供する。
特定の実施形態において、本発明は、レバウジオシドＭ４及びＵＤＰ－グルコースを含む出発組成物からレバウジオシド２ａの生成のためのバイオ触媒プロセスを提供する。
特定の実施形態において、本発明は、レバウジオシドＭ及びＵＤＰ－グルコースを含む出発組成物からレバウジオシド１ａの生成のためのバイオ触媒プロセスを提供する。
特定の実施形態において、本発明は、レバウジオシドＭ及びＵＤＰ－グルコースを含む出発組成物からレバウジオシド１ｂの生成のためのバイオ触媒プロセスを提供する。
特定の実施形態において、本発明は、レバウジオシドＭ及びＵＤＰ－グルコースを含む出発組成物からレバウジオシド１ｃの生成のためのバイオ触媒プロセスを提供する。
特定の実施形態において、本発明は、レバウジオシドＭ及びＵＤＰ－グルコースを含む出発組成物からレバウジオシド１ｄの生成のためのバイオ触媒プロセスを提供する。
特定の実施形態において、本発明は、レバウジオシドＭ及びＵＤＰ－グルコースを含む出発組成物からレバウジオシド１ｅの生成のためのバイオ触媒プロセスを提供する。
特定の実施形態において、本発明は、レバウジオシドＭ及びＵＤＰ－グルコースを含む出発組成物からレバウジオシド１ｆの生成のためのバイオ触媒プロセスを提供する。
特定の実施形態において、本発明は、レバウジオシドＭ及びＵＤＰ－グルコースを含む出発組成物からレバウジオシド１ｇの生成のためのバイオ触媒プロセスを提供する。
特定の実施形態において、本発明は、レバウジオシドＭ及びＵＤＰ－グルコースを含む出発組成物からレバウジオシド１ｈの生成のためのバイオ触媒プロセスを提供する。
特定の実施形態において、本発明は、レバウジオシドＭ及びＵＤＰ－グルコースを含む出発組成物からレバウジオシド１ｉの生成のためのバイオ触媒プロセスを提供する。
特定の実施形態において、本発明は、レバウジオシドＭ及びＵＤＰ－グルコースを含む出発組成物からレバウジオシド１ｊの生成のためのバイオ触媒プロセスを提供する。
特定の実施形態において、本発明は、レバウジオシドＭ及びＵＤＰ－グルコースを含む出発組成物からレバウジオシド１ｋの生成のためのバイオ触媒プロセスを提供する。
特定の実施形態において、本発明は、レバウジオシドＭ及びＵＤＰ－グルコースを含む出発組成物からレバウジオシド１ｌの生成のためのバイオ触媒プロセスを提供する。
特定の実施形態において、本発明は、レバウジオシドＭ及びＵＤＰ－グルコースを含む出発組成物からレバウジオシド１ｍの生成のためのバイオ触媒プロセスを提供する。
特定の実施形態において、本発明は、レバウジオシドＭ及びＵＤＰ－グルコースを含む出発組成物からレバウジオシド１ｎの生成のためのバイオ触媒プロセスを提供する。
特定の実施形態において、本発明は、レバウジオシドＭ４及びＵＤＰ－グルコースを含む出発組成物からレバウジオシド２ａの生成のためのバイオ触媒プロセスを提供する。
特定の実施形態において、本発明は、ステビオシド及びＵＤＰ－グルコースを含む出発組成物からＳｖＧ７の生成のためのバイオ触媒プロセスを提供する。
特定の実施形態において、本発明は、レバウジオシドＡ及びＵＤＰ－グルコースを含む出発組成物からＳｖＧ７の生成のためのバイオ触媒プロセスを提供する。
特定の実施形態において、本発明は、ステビオシド、レバウジオシドＡ及びＵＤＰ－グルコースを含む出発組成物からＳｖＧ７の生成のためのバイオ触媒プロセスを提供する。
特定の実施形態において、本発明は、レバウジオシドＡＭ及びＵＤＰ－グルコースを含む出発組成物からＳｖＧ７の生成のためのバイオ触媒プロセスを提供する。
特定の実施形態において、本発明は、レバウジオシドＭ及びＵＤＰ－グルコースを含む出発組成物からレＳｖＧ７の生成のためのバイオ触媒プロセスを提供する。
特定の実施形態において、本発明は、レバウジオシドＭ４及びＵＤＰ－グルコースを含む出発組成物からＳｖＧ７の生成のためのバイオ触媒プロセスを提供する。
任意選択的に、本発明の方法は、標的ステビオールグリコシドを培地から分離して、高純度標的ステビオールグリコシド組成物を提供することを更に含む。標的ステビオールグリコシドは、例えば、結晶化、膜による分離、遠心分離、抽出、クロマトグラフィ分離、又はこのような方法の組み合わせなどの、任意の好適な方法によって分離することができる。
特定の実施形態では、本明細書に記載されたプロセスは、高純度標的ステビオールグリコシド組成物をもたらす。本明細書で使用するとき、用語「高純度」は、無水（乾燥）基準で、約８０重量％超の標的ステビオールグリコシドを有する組成物を指す。一実施形態では、高純度標的ステビオールグリコシド組成物は、乾燥基準で、例えば、約９１重量％超、約９２重量％超、約９３重量％超、約９４重量％超、約９５重量％超、約９６重量％超、約９７重量％超、約９８重量％超、又は約９９重量％超の標的ステビオールグリコシド含量などの、無水（乾燥）基準で約９０重量％超の標的ステビオールグリコシドを含有する。
一実施形態では、標的ステビオールグリコシドがレバウジオシドＭ４である場合、本明細書に記載のプロセスは、乾燥基準で約９０重量％超のレバウジオシドＭ４含量を有する組成物を提供する。別の特定の実施形態では、標的ステビオールグリコシドがレバウジオシドＭ４である場合、本明細書に記載のプロセスは、乾燥基準で約９５重量％超の含量を含む組成物を提供する。
一実施形態では、標的ステビオールグリコシドがレバウジオシド２ａである場合、本明細書に記載のプロセスは、乾燥基準で約９０重量％超のレバウジオシド２ａ含量を有する組成物を提供する。別の特定の実施形態では、標的ステビオールグリコシドがレバウジオシド２ａである場合、本明細書に記載のプロセスは、乾燥基準で約９５重量％超の含量を含む組成物を提供する。
一実施形態では、標的ステビオールグリコシドがＳｖＧ７である場合、本明細書に記載のプロセスは、乾燥基準で約９０重量％超のＳｖＧ７含量を有する組成物を提供する。別の特定の実施形態では、標的ステビオールグリコシドがＳｖＧ７である場合、本明細書に記載のプロセスは、乾燥基準で約９５重量％超のＳｖＧ７含量を含む組成物を提供する。
微生物及び酵素調製物
本発明の一実施形態では、微生物（微生物細胞）及び／又は酵素調製物を、出発組成物を含む培地と接触させて、標的ステビオールグリコシドを生成する。
酵素は、全細胞懸濁液、粗溶解物、精製酵素、又はこれらの組み合わせの形態で提供することができる。一実施形態では、バイオ触媒は、出発組成物を標的ステビオールグリコシドに変換することができる精製酵素である。別の実施形態では、バイオ触媒は、出発組成物を標的ステビオールグリコシドに変換することができる少なくとも１種の酵素を含む粗溶解物である。なお別の実施形態では、バイオ触媒は、出発組成物を標的ステビオールグリコシドに変換することができる少なくとも１種の酵素を含む全細胞懸濁液である。
別の実施形態では、バイオ触媒は、出発組成物を標的ステビオールグリコシドに変換することができる酵素（複数可）を含む１つ以上の微生物細胞である。酵素は、細胞の表面上、細胞内に位置してもよく、あるいは細胞の表面上及び細胞内の両方に位置してもよい。
出発組成物を標的ステビオールグリコシドに変換するための好適な酵素としては、ステビオール生合成酵素、ＮＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼ（ＮＧＴ）、ＡＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼ（ＡＧＴ）、ＣＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼ（ＣＧＴ）、ＧＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼ（ＧＧＴ）、ＴＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼ（ＴＤＰ）、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）が挙げられるが、これらに限定されない。任意選択的に、上記好適な酵素としては、ＮＤＰ再利用酵素（複数可）、ＡＤＰ－再利用酵素（複数可）、ＣＤＰ－再利用酵素（複数可）、ＧＤＰ－再利用酵素（複数可）、ＴＤＰ－再利用酵素（複数可）、及び／又はＵＤＰ－再利用酵素（複数可）を挙げることができる。
一実施形態では、ステビオール生合成酵素としては、メバロン酸（ＭＶＡ）経路酵素が挙げられる。
別の実施形態では、ステビオール生合成酵素としては、非メバロン酸２－Ｃ－メチル－Ｄ－エリトリトール－４－リン酸経路（ＭＥＰ／ＤＯＸＰ）酵素が挙げられる。
一実施形態では、ステビオール生合成酵素は、ゲラニルゲラニル二リン酸シンターゼ、コパリル二リン酸シンターゼ、カウレンシンターゼ、カウレンオキシダーゼ、カウレン酸１３－ヒドロキシラーゼ（ＫＡＨ）、ステビオールシンセターゼ、デオキシキシルロース５－リン酸シンターゼ（ＤＸＳ）、Ｄ－１－デオキシキシルロース５－リン酸レダクトイソメラーゼ（ＤＸＲ）、４－ジホスホシチジル－２－Ｃ－メチル－Ｄ－エリトリトールシンターゼ（ＣＭＳ）、４－ジホスホシチジル－２－Ｃ－メチル－Ｄ－エリトリトールキナーゼ（ＣＭＫ）、４－ジホスホシチジル－２－Ｃ－メチル－Ｄ－エリトリトール２，４－シクロ二リン酸シンターゼ（ＭＣＳ）、ｌ－ヒドロキシ－２－メチル－２（Ｅ）－ブテニル４－二リン酸シンターゼ（ＨＤＳ）、ｌ－ヒドロキシ－２－メチル－２（Ｅ）－ブテニル４－二リン酸レダクターゼ（ＨＤＲ）、アセトアセチル－ＣｏＡチオラーゼ、切断型ＨＭＧ－ＣｏＡレダクターゼ、メバロン酸キナーゼ、ホスホメバロン酸キナーゼ、メバロン酸ピロリン酸デカルボキシラーゼ、シトクロムＰ４５０レダクターゼなどを含む群から選択される。
ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオール及び／又はステビオールグリコシド基質に少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、標的ステビオールグリコシドを提供することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼであり得る。
一実施形態では、ステビオール生合成酵素及びＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、微生物細胞内で産生される。微生物細胞は、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｐ．、Ｐｉｃｈｉａ ｓｐ．、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．、Ｙａｒｒｏｗｉａ ｓｐ．などであってもよい。別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、合成される。
一実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１、ＵＧＴ８５Ｃ２、ＵＧＴ７６Ｇ１、ＵＧＴ９１Ｄ２、ＵＧＴＳｌ２、ＥＵＧＴ１１及びこれらのポリペプチドに対してかなりの（＞８５％、＞８６％、＞８７％、＞８８％、＞８９％、＞９０％、＞９１％、＞９２％、＞９３％、＞９４％、＞９５％、＞９６％、＞９７％、＞９８％、＞９９％）アミノ酸配列同一性を有するＵＧＴ、更にはこれらのＵＧＴをコードする単離された核酸分子を含む群から選択される。
一実施形態では、ステビオール生合成酵素、ＵＧＴ、及びＵＤＰ－グルコース再利用システムは、１つの微生物（微生物細胞）中に存在する。微生物は、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｐ．、Ｐｉｃｈｉａ ｓｐ．、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．、Ｙａｒｒｏｗｉａ ｓｐ．であってもよい。
一実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオール又はＣ１３に－ＯＨ官能基を有する任意の出発ステビオールグリコシドに、少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、Ｃ１３に－Ｏ－グルコースβ－グルコピラノシドグリコシド結合を有する標的ステビオールグリコシドを与えることができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ８５Ｃ２、又はＵＧＴ８５Ｃ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオール又はＣ１９に－ＣＯＯＨ官能基を有する任意の出発ステビオールグリコシドに、少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、Ｃ１９に－ＣＯＯ－グルコースβ－グルコピラノシドグリコシド結合を有する標的ステビオールグリコシドを与えることができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１、又はＵＧＴ７４Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、任意の出発ステビオールグリコシドのＣ１９側の任意の既存のグルコースに、少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、新たに形成されるグリコシド結合において少なくとも１つのβ１→２グルコピラノシドグリコシド結合を有する少なくとも１つの追加のグルコースを伴う標的ステビオールグリコシドを与えることができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、任意の出発ステビオールグリコシドのＣ１９側の任意の既存のグルコースに、少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、新たに形成される結合であるグリコシド結合において少なくとも１つのβ１→３グルコピラノシドグリコシド結合を有する少なくとも１つの追加のグルコースを伴う標的ステビオールグリコシドを与えることができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、任意の出発ステビオールグリコシドのＣ１９側の任意の既存のグルコースに、少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、新たに形成されるグリコシド結合において少なくとも１つのβ１→４グルコピラノシドグリコシド結合を有する少なくとも１つの追加のグルコースを伴う標的ステビオールグリコシドを与えることができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、任意の出発ステビオールグリコシドのＣ１９側の任意の既存のグルコースに、少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、新たに形成されるグリコシド結合において少なくとも１つのβ１→６グルコピラノシドグリコシド結合を有する少なくとも１つの追加のグルコースを伴う標的ステビオールグリコシドを与えることができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、任意の出発ステビオールグリコシドのＣ１３側の任意の既存のグルコースに、少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、新たに形成されるグリコシド結合において少なくとも１つのβ１→２グルコピラノシドグリコシド結合を有する少なくとも１つの追加のグルコースを伴う標的ステビオールグリコシドを与えることができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、任意の出発ステビオールグリコシドのＣ１３側の任意の既存のグルコースに、少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、新たに形成される結合であるグリコシド結合において少なくとも１つのβ１→３グルコピラノシドグリコシド結合を有する少なくとも１つの追加のグルコースを伴う標的ステビオールグリコシドを与えることができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、任意の出発ステビオールグリコシドのＣ１３側の任意の既存のグルコースに、少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、新たに形成されるグリコシド結合において少なくとも１つのβ１→４グルコピラノシドグリコシド結合を有する少なくとも１つの追加のグルコースを伴う標的ステビオールグリコシドを与えることができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、任意の出発ステビオールグリコシドのＣ１３側の任意の既存のグルコースに、少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、新たに形成されるグリコシド結合において少なくとも１つのβ１→６グルコピラノシドグリコシド結合を有する少なくとも１つの追加のグルコースを伴う標的ステビオールグリコシドを与えることができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
一実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオールに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、ステビオールモノシドを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ８５Ｃ２、又はＵＧＴ８５Ｃ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴ、若しくはＵＧＴ８５Ｃ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオールに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、ステビオールモノシドＡを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１、又はＵＧＴ７４Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオールモノシドに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、ステビオールビオシドを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオールモノシドに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、ステビオールビオシドＤを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオールモノシドに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、ルブソシドを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１、又はＵＧＴ７４Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
一実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオールモノシドＡに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、ルブソシドを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ８５Ｃ２、又はＵＧＴ８５Ｃ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴ、若しくはＵＧＴ８５Ｃ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオールモノシドＡに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、ステビオールビオシドＡを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオールモノシドＡに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、ステビオールビオシドＢを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオールビオシドに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＢを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオールビオシドに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、ステビオシドを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１、又はＵＧＴ７４Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオールビオシドＤに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＢを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオールビオシドＤに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＧを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１、又はＵＧＴ７４Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ルブソシドに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、ステビオシドを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ルブソシドに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＧを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ルブソシドに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、ステビオシドＡを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ルブソシドに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、ステビオシドＢを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
一実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオールビオシドＡに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、ステビオシドＡを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ８５Ｃ２、又はＵＧＴ８５Ｃ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴ、若しくはＵＧＴ８５Ｃ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオールビオシドＡに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、ステビオシドＣを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
一実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオールビオシドＢに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、ステビオシドＢを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ８５Ｃ２、又はＵＧＴ８５Ｃ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴ、若しくはＵＧＴ８５Ｃ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオールビオシドＢに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、ステビオシドＣを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＢに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＡを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１、又はＵＧＴ７４Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオシドに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＡを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオシドに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＥを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオシドに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＥ２を形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＧに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＡを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＧに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＥ４を形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＧに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＥ６を形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオシドＡに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＥを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオシドＡに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＥ４を形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオシドＡに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＥ３を形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオシドＢに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＥ２を形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオシドＢに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＥ６を形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオシドＢに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＥ３を形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
一実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ステビオールビオシドＣに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＥ３を形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ８５Ｃ２、又はＵＧＴ８５Ｃ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴ、若しくはＵＧＴ８５Ｃ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＡに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＤを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＡに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＩを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＥに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＤを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＥに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＡＭを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＥ２に少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＩを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＥ２に少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＡＭを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＥ４に少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＤを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＥ４に少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＤ７を形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＥ６に少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＩを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＥ６に少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＤ７を形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＥ３に少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＡＭを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＥ３に少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＤ７を形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＤに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＭを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＩに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＭを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＡＭに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＭを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＡＭに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＭ４を形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＤ７に少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシドＭを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＭに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシド１ａを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＭに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシド１ｂを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＭに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシド１ｃを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＭに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシド１ｄを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＭに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシド１ｅを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＭに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシド１ｆを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＭに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシド１ｇを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＭに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシド１ｈを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＭに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシド１ｉを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＭに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシド１ｊを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＭに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシド１ｋを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＭに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシド１ｌを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＭに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシド１ｍを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＭに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシド１ｎを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
別の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、レバウジオシドＭ４に少なくとも１つのグルコース単位を付加することができて、レバウジオシド２ａを形成することができる、任意のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。特定の実施形態では、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１との＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
任意選択的に、本発明の方法は、ＵＤＰ－グルコースを提供するためにＵＤＰを再利用することを更に含む。一実施形態では、方法は、ステビオール及び／又はステビオールグリコシド基質の標的ステビオールグリコシドへの生体変換が触媒量のＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼ及びＵＤＰ－グルコースを使用して行われるように、再利用触媒及び再利用基質を提供することによってＵＤＰを再利用することを含む。
一実施形態では、再利用触媒は、スクロースシンターゼＳｕＳｙ＿Ａｔ、又はＳｕＳｙ＿Ａｔとの＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するスクロースシンターゼである。
一実施形態では、ＵＤＰ－グルコース再利用触媒のための再利用基質は、スクロースである。
任意選択的に、本発明の方法は、受容体である標的ステビオールグリコシド分子を修飾するために糖供与体としてオリゴ糖又は多糖を使用する、トランスグリコシダーゼの使用を更に含む。非限定的な例としては、シクロデキストリングリコシルトランスフェラーゼ（ＣＧＴａｓｅ）、フルクトフラノシダーゼ、アミラーゼ、サッカラーゼ、グルコスクラーゼ、β－ｈ－フルクトシダーゼ、β－フルクトシダーゼ、スクラーゼ、フルクトシルインベルターゼ、アルカリ性インベルターゼ、酸性インベルターゼ、フルクトフラノシダーゼが挙げられる。いくつかの実施形態では、グルコース、及びグルコース以外の糖であってフルクトース、キシロース、ラムノース、アラビノース、デオキシグルコース、ガラクトースを含むがこれらに限定されないものが、受容体である標的ステビオールグリコシドに転移される。一実施形態では、受容体であるステビオールグリコシドは、レバウジオシド１ａ、レバウジオシド１ｂ、レバウジオシド１ｃ、レバウジオシド１ｄ、レバウジオシド１ｅ、レバウジオシド１ｆ、レバウジオシド１ｇ、レバウジオシド１ｈ、レバウジオシド１ｉ、レバウジオシド１ｊ、レバウジオシド１ｋ、レバウジオシド１ｌ、レバウジオシド１ｍ、及び／又はレバウジオシド１ｎである。別の実施形態では、受容体であるステビオールグリコシドは、レバウジオシド２ａである。別の実施形態では、受容体であるステビオールグリコシドは、レバウジオシドＭ４である。別の実施形態では、受容体であるステビオールグリコシドは、ＳｖＧ７である。
別の実施形態において、出発組成物であるステビオールグリコシドに少なくとも１つのグルコース単位を付加することができるＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼは、以下のＧｅｎＩｎｆｏ識別子番号のリストから、好ましくは表１及び表２に提示される群から選択されるＵＧＴと＞８５％のアミノ酸配列同一性を有する。
本発明の一実施形態は、酵素、すなわち、出発組成物を標的ステビオールグリコシドに変換することができる酵素を含む微生物細胞である。したがって、本方法のいくつかの実施形態は、微生物を、出発組成物を含有する培地と接触させて、少なくとも１種の標的ステビオールグリコシドを含む培地を提供することを含む。
微生物は、出発組成物を標的ステビオールグリコシド（複数可）に変換するために必要な酵素（複数可）を有する任意の微生物であり得る。これらの酵素は微生物のゲノム内にコードされる。
好適な微生物としては、限定するものではないが、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｐ．、Ｐｉｃｈｉａ ｓｐ．、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．、Ｙａｒｒｏｗｉａ ｓｐ．などが挙げられる。
一実施形態では、微生物は、出発組成物と接触するとき遊離している。
別の実施形態では、微生物は、出発組成物と接触するとき固定化される。例えば、微生物は、無機材料又は有機材料から作製された固体の支持体に固定化されてもよい。微生物を固定化するのに好適な固体の支持体の非限定的な例としては、誘導体化（derivatized）セルロース若しくは誘導体化ガラス、セラミックス、金属酸化物、又は膜が挙げられる。微生物は、例えば、共有結合、吸着、架橋、捕捉、又は封入（encapsulation）によって固体の支持体に固定化され得る。
なお別の実施形態では、出発組成物を標的ステビオールグリコシドに変換することができる酵素は、微生物の外へ分泌され、かつ反応培地内に分泌される。
標的ステビオールグリコシドは、任意選択的に精製される。反応培地からの標的ステビオールグリコシドの精製は、高純度標的ステビオールグリコシド組成物を提供するための少なくとも１つの好適な方法によって達成することができる。好適な方法としては、結晶化、膜による分離、遠心分離、抽出（液相又は固相）、クロマトグラフィ分離、ＨＰＬＣ（分取若しくは分析）、又はこのような方法の組み合わせが挙げられる。
使用
本発明に従って得られる高純度標的グリコシド（複数可）、特にステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシド、ステビオールビオシドＤ、ルブソシド、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、レバウジオシドＢ、ステビオシド、レバウジオシドＧ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＥ２、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＩ、レバウジオシドＡＭ、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＭ、レバウジオシドＭ４、レバウジオシド１ａ、レバウジオシド１ｂ、レバウジオシド１ｃ、レバウジオシド１ｄ、レバウジオシド１ｅ、レバウジオシド１ｆ、レバウジオシド１ｇ、レバウジオシド１ｈ、レバウジオシド１ｉ、レバウジオシド１ｊ、レバウジオシド１ｋ、レバウジオシド１ｌ、レバウジオシド１ｍ、レバウジオシド１ｎ、レバウジオシド２ａ、及び／又はＳｖＧ７は、「そのまま」又は他の甘味料、風味料、食品成分、及びこれらの組み合わせと組み合わせて使用することができる。
風味料の非限定的な例としては、ライム、レモン、オレンジ、果実、バナナ、ブドウ、ナシ、パイナップル、マンゴー、ベリー、ビターアーモンド、コーラ、シナモン、砂糖、綿菓子、バニラ、及びこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
他の食品成分の非限定的な例としては、酸味料、有機酸及びアミノ酸、着色剤、増量剤、改質デンプン、ガム、テクスチャ化剤、防腐剤、カフェイン、酸化防止剤、乳化剤、安定剤、増粘剤、ゲル化剤、並びにこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
本発明に従って得られる高純度標的グリコシド（複数可）、特にステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシド、ステビオールビオシドＤ、ルブソシド、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、レバウジオシドＢ、ステビオシド、レバウジオシドＧ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＥ２、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＩ、レバウジオシドＡＭ、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＭ、レバウジオシドＭ４、レバウジオシド１ａ、レバウジオシド１ｂ、レバウジオシド１ｃ、レバウジオシド１ｄ、レバウジオシド１ｅ、レバウジオシド１ｆ、レバウジオシド１ｇ、レバウジオシド１ｈ、レバウジオシド１ｉ、レバウジオシド１ｊ、レバウジオシド１ｋ、レバウジオシド１ｌ、レバウジオシド１ｍ、レバウジオシド１ｎ、レバウジオシド２ａ及び／又はＳｖＧ７は、水和物、溶媒和物、無水、非晶質形態、及びこれらの組み合わせが挙げられるがこれらに限定されない様々な多型形態で調製することができる。
本発明に従って得られる高純度標的グリコシド（複数可）、特にステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシド、ステビオールビオシドＤ、ルブソシド、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、レバウジオシドＢ、ステビオシド、レバウジオシドＧ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＥ２、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＩ、レバウジオシドＡＭ、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＭ、レバウジオシドＭ４、レバウジオシド１ａ、レバウジオシド１ｂ、レバウジオシド１ｃ、レバウジオシド１ｄ、レバウジオシド１ｅ、レバウジオシド１ｆ、レバウジオシド１ｇ、レバウジオシド１ｈ、レバウジオシド１ｉ、レバウジオシド１ｊ、レバウジオシド１ｋ、レバウジオシド１ｌ、レバウジオシド１ｍ、レバウジオシド１ｎ、レバウジオシド２ａ、及び／又はＳｖＧ７は、食品、飲料、医薬組成物、化粧品、チューインガム、卓上製品、シリアル、乳製品、練り歯磨き、及び他の口腔用組成物などの高強度天然甘味料として組み込まれてもよい。
いくつかの実施形態では、本発明の高純度標的グリコシドは、例えば、約０．０００１重量％、約０．０００５重量％、約０．００１重量％、約０．００５重量％、約０．０１重量％、約０．０５重量％、約０．１重量％、約０．５重量％、約１．０重量％、約１．５重量％、約２．０重量％、約２．５重量％、約３．０重量％、約３．５重量％、約４．０重量％、約４．５重量％、約５．０重量％、約５．５重量％、約６．０重量％、約６．５重量％、約７．０重量％、約７．５重量％、約８．０重量％、約８．５重量％、約９．０重量％、約９．５重量％、約１０．０重量％、約１０．５重量％、約１１．０重量％、約１１．５重量％、又は約１２．０重量％などの、約０．０００１重量％～約１２％重量の量で、食品、飲料、医薬組成物、化粧品、チューインガム、卓上製品、シリアル、乳製品、練り歯磨き、及び他の口腔用組成物などの中に存在する。
特定の実施形態では、甘味料は、例えば、約０．０００１重量％～約０．０００５重量％、約０．０００５重量％～約０．００１重量％、約０．００１重量％～約０．００５重量％、約０．００５重量％～約０．０１重量％、約０．０１重量％～約０．０５重量％、約０．０５重量％～約０．１重量％、約０．１重量％～約０．５重量％、約０．５重量％～約１重量％、約１重量％～約２重量％、約２重量％～約３重量％、約３重量％～約４重量％、約４重量％～約５重量％、約５重量％～約６重量％、約６重量％～約７重量％、及び約７重量％～約８重量％などの、約０．０００１重量％～約８重量％の量で飲料中に存在する。
本発明に従って得られる高純度標的グリコシド（複数可）、特にステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシド、ステビオールビオシドＤ、ルブソシド、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、レバウジオシドＢ、ステビオシド、レバウジオシドＧ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＥ２、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＩ、レバウジオシドＡＭ、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＭ、レバウジオシドＭ４、レバウジオシド１ａ、レバウジオシド１ｂ、レバウジオシド１ｃ、レバウジオシド１ｄ、レバウジオシド１ｅ、レバウジオシド１ｆ、レバウジオシド１ｇ、レバウジオシド１ｈ、レバウジオシド１ｉ、レバウジオシド１ｊ、レバウジオシド１ｋ、レバウジオシド１ｌ、レバウジオシド１ｍ、レバウジオシド１ｎ、レバウジオシド２ａ、ＳｖＧ７、及び／又はこれらの組み合わせは、甘味料化合物として使用されてもよい、又は、ズルコシドＡ、ズルコシドＢ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、レバウジオシドＡ２、レバウジオシドＡ３、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ２、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＤ２、レバウジオシドＤ３、レバウジオシドＤ４、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＦ、レバウジオシドＦ２、レバウジオシドＦ３、レバウジオシドＨ、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＩ２、レバウジオシドＩ３、レバウジオシドＪ、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＫ２、レバウジオシドＫＡ、レバウジオシドＬ、レバウジオシドＭ２、レバウジオシドＭ３、レバウジオシドＮ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＯ、レバウジオシドＯ２、レバウジオシドＯ３、レバウジオシドＯ４、レバウジオシドＱ、レバウジオシドＱ２、レバウジオシドＱ３、レバウジオシドＲ、レバウジオシドＳ、レバウジオシドＴ、レバウジオシドＴ１、レバウジオシドＵ、レバウジオシドＵ２、レバウジオシドＶ、レバウジオシドＶ２、レバウジオシドＶ３、レバウジオシドＷ、レバウジオシドＷ２、レバウジオシドＷ３、レバウジオシドＹ、レバウジオシドＺ１、レバウジオシドＺ２、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＥ、ステビオシドＤ、ステビオシドＥ、ステビオシドＥ２、ステビオシドＦ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、モグロシド、ブラゼイン、ネオヘスペリジンジヒドロカルコン、グリチルリチン酸及びその塩、ソーマチン、ペリラルチン、ペルナンズルチン、ムクロジオシド、バイユノシド、フロミソシドＩ、ジメチル－ヘキサヒドロフルオレン－ジカルボン酸、アブルソシド、ペリアンドリン、カルノシフロシド、シクロカリオシド、プテロカリオシド、ポリポドシドＡ、ブラジリン、ヘルナンズルチン、フィロズルチン、グリシフィリン、フロリジン、トリロバチン、ジヒドロフラボノール、ジヒドロケルセチン－３－アセテート、ネオアスチリビン、ｔｒａｎｓ－シンナムアルデヒド、モナチン、モナチン塩、他のインドール誘導体甘味料、セリゲアインＡ、ヘマトキシリン、モネリン、オスラジン、プテロカリオシドＡ、プテロカリオシドＢ、マビンリン、ペンタジン、ミラクリン、クルクリン、ネオクリン、クロロゲン酸、シナリン、羅漢果甘味料、モグロシドＶ、シアメノシド、シラトース、並びにこれらの組み合わせなどの少なくとも１種の天然に生じる高甘味度甘味料と共に使用されてもよい。
特定の実施形態では、ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシド、ステビオールビオシドＤ、ルブソシド、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、レバウジオシドＢ、ステビオシド、レバウジオシドＧ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＥ２、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＩ、レバウジオシドＡＭ、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＭ、レバウジオシドＭ４、レバウジオシド１ａ、レバウジオシド１ｂ、レバウジオシド１ｃ、レバウジオシド１ｄ、レバウジオシド１ｅ、レバウジオシド１ｆ、レバウジオシド１ｇ、レバウジオシド１ｈ、レバウジオシド１ｉ、レバウジオシド１ｊ、レバウジオシド１ｋ、レバウジオシド１ｌ、レバウジオシド１ｍ、レバウジオシド１ｎ、レバウジオシド２ａ、及び／又はＳｖＧ７は、ズルコシドＡ、ズルコシドＢ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、レバウジオシドＡ２、レバウジオシドＡ３、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ２、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＤ２、レバウジオシドＤ３、レバウジオシドＤ４、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＦ、レバウジオシドＦ２、レバウジオシドＦ３、レバウジオシドＨ、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＩ２、レバウジオシドＩ３、レバウジオシドＪ、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＫ２、レバウジオシドＫＡ、レバウジオシドＬ、レバウジオシドＭ２、レバウジオシドＭ３、レバウジオシドＮ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＯ、レバウジオシドＯ２、レバウジオシドＯ３、レバウジオシドＯ４、レバウジオシドＱ、レバウジオシドＱ２、レバウジオシドＱ３、レバウジオシドＲ、レバウジオシドＳ、レバウジオシドＴ、レバウジオシドＴ１、レバウジオシドＵ、レバウジオシドＵ２、レバウジオシドＶ、レバウジオシドＶ２、レバウジオシドＶ３、レバウジオシドＷ、レバウジオシドＷ２、レバウジオシドＷ３、レバウジオシドＹ、レバウジオシドＺ１、レバウジオシドＺ２、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＥ、ステビオシドＤ、ステビオシドＥ、ステビオシドＥ２、ステビオシドＦ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、ＮＳＦ－０２、モグロシドＶ、シラトース、羅漢果、アルロース、アロース、Ｄ－タガトース、エリトリトール、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される化合物を含む甘味料組成物に使用することができる。
高純度標的グリコシド（複数可）、特にステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシド、ステビオールビオシドＤ、ルブソシド、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、レバウジオシドＢ、ステビオシド、レバウジオシドＧ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＥ２、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＩ、レバウジオシドＡＭ、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＭ、レバウジオシドＭ４、レバウジオシド１ａ、レバウジオシド１ｂ、レバウジオシド１ｃ、レバウジオシド１ｄ、レバウジオシド１ｅ、レバウジオシド１ｆ、レバウジオシド１ｇ、レバウジオシド１ｈ、レバウジオシド１ｉ、レバウジオシド１ｊ、レバウジオシド１ｋ、レバウジオシド１ｌ、レバウジオシド１ｍ、レバウジオシド１ｎ、レバウジオシド２ａ、及び／又はＳｖＧ７はまた、スクラロース、アセスルファムカリウム、アスパルテーム、アリテーム、サッカリン、ネオヘスペリジンジヒドロカルコン、シクラメート、ネオテーム、ズルチン、スオサンアドバンテーム、これらの塩、及びこれらの組み合わせなどの合成高甘味度甘味料と組み合わせて使用されてもよい。
更に、高純度標的ステビオールグリコシド（複数可）、特にステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシド、ステビオールビオシドＤ、ルブソシド、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、レバウジオシドＢ、ステビオシド、レバウジオシドＧ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＥ２、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＩ、レバウジオシドＡＭ、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＭ、レバウジオシドＭ４、レバウジオシド１ａ、レバウジオシド１ｂ、レバウジオシド１ｃ、レバウジオシド１ｄ、レバウジオシド１ｅ、レバウジオシド１ｆ、レバウジオシド１ｇ、レバウジオシド１ｈ、レバウジオシド１ｉ、レバウジオシド１ｊ、レバウジオシド１ｋ、レバウジオシド１ｌ、レバウジオシド１ｍ、レバウジオシド１ｎ、レバウジオシド２ａ、及び／又はＳｖＧ７は、ギムネマ酸、ホズルシン、ジジフィン、ラクチソールなどの天然甘味料抑制剤と組み合わせて使用することができる。ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシド、ステビオールビオシドＤ、ルブソシド、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、レバウジオシドＢ、ステビオシド、レバウジオシドＧ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＥ２、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＩ、レバウジオシドＡＭ、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＭ、レバウジオシドＭ４、レバウジオシド１ａ、レバウジオシド１ｂ、レバウジオシド１ｃ、レバウジオシド１ｄ、レバウジオシド１ｅ、レバウジオシド１ｆ、レバウジオシド１ｇ、レバウジオシド１ｈ、レバウジオシド１ｉ、レバウジオシド１ｊ、レバウジオシド１ｋ、レバウジオシド１ｌ、レバウジオシド１ｍ、レバウジオシド１ｎ、レバウジオシド２ａ、及び／又はＳｖＧ７はまた、様々なうまみ味増強剤と組み合わせてもよい。ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシド、ステビオールビオシドＤ、ルブソシド、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、レバウジオシドＢ、ステビオシド、レバウジオシドＧ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＥ２、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＩ、レバウジオシドＡＭ、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＭ、レバウジオシドＭ４、レバウジオシド１ａ、レバウジオシド１ｂ、レバウジオシド１ｃ、レバウジオシド１ｄ、レバウジオシド１ｅ、レバウジオシド１ｆ、レバウジオシド１ｇ、レバウジオシド１ｈ、レバウジオシド１ｉ、レバウジオシド１ｊ、レバウジオシド１ｋ、レバウジオシド１ｌ、レバウジオシド１ｍ、レバウジオシド１ｎ、レバウジオシド２ａ、及び／又はＳｖＧ７は、グルタミン酸、アスパラギン酸、グリシン、アラニン、トレオニン、プロリン、セリン、グルタミン酸、リシン、トリプトファン、及びこれらの組み合わせなどのうまみ風味アミノ酸及び甘いアミノ酸と混合することができる。
高純度標的ステビオールグリコシド（複数可）、特に、ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシド、ステビオールビオシドＤ、ルブソシド、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、レバウジオシドＢ、ステビオシド、レバウジオシドＧ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＥ２、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＩ、レバウジオシドＡＭ、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＭ、レバウジオシドＭ４、レバウジオシド１ａ、レバウジオシド１ｂ、レバウジオシド１ｃ、レバウジオシド１ｄ、レバウジオシド１ｅ、レバウジオシド１ｆ、レバウジオシド１ｇ、レバウジオシド１ｈ、レバウジオシド１ｉ、レバウジオシド１ｊ、レバウジオシド１ｋ、レバウジオシド１ｌ、レバウジオシド１ｍ、レバウジオシド１ｎ、レバウジオシド２ａ、及び／又はＳｖＧ７は、炭水化物、ポリオール、アミノ酸及びそれらの対応する塩、ポリアミノ酸及びそれらの対応する塩、糖酸及びそれらの対応する塩、ヌクレオチド、有機酸、無機酸、有機酸塩及び有機塩基塩を含む有機塩、無機塩、苦味化合物、風味剤及び風味成分、渋味化合物、タンパク質又はタンパク質加水分解物、界面活性剤、乳化剤、フラボノイド、アルコール、ポリマー、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択される１種以上の添加剤と組み合わせて使用することができる。
高純度標的ステビオールグリコシド（複数可）、特に、ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシド、ステビオールビオシドＤ、ルブソシド、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、レバウジオシドＢ、ステビオシド、レバウジオシドＧ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＥ２、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＩ、レバウジオシドＡＭ、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＭ、レバウジオシドＭ４、レバウジオシド１ａ、レバウジオシド１ｂ、レバウジオシド１ｃ、レバウジオシド１ｄ、レバウジオシド１ｅ、レバウジオシド１ｆ、レバウジオシド１ｇ、レバウジオシド１ｈ、レバウジオシド１ｉ、レバウジオシド１ｊ、レバウジオシド１ｋ、レバウジオシド１ｌ、レバウジオシド１ｍ、レバウジオシド１ｎ、レバウジオシド２ａ、及び／又はＳｖＧ７は、ポリオール又は糖アルコールと組み合わされてもよい。用語「ポリオール」は、２個以上のヒドロキシル基を含有する分子を指す。ポリオールは、それぞれ２個、３個、及び４個のヒドロキシル基を含有するジオール、トリオール、又はテトラオールであってもよい。ポリオールはまた、それぞれ５個、６個、又は７個のヒドロキシル基を含有するペンタオール、ヘキサオール、ヘプタオールなどの、５個以上のヒドロキシル基を含有してもよい。加えて、ポリオールはまた、糖アルコール、多価アルコール、又は炭水化物の還元形態であるポリアルコールであってもよく、カルボニル基（アルデヒド又はケトン、還元糖）は、第一級又は第二級ヒドロキシル基に還元されている。ポリオールの例としては、エリトリトール、マルチトール、マンニトール、ソルビトール、ラクチトール、キシリトール、イノシトール、イソマルト、プロピレングリコール、グリセロール、トレイトール、ガラクチトール、水素添加イソマルツロース、還元イソマルトオリゴ糖、還元キシロオリゴ糖、還元ゲンチオオリゴ糖、還元マルトースシロップ、還元グルコースシロップ、水素化デンプン加水分解物、ポリグリシトール及び糖アルコール、又は甘味料組成物の味に悪影響を及ぼさない還元可能な任意の他の炭水化物が挙げられる。
高純度標的ステビオールグリコシド（複数可）、特にステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシド、ステビオールビオシドＤ、ルブソシド、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、レバウジオシドＢ、ステビオシド、レバウジオシドＧ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＥ２、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＩ、レバウジオシドＡＭ、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＭ、レバウジオシドＭ４、レバウジオシド１ａ、レバウジオシド１ｂ、レバウジオシド１ｃ、レバウジオシド１ｄ、レバウジオシド１ｅ、レバウジオシド１ｆ、レバウジオシド１ｇ、レバウジオシド１ｈ、レバウジオシド１ｉ、レバウジオシド１ｊ、レバウジオシド１ｋ、レバウジオシド１ｌ、レバウジオシド１ｍ、レバウジオシド１ｎ、レバウジオシド２ａ、及び／又はＳｖＧ７は、例えば、Ｄ－タガトース、Ｌ糖、Ｌ－ソルボース、Ｌ－アラビノース、及びこれらの組み合わせなどの低カロリー甘味料と組み合わせてもよい。
高純度標的ステビオールグリコシド（複数可）、特にステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシド、ステビオールビオシドＤ、ルブソシド、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、レバウジオシドＢ、ステビオシド、レバウジオシドＧ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＥ２、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＩ、レバウジオシドＡＭ、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＭ、レバウジオシドＭ４、レバウジオシド１ａ、レバウジオシド１ｂ、レバウジオシド１ｃ、レバウジオシド１ｄ、レバウジオシド１ｅ、レバウジオシド１ｆ、レバウジオシド１ｇ、レバウジオシド１ｈ、レバウジオシド１ｉ、レバウジオシド１ｊ、レバウジオシド１ｋ、レバウジオシド１ｌ、レバウジオシド１ｍ、レバウジオシド１ｎ、レバウジオシド２ａ、及び／又はＳｖＧ７もまた、様々な炭水化物と組み合わされてもよい。用語「炭水化物」は、一般に、一般式（ＣＨ２Ｏ）ｎ（式中、ｎは、３～３０である）、並びにそれらのオリゴマー及びポリマーの、複数のヒドロキシル基で置換されたアルデヒド化合物又はケトン化合物を指す。更に、本発明の炭水化物は、１つ以上の位置で置換又は脱酸素化され得る。本明細書で使用するとき、炭水化物は、非修飾炭水化物、炭水化物誘導体、置換炭水化物、及び修飾炭水化物を包含する。本明細書で使用するとき、語句「炭水化物誘導体」、「置換炭水化物」、及び「修飾炭水化物」は、同義である。修飾炭水化物は、少なくとも１個の原子が付加、除去、若しくは置換された任意の炭水化物、又はこれらの組み合わせを意味する。したがって、炭水化物誘導体又は置換炭水化物としては、置換及び非置換単糖、二糖、オリゴ糖、及び多糖が挙げられる。炭水化物誘導体又は置換炭水化物は、炭水化物誘導体若しくは置換炭水化物官能基が、甘味料組成物の甘味を向上させるように機能する場合、任意選択的に、任意の対応するＣ位で脱酸素化することができ、かつ／あるいは、水素、ハロゲン、ハロアルキル、カルボキシル、アシル、アシルオキシ、アミノ、アミド、カルボキシル誘導体、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、アルコキシ、アリールオキシ、ニトロ、シアノ、スルホ、メルカプト、イミノ、スルホニル、スルフェニル、スルフィニル、スルファモイル、カルボアルコキシ、カルボキシアミド、ホスホニル、ホスフィニル、ホスホリル、ホスフィノ、チオエステル、チオエーテル、オキシイミノ、ヒドラジノ、カルバミル、ホスホ、ホスホナト、又は任意の他の可能な官能基などの１つ以上の部分により置換することができる。
本発明に従って使用してもよい炭水化物の例としては、プシコース、ツラノース、アロース、タガトース、トレハロース、ガラクトース、ラムノース、様々なシクロデキストリン、環状オリゴ糖、様々な種類のマルトデキストリン、デキストラン、スクロース、グルコース、リブロース、フルクトース、トレオース、アラビノース、キシロース、リキソース、アルトロース、マンノース、イドース、ラクトース、マルトース、転化糖、イソトレハロース、ネオトレハロース、イソマルツロース、エリトロース、デオキシリボース、グロース、イドース、タロース、エリトルロース、キシルロース、プシコース、ツラノース、セロビオース、アミロペクチン、グルコサミン、マンノサミン、フコース、グルクロン酸、グルコン酸、グルコノラクトン、アベクオース、ガラクトサミン、ビートオリゴ糖、イソマルトオリゴ糖（イソマルトース、イソマルトトリオース、パノースなど）、キシロオリゴ糖（キシロトリオース、キシロビオースなど）、キシロ末端オリゴ糖、ゲンチオオリゴ糖（ゲンチオビオース、ゲンチオトリオース、ゲンチオテトラオースなど）、ソルボース、ニゲロオリゴ糖、パラチノースオリゴ糖、フラクトオリゴ糖（ケストース、ニストースなど）、マルトテトラオール、マルトトリオール、マルトオリゴ糖（マルトトリオース、マルトテトラオース、マルトペンタオース、マルトヘキサオース、マルトヘプタオースなど）、デンプン、イヌリン、イヌロオリゴ糖、ラクツロース、メリビオース、ラフィノース、リボース、高フルクトースコーンシロップなどの異性化液体糖、カップリング糖、及び大豆オリゴ糖が挙げられるが、これらに限定されない。加えて、炭水化物は、本明細書で使用するとき、Ｄ－配置又はＬ－配置のいずれかであってもよい。
本発明に従って得られる高純度標的ステビオールグリコシド（複数可）、特にステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシド、ステビオールビオシドＤ、ルブソシド、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、レバウジオシドＢ、ステビオシド、レバウジオシドＧ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＥ２、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＩ、レバウジオシドＡＭ、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＭ、レバウジオシドＭ４、レバウジオシド１ａ、レバウジオシド１ｂ、レバウジオシド１ｃ、レバウジオシド１ｄ、レバウジオシド１ｅ、レバウジオシド１ｆ、レバウジオシド１ｇ、レバウジオシド１ｈ、レバウジオシド１ｉ、レバウジオシド１ｊ、レバウジオシド１ｋ、レバウジオシド１ｌ、レバウジオシド１ｍ、レバウジオシド１ｎ、レバウジオシド２ａ、及び／又はＳｖＧ７は、様々な生理学的に活性な物質又は機能性成分と組み合わせて使用することができる。機能性成分は、一般に、カロチノイド、食物繊維、脂肪酸、サポニン、酸化防止剤、栄養補助食品、フラボノイド、イソチオシアネート、フェノール、植物ステロール及びスタノール（フィトステロール及びフィトスタノール）、ポリオール、プレバイオティクス、プロバイオティクス、フィトエストロゲン、大豆タンパク質；スルフィド／チオール、アミノ酸、タンパク質、ビタミン、及びミネラルなどの種類に分類される。機能性成分はまた、循環器、コレステロール低減、及び抗炎症などの健康効果に基づいて分類されてもよい。例示的な機能性成分は、国際公開第２０１３／０９６４２０号に提供され、その内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
本発明に従って得られる高純度標的ステビオールグリコシド（複数可）、特にステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシド、ステビオールビオシドＤ、ルブソシド、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、レバウジオシドＢ、ステビオシド、レバウジオシドＧ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＥ２、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＩ、レバウジオシドＡＭ、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＭ、レバウジオシドＭ４、レバウジオシド１ａ、レバウジオシド１ｂ、レバウジオシド１ｃ、レバウジオシド１ｄ、レバウジオシド１ｅ、レバウジオシド１ｆ、レバウジオシド１ｇ、レバウジオシド１ｈ、レバウジオシド１ｉ、レバウジオシド１ｊ、レバウジオシド１ｋ、レバウジオシド１ｌ、レバウジオシド１ｍ、レバウジオシド１ｎ、レバウジオシド２ａ、及び／又はＳｖＧ７は、改善された味特性を有するゼロカロリー、低カロリー又は糖尿病飲料、及び食品製品を製造するために、高甘味度甘味料として適用されてもよい。また、飲料、食品、医薬品、及び糖を使用できない他の製品にも使用することができる。更に、高純度標的ステビオールグリコシド（複数可）、特にステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシド、ステビオールビオシドＤ、ルブソシド、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、レバウジオシドＢ、ステビオシド、レバウジオシドＧ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＥ２、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＩ、レバウジオシドＡＭ、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＭ、レバウジオシドＭ４、レバウジオシド１ａ、レバウジオシド１ｂ、レバウジオシド１ｃ、レバウジオシド１ｄ、レバウジオシド１ｅ、レバウジオシド１ｆ、レバウジオシド１ｇ、レバウジオシド１ｈ、レバウジオシド１ｉ、レバウジオシド１ｊ、レバウジオシド１ｋ、レバウジオシド１ｌ、レバウジオシド１ｍ、レバウジオシド１ｎ、レバウジオシド２ａ、及び／又はＳｖＧ７は、飲料、食品、及びヒト消費専用の他の製品用の甘味料としてだけではなく、改善された特性を有する動物飼料及び飼い葉においても使用することができる。
本発明に従って得られる高純度標的ステビオールグリコシド（複数可）、特にステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシド、ステビオールビオシドＤ、ルブソシド、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、レバウジオシドＢ、ステビオシド、レバウジオシドＧ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＥ２、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＩ、レバウジオシドＡＭ、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＭ、レバウジオシドＭ４、レバウジオシド１ａ、レバウジオシド１ｂ、レバウジオシド１ｃ、レバウジオシド１ｄ、レバウジオシド１ｅ、レバウジオシド１ｆ、レバウジオシド１ｇ、レバウジオシド１ｈ、レバウジオシド１ｉ、レバウジオシド１ｊ、レバウジオシド１ｋ、レバウジオシド１ｌ、レバウジオシド１ｍ、レバウジオシド１ｎ、レバウジオシド２ａ、及び／又はＳｖＧ７は、ゼロカロリー、低カロリー、又は糖尿病飲料及び食品製品を製造するために、発泡抑制剤として適用されてもよい。
高純度標的ステビオールグリコシド（複数可）、特にステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシド、ステビオールビオシドＤ、ルブソシド、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、レバウジオシドＢ、ステビオシド、レバウジオシドＧ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＥ２、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＩ、レバウジオシドＡＭ、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＭ、レバウジオシドＭ４、レバウジオシド１ａ、レバウジオシド１ｂ、レバウジオシド１ｃ、レバウジオシド１ｄ、レバウジオシド１ｅ、レバウジオシド１ｆ、レバウジオシド１ｇ、レバウジオシド１ｈ、レバウジオシド１ｉ、レバウジオシド１ｊ、レバウジオシド１ｋ、レバウジオシド１ｌ、レバウジオシド１ｍ、レバウジオシド１ｎ、レバウジオシド２ａ、及び／又はＳｖＧ７が甘味料化合物として使用されてもよい消費製品の例としては、ウォッカ、ワイン、ビール、酒、及び日本酒などのアルコール飲料、天然ジュース、清涼飲料、炭酸ソフトドリンク、ダイエット飲料、ゼロカロリー飲料、低カロリー飲料及び食品、ヨーグルトドリンク、インスタントジュース、インスタントコーヒー、粉末型のインスタント飲料、缶詰製品、シロップ、発酵大豆ペースト、しょうゆ、酢、ドレッシング、マヨネーズ、ケチャップ、カレー、スープ、インスタントブイヨン、粉末しょうゆ、粉末酢、種々のビスケット、米菓、クラッカー、パン、チョコレート、キャラメル、キャンディ、チューインガム、ゼリー、プディング、保存果物及び野菜、生クリーム、ジャム、マーマレード、フラワーペースト、粉ミルク、アイスクリーム、ソルベ、瓶詰めの野菜及び果物、煮豆の缶詰、甘味ソースで煮た肉及び食品、農業野菜の食品製品（agricultural vegetable food product）、海鮮物、ハム、ソーセージ、魚肉ハム、魚肉ソーセージ、魚のすり身、揚げた魚製品、乾燥海鮮物、冷凍食品製品、保存海藻、保存肉、タバコ製品、医薬品、及びその他の多くが挙げられるが、これらに限定されない。原則として、それは、非限定的な用途を有することができる。
高純度標的ステビオールグリコシド（複数可）、特にステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシド、ステビオールビオシドＤ、ルブソシド、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、レバウジオシドＢ、ステビオシド、レバウジオシドＧ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＥ２、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＩ、レバウジオシドＡＭ、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＭ、レバウジオシドＭ４、レバウジオシド１ａ、レバウジオシド１ｂ、レバウジオシド１ｃ、レバウジオシド１ｄ、レバウジオシド１ｅ、レバウジオシド１ｆ、レバウジオシド１ｇ、レバウジオシド１ｈ、レバウジオシド１ｉ、レバウジオシド１ｊ、レバウジオシド１ｋ、レバウジオシド１ｌ、レバウジオシド１ｍ、レバウジオシド１ｎ、レバウジオシド２ａ、及び／又はＳｖＧ７が風味調整剤又は調整特性を有する風味料として使用されてもよい消費製品の例としては、ウォッカ、ワイン、ビール、酒、及び日本酒などのアルコール飲料、天然ジュース、清涼飲料、炭酸ソフトドリンク、ダイエット飲料、ゼロカロリー飲料、低カロリー飲料及び食品、ヨーグルトドリンク、インスタントジュース、インスタントコーヒー、粉末型のインスタント飲料、缶詰製品、シロップ、発酵大豆ペースト、しょうゆ、酢、ドレッシング、マヨネーズ、ケチャップ、カレー、スープ、インスタントブイヨン、粉末しょうゆ、粉末酢、種々のビスケット、米菓、クラッカー、パン、チョコレート、キャラメル、キャンディ、チューインガム、ゼリー、プディング、保存果物及び野菜、生クリーム、ジャム、マーマレード、フラワーペースト、粉ミルク、アイスクリーム、ソルベ、瓶詰めの野菜及び果物、煮豆の缶詰、甘味ソースで煮た肉及び食品、農業野菜の食品製品、海鮮物、ハム、ソーセージ、魚肉ハム、魚肉ソーセージ、魚のすり身、揚げた魚製品、乾燥海鮮物、冷凍食品製品、保存海藻、保存肉、タバコ製品、医薬品、及びその他の多くが挙げられるが、これらに限定されない。原則として、それは、非限定的な用途を有することができる。
食品、飲料、医薬品、化粧品、卓上製品、及びチューインガムなどの製品の製造中に、混合、混練、溶解、漬け込み、浸透、浸出、散布、噴霧、注入、及び他の方法などの従来の方法を使用してもよい。
更に、本発明に従って得られる高純度標的ステビオールグリコシド（複数可）、ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシド、ステビオールビオシドＤ、ルブソシド、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、レバウジオシドＢ、ステビオシド、レバウジオシドＧ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＥ２、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＩ、レバウジオシドＡＭ、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＭ、レバウジオシドＭ４、レバウジオシド１ａ、レバウジオシド１ｂ、レバウジオシド１ｃ、レバウジオシド１ｄ、レバウジオシド１ｅ、レバウジオシド１ｆ、レバウジオシド１ｇ、レバウジオシド１ｈ、レバウジオシド１ｉ、レバウジオシド１ｊ、レバウジオシド１ｋ、レバウジオシド１ｌ、レバウジオシド１ｍ、レバウジオシド１ｎ、レバウジオシド２ａ、及び／又はＳｖＧ７は、乾燥形態又は液体形態で使用されてもよい。
高純度標的ステビオールグリコシドは、食品製品の熱処理の前又は後に添加することができる。高純度標的ステビオールグリコシド（複数可）、特にステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシド、ステビオールビオシドＤ、ルブソシド、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、レバウジオシドＢ、ステビオシド、レバウジオシドＧ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＥ２、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＩ、レバウジオシドＡＭ、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＭ、レバウジオシドＭ４、レバウジオシド１ａ、レバウジオシド１ｂ、レバウジオシド１ｃ、レバウジオシド１ｄ、レバウジオシド１ｅ、レバウジオシド１ｆ、レバウジオシド１ｇ、レバウジオシド１ｈ、レバウジオシド１ｉ、レバウジオシド１ｊ、レバウジオシド１ｋ、レバウジオシド１ｌ、レバウジオシド１ｍ、レバウジオシド１ｎ、レバウジオシド２ａ、及び／又はＳｖＧ７の量は、使用目的に依存する。上述のように、単独で又は他の化合物と組み合わせて添加することができる。
本発明はまた、ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシド、ステビオールビオシドＤ、ルブソシド、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、レバウジオシドＢ、ステビオシド、レバウジオシドＧ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＥ２、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＩ、レバウジオシドＡＭ、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＭ、レバウジオシドＭ４、レバウジオシド１ａ、レバウジオシド１ｂ、レバウジオシド１ｃ、レバウジオシド１ｄ、レバウジオシド１ｅ、レバウジオシド１ｆ、レバウジオシド１ｇ、レバウジオシド１ｈ、レバウジオシド１ｉ、レバウジオシド１ｊ、レバウジオシド１ｋ、レバウジオシド１ｌ、レバウジオシド１ｍ、レバウジオシド１ｎ、レバウジオシド２ａ、及び／又はＳｖＧ７を甘味増強剤（sweetness enhancer）として使用する飲料における甘味増強も目的とし、ステビオールモノシド、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシド、ステビオールビオシドＤ、ルブソシド、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、レバウジオシドＢ、ステビオシド、レバウジオシドＧ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＥ２、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＩ、レバウジオシドＡＭ、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＭ、レバウジオシドＭ４、レバウジオシド１ａ、レバウジオシド１ｂ、レバウジオシド１ｃ、レバウジオシド１ｄ、レバウジオシド１ｅ、レバウジオシド１ｆ、レバウジオシド１ｇ、レバウジオシド１ｈ、レバウジオシド１ｉ、レバウジオシド１ｊ、レバウジオシド１ｋ、レバウジオシド１ｌ、レバウジオシド１ｍ、レバウジオシド１ｎ、レバウジオシド２ａ、及び／又はＳｖＧ７は、それぞれの甘味認識閾値以下の濃度で存在する。
本明細書で使用するとき、用語「甘味増強剤」は、飲料などの組成物中の甘味の知覚を増強又は強化することができる化合物を指す。用語「甘味増強剤」は、用語「甘み増進剤（sweet taste potentionator）」、「甘味増進剤（sweetness potentionator）」、「甘味増幅剤（sweetness amplifier）」、及び「甘味強化剤（sweetness intensifier）」という用語と同義である。
用語「甘味認識閾値濃度」は、本明細書で一般に使用される場合、ヒトの味覚によって知覚可能な甘味化合物の最も低い既知濃度であり、典型的には約１．０％スクロース当量（１．０％ＳＥ）である。一般に、甘味増強剤は、所与の甘味増強剤の甘味認識閾値濃度以下で存在するとき、それ自体がいかなる知覚可能な甘味をもたらすことなく、甘味料の甘味を増強又は強化してもよいが、甘味増強剤自体が、その甘味認識閾値濃度を上回る濃度で甘味をもたらしてもよい。甘味認識閾値濃度は、特定の増強剤に特異的であり、飲料マトリックスに基づいて変化し得る。甘味認識閾値濃度は、所与の飲料マトリックス中において１．０％超のスクロース当量が検出されるまで、所与の増強剤の濃度を増加させる味覚試験によって容易に判定することができる。約１．０％スクロース当量をもたらす濃度は、甘味認識閾値と見なされる。
いくつかの実施形態では、甘味料は、例えば、約０．０００１重量％、約０．０００５重量％、約０．００１重量％、約０．００５重量％、約０．０１重量％、約０．０５重量％、約０．１重量％、約０．５重量％、約１．０重量％、約１．５重量％、約２．０重量％、約２．５重量％、約３．０重量％、約３．５重量％、約４．０重量％、約４．５重量％、約５．０重量％、約５．５重量％、約６．０重量％、約６．５重量％、約７．０重量％、約７．５重量％、約８．０重量％、約８．５重量％、約９．０重量％、約９．５重量％、約１０．０重量％、約１０．５重量％、約１１．０重量％、約１１．５重量％、又は約１２．０重量％などの、約０．０００１重量％～約１２重量％の量で飲料中に存在する。
特定の実施形態では、甘味料は、例えば、約０．０００１重量％～約０．０００５重量％、約０．０００５重量％～約０．００１重量％、約０．００１重量％～約０．００５重量％、約０．００５重量％～約０．０１重量％、約０．０１重量％～約０．０５重量％、約０．０５重量％～約０．１重量％、約０．１重量％～約０．５重量％、約０．５重量％～約１重量％、約１重量％～約２重量％、約２重量％～約３重量％、約３重量％～約４重量％、約４重量％～約５重量、約５重量％～約６重量％、約６重量％～約７重量％、約７重量％～約８重量％、約８重量％～約９重量％、又は約９重量％～約１０重量％などの、約０．０００１重量％～約１０重量％の量で飲料中に存在する。特定の実施形態では、甘味料は、約０．５重量％～約１０重量％の量で飲料中に存在する。別の特定の実施形態では、甘味料は、約２重量％～約８重量％の量で飲料中に存在する。
一実施形態では、甘味料は、従来のカロリー甘味料である。好適な甘味料としては、スクロース、フルクトース、グルコース、高フルクトースコーンシロップ、及び高フルクトースデンプンシロップが挙げられるが、これらに限定されない。
別の実施形態では、甘味料は、エリトリトールである。
更に別の実施形態では、甘味料は、希少糖である。好適な希少糖としては、Ｄ－アロース、Ｄ－プシコース、Ｄ－リボース、Ｄ－タガトース、Ｌ－グルコース、Ｌ－フコース、Ｌ－アラビノース、Ｄ－ツラノース、Ｄ－ロイクロース、及びこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
甘味料は、単独で、又は他の甘味料と組み合わせて使用することができることが企図されている。
一実施形態では、希少糖は、Ｄ－アロースである。より具体的な実施形態では、Ｄ－アロースは、例えば、約２重量％～約８重量％などの、約０．５重量％～約１０重量％の量で飲料中に存在する。
別の実施形態では、希少糖は、Ｄ－プシコースである。より具体的な実施形態では、Ｄ－プシコースは、例えば、約２重量％～約８重量％などの、約０．５重量％～約１０重量％の量で飲料中に存在する。
更に別の実施形態では、希少糖は、Ｄ－リボースである。より具体的な実施形態では、Ｄ－リボースは、例えば、約２重量％～約８重量％などの、約０．５重量％～約１０重量％の量で飲料中に存在する。
更に別の実施形態では、希少糖は、Ｄ－タガトースである。より具体的な実施形態では、Ｄ－タガトースは、例えば、約２重量％～約８重量％などの、約０．５重量％～約１０重量％の量で飲料中に存在する。
更なる実施形態では、希少糖は、Ｌ－グルコースである。より具体的な実施形態では、Ｌ－グルコースは、例えば、約２重量％～約８重量％などの、約０．５重量％～約１０重量％の量で飲料中に存在する。
一実施形態では、希少糖は、Ｌ－フコースである。より具体的な実施形態では、Ｌ－フコースは、例えば、約２重量％～約８重量％などの、約０．５重量％～約１０重量％の量で飲料中に存在する。
別の実施形態では、希少糖は、Ｌ－アラビノースである。より具体的な実施形態では、Ｌ－アラビノースは、例えば、約２重量％～約８重量％などの、約０．５重量％～約１０重量％の量で飲料中に存在する。
更に別の実施形態では、希少糖は、Ｄ－ツラノースである。より具体的な実施形態では、Ｄ－ツラノースは、例えば、約２重量％～約８重量％などの、約０．５重量％～約１０重量％の量で飲料中に存在する。
更に別の実施形態では、希少糖は、Ｄ－ロイクロースである。より具体的な実施形態では、Ｄ－ロイクロースは、例えば、約２重量％～約８重量％などの、約０．５重量％～約１０重量％の量で飲料中に存在する。
その甘味認識閾値以下の濃度での甘味増強剤の添加は、甘味増強剤の非存在下での対応する飲料と比較して、甘味料及び甘味増強剤を含む飲料の検出されるスクロース当量を増加させる。更に、甘味は、甘味料の非存在下で、少なくとも１種の甘味増強剤の同じ濃度を含有する溶液の検出可能な甘味よりも多い量だけ増加させることができる。
したがって、本発明はまた、甘味料を含む飲料を提供することと、ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシド、ステビオールビオシドＤ、ルブソシド、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、レバウジオシドＢ、ステビオシド、レバウジオシドＧ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＥ２、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＩ、レバウジオシドＡＭ、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＭ、レバウジオシドＭ４、レバウジオシド１ａ、レバウジオシド１ｂ、レバウジオシド１ｃ、レバウジオシド１ｄ、レバウジオシド１ｅ、レバウジオシド１ｆ、レバウジオシド１ｇ、レバウジオシド１ｈ、レバウジオシド１ｉ、レバウジオシド１ｊ、レバウジオシド１ｋ、レバウジオシド１ｌ、レバウジオシド１ｍ、レバウジオシド１ｎ、レバウジオシド２ａ、及び／若しくはＳｖＧ７、又はこれらの組み合わせから選択される甘味増強剤を添加することと、を含む、甘味料を含む飲料の甘味を増強するための方法を提供し、ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシド、ステビオールビオシドＤ、ルブソシド、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、レバウジオシドＢ、ステビオシド、レバウジオシドＧ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＥ２、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＩ、レバウジオシドＡＭ、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＭ、レバウジオシドＭ４、レバウジオシド１ａ、レバウジオシド１ｂ、レバウジオシド１ｃ、レバウジオシド１ｄ、レバウジオシド１ｅ、レバウジオシド１ｆ、レバウジオシド１ｇ、レバウジオシド１ｈ、レバウジオシド１ｉ、レバウジオシド１ｊ、レバウジオシド１ｋ、レバウジオシド１ｌ、レバウジオシド１ｍ、レバウジオシド１ｎ、レバウジオシド２ａ、及び／又はＳｖＧ７は、甘味認識閾値以下の濃度で存在する。
ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシド、ステビオールビオシドＤ、ルブソシド、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、レバウジオシドＢ、ステビオシド、レバウジオシドＧ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＥ２、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＩ、レバウジオシドＡＭ、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＭ、レバウジオシドＭ４、レバウジオシド１ａ、レバウジオシド１ｂ、レバウジオシド１ｃ、レバウジオシド１ｄ、レバウジオシド１ｅ、レバウジオシド１ｆ、レバウジオシド１ｇ、レバウジオシド１ｈ、レバウジオシド１ｉ、レバウジオシド１ｊ、レバウジオシド１ｋ、レバウジオシド１ｌ、レバウジオシド１ｍ、レバウジオシド１ｎ、レバウジオシド２ａ、及び／又はＳｖＧ７を、甘味料を含有する飲料に甘味認識閾値以下の濃度で添加することにより、検出されるスクロース当量を、例えば、約１．０％、約１．５％、約２．０％、約２．５％、約３．０％、約３．５％、約４．０％、約４．５％、又は約５．０％などの、約１．０％～約５．０％増加させてもよい。
以下の実施例は、高純度標的ステビオールグリコシド（複数可）、特にステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシド、ステビオールビオシドＤ、ルブソシド、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、レバウジオシドＢ、ステビオシド、レバウジオシドＧ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＥ２、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＩ、レバウジオシドＡＭ、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＭ、レバウジオシドＭ４、レバウジオシド１ａ、レバウジオシド１ｂ、レバウジオシド１ｃ、レバウジオシド１ｄ、レバウジオシド１ｅ、レバウジオシド１ｆ、レバウジオシド１ｇ、レバウジオシド１ｈ、レバウジオシド１ｉ、レバウジオシド１ｊ、レバウジオシド１ｋ、レバウジオシド１ｌ、レバウジオシド１ｍ、レバウジオシド１ｎ、レバウジオシド２ａ、及び／又はＳｖＧ７の調製のための本発明の好ましい実施形態を例示する。本発明は、単なる例示である実施例に記載される材料、割合、条件、及び手順に限定されないことが理解されるであろう。
実施例１
バイオ触媒プロセスで使用される操作された酵素のタンパク質配列
配列番号１：
＞ＳｕＳｙ＿Ａｔ、多様体ＰＭ１－５４－２－Ｅ０５（操作されたスクロースシンターゼ；野生型遺伝子の供給源：Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ）
ＭＡＮＡＥＲＭＩＴＲＶＨＳＱＲＥＲＬＮＥＴＬＶＳＥＲＮＥＶＬＡＬＬＳＲＶＥＡＫＧＫＧＩＬＱＱＮＱＩＩＡＥＦＥＡＬＰＥＱＴＲＫＫＬＥＧＧＰＦＦＤＬＬＫＳＴＱＥＡＩＶＬＰＰＷＶＡＬＡＶＲＰＲＰＧＶＷＥＹＬＲＶＮＬＨＡＬＶＶＥＥＬＱＰＡＥＦＬＨＦＫＥＥＬＶＤＧＶＫＮＧＮＦＴＬＥＬＤＦＥＰＦＮＡＳＩＰＲＰＴＬＨＫＹＩＧＮＧＶＤＦＬＮＲＨＬＳＡＫＬＦＨＤＫＥＳＬＬＰＬＬＤＦＬＲＬＨＳＨＱＧＫＮＬＭＬＳＥＫＩＱＮＬＮＴＬＱＨＴＬＲＫＡＥＥＹＬＡＥＬＫＳＥＴＬＹＥＥＦＥＡＫＦＥＥＩＧＬＥＲＧＷＧＤＮＡＥＲＶＬＤＭＩＲＬＬＬＤＬＬＥＡＰＤＰＳＴＬＥＴＦＬＧＲＶＰＭＶＦＮＶＶＩＬＳＰＨＧＹＦＡＱＤＮＶＬＧＹＰＤＴＧＧＱＶＶＹＩＬＤＱＶＲＡＬＥＩＥＭＬＱＲＩＫＱＱＧＬＮＩＫＰＲＩＬＩＬＴＲＬＬＰＤＡＶＧＴＴＣＧＥＲＬＥＲＶＹＤＳＥＹＣＤＩＬＲＶＰＦＲＴＥＫＧＩＶＲＫＷＩＳＲＦＥＶＷＰＹＬＥＴＹＴＥＤＡＡＶＥＬＳＫＥＬＮＧＫＰＤＬＩＩＧＮＹＳＤＧＮＬＶＡＳＬＬＡＨＫＬＧＶＴＱＣＴＩＡＨＡＬＥＫＴＫＹＰＤＳＤＩＹＷＫＫＬＤＤＫＹＨＦＳＣＱＦＴＡＤＩＦＡＭＮＨＴＤＦＩＩＴＳＴＦＱＥＩＡＧＳＫＥＴＶＧＱＹＥＳＨＴＡＦＴＬＰＧＬＹＲＶＶＨＧＩＤＶＦＤＰＫＦＮＩＶＳＰＧＡＤＭＳＩＹＦＰＹＴＥＥＫＲＲＬＴＫＦＨＳＥＩＥＥＬＬＹＳＤＶＥＮＤＥＨＬＣＶＬＫＤＫＫＫＰＩＬＦＴＭＡＲＬＤＲＶＫＮＬＳＧＬＶＥＷＹＧＫＮＴＲＬＲＥＬＶＮＬＶＶＶＧＧＤＲＲＫＥＳＫＤＮＥＥＫＡＥＭＫＫＭＹＤＬＩＥＥＹＫＬＮＧＱＦＲＷＩＳＳＱＭＤＲＶＲＮＧＥＬＹＲＹＩＣＤＴＫＧＡＦＶＱＰＡＬＹＥＡＦＧＬＴＶＶＥＡＭＴＣＧＬＰＴＦＡＴＣＫＧＧＰＡＥＩＩＶＨＧＫＳＧＦＨＩＤＰＹＨＧＤＱＡＡＤＬＬＡＤＦＦＴＫＣＫＥＤＰＳＨＷＤＥＩＳＫＧＧＬＱＲＩＥＥＫＹＴＷＱＩＹＳＱＲＬＬＴＬＴＧＶＹＧＦＷＫＨＶＳＮＬＤＲＬＥＨＲＲＹＬＥＭＦＹＡＬＫＹＲＰＬＡＱＡＶＰＬＡＱＤＤ
配列番号２：
＞ＵＧＴＳｌ２多様体０２３４（操作されたグルコシルトランスフェラーゼ；野生型遺伝子の供給源：Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｕｍ）
ＭＡＴＮＬＲＶＬＭＦＰＷＬＡＹＧＨＩＳＰＦＬＮＩＡＫＱＬＡＤＲＧＦＬＩＹＬＣＳＴＲＩＮＬＥＳＩＩＫＫＩＰＥＫＹＡＤＳＩＨＬＩＥＬＱＬＰＥＬＰＥＬＰＰＨＹＨＴＴＮＧＬＰＰＨＬＮＰＴＬＨＫＡＬＫＭＳＫＰＮＦＳＲＩＬＱＮＬＫＰＤＬＬＩＹＤＶＬＱＰＷＡＥＨＶＡＮＥＱＧＩＰＡＧＫＬＬＶＳＣＡＡＶＦＳＹＦＦＳＦＲＫＮＰＧＶＥＦＰＦＰＡＩＨＬＰＥＶＥＫＶＫＩＲＥＩＬＡＫＥＰＥＥＧＧＲＬＤＥＧＮＫＱＭＭＬＭＣＴＳＲＴＩＥＡＫＹＩＤＹＣＴＥＬＣＮＷＫＶＶＰＶＧＰＰＦＱＤＬＩＴＮＤＡＤＮＫＥＬＩＤＷＬＧＴＫＰＥＮＳＴＶＦＶＳＦＧＳＥＹＦＬＳＫＥＤＭＥＥＩＡＦＡＬＥＡＳＮＶＮＦＩＷＶＶＲＦＰＫＧＥＥＲＮＬＥＤＡＬＰＥＧＦＬＥＲＩＧＥＲＧＲＶＬＤＫＦＡＰＱＰＲＩＬＮＨＰＳＴＧＧＦＩＳＨＣＧＷＮＳＶＭＥＳＩＤＦＧＶＰＩＩＡＭＰＩＨＮＤＱＰＩＮＡＫＬＭＶＥＬＧＶＡＶＥＩＶＲＤＤＤＧＫＩＨＲＧＥＩＡＥＡＬＫＳＶＶＴＧＥＴＧＥＩＬＲＡＫＶＲＥＩＳＫＮＬＫＳＩＲＤＥＥＭＤＡＶＡＥＥＬＩＱＬＣＲＮＳＮＫＳＫ
配列番号３：
＞ＵＧＴ７６Ｇ１多様体００４２（操作されたグルコシルトランスフェラーゼ；野生型遺伝子の供給源：Ｓｔｅｖｉａ ｒｅｂａｕｄｉａｎａ）
ＭＥＮＫＴＥＴＴＶＲＲＲＲＲＩＩＬＦＰＶＰＦＱＧＨＩＮＰＩＬＱＬＡＮＶＬＹＳＫＧＦＡＩＴＩＬＨＴＮＦＮＫＰＫＴＳＮＹＰＨＦＴＦＲＦＩＬＤＮＤＰＱＤＥＲＩＳＮＬＰＴＨＧＰＬＡＧＭＲＩＰＩＩＮＥＨＧＡＤＥＬＲＲＥＬＥＬＬＭＬＡＳＥＥＤＥＥＶＳＣＬＩＴＤＡＬＷＹＦＡＱＤＶＡＤＳＬＮＬＲＲＬＶＬＭＴＳＳＬＦＮＦＨＡＨＶＳＬＰＱＦＤＥＬＧＹＬＤＰＤＤＫＴＲＬＥＥＱＡＳＧＦＰＭＬＫＶＫＤＩＫＳＡＹＳＮＷＱＩＧＫＥＩＬＧＫＭＩＫＱＴＫＡＳＳＧＶＩＷＮＳＦＫＥＬＥＥＳＥＬＥＴＶＩＲＥＩＰＡＰＳＦＬＩＰＬＰＫＨＬＴＡＳＳＳＳＬＬＤＨＤＲＴＶＦＥＷＬＤＱＱＡＰＳＳＶＬＹＶＳＦＧＳＴＳＥＶＤＥＫＤＦＬＥＩＡＲＧＬＶＤＳＧＱＳＦＬＷＶＶＲＰＧＦＶＫＧＳＴＷＶＥＰＬＰＤＧＦＬＧＥＲＧＫＩＶＫＷＶＰＱＱＥＶＬＡＨＰＡＩＧＡＦＷＴＨＳＧＷＮＳＴＬＥＳＶＣＥＧＶＰＭＩＦＳＳＦＧＧＤＱＰＬＮＡＲＹＭＳＤＶＬＲＶＧＶＹＬＥＮＧＷＥＲＧＥＶＶＮＡＩＲＲＶＭＶＤＥＥＧＥＹＩＲＱＮＡＲＶＬＫＱＫＡＤＶＳＬＭＫＧＧＳＳＹＥＳＬＥＳＬＶＳＹＩＳＳＬ
実施例２
配列番号１のＳｕＳｙ＿Ａｔ多様体の発現及び製剤
配列番号１のＳｕＳｙ＿Ａｔ多様体をコードする遺伝子（実施例１）を、発現ベクターｐＬＥ１Ａ１７（ｐＲＳＦ－１ｂの誘導体、Ｎｏｖａｇｅｎ）にクローニングした。得られたプラスミドをＥ．ｃｏｌｉ ＢＬ２１（ＤＥ３）細胞の形質転換に使用した。
細胞を、３７℃でカナマイシン（５０ｍｇ／Ｌ）を添加したＺＹＭ５０５培地（Ｆ．Ｗｉｌｌｉａｍ Ｓｔｕｄｉｅｒ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ４１（２００５）２０７－２３４）中で培養した。遺伝子の発現は、ＩＰＴＧ（０．２ｍＭ）により対数増殖期で誘導され、３０℃及び２００ｒｐｍで１６～１８時間実施した。
細胞を遠心分離（３２２０ｘｇ、２０分、４℃）によって採取し、細胞溶解緩衝液（１００ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ ｐＨ７．０；２ｍＭ ＭｇＣｌ２、ＤＮＡヌクレアーゼ２０Ｕ／ｍＬ、リゾチーム０．５ｍｇ／ｍＬ）を用いて再懸濁し、光学密度２００（６００ｎｍで測定（ＯＤ６００））とした。次いで、細胞を超音波処理により破壊し、粗抽出物を遠心分離（１８０００ｘｇ ４０分、４℃）により細胞残屑から分離した。上清を、０．２μｍのフィルタを通す濾過によって滅菌し、蒸留水で５０：５０に希釈し、酵素活性調製物を得た。
ＳｕＳｙ＿Ａｔの酵素活性製剤について、ユニット単位での活性は、以下のように定義する。１ｍＵのＳｕＳｙ＿Ａｔは、１分間に１ｎｍｏｌのスクロースをフルクトースに代謝回転する。アッセイの反応条件は、３０℃、５０ｍＭリン酸カリウム緩衝液ｐＨ７．０、ｔ０で４００ｍＭスクロース、３ｍＭ ＭｇＣｌ２、及び１５ｍＭウリジン二リン酸（ＵＤＰ）である。
実施例３
配列番号２のＵＧＴＳｌ２多様体の発現及び製剤
配列番号２（実施例１）のＵＧＴＳｌ２多様体をコードする遺伝子を、発現ベクターｐＬＥ１Ａ１７（ｐＲＳＦ－１ｂの誘導体、Ｎｏｖａｇｅｎ）にクローニングした。得られたプラスミドをＥ．ｃｏｌｉ ＢＬ２１（ＤＥ３）細胞の形質転換に使用した。
細胞を、３７℃でカナマイシン（５０ｍｇ／Ｌ）を添加したＺＹＭ５０５培地（Ｆ．Ｗｉｌｌｉａｍ Ｓｔｕｄｉｅｒ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ４１（２００５）２０７－２３４）中で培養した。遺伝子の発現は、ＩＰＴＧ（０．１ｍＭ）により対数増殖期で誘導され、３０℃及び２００ｒｐｍで１６～１８時間実施した。
細胞を遠心分離（３２２０ｘｇ、２０分、４℃）によって採取し、細胞溶解緩衝液（１００ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ ｐＨ７．０；２ｍＭ ＭｇＣｌ２、ＤＮＡヌクレアーゼ２０Ｕ／ｍＬ、リゾチーム０．５ｍｇ／ｍＬ）を用いて再懸濁し、光学密度２００（６００ｎｍで測定（ＯＤ６００））とした。次いで、細胞を超音波処理により破壊し、粗抽出物を遠心分離（１８０００ｘｇ ４０分、４℃）により細胞残屑から分離した。上清を、０．２μｍのフィルタを通す濾過によって滅菌し、１Ｍスクロース溶液で５０：５０に希釈し、酵素活性調製物を得た。
ＵＧＴＳｌ２の酵素活性製剤について、ユニット単位での活性は、以下のように定義する。１ｍＵのＵＧＴＳｌ２は、１分間に１ｎｍｏｌのレバウジオシドＡ（Ｒｅｂ Ａ）をレバウジオシドＤ（Ｒｅｂ Ｄ）に代謝回転する。アッセイの反応条件は、３０℃、５０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０、ｔ０で１０ｍＭ Ｒｅｂ Ａ、５００ｍＭスクロース、３ｍＭ ＭｇＣｌ２、０．２５ｍＭウリジン二リン酸（ＵＤＰ）及び３Ｕ／ｍＬ ＳｕＳｙ＿Ａｔである。
実施例４
配列番号３のＵＧＴ７６Ｇ１多様体の発現及び製剤
配列番号３（実施例１）のＵＧＴ７６Ｇ１多様体をコードする遺伝子を、発現ベクターｐＬＥ１Ａ１７（ｐＲＳＦ－１ｂの誘導体、Ｎｏｖａｇｅｎ）にクローニングした。得られたプラスミドをＥ．ｃｏｌｉ ＢＬ２１（ＤＥ３）細胞の形質転換に使用した。
細胞を、３７℃でカナマイシン（５０ｍｇ／Ｌ）を添加したＺＹＭ５０５培地（Ｆ．Ｗｉｌｌｉａｍ Ｓｔｕｄｉｅｒ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ４１（２００５）２０７－２３４）中で培養した。遺伝子の発現は、ＩＰＴＧ（０．１ｍＭ）により対数増殖期で誘導され、３０℃及び２００ｒｐｍで１６～１８時間実施した。
細胞を遠心分離（３２２０ｘｇ、２０分、４℃）によって採取し、細胞溶解緩衝液（１００ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ ｐＨ７．０；２ｍＭ ＭｇＣｌ２、ＤＮＡヌクレアーゼ２０Ｕ／ｍＬ、リゾチーム０．５ｍｇ／ｍＬ）を用いて再懸濁し、光学密度２００（６００ｎｍで測定（ＯＤ６００））とした。次いで、細胞を超音波処理により破壊し、粗抽出物を遠心分離（１８０００ｘｇ ４０分、４℃）により細胞残屑から分離した。上清を、０．２μｍのフィルタを通す濾過によって滅菌し、１Ｍスクロース溶液で５０：５０に希釈し、酵素活性調製物を得た。
ＵＧＴ７６Ｇ１の酵素活性製剤について、ユニット単位での活性は、以下のように定義する。１ｍＵのＵＧＴ７６Ｇ１は、１分間に１ｎｍｏｌのレバウジオシドＤ（Ｒｅｂ Ｄ）をレバウジオシドＭ（Ｒｅｂ Ｍ）に代謝回転する。アッセイの反応条件は、３０℃、５０ｍＭリン酸カリウム緩衝液ｐＨ７．０、ｔ０で１０ｍＭ Ｒｅｂ Ｄ、５００ｍＭスクロース、３ｍＭ ＭｇＣｌ２、０．２５ｍＭウリジン二リン酸（ＵＤＰ）及び３Ｕ／ｍＬ ＳｕＳｙ＿Ａｔである。
実施例５
ＳｖＧ７のワンポット反応の合成、ＵＧＴＳｌ２、ＳｕＳｙ＿Ａｔ及びＵＧＴ７６Ｇ１を同時に添加する。
様々なＳｖＧ７分子を３つの酵素（実施例１、２、３及び４を参照されたい）を利用して、ステビオシド（図４を参照されたい）からワンポット反応で直接合成した。ＵＧＴＳｌ２（配列番号２の多様体）、ＳｕＳｙ＿Ａｔ（配列番号１の多様体）及びＵＧＴ７６Ｇ１（配列番号３の多様体）。
最終反応溶液は、３４８Ｕ／Ｌ ＵＧＴＳｌ２、１３４１Ｕ／Ｌ ＳｕＳｙ＿Ａｔ、１０Ｕ／Ｌ ＵＧＴ７６Ｇ１、４７ｍＭステビオシド、０．３２ｍＭウリジン二リン酸（ＵＤＰ）、０．９９Ｍスクロース、３．９ｍＭ ＭｇＣｌ２、及びリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６．６）を含有していた。まず、２０６ｍＬの蒸留水を、０．２４ｇのＭｇＣｌ２・６Ｈ２Ｏ、１０２ｇのスクロース、９．８ｍＬの１．５Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６．６）及び１５ｇのステビオシドと混合した。反応混合物の最終体積を３００ｍＬに調整した。
構成成分を溶解した後、温度を４５℃に調整し、ＵＧＴＳｌ２、ＳｕＳｙ＿Ａｔ、ＵＧＴ７６Ｇ１及び３９ｍｇのＵＤＰを添加した。反応混合物を４５℃の振盪器で２４時間インキュベートした。追加の３９ｍｇのＵＤＰを、１２時間、２４時間、及び３６時間で添加した。反応終了時（４８時間）のｒｅｂ ２ａ及び様々なＳｖＧ７の含有量をＨＰＬＣにより分析した。
実施例６
ＨＰＬＣ分析
分析のために、１７％Ｈ３ＰＯ４を用いて反応混合物をｐＨ５．５に調整、次いで１０分間沸騰させることによって生体変換サンプルを不活性化した。得られたサンプルを濾過し、濾液を１０倍に希釈し、ＨＰＬＣ分析用のサンプルとして使用した。ＨＰＬＣアッセイは、ポンプ、カラムサーモスタット、オートサンプラー、バックグラウンド補正が可能なＵＶ検出器、及びデータ収集システムからなるＡｇｉｌｅｎｔ ＨＰ １２００ ＨＰＬＣシステムで実施した。分析物を、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｐｒｏｒｓｈｅｌｌ １２０ ＳＢ－Ｃ１８、４．６ｍｍ×１５０ｍｍ、２．７μｍを４０℃で使用して分離した。移動相は、２つのプレミックスから構成される。
－ ７５％１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ２．６）及び２５％アセトニトリルを含有するプレミックス１、及び
－ ６８％１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ２．６）及び３２％アセトニトリルを含有するプレミックス２。
プレミックス１で開始した溶出グラジエントは、１２．５分にプレミックス２を５０％に変化させ、１３分にプレミックス２を１００％に変化させた。合計実行時間は、４５分であった。カラム温度を４０℃に維持した。注入量は５μＬであった。レバウジオシド種は、２１０ｎｍでＵＶによって検出された。
表３は、各時点の、特定されたレバウジオシド種へのステビオシドの変換率（面積百分率）を示す。出発物質ステビオシド及び反応混合物の４８時間におけるクロマトグラムを、それぞれ図４及び図５に示す。当業者であれば、保持時間は、溶媒及び／又は装置の変更によって場合により変化し得ることを理解するであろう。
実施例７
レバウジオシド２ａ及び様々なＳｖＧ７の精製
３００ｍＬの実施例５の反応混合物（４８時間後）を、ｐＨをＨ３ＰＯ４でｐＨ５．５に調整し、次いで１０分間沸騰させることによって不活化し、濾過した。濾液を、水で予め平衡化した５００ｍＬのＹＷＤ０３（Ｃａｎｇｚｈｏｕ Ｙｕａｎｗｅｉ，Ｃｈｉｎａ）樹脂を含有するカラムに充填した。樹脂を２．５Ｌの水で洗浄し、この工程からの水溶出液を廃棄した。
ステビオールグリコシドを、２．５Ｌの７０％ｖ／ｖエタノール／水で溶出させることにより、ＹＷＤ０３樹脂カラムから溶出した。この工程からの流出液を回収し、６０℃の真空下で乾燥させて、２０ｇの乾燥固体生成物を得た。この試料を水に溶解させ、以下の表４に記載の条件を使用して、ＨＰＬＣによる更なる分別及び分離に供した。
複数回の実施から個々の化合物に相当するＨＰＬＣ分画を、保持時間に従ってまとめた。画分を凍結乾燥した。
得られた画分の純度を、実施例６に記載の分析ＨＰＬＣ法によって評価した。精製したレバウジオシド２ａのクロマトグラムを図６に示す。
実施例８
レバウジオシド２ａの構造解析
試料をピリジン－ｄ５に溶解して、ＮＭＲ実験をＢｒｕｋｅｒ ５００ＭＨｚ分光計で実施した。試料由来のシグナルと共に、ピリジン－ｄ５由来のシグナルがδＣ １２３．５、１３５．５、１４９．９ｐｐｍ及びδＨ ７．１９、７．５５、８．７１ｐｐｍに観察された。
ピリジン－ｄ５中で記録されたレバウジオシド２ａの１Ｈ－ＮＭＲスペクトルにより、試料の品質が優れていることを確認した（図７を参照されたい）。ＨＳＱＣ（図８を参照されたい）は、Ｈ，Ｈ－ＣＯＳＹで観察可能なＣ－１５に遠隔結合した糖領域中のｅｘｏ－メチレン基の存在を示す（図９）。第四級炭素（Ｃ－１３、Ｃ－１６及びＣ－１９）の他の低磁場シグナルは、ＨＭＢＣによって検出される（図１０）。ＨＳＱＣ、ＨＭＢＣ及びＨ，Ｈ－ＣＯＳＹにおけるシグナルの相関は、以下のアグリコン構造を有するステビオールグリコシドの存在を明らかにする。
ＨＳＱＣとＨＭＢＣとの相関は、１ｉ、１ｉｉ、１ｉｉｉ、１ｉｖ、１ｖ、１ｖｉ及び１ｖｉｉでマークされた７つのアノマーシグナルの存在を示す。アノマープロトンの約８Ｈｚの結合定数、それらの糖結合のブロードなシグナル、及びアノマープロトンのＮＯＥ相関から、これらの７個の糖をβ－Ｄ－グルコピラノシドとして同定することができる。
ＨＳＱＣ及びＨＭＢＣからの組み合わされたデータは、糖－糖結合及び糖－アグリコン結合を明らかにする。ＨＳＱＣ－ＴＯＣＳＹ（図１１ａ）及びＮＯＥＳＹ（図１１ｂ）の組み合わせを使用することによって、糖配列の帰属を確認した。
同様に、上記のＮＭＲ実験の結果を使用して、レバウジオシド２ａの構造のプロトン及び炭素の化学シフトを帰属した（表５を参照されたい）。
全てのＮＭＲ結果の相関は、以下の化学構造で示されるように、ステビオールアグリコンに結合した７個のβ－Ｄ－グルコースを有するレバウジオシド２ａを示す。
レバウジオシド２ａのＬＣＭＳ（図１２ａ及び図１２ｂ）分析は、ｍ／ｚ１４５１．６に［Ｍ－Ｈ］－イオンを示し、Ｃ６２Ｈ１００Ｏ３８の予想分子式と良好に一致した（［Ｃ６２Ｈ９９Ｏ３８］－単一同位体イオンの計算値：１４５１．６－）。ＭＳデータは、レバウジオシド２ａがＣ６２Ｈ１００Ｏ３８の分子式を有することを支持する。ＬＣＭＳ分析を、表６に列挙した以下の条件で行った。

Claims (16)

  1. 以下の式：
    を有するステビオールグリコシドであって、式中、Ｒ１糖鎖及びＲ２糖鎖は、以下の表に定義される、ステビオールグリコシド。
  2. 請求項１に記載の少なくとも１種のステビオールグリコシドを生成する方法であって、
    ａ．少なくとも１個の炭素原子を有する有機化合物を含む出発組成物を提供する工程と、
    ｂ．ステビオール生合成酵素、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼ、及び任意選択的にＵＤＰ－グルコース再利用酵素から選択される少なくとも１種の酵素を含有する酵素調製物又は微生物を提供する工程と、
    ｃ．前記酵素調製物又は前記微生物を、前記出発組成物を含有する培地と接触させて、請求項１に記載の少なくとも１種のステビオールグリコシドを含む培地を生成する工程と、を含む、方法。
  3. 請求項１に記載の少なくとも１種のステビオールグリコシドを生成する方法であって、
    ａ．少なくとも１個の炭素原子を有する有機化合物を含む出発組成物を提供する工程と、
    ｂ．ステビオール生合成酵素、ＵＤＰ－グルコシルトランスフェラーゼ、及び任意選択的にＵＤＰ－グルコース再利用酵素から選択される少なくとも１種の酵素を含むバイオ触媒を提供する工程と、
    ｃ．前記バイオ触媒を、前記出発組成物を含有する培地と接触させて、請求項１に記載の少なくとも１種のステビオールグリコシドを含む培地を生成する工程と、を含む、方法。
  4. ｄ．請求項１に記載の少なくとも１種のステビオールグリコシドを前記培地から分離して、請求項１に記載の少なくとも１種のステビオールグリコシドの高純度組成物を提供する工程を更に含む、請求項２又は３に記載の方法。
  5. 前記出発組成物は、ステビオール、ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシド、ステビオールビオシドＤ、ルブソシド、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、レバウジオシドＢ、ステビオシド、レバウジオシドＧ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＥ２、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＩ、レバウジオシドＡＭ、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＭ、レバウジオシドＭ４、他のステビオールグリコシド、ポリオール、炭水化物、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項２、３、又は４に記載の方法。
  6. 前記微生物は、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｐ．、Ｐｉｃｈｉａ ｓｐ．、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．、及びＹａｒｒｏｗｉａ ｓｐ．からなる群から選択される、請求項２に記載の方法。
  7. 前記バイオ触媒は、酵素、又は前記出発組成物を請求項１に記載の少なくとも１種のステビオールグリコシドに変換することが可能な、１種以上の酵素を含む細胞である、請求項３に記載の方法。
  8. 前記酵素は、メバロン酸（ＭＶＡ）経路酵素、２－Ｃ－メチル－Ｄ－エリトリトール－４－リン酸経路（ＭＥＰ／ＤＯＸＰ）酵素、ゲラニルゲラニル二リン酸シンターゼ、コパリル二リン酸シンターゼ、カウレンシンターゼ、カウレンオキシダーゼ、カウレン酸１３－ヒドロキシラーゼ（ＫＡＨ）、ステビオールシンセターゼ、デオキシキシルロース５－リン酸シンターゼ（ＤＸＳ）、Ｄ－１－デオキシキシルロース５－リン酸レダクトイソメラーゼ（ＤＸＲ）、４－ジホスホシチジル－２－Ｃ－メチル－Ｄ－エリトリトールシンターゼ（ＣＭＳ）、４－ジホスホシチジル－２－Ｃ－メチル－Ｄ－エリトリトールキナーゼ（ＣＭＫ）、４－ジホスホシチジル－２－Ｃ－メチル－Ｄ－エリトリトール２，４－シクロ二リン酸シンターゼ（ＭＣＳ）、ｌ－ヒドロキシ－２－メチル－２（Ｅ）－ブテニル４－二リン酸シンターゼ（ＨＤＳ）、ｌ－ヒドロキシ－２－メチル－２（Ｅ）－ブテニル４－二リン酸レダクターゼ（ＨＤＲ）、アセトアセチル－ＣｏＡチオラーゼ、切断型ＨＭＧ－ＣｏＡレダクターゼ、メバロン酸キナーゼ、ホスホメバロン酸キナーゼ、メバロン酸ピロリン酸デカルボキシラーゼ、シトクロムＰ４５０レダクターゼ、ＵＧＴ７４Ｇ１、ＵＧＴ８５Ｃ２、ＵＧＴ９１Ｄ２、ＥＵＧＴ１１、ＵＧＴＳｌ２、ＵＧＴ７６Ｇ１、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はその変異多様体からなる群から選択される、請求項２に記載の方法。
  9. 請求項１に記載の少なくとも１種のステビオールグリコシドの前記高純度組成物中の少なくとも１種のステビオールグリコシドの含有量は、乾燥重量基準で９５重量％を超える、請求項４に記載の方法。
  10. 請求項１に記載の少なくとも１種のステビオールグリコシドを含む消費製品であって、前記製品は、食品、飲料、医薬組成物、タバコ製品、栄養補助組成物、口腔衛生組成物、及び化粧品組成物からなる群から選択される、消費製品。
  11. 前記製品は、飲料、天然ジュース、清涼飲料、炭酸ソフトドリンク、ダイエット飲料、ゼロカロリー飲料、低カロリー飲料及び食品、ヨーグルトドリンク、インスタントジュース、インスタントコーヒー、粉末型のインスタント飲料、缶詰製品、シロップ、発酵大豆ペースト、しょうゆ、酢、ドレッシング、マヨネーズ、ケチャップ、カレー、スープ、インスタントブイヨン、粉末しょうゆ、粉末酢、種々のビスケット、米菓、クラッカー、パン、チョコレート、キャラメル、キャンディ、チューインガム、ゼリー、プディング、保存果物及び野菜、生クリーム、ジャム、マーマレード、フラワーペースト、粉ミルク、アイスクリーム、ソルベ、瓶詰めの野菜及び果物、煮豆の缶詰、甘味ソースで煮た肉及び食品、農業野菜の食品製品、海鮮物、ハム、ソーセージ、魚肉ハム、魚肉ソーセージ、魚のすり身、揚げた魚製品、乾燥海鮮物、冷凍食品製品、保存海藻、保存肉、タバコ製品及び医薬品からなる群から選択される、請求項１０に記載の消費製品。
  12. 炭水化物、ポリオール、アミノ酸及びそれらの対応する塩、ポリアミノ酸及びそれらの対応する塩、糖酸及びそれらの対応する塩、ヌクレオチド、有機酸、無機酸、有機酸塩及び有機塩基塩を含む有機塩、無機塩、苦味化合物、カフェイン、風味剤及び風味成分、渋味化合物、タンパク質又はタンパク質加水分解物、界面活性剤、乳化剤、フラボノイド、アルコール、ポリマー、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１種の添加剤を更に含む、請求項１０に記載の消費製品。
  13. サポニン、酸化防止剤、食物繊維供給源、脂肪酸、ビタミン、グルコサミン、ミネラル、防腐剤、水和剤、プロバイオティクス、プレバイオティクス、体重管理剤、骨粗鬆症管理剤、フィトエストロゲン、長鎖第一級脂肪族飽和アルコール、フィトステロール、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１種の機能性成分を更に含む、請求項１０に記載の消費製品。
  14. ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシド、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＢ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシド、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＤ、ステビオシドＥ、ステビオシドＥ２、ステビオシドＦ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＡ２、レバウジオシドＡ３、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＢ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ２、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＤ２、レバウジオシドＤ３、レバウジオシドＤ４、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＥ２、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＦ、レバウジオシドＦ２、レバウジオシドＦ３、レバウジオシドＧ、レバウジオシドＨ、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＩ、レバウジオシドＩ２、レバウジオシドＩ３、レバウジオシドＪ、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＫ２、レバウジオシドＫＡ、レバウジオシドＬ、レバウジオシドＭ、レバウジオシドＭ２、レバウジオシドＭ３、レバウジオシドＮ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＯ、レバウジオシドＯ２、レバウジオシドＯ３、レバウジオシドＯ４、レバウジオシドＱ、レバウジオシドＱ２、レバウジオシドＱ３、レバウジオシドＲ、レバウジオシドＳ、レバウジオシドＴ、レバウジオシドＴ１、レバウジオシドＵ、レバウジオシドＵ２、レバウジオシドＶ、レバウジオシドＶ２、レバウジオシドＶ３、レバウジオシドＷ、レバウジオシドＷ２、レバウジオシドＷ３、レバウジオシドＹ、レバウジオシドＺ１、レバウジオシドＺ２、レバウジオシドＡＭ、ＳｖＧ７、モグロシドＶ、シラトース、アルロース、Ｄ－アロース、Ｄ－タガトース、エリトリトール、ブラゼイン、ネオヘスペリジンジヒドロカルコン、グリチルリチン酸及びその塩、ソーマチン、ペリラルチン、ペルナンズルチン、ムクロジオシド、バイユノシド、フロミソシドＩ、ジメチル－ヘキサヒドロフルオレン－ジカルボン酸、アブルソシド、ペリアンドリン、カルノシフロシド、シクロカリオシド、プテロカリオシド、ポリポドシドＡ、ブラジリン、ヘルナンズルチン、フィロズルチン、グリシフィリン、フロリジン、トリロバチン、ジヒドロフラボノール、ジヒドロケルセチン－３－アセテート、ネオアスチリビン、ｔｒａｎｓ－シンナムアルデヒド、モナチン及びその塩、セリゲアインＡ、ヘマトキシリン、モネリン、オスラジン、プテロカリオシドＡ、プテロカリオシドＢ、マビンリン、ペンタジン、ミラクリン、クルクリン、ネオクリン、クロロゲン酸、シナリン、シアメノシド、スクラロース、アセスルファムカリウム、アスパルテーム、アリテーム、サッカリン、シクラメート、ネオテーム、ズルチン、スオサンアドバンテーム、ギムネマ酸、ホズルシン、ジジフィン、ラクチソール、グルタミン酸、アスパラギン酸、グリシン、アラニン、トレオニン、プロリン、セリン、リシン、トリプトファン、マルチトール、マンニトール、ソルビトール、ラクチトール、キシリトール、イノシトール、イソマルト、プロピレングリコール、グリセロール、トレイトール、ガラクチトール、水素添加イソマルツロース、還元イソマルトオリゴ糖、還元キシロオリゴ糖、還元ゲンチオオリゴ糖、還元マルトースシロップ、還元グルコースシロップ、水素化デンプン加水分解物、ポリグリシトール、糖アルコール、Ｌ糖、Ｌ－ソルボース、Ｌ－アラビノース、トレハロース、ガラクトース、ラムノース、様々なシクロデキストリン、環状オリゴ糖、様々な種類のマルトデキストリン、デキストラン、スクロース、グルコース、リブロース、フルクトース、トレオース、キシロース、リキソース、アルトロース、マンノース、イドース、ラクトース、マルトース、転化糖、イソトレハロース、ネオトレハロース、イソマルツロース、エリトロース、デオキシリボース、グロース、タロース、エリトルロース、キシルロース、セロビオース、アミロペクチン、グルコサミン、マンノサミン、グルクロン酸、グルコン酸、グルコノラクトン、アベクオース、ガラクトサミン、ビートオリゴ糖、イソマルトオリゴ糖（イソマルトース、イソマルトトリオース、パノースなど）、キシロオリゴ糖（キシロトリオース、キシロビオースなど）、キシロ末端オリゴ糖、ゲンチオオリゴ糖（ゲンチオビオース、ゲンチオトリオース、ゲンチオテトラオースなど）、ニゲロオリゴ糖、パラチノースオリゴ糖、フラクトオリゴ糖（ケストース、ニストースなど）、マルトテトラオール、マルトトリオール、マルトオリゴ糖（マルトトリオース、マルトテトラオース、マルトペンタオース、マルトヘキサオース、マルトヘプタオースなど）、デンプン、イヌリン、イヌロオリゴ糖、ラクツロース、メリビオース、ラフィノース、高フルクトースコーンシロップなどの異性化液体糖、カップリング糖、大豆オリゴ糖、Ｄ－プシコース、Ｄ－リボース、Ｌ－グルコース、Ｌ－フコース、Ｄ－ツラノース、Ｄ－ロイクロースからなる群から選択される化合物を更に含む、請求項１０に記載の消費製品。
  15. 甘味料を含む飲料又は食品製品の甘味を増強するための方法であって、
    ａ．甘味料を含む飲料又は食品製品を提供することと、
    ｂ．請求項１に記載の少なくとも１種のステビオールグリコシドを含む甘味増強剤を添加することと、を含み、
    請求項１に記載の少なくとも１種のステビオールグリコシドは、甘味認識閾値以下の濃度で存在する、方法。
  16. 飲料又は食品製品の風味を変更するための方法であって、
    ａ．飲料又は食品製品を提供することと、
    ｂ．請求項１に記載の少なくとも１種のステビオールグリコシドを含む組成物を添加することと、を含む、方法。
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