JP7648530B2 - Ｃａｒ操作されたｔ細胞およびサイトカインを含む治療 - Google Patents

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Description

本開示は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように操作されたＴ細胞の効果を増強するための方法および薬剤に関する。これらの方法および薬剤は、特に、ＣＡＲが向けられる抗原を発現する疾患細胞を特徴とする疾患の治療に有用である。具体的には、本開示は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように遺伝子改変されたＴ細胞を対象に提供すること、およびＩＬ２またはＩＬ２をコードするポリヌクレオチドを対象に投与することを含む方法に関する。本開示の方法は、ＩＬ２またはＩＬ２をコードするポリヌクレオチド、およびさらなるサイトカインまたはさらなるサイトカインをコードするポリヌクレオチドを投与することを含み得、さらなるサイトカインはＩＬ７またはＩＬ２１であり得る。ＣＡＲを発現するように遺伝子改変されたＴ細胞は、ＣＡＲを発現するように遺伝子改変されたＴ細胞を投与することによって、またはＣＡＲを発現するように遺伝子改変されたＴ細胞を対象において生成することによって、対象に提供され得る。本開示の方法は、抗原もしくはその変異体（variant）、または抗原もしくはその変異体をコードするポリヌクレオチドを対象に投与することをさらに含み得、ＣＡＲを発現するように遺伝子改変されたＴ細胞は抗原を標的とする。特に好ましい一実施形態では、本開示に従って投与されるポリヌクレオチドはＲＮＡである。
免疫系は、癌、自己免疫、アレルギー、および病原体関連疾患において重要な役割を果たす。Ｔ細胞は、ヒトおよび動物の細胞媒介性免疫において中心的な役割を果たす。Ｔ細胞による特定の抗原の認識および結合は、Ｔ細胞の表面に発現されるＴ細胞受容体（ＴＣＲ）によって媒介される。Ｔ細胞のＴＣＲは、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子に結合し、標的細胞の表面に提示される免疫原性ペプチド（エピトープ）と相互作用することができる。ＴＣＲの特異的結合は、増殖および成熟エフェクタＴ細胞への分化をもたらすＴ細胞内のシグナルカスケードを開始させる。
ＴＣＲの多様性は、ＴＣＲの様々な構造領域をコードする遺伝子の様々な不連続セグメントの遺伝子再編成によって得られる。ＴＣＲは、１つのα鎖と１つのβ鎖、または１つのγ鎖と１つのδ鎖で構成される。ＴＣＲ α／β鎖は、抗原認識に関与するＮ末端の高度に多型性の可変領域と不変の定常領域とで構成される。遺伝子レベルでは、これらの鎖はいくつかの領域、すなわち可変（Ｖ）領域、多様性（Ｄ）領域（β鎖とδ鎖のみ）、結合（Ｊ）領域および定常（Ｃ）領域に分けられる。Ｔ細胞の分化中に、１つのＶ領域、１つのＤ領域（β鎖とδ鎖のみ）、１つのＪ領域および１つのＣ領域遺伝子を再編成することによって特定のＴ細胞受容体遺伝子が作成される。ＴＣＲの多様性は、ランダムなヌクレオチドが組換え部位で導入および／または欠失される不正確なＶ－（Ｄ）－Ｊ再構成によってさらに増幅される。ＴＣＲ遺伝子座の再構成はＴ細胞の成熟中にゲノム内で起こるため、各成熟Ｔ細胞は１つの特定のα／β ＴＣＲまたはγ／δ ＴＣＲのみを発現する。ＴＣＲは、ＴＣＲ α鎖およびβ鎖のヘテロ二量体複合体、共受容体ＣＤ４またはＣＤ８、およびＣＤ３シグナル伝達モジュールを含む複雑なシグナル伝達機構の一部である。ＣＤ３鎖は細胞内で活性化シグナルを伝達するが、ＴＣＲ α／βヘテロ二量体は抗原認識のみに関与する。
養子細胞移入（ＡＣＴ）に基づく免疫療法は、低い前駆細胞頻度から臨床的に適切な細胞数までエクスビボで増殖させた後に非免疫レシピエントまたは自己宿主に移入される、以前に感作されたＴ細胞による受動免疫の一形態として広く定義することができる。ＡＣＴ実験に使用されてきた細胞型は、リンホカイン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞（Ｍｕｌｅ，Ｊ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．（１９８４）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２５，１４８７－１４８９；Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ，Ｓ．Ａ．ｅｔ ａｌ．（１９８５）Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３１３，１４８５－１４９２）、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ，Ｓ．Ａ．ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．８６，１１５９－１１６６）、造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）後のドナーリンパ球および腫瘍特異的Ｔ細胞株またはクローン（Ｄｕｄｌｅｙ，Ｍ．Ｅ．ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２４，３６３－３７３；Ｙｅｅ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ ９９，１６１６８－１６１７３）である。養子Ｔ細胞移入は、ＣＭＶなどのヒトウイルス感染に対して治療活性を有することが示された。ＣＭＶ感染および内因性潜在ウイルスの再活性化は、健康な個体では免疫系によって制御されるが、移植レシピエントまたはＡＩＤＳ患者などの免疫無防備状態の個体では有意な罹患率および死亡率をもたらす。Ｒｉｄｄｅｌｌと共同研究者たちは、ＨＬＡ適合ＣＭＶ血清陽性移植ドナーに由来するＣＤ８＋ＣＭＶ特異的Ｔ細胞クローンの移入後の免疫抑制患者における養子Ｔ細胞療法によるウイルス免疫の再構成を実証した（Ｒｉｄｄｅｌｌ，Ｓ．Ｒ．（１９９２）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５７，２３８－２４１）。代替アプローチとして、ポリクローナルドナー由来のＣＭＶまたはＥＢＶ特異的Ｔ細胞集団を移植レシピエントに移入し、移入されたＴ細胞の持続性を増加させた（Ｒｏｏｎｅｙ，Ｃ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｂｌｏｏｄ ９２，１５４９－１５５５；Ｐｅｇｇｓ，Ｋ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｌａｎｃｅｔ ３６２，１３７５－１３７７）。黒色腫の養子免疫療法のために、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇと共同研究者たちは、骨髄非破壊的リンパ球枯渇化学療法および高用量ＩＬ－２と組み合わせて、切除した腫瘍から単離し、インビトロで増殖させた自己腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を持続注入することに基づくＡＣＴアプローチを確立した。最近公表された臨床試験では、転移性黒色腫に罹患している治療患者の約５０％の客観的奏効率が得られた（Ｄｕｄｌｅｙ，Ｍ．Ｅ．ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２３：２３４６－２３５７）。
代替アプローチは、短時間のエクスビボ培養中に定義された特異性の腫瘍反応性免疫受容体を発現するように再プログラムされた自己Ｔ細胞の養子移入とそれに続く患者への再注入である（Ｋｅｒｓｈａｗ Ｍ．Ｈ．ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｃａｎｃｅｒ １３（８）：５２５－４１）。この戦略は、腫瘍反応性Ｔ細胞が患者に存在しない場合でも、ＡＣＴを様々な一般的悪性腫瘍に適用可能にする。Ｔ細胞の抗原特異性はＴＣＲ α鎖およびβ鎖のヘテロ二量体複合体に全面的に依存するので、クローニングされたＴＣＲ遺伝子のＴ細胞への移入は、それらを目的の抗原へと再指向させる可能性を提供する。したがって、ＴＣＲ遺伝子治療は、治療選択肢として自己リンパ球を用いた抗原特異的免疫療法を開発するための魅力的な戦略を提供する。ＴＣＲ遺伝子導入の主な利点は、治療量の抗原特異的Ｔ細胞を数日以内に生産できること、および患者の内因性ＴＣＲレパートリには存在しない特異性を導入できることである。
いくつかのグループは、ＴＣＲ遺伝子導入が初代Ｔ細胞の抗原特異性を再指向する魅力的な戦略であることを明らかにした（Ｍｏｒｇａｎ，Ｒ．Ａ．ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７１，３２８７－３２９５；Ｃｏｏｐｅｒ，Ｌ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７４，８２０７－８２１２；Ｆｕｊｉｏ，Ｋ．ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６５，５２８－５３２；Ｋｅｓｓｅｌｓ，Ｈ．Ｗ．ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２，９５７－９６１；Ｄｅｍｂｉｃ，Ｚ．ｅｔ ａｌ．（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ ３２０，２３２－２３８）。ヒトにおけるＴＣＲ遺伝子療法の実現可能性は、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇと彼のグループによる悪性黒色腫の治療のための臨床試験で最初に実証された。黒色腫／メラノサイト抗原特異的ＴＣＲをレトロウイルスで形質導入した自己リンパ球の養子移入は、治療された黒色腫患者の最大３０％で癌の退縮をもたらした（Ｍｏｒｇａｎ，Ｒ．Ａ．ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３１４，１２６－１２９；Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｌ．Ａ．ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｂｌｏｏｄ １１４，５３５－５４６）。一方、ＴＣＲ遺伝子療法の臨床試験は、多くの異なる腫瘍抗原を標的とする、黒色腫以外の癌にも拡大された（Ｐａｒｋ，Ｔ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．，（２０１１）Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２９，５５０－５５７）。
定義された特異性の抗原標的受容体をＴ細胞に挿入するための遺伝子工学的アプローチの使用は、ＡＣＴの潜在的可能性を大きく拡大した。キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、細胞外抗原結合部分、最も一般的にはモノクローナル抗体からの一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）に融合した細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインからなる抗原標的受容体の一種である。ＣＡＲは、ＭＨＣ媒介提示とは無関係に、細胞表面抗原を直接認識し、全ての患者で所与の抗原に特異的な単一の受容体構築物の使用を可能にする。最初のＣＡＲは、抗原認識ドメインをＴ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体のＣＤ３ζ活性化鎖に融合させた。その後のＣＡＲ反復には、ＣＤ２８または４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）およびＯＸ４０（ＣＤ１３４）などの様々なＴＮＦ受容体ファミリー分子からの細胞内ドメインを含む、ＣＤ３ζと連携した二次共刺激シグナルが含まれている。さらに、第３世代の受容体には、ＣＤ３ζに加えて、最も一般的にはＣＤ２８および４－１ＢＢからの２つの共刺激シグナルが含まれる。第２および第３世代ＣＡＲは、抗腫瘍効果を劇的に改善し、場合によっては進行癌の患者において完全寛解を誘導した。
Ｍｕｌｅ，Ｊ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．（１９８４）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２５，１４８７－１４８９ Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ，Ｓ．Ａ．ｅｔ ａｌ．（１９８５）Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３１３，１４８５－１４９２） Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ，Ｓ．Ａ．ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．８６，１１５９－１１６６ Ｄｕｄｌｅｙ，Ｍ．Ｅ．ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２４，３６３－３７３ Ｙｅｅ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ ９９，１６１６８－１６１７３ Ｒｉｄｄｅｌｌ，Ｓ．Ｒ．（１９９２）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５７，２３８－２４１ Ｒｏｏｎｅｙ，Ｃ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｂｌｏｏｄ ９２，１５４９－１５５５ Ｐｅｇｇｓ，Ｋ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｌａｎｃｅｔ ３６２，１３７５－１３７７ Ｄｕｄｌｅｙ，Ｍ．Ｅ．ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２３：２３４６－２３５７ Ｋｅｒｓｈａｗ Ｍ．Ｈ．ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｃａｎｃｅｒ １３（８）：５２５－４１ Ｍｏｒｇａｎ，Ｒ．Ａ．ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７１，３２８７－３２９５ Ｃｏｏｐｅｒ，Ｌ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７４，８２０７－８２１２ Ｆｕｊｉｏ，Ｋ．ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６５，５２８－５３２ Ｋｅｓｓｅｌｓ，Ｈ．Ｗ．ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２，９５７－９６１ Ｄｅｍｂｉｃ，Ｚ．ｅｔ ａｌ．（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ ３２０，２３２－２３８） Ｍｏｒｇａｎ，Ｒ．Ａ．ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３１４，１２６－１２９ Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｌ．Ａ．ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｂｌｏｏｄ １１４，５３５－５４６ Ｐａｒｋ，Ｔ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．，（２０１１）Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２９，５５０－５５７
一般に、移入されたＴ細胞の数は治療応答と相関すると考えられている。しかしながら、養子Ｔ細胞移入のために患者に投与することができる細胞の数は限られており、養子Ｔ細胞移入のための大量のＴ細胞の生成は依然として課題である。患者がＴＩＬまたは受容体操作Ｔ細胞のいずれかの注入前にリンパ球枯渇準備レジメンを受けた場合、細胞持続性の実質的な増加が達成され得る。しかし、大量の操作されたＴ細胞を空の宿主に移入することは、標的抗原が関連する正常組織で予期せずに発現された場合に重篤な有害事象のリスクももたらす。したがって、安全であることが証明された後に、患者において増殖することができる限られた量の操作されたＴ細胞を移入することが望ましいであろう。
本発明者らは、任意でＩＬ７またはＩＬ２１などのさらなるサイトカインをコードするＲＮＡと組み合わせてＩＬ２をコードするＲＮＡを投与し、任意でＲＮＡワクチン接種を使用してＣＡＲ－Ｔ細胞刺激のための抗原を提供することによって、対象においてＣＡＲ－Ｔ細胞を増殖させることが可能であることを見出した。本発明の方法は、少量のＣＡＲ操作Ｔ細胞のみを患者に提供し、次いでＴ細胞をインビボで増殖させることを可能にする。
本発明は、一般に、細胞表面に抗原を発現する疾患細胞、特に細胞表面に腫瘍抗原を発現する癌細胞などの細胞表面に抗原を発現する細胞を標的とすることによる疾患の治療を包含する。この方法は、自らの表面に抗原を発現する細胞の選択的根絶を提供し、それによって抗原を発現しない正常細胞への有害作用を最小限に抑える。抗原への結合を介して細胞を標的とするキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように遺伝子改変されたＴ細胞は、Ｔ細胞の投与などによって対象に提供される。ＩＬ２またはそれをコードする核酸が投与される。一実施形態では、ＩＬ７もしくはＩＬ２１などのさらなるサイトカインまたはそれをコードする核酸が投与される。一実施形態では、抗原もしくはその変異体またはそれをコードする核酸を投与して、Ｔ細胞の刺激、プライミングおよび／または拡大のための抗原を提供する（任意で適切な標的細胞による核酸の発現後に）。患者において刺激、プライミングおよび／または拡大されたＴ細胞は、疾患細胞などの細胞表面に抗原を発現する細胞を認識することができ、疾患細胞の根絶をもたらす。本アプローチは、受動免疫化および能動免疫化を含むと考えることができる。ＣＡＲを発現するように遺伝子改変されたＴ細胞の投与を含む治療は、受動免疫化の一形態と見なすことができる。抗原またはその変異体の投与を含み、それによって標的細胞集団または組織に対するＴ細胞媒介免疫応答を刺激する治療は、能動免疫化の一形態と見なすことができる。
本開示による免疫応答は、哺乳動物において抗原を発現する標的細胞集団または標的組織に対するものであり、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように遺伝子改変されたＴ細胞は抗原を標的とする。本方法は、任意で、抗原またはその変異体の投与も含む。一実施形態では、免疫応答はＴ細胞媒介免疫応答である。一実施形態では、免疫応答は抗腫瘍免疫応答であり、標的細胞集団または標的組織は腫瘍細胞または腫瘍組織である。
本明細書に記載される方法および薬剤は、薬物動態修飾基に結合したＩＬ２（以下、「延長薬物動態（ＰＫ）ＩＬ２」と称する。）をコードするＲＮＡを、任意で薬物動態修飾基に結合したＩＬ７またはＩＬ２１などのさらなるサイトカイン（以下、「延長薬物動態（ＰＫ）サイトカイン」と称する。）をコードするＲＮＡと組み合わせて投与した場合に特に有効である。本明細書に記載される方法および薬剤は、延長ＰＫ ＩＬ２をコードするＲＮＡおよび／または延長ＰＫサイトカインをコードするＲＮＡが、全身アベイラビリティのために肝臓を標的とする場合に特に有効である。肝細胞は効率的にトランスフェクトすることができ、大量のタンパク質を産生することができる。抗原をコードするＲＮＡは、好ましくは二次リンパ器官を標的とする。
一態様では、本発明は、対象において免疫応答を誘導するための方法であって、
ａ．キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように遺伝子改変されたＴ細胞を対象に提供すること、および
ｂ．ＩＬ２またはＩＬ２をコードするポリヌクレオチドを対象に投与すること
を含む方法を提供する。
一実施形態では、この方法は、ＩＬ２またはＩＬ２をコードするポリヌクレオチド、およびさらなるサイトカインまたはさらなるサイトカインをコードするポリヌクレオチドを投与することを含む。一実施形態では、さらなるサイトカインは、ＩＬ７およびＩＬ２１からなる群より選択される。一実施形態では、この方法は、ＩＬ２またはＩＬ２をコードするポリヌクレオチド、およびＩＬ７またはＩＬ７をコードするポリヌクレオチドを投与することを含む。一実施形態では、この方法は、ＩＬ２またはＩＬ２をコードするポリヌクレオチド、およびＩＬ２１またはＩＬ２１をコードするポリヌクレオチドを投与することを含む。
一実施形態では、ＩＬ２をコードするポリヌクレオチドはＲＮＡであり、任意で、さらなるサイトカインをコードするポリヌクレオチドはＲＮＡである。
一実施形態では、ＣＡＲを発現するように遺伝子改変されたＴ細胞は、ＣＡＲを発現するように遺伝子改変されたＴ細胞を投与することによって、またはＣＡＲを発現するように遺伝子改変されたＴ細胞を対象において生成することによって、対象に提供される。
一実施形態では、この方法は、抗原もしくはその変異体、または抗原もしくは変異体をコードするポリヌクレオチドを対象に投与することをさらに含み、ＣＡＲを発現するように遺伝子改変されたＴ細胞は抗原を標的とし、免疫応答は、抗原を発現する標的細胞集団または標的組織に対する免疫応答である。一実施形態では、抗原または変異体をコードするポリヌクレオチドはＲＮＡである。
一態様では、本発明は、対象において免疫応答を誘導するための方法であって、
ａ．キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように遺伝子改変されたＴ細胞を対象に提供すること、および
ｂ．ＩＬ２をコードするＲＮＡを対象に投与すること
を含む方法を提供する。
一実施形態では、この方法は、ＩＬ２をコードするＲＮＡおよびさらなるサイトカインをコードするＲＮＡを投与することを含む。一実施形態では、さらなるサイトカインは、ＩＬ７およびＩＬ２１からなる群より選択される。一実施形態では、この方法は、ＩＬ２をコードするＲＮＡおよびＩＬ７をコードするＲＮＡを投与することを含む。一実施形態では、この方法は、ＩＬ２をコードするＲＮＡおよびＩＬ２１をコードするＲＮＡを投与することを含む。
一実施形態では、ＣＡＲを発現するように遺伝子改変されたＴ細胞は、ＣＡＲを発現するように遺伝子改変されたＴ細胞を投与することによって、またはＣＡＲを発現するように遺伝子改変されたＴ細胞を対象において生成することによって、対象に提供される。
一実施形態では、この方法は、抗原またはその変異体をコードするＲＮＡを対象に投与することをさらに含み、ＣＡＲを発現するように遺伝子改変されたＴ細胞は抗原を標的とし、免疫応答は、抗原を発現する標的細胞集団または標的組織に対する免疫応答である。
全ての態様の一実施形態では、免疫応答はＴ細胞媒介免疫応答である。
一態様では、本発明は、抗原の発現または発現上昇に関連する疾患、障害または状態を有する対象を治療するための方法であって、
ａ．抗原を標的とするキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように遺伝子改変されたＴ細胞を対象に提供すること、および
ｂ．ＩＬ２またはＩＬ２をコードするポリヌクレオチドを対象に投与すること
を含む方法を提供する。
一実施形態では、この方法は、ＩＬ２またはＩＬ２をコードするポリヌクレオチド、およびさらなるサイトカインまたはさらなるサイトカインをコードするポリヌクレオチドを投与することを含む。一実施形態では、さらなるサイトカインは、ＩＬ７およびＩＬ２１からなる群より選択される。一実施形態では、この方法は、ＩＬ２またはＩＬ２をコードするポリヌクレオチド、およびＩＬ７またはＩＬ７をコードするポリヌクレオチドを投与することを含む。一実施形態では、この方法は、ＩＬ２またはＩＬ２をコードするポリヌクレオチド、およびＩＬ２１またはＩＬ２１をコードするポリヌクレオチドを投与することを含む。
一実施形態では、ＩＬ２をコードするポリヌクレオチドはＲＮＡであり、任意で、さらなるサイトカインをコードするポリヌクレオチドはＲＮＡである。
一実施形態では、ＣＡＲを発現するように遺伝子改変されたＴ細胞は、ＣＡＲを発現するように遺伝子改変されたＴ細胞を投与することによって、またはＣＡＲを発現するように遺伝子改変されたＴ細胞を対象において生成することによって、対象に提供される。
一実施形態では、この方法は、抗原もしくはその変異体、または抗原もしくは変異体をコードするポリヌクレオチドを対象に投与することをさらに含む。一実施形態では、抗原または変異体をコードするポリヌクレオチドはＲＮＡである。
一態様では、本発明は、抗原の発現または発現上昇に関連する疾患、障害または状態を有する対象を治療するための方法であって、
ａ．抗原を標的とするキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように遺伝子改変されたＴ細胞を対象に提供すること、および
ｂ．ＩＬ２をコードするＲＮＡを対象に投与すること
を含む方法を提供する。
一実施形態では、この方法は、ＩＬ２をコードするＲＮＡおよびさらなるサイトカインをコードするＲＮＡを投与することを含む。一実施形態では、さらなるサイトカインは、ＩＬ７およびＩＬ２１からなる群より選択される。一実施形態では、この方法は、ＩＬ２をコードするＲＮＡおよびＩＬ７をコードするＲＮＡを投与することを含む。一実施形態では、この方法は、ＩＬ２をコードするＲＮＡおよびＩＬ２１をコードするＲＮＡを投与することを含む。
一実施形態では、ＣＡＲを発現するように遺伝子改変されたＴ細胞は、ＣＡＲを発現するように遺伝子改変されたＴ細胞を投与することによって、またはＣＡＲを発現するように遺伝子改変されたＴ細胞を対象において生成することによって、対象に提供される。
一実施形態では、この方法は、抗原またはその変異体をコードするＲＮＡを対象に投与することをさらに含む。
全ての態様の一実施形態では、疾患、障害または状態は癌であり、抗原は腫瘍関連抗原である。
全ての態様の一実施形態では、ＩＩＬ２は、延長薬物動態（ＰＫ）ＩＬ２である。一実施形態では、延長ＰＫ ＩＬ２は融合タンパク質を含む。一実施形態では、融合タンパク質は、ＩＬ２部分と、血清アルブミン、免疫グロブリン断片、トランスフェリン、Ｆｎ３、およびそれらの変異体からなる群より選択される部分とを含む。
全ての態様の一実施形態では、さらなるサイトカイン、特にＩＬ７またはＩＬ２１は、延長薬物動態（ＰＫ）サイトカイン、特に延長ＰＫ ＩＬ７または延長ＰＫ ＩＬ２１である。一実施形態では、延長ＰＫサイトカイン、特に延長ＰＫ ＩＬ７または延長ＰＫ ＩＬ２１は、融合タンパク質を含む。一実施形態では、融合タンパク質は、さらなるサイトカインの部分、特にＩＬ７部分またはＩＬ２１部分と、血清アルブミン、免疫グロブリン断片、トランスフェリン、Ｆｎ３、およびそれらの変異体からなる群より選択される部分とを含む。
一実施形態では、血清アルブミンは、マウス血清アルブミンまたはヒト血清アルブミンを含む。一実施形態では、免疫グロブリン断片は、免疫グロブリンＦｃドメインを含む。
全ての態様の一実施形態では、方法は、対象における癌を治療または予防するための方法であり、抗原は腫瘍関連抗原である。
一態様では、本発明は、
ａ．キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように遺伝子改変されたＴ細胞、および
ｂ．ＩＬ２またはＩＬ２をコードするポリヌクレオチド
を含む医薬製剤を提供する。
一実施形態では、医薬製剤は、ＩＬ２またはＩＬ２をコードするポリヌクレオチド、およびさらなるサイトカインまたはさらなるサイトカインをコードするポリヌクレオチドを含む。一実施形態では、さらなるサイトカインは、ＩＬ７およびＩＬ２１からなる群より選択される。一実施形態では、医薬製剤は、ＩＬ２またはＩＬ２をコードするポリヌクレオチド、およびＩＬ７またはＩＬ７をコードするポリヌクレオチドを含む。一実施形態では、医薬製剤は、ＩＬ２またはＩＬ２をコードするポリヌクレオチド、およびＩＬ２１またはＩＬ２１をコードするポリヌクレオチドを含む。
一実施形態では、ＩＬ２をコードするポリヌクレオチドはＲＮＡであり、任意で、さらなるサイトカインをコードするポリヌクレオチドはＲＮＡである。
一実施形態では、医薬製剤は、抗原もしくはその変異体、または抗原もしくは変異体をコードするポリヌクレオチドをさらに含み、ＣＡＲを発現するように遺伝子改変されたＴ細胞は抗原を標的とする。一実施形態では、抗原または変異体をコードするポリヌクレオチドはＲＮＡである。
一実施形態では、医薬製剤はキットである。
一実施形態では、医薬製剤は、ＣＡＲを発現するように遺伝子改変されたＴ細胞、ＩＬ２もしくはＩＬ２をコードするポリヌクレオチド、任意でさらなるサイトカインもしくはさらなるサイトカインをコードするポリヌクレオチド、および任意で抗原もしくはその変異体または抗原もしくは変異体をコードするポリヌクレオチドを別々の容器中に含む。
一実施形態では、医薬製剤は、癌を治療または予防するための医薬製剤の使用説明書をさらに含み、抗原は腫瘍関連抗原である。
一実施形態では、医薬製剤は医薬組成物である。
一実施形態では、医薬組成物は、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤および／または賦形剤をさらに含む。
一態様では、本発明は、
ａ．キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように遺伝子改変されたＴ細胞、および
ｂ．ＩＬ２をコードするＲＮＡ
を含む医薬製剤を提供する。
一実施形態では、医薬製剤は、ＩＬ２をコードするＲＮＡおよびさらなるサイトカインをコードするＲＮＡを含む。一実施形態では、さらなるサイトカインは、ＩＬ７およびＩＬ２１からなる群より選択される。一実施形態では、医薬製剤は、ＩＬ２をコードするＲＮＡおよびＩＬ７をコードするＲＮＡを含む。一実施形態では、医薬製剤は、ＩＬ２をコードするＲＮＡおよびＩＬ２１をコードするＲＮＡを含む。
一実施形態では、医薬製剤は、抗原またはその変異体をコードするＲＮＡをさらに含み、ＣＡＲを発現するように遺伝子改変されたＴ細胞は抗原を標的とする。
一実施形態では、医薬製剤はキットである。
一実施形態では、医薬製剤は、ＣＡＲを発現するように遺伝子改変されたＴ細胞、ＩＬ２をコードするＲＮＡ、任意でさらなるサイトカインをコードするＲＮＡ、および任意で抗原またはその変異体をコードするＲＮＡを別々の容器中に含む。
一実施形態では、医薬製剤は、癌を治療または予防するための医薬製剤の使用説明書をさらに含み、抗原は腫瘍関連抗原である。
一実施形態では、医薬製剤は医薬組成物である。
一実施形態では、医薬組成物は、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤および／または賦形剤をさらに含む。
全ての態様の一実施形態では、ＩＩＬ２は、延長薬物動態（ＰＫ）ＩＬ２である。一実施形態では、延長ＰＫ ＩＬ２は融合タンパク質を含む。一実施形態では、融合タンパク質は、ＩＬ２部分と、血清アルブミン、免疫グロブリン断片、トランスフェリン、Ｆｎ３、およびそれらの変異体からなる群より選択される部分とを含む。
全ての態様の一実施形態では、さらなるサイトカインは、延長薬物動態（ＰＫ）サイトカインである。一実施形態では、延長ＰＫサイトカインは融合タンパク質を含む。一実施形態では、融合タンパク質は、サイトカイン部分と、血清アルブミン、免疫グロブリン断片、トランスフェリン、Ｆｎ３、およびそれらの変異体からなる群より選択される部分とを含む。
一実施形態では、血清アルブミンは、マウス血清アルブミンまたはヒト血清アルブミンを含む。
一実施形態では、免疫グロブリン断片は、免疫グロブリンＦｃドメインを含む。
一態様では、本発明は、医薬用途のための本明細書に記載の医薬製剤を提供する。一実施形態では、医薬用途は、疾患または障害の治療的または予防的治療を含む。
一態様では、本発明は、対象における癌を治療または予防するための方法で使用するための本明細書に記載の医薬製剤を提供し、抗原は腫瘍関連抗原である。
一態様では、本発明は、本明細書に記載の方法で使用するための本明細書に記載の薬剤および組成物を提供する。
一態様では、本発明は、本明細書に記載の方法で使用するための、抗原を標的とするキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように遺伝子改変されたＴ細胞を提供する。
一態様では、本発明は、本明細書に記載の方法で使用するためのＩＬ２またはＩＬ２をコードするポリヌクレオチドを提供する。
一態様では、本発明は、本明細書に記載の方法で使用するための、ＩＬ７またはＩＬ２１などのＩＬ２以外のサイトカインまたはそれをコードするポリヌクレオチドを提供する。
一態様では、本発明は、本明細書に記載の方法で使用するための抗原もしくはその変異体、または抗原もしくはその変異体をコードする核酸を提供する。
医薬製剤の一実施形態では、ＲＮＡは、液体形態、固体形態、またはそれらの組合せから選択される形態で存在する。一実施形態では、固体形態は、凍結形態または脱水形態である。一実施形態では、脱水形態は、凍結乾燥形態または噴霧乾燥形態である。
一実施形態では、本明細書に記載の癌は、黒色腫、白血病、リンパ腫、肺癌、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、結腸癌、中皮腫、腎細胞癌、および脳の癌からなる群より選択される。
図１Ａ～図１Ｄは、ｍＡｌｂ－ｍＩＬ－２およびｍＩＬ－７－ｍＡｌｂが、プレコンディショニングされたマウスにおいてインビボで遺伝子操作されたＣＡＲ Ｔ細胞のインサイチュ反復抗原特異的増殖を促進することを示す図である。（Ａ）２．５Ｇｙ照射した（ＸＲＡＤ３２０）Ｃ５７ＢＬ／６ＢｒｄＣｒＨｓｄ－Ｔｙｒｃマウス（ｎ＝２～３匹／群）に、５×１０６個のＣＬＤＮ６－ＣＡＲ－ＢＢｚ－Ｌｕｃ－ＧＦＰ形質導入Ｃ５７Ｂｌ／６－Ｔｈｙ１．１＋Ｔ細胞をｉ．ｖ．移植した。１日後、マウスをｈＣＬＤＮ６またはＯｖａＩ（対照ＲＮＡ）をコードするｍＲＮＡリポプレックスワクチン接種（２０μｇ、ｉ．ｖ．）で処置し、続いてｍＡｌｂ－ｍＩＬ－２およびｍＩＬ－７－ｍＡｌｂをコードするヌクレオシド修飾製剤化ＲＮＡをｉ．ｐ．投与した（１μｇ／ｍＲＮＡ／マウス）。緩衝液をモック対照として使用した。さらに７日後、処置を繰り返した。ＡＣＴ後１日目（ベースライン）から１５日目までの増殖および持続性を監視するために生物発光イメージング（ＢＬＩ）を実施した。（Ｂ）養子移入されたマウスＣＡＲ形質導入Ｔ細胞の導入遺伝子発現を示す図である。細胞を、ＣＤ８およびＣＤ４に対する蛍光色素結合抗体、ならびにＣＬＤＮ６－ＣＡＲのｓｃＦｖ部分に対するイディオタイプ特異的抗体（抗ＩＭＡＢ２０６）で染色し、フローサイトメトリによって分析した。左：細胞を単一リンパ球でゲートした；右：細胞をＣＤ８＋Ｔ細胞でゲートした。 （Ｃ）ＡＣＴ、および示されているようにアルブミン－サイトカインをコードするｍＲＮＡと組み合わせた抗原ＲＮＡ（ＬＩＰ）による処置後の、様々な時点での側臥位のマウスの生物発光イメージングを示す図である。オフカラー画像は、グレースケール参照画像に重ね合わせた光の強度（黒色、最も弱い；白色から暗灰色、最も強い）を表す。 （Ｄ）１日目のベースラインと比較したＡＣＴの４日後および１１日後の全光束の算出された増殖指数（平均±ｓ．ｄ．）を示す図である。ＡＣＴ：養子Ｔ細胞移入、ＴＢＩ：全身照射、ＢＬＩ：生物発光イメージング、Ｌｕｃ：有効ホタルルシフェラーゼ、ｍＡｌｂ：マウス血清アルブミン、ｍＩＬ－２：マウスインターロイキン２、ｍＩＬ－７：マウスインターロイキン７。 図２Ａ～図２Ｃは、ｍＡｌｂ－ｍＩＬ－２およびｍＩＬ－７－ｍＡｌｂは、免疫適格マウスにおいても、インビボで抗原特異的に増殖したＣＡＲ Ｔ細胞の持続性を延長することを示す図である。（Ａ）非照射Ｃ５７ＢＬ／６ＢｒｄＣｒＨｓｄ－Ｔｙｒｃマウス（ｎ＝２～３匹／群）に、同じ用量のＣＡＲ形質導入Ｔ細胞を与え、図１Ａ～１Ｂの説明に記載されているように処置した。 （Ｂ）ＡＣＴ、および示されているようにアルブミン－サイトカインをコードするｍＲＮＡと組み合わせた抗原ＲＮＡ（ＬＩＰ）による処置後の様々な時点での側臥位のマウスの生物発光イメージングを示す図である。オフカラー画像は、グレースケール参照画像に重ね合わせた光の強度（黒色、最も弱い；白色から暗灰色、最も強い）を表す。 （Ｃ）１日目のベースラインと比較したＡＣＴの４日後および１１日後の全光束の増殖指数（平均±ｓ．ｄ．）を示す図である。ＡＣＴ：養子Ｔ細胞移入、ＢＬＩ：生物発光イメージング、Ｌｕｃ：有効ホタルルシフェラーゼ、ｍＡｌｂ：マウス血清アルブミン、ｍＩＬ－２：マウスインターロイキン２、ｍＩＬ－７：マウスインターロイキン７。 図３Ａ～図３Ｄは、ｍＩＬ－７－ｍＡｌｂまたはｍＩＬ－２１－ｍＡｌｂのいずれかと組み合わせたｍＡｌｂ－ｍＩＬ－２の存在は、インサイチュ反復抗原特異的増殖の蓄積および遺伝子操作されたＣＡＲ Ｔ細胞のインビボでの持続性の延長をもたらしたことを示す図である。（Ａ）２．５Ｇｙ照射したＣ５７ＢＬ／６ＢｒｄＣｒＨｓｄ－Ｔｙｒｃマウス（ｎ＝２～３匹／群）に、図１Ａについて説明しているように、同じ用量のＣＡＲ形質導入Ｔ細胞、および異なるヌクレオシド修飾製剤化サイトカインと組み合わせたｈＣＬＤＮ６またはＯｖａＩ（対照ＲＮＡ）をコードするｍＲＮＡリポプレックスワクチン接種（使用した個々のｍＲＮＡにつき１μｇ／動物）を与えた。 （Ｂ）処置したマウスの生物発光の相対的増加を３回のワクチン接種ラウンド中に定量化し、計算した（イメージングは通常、示された抗原－ＲＮＡ（ＬＩＰ）およびサイトカインＲＮＡ処置ラウンドの２～３日後に実施した）。増殖指数を以下のように計算した：それぞれの増殖ラウンドの全光束［ｐ／ｓ］／ＡＣＴ後１日目のベースラインの全光束［ｐ／ｓ］（平均±ｓ．ｅ．ｍ．）。 （Ｃ－Ｄ）示されているヌクレオシド修飾製剤化サイトカインＲＮＡの存在下でのＣＬＤＮ６－ＲＮＡ（ＬＩＰ）による増殖ラウンド中および増殖ラウンド後の生物発光の定量化（平均±ｓ．ｅ．ｍ．）を示す図である。矢印は、ｈＣＬＤＮ６ ＲＮＡ（ＬＩＰ）ワクチン接種およびヌクレオシド修飾製剤化サイトカイン（リボサイトカイン）処置を示す。ＡＣＴ：養子Ｔ細胞移入、ＴＢＩ：全身照射、ＢＬＩ：生物発光イメージング、Ｌｕｃ：有効なホタルルシフェラーゼ、ｍＡｌｂ：マウス血清アルブミン、ｍＩＬ－２：マウスインターロイキン２、ｍＩＬ－７：マウスインターロイキン７。
本開示を以下で詳細に説明するが、この開示は本明細書に記載される特定の方法論、プロトコルおよび試薬に限定されず、これらは異なり得ることが理解されるべきである。また、本明細書で使用される用語は、特定の実施形態を説明することのみを目的とし、本開示の範囲を限定することを意図するものではなく、本開示の範囲は付属の特許請求の範囲によってのみ限定されることも理解されるべきである。特に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。
好ましくは、本明細書で使用される用語は、''Ａ ｍｕｌｔｉｌｉｎｇｕａｌ ｇｌｏｓｓａｒｙ ｏｆ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｔｅｒｍｓ：（ＩＵＰＡＣ Ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎｓ）''，Ｈ．Ｇ．Ｗ．Ｌｅｕｅｎｂｅｒｇｅｒ，Ｂ．Ｎａｇｅｌ，ａｎｄ Ｈ．Ｋｏｌｂｌ，Ｅｄｓ．，Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ，ＣＨ－４０１０ Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ，（１９９５）に記載されているように定義される。
本開示の実施は、特に指示されない限り、当技術分野の文献（例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ １９８９参照）で説明されている化学、生化学、細胞生物学、免疫学、および組換えＤＮＡ技術の従来の方法を用いる。
以下において、本開示の要素を説明する。これらの要素を具体的な実施形態と共に列挙するが、それらは、さらなる実施形態を創出するために任意の方法および任意の数で組み合わせてもよいことが理解されるべきである。様々に説明される例および実施形態は、本開示を明示的に記載される実施形態のみに限定すると解釈されるべきではない。この説明は、明示的に記載される実施形態を任意の数の開示される要素と組み合わせた実施形態を開示し、包含すると理解されるべきである。さらに、説明される全ての要素の任意の並び替えおよび組合せは、文脈上特に指示されない限り、この説明によって開示されていると見なされるべきである。
「約」という用語はおよそまたはほぼを意味し、一実施形態では本明細書に記載の数値または範囲の文脈において、列挙または特許請求される数値または範囲の±２０％、±１０％、±５％、または±３％を意味する。
本開示を説明する文脈において（特に特許請求の範囲の文脈において）使用される「１つの」（"a" and "an"）および「その」（"the"）という用語ならびに同様の言及は、本明細書で特に指示されない限り、または文脈上明らかに矛盾しない限り、単数および複数の両方を包含すると解釈されるべきである。本明細書における値の範囲の列挙は、単に、その範囲内に属するそれぞれ別々の値を個別に言及することの簡略方法として機能することが意図されている。本明細書で特に指示されない限り、各個別の値は、本明細書で個別に列挙されているかのごとくに本明細書に組み込まれる。本明細書に記載される全ての方法は、本明細書で特に指示されない限り、または文脈上明らかに矛盾しない限り、任意の適切な順序で実施することができる。本明細書で提供されるありとあらゆる例または例示的言語（例えば「など」）の使用は、単に本開示をより良く説明することを意図しており、特許請求の範囲に限定を課すものではない。本明細書中のいかなる言語も、本開示の実施に必須の特許請求されていない要素を指示すると解釈されるべきではない。
特に明記されない限り、「含む」という用語は、「含む」によって導入されたリストのメンバーに加えて、さらなるメンバーが任意に存在し得ることを示すために本文書の文脈で使用される。しかし、「含む」という用語は、さらなるメンバーが存在しない可能性を包含することが本開示の具体的な実施形態として企図され、すなわち、この実施形態の目的のためには、「含む」は「からなる」の意味を有すると理解されるべきである。
本明細書の本文全体を通していくつかの資料を引用する。本明細書で引用される各資料（全ての特許、特許出願、科学刊行物、製造者の仕様書、説明書などを含む）は、上記または下記のいずれでも、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。本明細書のいかなる内容も、本開示がそのような開示に先行する権利を有さなかったことの承認と解釈されるべきではない。
以下において、本開示の全ての態様に適用される定義を提供する。以下の用語は、特に指示されない限り、以下の意味を有する。未定義の用語は、それらの技術分野で広く認められている意味を有する。
本開示によれば、「ペプチド」という用語は、オリゴペプチドおよびポリペプチドを含み、約２個以上、約３個以上、約４個以上、約６個以上、約８個以上、約１０個以上、約１３個以上、約１６個以上、約２０個以上、および最大約５０個、約１００個または約１５０個までの、ペプチド結合によって互いに連結された連続するアミノ酸を含む物質を指す。「タンパク質」または「ポリペプチド」という用語は、大きなペプチド、特に少なくとも約１５１個のアミノ酸を有するペプチドを指すが、「ペプチド」、「タンパク質」および「ポリペプチド」という用語は、本明細書では通常同義語として使用される。
「治療用タンパク質」は、治療有効量で対象に提供された場合、対象の状態または病状に対してプラスのまたは有利な効果を及ぼす。一実施形態では、治療用タンパク質は治癒的または緩和的特性を有し、疾患または障害の１つ以上の症状を改善する、緩和する、和らげる、逆転させる、発症を遅延させる、または重症度を軽減するために投与され得る。治療用タンパク質は予防特性を有し、疾患の発症を遅延させるため、またはそのような疾患もしくは病的状態の重症度を軽減するために使用され得る。「治療用タンパク質」という用語は、タンパク質またはペプチド全体を含み、治療的に活性なその断片を指すこともできる。それはまた、タンパク質の治療的に活性な変異体を含み得る。治療的に活性なタンパク質の例には、サイトカインが含まれるが、これに限定されない。
アミノ酸配列（ペプチドまたはタンパク質）に関する「断片」は、アミノ酸配列の一部、すなわちＮ末端および／またはＣ末端で短縮されたアミノ酸配列を表す配列に関する。Ｃ末端で短縮された断片（Ｎ末端断片）は、例えばオープンリーディングフレームの３'末端を欠くトランケートされたオープンリーディングフレームの翻訳によって得られる。Ｎ末端で短縮された断片（Ｃ末端断片）は、トランケートされたオープンリーディングフレームが翻訳を開始させるように働く開始コドンを含む限り、例えばオープンリーディングフレームの５'末端を欠くトランケートされたオープンリーディングフレームの翻訳によって得られる。アミノ酸配列の断片は、例えばアミノ酸配列からのアミノ酸残基の少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％を含む。アミノ酸配列の断片は、好ましくはアミノ酸配列からの少なくとも６個、特に少なくとも８個、少なくとも１２個、少なくとも１５個、少なくとも２０個、少なくとも３０個、少なくとも５０個、または少なくとも１００個の連続するアミノ酸を含む。
本開示の目的のために、アミノ酸配列（ペプチドまたはタンパク質）の「変異体」は、アミノ酸挿入変異体、アミノ酸付加変異体、アミノ酸欠失変異体および／またはアミノ酸置換変異体を含む。「変異体」という用語は、特にアミノ酸配列の断片を含む。
アミノ酸挿入変異体は、特定のアミノ酸配列中に１個または２個以上のアミノ酸の挿入を含む。挿入を有するアミノ酸配列変異体の場合、１個以上のアミノ酸残基がアミノ酸配列の特定の部位に挿入されるが、結果として生じる産物の適切なスクリーニングを伴うランダム挿入も可能である。アミノ酸付加変異体は、１個以上のアミノ酸、例えば１個、２個、３個、５個、１０個、２０個、３０個、５０個、またはそれ以上のアミノ酸のアミノ末端および／またはカルボキシ末端融合を含む。アミノ酸欠失変異体は、配列からの１個以上のアミノ酸の除去、例えば１個、２個、３個、５個、１０個、２０個、３０個、５０個、またはそれ以上のアミノ酸の除去を特徴とする。欠失はタンパク質の任意の位置にあってよい。タンパク質のＮ末端および／またはＣ末端に欠失を含むアミノ酸欠失変異体は、Ｎ末端および／またはＣ末端切断変異体とも呼ばれる。アミノ酸置換変異体は、配列内の少なくとも１個の残基が除去され、別の残基がその位置に挿入されていることを特徴とする。相同なタンパク質もしくはペプチド間で保存されていないアミノ酸配列の位置にある修飾、および／またはアミノ酸を類似の性質を有する他のアミノ酸で置き換えることが好ましい。好ましくは、ペプチドおよびタンパク質変異体におけるアミノ酸変化は、保存的アミノ酸変化、すなわち同様に荷電したアミノ酸または非荷電アミノ酸の置換である。保存的アミノ酸変化には、その側鎖が関連するアミノ酸のファミリーの１つの置換が含まれる。天然に存在するアミノ酸は、一般に、酸性（アスパラギン酸、グルタミン酸）、塩基性（リシン、アルギニン、ヒスチジン）、非極性（アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、および非荷電極性（グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、トレオニン、チロシン）アミノ酸の４つのファミリーに分けられる。フェニルアラニン、トリプトファン、およびチロシンは、時に芳香族アミノ酸として一緒に分類されることがある。
好ましくは、所与のアミノ酸配列と前記所与のアミノ酸配列の変異体であるアミノ酸配列との間の類似性、好ましくは同一性の程度は、少なくとも約６０％、６５％、７０％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％である。類似性または同一性の程度は、好ましくは、参照アミノ酸配列の全長の少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または約１００％であるアミノ酸領域について与えられる。例えば、参照アミノ酸配列が２００個のアミノ酸からなる場合、類似性または同一性の程度は、好ましくは少なくとも約２０個、少なくとも約４０個、少なくとも約６０個、少なくとも約８０個、少なくとも約１００個、少なくとも約１２０個、少なくとも約１４０個、少なくとも約１６０個、少なくとも約１８０個、または約２００個のアミノ酸、好ましくは連続するアミノ酸について与えられる。好ましい実施形態では、類似性または同一性の程度は、参照アミノ酸配列の全長について与えられる。配列類似性、好ましくは配列同一性を決定するためのアラインメントは、当技術分野で公知のツールを用いて、好ましくは最適な配列アラインメントを使用して、例えばＡｌｉｇｎを使用して、標準設定、好ましくはＥＭＢＯＳＳ：：ニードル、マトリックス：Ｂｌｏｓｕｍ６２、ギャップオープン１０．０、ギャップ伸長０．５を使用して行うことができる。
「配列類似性」は、同一であるかまたは保存的アミノ酸置換を表すアミノ酸の割合を示す。２つのアミノ酸配列間の「配列同一性」は、これらの配列間で同一であるアミノ酸の割合を示す。
「同一性パーセント」という用語は、最適なアラインメント後に得られる、比較する２つの配列間で同一であるアミノ酸残基の割合を示すことが意図されており、この割合は純粋に統計的であり、２つの配列間の相違はそれらの全長にわたってランダムに分布している。２つのアミノ酸配列間の配列比較は、従来、これらの配列を最適に整列させた後に比較することによって行われ、前記比較は、配列類似性の局所領域を同定し、比較するためにセグメントごとにまたは「比較ウィンドウ」ごとに行われる。比較のための配列の最適なアラインメントは、手作業に加えて、Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｗａｔｅｒｍａｎ，１９８１，Ａｄｓ Ａｐｐ．Ｍａｔｈ．２，４８２の局所相同性アルゴリズムによって、Ｎｅｄｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ，１９７０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８，４４３の局所相同性アルゴリズムによって、Ｐｅａｒｓｏｎ ａｎｄ Ｌｉｐｍａｎ，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５，２４４４の類似性検索法によって、またはこれらのアルゴリズムを使用するコンピュータプログラム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒｉｖｅ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．のＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴ Ｐ、ＢＬＡＳＴ ＮおよびＴＦＡＳＴＡ）によって作成され得る。
同一性パーセントは、比較する２つの配列間で同一の位置の数を決定し、この数を比較する位置の数で除し、得られた結果に１００を乗じて、これら２つの配列間の同一性パーセントを得ることによって計算される。
相同なアミノ酸配列は、本開示によれば、アミノ酸残基の少なくとも４０％、特に少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８、または少なくとも９９％の同一性を示す。
本明細書に記載のアミノ酸配列変異体は、当業者によって、例えば組換えＤＮＡ操作によって容易に調製され得る。置換、付加、挿入または欠失を有するペプチドまたはタンパク質を調製するためのＤＮＡ配列の操作は、例えばＳａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．（１９８９）に詳細に記載されている。さらに、本明細書に記載のペプチドおよびアミノ酸変異体は、例えば、固相合成および類似の方法などによる公知のペプチド合成技術を用いて容易に調製され得る。
一実施形態では、アミノ酸配列（ペプチドまたはタンパク質）の断片または変異体は、好ましくは「機能的断片」または「機能的変異体」である。アミノ酸配列の「機能的断片」または「機能的変異体」という用語は、それが由来するアミノ酸配列のものと同一または類似の１つ以上の機能特性を示す任意の断片または変異体に関し、すなわち、それは機能的に等価である。サイトカインに関して、１つの特定の機能は、断片もしくは変異体が由来するアミノ酸配列によって、および／または断片もしくは変異体が由来するアミノ酸配列が結合する受容体（１つまたは複数）への結合によって示される１つ以上の免疫調節活性である。
指定されたアミノ酸配列（ペプチドまたはタンパク質）に「由来する」アミノ酸配列（ペプチドまたはタンパク質）は、最初のアミノ酸配列の起源を指す。好ましくは、特定のアミノ酸配列に由来するアミノ酸配列は、その特定の配列またはその断片と同一、本質的に同一または相同であるアミノ酸配列を有する。特定のアミノ酸配列に由来するアミノ酸配列は、その特定の配列の変異体またはその断片であり得る。例えば、本明細書での使用に適した抗原およびサイトカイン（例えば、ＩＬ２、ＩＬ７またはＩＬ２１）は、天然配列の望ましい活性を保持しながら、それらが由来する天然に存在するまたは天然の配列とは配列が異なるように改変され得ることが当業者に理解されるであろう。
Ｔ細胞
Ｔ細胞は、リンパ球として公知の白血球のグループに属し、細胞性免疫において中心的な役割を果たす。これらは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）と呼ばれるこれらの細胞表面上の特別な受容体の存在によって、Ｂ細胞およびナチュラルキラー細胞などの他の種類のリンパ球と区別することができる。胸腺は、Ｔ細胞の成熟に関与する主要な器官である。それぞれ別個の機能を有する、Ｔ細胞のいくつかの異なるサブセットが発見されている。
Ｔ細胞の大部分は、いくつかのタンパク質の複合体として存在するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を有する。実際のＴ細胞受容体は、独立したＴ細胞受容体アルファおよびベータ（ＴＣＲαおよびＴＣＲβ）遺伝子から産生され、α－ＴＣＲ鎖およびβ－ＴＣＲ鎖と呼ばれる２つの別個のペプチド鎖から構成される。γδ Ｔ細胞（ガンマデルタＴ細胞）は、その表面に異なるＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を有するＴ細胞の小さなサブセットである。しかし、γδ Ｔ細胞では、ＴＣＲは一本のγ鎖と一本のδ鎖で構成される。このグループのＴ細胞は、αβ Ｔ細胞よりもはるかにまれである（全Ｔ細胞の２％）。
全てのＴ細胞は、骨髄の造血幹細胞に由来する。造血幹細胞に由来する造血前駆細胞は胸腺に存在し、細胞分裂によって拡大して未成熟な胸腺細胞の大きな集団を生じる。最初期の胸腺細胞はＣＤ４もＣＤ８も発現しないため、二重陰性（ＣＤ４－ＣＤ８－）細胞として分類される。発達が進むにつれて、それらは二重陽性胸腺細胞（ＣＤ４＋ＣＤ８＋）になり、最終的に単一陽性（ＣＤ４＋ＣＤ８－またはＣＤ４－ＣＤ８＋）胸腺細胞に成熟して、胸腺から末梢組織に放出される。
「Ｔ細胞」および「Ｔリンパ球」という用語は、本明細書では交換可能に使用され、Ｔヘルパー細胞（ＣＤ４＋Ｔ細胞）および細胞溶解性Ｔ細胞を含む細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ、ＣＤ８＋Ｔ細胞）を含む。「抗原特異的Ｔ細胞」という用語または同様の用語は、特に抗原提示細胞または癌細胞などの疾患細胞の表面に提示された場合、Ｔ細胞が標的とする抗原を認識し、好ましくはＴ細胞のエフェクタ機能を発揮するＴ細胞に関する。Ｔ細胞が抗原を発現する標的細胞を死滅させる場合、Ｔ細胞は抗原に特異的であると見なされる。Ｔ細胞の特異性は、様々な標準的技術のいずれかを使用して、例えばクロム放出アッセイまたは増殖アッセイにおいて評価し得る。あるいは、リンホカイン（インターフェロンγなど）の合成を測定することができる。
Ｔヘルパー細胞は、数ある機能の中でも特に、Ｂ細胞の形質細胞への成熟ならびに細胞傷害性Ｔ細胞およびマクロファージの活性化を含む免疫学的プロセスにおいて他の白血球を補助する。これらの細胞は、その表面にＣＤ４タンパク質を発現するため、ＣＤ４＋Ｔ細胞としても公知である。ヘルパーＴ細胞は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）の表面に発現されるＭＨＣクラスＩＩ分子によってペプチド抗原と共に提示された場合に活性化される。ひとたび活性化されると、これらは速やかに分裂し、能動免疫応答を調節または補助する、サイトカインと呼ばれる小さなタンパク質を分泌する。
細胞傷害性Ｔ細胞は、ウイルス感染細胞および腫瘍細胞を破壊し、移植片拒絶反応にも関与する。これらの細胞は、その表面にＣＤ８糖タンパク質を発現するため、ＣＤ８＋Ｔ細胞としても公知である。これらの細胞は、身体のほぼあらゆる細胞の表面に存在する、ＭＨＣクラスＩに関連する抗原に結合することによってその標的を認識する。
Ｔ細胞媒介エフェクタ機能は、ヘルパーＴ細胞（ＣＤ４＋Ｔ細胞）の場合、サイトカインの放出ならびに／またはＣＤ８＋リンパ球（ＣＴＬ）および／もしくはＢ細胞の活性化を含み、ＣＴＬの場合、例えばアポトーシスまたはパーフォリン媒介細胞溶解を介した、細胞、すなわち抗原の発現を特徴とする細胞の除去、ＩＦＮ－γおよびＴＮＦ－αなどのサイトカインの産生、ならびに抗原を発現する標的細胞の特異的細胞溶解死滅を含む。
本発明によれば、「Ｔ細胞」という用語はまた、適切な刺激でＴ細胞に成熟することができる細胞を含む。
Ｔ細胞は一般に、標準的な手順を用いて、インビトロまたはエクスビボで調製し得る。例えば、Ｔ細胞は、市販の細胞分離システムを使用して、患者などの哺乳動物の骨髄、末梢血または骨髄もしくは末梢血の画分から単離し得る。あるいは、Ｔ細胞は、関係のあるもしくは無関係なヒト、非ヒト動物、細胞株または培養物に由来し得る。Ｔ細胞を含む試料は、例えば、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）であり得る。
本発明に従って使用されるＴ細胞は、内因性Ｔ細胞受容体を発現してもよく、または内因性Ｔ細胞受容体の発現を欠いてもよい。
ＣＡＲ
ＣＡＲをコードするＲＮＡなどの核酸を、Ｔ細胞または溶解能を有する他の細胞、特にリンパ系細胞に導入し得る。
本開示によれば、ＣＡＲは、Ｔ細胞上に存在する場合、上記のようにＴ細胞が刺激、プライミングおよび／もしくは拡大されるか、またはエフェクタ機能を発揮するように、抗原提示細胞または癌細胞などの疾患細胞の表面などの抗原を認識する。
本発明によれば、「キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）」という用語は、「キメラＴ細胞受容体」および「人工Ｔ細胞受容体」という用語と同義である。
好ましくは、前記ＣＡＲは細胞の表面に発現される。
本発明によれば、「ＣＡＲ」（または「キメラ抗原受容体」）という用語は、癌細胞などの標的細胞上の標的構造（例えば抗原）を認識し、すなわち結合し（例えば標的細胞の表面に発現される抗原への抗原結合ドメインの結合によって）、細胞表面に前記ＣＡＲを発現するＴ細胞などの免疫エフェクタ細胞に特異性を付与し得る、単一分子または分子の複合体を含む人工受容体に関する。そのような細胞は、標的細胞の認識のために抗原のプロセシングおよび提示を必ずしも必要とせず、むしろ、好ましくは標的細胞上に存在する任意の抗原を特異的に認識し得る。好ましくは、ＣＡＲによる標的構造の認識は、前記ＣＡＲを発現する免疫エフェクタ細胞の活性化をもたらす。ＣＡＲは、本明細書に記載の１つ以上のドメインを含む１つ以上のタンパク質ユニットを含み得る。「ＣＡＲ」という用語は、Ｔ細胞受容体を含まない。
本発明によれば、ＣＡＲは一般に、いくつかのドメインを含み得る。本発明の全ての態様の一実施形態では、ＣＡＲは、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＴ細胞シグナル伝達ドメインを含む。
結合ドメインは、抗原を認識して結合する。一実施形態では、モノクローナル抗体に由来する一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）が結合ドメインとして使用される。同様に使用され得る抗原認識ドメインには、とりわけ、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）アルファおよびベータ一本鎖が含まれる。実際に、所与の標的に高い親和性で結合するほとんどあらゆるものが抗原認識ドメインとして使用できる。本発明の全ての態様の一実施形態では、ＣＡＲは抗原結合ドメインを含む。一実施形態では、抗原結合ドメインはＣＡＲのエキソドメインで構成される。一実施形態では、抗原結合ドメインは、抗原に対する抗体の一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む。一実施形態では、抗原結合ドメインは、抗原（ＶＨ（抗原））に対する特異性を有する免疫グロブリンの重鎖の可変領域（ＶＨ）と、抗原（ＶＬ（抗原））に対する特異性を有する免疫グロブリンの軽鎖の可変領域（ＶＬ）とを含む。一実施形態では、前記重鎖可変領域（ＶＨ）および対応する軽鎖可変領域（ＶＬ）は、ペプチドリンカー、好ましくはアミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）３を含むペプチドリンカーによって接続されている。
本発明の全ての態様の一実施形態では、ＣＡＲは膜貫通ドメインを含む。一実施形態では、膜貫通ドメインは、膜にまたがる疎水性αヘリックスである。一実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８膜貫通ドメインまたはその断片を含む。
活性化シグナル伝達ドメイン（またはＴ細胞シグナル伝達ドメイン）は、ＣＡＲが抗原に結合すると、細胞傷害性リンパ球を活性化する働きをする。活性化シグナル伝達ドメインの同一性は、ＣＡＲによる抗原の結合時に選択された細胞傷害性リンパ球の活性化を誘導する能力を有するという点のみに限定される。適切な活性化シグナル伝達ドメインには、Ｔ細胞ＣＤ３ζ鎖およびＦｃ受容体γが含まれる。当業者は、これらの記載された活性化シグナル伝達ドメインの配列変異体が、本発明に悪影響を及ぼすことなく使用でき、変異体がモデルとするドメインと同じまたは類似の活性を有することを理解する。そのような変異体は、それらが由来するドメインのアミノ酸配列と少なくとも約８０％の配列同一性を有する。
一実施形態では、Ｔ細胞シグナル伝達ドメインは細胞内に位置する。一実施形態では、Ｔ細胞シグナル伝達ドメインは、任意でＣＤ２８と組み合わせて、ＣＤ３ζ、好ましくはＣＤ３ζのエンドドメインを含む。
存在し得るさらなるドメインは、共刺激ドメインである。共刺激ドメインは、ＣＡＲが標的部分に結合すると、細胞傷害性リンパ球の増殖および生存を増強する働きをする。共刺激ドメインの同一性は、ＣＡＲによる標的部分の結合時に細胞増殖および生存を増強する能力を有するという点のみに限定される。適切な共刺激ドメインには、ＣＤ２８、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体ファミリーのメンバーであるＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＴＮＦＲスーパーファミリーの受容体のメンバーであるＣＤ１３４（ＯＸ４０）、および活性化Ｔ細胞上に発現されるＣＤ２８スーパーファミリーの共刺激分子であるＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）が含まれる。当業者は、これらの記載された共刺激ドメインの配列変異体が、本発明に悪影響を及ぼすことなく使用でき、変異体がモデルとするドメインと同じまたは類似の活性を有することを理解する。そのような変異体は、それらが由来するドメインのアミノ酸配列と少なくとも約８０％の配列同一性を有する。本発明のいくつかの実施形態では、ＣＡＲ構築物は２つの共刺激ドメインを含む。特定の組合せには、４つの記載されたドメインの全ての可能な変形が含まれるが、具体的な例にはＣＤ２８＋ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）およびＣＤ２８＋ＣＤ１３４（ＯＸ４０）が含まれる。
本発明のＣＡＲは、融合タンパク質の形態で一緒に上記ドメインを含み得る。そのような融合タンパク質は一般に、Ｎ末端からＣ末端の方向に連結された、結合ドメイン、１つ以上の共刺激ドメイン、および活性化シグナル伝達ドメインを含む。しかし、本発明のＣＡＲはこの配置に限定されず、他の配置も許容され、結合ドメイン、活性化シグナル伝達ドメイン、および１つ以上の共刺激ドメインを含む。結合ドメインは抗原に自由に結合できなければならないため、融合タンパク質における結合ドメインの配置は一般に、細胞の外側で領域の表示が達成される配置であることが理解されるであろう。同様に、共刺激ドメインおよび活性化シグナル伝達ドメインは細胞傷害性リンパ球の活性および増殖を誘導する働きをするため、融合タンパク質は一般に、細胞の内部でこれら２つのドメインを提示する。ＣＡＲには、さらなる要素、例えば融合タンパク質の細胞表面への適切な輸送を確実にするシグナルペプチド、融合タンパク質が内在性膜タンパク質として維持されるのを確実にする膜貫通ドメイン、および結合ドメインに柔軟性を与え、抗原への強力な結合を可能にするヒンジドメイン（またはスペーサ領域）などが含まれ得る。
本発明の全ての態様の一実施形態では、ＣＡＲは、新生タンパク質を小胞体に向かわせるシグナルペプチドを含む。一実施形態では、シグナルペプチドは抗原結合ドメインに先行する。
本発明の全ての態様の一実施形態では、ＣＡＲは、抗原結合ドメインを膜貫通ドメインに連結するスペーサ領域を含む。一実施形態では、スペーサ領域は、抗原認識を容易にするために抗原結合ドメインが異なる方向に配向することを可能にする。一実施形態では、スペーサ領域は、ＩｇＧ１由来のヒンジ領域を含む。
本発明の全ての態様の一実施形態では、ＣＡＲは、構造：
ＮＨ２－シグナルペプチド－抗原結合ドメイン－スペーサ領域－膜貫通ドメイン－Ｔ細胞シグナル伝達ドメイン－ＣＯＯＨ
を含む。
本発明の全ての態様の一実施形態では、ＣＡＲは、特に疾患細胞または抗原提示細胞などの細胞の表面に存在する場合、好ましくはそれが標的とする抗原に特異的である。
本発明の全ての態様の一実施形態では、ＣＡＲは、Ｔ細胞、好ましくは細胞傷害性Ｔ細胞によって発現され得、および／またはＴ細胞、好ましくは細胞傷害性Ｔ細胞の表面に存在し得る。一実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＡＲが標的とする抗原と反応性である。
本発明のＣＡＲシステムに関連して使用される細胞は、好ましくはＴ細胞、特に細胞傷害性リンパ球であり、好ましくはＴ細胞、特に細胞傷害性Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、およびリンホカイン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞から選択される。活性化されると、これらの細胞傷害性リンパ球はそれぞれ標的細胞の破壊を引き起こす。例えば、細胞傷害性Ｔ細胞は、以下の手段のいずれかまたは両方によって標的細胞の破壊を引き起こす。まず、活性化されると、Ｔ細胞は、パーフォリン、グランザイム、およびグラニュライシンなどの細胞毒を放出する。パーフォリンおよびグラニュライシンは標的細胞に細孔を作り、グランザイムは細胞に進入し、細胞のアポトーシス（プログラム細胞死）を誘導する細胞質のカスパーゼカスケードを引き起こす。第２に、アポトーシスは、Ｔ細胞と標的細胞との間のＦａｓ－Ｆａｓリガンド相互作用を介して誘導され得る。細胞傷害性リンパ球は、好ましくは自家細胞であるが、異種細胞または同種異系細胞を使用することができる。
キメラ抗原受容体を発現するＴ細胞を用いた養子細胞移入療法は、ＣＡＲ改変Ｔ細胞を、実質的に任意の腫瘍抗原を標的とするように操作することができるので、有望な抗癌治療法である。例えば、患者のＴ細胞を、患者の腫瘍細胞上の抗原に特異的に向けられるＣＡＲを発現するように遺伝子操作（遺伝子改変）し、その後患者に注入して戻し得る。
本発明によれば、ＣＡＲは、Ｔ細胞受容体の機能を置き換えることができ、特に、Ｔ細胞などの細胞に細胞溶解活性などの反応性を付与し得る。しかしながら、Ｔ細胞受容体の抗原ペプチド－ＭＨＣ複合体への結合とは対照的に、ＣＡＲは、特に細胞表面に発現された場合、抗原に結合し得る。
非ウイルスベースのＤＮＡトランスフェクション、トランスポゾンベースのシステムおよびウイルスベースのシステムを含む様々な方法を使用して、ＣＡＲ構築物をＴ細胞に導入し得る。非ウイルスベースのＤＮＡトランスフェクションは、挿入突然変異誘発のリスクが低い。トランスポゾンベースのシステムは、組み込み要素を含まないプラスミドよりも効率的に導入遺伝子を組み込むことができる。ウイルスベースのシステムには、γ－レトロウイルスおよびレンチウイルスベクターの使用が含まれる。γ－レトロウイルスは、Ｔ細胞を比較的容易に産生し、効率的かつ永続的に形質導入し、初代ヒトＴ細胞における組み込みの観点から安全であることが予め証明されている。レンチウイルスベクターも、Ｔ細胞を効率的かつ永続的に形質導入するが、製造コストがより高い。これらはまた、潜在的にレトロウイルスベースのシステムよりも安全である。
本発明の全ての態様の一実施形態では、方法は、ＣＡＲを発現するように遺伝子改変されたＴ細胞を提供するために、ＣＡＲをコードする核酸で、エクスビボまたはインビボのいずれかでＴ細胞またはＴ細胞前駆体をトランスフェクトすることをさらに含む。
ＣＡＲ Ｔ細胞は、Ｔ細胞を標的とするナノ粒子を使用して、インビボで、したがってほぼ瞬時に産生され得る。例えば、ポリ（β－アミノエステル）ベースのナノ粒子を、Ｔ細胞上のＣＤ３に結合するために抗ＣＤ３ｅ ｆ（ａｂ）断片に結合し得る。この目的のために、抗ＣＤ３ｅ ｆ（ａｂ）断片をポリグルタミン酸（ＰＧＡ）に共有結合させ得る。ＰＧＡは、核酸および過剰のポリ（β－アミノエステル）（ＰＢＡＥ）ポリマーを含む粒子コアを取り囲み、電荷相互作用によってそれに付着する。Ｔ細胞に結合すると、これらのナノ粒子はエンドサイトーシスされる。それらの内容物、例えば抗腫瘍抗原ＣＡＲをコードするプラスミドＤＮＡは、ＰＢＡＥポリマーに共有結合した微小管関連配列（ＭＴＡＳ）および核局在化シグナル（ＮＬＳ）を含むペプチドを含むため、Ｔ細胞核に向けられ得る。ＣＡＲ遺伝子発現カセットに隣接するトランスポゾンおよび高活性トランスポザーゼをコードする別個のプラスミドを含めることにより、ＣＡＲベクターの染色体への効率的な組み込みが可能になり得る。ナノ粒子注入後のＣＡＲ Ｔ細胞のインビボ産生を可能にするそのようなシステムは、Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｎａｔ．Ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌ．１２：８１３－８２０に記載されている。
別の可能性は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９法を使用して、ＣＡＲコード配列を特定の遺伝子座に意図的に配置することである。例えば、既存のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）をノックアウトし、一方でＣＡＲをノックインし、それを、さもなければＴＣＲの発現を抑える内因性プロモータの動的調節制御下に置くことができる；例えば、Ｅｙｑｕｅｍ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｎａｔｕｒｅ ５４３：１１３－１１７参照。
本発明の全ての態様の一実施形態では、ＣＡＲを発現するように遺伝子改変されたＴ細胞は、ＣＡＲをコードする核酸で安定にまたは一過性にトランスフェクトされる。したがって、ＣＡＲをコードする核酸は、Ｔ細胞のゲノムに組み込まれるか、または組み込まれない。
本発明の全ての態様の一実施形態では、Ｔ細胞またはＴ細胞前駆体は、治療される対象に由来する。本発明の全ての態様の一実施形態では、Ｔ細胞またはＴ細胞前駆体は、治療される対象とは異なる対象に由来する。
本発明の全ての態様の一実施形態では、Ｔ細胞は、治療される対象に対して自家、同種異系または同系であり得る。Ｔ細胞は、抗原を標的とするキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するようにインビトロで遺伝子改変され得る。
本発明の全ての態様の一実施形態では、ＣＡＲを発現するように遺伝子改変されたＴ細胞は、内因性Ｔ細胞受容体および／または内因性ＨＬＡの発現のために不活性化される。
「自家」という用語は、同じ対象に由来するものを表すために使用される。例えば、「自家移植」は、同じ対象に由来する組織または臓器の移植を指す。そのような手順は、さもなければ拒絶反応をもたらす免疫学的障壁を克服するので有利である。
「同種異系」という用語は、同じ種の異なる個体に由来するものを表すために使用される。１つ以上の遺伝子座の遺伝子が同一でない場合、２つ以上の個体は互いに同種異系であると言われる。
「同系」という用語は、同一の遺伝子型を有する個体または組織、すなわち同じ近交系の同一の双生児もしくは動物、またはそれらの組織に由来するものを表すために使用される。
「異種」という用語は、複数の異なる要素からなるものを表すために使用される。一例として、ある個体の骨髄を異なる個体に移入することは、異種移植を構成する。異種遺伝子は、対象以外の供給源に由来する遺伝子である。
ＲＮＡ
本明細書で使用される「ポリヌクレオチド」または「核酸」という用語は、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡ、組換え生産された分子および化学合成された分子などのＤＮＡおよびＲＮＡを含むことが意図されている。核酸は、一本鎖または二本鎖であり得る。ＲＮＡは、インビトロ転写されたＲＮＡ（ＩＶＴ ＲＮＡ）または合成ＲＮＡを含む。本発明によれば、ポリヌクレオチドは、好ましくは単離されている。
核酸は、ベクターに含まれ得る。本明細書で使用される「ベクター」という用語は、プラスミドベクター、コスミドベクター、λファージなどのファージベクター、アデノウイルスもしくはバキュロウイルスベクターなどのウイルスベクター、または細菌人工染色体（ＢＡＣ）、酵母人工染色体（ＹＡＣ）もしくはＰ１人工染色体（ＰＡＣ）などの人工染色体ベクターを含む、当業者に公知の任意のベクターを含む。前記ベクターには、発現ベクターおよびクローニングベクターが含まれる。発現ベクターは、プラスミドおよびウイルスベクターを含み、一般に、所望のコード配列および特定の宿主生物（例えば、細菌、酵母、植物、昆虫もしくは哺乳動物）またはインビトロ発現系における作動可能に連結されたコード配列の発現に必要な適切なＤＮＡ配列を含む。クローニングベクターは一般に、ある所望のＤＮＡ断片を操作および増幅するために使用され、所望のＤＮＡ断片の発現に必要な機能的配列を欠いていてもよい。
本発明の全ての態様の一実施形態では、サイトカインをコードする、または抗原もしくはその変異体をコードする核酸は、サイトカインまたは抗原もしくはその変異体を提供するために、治療される対象の細胞において発現される。本発明の全ての態様の一実施形態では、核酸は、哺乳動物の細胞において一過性に発現される。したがって、一実施形態では、核酸は細胞のゲノムに組み込まれない。本発明の全ての態様の一実施形態では、核酸はＲＮＡ、好ましくはインビトロ転写ＲＮＡである。本発明の全ての態様の一実施形態では、抗原またはその変異体の発現は細胞表面で起こる。
本発明の全ての態様の一実施形態では、抗原またはその変異体をコードする核酸は、ＣＡＲを発現するように遺伝子改変されたＴ細胞による結合のための抗原またはその変異体を提供するために、哺乳動物の細胞において発現され、前記結合は、ＣＡＲを発現するように遺伝子改変されたＴ細胞の刺激、プライミングおよび／または拡大をもたらす。
「発現」という用語は、本発明に従ってその最も一般的な意味で使用され、例えば転写および／または翻訳による、ＲＮＡおよび／またはペプチドもしくはタンパク質の産生を含む。発現は一過性または安定であり得る。本発明によれば、発現という用語は、「異所性発現」または「異常発現」も含む。
本発明によれば、「核酸がコードする」という用語は、核酸が、細胞内などの適切な環境に存在する場合、それがコードするタンパク質またはペプチドを産生するように発現され得ることを意味する。
本明細書に記載の核酸は、組換えおよび／または単離された分子であり得る。
本明細書で使用される「単離された分子」は、他の細胞物質などの他の分子を実質的に含まない分子を指すことが意図されている。
本発明の文脈における「組換え」という用語は、「遺伝子工学によって作製された」ことを意味する。好ましくは、本発明の文脈における組換え細胞などの「組換え物」は、天然には存在しない。
本明細書で使用される「天然に存在する」という用語は、物体が自然界で見出され得るという事実を指す。例えば、生物（ウイルスを含む）中に存在し、自然界の供給源から単離することができ、実験室で人間によって意図的に改変されていないペプチドまたは核酸は、天然に存在する。
「トランスフェクション」という用語は、細胞への核酸、特にＲＮＡの導入に関する。本発明の目的のために、「トランスフェクション」という用語はまた、細胞への核酸の導入またはそのような細胞による核酸の取り込みを含み、細胞は、対象、例えば患者に存在し得る。したがって、本発明によれば、本明細書に記載の核酸のトランスフェクションのための細胞は、インビトロまたはインビボで存在することができ、例えば細胞は、患者の器官、組織および／または生物の一部を形成することができる。本発明によれば、トランスフェクションは一過性または安定であり得る。トランスフェクションのいくつかの適用では、トランスフェクトされた遺伝物質が一過性に発現されるだけで十分である。トランスフェクションの過程で導入された核酸は通常、核ゲノムに組み込まれないため、外来核酸は有糸分裂によって希釈されるかまたは分解される。核酸のエピソーム増幅を可能にする細胞は、希釈率を大幅に低下させる。トランスフェクトされた核酸が実際に細胞およびその娘細胞のゲノムに残ることが望ましい場合は、安定なトランスフェクションが起こらなければならない。ＲＮＡを細胞にトランスフェクトして、そのコードされたタンパク質を一過性に発現させることができる。
本発明の全ての態様の一実施形態では、サイトカインをコードする、または抗原もしくはその変異体をコードする核酸は、粒子などの送達ビヒクルに製剤化される。一実施形態では、送達ビヒクルは、少なくとも１つの脂質を含む。一実施形態では、少なくとも１つの脂質は、少なくとも１つのカチオン性脂質を含む。一実施形態では、脂質は、核酸と複合体を形成し、および／または核酸を封入する。一実施形態では、脂質は、核酸を封入する小胞に含まれる。本発明の全ての態様の一実施形態では、核酸はリポソームに製剤化される。
本開示では、「ＲＮＡ」という用語は、リボヌクレオチド残基を含む核酸分子に関する。好ましい実施形態では、ＲＮＡは、リボヌクレオチド残基の全てまたは大部分を含む。本明細書で使用される場合、「リボヌクレオチド」は、β－Ｄ－リボフラノシル基の２'位にヒドロキシル基を有するヌクレオチドを指す。ＲＮＡは、限定されることなく、二本鎖ＲＮＡ、一本鎖ＲＮＡ、部分的に精製されたＲＮＡなどの単離されたＲＮＡ、本質的に純粋なＲＮＡ、合成ＲＮＡ、組換え生産されたＲＮＡ、ならびに１つ以上のヌクレオチドの付加、欠失、置換および／または改変によって天然に存在するＲＮＡとは異なる修飾ＲＮＡを包含する。そのような改変は、内部ＲＮＡヌクレオチドまたはＲＮＡの末端（一方もしくは両方）への非ヌクレオチド物質の付加を指し得る。本明細書ではまた、ＲＮＡ中のヌクレオチドは、化学的に合成されたヌクレオチドまたはデオキシヌクレオチドなどの非標準ヌクレオチドであり得ることが企図される。本開示では、これらの改変されたＲＮＡは、天然に存在するＲＮＡの類似体と見なされる。
本開示のある実施形態では、ＲＮＡは、ペプチドまたはタンパク質をコードするＲＮＡ転写物に関連するメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）である。当技術分野で確立されているように、ｍＲＮＡは一般に、５'非翻訳領域（５'－ＵＴＲ）、ペプチドコード領域および３'非翻訳領域（３'－ＵＴＲ）を含む。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、インビトロ転写または化学合成によって生成される。一実施形態では、ｍＲＮＡは、ＤＮＡ鋳型を使用するインビトロ転写によって生成され、ＤＮＡは、デオキシリボヌクレオチドを含む核酸を指す。
一実施形態では、ＲＮＡはインビトロ転写されたＲＮＡ（ＩＶＴ－ＲＮＡ）であり、適切なＤＮＡ鋳型のインビトロ転写によって得られ得る。転写を制御するためのプロモータは、任意のＲＮＡポリメラーゼのための任意のプロモータであり得る。インビトロ転写のためのＤＮＡ鋳型は、核酸、特にｃＤＮＡをクローニングし、それをインビトロ転写のための適切なベクターに導入することによって得られ得る。ｃＤＮＡは、ＲＮＡの逆転写によって得られ得る。
一実施形態では、ＲＮＡは、修飾されたリボヌクレオチドを有し得る。修飾リボヌクレオチドの例には、限定されることなく、５－メチルシチジン、プソイドウリジンおよび／または１－メチルプソイドウリジンが含まれる。
いくつかの実施形態では、本開示によるＲＮＡは５'キャップを含む。一実施形態では、本開示のＲＮＡは、キャップされていない５'－三リン酸を有さない。一実施形態では、ＲＮＡは５'キャップ類似体によって修飾され得る。「５'キャップ」という用語は、ｍＲＮＡ分子の５'末端に認められる構造を指し、一般に、５'－５'三リン酸結合によってｍＲＮＡに接続されたグアノシンヌクレオチドからなる。一実施形態では、このグアノシンは７位でメチル化されている。ＲＮＡに５'キャップまたは５'キャップ類似体を提供することは、５'キャップがＲＮＡ鎖に共転写的に発現されるインビトロ転写によって達成され得るか、またはキャッピング酵素を使用して転写後にＲＮＡに結合され得る。
いくつかの実施形態では、本開示によるＲＮＡは、５'－ＵＴＲおよび／または３'－ＵＴＲを含む。「非翻訳領域」または「ＵＴＲ」という用語は、転写されるがアミノ酸配列に翻訳されないＤＮＡ分子内の領域、またはｍＲＮＡ分子などのＲＮＡ分子内の対応する領域に関する。非翻訳領域（ＵＴＲ）は、オープンリーディングフレームの５'側（上流）（５'－ＵＴＲ）および／またはオープンリーディングフレームの３'側（下流）（３'－ＵＴＲ）に存在し得る。５'－ＵＴＲは、存在する場合、タンパク質コード領域の開始コドンの上流の、５'末端に位置する。５'－ＵＴＲは５'キャップ（存在する場合）の下流にあり、例えば５'キャップに直接隣接している。３'－ＵＴＲは、存在する場合、タンパク質コード領域の終止コドンの下流の、３'末端に位置するが、「３'－ＵＴＲ」という用語は、好ましくはポリ（Ａ）尾部を含まない。したがって、３'－ＵＴＲはポリ（Ａ）配列（存在する場合）の上流にあり、例えばポリ（Ａ）配列に直接隣接している。
いくつかの実施形態では、本開示によるＲＮＡは３'－ポリ（Ａ）配列を含む。「ポリ（Ａ）配列」という用語は、典型的にはＲＮＡ分子の３'末端に位置するアデニル（Ａ）残基の配列に関する。本開示によれば、一実施形態では、ポリ（Ａ）配列は、少なくとも約２０個、少なくとも約４０個、少なくとも約８０個、または少なくとも約１００個、および最大約５００個、最大約４００個、最大約３００個、最大約２００個、または最大約１５０個までのＡヌクレオチド、特に約１２０個のＡヌクレオチドを含む。
本開示の文脈において、「転写」という用語は、ＤＮＡ配列中の遺伝暗号がＲＮＡに転写されるプロセスに関する。その後、ＲＮＡはペプチドまたはタンパク質に翻訳され得る。
ＲＮＡに関して、「発現」または「翻訳」という用語は、ｍＲＮＡの鎖が、ペプチドまたはタンパク質を作製するようにアミノ酸の配列のアセンブリを指示する、細胞のリボソームにおける過程に関する。
本開示によれば、「ＲＮＡがコードする」という用語は、ＲＮＡが、標的組織の細胞内などの適切な環境に存在する場合、翻訳過程の間にそれがコードするペプチドまたはタンパク質を産生するようにアミノ酸のアセンブリを指示できることを意味する。一実施形態では、ＲＮＡは、ペプチドまたはタンパク質の翻訳を可能にする細胞翻訳機構と相互作用することができる。細胞は、コードされたペプチドもしくはタンパク質を細胞内で（例えば細胞質内および／もしくは核内で）産生し得るか、コードされたペプチドもしくはタンパク質を分泌し得るか、またはそれを表面上で産生し得る。
本明細書で使用される場合、「連結された」、「融合された」、または「融合」という用語は、交換可能に使用される。これらの用語は、２つ以上の要素または成分またはドメインの結合を指す。
本明細書で使用される場合、「半減期」は、例えば分解および／または天然の機構によるクリアランスもしくは隔離のために、インビボでペプチドまたはタンパク質の血清または血漿濃度が５０％減少するのに要する時間を指す。本明細書での使用に適した延長ＰＫインターロイキン（ＩＬ）などの延長ＰＫサイトカインは、インビボで安定化され、その半減期は、例えば血清アルブミン（例えばＨＳＡまたはＭＳＡ）への融合によって増加し、分解および／またはクリアランスもしくは隔離に抵抗する。半減期は、薬物動態分析などによる、それ自体公知の任意の方法で決定することができる。適切な技術は当業者に明らかであり、例えば一般に、適切な用量のアミノ酸配列または化合物を対象に適切に投与する工程；前記対象から規則的な間隔で血液試料または他の試料を収集する工程；前記血液試料中のアミノ酸配列または化合物のレベルまたは濃度を決定する工程；およびこのようにして得られたデータ（のプロット）から、アミノ酸配列または化合物のレベルまたは濃度が投与時の初期レベルと比較して５０％減少するまでの時間を計算する工程を含み得る。さらなる詳細は、例えばＫｅｎｎｅｔｈ，Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ：Ａ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｆｏｒ Ｐｈａｒｍａｃｉｓｔｓなどの標準的なハンドブックおよびＰｅｔｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ（１９９６）に提供されている。Ｇｉｂａｌｄｉ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ，２ｎｄ Ｒｅｖ．Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ（１９８２）も参照されたい。
サイトカイン
サイトカインは、細胞シグナル伝達に重要である小さなタンパク質（約５～２０ｋＤａ）のカテゴリである。サイトカインの放出は、それらの周りの細胞の挙動に影響を及ぼす。サイトカインは、免疫調節剤として自己分泌シグナル伝達、パラ分泌シグナル伝達および内分泌シグナル伝達に関与する。サイトカインには、ケモカイン、インターフェロン、インターロイキン、リンホカイン、および腫瘍壊死因子が含まれるが、一般にホルモンまたは成長因子は含まれない（用語が一部重複しているにもかかわらず）。サイトカインは、マクロファージ、Ｂリンパ球、Ｔリンパ球およびマスト細胞のような免疫細胞、ならびに内皮細胞、線維芽細胞および様々な間質細胞を含む、幅広い細胞によって産生される。所与のサイトカインは、複数の種類の細胞によって産生され得る。サイトカインは受容体を介して作用し、免疫系において特に重要である；サイトカインは、体液性免疫応答と細胞性免疫応答のバランスを調整し、特定の細胞集団の成熟、成長、および応答性を調節する。一部のサイトカインは、他のサイトカインの作用を複雑な方法で増強または阻害する。
ＩＬ２
インターロイキン２（ＩＬ２）は、抗原活性化Ｔ細胞の増殖を誘導し、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を刺激するサイトカインである。ＩＬ２の生物学的活性は、細胞膜にまたがる３つのポリペプチドサブユニットのマルチサブユニットＩＬ２受容体複合体（ＩＬ２Ｒ）によって媒介される：ｐ５５（ＩＬ２Ｒα、αサブユニット、ヒトではＣＤ２５としても公知）、ｐ７５（ＩＬ２Ｒβ、βサブユニット、ヒトではＣＤ１２２としても公知）およびｐ６４（ＩＬ２Ｒγ、γサブユニット、ヒトではＣＤ１３２としても公知）。ＩＬ２に対するＴ細胞応答は、（１）ＩＬ２の濃度；（２）細胞表面のＩＬ２Ｒ分子の数；および（３）ＩＬ２が占有するＩＬ２Ｒの数（すなわち、ＩＬ２とＩＬ２Ｒの間の結合相互作用の親和性（Ｓｍｉｔｈ，''Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｓｉｇｎａｌ Ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ｉｓ Ｑｕａｎｔａｌ'' Ｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｂｙ Ａｎｔｉｇｅｎｓ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ，Ｈｏｒｍｏｎｅｓ，ａｎｄ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒｓ ７６６：２６３－２７１，１９９５））を含む様々な因子に依存する。ＩＬ２：ＩＬ２Ｒ複合体はリガンド結合時に内在化され、様々な成分が異なる選別を受ける。静脈内（ｉ．ｖ．）ボーラスとして投与された場合、ＩＬ２は急速な全身クリアランスを有する（半減期が１２．９分の初期クリアランス期、続いて半減期が８５分のより緩やかなクリアランス期）（Ｋｏｎｒａｄ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５０：２００９－２０１７，１９９０）。
癌患者におけるＩＬ２の全身投与の結果は理想からほど遠い。患者の１５～２０％は高用量のＩＬ２に客観的に応答するが、大多数は応答せず、多くが吐き気、錯乱、低血圧、および敗血症性ショックなどの重篤で生命にかかわる副作用を経験する。高用量のＩＬ２治療に関連する重篤な毒性は、主にナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の活性に起因する。用量を減らし、投与レジメンを調整することによって血清濃度を低下させる試みが為されており、毒性は低くなるが、そのような治療は有効性も低かった。
本開示によれば、ある実施形態では、ＩＬ２は薬物動態修飾基に結合される。以下、「延長薬物動態（ＰＫ）ＩＬ２」と称する、得られた分子は、遊離ＩＬ２と比較して延長された循環半減期を有する。延長ＰＫ ＩＬ２の延長された循環半減期は、インビボでの血清ＩＬ２濃度が治療範囲内に維持されることを可能にし、潜在的に、Ｔ細胞を含む多くの種類の免疫細胞の活性化の増強につながる。その有利な薬物動態プロフィールのために、延長ＰＫ ＩＬ２は、非修飾ＩＬ２と比較した場合、より少ない頻度でより長期間投与することができる。
本開示によれば、ＩＬ２（任意で延長ＰＫ ＩＬ２の一部として）は、天然に存在するＩＬ２またはその断片もしくは変異体であり得る。ＩＬ２はヒトＩＬ２であり得、任意の脊椎動物、特に任意の哺乳動物に由来し得る。一実施形態では、ＩＬ２は、配列番号１のアミノ酸配列、または配列番号１と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＩＬ２またはＩＬ２断片もしくは変異体は、ＩＬ２受容体、またはＩＬ２受容体のサブユニット、例えばαサブユニットおよび／もしくはβ／γサブユニットに結合する。
ある実施形態では、延長ＰＫ ＩＬ２のＩＬ２部分は、ヒトＩＬ２である。他の実施形態では、延長ＰＫ ＩＬ２のＩＬ２部分は、ヒトＩＬ２の断片または変異体である。
本明細書に記載のある実施形態では、ＩＬ２は異種ポリペプチド（すなわち、ＩＬ２ではないポリペプチド）に融合される。異種ポリペプチドは、ＩＬ２の循環半減期を増加させることができる。以下でさらに詳細に論じるように、循環半減期を増加させるポリペプチドは、ヒト（例えば配列番号４）またはマウス（例えば配列番号８、１１）血清アルブミンなどの血清アルブミンであり得る。
ＩＬ７
ＩＬ７は、骨髄および胸腺の間質細胞によって分泌される造血成長因子である。これはまた、ケラチノサイト、樹状細胞、肝細胞、ニューロン、および上皮細胞によっても産生されるが、正常なリンパ球によっては産生されない。ＩＬ７は、Ｂ細胞およびＴ細胞の発生に重要なサイトカインである。ＩＬ７サイトカインと肝細胞増殖因子は、プレプロＢ細胞増殖刺激因子として機能するヘテロ二量体を形成する。マウスでのノックアウト試験は、ＩＬ７がリンパ系細胞の生存に必須の役割を果たすことを示唆した。
ＩＬ７は、ＩＬ７受容体αと共通γ鎖受容体からなるヘテロ二量体であるＩＬ７受容体に結合する。結合は、胸腺内でのＴ細胞の発生と末梢内での生存に重要なシグナルのカスケードをもたらす。ＩＬ７受容体が遺伝的に欠損しているノックアウトマウスは、胸腺萎縮、Ｔ細胞発生の二重陽性段階での停止、および重度のリンパ球減少症を示す。マウスへのＩＬ７の投与は、胸腺移出Ｔ細胞の増加、Ｂ細胞およびＴ細胞の増加、ならびにシクロホスファミド投与後または骨髄移植後のＴ細胞の回復の増加をもたらす。
本開示によれば、ある実施形態では、ＩＬ７は薬物動態修飾基に結合される。以下、「延長薬物動態（ＰＫ）ＩＬ７」と称する、得られた分子は、遊離ＩＬ７と比較して延長された循環半減期を有する。延長ＰＫ ＩＬ７の延長された循環半減期は、インビボでの血清ＩＬ７濃度が治療範囲内に維持されることを可能にし、潜在的に、Ｔ細胞を含む多くの種類の免疫細胞の生存の増強につながる。その有利な薬物動態プロフィールのために、延長ＰＫ ＩＬ７は、非修飾ＩＬ７と比較した場合、より少ない頻度でより長期間投与することができる。
本開示によれば、ＩＬ７（任意で延長ＰＫ ＩＬ７の一部として）は、天然に存在するＩＬ７またはその断片もしくは変異体であり得る。ＩＬ７はヒトＩＬ７であり得、任意の脊椎動物、特に任意の哺乳動物に由来し得る。一実施形態では、ＩＬ７は、配列番号２のアミノ酸配列、または配列番号２と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＩＬ７またはＩＬ７断片もしくは変異体は、ＩＬ７受容体に結合する。
ある実施形態では、延長ＰＫ ＩＬ７のＩＬ７部分は、ヒトＩＬ７である。他の実施形態では、延長ＰＫ ＩＬ７のＩＬ７部分は、ヒトＩＬ７の断片または変異体である。
本明細書に記載のある実施形態では、ＩＬ７は異種ポリペプチド（すなわち、ＩＬ７ではないポリペプチド）に融合される。異種ポリペプチドは、ＩＬ７の循環半減期を増加させることができる。以下でさらに詳細に論じるように、循環半減期を増加させるポリペプチドは、ヒト（例えば配列番号４）またはマウス（例えば配列番号８、１１）血清アルブミンなどの血清アルブミンであり得る。
ＩＬ２１
インターロイキン２１（ＩＬ２１）は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞および細胞傷害性Ｔ細胞を含む免疫系の細胞に強力な調節作用を及ぼすサイトカインである。このサイトカインは、その標的細胞において細胞分裂／増殖を誘導する。ＩＬ２１は、活性化ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞で発現されるが、他のほとんどの組織では発現されない。さらに、ＩＬ２１発現は、Ｔヘルパー細胞のＴｈ２およびＴｈ１７サブセット、ならびにＴ濾胞細胞において上方制御される。さらに、ＩＬ２１は、これらの細胞の機能を調節するＮＫ Ｔ細胞で発現される。インターロイキン２１は、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）癌細胞によっても産生される。
ＩＬ２１受容体（ＩＬ２１Ｒ）は、Ｔ細胞、Ｂ細胞およびＮＫ細胞の表面に発現される。ＩＬ２１Ｒは、ＩＬ２またはＩＬ１５のような他のＩ型サイトカインの受容体と構造が類似しており、ＩＬ２１に結合するためには共通γ鎖（γｃ）との二量体化を必要とする。ＩＬ２１に結合すると、ＩＬ２１受容体はＪａｋ／ＳＴＡＴ経路を介して作用し、Ｊａｋ１およびＪａｋ３ならびにＳＴＡＴ３ホモ二量体を利用してその標的遺伝子を活性化する。
本開示によれば、ある実施形態では、ＩＬ２１は薬物動態修飾基に結合される。以下、「延長薬物動態（ＰＫ）ＩＬ２１」と称される、得られた分子は、遊離ＩＬ２１と比較して延長された循環半減期を有する。延長ＰＫ ＩＬ２１の延長された循環半減期は、インビボでの血清ＩＬ２１濃度が治療範囲内に維持されることを可能にし、潜在的に、Ｔ細胞を含む多くの種類の免疫細胞の活性化の増強につながる。その有利な薬物動態プロフィールのために、延長ＰＫ ＩＬ２１は、非修飾ＩＬ２１と比較した場合、より少ない頻度でより長期間投与することができる。
本開示によれば、ＩＬ２１（任意で延長ＰＫ ＩＬ２１の一部として）は、天然に存在するＩＬ２１またはその断片もしくは変異体であり得る。ＩＬ２１はヒトＩＬ２１であり得、任意の脊椎動物、特に任意の哺乳動物に由来し得る。一実施形態では、ＩＬ２１は、配列番号３のアミノ酸配列、または配列番号３と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＩＬ２１またはＩＬ２１断片もしくは変異体は、ＩＬ２１受容体に結合する。
ある実施形態では、延長ＰＫ ＩＬ２１のＩＬ２１部分は、ヒトＩＬ２１である。他の実施形態では、延長ＰＫ ＩＬ２１のＩＬ２１部分は、ヒトＩＬ２１の断片または変異体である。
本明細書に記載されるある実施形態では、ＩＬ２１は異種ポリペプチド（すなわちＩＬ２１ではないポリペプチド）に融合される。異種ポリペプチドは、ＩＬ２１の循環半減期を増加させることができる。以下でさらに詳細に論じるように、循環半減期を増加させるポリペプチドは、ヒト（例えば配列番号４）またはマウス（例えば配列番号８、１１）血清アルブミンなどの血清アルブミンであり得る。
延長ＰＫ基
本明細書に記載のサイトカイン、例えばＩＬ２、ＩＬ７またはＩＬ２１などのインターロイキンは、循環半減期を増加させる延長ＰＫ基に融合され得る。延長ＰＫ基の非限定的な例を以下で説明する。サイトカインまたはその変異体の循環半減期を増加させる他のＰＫ基もまた、本開示に適用可能であることが理解されるべきである。ある実施形態では、延長ＰＫ基は、血清アルブミンドメイン（例えば、マウス血清アルブミン、ヒト血清アルブミン）である。
本明細書で使用される場合、「ＰＫ」という用語は、「薬物動態」の頭字語であり、例として、対象による吸収、分布、代謝、および排泄を含む化合物の特性を包含する。本明細書で使用される場合、「延長ＰＫ基」は、生物学的に活性な分子に融合されるかまたは一緒に投与された場合、生物学的に活性な分子の循環半減期を増加させるタンパク質、ペプチド、または部分を指す。延長ＰＫ基の例には、血清アルブミン（例えばＨＳＡ）、ＦｃまたはＦｃ断片およびその変異体、トランスフェリンおよびその変異体、ならびにヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）結合剤（米国特許出願公開第２００５／０２８７１５３号および同第２００７／０００３５４９号に開示されている。）が含まれる。他の例示的な延長ＰＫ基は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２０１１；２２：８６８－８７６に開示されている。本明細書で使用される場合、「延長ＰＫサイトカイン」は、延長ＰＫ基と組み合わせたサイトカイン部分を指す。一実施形態では、延長ＰＫサイトカインは、サイトカイン部分が延長ＰＫ基に連結または融合されている融合タンパク質である。本明細書で使用される場合、「延長ＰＫ ＩＬ」は、延長ＰＫ基と組み合わせたインターロイキン（ＩＬ）部分を指す。一実施形態では、延長ＰＫ ＩＬは、ＩＬ部分が延長ＰＫ基に連結または融合されている融合タンパク質である。例示的な融合タンパク質は、ＩＬ２部分がＨＳＡと融合されているＨＳＡ／ＩＬ２融合物である。別の例示的な融合タンパク質は、ＩＬ７部分がＨＳＡと融合されているＨＳＡ／ＩＬ７融合物である。別の例示的な融合タンパク質は、ＩＬ２１部分がＨＳＡと融合されているＨＳＡ／ＩＬ２１融合物である。
ある実施形態では、延長ＰＫサイトカインの血清半減期は、サイトカイン単独（すなわち、延長ＰＫ基に融合されていないサイトカイン）と比較して増加している。ある実施形態では、延長ＰＫサイトカインの血清半減期は、サイトカイン単独の血清半減期と比較して少なくとも２０、４０、６０、８０、１００、１２０、１５０、１８０、２００、４００、６００、８００、または１０００％長い。ある実施形態では、延長ＰＫサイトカインの血清半減期は、サイトカイン単独の血清半減期より少なくとも１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、１０倍、１２倍、１３倍、１５倍、１７倍、２０倍、２２倍、２５倍、２７倍、３０倍、３５倍、４０倍、または５０倍長い。ある実施形態では、延長ＰＫサイトカインの血清半減期は、少なくとも１０時間、１５時間、２０時間、２５時間、３０時間、３５時間、４０時間、５０時間、６０時間、７０時間、８０時間、９０時間、１００時間、１１０時間、１２０時間、１３０時間、１３５時間、１４０時間、１５０時間、１６０時間、または２００時間である。
ある実施形態では、延長ＰＫ基は、血清アルブミン、またはその断片、または血清アルブミンもしくはその断片の変異体（本開示の目的のために、その全てが「アルブミン」という用語に含まれる。）を含む。本明細書に記載のポリペプチドは、アルブミン（またはその断片もしくは変異体）に融合してアルブミン融合タンパク質を形成し得る。そのようなアルブミン融合タンパク質は、米国特許出願公開第２００７００４８２８２号に記載されている。
本明細書で使用される場合、「アルブミン融合タンパク質」は、少なくとも１分子のアルブミン（またはその断片もしくは変異体）と、治療用タンパク質、特にＩＬ２、ＩＬ７またはＩＬ２１（またはその断片もしくは変異体）などの少なくとも１分子のタンパク質との融合によって形成されるタンパク質を指す。アルブミン融合タンパク質は、治療用タンパク質をコードするポリヌクレオチドが、アルブミンをコードするポリヌクレオチドとインフレームで結合している核酸の翻訳によって生成され得る。治療用タンパク質およびアルブミンは、アルブミン融合タンパク質の一部になると、それぞれ、アルブミン融合タンパク質の「一部」、「領域」または「部分」（例えば、「治療用タンパク質部分」または「アルブミンタンパク質部分」）と称され得る。非常に好ましい実施形態では、アルブミン融合タンパク質は、少なくとも１分子の治療用タンパク質（治療用タンパク質の成熟形態を含むがこれに限定されない）および少なくとも１分子のアルブミン（アルブミンの成熟形態を含むがこれに限定されない）を含む。一実施形態では、アルブミン融合タンパク質は、投与されたＲＮＡの標的器官の細胞、例えば肝細胞などの宿主細胞によってプロセシングされ、循環中に分泌される。ＲＮＡの発現に使用される宿主細胞の分泌経路で起こる新生アルブミン融合タンパク質のプロセシングには、シグナルペプチド切断、ジスルフィド結合の形成、適切な折り畳み、炭水化物の付加とプロセシング（例えば、Ｎ－結合型およびＯ－結合型グリコシル化など）、特異的タンパク質分解切断、ならびに／または多量体タンパク質へのアセンブリが含まれ得るが、これらに限定されない。アルブミン融合タンパク質は、好ましくは、特にそのＮ末端にシグナルペプチドを有するプロセシングされていない形態のＲＮＡによってコードされ、細胞による分泌後は、好ましくは、特にシグナルペプチドが切断されたプロセシングされた形態で存在する。最も好ましい実施形態では、「プロセシングされた形態のアルブミン融合タンパク質」は、本明細書では「成熟アルブミン融合タンパク質」とも称される、Ｎ末端シグナルペプチド切断を受けたアルブミン融合タンパク質産物を指す。
好ましい実施形態では、治療用タンパク質を含むアルブミン融合タンパク質は、アルブミンに融合されていない場合の同じ治療用タンパク質の血漿安定性と比較して、より高い血漿安定性を有する。血漿安定性は、典型的には、治療用タンパク質がインビボで投与され、血流に運ばれたときから、治療用タンパク質が分解され、血流から腎臓または肝臓などの器官へとクリアランスされ、最終的に治療用タンパク質が体内からクリアランスされるときまでの期間を指す。血漿安定性は、血流中の治療用タンパク質の半減期に関して計算される。血流中の治療用タンパク質の半減期は、当技術分野で公知の一般的なアッセイによって容易に決定することができる。
本明細書で使用される場合、「アルブミン」は、アルブミンの１つ以上の機能的活性（例えば生物学的活性）を有する、アルブミンタンパク質もしくはアミノ酸配列、またはアルブミン断片もしくは変異体を集合的に指す。特に、「アルブミン」は、ヒトアルブミンまたはその断片もしくは変異体、特にヒトアルブミンの成熟形態、または他の脊椎動物由来のアルブミンもしくはその断片、またはこれらの分子の変異体を指す。アルブミンは、任意の脊椎動物、特に任意の哺乳動物、例えばヒト、ウシ、ヒツジ、またはブタに由来し得る。非哺乳動物アルブミンには、雌鶏およびサケが含まれるが、これらに限定されない。アルブミン融合タンパク質のアルブミン部分は、治療用タンパク質部分とは異なる動物に由来し得る。
ある実施形態では、アルブミンは、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、またはその断片もしくは変異体、例えば米国特許第５，８７６，９６９号、国際公開第２０１１／１２４７１８号、国際公開第２０１３／０７５０６６号、および国際公開第２０１１／０５１４７８９号に開示されているものである。
ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）およびヒトアルブミン（ＨＡ）という用語は、本明細書では交換可能に使用される。「アルブミンおよび「血清アルブミン」という用語はより広義であり、ヒト血清アルブミン（およびその断片と変異体）ならびに他の種由来のアルブミン（およびその断片と変異体）を包含する。
本明細書で使用される場合、治療用タンパク質の治療活性または血漿安定性を延長するのに十分なアルブミンの断片は、アルブミン融合タンパク質の治療用タンパク質部分の血漿安定性が非融合状態での血漿安定性と比較して延長または拡大されるように、タンパク質の治療活性または血漿安定性を安定化または延長するのに十分な長さまたは構造のアルブミン断片を指す。
アルブミン融合タンパク質のアルブミン部分は、アルブミン配列の全長を含み得るか、または治療活性もしくは血漿安定性を安定化もしくは延長することができるその１つ以上の断片を含み得る。そのような断片は、１０個以上のアミノ酸の長さであり得るか、またはアルブミン配列からの約１５個、２０個、２５個、３０個、５０個もしくはそれ以上の連続するアミノ酸を含み得るか、またはアルブミンの特定のドメインの一部もしくは全部を含み得る。例えば、最初の２つの免疫グロブリン様ドメインにまたがるＨＳＡの１つ以上の断片を使用し得る。好ましい実施形態では、ＨＳＡ断片は、ＨＳＡの成熟形態である。
一般的に言えば、アルブミン断片または変異体は、少なくとも１００アミノ酸長、好ましくは少なくとも１５０アミノ酸長である。
本開示によれば、アルブミンは、天然に存在するアルブミンまたはその断片もしくは変異体であり得る。アルブミンは、ヒトアルブミンであり得、任意の脊椎動物、特に任意の哺乳動物に由来し得る。一実施形態では、アルブミンは、配列番号４のアミノ酸配列、または配列番号４と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
好ましくは、アルブミン融合タンパク質は、Ｎ末端部分としてアルブミンを含み、Ｃ末端部分として治療用タンパク質を含む。あるいは、Ｃ末端部分としてアルブミンを含み、Ｎ末端部分として治療用タンパク質を含むアルブミン融合タンパク質も使用し得る。他の実施形態では、アルブミン融合タンパク質は、アルブミンのＮ末端とＣ末端の両方に融合した治療用タンパク質を有する。好ましい実施形態では、Ｎ末端およびＣ末端で融合した治療用タンパク質は、同じ治療用タンパク質である。別の好ましい実施形態では、Ｎ末端およびＣ末端で融合した治療用タンパク質は、異なる治療用タンパク質である。一実施形態では、異なる治療用タンパク質は、同じまたは関連する疾患、障害、または状態を治療または予防するのに有用であり得る。一実施形態では、異なる治療用タンパク質は両方ともサイトカインである。
一実施形態では、治療用タンパク質（１つまたは複数）は、ペプチドリンカー（１つまたは複数）を介してアルブミンに結合される。融合部分の間のリンカーペプチドは、部分間のより大きな物理的分離を提供し、したがって、例えばその同族受容体に結合するための治療用タンパク質部分のアクセス可能性を最大化し得る。リンカーペプチドは、それが柔軟であるかまたはより剛性であるようにアミノ酸で構成され得る。リンカー配列は、プロテアーゼによってまたは化学的に切断可能であり得る。
本明細書で使用される場合、「Ｆｃ領域」という用語は、免疫グロブリンの２本の重鎖のそれぞれのＦｃドメイン（またはＦｃ部分）によって形成される天然免疫グロブリンの部分を指す。本明細書で使用される場合、「Ｆｃドメイン」という用語は、ＦｃドメインがＦｖドメインを含まない単一の免疫グロブリン（Ｉｇ）重鎖の一部または断片を指す。ある実施形態では、Ｆｃドメインは、パパイン切断部位のすぐ上流のヒンジ領域で始まり、抗体のＣ末端で終わる。したがって、完全なＦｃドメインは、少なくともヒンジドメイン、ＣＨ２ドメイン、およびＣＨ３ドメインを含む。ある実施形態では、Ｆｃドメインは、ヒンジ（例えば、上部、中間および／または下部ヒンジ領域）ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、ＣＨ４ドメイン、またはその変異体、部分もしくは断片の少なくとも１つを含む。ある実施形態では、Ｆｃドメインは、完全なＦｃドメイン（すなわち、ヒンジドメイン、ＣＨ２ドメイン、およびＣＨ３ドメイン）を含む。ある実施形態では、Ｆｃドメインは、ＣＨ３ドメイン（またはその一部）に融合したヒンジドメイン（またはその一部）を含む。ある実施形態では、Ｆｃドメインは、ＣＨ３ドメイン（またはその一部）に融合したＣＨ２ドメイン（またはその一部）を含む。ある実施形態では、Ｆｃドメインは、ＣＨ３ドメインまたはその一部からなる。ある実施形態では、Ｆｃドメインは、ヒンジドメイン（またはその一部）およびＣＨ３ドメイン（またはその一部）からなる。ある実施形態では、Ｆｃドメインは、ＣＨ２ドメイン（またはその一部）およびＣＨ３ドメインからなる。ある実施形態では、Ｆｃドメインは、ヒンジドメイン（またはその一部）およびＣＨ２ドメイン（またはその一部）からなる。ある実施形態では、Ｆｃドメインは、ＣＨ２ドメインの少なくとも一部（例えば、ＣＨ２ドメインの全部または一部）を欠く。本明細書におけるＦｃドメインは、一般に、免疫グロブリン重鎖のＦｃドメインの全部または一部を含むポリペプチドを指す。これには、ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、および／またはＣＨ３ドメイン全体を含むポリペプチド、ならびに、例えばヒンジ、ＣＨ２、およびＣＨ３ドメインのみを含むそのようなペプチドの断片が含まれるが、これらに限定されない。Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＤ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、またはＩｇＭ抗体を含むがこれらに限定されない、任意の種および／または任意のサブタイプの免疫グロブリンに由来し得る。Ｆｃドメインは、天然ＦｃおよびＦｃ変異体分子を包含する。本明細書に記載されるように、任意のＦｃドメインを、アミノ酸配列が天然に存在する免疫グロブリン分子の天然Ｆｃドメインとは異なるように修飾し得ることは、当業者に理解されるであろう。ある実施形態では、Ｆｃドメインは、エフェクタ機能（例えばＦｃγＲ結合）が低下している。
本明細書に記載のポリペプチドのＦｃドメインは、異なる免疫グロブリン分子に由来し得る。例えば、ポリペプチドのＦｃドメインは、ＩｇＧ１分子に由来するＣＨ２および／またはＣＨ３ドメイン、ならびにＩｇＧ３分子に由来するヒンジ領域を含み得る。別の例では、Ｆｃドメインは、一部はＩｇＧ１分子に由来し、一部はＩｇＧ３分子に由来するキメラヒンジ領域を含むことができる。別の例では、Ｆｃドメインは、一部はＩｇＧ１分子に由来し、一部はＩｇＧ４分子に由来するキメラヒンジを含むことができる。
ある実施形態では、延長ＰＫ基は、Ｆｃドメインもしくはその断片、またはＦｃドメインもしくはその断片の変異体（本開示の目的のために、その全てが「Ｆｃドメイン」という用語に含まれる。）を含む。Ｆｃドメインは、抗原に結合する可変領域を含まない。本開示での使用に適したＦｃドメインは、いくつかの異なる供給源から入手し得る。ある実施形態では、Ｆｃドメインはヒト免疫グロブリンに由来する。ある実施形態では、ＦｃドメインはヒトＩｇＧ１定常領域に由来する。しかしながら、Ｆｃドメインは、例えば、げっ歯動物種（例えばマウス、ラット、ウサギ、モルモット）または非ヒト霊長動物種（例えばチンパンジー、マカク）を含む別の哺乳動物種の免疫グロブリンに由来し得ることが理解される。
さらに、Ｆｃドメイン（またはその断片もしくは変異体）は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、およびＩｇＥを含む任意の免疫グロブリンクラス、ならびにＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４を含む任意の免疫グロブリンアイソタイプに由来し得る。
様々なＦｃドメイン遺伝子配列（例えば、マウスおよびヒト定常領域遺伝子配列）は、公的にアクセス可能な寄託物の形で入手可能である。特定のエフェクタ機能を欠く、および／または免疫原性を低下させる特定の修飾を有するＦｃドメイン配列を含む定常領域ドメインを選択することができる。抗体および抗体をコードする遺伝子の多くの配列が公開されており、適切なＦｃドメイン配列（例えばヒンジ、ＣＨ２、および／もしくはＣＨ３配列、またはその断片もしくは変異体）は、当技術分野で広く認められている技術を使用してこれらの配列から得ることができる。
ある実施形態では、延長ＰＫ基は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許出願第２００５／０２８７１５３号、米国特許出願第２００７／０００３５４９号、米国特許出願第２００７／０１７８０８２号、米国特許出願第２００７／０２６９４２２号、米国特許出願第２０１０／０１１３３３９号、国際公開第２００９／０８３８０４号、および国際公開第２００９／１３３２０８号に記載されているものなどの血清アルブミン結合タンパク質である、ある実施形態では、延長ＰＫ基は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第７，１７６，２７８号および米国特許第８，１５８，５７９号に開示されているように、トランスフェリンである。ある実施形態では、延長ＰＫ基は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許出願第２００７／０１７８０８２号に開示されているものなどの血清免疫グロブリン結合タンパク質である。ある実施形態では、延長ＰＫ基は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許出願第２０１２／００９４９０９号に開示されているものなどの、血清アルブミンに結合するフィブロネクチン（Ｆｎ）ベースの足場ドメインタンパク質である。フィブロネクチンベースの足場ドメインタンパク質を作製する方法もまた、米国特許出願第２０１２／００９４９０９号に開示されている。Ｆｎ３ベースの延長ＰＫ基の非限定的な例は、Ｆｎ３（ＨＳＡ）、すなわち、ヒト血清アルブミンに結合するＦｎ３タンパク質である。
ある態様では、本開示による使用に適した、延長ＰＫ ＩＬなどの延長ＰＫサイトカインは、１つ以上のペプチドリンカーを使用することができる。本明細書で使用される場合、「ペプチドリンカー」という用語は、ポリペプチド鎖の線状アミノ酸配列中の２つ以上のドメイン（例えば、延長ＰＫ部分とＩＬ２、ＩＬ７またはＩＬ２１などのＩＬ部分）を連結するペプチドまたはポリペプチド配列を指す。例えば、ペプチドリンカーを使用して、ＩＬ２部分をＨＳＡドメインに連結し得る。別の実施形態では、ペプチドリンカーを使用して、ＩＬ７部分をＨＳＡドメインに連結し得る。別の実施形態では、ペプチドリンカーを使用して、ＩＬ２１部分をＨＳＡドメインに連結し得る。
延長ＰＫ基を、例えばＩＬ２、ＩＬ７またはＩＬ２１に融合するのに適したリンカーは当技術分野で周知である。例示的なリンカーには、グリシン－セリンポリペプチドリンカー、グリシン－プロリンポリペプチドリンカー、およびプロリン－アラニンポリペプチドリンカーが含まれる。ある実施形態では、リンカーは、グリシン－セリンポリペプチドリンカー、すなわち、グリシン残基とセリン残基からなるペプチドである。
抗原
本開示による使用に適したペプチドおよびタンパク質抗原、すなわち抗原またはその変異体は、典型的には、免疫応答を誘導するためのエピトープを含むペプチドまたはタンパク質を含む。ペプチドまたはタンパク質またはエピトープは、標的抗原、すなわちそれに対して免疫応答が惹起されるべき抗原に由来し得る。例えば、ペプチドもしくはタンパク質抗原、またはペプチドもしくはタンパク質抗原内に含まれるエピトープは、標的抗原または標的抗原の断片もしくは変異体であり得る。
投与される、または投与される核酸、特にＲＮＡによってコードされるペプチドおよびタンパク質抗原、すなわちワクチン抗原は、好ましくは、ペプチドもしくはタンパク質抗原または核酸が投与される対象において、ＣＡＲを発現するように遺伝子改変されたＴ細胞の刺激、プライミングおよび／または拡大をもたらす。前記刺激された、プライミングされたおよび／または拡大されたＴ細胞は、好ましくは、標的抗原、特に疾患細胞、組織および／または器官によって発現される標的抗原、すなわち疾患関連抗原に対して向けられる。したがって、ワクチン抗原は、疾患関連抗原、またはその断片もしくは変異体を含み得る。一実施形態では、そのような断片または変異体は、疾患関連抗原と免疫学的に等価である。本開示の文脈において、「抗原の断片」または「抗原の変異体」という用語は、ＣＡＲ操作されたＴ細胞の刺激、プライミングおよび／または拡大をもたらす作用物質を意味し、刺激、プライミングおよび／または拡大されたＴ細胞は、特に疾患細胞、組織および／または器官によって提示された場合、抗原、すなわち疾患関連抗原を標的とする。したがって、ワクチン抗原は、疾患関連抗原に対応し得るかもしくはそれを含み得る、疾患関連抗原の断片に対応し得るかもしくはそれを含み得る、または疾患関連抗原もしくはその断片に相同である抗原に対応し得るかもしくはそれを含み得る。ワクチン抗原が、疾患関連抗原の断片または疾患関連抗原の断片に相同であるアミノ酸配列を含む場合、前記断片またはアミノ酸配列は、ＣＡＲ操作されたＴ細胞のＣＡＲが標的とする疾患関連抗原のエピトープ、または疾患関連抗原のエピトープに相同である配列を含み得る。したがって、本開示によれば、ワクチン抗原は、疾患関連抗原の免疫原性断片、または疾患関連抗原の免疫原性断片に相同であるアミノ酸配列を含み得る。本開示による「抗原の免疫原性断片」は、好ましくは、抗原に結合するＣＡＲを担持するＴ細胞または抗原を発現する細胞を刺激、プライミングおよび／または拡大することができる抗原の断片に関する。ワクチン抗原は（疾患関連抗原と同様に）、ＣＡＲ操作されたＴ細胞による結合のための関連するエピトープを提供するために、抗原提示細胞などの細胞の表面に発現され得ることが好ましい。ワクチン抗原は組換え抗原であり得る。
「免疫学的に等価」という用語は、免疫学的に等価なアミノ酸配列などの免疫学的に等価な分子が、同じもしくは本質的に同じ免疫学的特性を示し、および／または、例えば免疫学的作用の種類に関して、同じもしくは本質的に同じ免疫学的作用を発揮することを意味する。本開示の文脈において、「免疫学的に等価」という用語は、好ましくは、免疫化のために使用される抗原または抗原変異体の免疫学的作用または特性に関して使用される。例えば、アミノ酸配列が、参照アミノ酸配列に結合するＴ細胞または参照アミノ酸配列を発現する細胞などの対象の免疫系に暴露されたときに、参照アミノ酸配列と反応する特異性を有する免疫反応を誘導する場合、前記アミノ酸配列は参照アミノ酸配列と免疫学的に等価である。したがって、抗原と免疫学的に等価である分子は、Ｔ細胞の刺激、プライミングおよび／または拡大に関して、Ｔ細胞が標的とする抗原と同じもしくは本質的に同じ特性を示し、および／または同じもしくは本質的に同じ作用を発揮する。
「プライミング」という用語は、Ｔ細胞がその特異的抗原と最初に接触し、エフェクタＴ細胞への分化を引き起こす過程を指す。
「クローン拡大」または「拡大」という用語は、特定の実体が増加する過程を指す。本開示の文脈において、この用語は、好ましくは、リンパ球が抗原によって刺激され、増殖し、前記抗原を認識する特定のリンパ球が増幅される免疫学的応答の文脈で使用される。好ましくは、クローン拡大はリンパ球の分化をもたらす。
「抗原」という用語は、免疫応答を生じさせることができるエピトープを含む作用物質に関する。「抗原」という用語には、特にタンパク質およびペプチドが含まれる。一実施形態では、抗原は、樹状細胞またはマクロファージのような抗原提示細胞などの免疫系の細胞の表面に存在する。Ｔ細胞エピトープなどの抗原またはそのプロセシング産物は、一実施形態では、ＣＡＲ分子によって結合される。したがって、抗原またはそのプロセシング産物は、Ｔリンパ球（Ｔ細胞）と特異的に反応し得る。一実施形態では、抗原は、腫瘍抗原、ウイルス抗原、または細菌抗原などの疾患関連抗原であり、エピトープはそのような抗原に由来する。
「疾患関連抗原」という用語は、疾患に関連する任意の抗原を指すためにその最も広い意味で使用される。疾患関連抗原は、宿主の免疫系を刺激して疾患に対する細胞性抗原特異的免疫応答および／または体液性抗体応答を生じさせるエピトープを含む分子である。したがって、疾患関連抗原またはそのエピトープは、治療目的に使用され得る。疾患関連抗原は、微生物、典型的には微生物抗原による感染に関連し得るか、または癌、典型的には腫瘍に関連し得る。
「腫瘍抗原」という用語は、細胞質、細胞表面および細胞核に由来し得る癌細胞の構成要素を指す。特に、この用語は、細胞内でまたは腫瘍細胞上の表面抗原として産生される抗原を指す。腫瘍抗原は、典型的には癌細胞によって選択的に発現され（例えば、非癌細胞上よりも癌細胞においてより高いレベルで発現される。）、場合によっては、癌細胞によってのみ発現される。腫瘍抗原の例には、限定されることなく、ｐ５３、ＡＲＴ－４、ＢＡＧＥ、β－カテニン／ｍ、Ｂｃｒ－ａｂＬ ＣＡＭＥＬ、ＣＡＰ－１、ＣＡＳＰ－８、ＣＤＣ２７／ｍ、ＣＤＫ４／ｍ、ＣＥＡ、クローディン６、クローディン１８．２およびクローディン１２などのクローディンファミリーの細胞表面タンパク質、ｃ－ＭＹＣ、ＣＴ、Ｃｙｐ－Ｂ、ＤＡＭ、ＥＬＦ２Ｍ、ＥＴＶ６－ＡＭＬ１、Ｇ２５０、ＧＡＧＥ、ＧｎＴ－Ｖ、Ｇａｐ １００、ＨＡＧＥ、ＨＥＲ－２／ｎｅｕ、ＨＰＶ－Ｅ７、ＨＰＶ－Ｅ６、ＨＡＳＴ－２、ｈＴＥＲＴ（またはｈＴＲＴ）、ＬＡＧＥ、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ、ＭＡＧＥ－Ａ、好ましくはＭＡＧＥ－Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ４、ＭＡＧＥ－Ａ５、ＭＡＧＥ－Ａ６、ＭＡＧＥ－Ａ７、ＭＡＧＥ－Ａ８、ＭＡＧＥ－Ａ９、ＭＡＧＥ－Ａ１０、ＭＡＧＥ－Ａ１１、またはＭＡＧＥ－Ａ１２、ＭＡＧＥ－Ｂ、ＭＡＧＥ－Ｃ、ＭＡＲＴ－１／メランＡ、ＭＣ１Ｒ、ミオシン／ｍ、ＭＵＣ１、ＭＵＭ－１、ＭＵＭ－２、ＭＵＭ－３、ＮＡ８８－Ａ、ＮＦ１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＮＹ－ＢＲ－１、ｐｌ９０マイナーＢＣＲ－ａｂＬ、Ｐｍｌ／ＲＡＲａ、ＰＲＡＭＥ、プロテイナーゼ３、ＰＳＡ、ＰＳＭ、ＲＡＧＥ、ＲＵ１またはＲＵ２、ＳＡＧＥ、ＳＡＲＴ－１またはＳＡＲＴ－３、ＳＣＧＢ３Ａ２、ＳＣＰ１、ＳＣＰ２、ＳＣＰ３、ＳＳＸ、サバイビン、ＴＥＬ／ＡＭＬ１、ＴＰＩ／ｍ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、ＴＲＰ－２／ＩＮＴ２、ＴＰＴＥ、ＷＴ、およびＷＴ－１が含まれる。
「ウイルス抗原」という用語は、抗原特性を有する、すなわち個体において免疫応答を誘発することができる任意のウイルス成分を指す。ウイルス抗原は、ウイルスリボ核タンパク質またはエンベロープタンパク質であり得る。
「細菌抗原」という用語は、抗原特性を有する、すなわち個体において免疫応答を誘発することができる任意の細菌成分を指す。細菌抗原は、細菌の細胞壁または細胞質膜に由来し得る。
「エピトープ」という用語は、免疫系によって認識される抗原などの分子の一部または断片を指す。例えば、エピトープは、Ｔ細胞、Ｂ細胞または抗体によって認識され得る。抗原のエピトープは、抗原の連続部分または不連続部分を含み得、約５～約１００、例えば約５～約５０、より好ましくは約８～約３０、最も好ましくは約１０～約２５アミノ酸の長さであり得、例えば、エピトープは、好ましくは９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５アミノ酸の長さであり得る。一実施形態では、エピトープは、約１０～約２５アミノ酸の長さである。「エピトープ」という用語は、Ｔ細胞エピトープを含む。
「Ｔ細胞エピトープ」という用語は、ＭＨＣ分子に関連して提示された場合にＴ細胞によって認識されるタンパク質の一部または断片を指す。「主要組織適合遺伝子複合体」という用語および「ＭＨＣ」という略語は、ＭＨＣクラスＩおよびＭＨＣクラスＩＩ分子を含み、全ての脊椎動物に存在する遺伝子の複合体に関する。ＭＨＣタンパク質または分子は、免疫反応におけるリンパ球と抗原提示細胞または疾患細胞との間のシグナル伝達に重要であり、ＭＨＣタンパク質または分子はペプチドエピトープに結合し、Ｔ細胞上のＴ細胞受容体による認識のためにそれらを提示する。ＭＨＣによってコードされるタンパク質は、細胞の表面に発現され、自己抗原（細胞自体からのペプチド断片）および非自己抗原（例えば、侵入微生物の断片）の両方をＴ細胞に提示する。クラスＩ ＭＨＣ／ペプチド複合体の場合、結合ペプチドは、典型的には約８～約１０アミノ酸長であるが、より長いまたはより短いペプチドも有効であり得る。クラスＩＩ ＭＨＣ／ペプチド複合体の場合、結合ペプチドは、典型的には約１０～約２５アミノ酸長であり、特に約１３～約１８アミノ酸長であるが、より長いおよびより短いペプチドも有効であり得る。
一実施形態では、標的抗原は腫瘍抗原であり、ワクチン抗原またはその断片（例えば、エピトープ）は腫瘍抗原に由来する。腫瘍抗原は、様々な癌で発現されることが一般的に公知の「標準」抗原であり得る。腫瘍抗原はまた、個体の腫瘍に特異的であり、それまで免疫系によって認識されていなかった「ネオ抗原」であり得る。ネオ抗原またはネオエピトープは、アミノ酸変化をもたらす癌細胞のゲノムにおける１つ以上の癌特異的変異から生じ得る。腫瘍抗原がネオ抗原である場合、ワクチン抗原は、好ましくは、１つ以上のアミノ酸変化を含む前記ネオ抗原のエピトープまたは断片を含む。
ペプチドおよびタンパク質抗原は、例えば５アミノ酸、１０アミノ酸、１５アミノ酸、２０アミノ酸、２５アミノ酸、３０アミノ酸、３５アミノ酸、４０アミノ酸、４５アミノ酸、または５０アミノ酸の長さを含む、２～１００アミノ酸であり得る。いくつかの実施形態では、ペプチドは、５０個を超えるアミノ酸であり得る。いくつかの実施形態では、ペプチドは、１００個を超えるアミノ酸であり得る。
本発明によれば、抗原またはその変異体は、ＣＡＲによって認識可能であるべきである。好ましくは、抗原またはその変異体は、ＣＡＲによって認識される場合、適切な共刺激シグナルの存在下で、抗原またはその変異体を認識するＣＡＲを担持するＴ細胞の、刺激、プライミングおよび／または拡大を誘導することができる。本発明の実施形態の文脈において、抗原またはその変異体は、好ましくは細胞、好ましくは抗原提示細胞の表面に存在する。疾患細胞の表面での抗原の認識は、抗原（または抗原を発現する細胞）に対する免疫反応をもたらし得る。
本発明の様々な態様によれば、目的は、好ましくは、ＣＬＤＮ６またはＣＬＤＮ１８．２などの腫瘍抗原を発現する癌細胞に対する免疫応答を提供すること、およびＣＬＤＮ６またはＣＬＤＮ１８．２などの腫瘍抗原を発現する細胞が関与する癌疾患を治療することである。好ましくは、本発明は、ＣＬＤＮ６またはＣＬＤＮ１８．２などの腫瘍抗原を発現する癌細胞を標的とするＣＡＲ操作されたＴ細胞の投与を含む。
「細胞表面」は、当技術分野におけるその通常の意味に従って使用され、したがって、タンパク質および他の分子による結合にアクセス可能な細胞の外側を含む。抗原は、それが前記細胞の表面に位置し、例えば細胞に加えられた抗原特異的抗体による結合にアクセス可能である場合、細胞の表面で発現される。一実施形態では、細胞の表面に発現される抗原は、ＣＡＲによって認識される細胞外部分を有する内在性膜タンパク質である。
本発明の文脈における「細胞外部分」または「エキソドメイン」という用語は、細胞の細胞外空間に面しており、好ましくは、例えば細胞の外側に位置する抗体などの分子に結合することによって、前記細胞の外側からアクセス可能であるタンパク質などの分子の一部を指す。好ましくは、この用語は、１つ以上の細胞外ループもしくはドメインまたはその断片を指す。
本発明の全ての態様の一実施形態では、抗原は、癌細胞などの疾患細胞で発現される。一実施形態では、抗原は、癌細胞などの疾患細胞の表面に発現される。一実施形態では、ＣＡＲは、抗原またはその変異体の細胞外ドメインまたは細胞外ドメイン内のエピトープに結合する。一実施形態では、ＣＡＲは、生細胞の表面に存在する抗原またはその変異体の天然エピトープに結合する。一実施形態では、前記抗原はクローディン、特にクローディン６またはクローディン１８．２であり、前記ＣＡＲは前記クローディンの最初の細胞外ループに結合する。一実施形態では、Ｔ細胞によって発現されるおよび／またはＴ細胞上に存在する場合の前記ＣＡＲの、抗原提示細胞などの細胞上に存在する抗原またはその変異体への結合は、前記Ｔ細胞の刺激、プライミングおよび／または拡大をもたらす。一実施形態では、Ｔ細胞によって発現されるおよび／またはＴ細胞上に存在する場合の前記ＣＡＲの、癌細胞などの疾患細胞上に存在する抗原への結合は、疾患細胞の細胞溶解および／またはアポトーシスをもたらし、前記Ｔ細胞は、好ましくは細胞毒性因子、例えばパーフォリンおよびグランザイムを放出する。
免疫チェックポイント阻害剤
ある実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、本明細書に記載される他の治療剤と組み合わせて使用される。
本明細書で使用される場合、「免疫チェックポイント」は、抗原のＴ細胞受容体認識の大きさおよび質を調節する共刺激および阻害シグナルを指す。ある実施形態では、免疫チェックポイントは阻害シグナルである。ある実施形態では、阻害シグナルは、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との間の相互作用である。ある実施形態では、阻害シグナルは、ＣＤ２８結合を置き換えるＣＴＬＡ－４とＣＤ８０またはＣＤ８６との間の相互作用である。ある実施形態では、阻害シグナルは、ＬＡＧ３とＭＨＣクラスＩＩ分子との間の相互作用である。ある実施形態では、阻害シグナルは、ＴＩＭ３とガレクチン９との間の相互作用である。
本明細書で使用される場合、「免疫チェックポイント阻害剤」は、１つ以上のチェックポイントタンパク質を完全にまたは部分的に低減する、阻害する、妨げるまたは調節する分子を指す。ある実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、免疫チェックポイントに関連する阻害シグナルを防止する。ある実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、免疫チェックポイントに関連する阻害シグナル伝達を妨害する抗体またはその断片である。ある実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、阻害シグナル伝達を妨害する小分子である。ある実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、チェックポイント遮断タンパク質間の相互作用を妨げる抗体、その断片、または抗体模倣物、例えば、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との間の相互作用を妨げる抗体またはその断片である。ある実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ－４とＣＤ８０またはＣＤ８６との間の相互作用を防げる抗体またはその断片である。ある実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＬＡＧ３とそのリガンド、またはＴＩＭ－３とそのリガンドとの間の相互作用を妨げる抗体またはその断片である。チェックポイント阻害剤はまた、分子（またはその変異体）自体の可溶性形態、例えば、可溶性ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ１融合物の形態であり得る。
「プログラム死１（ＰＤ－１）」受容体は、ＣＤ２８ファミリーに属する免疫抑制性受容体を指す。ＰＤ－１は、インビボで以前に活性化されたＴ細胞上で主に発現され、ＰＤ－Ｌ１とＰＤ－Ｌ２の２つのリガンドに結合する。本明細書で使用される「ＰＤ－１」という用語は、ヒトＰＤ－１（ｈＰＤ－１）、ｈＰＤ－１の変異体、アイソフォーム、および種ホモログ、ならびにｈＰＤ－１と少なくとも１つの共通のエピトープを有する類似体を含む。
「プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）」は、ＰＤ－１に結合するとＴ細胞の活性化およびサイトカイン分泌を下方制御する、ＰＤ－１の２つの細胞表面糖タンパク質リガンドの１つ（もう１つはＰＤ－Ｌ２）である。本明細書で使用される「ＰＤ－Ｌ１」という用語は、ヒトＰＤ－Ｌ１（ｈＰＤ－Ｌ１）、ｈＰＤ－Ｌ１の変異体、アイソフォーム、および種ホモログ、ならびにｈＰＤ－Ｌ１と少なくとも１つの共通のエピトープを有する類似体を含む。
「細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ－４）」は、Ｔ細胞表面分子であり、免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーである。このタンパク質は、ＣＤ８０およびＣＤ８６に結合することによって免疫系を下方制御する。本明細書で使用される「ＣＴＬＡ－４」という用語は、ヒトＣＴＬＡ－４（ｈＣＴＬＡ－４）、ｈＣＴＬＡ－４の変異体、アイソフォーム、および種ホモログ、ならびにｈＣＴＬＡ－４と少なくとも１つの共通のエピトープを有する類似体を含む。
「リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ３）」は、ＭＨＣクラスＩＩ分子に結合することによるリンパ球活性の阻害に関連する阻害性受容体である。この受容体は、Ｔｒｅｇ細胞の機能を増強し、ＣＤ８＋エフェクタＴ細胞の機能を阻害する。本明細書で使用される「ＬＡＧ３」という用語は、ヒトＬＡＧ３（ｈＬＡＧ３）、ｈＬＡＧ３の変異体、アイソフォーム、および種ホモログ、ならびに少なくとも１つの共通のエピトープを有する類似体を含む。
「Ｔ細胞膜タンパク質３（ＴＩＭ３）」は、ＴＨ１細胞応答の阻害によるリンパ球活性の阻害に関与する阻害性受容体である。そのリガンドは、様々な種類の癌で上方制御されるガレクチン９である。本明細書で使用される「ＴＩＭ３」という用語は、ヒトＴＩＭ３（ｈＴＩＭ３）、ｈＴＩＭ３の変異体、アイソフォーム、および種ホモログ、ならびに少なくとも１つの共通のエピトープを有する類似体を含む。
「Ｂ７ファミリー」は、未定義の受容体の阻害性リガンドを指す。Ｂ７ファミリーはＢ７－Ｈ３およびＢ７－Ｈ４を包含し、どちらも腫瘍細胞および腫瘍浸潤細胞で上方制御される。
ある実施形態では、本明細書に開示される方法での使用に適した免疫チェックポイント阻害剤は、阻害シグナルのアンタゴニスト、例えば、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、またはＴＩＭ３を標的とする抗体である。これらのリガンドと受容体は、Ｐａｒｄｏｌｌ，Ｄ．，Ｎａｔｕｒｅ．１２：２５２－２６４，２０１２で総説されている。
ある実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、阻害性免疫調節因子からのシグナル伝達を妨害または阻害する抗体またはその抗原結合部分である。ある実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、阻害性免疫調節因子からのシグナル伝達を妨害または阻害する小分子である。
ある実施形態では、阻害性免疫調節因子は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達経路の成分である。したがって、本開示のある実施形態は、ＰＤ－１受容体とそのリガンドであるＰＤ－Ｌ１との間の相互作用を妨害する抗体またはその抗原結合部分を対象に投与することを提供する。ＰＤ－１に結合し、ＰＤ－１とそのリガンドであるＰＤ－Ｌ１との間の相互作用を妨害する抗体は、当技術分野で公知である。ある実施形態では、抗体またはその抗原結合部分は、ＰＤ－１に特異的に結合する。ある実施形態では、抗体またはその抗原結合部分は、ＰＤ－Ｌ１に特異的に結合し、ＰＤ－１とのその相互作用を阻害し、それによって免疫活性を増加させる。
ある実施形態では、阻害性免疫調節因子は、ＣＴＬＡ４シグナル伝達経路の成分である。したがって、本開示のある実施形態は、ＣＴＬＡ４を標的とし、ＣＤ８０およびＣＤ８６とのその相互作用を妨害する抗体またはその抗原結合部分を対象に投与することを提供する。
ある実施形態では、阻害性免疫調節因子は、ＬＡＧ３（リンパ球活性化遺伝子３）シグナル伝達経路の成分である。したがって、本開示のある実施形態は、ＬＡＧ３を標的とし、ＭＨＣクラスＩＩ分子とのその相互作用を妨害する抗体またはその抗原結合部分を対象に投与することを提供する。
ある実施形態では、阻害性免疫調節因子は、Ｂ７ファミリーシグナル伝達経路の成分である。ある実施形態では、Ｂ７ファミリーメンバーは、Ｂ７－Ｈ３およびＢ７－Ｈ４である。したがって、本開示のある実施形態は、Ｂ７－Ｈ３またはＢ７－Ｈ４を標的とする抗体またはその抗原結合部分を対象に投与することを提供する。Ｂ７ファミリーは定義された受容体を有さないが、これらのリガンドは腫瘍細胞または腫瘍浸潤細胞で上方制御される。前臨床マウスモデルは、これらのリガンドの遮断が抗腫瘍免疫を増強できることを示している。
ある実施形態では、阻害性免疫調節因子は、ＴＩＭ３（Ｔ細胞膜タンパク質３）シグナル伝達経路の成分である。したがって、本開示のある実施形態は、ＴＩＭ３を標的とし、ガレクチン９とのその相互作用を妨害する抗体またはその抗原結合部分を対象に投与することを提供する。
標的化が、例えば、Ｔ細胞増殖の増加、Ｔ細胞活性化の増強、および／またはサイトカイン産生の増加（例えばＩＦＮ－γ、ＩＬ２）に反映されるような抗腫瘍免疫応答などの免疫応答の刺激をもたらすことを条件として、他の免疫チェックポイント標的もまた、アンタゴニストまたは抗体によって標的化され得ることが当業者に理解されるであろう。
本開示によれば、「抗体」という用語は、ジスルフィド結合によって相互に接続された少なくとも２本の重（Ｈ）鎖および２本の軽（Ｌ）鎖を含む糖タンパク質を指す。「抗体」という用語には、モノクローナル抗体、組換え抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体およびキメラ抗体が含まれる。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＶＨと略す）と重鎖定常領域で構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＶＬと略す）と軽鎖定常領域で構成される。ＶＨおよびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と称されるより保存された領域が間に組み入れられた、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変性の領域にさらに細分化することができる。各ＶＨおよびＶＬは、次の順序でアミノ末端からカルボキシ末端へと配置された３つのＣＤＲと４つのＦＲで構成される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えばエフェクタ細胞）および古典的補体系の第１成分（Ｃ１ｑ）を含む、宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介し得る。
抗体は、マウス、ラット、ウサギ、モルモットおよびヒトを含むがこれらに限定されない、様々な種に由来し得る。
本明細書に記載される抗体には、ＩｇＡ１またはＩｇＡ２などのＩｇＡ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＥ、ＩｇＭ、およびＩｇＤ抗体が含まれる。様々な実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１抗体、より具体的にはＩｇＧ１、カッパもしくはＩｇＧ１、ラムダアイソタイプ（すなわちＩｇＧ１、κ、λ）、ＩｇＧ２ａ抗体（例えばＩｇＧ２ａ、κ、λ）、ＩｇＧ２ｂ抗体（例えばＩｇＧ２ｂ、κ、λ）、ＩｇＧ３抗体（例えばＩｇＧ３、κ、λ）またはＩｇＧ４抗体（例えばＩｇＧ４、κ、λ）である。
抗体の「抗原結合部分」（もしくは単に「結合部分」）または抗体の「抗原結合断片」（もしくは単に「結合断片」）という用語または同様の用語は、抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つ以上の断片を指す。抗体の抗原結合機能は、完全長抗体の断片によって実施され得ることが示されている。抗体の「抗原結合部分」という用語に包含される結合断片の例には、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨドメインからなる一価断片である、Ｆａｂ断片；（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片である、Ｆ（ａｂ'）２断片；（ｉｉｉ）ＶＨドメインとＣＨドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の一本の腕のＶＬドメインとＶＨドメインからなるＦｖ断片；（ｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４－５４６）；（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、ならびに（ｖｉｉ）任意で合成リンカーによって連結されていてもよい２つ以上の単離されたＣＤＲの組合せが含まれる。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメイン、ＶＬとＶＨは別々の遺伝子によってコードされるが、それらを、ＶＬ領域とＶＨ領域が対合して一価分子（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として公知；例えば、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６；およびＨｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９－５８８３参照）を形成する単一のタンパク質鎖として作製することを可能にする合成リンカーによって、組換え法を用いて連結することができる。そのような一本鎖抗体も、抗体の「抗原結合断片」という用語に包含されることが意図されている。さらなる例は、（ｉ）免疫グロブリンヒンジ領域ポリペプチドに融合した結合ドメインポリペプチド、（ｉｉ）ヒンジ領域に融合した免疫グロブリン重鎖ＣＨ２定常領域、および（ｉｉｉ）ＣＨ２定常領域に融合した免疫グロブリン重鎖ＣＨ３定常領域を含む、結合ドメイン免疫グロブリン融合タンパク質である。結合ドメインポリペプチドは、重鎖可変領域または軽鎖可変領域であり得る。結合ドメイン免疫グロブリン融合タンパク質は、米国特許出願第２００３／０１１８５９２号および米国特許出願第２００３／０１３３９３９号にさらに開示されている。これらの抗体断片は、当業者に公知の従来技術を使用して得られ、断片は、無傷の抗体と同じ方法で有用性についてスクリーニングされる。
ＲＮＡ標的化
本開示によれば、本明細書に記載のＲＮＡの投与後、ＲＮＡの少なくとも一部は標的細胞に送達される。一実施形態では、ＲＮＡの少なくとも一部は標的細胞のサイトゾルに送達される。一実施形態では、ＲＮＡは標的細胞によって翻訳されて、コードされたペプチドまたはタンパク質を産生する。
本開示のいくつかの態様は、本明細書に開示されるＲＮＡ（例えば、サイトカインをコードするＲＮＡおよび抗原またはその変異体をコードするＲＮＡ）の標的化送達を含む。
一実施形態では、本開示は、リンパ系、特に二次リンパ器官、より具体的には脾臓を標的とすることを含む。投与されるＲＮＡが、抗原またはその変異体をコードするＲＮＡである場合、リンパ系、特に二次リンパ器官、より具体的には脾臓を標的とすることが特に好ましい。
一実施形態では、標的細胞は脾臓細胞である。一実施形態では、標的細胞は、脾臓におけるプロフェッショナル抗原提示細胞などの抗原提示細胞である。一実施形態では、標的細胞は脾臓の樹状細胞である。
「リンパ系」は、循環系の一部であり、リンパを運ぶリンパ管のネットワークを含む免疫系の重要な部分である。リンパ系は、リンパ器官、リンパ管の伝導ネットワーク、および循環リンパからなる。一次または中枢リンパ器官は、未成熟な前駆細胞からリンパ球を生成する。胸腺および骨髄は一次リンパ器官を構成する。リンパ節および脾臓を含む二次または末梢リンパ器官は、成熟したナイーブリンパ球を維持し、適応免疫応答を開始する。
ＲＮＡは、ＲＮＡがカチオン性脂質および任意でさらなる脂質またはヘルパー脂質を含むリポソームに結合して注射可能なナノ粒子製剤を形成する、いわゆるリポプレックス製剤によって脾臓に送達され得る。リポソームは、エタノール中の脂質の溶液を水または適切な水相に注入することによって得られ得る。ＲＮＡリポプレックス粒子は、リポソームをＲＮＡと混合することによって調製され得る。脾臓標的化ＲＮＡリポプレックス粒子は、参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１３／１４３６８３号に記載されている。正味の負電荷を有するＲＮＡリポプレックス粒子を使用して、脾臓組織または脾臓細胞、例えば抗原提示細胞、特に樹状細胞を選択的に標的化し得ることが見出された。したがって、ＲＮＡリポプレックス粒子の投与後、脾臓におけるＲＮＡ蓄積および／またはＲＮＡ発現が起こる。したがって、本開示のＲＮＡリポプレックス粒子は、脾臓においてＲＮＡを発現するために使用され得る。一実施形態では、ＲＮＡリポプレックス粒子の投与後、肺および／または肝臓におけるＲＮＡ蓄積および／またはＲＮＡ発現は、全く起こらないかまたは本質的に起こらない。一実施形態では、ＲＮＡリポプレックス粒子の投与後、脾臓内のプロフェッショナル抗原提示細胞などの抗原提示細胞におけるＲＮＡ蓄積および／またはＲＮＡ発現が起こる。したがって、本開示のＲＮＡリポプレックス粒子は、そのような抗原提示細胞においてＲＮＡを発現するために使用され得る。一実施形態では、抗原提示細胞は、樹状細胞および／またはマクロファージである。
本開示の文脈において、「ＲＮＡリポプレックス粒子」という用語は、脂質、特にカチオン性脂質、およびＲＮＡを含む粒子に関する。正に帯電したリポソームと負に帯電したＲＮＡとの間の静電相互作用は、複合体化とＲＮＡリポプレックス粒子の自発的形成をもたらす。正に帯電したリポソームは、一般に、ＤＯＴＭＡなどのカチオン性脂質とＤＯＰＥなどのさらなる脂質を使用して合成し得る。一実施形態では、ＲＮＡリポプレックス粒子はナノ粒子である。
本明細書で使用される場合、「カチオン性脂質」は、正味の正電荷を有する脂質を指す。カチオン性脂質は、静電相互作用によって負に帯電したＲＮＡを脂質マトリックスに結合する。一般に、カチオン性脂質は、ステロール、アシルまたはジアシル鎖などの親油性部分を有し、脂質の頭部基は、典型的には正電荷を担持する。カチオン性脂質の例には、１，２－ジ－Ｏ－オクタデセニル－３－トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＴＭＡ）、ジメチルジオクタデシルアンモニウム（ＤＤＡＢ）；１，２－ジオレオイル－３－トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＴＡＰ）；１，２－ジオレオイル－３－ジメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＤＡＰ）；１，２－ジアシルオキシ－３－ジメチルアンモニウムプロパン；１，２－ジアルキルオキシ－３－ジメチルアンモニウムプロパン；ジオクタデシルジメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＤＡＣ）、２，３－ジ（テトラデコキシ）プロピル－（２－ヒドロキシエチル）－ジメチルアザニウム（ＤＭＲＩＥ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－エチルホスホコリン（ＤＭＥＰＣ）、ｌ，２－ジミリストイル－３－トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＭＴＡＰ）、１，２－ジオレイルオキシプロピル－３－ジメチルヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＯＲＩＥ）、および２，３－ジオレオイルオキシ－Ｎ－［２（スペルミンカルボキサミド）エチル］－Ｎ，Ｎ－ジメチル－ｌ－プロパナミウムトリフルオロアセテート（ＤＯＳＰＡ）が含まれるが、これらに限定されない。ＤＯＴＭＡ、ＤＯＴＡＰ、ＤＯＤＡＣ、およびＤＯＳＰＡが好ましい。特定の実施形態では、カチオン性脂質は、ＤＯＴＭＡおよび／またはＤＯＴＡＰである。
ＲＮＡリポプレックス粒子の正電荷と負電荷の全体的な比率および物理的安定性を調整するために、さらなる脂質を組み込んでもよい。ある実施形態では、さらなる脂質は中性脂質である。本明細書で使用される場合、「中性脂質」は、ゼロの正味電荷を有する脂質を指す。中性脂質の例には、１，２－ジ－（９Ｚ－オクタデセノイル）－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、ジアシルホスファチジルコリン、ジアシルホスファチジルエタノールアミン、セラミド、スフィンゴミエリン、セファリン、コレステロール、およびセレブロシドが含まれるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、さらなる脂質は、ＤＯＰＥ、コレステロールおよび／またはＤＯＰＣである。
ある実施形態では、ＲＮＡリポプレックス粒子は、カチオン性脂質およびさらなる脂質の両方を含む。例示的な実施形態では、カチオン性脂質はＤＯＴＭＡであり、さらなる脂質はＤＯＰＥである。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのカチオン性脂質と少なくとも１つのさらなる脂質とのモル比は、約１０：０～約１：９、約４：１～約１：２、または約３：１～約１：１である。特定の実施形態では、モル比は、約３：１、約２．７５：１、約２．５：１、約２．２５：１、約２：１、約１．７５：１、約１．５：１、約１．２５：１、または約１：１であり得る。例示的な実施形態では、少なくとも１つのカチオン性脂質と少なくとも１つのさらなる脂質とのモル比は、約２：１である。
本明細書に記載のＲＮＡリポプレックス粒子は、一実施形態では、約２００ｎｍ～約１０００ｎｍ、約２００ｎｍ～約８００ｎｍ、約２５０ｎｍ～約７００ｎｍ、約４００ｎｍ～約６００ｎｍ、約３００ｎｍ～約５００ｎｍ、または約３５０ｎｍ～約４００ｎｍの範囲の平均直径を有する。特定の実施形態では、ＲＮＡリポプレックス粒子は、約２００ｎｍ、約２２５ｎｍ、約２５０ｎｍ、約２７５ｎｍ、約３００ｎｍ、約３２５ｎｍ、約３５０ｎｍ、約３７５ｎｍ、約４００ｎｍ、約４２５ｎｍ、約４５０ｎｍ、約４７５ｎｍ、約５００ｎｍ、約５２５ｎｍ、約５５０ｎｍ、約５７５ｎｍ、約６００ｎｍ、約６２５ｎｍ、約６５０ｎｍ、約７００ｎｍ、約７２５ｎｍ、約７５０ｎｍ、約７７５ｎｍ、約８００ｎｍ、約８２５ｎｍ、約８５０ｎｍ、約８７５ｎｍ、約９００ｎｍ、約９２５ｎｍ、約９５０ｎｍ、約９７５ｎｍ、または約１０００ｎｍの平均直径を有する。一実施形態では、ＲＮＡリポプレックス粒子は、約２５０ｎｍ～約７００ｎｍの範囲の平均直径を有する。別の実施形態では、ＲＮＡリポプレックス粒子は、約３００ｎｍ～約５００ｎｍの範囲の平均直径を有する。例示的な実施形態では、ＲＮＡリポプレックス粒子は、約４００ｎｍの平均直径を有する。
本開示のＲＮＡリポプレックス粒子の電荷は、少なくとも１つのカチオン性脂質に存在する電荷とＲＮＡに存在する電荷との合計である。電荷比は、少なくとも１つのカチオン性脂質に存在する正電荷とＲＮＡに存在する負電荷の比である。少なくとも１つのカチオン性脂質に存在する正電荷とＲＮＡに存在する負電荷の電荷比は、以下の式によって計算される：電荷比＝［（カチオン性脂質濃度（ｍｏｌ））＊（カチオン性脂質中の正電荷の総数）］／［（ＲＮＡ濃度（ｍｏｌ））＊（ＲＮＡ中の負電荷の総数）］。
生理的ｐＨでの本明細書に記載の脾臓標的化ＲＮＡリポプレックス粒子は、好ましくは、正電荷と負電荷の電荷比が約１．９：２～約１：２などの正味の負電荷を有する。特定の実施形態では、生理的ｐＨでのＲＮＡリポプレックス粒子における正電荷と負電荷の電荷比は、約１．９：２．０、約１．８：２．０、約１．７：２．０、約１．６：２．０、約１．５：２．０、約１．４：２．０、約１．３：２．０、約１．２：２．０、約１．１：２．０、または約１：２．０である。
延長ＰＫサイトカイン、特に本明細書に記載されるような延長ＰＫインターロイキンなどのサイトカインは、対象における標的器官または標的組織に送達され得、これは、前記標的器官または標的組織へのＲＮＡの選択的送達のための製剤中でサイトカインをコードするＲＮＡを対象に投与することを含む。
一実施形態では、標的器官はリンパ系、特に二次リンパ系器官、より具体的には脾臓であり、標的組織はリンパ系の組織、特に二次リンパ系器官の組織、より具体的には脾臓組織である。そのような標的組織へのサイトカインの送達は、特に、この器官または組織におけるサイトカインの存在が望ましい（例えば、免疫応答を誘導するために、特にサイトカインがＴ細胞プライミング中に必要とされる場合、または常在免疫細胞の活性化のために）が、サイトカインが全身的に、特に有意な量で存在することは望ましくない（例えば、サイトカインが全身毒性を有するため）場合に好ましい。適切なサイトカインの特に好ましい例は、Ｔ細胞プライミングに関与するサイトカインである。
対象の標的器官または標的組織へのサイトカインの送達の別の実施形態では、標的器官は肝臓であり、標的組織は肝臓組織である。そのような標的組織へのサイトカインの送達は、特に、この器官もしくは組織におけるサイトカインの存在が望ましい場合、および／または大量のサイトカインを発現することが望ましい場合、および／またはサイトカインの全身的な存在、特に有意な量での存在が望ましいかもしくは必要とされる場合に好ましい。
一実施形態では、サイトカインをコードするＲＮＡは、肝臓を標的とするための製剤中で投与される。そのような製剤は本明細書に記載されている。適切なサイトカインの例には、ＩＬ２、ＩＬ７またはＩＬ２１、その断片および変異体、ならびに本明細書に記載されるような延長ＰＫサイトカインなどの、これらのサイトカイン、断片および変異体の融合タンパク質が含まれる。適切なサイトカインの特に好ましい例は、Ｔ細胞の増殖および／または維持に関与するサイトカインである。
ＲＮＡ送達システムは、肝臓に対する固有の選択性を有する。これは、脂質ベースの粒子、カチオン性および中性ナノ粒子、特にリポソーム、ナノミセルおよびバイオコンジュゲートの親油性リガンドなどの脂質ナノ粒子に関係する。肝臓蓄積は、肝血管系の不連続な性質または脂質代謝（リポソームおよび脂質もしくはコレステロールコンジュゲート）によって引き起こされる。
肝臓へのＲＮＡのインビボ送達のために、薬物送達システムを使用して、その分解を防止することによってＲＮＡを肝臓に輸送し得る。例えば、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）被覆表面とｍＲＮＡ含有コアからなるポリプレックスナノミセルは、ナノミセルが生理的条件下でＲＮＡの優れたインビボ安定性を提供するため、有用なシステムである。さらに、高密度のＰＥＧパリセードで構成されるポリプレックスナノミセル表面によって提供されるステルス特性は、宿主の免疫防御を有効に回避する。
医薬組成物
本明細書に記載の薬剤は、医薬組成物または医薬品で投与され得、任意の適切な医薬組成物の形態で投与され得る。
本発明の全ての態様の一実施形態では、ＣＡＲを発現するように遺伝子改変されたＴ細胞、サイトカインをコードする核酸、または抗原もしくはその変異体をコードする核酸などの本明細書に記載の成分は、一緒にまたは互いに別々に、薬学的に許容される担体を含み得、任意で１つ以上のアジュバント、安定剤などを含み得る医薬組成物で投与され得る。一実施形態では、医薬組成物は、治療的または予防的治療のため、例えば、本明細書に記載されるような癌疾患などの抗原が関与する疾患の治療または予防に使用するためのものである。
「医薬組成物」という用語は、好ましくは薬学的に許容される担体、希釈剤および／または賦形剤と共に、治療上有効な薬剤を含む製剤に関する。前記医薬組成物は、前記医薬組成物を対象に投与することによって疾患または障害を治療する、予防する、またはその重症度を軽減するのに有用である。医薬組成物は、当技術分野では医薬製剤としても公知である。
本開示の医薬組成物は、好ましくは１つ以上のアジュバントを含むか、または１つ以上のアジュバントと共に投与され得る。「アジュバント」という用語は、免疫応答を延長、増強または加速する化合物に関する。アジュバントは、油エマルジョン（例えばフロイントアジュバント）、無機化合物（ミョウバンなど）、細菌産物（百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）毒素など）、または免疫刺激複合体などの不均一な化合物の群を含む。アジュバントの例には、限定されることなく、ＬＰＳ、ＧＰ９６、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド、成長因子、およびモノカイン、リンホカイン、インターロイキン、ケモカインなどのサイトカインが含まれる。ケモカインは、ＩＬ１、ＩＬ２、ＩＬ３、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ８、ＩＬ９、ＩＬ１０、ＩＬ１２、ＩＦＮα、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＬＴ－ａであり得る。さらなる公知のアジュバントは、水酸化アルミニウム、フロイントアジュバント、またはＭｏｎｔａｎｉｄｅ（登録商標）ＩＳＡ５１などの油である。本開示で使用するための他の適切なアジュバントには、Ｐａｍ３Ｃｙｓなどのリポペプチドが含まれる。
本開示による医薬組成物は、一般に「薬学的に有効な量」および「薬学的に許容される製剤」で適用される。
「薬学的に許容される」という用語は、医薬組成物の活性成分の作用と相互作用しない物質の非毒性を指す。
「薬学的に有効な量」または「治療有効量」という用語は、単独でまたはさらなる用量と共に、所望の反応または所望の効果を達成する量を指す。特定の疾患の治療の場合、所望の反応は、好ましくは疾患の経過の阻害に関する。これは、疾患の進行を遅くすること、特に疾患の進行を中断または逆転させることを含む。疾患の治療における所望の反応はまた、前記疾患または前記状態の発症の遅延または発症の予防であり得る。本明細書に記載の組成物の有効量は、治療される状態、疾患の重症度、年齢、生理学的状態、サイズおよび体重を含む患者の個々のパラメータ、治療の期間、付随する治療の種類（存在する場合）、特定の投与経路ならびに同様の因子に依存する。したがって、本明細書に記載の組成物の投与量は、そのような様々なパラメータに依存し得る。患者の反応が初期用量では不十分である場合、より高い用量（または異なる、より局所的な投与経路によって達成される効果的により高い用量）を使用し得る。
本開示の医薬組成物は、塩、緩衝剤、防腐剤、および任意で他の治療薬を含み得る。一実施形態では、本開示の医薬組成物は、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤および／または賦形剤を含む。
本開示の医薬組成物で使用するための適切な防腐剤には、限定されることなく、塩化ベンザルコニウム、クロロブタノール、パラベンおよびチメロサールが含まれる。
本明細書で使用される「賦形剤」という用語は、本開示の医薬組成物中に存在し得るが、活性成分ではない物質を指す。賦形剤の例には、限定されることなく、担体、結合剤、希釈剤、潤滑剤、増粘剤、界面活性剤、防腐剤、安定剤、乳化剤、緩衝剤、香味剤、または着色剤が含まれる。
「希釈剤」という用語は、希釈するおよび／または希薄にする薬剤に関する。さらに、「希釈剤」という用語には、流体、液体もしくは固体の懸濁液および／または混合媒体のいずれか１つ以上が含まれる。適切な希釈剤の例には、エタノール、グリセロールおよび水が含まれる。
「担体」という用語は、医薬組成物の投与を容易にする、増強するまたは可能にするために活性成分が組み合わされる、天然、合成、有機、無機であり得る成分を指す。本明細書で使用される担体は、対象への投与に適した１つ以上の適合性の固体もしくは液体充填剤、希釈剤または封入物質であり得る。適切な担体には、限定されることなく、滅菌水、リンゲル液、乳酸リンゲル液、滅菌塩化ナトリウム溶液、等張食塩水、ポリアルキレングリコール、水素化ナフタレンおよび、特に生体適合性ラクチドポリマー、ラクチド／グリコリドコポリマーまたはポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーが含まれる。一実施形態では、本開示の医薬組成物は等張食塩水を含む。
治療的使用のための薬学的に許容される担体、賦形剤または希釈剤は、製薬分野で周知であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ'ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．（Ａ．Ｒ Ｇｅｎｎａｒｏ ｅｄｉｔ．１９８５）に記載されている。
医薬担体、賦形剤または希釈剤は、意図される投与経路および標準的な薬務に関して選択することができる。
一実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、静脈内、動脈内、皮下、皮内または筋肉内に投与され得る。ある実施形態では、医薬組成物は、局所投与または全身投与用に製剤化される。全身投与は、胃腸管を介した吸収を含む経腸投与、または非経口投与を含み得る。本明細書で使用される場合、「非経口投与」は、静脈内注射などによる、胃腸管を介する以外の任意の方法での投与を指す。好ましい実施形態では、医薬組成物は全身投与用に製剤化される。別の好ましい実施形態では、全身投与は静脈内投与によるものである。
本発明の全ての態様の一実施形態では、サイトカインをコードするか、または抗原もしくはその変異体をコードする核酸を全身投与する。本発明の全ての態様の一実施形態では、抗原またはその変異体をコードする核酸の全身投与後、脾臓における抗原またはその変異体の発現が起こる。本発明の全ての態様の一実施形態では、抗原またはその変異体をコードする核酸の全身投与後、抗原提示細胞、好ましくはプロフェッショナル抗原提示細胞における抗原またはその変異体の発現が起こる。一実施形態では、抗原提示細胞は、樹状細胞、マクロファージおよびＢ細胞からなる群より選択される。本発明の全ての態様の一実施形態では、抗原またはその変異体をコードする核酸の全身投与後、肺および／または肝臓における抗原またはその変異体の発現は、全く起こらないかまたは本質的に起こらない。本発明の全ての態様の一実施形態では、抗原またはその変異体をコードする核酸の全身投与後、脾臓における抗原またはその変異体の発現は、肺における発現量の少なくとも５倍である。
本明細書で使用される「同時投与」という用語は、異なる化合物または組成物（例えば、インターロイキンをコードするＲＮＡおよび抗原またはその変異体をコードするＲＮＡ）を同じ患者に同時に、本質的に同時に、または連続的に投与する方法を意味する。投与が同時に行われる場合、異なる化合物または組成物が同じ組成物内で投与される必要はない。
治療
本明細書に記載の薬剤、組成物および方法は、疾患、例えば、抗原を発現する疾患細胞の存在を特徴とする疾患を有する対象を治療するために使用することができる。特に好ましい疾患は癌疾患である。例えば、抗原がウイルスに由来する場合、薬剤、組成物および方法は、前記ウイルスによって引き起こされるウイルス性疾患の治療に有用であり得る。抗原が腫瘍抗原である場合、薬剤、組成物および方法は、癌細胞が前記腫瘍抗原を発現する癌疾患の治療に有用であり得る。
一実施形態では、本開示は、対象において免疫応答を誘導するための方法に関する。例示的な実施形態では、免疫応答は癌に対するものである。
「疾患」という用語は、個体の身体に影響を及ぼす異常な状態を指す。疾患はしばしば、特定の症状および徴候に関連する医学的状態として解釈される。疾患は、感染症などの外部からの要因によって引き起こされ得るか、または自己免疫疾患などの内部機能不全によって引き起こされ得る。ヒトでは、「疾患」はしばしば、罹患した個人に疼痛、機能障害、苦痛、社会的な問題、もしくは死を引き起こす、または個人と接触する人々に同様の問題を引き起こす状態を指すためにより広く使用される。このより広い意味では、疾患は時に、損傷、無力、障害、症候群、感染、孤発症状、逸脱した挙動、および構造と機能の非定型の変化を含むが、他の状況および他の目的では、これらは区別可能なカテゴリと見なされ得る。多くの疾患を患い、それと共に生活することは、人生観および人格を変える可能性があるため、疾患は通常、身体的だけでなく感情的にも個体に影響を及ぼす。
本文脈において、「治療」、「治療する」または「治療的介入」という用語は、疾患または障害などの状態と闘うことを目的とした対象の管理およびケアに関する。この用語は、症状もしくは合併症を緩和するため、疾患、障害もしくは状態の進行を遅らせるため、症状および合併症を緩和もしくは軽減するため、ならびに／または疾患、障害もしくは状態を治癒もしくは除去するため、ならびに状態を予防するための治療上有効な化合物の投与などの、対象が罹患している所与の状態に対するあらゆる範囲の治療を含むことを意図しており、予防は、疾患、状態または障害と闘う目的での個体の管理およびケアとして理解されるべきであり、症状または合併症の発症を防止するための活性化合物の投与を含む。
「治療的治療」という用語は、個体の健康状態を改善する、および／または寿命を延長（増加）させる任意の治療に関する。前記治療は、個体における疾患を排除し、個体における疾患の発症を停止もしくは遅延させ、個体における疾患の発症を阻害もしくは遅延させ、個体における症状の頻度もしくは重症度を低下させ、および／または現在疾患を有しているかもしくは以前に有していたことがある個体における再発を減少させ得る。
「予防的治療」または「防止的治療」という用語は、個体において疾患が発生するのを防ぐことを目的とした任意の治療に関する。「予防的治療」または「防止的治療」という用語は、本明細書では交換可能に使用される。
「個体」および「対象」という用語は、本明細書では交換可能に使用される。これらは、疾患または障害（例えば癌）に罹患し得るかまたは罹患しやすいが、疾患または障害を有していてもよくまたは有していなくてもよいヒトまたは別の哺乳動物（例えばマウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ウマまたは霊長動物）を指す。多くの実施形態では、個体はヒトである。特に明記されない限り、「個体」および「対象」という用語は特定の年齢を示すものではなく、したがって成人、高齢者、子供、および新生児を包含する。本開示の実施形態では、「個体」または「対象」は「患者」である。
「患者」という用語は、治療のための個体または対象、特に罹患した個体または対象を意味する。
本開示の一実施形態では、目的は、腫瘍抗原を発現する癌細胞などの抗原を発現する疾患細胞に対する免疫応答を提供し、腫瘍抗原などの抗原を発現する細胞が関与する癌疾患などの疾患を治療することである。
治療的または部分的もしくは完全に防御的であり得る、抗原に対する免疫応答が誘発され得る。本明細書に記載の医薬組成物は、免疫応答を誘導または増強するために適用可能である。したがって、本明細書に記載の医薬組成物は、抗原が関与する疾患の予防的および／または治療的治療において有用である。
本明細書で使用される場合、「免疫応答」は、抗原または抗原を発現する細胞に対する統合された身体応答を指し、細胞性免疫応答および／または体液性免疫応答を指す。細胞性免疫応答には、限定されないが、抗原を発現する細胞に対する細胞性応答が含まれる。そのような細胞は、細胞表面での抗原の発現、またはクラスＩもしくはクラスＩＩ ＭＨＣ分子による抗原の提示を特徴とし得る。細胞応答はＴリンパ球に関連し、Ｔリンパ球は、免疫応答を調節することによって中心的な役割を果たすヘルパーＴ細胞（ＣＤ４＋Ｔ細胞とも称される。）、または感染細胞もしくは癌細胞におけるアポトーシスを誘導するキラー細胞（細胞傷害性Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、もしくはＣＴＬとも称される。）として分類され得る。一実施形態では、本開示の医薬組成物を投与することは、１つ以上の腫瘍抗原を発現する癌細胞に対する抗腫瘍ＣＤ８＋Ｔ細胞応答の刺激を含む。
本開示は、防御的、防止的、予防的および／または治療的であり得る免疫応答を企図する。本明細書で使用される場合、「免疫応答を誘導する（または誘導すること）」は、特定の抗原に対する免疫応答が誘導前に存在しなかったことを示し得るか、または誘導前に特定の抗原に対する基礎レベルの免疫応答があり、これが誘導後に増強されたことを示し得る。したがって、「免疫応答を誘導する（または誘導すること）」には、「免疫応答を増強する（または増強すること）」が含まれる。
「免疫療法」という用語は、免疫応答を誘導または増強することによる疾患または状態の治療に関する。
「ワクチン接種」または「免疫」という用語は、例えば、治療的または予防的理由により、免疫応答を誘導する目的で個体に抗原を投与する工程を表す。
一実施形態では、本開示は、本明細書に記載のＲＮＡ粒子などのＲＮＡ製剤が投与される実施形態を想定する。
したがって、本開示は、抗原が関与する疾患、好ましくは癌疾患の予防的および／または治療的治療に使用するための、本明細書に記載のＲＮＡに関する。
「マクロファージ」という用語は、単球の分化によって産生される食細胞のサブグループを指す。炎症、免疫サイトカインまたは微生物産物によって活性化されるマクロファージは、マクロファージ内に外来病原体を非特異的に飲み込み、病原体の分解をもたらす加水分解および酸化攻撃によって死滅させる。分解されたタンパク質からのペプチドは、Ｔ細胞によって認識され得るマクロファージ細胞表面に表示され、Ｂ細胞表面の抗体と直接相互作用して、Ｔ細胞およびＢ細胞の活性化と免疫応答のさらなる刺激をもたらすことができる。マクロファージは抗原提示細胞のクラスに属する。一実施形態では、マクロファージは脾臓マクロファージである。
「樹状細胞」（ＤＣ）という用語は、抗原提示細胞のクラスに属する食細胞の別のサブタイプを指す。一実施形態では、樹状細胞は造血骨髄前駆細胞に由来する。これらの前駆細胞は、最初は未成熟な樹状細胞に変化する。これらの未成熟細胞は、高い食作用活性と低いＴ細胞活性化能を特徴とする。未成熟な樹状細胞は、ウイルスおよび細菌などの病原体の周囲環境を絶えずサンプリングしている。それらは、提示可能な抗原と接触すると、活性化されて成熟した樹状細胞になり、脾臓またはリンパ節に移動し始める。未成熟樹状細胞は病原体を貪食し、それらのタンパク質を小さな断片に分解し、成熟すると、ＭＨＣ分子を使用してそれらの断片を細胞表面に提示する。同時に、ＣＤ８０、ＣＤ８６およびＣＤ４０などのＴ細胞活性化の共受容体として機能する細胞表面受容体を上方制御し、Ｔ細胞を活性化するそれらの能力を大幅に増強する。それらはまた、樹状細胞が血流を通って脾臓に、またはリンパ系を通ってリンパ節に移動するように誘導する走化性受容体であるＣＣＲ７を上方制御する。ここで、それらは抗原提示細胞として機能し、非抗原特異的共刺激シグナルと共に、抗原を提示することによってヘルパーＴ細胞およびキラーＴ細胞ならびにＢ細胞を活性化する。したがって、樹状細胞は、Ｔ細胞またはＢ細胞関連の免疫応答を積極的に誘導することができる。一実施形態では、樹状細胞は脾臓樹状細胞である。
「抗原提示細胞」（ＡＰＣ）という用語は、その細胞表面上に（またはその細胞表面で）少なくとも１つの抗原または抗原性断片を表示、獲得、および／または提示することができる様々な細胞の１つである。抗原提示細胞は、プロフェッショナル抗原提示細胞と非プロフェッショナル抗原提示細胞とに区別することができる。
「プロフェッショナル抗原提示細胞」という用語は、ナイーブＴ細胞との相互作用に必要な主要組織適合遺伝子複合体クラスＩＩ（ＭＨＣクラスＩＩ）分子を構成的に発現する抗原提示細胞に関する。Ｔ細胞が抗原提示細胞の膜上のＭＨＣクラスＩＩ分子複合体と相互作用する場合、抗原提示細胞は、Ｔ細胞の活性化を誘導する共刺激分子を産生する。プロフェッショナル抗原提示細胞は、樹状細胞およびマクロファージを含む。
「非プロフェッショナル抗原提示細胞」という用語は、ＭＨＣクラスＩＩ分子を構成的には発現しないが、インターフェロンγなどのある種のサイトカインによる刺激を受けると発現する抗原提示細胞に関する。例示的な非プロフェッショナル抗原提示細胞には、線維芽細胞、胸腺上皮細胞、甲状腺上皮細胞、グリア細胞、膵臓ベータ細胞または血管内皮細胞が含まれる。
「抗原プロセシング」は、抗原の、前記抗原の断片であるプロセシング産物への分解（例えば、タンパク質のペプチドへの分解）、および抗原提示細胞などの細胞による特定のＴ細胞への提示のためのＭＨＣ分子とこれらの断片の１つ以上との会合（例えば結合による。）を指す。
「抗原が関与する疾患」、「抗原を発現する細胞が関与する疾患」という用語または同様の用語は、抗原が関係する任意の疾患、例えば抗原の存在を特徴とする疾患を指す。疾患は、感染症、または癌疾患、または単に癌であり得る。上記のように、抗原は、腫瘍関連抗原、ウイルス抗原、または細菌抗原などの疾患関連抗原であり得る。好ましくは、抗原が関与する疾患は、好ましくは細胞表面に抗原を発現する細胞が関与する疾患である。
「感染症」という用語は、個体から個体へ、または生物から生物へと伝染する可能性があり、微生物因子によって引き起こされる任意の疾患（例えば普通の風邪）を指す。感染症は当技術分野で公知であり、例えば、ウイルス性疾患、細菌性疾患、または寄生虫性疾患が含まれ、これらの疾患は、それぞれウイルス、細菌、および寄生虫によって引き起こされる。これに関して、感染症は、例えば、肝炎、性感染症（例えばクラミジアまたは淋病）、結核、ＨＩＶ／後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、ジフテリア、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、コレラ、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）、鳥インフルエンザ、およびインフルエンザであり得る。
「癌疾患」または「癌」という用語は、典型的には無秩序な細胞増殖を特徴とする個体の生理学的状態を指すかまたは表す。癌の例には、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、および白血病が含まれるが、これらに限定されない。より具体的には、そのような癌の例には、骨癌、血液癌、肺癌、肝臓癌、膵臓癌、皮膚癌、頭頸部癌、皮膚または眼内黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門領域の癌、胃癌、結腸癌、乳癌、前立腺癌、子宮癌、性器および生殖器の癌、ホジキン病、食道癌、小腸癌、内分泌系の癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟部組織肉腫、膀胱癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、神経外胚葉癌、脊髄軸腫瘍、神経膠腫、髄膜腫、および下垂体腺腫が含まれる。本開示による「癌」という用語は、癌転移も含む。
癌治療における併用戦略は、結果として生じる相乗効果のために望ましい場合があり、これは、単剤療法アプローチの影響よりもかなり強力であり得る。一実施形態では、医薬組成物は免疫療法剤と共に投与される。本明細書で使用される場合、「免疫療法剤」は、特定の免疫応答および／または免疫エフェクタ機能（１つまたは複数）の活性化に関与し得る任意の薬剤に関する。本開示は、免疫療法剤としての抗体の使用を企図する。理論に拘束されることを望むものではないが、抗体は、アポトーシスを誘導する、シグナル伝達経路の成分をブロックする、または腫瘍細胞の増殖を阻害することを含む、様々な機構を通して癌細胞に対する治療効果を達成することができる。ある実施形態では、抗体はモノクローナル抗体である。モノクローナル抗体は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を介して細胞死を誘導し得るか、または補体タンパク質に結合して、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）として公知の直接的な細胞毒性をもたらし得る。本開示と組み合わせて使用し得る抗癌抗体および潜在的な抗体標的（括弧内）の非限定的な例には、アバゴボマブ（ＣＡ－１２５）、アブシキシマブ（ＣＤ４１）、アデカツムマブ（ＥｐＣＡＭ）、アフツズマブ（ＣＤ２０）、アラシズマブペゴル（ＶＥＧＦＲ２）、アルツモマブペンテテート（ＣＥＡ）、アマツキシマブ（ＭＯＲＡｂ－００９）、アナツモマブマフェナトクス（ＴＡＧ－７２）、アポリズマブ（ＨＬＡ－ＤＲ）、アルシツモマブ（ＣＥＡ）、アテゾリズマブ（ＰＤ－Ｌ１）、バビツキシマブ（ホスファチジルセリン）、ベクツモマブ（ＣＤ２２）、ベリムマブ（ＢＡＦＦ）、ベバシズマブ（ＶＥＧＦ－Ａ）、ビバツズマブメルタンシン（ＣＤ４４ ｖ６）、ブリナツモマブ（ＣＤ１９）、ブレンツキシマブベドチン（ＣＤ３０ ＴＮＦＲＳＦ８）、カンツズマブメルタンシン（ムチンＣａｎＡｇ）、カンツズマブラブタンシン（ＭＵＣ１）、カプロマブペンデチド（前立腺癌細胞）、カルルマブ（ＣＮＴ０８８８）、カツマキソマブ（ＥｐＣＡＭ、ＣＤ３）、セツキシマブ（ＥＧＦＲ）、シタツズマブボガトクス（ＥｐＣＡＭ）、シクスツムマブ（ＩＧＦ－１受容体）、クローディキシマブ（クローディン）、クリバツズマブテトラキセタン（ＭＵＣ１）、コナツムマブ（ＴＲＡＩＬ－Ｒ２）、ダセツズマブ（ＣＤ４０）、ダロツズマブ（インスリン様増殖因子Ｉ受容体）、デノスマブ（ＲＡＮＫＬ）、デツモマブ（Ｂリンパ腫細胞）、ドロジツマブ（ＤＲ５）、エクロメキシマブ（ＧＤ３ガングリオシド）、エドレコロマブ（ＥｐＣＡＭ）、エロツズマブ（ＳＬＡＭＦ７）、エナバツズマブ（ＰＤＬ１９２）、エンシツキシマブ（ＮＰＣ－１Ｃ）、エプラツズマブ（ＣＤ２２）、エルツマキソマブ（ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＣＤ３）、エタラシズマブ（インテグリンανβ３）、ファルレツズマブ（葉酸受容体１）、ＦＢＴＡ０５（ＣＤ２０）、フィクラツズマブ（ＳＣＨ ９００１０５）、フィギツムマブ（ＩＧＦ－１受容体）、フランボツマブ（糖タンパク質７５）、フレソリムマブ（ＴＧＦ－β）、ガリキシマブ（ＣＤ８０）、ガニツマブ（ＩＧＦ－Ｉ）、ゲムツズマブオゾガマイシン（ＣＤ３３）、ゲボキズマブ（ＩＬΙβ）、ギレンツキシマブ（炭酸脱水酵素９（ＣＡ－ＩＸ））、グレムバツムマブベドチン（ＧＰＮＭＢ）、イブリツモマブチウキセタン（ＣＤ２０）、イクルクマブ（ＶＥＧＦＲ－１）、イゴボマ（ＣＡ－１２５）、インダツキシマブラブタンシン（ＳＤＣ１）、インテツムマブ（ＣＤ５１）、イノツズマブオゾガマイシン（ＣＤ２２）、イピリムマブ（ＣＤ１５２）、イラツムマブ（ＣＤ３０）、ラベツズマブ（ＣＥＡ）、レクサツムマブ（ＴＲＡＩＬ－Ｒ２）、リビビルマブ（Ｂ型肝炎表面抗原）、リンツズマブ（ＣＤ３３）、ロルボツズマブメルタンシン（ＣＤ５６）、ルカツムマブ（ＣＤ４０）、ルミリキシマブ（ＣＤ２３）、マパツムマブ（ＴＲＡＩＬ－Ｒ１）、マツズマブ（ＥＧＦＲ）、メポリズマブ（ＩＬ５）、ミラツズマブ（ＣＤ７４）、ミツモマブ（ＧＤ３ガングリオシド）、モガムリズマブ（ＣＣＲ４）、モキセツモマブパスドトクス（ＣＤ２２）、ナコロマブタフェナトクス（Ｃ２４２抗原）、ナプツモマブエスタフェナトクス（５Ｔ４）、ナマツマブ（ＲＯＮ）、ネシツムマブ（ＥＧＦＲ）、ニモツズマブ（ＥＧＦＲ）、ニボルマブ（ＩｇＧ４）、オファツムマブ（ＣＤ２０）、オララツマブ（ＰＤＧＦ－Ｒ ａ）、オナルツズマブ（ヒト散乱因子受容体キナーゼ）、オポルツズマブモナトクス（ＥｐＣＡＭ）、オレゴボマブ（ＣＡ－１２５）、オキセルマブ（ＯＸ－４０）、パニツムマブ（ＥＧＦＲ）、パトリツマブ（ＨＥＲ３）、ペムツモマ（ＭＵＣ１）、ペルツズマ（ＨＥＲ２／ｎｅｕ）、ピンツモマブ（腺癌抗原）、プリツムマブ（ビメンチン）、ラコツモマブ（Ｎ－グリコリルノイラミン酸）、ラドレツマブ（フィブロネクチンエクストラドメインＢ）、ラフィビルマブ（狂犬病ウイルス糖タンパク質）、ラムシルマブ（ＶＥＧＦＲ２）、リロツムマブ（ＨＧＦ）、リツキシマブ（ＣＤ２０）、ロバツムマブ（ＩＧＦ－１受容体）、サマリズマブ（ＣＤ２００）、シブロツズマブ（ＦＡＰ）、シルツキシマブ（ＩＬ６）、タバルマブ（ＢＡＦＦ）、タカツズマブテトラキセタン（α－フェトプロテイン）、タプリツモマブパプトクス（ＣＤ１９）、テナツモマブ（テネイシンＣ）、テプロツムマブ（ＣＤ２２１）、チシリムマブ（ＣＴＬＡ－４）、ティガツズマブ（ＴＲＡＩＬ－Ｒ２）、ＴＮＸ－６５０（ＩＬ１３）、トシツモマブ（ＣＤ２０）、トラスツズマブ（ＨＥＲ２／ｎｅｕ）、ＴＲＢＳ０７（ＧＤ２）、トレメリムマブ（ＣＴＬＡ－４）、ツコツズマブセルモロイキン（ＥｐＣＡＭ）、ウブリツキシマブ（ＭＳ４Ａ１）、ウレルマブ（４－１ＢＢ）、ボロシキシマブ（インテグリンα５β１）、ボツムマブ（腫瘍抗原ＣＴＡＡ １６．８８）、ザルツムマブ（ＥＧＦＲ）、およびザノリムマブ（ＣＤ４）が含まれる。
本明細書で参照される文書および試験の引用は、前述のいずれかが関連する先行技術であることの承認を意図するものではない。これらの文書の内容に関する全ての記述は、出願人が入手できる情報に基づいており、これらの文書の内容の正確さについての承認を構成するものではない。
以下の説明は、当業者が様々な実施形態を作成および使用することを可能にするために提示される。特定の機器、技術、および用途の説明は、例としてのみ提供される。本明細書に記載される例に対する様々な修正は、当業者には容易に明らかであり、本明細書で定義される一般原理は、様々な実施形態の精神および範囲から逸脱することなく他の例および用途に適用され得る。したがって、様々な実施形態は、本明細書で説明され、示される例に限定されることを意図するものではなく、特許請求の範囲と一致する範囲を与えられるべきである。
以下、参考形態の例を付記する。
１． 対象において免疫応答を誘導するための方法であって、
ａ．キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように遺伝子改変されたＴ細胞を前記対象に提供すること、および
ｂ．ＩＬ２またはＩＬ２をコードするポリヌクレオチドを前記対象に投与すること
を含む方法。
２． ＩＬ２またはＩＬ２をコードするポリヌクレオチドおよびさらなるサイトカインまたはさらなるサイトカインをコードするポリヌクレオチドを投与することを含む、１．に記載の方法。
３． 前記さらなるサイトカインが、ＩＬ７およびＩＬ２１からなる群より選択される、２．に記載の方法。
４． ＩＬ２またはＩＬ２をコードするポリヌクレオチドおよびＩＬ７またはＩＬ７をコードするポリヌクレオチドを投与することを含む、１．～３．のいずれか一つに記載の方法。
５． Ｌ２またはＩＬ２をコードするポリヌクレオチドおよびＩＬ２１またはＩＬ２１をコードするポリヌクレオチドを投与することを含む、１．～３．のいずれか一つに記載の方法。
６． ＩＬ２をコードする前記ポリヌクレオチドがＲＮＡであり、任意でさらなるサイトカインをコードする前記ポリヌクレオチドがＲＮＡである、１．～５．のいずれか一つに記載の方法。
７． ＣＡＲを発現するように遺伝子改変された前記Ｔ細胞が、ＣＡＲを発現するように遺伝子改変された前記Ｔ細胞を投与することによって、またはＣＡＲを発現するように遺伝子改変された前記Ｔ細胞を前記対象において生成することによって、前記対象に提供される、１．～６．のいずれか一つに記載の方法。
８． 抗原もしくはその変異体、または前記抗原もしくは変異体をコードするポリヌクレオチドを前記対象に投与することをさらに含み、ＣＡＲを発現するように遺伝子改変された前記Ｔ細胞が前記抗原を標的とし、前記免疫応答が、前記抗原を発現する標的細胞集団または標的組織に対する免疫応答である、１．～７．のいずれか一つに記載の方法。
９． 前記抗原または変異体をコードする前記ポリヌクレオチドがＲＮＡである、８．に記載の方法。
１０． 対象において免疫応答を誘導するための方法であって、
ａ．キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように遺伝子改変されたＴ細胞を前記対象に提供すること、および
ｂ．ＩＬ２をコードするＲＮＡを前記対象に投与すること
を含む方法。
１１． ＩＬ２をコードするＲＮＡおよびさらなるサイトカインをコードするＲＮＡを投与することを含む、１０．に記載の方法。
１２． 前記さらなるサイトカインが、ＩＬ７およびＩＬ２１からなる群より選択される、１１．に記載の方法。
１３． ＩＬ２をコードするＲＮＡおよびＩＬ７をコードするＲＮＡを投与することを含む、１０．～１２．のいずれか一つに記載の方法。
１４． ＩＬ２をコードするＲＮＡおよびＩＬ２１をコードするＲＮＡを投与することを含む、１０．～１２．のいずれか一つに記載の方法。
１５． ＣＡＲを発現するように遺伝子改変された前記Ｔ細胞が、ＣＡＲを発現するように遺伝子改変された前記Ｔ細胞を投与することによって、またはＣＡＲを発現するように遺伝子改変された前記Ｔ細胞を前記対象において生成することによって、前記対象に提供される、１０．～１４．のいずれか一つに記載の方法。
１６． 抗原またはその変異体をコードするＲＮＡを前記対象に投与することをさらに含み、ＣＡＲを発現するように遺伝子改変された前記Ｔ細胞が前記抗原を標的とし、前記免疫応答が前記抗原を発現する標的細胞集団または標的組織に対する免疫応答である、１０．～１５．のいずれか一つに記載の方法。
１７． 前記免疫応答がＴ細胞媒介免疫応答である、１．～１６．のいずれか一つに記載の方法。
１８． 抗原の発現または発現上昇に関連する疾患、障害または状態を有する対象を治療するための方法であって、
ａ．前記抗原を標的とするキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように遺伝子改変されたＴ細胞を前記対象に提供すること、および
ｂ．ＩＬ２またはＩＬ２をコードするポリヌクレオチドを前記対象に投与すること
を含む方法。
１９． ＩＬ２またはＩＬ２をコードするポリヌクレオチドおよびさらなるサイトカインまたはさらなるサイトカインをコードするポリヌクレオチドを投与することを含む、１８．に記載の方法。
２０． 前記さらなるサイトカインが、ＩＬ７およびＩＬ２１からなる群より選択される、１９．に記載の方法。
２１． ＩＬ２またはＩＬ２をコードするポリヌクレオチドおよびＩＬ７またはＩＬ７をコードするポリヌクレオチドを投与することを含む、１８．～２０．のいずれか一つに記載の方法。
２２． Ｌ２またはＩＬ２をコードするポリヌクレオチドおよびＩＬ２１またはＩＬ２１をコードするポリヌクレオチドを投与することを含む、１８．～２０．のいずれか一つに記載の方法。
２３． ＩＬ２をコードする前記ポリヌクレオチドがＲＮＡであり、任意でさらなるサイトカインをコードする前記ポリヌクレオチドがＲＮＡである、１８．～２２．のいずれか一つに記載の方法。
２４． ＣＡＲを発現するように遺伝子改変された前記Ｔ細胞が、ＣＡＲを発現するように遺伝子改変された前記Ｔ細胞を投与することによって、またはＣＡＲを発現するように遺伝子改変された前記Ｔ細胞を前記対象において生成することによって、前記対象に提供される、１８．～２３．のいずれか一つに記載の方法。
２５． 前記抗原もしくはその変異体、または前記抗原もしくは変異体をコードするポリヌクレオチドを前記対象に投与することをさらに含む、１８．～２４．のいずれか一つに記載の方法。
２６． 前記抗原または変異体をコードする前記ポリヌクレオチドがＲＮＡである、２５．に記載の方法。
２７． 抗原の発現または発現上昇に関連する疾患、障害または状態を有する対象を治療するための方法であって、
ａ．前記抗原を標的とするキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように遺伝子改変されたＴ細胞を前記対象に提供すること、および
ｂ．ＩＬ２をコードするＲＮＡを前記対象に投与すること
を含む方法。
２８． ＩＬ２をコードするＲＮＡおよびさらなるサイトカインをコードするＲＮＡを投与することを含む、２７．に記載の方法。
２９． 前記さらなるサイトカインが、ＩＬ７およびＩＬ２１からなる群より選択される、２８．に記載の方法。
３０． ＩＬ２をコードするＲＮＡおよびＩＬ７をコードするＲＮＡを投与することを含む、２７．～２９．のいずれか一つに記載の方法。
３１． ＩＬ２をコードするＲＮＡおよびＩＬ２１をコードするＲＮＡを投与することを含む、２７．～２９．のいずれか一つに記載の方法。
３２． ＣＡＲを発現するように遺伝子改変された前記Ｔ細胞が、ＣＡＲを発現するように遺伝子改変された前記Ｔ細胞を投与することによって、またはＣＡＲを発現するように遺伝子改変された前記Ｔ細胞を前記対象において生成することによって、前記対象に提供される、２７．～３１．のいずれか一つに記載の方法。
３３． 前記抗原またはその変異体をコードするＲＮＡを前記対象に投与することをさらに含む、２７．～３２．のいずれか一つに記載の方法。
３４． 前記疾患、障害または状態が癌であり、前記抗原が腫瘍関連抗原である、１８．～３３．のいずれか一つに記載の方法。
３５． ＩＬ２が延長薬物動態（ＰＫ）ＩＬ２である、１．～３４．のいずれか一つに記載の方法。
３６． 前記延長ＰＫ ＩＬ２が融合タンパク質を含む、３５．に記載の方法。
３７． 前記融合タンパク質が、ＩＬ２部分と、血清アルブミン、免疫グロブリン断片、トランスフェリン、Ｆｎ３、およびそれらの変異体からなる群より選択される部分とを含む、３６．に記載の方法。
３８． 前記さらなるサイトカイン、特にＩＬ７またはＩＬ２１が、延長薬物動態（ＰＫ）サイトカイン、特に延長ＰＫ ＩＬ７または延長ＰＫ ＩＬ２１である、２．～９．、１１．～１７．、１９．～２６．および２８．～３７．のいずれか一つに記載の方法。
３９． 前記延長ＰＫサイトカイン、特に延長ＰＫ ＩＬ７または延長ＰＫ ＩＬ２１が融合タンパク質を含む、３８．に記載の方法。
４０． 前記融合タンパク質が、前記さらなるサイトカインの部分、特にＩＬ７部分またはＩＬ２１部分と、血清アルブミン、免疫グロブリン断片、トランスフェリン、Ｆｎ３、およびそれらの変異体からなる群より選択される部分とを含む、３９．に記載の方法。
４１． 前記血清アルブミンがマウス血清アルブミンまたはヒト血清アルブミンを含む、３７．～４０．のいずれか一つに記載の方法。
４２． 前記免疫グロブリン断片が免疫グロブリンＦｃドメインを含む、３７．～４１．のいずれか一つに記載の方法。
４３． 対象における癌を治療または予防するための方法であって、前記抗原が腫瘍関連抗原である、１．～４２．のいずれか一つに記載の方法。
４４． ａ．キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように遺伝子改変されたＴ細胞、および
ｂ．ＩＬ２またはＩＬ２をコードするポリヌクレオチド
を含む医薬製剤。
４５． ＩＬ２またはＩＬ２をコードするポリヌクレオチドおよびさらなるサイトカインまたはさらなるサイトカインをコードするポリヌクレオチドを含む、４４．に記載の医薬製剤。
４６． 前記さらなるサイトカインが、ＩＬ７およびＩＬ２１からなる群より選択される、４５．に記載の医薬製剤。
４７． ＩＬ２またはＩＬ２をコードするポリヌクレオチドおよびＩＬ７またはＩＬ７をコードするポリヌクレオチドを含む、４４．～４６．のいずれか一つに記載の医薬製剤。
４８． ＩＬ２またはＩＬ２をコードするポリヌクレオチドおよびＩＬ２１またはＩＬ２１をコードするポリヌクレオチドを含む、４４．～４６．のいずれか一つに記載の医薬製剤。
４９． ＩＬ２をコードする前記ポリヌクレオチドがＲＮＡであり、任意でさらなるサイトカインをコードする前記ポリヌクレオチドがＲＮＡである、４４．～４８．のいずれか一つに記載の医薬製剤。
５０． 抗原もしくはその変異体、または前記抗原もしくは変異体をコードするポリヌクレオチドをさらに含み、ＣＡＲを発現するように遺伝子改変された前記Ｔ細胞が前記抗原を標的とする、４４．～４９．のいずれか一つに記載の医薬製剤。
５１． 前記抗原または変異体をコードする前記ポリヌクレオチドがＲＮＡである、５０．に記載の医薬製剤。
５２． キットである、４４．～５１．のいずれか一つに記載の医薬製剤。
５３． ＣＡＲを発現するように遺伝子改変された前記Ｔ細胞、前記ＩＬ２もしくはＩＬ２をコードする前記ポリヌクレオチド、任意で前記さらなるサイトカインもしくはさらなるサイトカインをコードする前記ポリヌクレオチド、および任意で前記抗原もしくはその変異体、または前記抗原もしくは変異体をコードする前記ポリヌクレオチドを別々の容器中に含む、５２．に記載の医薬製剤。
５４． 癌を治療または予防するための前記医薬製剤の使用説明書をさらに含み、前記抗原が腫瘍関連抗原である、５２．または５３．に記載の医薬製剤。
５５． 医薬組成物である、４４．～５１．のいずれか一つに記載の医薬製剤。
５６． 前記医薬組成物が、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤および／または賦形剤をさらに含む、５５．に記載の医薬製剤。
５７． ａ．キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように遺伝子改変されたＴ細胞、および
ｂ．ＩＬ２をコードするＲＮＡ
を含む医薬製剤。
５８． ＩＬ２をコードするＲＮＡおよびさらなるサイトカインをコードするＲＮＡを含む、５７．に記載の医薬製剤。
５９． 前記さらなるサイトカインが、ＩＬ７およびＩＬ２１からなる群より選択される、５８．に記載の医薬製剤。
６０． ＩＬ２をコードするＲＮＡおよびＩＬ７をコードするＲＮＡを含む、５７．～５９．のいずれか一つに記載の医薬製剤。
６１． ＩＬ２をコードするＲＮＡおよびＩＬ２１をコードするＲＮＡを含む、５７．～６０．のいずれか一つに記載の医薬製剤。
６２． 抗原またはその変異体をコードするＲＮＡをさらに含み、ＣＡＲを発現するように遺伝子改変された前記Ｔ細胞が前記抗原を標的とする、５７．～６１．のいずれか一つに記載の医薬製剤。
６３． キットである、５７．～６２．のいずれか一つに記載の医薬製剤。
６４． ＣＡＲを発現するように遺伝子改変された前記Ｔ細胞、ＩＬ２をコードする前記ＲＮＡ、任意でさらなるサイトカインをコードする前記ＲＮＡ、および任意で抗原またはその変異体をコードする前記ＲＮＡを別々の容器中に含む、６３．に記載の医薬製剤。
６５． 癌を治療または予防するための前記医薬製剤の使用説明書をさらに含み、前記抗原が腫瘍関連抗原である、６３．または６４．に記載の医薬製剤。
６６． 医薬組成物である、５７．～６２．のいずれか一つに記載の医薬製剤。
６７． 前記医薬組成物が、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤および／または賦形剤をさらに含む、６６．に記載の医薬製剤。
６８． ＩＬ２が延長薬物動態（ＰＫ）ＩＬ２である、４４．～６７．のいずれか一つに記載の医薬製剤。
６９． 前記延長ＰＫ ＩＬ２が融合タンパク質を含む、６８．に記載の医薬製剤。
７０． 前記融合タンパク質が、ＩＬ２部分と、血清アルブミン、免疫グロブリン断片、トランスフェリン、Ｆｎ３、およびそれらの変異体からなる群より選択される部分とを含む、６９．に記載の医薬製剤。
７１． 前記さらなるサイトカインが延長薬物動態（ＰＫ）サイトカインである、４５．～５６．および５８．～７０．のいずれか一つに記載の医薬製剤。
７２． 前記延長ＰＫサイトカインが融合タンパク質を含む、７１．に記載の医薬製剤。
７３． 前記融合タンパク質が、サイトカイン部分と、血清アルブミン、免疫グロブリン断片、トランスフェリン、Ｆｎ３、およびそれらの変異体からなる群より選択される部分とを含む、７２．に記載の医薬製剤。
７４． 前記血清アルブミンがマウス血清アルブミンまたはヒト血清アルブミンを含む、７０．～７３．のいずれか一つに記載の医薬製剤。
７５． 前記免疫グロブリン断片が免疫グロブリンＦｃドメインを含む、７０．～７４．のいずれか一つに記載の医薬製剤。
７６． 医薬用途のための、４４．～７５．のいずれか一つに記載の医薬製剤。
７７． 前記医薬用途が、疾患または障害の治療的または予防的治療を含む、７６．に記載の医薬製剤。
７８． 前記抗原が腫瘍関連抗原である、対象における癌を治療または予防するための方法で使用するための、４４．～７７．のいずれか一つに記載の医薬製剤。
実施例：
方法：
動物
Ｃ５７ＢＬ／６ＢｒｄＣｒＨｓｄ－ＴｙｒｃマウスはＥｎｖｉｇｏ Ｌａｂｓから購入した。実験全体を通して、年齢（８～１０週齢）および性別（雄性または雌性）が一致する動物を使用した。コンジェニックＣ５７Ｂｌ／６－Ｔｈｙ１．１マウスをＢｉｏＮＴｅｃｈ ＡＧ，Ｇｅｒｍａｎｙの動物施設で飼育した。
ＣＡＲ構築物／ＣＡＲ Ｔ細胞
γ－レトロウイルス自己不活性化（ＳＩＮ）ベクターｐＥＳ．１２－６を使用して、内部真核生物プロモータである短いイントロンレス型のヒト伸長因子１－αプロモータ（ＥＦＳ－２１３／＋３１）の制御下で、マウスＴ細胞においてＣＬＤＮ６－ＣＡＲ－ＢＢｚ－Ｔ２Ａ－Ｌｕｃ－Ｔ２Ａ－ＧＦＰを安定に過剰発現させた。ベクター骨格は、５'－および３'－ＬＴＲにＲ領域およびＵ５領域のＭＬＶ野生型配列ならびにパッケージング領域（ψおよびψ＋）を含む。３'－ＬＴＲのＵ３領域中のエンハンサエレメントを除去し（ＣＡＡＴボックスを含む）、ＴＡＴＡボックス配列を、転写開始を妨げるように変異させた。望ましくないウイルスタンパク質の発現を防ぐために、ウッドチャック肝炎ウイルス（ＷＨＶ）の転写後調節エレメント（ＰＲＥ）の短縮型を使用する。ＣＬＤＮ６－ＣＡＲ－ＢＢｚは、ヒトＩｇＧのシグナル伝達ペプチド（配列番号１２）、重鎖（ＶＨ）（配列番号１３）と軽鎖（ＶＬ）（配列番号１５）の間に（Ｇ４Ｓ）３リンカー（配列番号１４）を有し、ＶＬの４６位にシステインからセリンへの置換を有するクローディン６特異的抗体ＩＭＡＢ２０６（Ｇａｎｙｍｅｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）の一本鎖Ｆｖ断片を含む。ＳｃＦｖ断片をヒトＣＤ８αヒンジおよび膜貫通領域（配列番号１６）に融合し、続いてヒト４－１ＢＢ（配列番号１７）およびヒトＣＤ３ζ（Ｑ１４Ｋ）（配列番号１８）シグナル伝達部分に融合する。ＣＡＲを、Ｔ２Ａリボソームスキップエレメント（配列番号１９）を用いて有効なホタルルシフェラーゼ（配列番号２０）およびｅＧＦＰ（配列番号２１）に連結し、形質導入したＴ細胞における示されたタンパク質の等モル産生を可能にする。
レトロウイルス遺伝子操作および養子Ｔ細胞移入のためのＣＡＲ Ｔ細胞の調製
ナイーブＣ５７Ｂｌ／６－Ｔｈｙ１．１＋の脾細胞を単離し、５ｎｇ／ｍＬの組換えヒト（ｒｈ）ＩＬ－７および５ｎｇ／ｍＬのｒｈ ＩＬ－１５（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）の存在下で、１：１のビーズ対Ｔ細胞比のＤｙｎａｂｅａｄｓ（商標）マウスＴアクチベータＣＤ３／ＣＤ２８（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）によって予備活性化した。マウス細胞の形質導入のために、ＭＬＶ－Ｅ偽型レトロウイルス上清を、ＲｅｔｒｏＮｅｃｔｉｎ（２μｇ／ｃｍ２）で被覆した非組織培養処理ウェルプレートに製造者の指示（Ｔａｋａｒａ Ｂｉｏ Ｉｎｃ．，Ｏｔｓｕ，Ｊａｐａｎ）に従って負荷し、結合を増加させるためにウイルス負荷および遠心分離（１，３００×ｇ、１５℃、１５分）のサイクルを３回繰り返した。予備活性化の２４時間後、０．５～０．６×１０６細胞／ｃｍ２をウイルス粒子被覆ウェル上にスピンダウンした（３００×ｇ、３７℃、１時間）。一晩培養した後、新たにウイルス粒子で被覆したプレートを用いてスピンダウン形質導入を繰り返した。予備活性化の７２時間後、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（商標）マウスＴアクチベータＣＤ３／ＣＤ２８を培養物から取り出し、５ｎｇ／ｍＬのｒｈ ＩＬ－７および５ｎｇ／ｍＬのｒｈ ＩＬ－１５の存在下で細胞を増殖させた。フィコール洗浄後、細胞をＰＢＳで２回洗浄して血清タンパク質を除去し、次いで、養子細胞移入（ＡＣＴ）用に調製した。コードされたＯＴ１－ＴＣＲまたはＣＬＤＮ６－ＣＡＲのいずれか、ならびに２Ａスプライスエレメント（Ｓｚｙｍｃｚａｋ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２２（５）：５８９－９４）を使用して別々に発現させた増強ホタルルシフェラーゼ（ｅｆｆＬｕｃ；Ｒａｂｉｎｏｖｉｃｈ ｅｔ ａｌ．（２００８）ＰＮＡＳ １０５（３８）：１４３４２－６）およびｅＧＦＰ（増強緑色蛍光タンパク質）レポータ遺伝子を含むｐＥＳ１２．６ベースのレトロウイルスベクターを形質導入に使用した。
インビトロ転写（ＩＶＴ）ｍＲＮＡの作製
サイトカイン－アルブミン融合タンパク質をコードするｍＲＮＡのインビトロ転写は、ｐＳＴ４－Ｔ７－ＧＧ－ＴＥＶ－ＭＣＳ－ＦＩ－Ａ３０ＬＡ７０プラスミド骨格および派生ＤＮＡ構築物に基づいた。これらのプラスミド構築物は、タバコエッチウイルス（ＴＥＶ）の５'リーダ配列、３'Ｆｌエレメント（Ｆはスプリットのアミノ末端エンハンサの１３６ヌクレオチド長の３'－ＵＴＲ断片であるｍＲＮＡであり、Ｉはミトコンドリアにコードされた１２Ｓ ＲＮＡの１４２ヌクレオチド長の断片であり、両方ともヒト（Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ）において同定されている；国際公開第２０１７／０６０３１４号）および１００ヌクレオチドのポリ（Ａ）尾部と、７０ヌクレオチド後にリンカーを含む。サイトカインおよび血清アルブミンコード配列は、ハツカネズミ（Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ）に由来し、得られたアミノ酸配列に変化は導入されなかった（マウス（ｍ）ＩＬ－２、配列番号５、ｍＩＬ－７、配列番号６およびｍＩＬ－２１、配列番号７）。コード化されるタンパク質は、Ｎ末端部分の天然シグナルペプチド（ＳＰ）であるＮ末端シグナルペプチドを備える。Ｎ末端部分のＳＰのみが維持され、さらなる部分については、成熟部分（ＳＰを含まないタンパク質）のみがコードされた。終止コドンは、ほとんどのＣ末端部分についてのみ維持された。構築物中のアルブミン部分とサイトカイン部分を、グリシンおよびセリン残基をコードする３０ヌクレオチド長のリンカー配列によって分離した。使用したアルブミン－サイトカイン融合タンパク質の配向は次の通りであった：アルブミン－リンカー－ｍＩＬ２（Ｎ末端からＣ末端へ連続する配列番号８、９および１０）、ｍＩＬ７－リンカー－アルブミン（Ｎ末端からＣ末端へ連続する配列番号６、９および１１）ならびにｍＩＬ２１－リンカー－アルブミン（Ｎ末端からＣ末端へ連続する配列番号７、９および１１の）。抗原をコードするｍＲＮＡのインビトロ転写は、ｐＳＴ１－Ｔ７－ＧＧ－ｈＡｇ－ＭＣＳ－２ｈＢｇ－Ａ３０ＬＡ７０プラスミド骨格および派生ＤＮＡ構築物に基づいた。これらのプラスミド構築物は、完全長ヒトＣＬＤＮ６またはニワトリオボアルブミンエピトープＳＩＩＮＦＥＫＬ（ＯｖａＩ；Ｋｒｅｉｔｅｒ ｅｔ ａｌ（２００８）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８０（１）：３０９－１８に記載されているようにさらに３'Ｓｅｃおよび５'ＴＭ１配列と隣接する。）の他に、５'ヒトα－グロビン、２つの連続する３'ヒトβ－グロビンＵＴＲおよび１００ヌクレオチドのポリ（Ａ）尾部と、７０ヌクレオチド後にリンカーを含む。Ｈｏｌｔｋａｍｐ Ｓ．ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｂｌｏｏｄ １０８（１３）：４００９－１７に記載されているように、抗原およびサイトカインをコードするｍＲＮＡをインビトロ転写によって生成した。後者を、通常のヌクレオシドウリジンを１－メチル－プソイドウリジンで置換することによってさらに修飾した。得られたサイトカインｍＲＮＡはキャップ１構造を備えており、二本鎖（ｄｓＲＮＡ）分子をセルロース精製によって枯渇させた。精製したｍＲＮＡをＨ２Ｏで溶出し、さらに使用するまで－８０℃で保存した。記載されている全てのｍＲＮＡ構築物のインビトロ転写は、ＢｉｏＮＴｅｃｈ ＲＮＡ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ ＧｍｂＨで実施された。
リポソーム製剤化抗原をコードするＩＶＴ ＲＮＡ（ＲＮＡ（ＬＩＰ））の生成
抗原をコードするＩＶＴ ＲＮＡとリポソームとの複合体化は、以前にＫｒａｎｚ ｅｔ ａｌ（２０１６）Ｎａｔｕｒｅ ５３４（７６０７）：３９６－４０１に記載された。カチオン性ＤＯＴＭＡとＲＮＡの１．３対２の電荷比を使用した。ＤＯＴＭＡに加えて、脂質画分は、ＤＯＰＥあたり２：１のＤＯＴＭＡのモル比でヘルパー脂質ＤＯＰＥを含む。
マウス実験
５×１０６個のγ－レトロウイルス形質導入ＣＡＲまたはＴＣＲコンジェニックＴｈｙ１．１＋Ｔ細胞を、免疫適格または中程度に全身照射された（２．５Ｇｙ－ＸＲＡＤ３２０）Ｃ５７ＢＬ／６ＢｒｄＣｒＨｓｄ－Ｔｙｒｃドナーマウスのいずれかに２００μＬで静脈内（ｉ．ｖ．）移入した。その後、ＡＣＴ後の様々な時点で、マウスに、１．３：２のＦ１２：ＲＮＡ比の抗原をコードするＲＮＡ（ＬＩＰ）を静脈内（ｉ．ｖ．）ワクチン接種した。示されている時点で、マウスを、ＴｒａｎｓＩＴ（Ｍｉｒｒｕｓ）または緩衝液のみを用いて製剤化した、１μｇのヌクレオシド修飾マウスアルブミン－サイトカイン融合タンパク質がコードされたｍＲＮＡで繰り返し処置した。末梢血提供および全身生物発光イメージングを示された時点で実施した。
インビボルシフェラーゼイメージング（ＢＬＩ）
ＣＡＲまたはＴＣＲ－ｅｆｆＬｕｃ－ＧＦＰ形質導入Ｔ細胞の増殖および分布を、ＩＶＩＳ Ｌｕｍｉｎａイメージングシステム（Ｃａｌｉｐｅｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用したインビボ生物発光イメージングによって評価した。簡単に説明すると、形質導入したＴ細胞の養子移入後の示されている時点で、Ｄ－ルシフェリンの水溶液（８０ｍｇ／ｋｇ体重；Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）をｉ．ｐ．注射した。５分後、放出された光子を定量化した（積分時間１分、ビニング８）。関心領域（ＲＯＩ）におけるインビボ生物発光を、ＩＶＩＳ Ｌｉｖｉｎｇ Ｉｍａｇｅ ４．０ソフトウェアを使用して全光束（光子／秒）として定量化した。動物内のルシフェラーゼ発現細胞に由来する透過光の強度をグレースケール画像として表し、黒色が最も弱く、白色から暗灰色が最も強い生物発光シグナルである。マウスのグレースケール参照画像をＬＥＤ低照度照明下で取得した。Ｌｉｖｉｎｇ Ｉｍａｇｅ ４．０ソフトウェアを使用して画像を重ね合わせた。
実施例１：選択した薬物動態延長γ鎖サイトカイン（ＩＬ－２／７）は、抗原接触時にインビボでＣＡＲ Ｔ細胞の反復増殖をもたらす。
通常、抗原接触時にＴ細胞の持続性を維持するために、ある種のサイトカイン環境が存在する必要がある。γ鎖サイトカイン、例えばＩＬ－２およびＩＬ－７は、Ｔ細胞の増殖および生存を増強することが示されている（例えば、Ｂｌａｔｔｍａｎ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９（５）：５４０－７、Ｆｒｙ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｔｒｅｎｄｓ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２（１０）：５６４－７１、Ｂｒａｄｌｅｙ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｔｒｅｎｄｓ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２６（３）：１７２－６、Ｊｉａｎｇ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｖ．１６（４－５）：５１３－３３）。しかしながら、ＩＬ－２などの組換えサイトカインの使用は、その短い半減期およびその用量依存性毒性によって制限されてきた（Ｖｉａｌ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｄｒｕｇ Ｓａｆ．７（６）：４１７－３３）。養子移入されたＴ細胞の限られたサイトカイン支持を克服するために、サイトカイン－アルブミン融合タンパク質をコードするｍＲＮＡ構築物を開発し、実際に、全身投与時にインビボでコードされたサイトカインの血清半減期を有意に増加させることができた。サイトカイン－アルブミン構築物の全身アベイラビリティは、それらがヌクレオシド修飾ｍＲＮＡにコードされている場合に延長される。
したがって、本発明者らは、二次リンパ器官のＡＰＣを選択的に標的とし、選択されたサイトカインを支持する、リポソームに製剤化されたＴＡＡ、例えばＣＬＤＮ６をコードするＲＮＡ（ＲＮＡ（ＬＩＰ））の組合せが、インビボでのＣＡＲ－Ｔ細胞の適切な反復増殖および持続性をもたらし得るかどうかという問いを投げかけた。
この概念を試験するために、γ－レトロウイルスで形質導入したＣＬＤＮ６－ＣＡＲ Ｔ細胞を、中程度に照射された（２．５Ｇｙ）マウスまたは免疫適格マウスのいずれかに養子移入した（それぞれ図１および図２）。それらのマウスＣＬＤＮ６－ＣＡＲ Ｔ細胞のインビボでの増殖および運命を可視化するために、本発明者らは、ウイルスＴ２Ａ配列によって分離された、同じＣＬＤＮ６ ＣＡＲをコードするレトロウイルスベクターでのルシフェラーゼとＧＦＰレポータの共発現を利用した（図１Ａ）。注目すべきことに、ＣＬＤＮ６－ＣＡＲの表面発現および抗原特異性は、ＣＡＲ形質導入マウスＴ細胞におけるルシフェラーゼとＧＦＰの共発現によって有意に影響されなかった（データは示していない）。
中程度に照射された（ＸＲＡＤ３２０で２．５Ｇｙ）アルビノＣ５７Ｂｌ／６マウスに、５×１０６個のＣＬＤＮ６－ＣＡＲレポータ形質導入コンジェニックＴｈｙ１．１＋マウスバルクＴ細胞（約２．５×１０８細胞／ｋｇ体重）を移植した。２０μｇのＣＬＤＮ６をコードするＲＮＡまたは対照ＲＮＡを脾臓標的化リポソームに製剤化し、養子ＣＡＲ－Ｔ移入の１日後にマウスに静脈内注射した。ＣＬＤＮ６ ＲＮＡ（ＬＩＰ）ワクチン接種と同時に、マウスに、ＴｒａｎｓＩＴで製剤化したアルブミン結合マウスＩＬ－２およびマウスＩＬ－７コードｍＲＮＡ（１μｇ／サイトカインＲＮＡ）またはモック対照（緩衝液）を腹腔内に投与した。処置を７日後に繰り返した。その後、示されている時点で、ＣＡＲ－Ｔの増殖および生体内分布を、マウスあたり１．６６ｍｇのＤ－ルシフェリン溶液の腹腔内投与によってインビボで追跡した。ＡＣＴの２４時間後、ほとんどのＣＡＲ－Ｔ細胞が既に脾臓で見出された。サイトカインの非存在下（モック）では、ＣＡＲ－Ｔ細胞における約２１倍の増加（１日目と比較して）が、ＡＣＴ後４日目の生物発光で検出されたようにＣＬＤＮ６－ＲＮＡ（ＬＩＰ）での処置によってのみ誘導された。ＣＬＤＮ６－ＲＮＡ（ＬＩＰ）による２回目のブーストは、１１日目に、１日目に測定されたベースライン発光と比較して、依然として１５倍高い発光強度をもたらした。ＴｒａｎｓＩＴで製剤化したアルブミン融合ＩＬ－２およびＩＬ－７コードｍＲＮＡを同時投与した場合、ＣＡＲ Ｔ細胞の増殖能が有意に増加した。最初のＲＮＡ（ＬＩＰ）処置後にＣＡＲ－Ｔ細胞の７５倍の増殖を達成することができ、２回目のＣＬＤＮ６ ＲＮＡ（ＬＩＰ）で最大１１４倍までさらに改善された（図１Ｃおよび図１Ｄ）。この効果は、単独またはサイトカイン－アルブミンをコードするＲＮＡと組み合わせたＣＬＤＮ６をコードするＲＮＡ（ＬＩＰ）での処置後に、ＣＬＤＮ６－ＣＡＲ Ｔ細胞を投与されたマウスで観察されたが、サイトカイン－アルブミンをコードするＲＮＡの存在下または非存在下のいずれでも、ＯｖａＩをコードする対照ＲＮＡ（ＬＩＰ）を投与されたそれぞれの対照群では観察されなかった。これらのデータは、ＣＡＲ－Ｔ細胞が、中程度に照射されたマウスにおいて高度に抗原特異的な方法で、インサイチュで成功裏に増殖できることを実証する。
ＣＡＲ Ｔ細胞が、中程度に照射されたマウスにおいて、サイトカインをコードするＲＮＡの存在下でそれぞれの抗原をコードするＲＮＡ（ＬＩＰ）を使用してインサイチュで反復増殖できることを実証した後、本発明者らは、この効果が免疫適格宿主でも達成され得るかどうかを調べた。しかしながら、リンパ球枯渇は、潜在的な感染症および敗血症などの化学療法に関連する周知の副作用およびリスクを含むいくつかの難点を有する（Ｂｒｅｎｔｊｅｎｓ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．１８（４）：６６６－８およびＲｏｂｂｉｎｓ ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２１（５）：１０１９－２７）。さらに、オンターゲットおよび／またはオフターゲット毒性の場合、養子移入されたＣＡＲ－Ｔ細胞の急速な増殖は致死的であり得る（Ｍｏｒｇａｎ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．１８（４）：８４３－５１）。この目的のために、ＣＬＤＮ６－ＣＡＲ形質導入マウスＴｈｙ１．１＋Ｔ細胞を移植した非照射アルビノＣ５７Ｂｌ／６マウスを上記のように処置した（図２Ａ）。最初の刺激ラウンド中のＩＬ－２およびＩＬ－７の全身的存在は、ＴｒａｎｓＩＴで製剤化されたサイトカイン－アルブミンをコードするＲＮＡの代わりに緩衝液（モック）を投与された対照群と比較して、ＣＬＤＮ６－ＲＮＡ（ＬＩＰ）ワクチン接種後のＣＬＤＮ６－ＣＡＲ Ｔ細胞の増殖に有意な影響を及ぼさない（４日目：増殖指数：モック１９２倍およびＩＬ－２／７：２２３倍）。しかし、ＩＬ－２／７サイトカインの非存在下では、ＣＡＲ Ｔ細胞集団は、最初のＣＬＤＮ６ ＲＮＡ（ＬＩＰ）媒介増殖後に強く収縮し、２回目の再増殖はできなかった。ＩＬ－２／ＩＬ－７－アルブミンをコードするＲＮＡの存在下でのみ、ＣＬＤＮ６－ＣＡＲ Ｔ細胞は免疫適格マウスにおいて繰り返し増殖することができ、数日間にわたって持続する（１１日目：増殖指数：モック：０．５倍およびＩＬ－２／７：７９倍）（図２Ｂおよび図２Ｃ）。
これらのデータは、ＲＮＡ（ＬＩＰ）技術を使用して患者における直接の制御されたＣＡＲ－Ｔ細胞増殖が実現可能であるという考えを強く支持するが、持続性のためには、細胞は、ＩＬ－２およびＩＬ－７などの好ましいサイトカイン環境を必要とし、これは、延長薬物動態γ鎖サイトカインをコードするＲＮＡの投与によって達成され得る。
実施例２：ＣＡＲ Ｔ細胞の反復増殖中のサイトカインアルブミン融合物の最適な組合せ。
いくつかのγ鎖サイトカインはＴ細胞の生存を積極的に支持し、抗原特異的な方法でＴ細胞の治療効果を支援するので（例えば、Ｍａｒｋｌｅｙ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｂｌｏｏｄ １１５（１７）：３５０８－１９、Ｈｅ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｊ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ．４：２４。）、本発明者らは、反復ＲＮＡ（ＬＩＰ）処置時のインビボでのＣＡＲ改変Ｔ細胞の増殖および持続性の支持効果を促進する観点から、ｍＩＬ－２、ｍＩＬ－７、ｍＩＬ－２１、およびＩＬ－２／７とＩＬ－２／２１の組合せをコードするヌクレオシド修飾ＲＮＡを比較した。
実施例１に記載したのと同様の方法で、ＣＬＤＮ６－ＣＡＲレポータ形質導入Ｔ細胞を移植した中程度に照射されたアルビノＣ５７Ｂｌ／６マウスに、リポソームに製剤化されたｈＣＬＤＮ６または対照をコードするＲＮＡを、ＴｒａｎｓＩＴで製剤化されたマウスアルブミン結合ｍＩＬ－２、ｍＩＬ－７、ｍＩＬ－２１をコードするｍＲＮＡをコードするＲＮＡ（１μｇ／サイトカインＲＮＡ）またはマウスアルブミンをコードするＲＮＡ（Ａｌｂ対照）の処置と同時にワクチン接種した。抗原／サイトカインカクテルを１週間の間隔で投与した（図３Ａ）。ＣＡＲ Ｔ細胞のインビボ増殖のピーク時（通常、ＲＮＡベースの処置の２～３日後に到達）に、生物発光強度を分析した（図３Ｂ）。ＩＬ－７およびＩＬ－２１単独の全身的存在は、アルブミン対照と比較して、反復ＲＮＡ（ＬＩＰ）処置時に抗原特異的ＣＡＲＴ増殖能の低下をもたらした。ＩＬ－２の同時処置は、ベースラインと比較した場合、最大１６４倍のＣＡＲ Ｔ細胞増殖をもたらした。しかしながら、ＣＡＲ Ｔ細胞のインビボ蓄積は、ＩＬ－２ ＲＮＡをそれぞれＩＬ－７（３回目の増殖後に最大２１４倍の増加）またはＩＬ－２１（３回目の増殖後に最大１４１倍の増加）と同時投与した場合にのみ達成することができた。インビボでのＣＡＲ Ｔ細胞の蓄積能力に加えて、養子移入された腫瘍反応性Ｔ細胞療法の臨床的成功もまた、インビボでのそれらの細胞の持続性と正の相関がある（Ｒｏｂｂｉｎｓ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７３（１２）：７１２５－３０、Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ．（２００５）２８（３）：２５８－６７）。したがって、本発明者らは、単独またはＩＬ－２と組み合わせたＩＬ－７の存在下（図３Ｃ）またはＩＬ－２１の存在下（図３Ｄ）で、生物発光を用いて３回の抗原特異的増殖後のＣＡＲＴ Ｔ細胞の収縮を分析した。ＣＡＲ Ｔ細胞集団は、アルブミン、ＩＬ－２またはＩＬ－７のみが存在する場合に、３回目のＣＬＤＮ６ ＲＮＡ（ＬＩＰ）の直後に収縮した。しかし、ＩＬ－２とＩＬ－７の組合せのみが、抗原除去後のＣＬＤＮ６ ＣＡＲ Ｔ細胞の収縮の減速を増強することができる（図３Ｃ）。この効果は、ＩＬ－２およびＩＬ－２１－ＲＮＡ同時処置マウスにおいてさらにより顕著であった（図３Ｄ）。
全体として、これらの結果は、ＩＬ－２をコードし、ＩＬ－７およびＩＬ－２１と関与するヌクレオシド修飾ＲＮＡの全身投与が、抗原特異的刺激時にインビボでＣＡＲ Ｔ細胞の高度に抗原依存性の蓄積および長期持続性を増強できることを示す。

Claims (14)

  1. ａ．抗原を標的とするキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように遺伝子改変されたＴ細胞、
    ｂ．ＩＬ２またはＩＬ２をコードするポリヌクレオチド、および
    ｃ．さらなるサイトカインまたはさらなるサイトカインをコードするポリヌクレオチド
    を含み、前記さらなるサイトカインが、ＩＬ７およびＩＬ２１からなる群より選択される、医薬製剤。
  2. ＩＬ２をコードする前記ポリヌクレオチドがＲＮＡである、請求項１に記載の医薬製剤。
  3. 前記抗原もしくはその変異体、または前記抗原もしくはその変異体をコードするポリヌクレオチドをさらに含む、請求項１または２に記載の医薬製剤。
  4. 前記抗原もしくはその変異体をコードする前記ポリヌクレオチドがＲＮＡである、請求項３に記載の医薬製剤。
  5. キットである、請求項１～４のいずれか一項に記載の医薬製剤。
  6. ＣＡＲを発現するように遺伝子改変された前記Ｔ細胞、前記ＩＬ２もしくはＩＬ２をコードする前記ポリヌクレオチド、および前記さらなるサイトカインもしくはさらなるサイトカインをコードする前記ポリヌクレオチドを別々の容器中に含む、請求項５に記載の医薬製剤。
  7. 医薬組成物である、請求項１～６のいずれか一項に記載の医薬製剤。
  8. ＩＬ２が延長薬物動態（ＰＫ）ＩＬ２である、請求項１～７のいずれか一項に記載の医薬製剤。
  9. 前記さらなるサイトカインが延長薬物動態（ＰＫ）サイトカインである、請求項１～８のいずれか一項に記載の医薬製剤。
  10. ＩＬ２が延長薬物動態（ＰＫ）ＩＬ２であり、前記延長ＰＫ ＩＬ２が、ＩＬ２部分と、血清アルブミン、またはそれらの変異体を含む融合タンパク質を含み、前記血清アルブミンがマウス血清アルブミンまたはヒト血清アルブミンを含み、ならびに／あるいは
    前記さらなるサイトカインが延長薬物動態（ＰＫ）サイトカインであり、前記延長ＰＫサイトカインが、サイトカイン部分と、血清アルブミン、またはそれらの変異体を含む融合タンパク質を含み、前記血清アルブミンがマウス血清アルブミンまたはヒト血清アルブミンを含む、請求項８または９に記載の医薬製剤。
  11. ＩＬ２が延長薬物動態（ＰＫ）ＩＬ２であり、前記延長ＰＫ ＩＬ２が、ＩＬ２部分と、免疫グロブリン断片、またはそれらの変異体を含む融合タンパク質を含み、前記免疫グロブリン断片が免疫グロブリンＦｃドメインを含み、ならびに／あるいは
    前記さらなるサイトカインが延長薬物動態（ＰＫ）サイトカインであり、前記延長ＰＫサイトカインが、サイトカイン部分と、免疫グロブリン断片、またはそれらの変異体を含む融合タンパク質を含み、前記免疫グロブリン断片が免疫グロブリンＦｃドメインを含む、請求項８～１０のいずれか一項に記載の医薬製剤。
  12. 医薬用途のための、請求項１～１１のいずれか一項に記載の医薬製剤。
  13. 前記医薬用途が、疾患または障害の治療的または予防的治療を含む、請求項１２に記載の医薬製剤。
  14. 前記抗原が腫瘍関連抗原である、対象における癌を治療または予防するための方法で使用するための、請求項１～１３のいずれか一項に記載の医薬製剤。
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Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2019291069B2 (en) * 2018-06-19 2026-02-19 Fondazione Centro San Raffaele Production of engineered dendritic cells and uses thereof
EP4228658A4 (en) 2020-10-14 2025-02-19 George Mason Research Foundation, Inc. IONIZABLE LIPIDS AND METHODS FOR THE PRODUCTION AND USE THEREOF
TW202332687A (zh) * 2021-12-23 2023-08-16 比利時商ｅＴｈｅＲＮＡ免疫治療公司 免疫刺激性mrna組成物及其用途
US20230399614A1 (en) * 2022-06-09 2023-12-14 Kite Pharma, Inc. Methods of preparing lymphocytes for cell therapy
WO2024121426A1 (en) 2022-12-09 2024-06-13 Cemm - Forschungszentrum Für Molekulare Medizin Gmbh Method for optimizing t cells for immuno-therapy
WO2025064669A1 (en) * 2023-09-20 2025-03-27 University Of Washington Compositions, kits, and methods for multiplexed measurements of cellular perturbations

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2016180467A1 (en) 2015-05-11 2016-11-17 Biontech Cell & Gene Therapies Gmbh Enhancing the effect of car-engineered t cells by means of nucleic acid vaccination
WO2017139570A1 (en) 2016-02-12 2017-08-17 Massachusetts Intitute Of Technology Synergistic tumor treatment with il-2, an integrin-binding-fc fusion protein, and a cancer vaccinne
JP2018517674A (ja) 2015-04-22 2018-07-05 キュアバック アーゲー 癌疾患の処置のための、ｒｎａ含有組成物
JP2018519842A (ja) 2015-07-21 2018-07-26 ノバルティス アーゲー 免疫細胞の有効性および増大を改善する方法
WO2019010222A2 (en) 2017-07-03 2019-01-10 Torque Therapeutics, Inc. POLYNUCLEOTIDES ENCODING IMMUNOSTIMULATING FUSION MOLECULES AND USES THEREOF

Family Cites Families (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2686899B1 (fr) 1992-01-31 1995-09-01 Rhone Poulenc Rorer Sa Nouveaux polypeptides biologiquement actifs, leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant.
US20050287153A1 (en) 2002-06-28 2005-12-29 Genentech, Inc. Serum albumin binding peptides for tumor targeting
US20030133939A1 (en) 2001-01-17 2003-07-17 Genecraft, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
US7754208B2 (en) 2001-01-17 2010-07-13 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
US7176278B2 (en) 2001-08-30 2007-02-13 Biorexis Technology, Inc. Modified transferrin fusion proteins
US7696320B2 (en) 2004-08-24 2010-04-13 Domantis Limited Ligands that have binding specificity for VEGF and/or EGFR and methods of use therefor
EP1900753B1 (en) 2002-11-08 2017-08-09 Ablynx N.V. Method of administering therapeutic polypeptides, and polypeptides therefor
HUE027902T2 (en) 2004-02-09 2016-11-28 Human Genome Sciences Inc Corp Service Company Albumin fusion proteins
US20070269422A1 (en) 2006-05-17 2007-11-22 Ablynx N.V. Serum albumin binding proteins with long half-lives
CN101511868B (zh) 2006-07-24 2013-03-06 比奥雷克西斯制药公司 毒蜥外泌肽融合蛋白
AU2007293614A1 (en) 2006-09-08 2008-03-13 Ablynx N.V. Serum albumin binding proteins with long half-lives
WO2009083804A2 (en) 2007-12-27 2009-07-09 Novartis Ag Improved fibronectin-based binding molecules and their use
EA201001734A1 (ru) 2008-05-02 2011-10-31 Новартис Аг Улучшенные связывающие молекулы на основе фибронектина и их применение
EP2556087A1 (en) 2010-04-09 2013-02-13 Novozymes Biopharma DK A/S Albumin derivatives and variants
EP2558491B1 (en) 2010-04-13 2018-07-04 Bristol-Myers Squibb Company Fibronectin based scaffold domain proteins that bind pcsk9
EP3326467B1 (en) * 2011-09-16 2020-03-11 Baylor College of Medicine Targeting the tumor microenvironment using manipulated nkt cells
EP2780364A2 (en) 2011-11-18 2014-09-24 Eleven Biotherapeutics, Inc. Proteins with improved half-life and other properties
WO2013143555A1 (en) 2012-03-26 2013-10-03 Biontech Ag Rna formulation for immunotherapy
CA2945388A1 (en) * 2014-04-23 2015-10-29 Board Of Regents, The University Of Texas System Chimeric antigen receptors (car) for use in therapy and methods for making the same
AU2016249005B2 (en) * 2015-04-17 2022-06-16 Novartis Ag Methods for improving the efficacy and expansion of chimeric antigen receptor-expressing cells
AU2016323985B2 (en) * 2015-09-17 2022-12-15 Novartis Ag CAR T cell therapies with enhanced efficacy
WO2017059902A1 (en) 2015-10-07 2017-04-13 Biontech Rna Pharmaceuticals Gmbh 3' utr sequences for stabilization of rna
CN106279432B (zh) * 2016-08-10 2019-09-20 深圳市再生之城生物医药技术有限公司 一种vc-car分子及在清除hiv-1感染细胞中的应用
CN110381989A (zh) * 2016-12-21 2019-10-25 丹麦技术大学 用于免疫细胞操作的抗原呈递支架
US10918667B2 (en) * 2018-11-20 2021-02-16 Innovative Cellular Therapeutics CO., LTD. Modified cell expressing therapeutic agent and uses thereof

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2018517674A (ja) 2015-04-22 2018-07-05 キュアバック アーゲー 癌疾患の処置のための、ｒｎａ含有組成物
WO2016180467A1 (en) 2015-05-11 2016-11-17 Biontech Cell & Gene Therapies Gmbh Enhancing the effect of car-engineered t cells by means of nucleic acid vaccination
JP2018519842A (ja) 2015-07-21 2018-07-26 ノバルティス アーゲー 免疫細胞の有効性および増大を改善する方法
WO2017139570A1 (en) 2016-02-12 2017-08-17 Massachusetts Intitute Of Technology Synergistic tumor treatment with il-2, an integrin-binding-fc fusion protein, and a cancer vaccinne
WO2019010222A2 (en) 2017-07-03 2019-01-10 Torque Therapeutics, Inc. POLYNUCLEOTIDES ENCODING IMMUNOSTIMULATING FUSION MOLECULES AND USES THEREOF

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Oncotarget，2016年，Vol.7, No.50，pp.82354-82368

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