JP7653532B2 - 抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体およびその使用 - Google Patents

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Description

本願は、一般にバイオ医薬品の分野に関し、特に、新規な抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体またはその抗原結合断片、前記抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物、および前記抗体またはその抗原結合断片の薬学的に有用な使用に関する。
シアル酸結合免疫グロブリン型レクチン（Ｓｉａｌｉｃ ａｃｉｄ－ｂｉｎｄｉｎｇ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ－ｔｙｐｅｌｅｃｔｉｎ、Ｓｉｇｌｅｃ）は、免疫グロブリンスーパーファミリーの一員で、細胞外領域、膜貫通領域、細胞内領域からなる分子構造を持つＩ型膜貫通型糖タンパク質である。研究により、Ｓｉｇｌｅｃファミリーのメンバーは、免疫細胞の活性化や増殖、生理的・病理的プロセスの媒介に重要な役割を果たすことが明らかになっている。また、Ｓｉｇｌｅｃファミリーのメンバーは、免疫寛容の制御に関与し、自己免疫疾患、炎症反応、腫瘍形成の制御において重要な役割を担っている。
Ｓｉｇｌｅｃ１５はＳｉｇｌｅｃファミリーの一員で、３２８アミノ酸残基からなり、その細胞外領域（ＥＣＤ）には免疫グロブリン可変領域（Ｉｇ－ｌｉｋｅ Ｖ－ｔｙｐｅ Ｄｏｍａｉｎ、ＩｇＶ）と２型定常領域（Ｉｇ－ｌｉｋｅ Ｃ２－ｔｙｐｅ Ｄｏｍａｉｎ、ＩｇＣ２）があり、ここで、ＩｇＶ領域は、Ｎｅｕ５Ａｃα２－６ＧａｌＮＡｃα－構造を持つ糖タンパク質、ミエリン関連糖タンパク質（ＭＡＧ）、ロイシンリッチリピート含有４Ｃ（ＬＲＲＣ４Ｃ）またはＳｉｇｌｅｃ１５－抗レセプターなどのようなＳｉｇｌｅｃ１５リガンドとの結合のＳｉｇｌｅｃ１５キーサイトである。タンパク質配列解析の結果、Ｓｉｇｌｅｃ１５はＴ細胞のＢ７遺伝子ファミリーと３０％以上の構造的相同性を持つことが明らかになった。Ｓｉｇｌｅｃ１５は当初、生理的な骨の再構成に重要な役割を果たし、エストロゲン欠乏による病的な骨喪失にも関与していることがわかった。最近の研究では、Ｓｉｇｌｅｃ１５は腫瘍免疫の負の制御因子であり、腫瘍免疫に関与していることが明らかになっている。Ｓｉｇｌｅｃ１５は、多くの種類の癌細胞や腫瘍関連マクロファージで高発現し、Ｔ細胞上の未知の受容体に結合してＴ細胞の機能抑制をもたらす。また、Ｂ７－Ｈ１（ＰＤ－Ｌ１）／ＰＤ－１経路とは独立した方法で免疫抑制を制御することができ、Ｓｉｇｌｅｃ１５の免疫抑制作用を阻害することにより、身体の抗腫瘍免疫応答を回復または強化することができる。
固形がんに対する抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体系医薬は、臨床試験中のＮｅｘｔＣｕｒｅ社のＮＣ－３１８のみが報告されており、その作用エピトープは現在のところ不明である。現在、Ｓｉｇｌｅｃ１５を標的とした承認医薬はなく、臨床プログラムもほとんど進行していないため、より有効なＳｉｇｌｅｃ１５抗体を患者に提供することが急務となっている。
第１の態様では、本願は、抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体またはその抗原結合断片は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が、重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）、重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）および重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）を含み、軽鎖可変領域が、軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）、軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）および軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）を含み、
重鎖可変領域が、配列番号６に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ１、配列番号７に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ２、および配列番号８に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ３を含み、軽鎖可変領域が、配列番号９に示されるアミノ酸配列のＬＣＤＲ１、配列番号１０に示されるアミノ酸配列のＬＣＤＲ２、配列番号１１に示されるアミノ酸配列のＬＣＤＲ３を含み；または
重鎖可変領域が、配列番号６に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ１、配列番号１２に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ２、および配列番号８に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ３を含み、軽鎖可変領域が、配列番号１３に示されるアミノ酸配列のＬＣＤＲ１、配列番号１０に示されるアミノ酸配列のＬＣＤＲ２、配列番号１１に示されるアミノ酸配列のＬＣＤＲ３を含み；または
重鎖可変領域が、配列番号１４に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ１、配列番号１５に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ２、および配列番号１６に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ３を含み、軽鎖可変領域が、配列番号１７に示されるアミノ酸配列のＬＣＤＲ１、配列番号１８に示されるアミノ酸配列のＬＣＤＲ２、配列番号１９に示されるアミノ酸配列のＬＣＤＲ３を含み；または
重鎖可変領域が、配列番号２０に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ１、配列番号２１に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ２、および配列番号２２に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ３を含み、軽鎖可変領域が、配列番号２３に示されるアミノ酸配列のＬＣＤＲ１、配列番号２４に示されるアミノ酸配列のＬＣＤＲ２、配列番号２５に示されるアミノ酸配列のＬＣＤＲ３を含み、
ここで、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３およびＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３アミノ酸配列がＫａｂａｔ定義に従う、抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体またはその抗原結合断片を提供する。
第２の態様では、本願は、抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体またはその抗原結合断片が、（ａ）から（ｅ）のいずれか一項記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに特異的に結合するものである、抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体またはその抗原結合断片を提供する。
（ａ）配列番号１に示されるアミノ酸配列；
（ｂ）配列番号１に示されるアミノ酸配列のアミノ酸残基２０位から３２８位からなるアミノ酸配列；
（ｃ）配列番号１に示されるアミノ酸配列のアミノ酸残基１位から２６３位からなるアミノ酸配列；
（ｄ）配列番号１に示されるアミノ酸配列のアミノ酸残基２０位から２６３位からなるアミノ酸配列；
（ｅ）（ａ）から（ｄ）記載のアミノ酸配列においてアミノ酸残基の置換、欠失または付加を一つまたは複数有するアミノ酸配列。
第３の態様では、本願は、抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体またはその抗原結合断片が、重鎖可変領域と軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域が、配列番号２６、２８、３０または３２に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９９％の相同性を有するアミノ酸配列を有し、軽鎖可変領域が、配列番号２７、２９、３１または３３に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９９％の相同性を有するアミノ酸配列を有する、抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体またはその抗原結合断片を提供する。
第４の態様では、本願は、抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体またはその抗原結合断片が重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）、重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）および重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）を含み、
重鎖可変領域が、配列番号６に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ１、配列番号７に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ２、および配列番号８に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ３を含み；または
重鎖可変領域が、配列番号６に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ１、配列番号１２に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ２、および配列番号８に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ３を含み；または
重鎖可変領域が、配列番号１４に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ１、配列番号１５に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ２、および配列番号１６に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ３を含み；または
重鎖可変領域が、配列番号２０に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ１、配列番号２１に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ２、および配列番号２２に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ３を含み、
ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３アミノ酸配列がＫａｂａｔ定義に従う、抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体またはその抗原結合断片を提供する。
第５の態様では、本願は、治療薬と複合する第１から第４の態様に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体またはその抗原結合断片を含む、免疫薬物複合体を提供する。
第６の態様では、本願は、第１から第４の態様に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体またはその抗原結合断片または第５の態様に記載の免疫薬物複合体と、薬理学的に許容される賦形剤、希釈剤または担体とを含む、医薬組成物を提供する。
本願は、さらに、個体における免疫応答の調節、Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質によるＰＢＭＣリンパ球増殖の阻害の逆転、Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質によるＰＢＭＣリンパ球ＩＦＮ－γ分泌の阻害の逆転、個体における腫瘍細胞増殖の阻害または過増殖性障害（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ１５の異常発現に関連する過増殖性障害）を治療するための、第１から第４の態様に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体またはその抗原結合断片または第５の態様に記載の免疫薬物複合体または第６の態様に記載の医薬組成物の使用を提供する。
第７の態様では、本願は、個体における免疫応答の調節、Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質によるＰＢＭＣリンパ球増殖の阻害の逆転、Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質によるＰＢＭＣリンパ球ＩＦＮ－γ分泌の阻害の逆転、個体における腫瘍細胞増殖の阻害または過増殖性障害（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ１５の異常発現に関連する過増殖性障害）を治療するための医薬の製造における、第１から第４の態様に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体またはその抗原結合断片または第５の態様に記載の免疫薬物複合体または第６の態様に記載の医薬組成物の使用を提供する。
第８の態様では、本願は、個体における免疫応答の調節、Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質によるＰＢＭＣリンパ球増殖の阻害の逆転、Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質によるＰＢＭＣリンパ球ＩＦＮ－γ分泌の阻害の逆転、個体における腫瘍細胞増殖の阻害または過増殖性障害（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ１５の異常発現に関連する過増殖性障害）を治療するための方法であって、それを必要とする個体に治療有効量の第１から第４の態様に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体またはその抗原結合断片、第５の態様に記載の免疫薬物複合体または第６の態様に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法を提供する。
第９の態様では、本願は、第１から第４の態様に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体または抗原結合断片をコードする、単離ポリヌクレオチドを提供する。
第１０の態様では、本願は、第１から第４の態様に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体または抗原結合断片をコードするポリヌクレオチドを含む、ベクターを提供する。
第１１の態様では、本願は、第１０の態様に記載のベクターを含む、単離宿主細胞を提供する。
第１２の態様では、本願は、第１から第４の態様に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体またはその抗原結合断片の製造方法であって、第１１の態様に記載の宿主細胞を培養する工程を含む、方法を提供する。第１２の態様のいくつかの実施形態では、前記方法は、さらに、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体またはその抗原結合断片を単離する工程を含む。
Ｓｉｇｌｅｃ１５－ＥＣＤ－ＦｃおよびＳｉｇｌｅｃ１５－ＩｇＶ－Ｆｃでタンパク質を免疫したマウスの血漿抗体力価曲線である。 本願の複数の例示的抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体のＳｉｇｌｅｃ１５とＬＲＲＣ４Ｃ－Ｈｅｋ２９３細胞との相互作用に対する阻害効果を示すグラフである。 本願の複数の例示的抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体のヒトＳｉｇｌｅｃ１５タンパク質との結合のＥＬＩＳＡ測定結果曲線を示す。 本願の複数の例示的抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体のサルＳｉｇｌｅｃ１５タンパク質との結合のＥＬＩＳＡ測定結果曲線を示す。 本願の複数の例示的抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体のマウスＳｉｇｌｅｃ１５タンパク質との結合のＥＬＩＳＡ測定結果曲線を示す。 本願の複数の例示的抗Ｓｉｇｌｅｃ１５キメラ抗体および対照抗体とヒトＳｉｇｌｅｃ１５を発現するＨｅｋ２９３細胞との結合の結果曲線を示す。 本願の複数の例示的抗Ｓｉｇｌｅｃ１５キメラ抗体および対照抗体のＳｉｇｌｅｃ１５タンパク質によるＰＢＭＣリンパ球増殖に対する阻害の逆転効果を示すグラフである。 本願の複数の例示的抗Ｓｉｇｌｅｃ１５キメラ抗体および対照抗体Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質によるＰＢＭＣリンパ球ＩＦＮ－γ分泌に対する阻害の逆転効果を示すグラフである。
本願の発明者らは、Ｓｉｇｌｅｃ１５分子のシグナル伝達機構に基づいて抗体スクリーニング策略を設計し、最終的に優れた特性を示す様々な抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体をスクリーニングし、優れた特性とは、例えば、対照抗体と比較してヒトＳｉｇｌｅｃ１５に対する親和性が高いこと、Ｓｉｇｌｅｃ１５が媒介するＴ細胞活性の回復が大きいこと、などが挙げられる。Ｓｉｇｌｅｃ１５が媒介するＴ細胞活性の抑制がより回復すること等である。また、本願の抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体は、免疫応答を調節する特性を示す。
定義
特に定義しない限り、本明細書で使用するすべての科学技術用語は、当業者によって理解されるのと同じ意味を持つ。当該分野の定義および用語については、当業者は特にＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｕｓｕｂｅｌ）を参照される。アミノ酸残基の略号は、一般的に使用される２０種のＬ－アミノ酸の１つを参照するために当該技術分野で使用される標準的な３文字および／または１文字のコードである。
本願の広義的な範囲に示された数値範囲とパラメータは近似値であるが、特定の実施形態で示された値は、可能な限り正確に文書化されている。しかしながら、いかなる値も本質的にある量の誤差を含んでおり、それはそれぞれの測定に存在する標準偏差に起因するものである。さらに、本明細書に開示されたすべての範囲は、そこに含まれるあらゆるサブレンジをカバーするものと理解されるべきである。例えば、「１～１０」の範囲は、最小値１～最大値１０（端点を含む）の間のあらゆる部分範囲、すなわち、最小値１以上（例えば１～６．１）で始まり、最大値１０以下（例えば５．５～１０）で終わるすべての部分範囲を包含するものと考えるべきである。「本明細書に組み込まれる」と言及されたあらゆる参照は、その全体が組み込まれたものとして理解されるべきである。
広義には、「抗体」は、免疫グロブリン分子の可変領域に位置する少なくとも１つの抗原認識部位を介して標的と特異的に結合することができる免疫グロブリン分子を指す場合があり、したがって、インタクト抗体、抗体単鎖または抗体の任意の抗原結合断片（「抗原結合部分」とも呼ばれる）を含む。用語「抗体」と「抗原結合断片／抗原結合部分」が同じ文脈で使用される場合、「抗体」は、「抗原結合断片／抗原結合部分」に対する完全体と理解されてもよく、両者を合わせると、広義的な「抗体」の概念に対応する。
用語「全長抗体」とは、少なくとも２本の重鎖（Ｈ）と２本の軽鎖（Ｌ）がジスルフィド結合で連結されたタンパク質のことである。各重鎖は、重鎖可変領域（ＶＨと略記）と重鎖定常領域を含む。重鎖定常領域には、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３の３つの領域が含まれる。各軽鎖は、軽鎖可変領域（略称：ＶＬ）と軽鎖定常領域を含む。軽鎖定常領域は一つの領域ＣＬを含む。ＶＨとＶＬ領域はさらに細分化され、相補的決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる可変性の高い複数の領域と、それらの間に点在するフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保守的な複数の領域とに分けられる。各ＶＨとＶＬは、アミノ末端からカルボキシル末端に向かって、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順に配置された３つのＣＤＲと４つのＦＲから構成されている。重鎖と軽鎖のこれらの可変領域には抗原と相互作用する結合領域がある。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えばエフェクター細胞）や古典補体系の第一成分（Ｃｌｑ）を含む宿主の組織や因子への免疫グロブリンの結合を媒介する。全長抗体は、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＡまたはＩｇＭ（または上記のサブクラス）などの任意のクラスの抗体であり得るが、抗体は特定のクラスに属している必要はない。免疫グロブリンは、重鎖の定常領域における抗体のアミノ酸配列によって、異なるクラスに割り当てることができる。一般に、免疫グロブリンにはＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭの５つの主要クラスがあり、これらのクラスのいくつかは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２などのサブクラス（アイソタイプ）にさらに区別することができる。異なる免疫グロブリンクラスに対応する重鎖定常領域は、(、(、(、(、および(と呼ばれている。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造および三次元構造はよく知られている。キメラ抗体またはヒト化抗体も、本願による抗体の対象となる。相補的決定領域（ＣＤＲ、通常はＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）は、抗体の親和性及び特異性に最も影響を与える可変領域の領域であることは当業者によく知られている。ＶＨ又はＶＬのＣＤＲアミノ酸配列は、２つの共通の方法、すなわちＣｈｏｔｈｉａ定義とｋａｂａｔ定義で定義されている。所定の抗体の可変領域のアミノ酸配列について、ＶＨ及びＶＬのアミノ酸配列におけるＣＤＲアミノ酸配列は、通常、Ｃｈｏｔｈｉａ定義又はＫａｂａｔ定義のいずれかに基づいて決定することができる。本願の実施形態では、ＣＤＲアミノ酸配列はＫａｂａｔを用いて定義される。所定の抗体の可変領域アミノ酸配列について、可変領域アミノ酸配列の中間ＣＤＲアミノ酸配列は、様々な方法で分析することができ、例えば、オンラインソフトウェアＡｂｙｓｉｓ（HYPERLINK "http://www.abysis.org/"ｈｔｔｐ:／／ｗｗｗ．ａｂｙｓｉｓ．ｏｒｇ／）を使用して決定することができる。
本明細書で使用する場合、用語「抗原結合断片」は、特に、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）2またはＦａｂ’などの抗体断片、または化学修飾によって、またはリポソームへの組み込みによって半減期を増加させることができるはずの任意の断片を指し、好ましくは、前記機能性断片は、そのソース抗体の重鎖または軽鎖可変鎖の部分配列からなるか、またはそれを含み、前記部分配列は、そのソース抗体と同じ結合特異性および十分な親和性を保持するのに十分であり、その機能性断片は、そのソース抗体配列の最小５個のアミノ酸、好ましくは１０、１５、２５、５０および１００個の連続したアミノ酸を含む。抗原結合断片の例としては、（１）ＶＬ－ＣＬ鎖とＶＨ－ＣＨ１鎖を有する一価の断片であってもよいＦａｂ断片；（２）ヒンジ領域においてジスルフィド橋によって連結された２つのＦａｂ’断片（すなわちＦａｂの二量体）を有する二価断片でもよいＦ（ａｂ’）2断片；（３）抗体の単一のアームを有するＶＬおよびＶＨ領域を持つＦｖ断片があるが、これらに限定されない。
用語「単鎖抗体（ｓｃＦｖ）」とは、ＶＨ領域とＶＬ領域がペプチドリンカーで連結された１本のポリペプチド鎖を指す。（ｓｃＦｖ）2は、ペプチドリンカーによって連結された２つのＶＨ領域と、ジスルフィドブリッジを介して２つのＶＨ領域と結合した２つのＶＬ領域とを含む。
用語「Ｆｃ断片」、「Ｆｃ構造領域」、「Ｆｃ部分」または類似の用語は、抗体重鎖の定常領域の一部を指し、ヒンジ領域、定常領域のＣＨ２断片とＣＨ３断片を含む。
本明細書において、用語「特異的結合」とは、抗原エピトープへの抗体の結合など、２つの分子間の非ランダムな結合反応を意味するものである。
用語「ヒト化抗体」とは、マウス系統などの他の哺乳類種由来のＣＤＲ配列をヒトフレーム配列に移植することによって得られる抗体を指す。ヒトフレームワーク配列には、他のフレームワーク領域の改変を加えることができる。本願に係るヒト化抗体又はその断片は、当業者に公知の技術により製造することができる。
用語「キメラ抗体」とは、可変領域の配列がある種に由来し、定常領域の配列が他の種に由来する抗体であり、例えば、可変領域の配列がマウス抗体に由来し、定常領域の配列がヒト抗体に由来する抗体を指す。本願によるキメラ抗体又はその断片は、遺伝子組換え技術を用いることにより製造することができる。例えば、前記キメラ抗体は、プロモーターと、本願による非ヒト、特にマウスモノクローナル抗体の可変領域をコードする配列と、ヒト抗体の定常領域をコードする配列とを含む組換えＤＮＡをクローニングすることにより製造することができる。このような組換え遺伝子によってコードされる本願のキメラ抗体は、例えば、マウス－ヒトキメラとなり、その特異性はマウスＤＮＡ由来の可変領域によって決定され、そのアイソタイプはヒトＤＮＡ由来の定常領域によって決定される。キメラ抗体の製造方法については、例えば、文献Ｖｅｒｈｏｅｙｎら（ＢｉｏＥｓｓａｙｓ，８：７４，１９８８）を参照することができる。
本明細書において、用語「モノクローナル抗体」とは、実質的に均質な抗体の集団から得られた抗体、すなわち、少数の個体に存在し得る天然由来の変異を除いて、その集団を構成する個々の抗体が同一である抗体を意味する。本明細書で使用するモノクローナル抗体には、特に、重鎖及び／又は軽鎖の一部が特定の種に由来する抗体又は特定の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体の対応するアミノ酸配列と同一又は相同であり、重鎖及び／又は軽鎖の残りが別の種に由来する抗体又は別の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体の対応するアミノ酸配列と同一又は相同である「キメラ」抗体であり、さらに、所望の生物学的活性を示すことを条件として、このような抗体の断片を含む。
用語「二重特異性抗体」とは、２つの抗原エピトープを同時に結合する能力を有する抗体のことを指す。２つの抗原性エピトープは、異なる抗原上にある場合もあれば、同じ抗原上にある場合もある。二重特異性抗体は、様々な構造構成を持つことができる。例えば、二重特異性抗体は、２つのＦｃ断片とそれぞれに融合した２つの結合部分（２つのアームが異なる抗原性標的またはエピトープに結合することを除いて、天然抗体と同様）からなり、単鎖抗体（ｓｃｆｖ）の形態またはＦａｂ断片の形態であることが考えられる。
本明細書において、用語「医薬組成物」とは、特定の目的を達成するために一緒に組み合わされる、少なくとも１つの薬物と、任意に薬理学的に許容される担体または賦形剤との組み合わせを示す。いくつかの実施形態では、前記医薬組成物は、本願の目的を達成するために一緒に作用することが可能であることを条件として、時間的および／または空間的に別々の組み合わせからなる。例えば、前記医薬組成物に含まれる成分（例えば、抗体、核酸分子、核酸分子の組み合わせおよび／または本願によるアジュバント）は、全体として、または別々に個体に投与され得る。前記医薬組成物に含まれる組成物が個体に別々に投与される場合、前記組成物は、個体に同時または順次投与され得る。好ましくは、前記薬理学的に許容される担体は、水、緩衝水溶液、ＰＢＳ（リン酸緩衝液）などの等張塩溶液、グルコース、マンニトール、デキストロース、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、セルロース、炭酸マグネシウム、０．３％グリセロール、ヒアルロン酸、エタノールまたはポリプロピレングリコールなどのポリアルキレングリコール、トリグリセライドなどである。使用される薬理学的に許容される担体の種類は、特に、本願による組成物が経口、鼻腔内、皮内、皮下、筋肉内または静脈内投与のために処方されるかどうかに依存する。本願による組成物は、添加物として湿潤剤、乳化剤または緩衝物質を含むことができる。本願による医薬組成物または医薬製剤は、任意の適切な経路、例えば、経口、経鼻、皮内、皮下、筋肉内または静脈内により投与することができる。
本明細書において、用語「治療有効量」または「有効量」とは、投与される個体に利益を示すのに十分な用量を意味する。実際に投与される量、ならびに投与の速度および時間経過は、治療されるものの状態および重症度に依存する。治療の処方（投与量の決定など）は、通常、治療対象の疾患、個々の患者の状態、投与部位、投与方法、その他の医師が知る要素を考慮し、最終的に全科医師またはその他の医師の責任であり、それに依存する。
本明細書において、用語「個体」は、ヒトなどの哺乳類を指すが、野生動物（サギ、コウノトリ、ツルなど）、家畜（カモ、ガチョウなど）または実験動物（オランウータン、サル、ラット、マウス、ウサギ、モルモット、グランドホッグ、ジリスなど）などの他の動物であってもよい。
アミノ酸または核酸配列に関する「相同性／ホモロジー／コンシステンシー」という用語は、配列アライメントを行い、所望によりヌル位置を導入して相同性の最大割合を達成した後のアミノ酸または核酸配列変異体における同一残基の割合と定義する。アライメントに使用される方法およびコンピュータプログラムは、当技術分野でよく知られている。
一般に、特にマウス由来のモノクローナル抗体又はその機能的断片の製造については、特にマニュアル「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」（Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ ＮＹ、ｐｐ．７２６、１９８８）に記載されている技術、又はハイブリドーマ細胞からの製造についてＫｏｈｌｅｒとＭｉｌｓｔｅｉｎ（Ｎａｔｕｒｅ， ２５６: ４９５－４９７， １９７５）によって記載されている技術を参照できる。
第１の態様では、本願は、抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体またはその抗原結合断片は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）、重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）および重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）を含み、軽鎖可変領域が軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）、軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）および軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）を含み、
重鎖可変領域が、配列番号６に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ１、配列番号７に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ２および配列番号８に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ３を含み、軽鎖可変領域が、配列番号９に示されるアミノ酸配列のＬＣＤＲ１、配列番号１０に示されるアミノ酸配列のＬＣＤＲ２、配列番号１１に示されるアミノ酸配列のＬＣＤＲ３を含み；または
重鎖可変領域が、配列番号６に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ１、配列番号１２に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ２および配列番号８に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ３を含み、軽鎖可変領域が、配列番号１３に示されるアミノ酸配列のＬＣＤＲ１、配列番号１０に示されるアミノ酸配列のＬＣＤＲ２、配列番号１１に示されるアミノ酸配列のＬＣＤＲ３を含み；または
重鎖可変領域が、配列番号１４に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ１、配列番号１５に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ２および配列番号１６に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ３を含み、軽鎖可変領域が、配列番号１７に示されるアミノ酸配列のＬＣＤＲ１、配列番号１８に示されるアミノ酸配列のＬＣＤＲ２、配列番号１９に示されるアミノ酸配列のＬＣＤＲ３を含み；または
重鎖可変領域が、配列番号２０に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ１、配列番号２１に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ２および配列番号２２に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ３を含み、軽鎖可変領域が、配列番号２３に示されるアミノ酸配列のＬＣＤＲ１、配列番号２４に示されるアミノ酸配列のＬＣＤＲ２、配列番号２５に示されるアミノ酸配列のＬＣＤＲ３を含み、
ここで、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３およびＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３アミノ酸配列がＫａｂａｔ定義に従う、抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体またはその抗原結合断片を提供する。
第１の態様のいくつかの実施形態では、重鎖可変領域が、配列番号２６、２８、３０または３２に示されるアミノ酸配列または配列番号２６、２８、３０または３２に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の相同性を有するアミノ酸配列を有する。
第１の態様のいくつかの実施形態では、軽鎖可変領域が、配列番号２７、２９、３１または３３に示されるアミノ酸配列または配列番号２７、２９、３１または３３に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の相同性を有するアミノ酸配列を有する。
第１の態様のいくつかの実施形態では、重鎖可変領域が配列番号２６に示されるアミノ酸配列を有し、軽鎖可変領域が配列番号２７に示されるアミノ酸配列を有する。
第１の態様のいくつかの実施形態では、重鎖可変領域が配列番号２８に示されるアミノ酸配列を有し、軽鎖可変領域が配列番号２９に示されるアミノ酸配列を有する。
第１の態様のいくつかの実施形態では、重鎖可変領域が配列番号３０に示されるアミノ酸配列を有し、軽鎖可変領域が配列番号３１に示されるアミノ酸配列を有する。
第１の態様のいくつかの実施形態では、重鎖可変領域が配列番号３２に示されるアミノ酸配列を有し、軽鎖可変領域が配列番号３３に示されるアミノ酸配列を有する。
第２の態様では、本願は、抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体またはその抗原結合断片は、（ａ）から（ｅ）のいずれか一項記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに特異的に結合する、抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体またはその抗原結合断片を提供する。
（ａ）配列番号１に示されるアミノ酸配列；
（ｂ）配列番号１に示されるアミノ酸配列のアミノ酸残基２０位から３２８位からなるアミノ酸配列；
（ｃ）配列番号１に示されるアミノ酸配列のアミノ酸残基１位から２６３位からなるアミノ酸配列；
（ｄ）配列番号１に示されるアミノ酸配列のアミノ酸残基２０位から２６３位からなるアミノ酸配列；
（ｅ）（ａ）から（ｄ）記載のアミノ酸配列においてアミノ酸残基の置換、欠失または付加を一つまたは複数有するアミノ酸配列。
ヒトＳｉｇｌｅｃ１５の全長アミノ酸配列は、配列番号１に示され、１～１９位はシグナルペプチド配列、２０～２６３位は細胞外構造領域（ＥＣＤ）、４０～１５８位はＩｇＶ構造領域、１６８～２５１位はＩｇＣ２構造領域である。したがって、上記（ａ）～（ｄ）に記載のアミノ酸配列は、ヒトＳｉｇｌｅｃ１５の全長アミノ酸配列、および種々のヒトＳｉｇｌｅｃ１５断片を構成し、そのすべてが細胞外構造領域、すなわち本願抗体の結合構造領域を含んでいる。
第３の態様では、本願は、抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体またはその抗原結合断片は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域が、配列番号２６、２８、３０または３２に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の相同性を有するアミノ酸配列を有し、軽鎖可変領域が、配列番号２７、２９、３１または３３に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の相同性を有するアミノ酸配列を有する、抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体またはその抗原結合断片を提供する。
第３の態様のいくつかの実施形態では、重鎖可変領域が、配列番号２６に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の相同性を有するアミノ酸配列を有し、軽鎖可変領域が、配列番号２７に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の相同性を有するアミノ酸配列を有する。
第３の態様のいくつかの実施形態では、重鎖可変領域が、配列番号２８に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の相同性を有するアミノ酸配列を有し、軽鎖可変領域が、配列番号２９に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の相同性を有するアミノ酸配列を有する。
第３の態様のいくつかの実施形態では、重鎖可変領域が、配列番号３０に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の相同性を有するアミノ酸配列を有し、軽鎖可変領域が配列番号３１に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の相同性を有するアミノ酸配列を有する。
第３の態様のいくつかの実施形態では、重鎖可変領域が、配列番号３２に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の相同性を有するアミノ酸配列を有し、軽鎖可変領域が、配列番号３３に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の相同性を有するアミノ酸配列を有する。
第４の態様では、本願は、抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体またはその抗原結合断片は、重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が、重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）、重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）および重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）を含み、
重鎖可変領域が、配列番号６に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ１、配列番号７に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ２および配列番号８に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ３を含み；または
重鎖可変領域が、配列番号６に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ１、配列番号１２に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ２および配列番号８に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ３を含み；または
重鎖可変領域が、配列番号１４に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ１、配列番号１５に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ２および配列番号１６に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ３を含み；または
重鎖可変領域が、配列番号２０に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ１、配列番号２１に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ２および配列番号２２に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ３を含み、
ここで、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３アミノ酸配列がＫａｂａｔ定義に従う、抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体またはその抗原結合断片を提供する。
第４の態様に記載の抗体の一例は、１つの重鎖可変領域のみからなり、ナノ抗体とも呼ばれる重鎖抗体の可変領域（ＶＨＨ）としても知られているシングル領域抗体である。ＶＨＨ抗体は天然に存在するものである。ＶＨＨ抗体は、もともとアルパカ末梢血から発見された天然由来の軽鎖欠損抗体であり、１つの重鎖可変領域（ＶＨＨ）と２つの従来のＣＨ２およびＣＨ３領域のみを有している。クローン化され発現したＶＨＨ構造は、オリジナルの重鎖抗体と同等の構造安定性と抗原結合活性を持ち、標的抗原と結合することが知られている最小のユニットである。
第１から第４の態様のいくつかの実施形態では、重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号２６、２８、３０または３２に示されるアミノ酸配列と約１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸の置換、欠失および／または付加で相違する。いくつかの実施形態では、配列番号２６、２８、３０または３２に示されるアミノ酸配列のＣ端またはＮ端領域は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、２５またはより多くのアミノ酸がトランケートされ、前記抗体の重鎖可変領域の同じような機能を維持するものであってもよい。いくつかの実施形態では、配列番号２７、２９、３１または３３に示されるアミノ酸配列のＣ端またはＮ端領域は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、２５またはより多くのアミノ酸を付加し、得られたアミノ酸配列が前記抗体の重鎖可変領域の同じような機能を維持するものであってもよい。いくつかの実施形態では、変化後のアミノ酸配列が前記抗体の重鎖可変領域の同じような機能を基本的に維持する限り、配列番号２７、２９、３１または３３に示されるアミノ酸配列のＣ端またはＮ端以外の領域に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、２５またはより多くのアミノ酸を付加または欠失してもよい。
第１から第４の態様のいくつかの実施形態では、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号２７、２９、３１または３３に示されるアミノ酸配列と約１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸の置換、欠失および／または付加で相違する。いくつかの実施形態では、配列番号２７、２９、３１または３３に示されるアミノ酸配列のＣ端またはＮ端領域は、さらに、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、２５またはより多くのアミノ酸がトランケートされ、前記抗体の軽鎖可変領域の同じような機能を維持するものであってもよい。いくつかの実施形態では、さらに、配列番号２７、２９、３１または３３に示されるアミノ酸配列のＣ端またはＮ端領域は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、２５またはより多くのアミノ酸を付加し、得られたアミノ酸配列が前記抗体の軽鎖可変領域の同じような機能を維持するものであってもよい。いくつかの実施形態では、さらに、変化後のアミノ酸配列が前記抗体の軽鎖可変領域の同じような機能を基本的に維持する限り、配列番号２７、２９、３１または３３に示されるアミノ酸配列のＣ端またはＮ端以外の領域に、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、２５またはより多くのアミノ酸を付加または欠失してもよい。
第１から第４の態様のいくつかの実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体は、全長抗体、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）または二重特異性抗体である。第１から第４の態様のいくつかの実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体の抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ＦｖまたはＦ（ａｂ’）2である。第１から第４の態様のいくつかの実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体は、マウス由来抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体または完全ヒト抗体である。第１から第４の態様のいくつかの実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体は、モノクローナル抗体である。第１から第４の態様のいくつかの実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体は、二重特異性抗体である。第１から第４の態様のいくつかの実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４アイソタイプであり、即ち、抗体が、ＩｇＧ１サブタイプ、ＩｇＧ２サブタイプまたはＩｇＧ４サブタイプの重鎖定常領域を含む。いくつかの具体実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプである。第１から第４の態様のいくつかの実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体は、κサブタイプまたはλサブタイプの軽鎖定常領域を含む。
第５の態様では、本願は、治療薬と複合する第１から第４の態様に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体またはその抗原結合断片を含む、免疫薬物複合体（抗体－薬物複合体（ＡＤＣ）ともいう）を提供する。
第５の態様のいくつかの実施形態では、治療薬は、抗腫瘍医薬であり、例えば、細胞毒性薬、免疫増強剤または放射性同位体である。
いくつかの実施形態では、細胞毒性薬の種類は、微小管タンパク質阻害剤（例えば、アルカロイド）、ＤＮＡトポイソメラーゼ阻害剤、ＤＮＡ損傷剤、代謝拮抗剤または抗腫瘍抗生物質を含む。
いくつかの実施形態では、微小管タンパク質阻害剤は、オレスタチン誘導体（例えば、ＭＭＡＥ（Ｍｏｎｏｍｅｔｈｙｌ ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ Ｅ）、ＭＭＡＦ（Ｍｏｎｏｍｅｔｈｙｌ ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ Ｆ））またはマイタンシンアルカロイド誘導体（例えば、ＤＭ１、ＤＭ４、アンサミトシン（Ａｎｓａｍｉｔｏｃｉｎ）、マイタンシン（Ｍｅｒｔａｎｓｉｎｅ）またはドラスタチン（ｄｏｌａｓｔａｔｉｎ）およびその誘導体）を含むが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、ＤＮＡトポイソメラーゼ阻害剤は、カンプトテシン類似体またはＤＮＡトポイソメラーゼＩ阻害剤およびその誘導体であり、例えば、ＤＸＤ、ＳＮ３８、イリノテカン、イリノテカン塩酸塩、カンプトテシン、９－アミノカンプトテシン、９－ニトロカンプトテシン、１０－ヒドロキシカンプトテシン、９－クロロ－１０－ヒドロキシカンプトテシン、２２－ヒドロキシラビノミシン、トポテカン、レトテカン、ベロテカン、エキセテカン、シリルホモカンプトテシン（ｈｏｍｏｓｉｌａｔｅｃａｎ）、６，８－ジブロモ－２－メチル－３－［２－（Ｄ－キシロピラノシルアミノ）フェニル］－４（３Ｈ）－キナゾリノン、２－シアノ－３－（３，４－ジヒドロキシフェニル）－Ｎ－（フェニルメチル）－（２Ｅ）－２－アクリルアミド、２－シアノ－３－（３，４－ジヒドロキシフェニル）－Ｎ－（３－ヒドロキシフェニルプロピル）－（Ｅ）－２－アクリルアミド、１２－β－Ｄ－グルコピラノシル－１２，１３－ジヒドロ－２，１０－ジヒドロキシ－６－［［２－ヒドロキシ－１－（ヒドロキシメチル）エチル］アミノ］－５Ｈ－インドロ［２，３－ａ］ピロロ［３，４－ｃ］カルバゾール－５，７（６Ｈ）－ジオン、Ｎ－［２－（二メチルアミノ）エチル］－４－アクリジンカルボキサミド二塩酸塩、Ｎ－［２－（二メチルアミノ）エチル］－４－アクリジンカルボキサミドである。
いくつかの実施形態では、ＤＮＡ損傷剤は、カリケアミシンクラス（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ）系、デュオカルマイシン（ｄｕｏｃａｒｍｙｃｉｎ）系、アントラサイクリン誘導体PBD（ｐｙｒｒｏｌｏｂｅｎｚｏｄｉａｚｅｐｉｎｅ、ピロロベンゾジアゼピン）を含むが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、代謝拮抗剤は、メトトレキサート、6－メルカプトプリンまたは5－フルオロウラシルを含むが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、抗腫瘍抗生物質は、ポリペプチド系抗生物質（例えば、アクチノマイシンDまたはブレオマイシン）またはアントラキノン系薬剤（例えば、塩酸アドリアマイシンまたは塩酸ミトキサントロン）を含むが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、放射性同位体は、２１１Ａｔ、１３１Ｉ、１２５Ｉ、９０Ｙ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１５３Ｓｍ、２１２Ｂｉ、３２Ｐ、６０Ｃｏまたは１７７Ｌｕを含むが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、免疫増強剤は、レバミソール（ｌｅｖａｍｉｓｏｌｅ）、ピドチモド（ｐｉｄｏｔｉｍｏｄ）、イミキモド（ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ）、イソプロテレノール、ポリノシン酸、またはポリノシン酸を含むが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、本願の抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体抗体は、接合部を介して薬剤部分に共有結合している。いくつかの実施形態では、接合部は、開裂可能な接合部である。いくつかの実施形態では、接合部は、細胞内条件下で開裂可能である。ある実施形態では、接合部は、５．５未満のｐＨで加水分解可能である。いくつかの実施形態では、接合部は、細胞内プロテアーゼによって開裂可能である。いくつかの実施形態では、接合部は、組織プロテアーゼ切断可能な接合部である。いくつかの実施形態では、接合部は、ジペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ジペプチドは、バリン（Ｖａｌ）－シトルリン（Ｃｉｔ）である。いくつかの実施形態では、抗体は、抗体のシステインスルフヒドリル基を介して接合部に結合される。ある実施形態では、抗体は、抗体のアミノ基（特に、グルタミン残基のアミノ基）を介して接合部に結合している。接合体の非限定的な例としては、ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢ、ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢＣ、ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ、ＮＨ2－（ＰＥＧ）ｍ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ、ＮＨ2－（ＰＥＧ）ｍ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐＡＢであり、ここでｍは１～８までの整数である。
第６の態様では、本願は、第１から第４の態様に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体またはその抗原結合断片または第５の態様に記載の免疫薬物複合体と、薬理学的に許容される賦形剤、希釈剤または担体とを含む、医薬組成物を提供する。
いくつかの実施形態では、前記医薬組成物は、タルク、ステアリン酸マグネシウムおよび鉱油などの潤滑剤；湿潤剤；乳化剤；懸濁剤；安息香酸、ソルビン酸およびプロピオン酸カルシウムなどの保存剤；甘味料および／または香味剤、等の１つ以上をさらに含むことができる。いくつかの実施形態では、本願の医薬組成物は、錠剤、丸薬、粉末、トローチ、エリキシル、懸濁液、乳剤、溶液、シロップ、座薬またはカプセルの形態に処方することができる。
いくつかの実施形態では、本願の医薬組成物は、任意の生理学的に許容される投与様式を用いて投与されることができ、これには、経口投与、非経口投与、経鼻投与、直腸投与、腹腔内投与、血管内注射、皮下投与、経皮投与、吸入投与、等が含まれるが、これらに限定されるものではない。
いくつかの実施形態では、治療用医薬組成物は、所望の純度の試薬を薬学的に許容される担体、賦形剤などと適宜混合することにより、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で保存するために処方することができる。
第６の態様のいくつかの実施形態では、医薬組成物は、個体における免疫応答の調節、Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質によるＰＢＭＣリンパ球増殖の阻害の逆転、Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質によるＰＢＭＣリンパ球ＩＦＮ－γ分泌の阻害の逆転、個体における腫瘍細胞増殖の阻害または過増殖性障害（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ１５の異常発現に関連する過増殖性障害）の治療のために用いられる。いくつかの具体実施形態では、過増殖性障害は、腫瘍、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ１５の異常発現に関連する腫瘍である。
第６の態様のいくつかの実施形態では、第６の態様の医薬組成物は、腫瘍を治療するために、抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体と組み合わせて使用される。
第７の態様では、本願は、個体における免疫応答の調節、Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質によるＰＢＭＣリンパ球増殖の阻害の逆転、Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質によるＰＢＭＣリンパ球ＩＦＮ－γ分泌の阻害の逆転、個体における腫瘍細胞増殖の阻害または過増殖性障害（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ１５の異常発現に関連する過増殖性障害）の治療のための医薬の製造における第１から第４の態様に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体またはその抗原結合断片または第５の態様に記載の免疫薬物複合体の使用を提供する。いくつかの具体実施形態では、過増殖性障害は、腫瘍、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ１５の異常発現に関連する腫瘍である。
第７の態様のいくつかの実施形態では、前記医薬は、さらに、抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体を含む。
第８の態様では、本願は、個体における免疫応答の調節、Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質によるＰＢＭＣリンパ球増殖の阻害の逆転、Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質によるＰＢＭＣリンパ球ＩＦＮ－γ分泌の阻害の逆転、個体における腫瘍細胞増殖の阻害または過増殖性障害（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ１５の異常発現に関連する過増殖性障害）の治療のための方法であって、それを必要とする個体に、治療有効量の第１から第４の態様に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体またはその抗原結合断片、第５の態様に記載の免疫薬物複合体または請求項１２～１５のいずれか一項記載の医薬組成物を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの具体実施形態では、過増殖性障害は、腫瘍、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ１５の異常発現に関連する腫瘍である。
第８の態様のいくつかの実施形態では、方法は、さらに、それを必要とする個体に抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体を投与することを含む。
第６から第８の態様の実施形態では、本願の抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体は、Ｔ細胞上のカウンターレセプターへのＳｉｇｌｅｃ－１５の結合を低減または防止してＴ細胞応答を誘導することにより、Ｔ細胞増殖を誘導、増加または強化するために使用することができる。免疫系のアップレギュレーションは、癌や慢性感染症の治療において特に必要とされるため、本願の抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体は、このような疾患の治療に用いることができる。
本願の抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体、免疫薬物複合体または医薬組成物は、以下を含む（ただし、これらに限定されない）種々の癌または他の異常増殖性疾患の治療または予防に使用できる：膀胱癌、乳癌、結腸癌、腎癌、肝臓癌、肺癌、卵巣癌、すい臓癌、胃癌、子宮頸癌、甲状腺癌および皮膚癌などの癌；扁平細胞癌；白血病、急性リンパ球性白血病、急性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫及びバーキットリンパ腫を含むリンパ系造血系の腫瘍；急性及び慢性骨髄性白血病、前骨髄球性白血病を含む骨髄系造血系の腫瘍；線維肉腫及び横紋筋肉腫を含む間葉系の腫瘍；アストロサイトーマ、神経芽腫、グリオーマ及び神経芽腫を含む中央及び末梢神経の腫瘍；線維肉腫、横紋筋肉腫および骨肉腫を含む間葉系由来の腫瘍；ならびにメラノーマ、染色幹細胞、ケラトアカントーマ、セミノーマ、甲状腺の濾胞がんおよび奇形がんを含む他の腫瘍。
本願の抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体、免疫薬物複合体または医薬組成物は、感染症および感染性疾患を治療するために使用することができる。典型的には、本方法は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合分子の量を被験者に投与することにより、感染開始因子に対する免疫応答を刺激または増強すること、感染症の進行を軽減または防止すること、またはそれらの組合せを含む。本方法は、感染症の１つまたは複数の症状を軽減することができる。感染症または疾患は、細胞内に侵入し、細胞傷害性Ｔリンパ球によって攻撃される細菌、ウイルス、原虫、蠕虫または他の微生物病原体によって引き起こされることができる。感染症や病気には、急性感染症と慢性感染症がある。急性感染症は通常、短命の感染症である。急性微生物感染症の間、免疫細胞は、免疫調節受容体を発現し始める。したがって、いくつかの実施形態では、本方法は、急性感染に対する免疫刺激性応答を増強することを含んでいる。
第９の態様では、本願は、第１から第４の態様に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体または抗原結合断片をコードする単離ポリヌクレオチドを提供する。いくつかの実施形態では、前記ポリヌクレオチドは、調節配列に作動可能に連結されており、該調節配列は、前記ベクターで形質転換した宿主細胞によって認識可能である。
第１０の態様では、本願は、第１から第４の態様に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体または抗原結合断片をコードするポリヌクレオチドを含む、ベクター（例えば、発現ベクター）を提供する。発現ベクターの選択は、宿主細胞の選択に依存し、選択された宿主細胞において所望の発現および調節特性を有するように選択することができる。
「発現ベクター」とは、１つ以上の発現制御配列を含むベクターであり、「発現制御配列」とは、他のＤＮＡ配列の転写および／または翻訳を制御・調節するＤＮＡ配列である。
ベクター中の核酸は、１つまたは複数の発現制御配列に作動可能に連結され得る。本明細書で使用する場合、「作動可能に連結された」とは、発現制御配列が標的コード配列の発現を効果的に制御するように、遺伝子構築物に組み込まれることを意味する。発現制御配列の例としては、プロモーター、エンハンサーおよび転写終結領域が挙げられる。プロモーターは、転写開始部位（通常はＲＮＡポリメラーゼＩＩの開始部位付近）の上流１００ヌクレオチド以内のＤＮＡ分子の領域からなる発現制御配列である。コーディング配列がプロモーターの制御下にあるためには、ペプチド翻訳リーディングフレームの翻訳開始部位がプロモーターの１～約５０ヌクレオチドの下流に位置する必要がある。エンハンサーは、タイミング、位置、レベルの点で発現特異性を提供する。プロモーターとは異なり、エンハンサーは転写部位から異なる距離に位置していても作用することができる。また、エンハンサーは転写開始部位の下流に位置することもある。ＲＮＡポリメラーゼがコード配列をｍＲＮＡに転写し、それがコード配列によってコードされるタンパク質に翻訳されることができるとき、コード配列は細胞内で発現制御配列と「作動可能に連結」し、発現制御配列の「制御下にある」。
好適な発現ベクターとしては、例えば、ファージ、バキュロウイルス、タバコモザイクウイルス、ヘルペスウイルス、サイトメガロウイルス、レトロウイルス、ポックスウイルス、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルスに由来するプラスミドおよびウイルスベクターがあるが、これらに限定されない。ベクターや発現系は、Ｎｏｖａｇｅｎ（Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ（Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ）、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ（ＬａＪｏｌｌａ，ＣＡ）およびＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）などの会社から市販されているものが多くある。
発現ベクターは、タグ配列を含んでいてもよい。タグ配列は、典型的には、コードされたポリペプチドとの融合体として発現される。このようなタグは、カルボキシル末端またはアミノ末端を含む、ポリペプチド内の任意の位置に挿入することができる。有用なタグの例としては、Ｆｃ断片、ポリヒスチジン、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、グルタチオンＳ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、ｃ－ｍｙｃ、ヘマグルチニン、ＦｌａｇＴＭタグ（コダック、ニューヘブン、ＣＴ）、マルトースＥ結合タンパク質およびタンパク質Ａなどがあるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、シグレック１５融合ポリペプチドをコードする核酸分子は、Ｉｇ重鎖の定常領域の１つ以上の構造領域をコードする核酸を含むベクター中に存在し、前記構造領域は、例えば、ヒト免疫グロブリンＣγ１鎖のヒンジ領域、ＣＨ２領域及びＣＨ３領域のアミノ酸配列（Ｆｃ断片）に相当する。
第１１の態様では、本願は、第１０の態様に記載の担体を含む単離宿主細胞を提供する。
いくつかの実施形態では、宿主細胞は、原核宿主細胞、真核宿主細胞またはファージであってもよい。原核生物宿主細胞は、例えば、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ、ＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓまたはＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｃｈｉｍａｅｒｉｃｕｓであってもよい。真核宿主細胞としては、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、分裂酵母、Ｘｙｌａｒｉａ等の真菌、Ｍｅａｄｏｗ ｓｌｉｍｅ等の昆虫細胞、タバコ等の植物細胞、ＢＨＫ細胞、ＣＨＯ細胞、ＣＯＳ細胞、ミエローマ細胞等の哺乳類細胞等を挙げることが出来る。
第１２の態様では、本願は、第１から第４の態様に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体またはその抗原結合断片の製造方法であって、第１１の態様に記載の宿主細胞を培養する工程を含む、方法を提供する。第１２の態様のいくつかの実施形態では、前記方法は、さらに、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体またはその抗原結合断片を単離する工程を含む。
上記の詳細な説明は、当業者に対して本願の内容をより明確に理解させることのみを目的としており、いかなる点においても限定することを意図していないことが理解されるべきである。当業者は、説明した実施形態に対して様々な変更および変形を行うことができる。
なお、以下の実施形態は例示であり、本願の範囲を限定するためのものではない。
実施例１、Ｓｉｇｌｅｃ１５抗原および測定タンパク質の製造
本願の発明者らは、Ｕｎｉｐｒｏｔ（Ｑ６ＺＭＣ９）を用いて、免疫用Ｓｉｇｌｅｃ１５抗原および検出用Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質のアミノ酸配列を取得した。Ｓｉｇｌｅｃ１５のＩｇＶ領域または細胞外領域の全長を、それぞれＩｇＧ抗体重鎖ヒトＩｇＧ１Ｆｃ断片または７つのヒスチジン（Ｈｉｓｔｉｄｉｎｅ，Ｈｉｓ）と組み替え、ｐＣＤＮＡ３．１ベクター（南京Ｋｉｎｇｓｒａｙ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ， Ｌｔｄ．）にクローニングした。上記プラスミドをＰＥＩトランスフェクション法を用いてＨｅｋ２９３Ｆ哺乳類細胞にトランスフェクションし、トランスフェクション７日後に細胞上清を回収して精製した。このプラスミドをそれぞれＳｉｇｌｅｃ１５－ＩｇＶ－Ｆｃ、Ｓｉｇｌｅｃ１５－ＥＣＤ－ＦｃまたはＳｉｇｌｅｃ１５－ＥＣＤ－Ｈｉｓと命名し、そのアミノ酸配列を以下に示す。
ヒトＳｉｇｌｅｃ１５（配列番号１）の全長アミノ酸配列は以下の通りであり、１－１９位はシグナルペプチド配列、２０－２６３位は細胞外構造領域（イタリック文字、太字）、４０－１５８位はＩｇＶ構造領域（シングル下線）、１６８－２５１位はＩｇＣ２構造領域（ダブル下線）である。
Figure 0007653532000001
Ｓｉｇｌｅｃ１５－ＥＣＤ－Ｆｃ（配列番号２）のアミノ酸配列は以下の通りであり、１－１９位はシグナルペプチド、２０－２６３位はＳｉｇｌｅｃ１５細胞外構造領域（ＥＣＤ）（斜体、太字で表示）、２６４－４９４位はＦｃタグである。
Figure 0007653532000002
Ｓｉｇｌｅｃ１５－ＩｇＶ－Ｆｃ（配列番号３）のアミノ酸配列は以下の通りであり、１－１９位はシグナルペプチド、４０－１５８位はＳｉｇｌｅｃ１５のＩｇＶ領域（イタリック体、太字で表示）、１６６－３９６位はＦｃタグである：
Figure 0007653532000003
Ｓｉｇｌｅｃ１５－ＥＣＤ－Ｈｉｓ（配列番号４）は、本願の検出試薬として使用され、以下のアミノ酸配列を有し、ここで、１－１９位はシグナルペプチド、２０－２６３位はＳｉｇｌｅｃ１５細胞外構造領域（ＥＣＤ）（イタリック体、太字で表示）、２６４－２７０位はヒスチジンタグである：
Figure 0007653532000004
実施例２、組換えタンパク質または抗体の精製
２．１ Ｈｉｓタグ付き組換えタンパク質の精製
高速遠心分離により沈殿物を除去し、細胞発現上清を回収した。ニッケルカラムを１０ｍＭイミダゾールを含むＨＢＳバッファー（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．５、５００ｍＭＮａＣｌ）で予備平衡化し、カラム容量の２～５倍をリンスし、上清試料をニッケルカラムにロードした。Ａ２８０の測定値がベースラインに下がるまで、１０ｍＭイミダゾールを含むＨＢＳバッファーでカラムをすすいだ。次に、クロマトグラフィーカラムを２０ｍＭイミダゾールを含むＨＢＳバッファーで洗浄し、非特異的に結合したヘテロ蛋白質を除去し、流出液を回収した。その後、３００ｍＭイミダゾールを含むＨＢＳバッファーで標的タンパク質を溶出し、溶出ピークを回収し、回収した溶出液をＨＢＳバッファーに交換した。ニッケルカラム精製により得られたＳｉｇｌｅｃ１５－ＥＣＤ－Ｈｉｓタンパク質は、本願の抗体のスクリーニングおよび性能試験に使用した。
２．２ Ｆｃ融合タンパク質または抗体の精製
細胞発現上清を高速遠心分離により沈殿物を除去し、上清を回収した。Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ／ＧカラムをＰＢバッファーで予備平衡化し、カラム容量の２～５倍の量をリンスし、上清のサンプルをカラムにロードした。Ａ２８０の測定値がベースラインに下がるまで、ＰＢバッファーでカラムをリンスした。ｐＨ２．７の０．１Ｍグリシン溶液をｐＨ９．０にプレスパイクした１ＭＴｒｉｓ－ＨＣＬ中和バッファーに通すことで標的タンパク質を溶出し、集めた溶出液をＰＢＳバッファーに交換した。Ｆｃ断片を有するＳｉｇｌｅｃ１５－ＥＣＤ－Ｆｃ、Ｓｉｇｌｅｃ１５－ＩｇＶ－Ｆｃは、免疫原として、あるいは本願抗体の性能試験用として用いられた。融合Ｆｃ断片は、哺乳類における標的タンパク質の発現・分泌を促進し、また、Ｆｃ断片はプロテインＡに特異的に結合できるため、融合タンパク質の精製を容易にし、さらに、Ｆｃ断片は動物の抗ヒト二次抗体で認識・結合できるため、抗体阻害の効果を示すために用いることができる。
実施例３、抗ヒトＳｉｇｌｅｃ１５ハイブリドーマモノクローナル抗体の製造
６～８週齢の健康なＢＡＬＢ／ｃ雌マウスを選び、それぞれＳｉｇｌｅｃ１５－ＥＣＤ－ＦｃおよびＳｉｇｌｅｃ１５－ＩｇＶ－Ｆｃタンパク質で免疫した。初回免疫には、フロイント完全アジュバントと免疫タンパク質の混合物を乳化し、免疫原とアジュバントが１：１の割合で、それぞれ１００μｇ／匹ずつマウスの背部と鼠径部に皮下注射した。初回免疫の前に、血清抗体力試験の陰性対照として、マウスの目から少量の血液を採取した。初回免疫の７～１０日後、フロイントインコンプリートアジュバントと免疫タンパク質の混合乳剤を初回免疫と同じルートでブースター免疫した。以後、ブースター免疫は、免疫原とアジュバントの比が１：１で、５０μｇ／１ずつ、７～１０日間隔で２～３回実施した。マウスから末梢血清を採取し、以下に記載するように、酵素結合免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）により試験した。図１に示すＳｉｇｌｅｃ１５－ＥＣＤ－ＦｃおよびＳｉｇｌｅｃ１５－ＩｇＶ－Ｆｃタンパク質で免疫したマウスは、いずれも血清力価が３６万以上であり、血漿抗体価の高いマウスをそれぞれ細胞融合に選択した。融合の３日前に、アジュバントを含まない免疫原５０μｇを尾静脈または腹腔内に注射し、ショック免疫とした。融合当日、マウス脾臓を採取し、ＲＰＭＩ１６４０基礎培地（ＧＩＢＣＯ）を用いて単細胞懸濁液に製造し、ＳＰ２／０細胞と脾臓細胞を１：３～１：５の割合で混合して電気融合により融合させた。ＨＡＴ選択培地により５～７日間培養し、ＨＴ培地に切り替えて３７℃ ＣＯ2インキュベーターに入れ、さらに培養を行った。
ＥＬＩＳＡ法で抗体の力価を測定し、またはモノクローナル抗体をスクリーニングし、具体的な方法は以下の通りである：
（１）コーチング化：Ｓｉｇｌｅｃ１５－ＥＣＤ－Ｈｉｓタンパク質を抗原カプセル化バッファー（ｐＨ ９．６、０．０５Ｍ炭酸塩バッファー）に最終濃度１μｇ／ｍＬになるように溶解し、９６ウェルポリスチレンリーダープレートで４℃にて一晩コーチング化した。
（２）クロージング：プレートをＰＢＳＴ バッファーで３回洗浄した後、２％ＢＳＡ を含むＰＢＳ溶液を各ウェルに添加し、３７℃で２時間インキュベートした後、プレートをＰＢＳＴバッファーで３回洗浄した。
（３）一次抗体のインキュベーション：マウス血清（またはハイブリドーマ細胞分泌上清、精製抗体）を０．２％ＢＳＡ を含む一連の濃度勾配に多重希釈し、酵素プレートに添加した。初回免疫前にマウスから採取した目の血清を陰性対照として使用し、ブランクは０．２％ＢＳＡを含むＰＢＳで３７℃、２時間インキュベートした。プレートはＰＢＳＴバッファーで３回洗浄した。
（４）二次抗体のインキュベーション：西洋ワサビペルオキシダーゼ標識ヤギ抗ヒトＩｇＧを加え、３７℃で１時間インキュベートし、ＰＢＳＴバッファーでプレートを３回洗浄した。
（５）発色：ＴＭＢ基質発色液ＡとＢを混合し、１ウェルあたり１００μＬを加え、遮光し、室温で１０分間反応させる。
（６）終了：各ウェルに１００μＬの２Ｍ Ｈ2ＳＯ4を加え、発色反応を終了させた。
（７）測定：酵素プレートの各ウェルの吸光度値を、酵素マーカーにより４５０ｎｍで測定した。
実施例４、ハイブリドーマ細胞株のスクリーニングと特性評価
ハイブリドーマ細胞を一定量まで増殖させた後、Ｓｉｇｌｅｃ１５－Ｈｉｓタンパク質を９６ウェル酵素標識プレートに封入し、マウス抗Ｓｉｇｌｅｃ１５血清を陽性対照としたＥＬＩＳＡ法によりハイブリドーマ上清をスクリーニングして陽性クローンを選択した。ＬＲＲＣ４Ｃ－Ｈｅｋ２９３細胞へのＳｉｇｌｅｃ１５－ＥＣＤ－Ｆｃの結合アッセイを阻害する陽性クローン上清を検出することにより、抗体３－１０Ｂ２、１－１５Ｄ１、１－７Ｆ４、３－８Ｂ９、１４Ａ７、１３Ｅ４、４Ｇ５、９Ｈ７、１－１０Ｅ５および１４Ｃ４はＳｉｇｌｅｃ１５－ＥＣＤ－ＦｃとＬＲＲＣ４Ｃ－Ｈｅｋ２９３細胞の結合を阻害することが明らかになり、後述する図２に示すような実験結果を得た。本発明者らは、これら１０個の細胞株を限定希釈法によるサブクローナルスクリーニングに供し、得られたモノクローナル陽性細胞株を最終的に別々に保存し、ハイブリドーマ細胞の上清を採取してＰｒｏｔｅｉｎＧにより精製した。
Ｓｉｇｌｅｃ１５－ＥＣＤ－ＦｃとＬＲＲＣ４Ｃ－Ｈｅｋ２９３細胞との結合は、シングルサイトブロッキングフローサイトメトリーにより、以下のように検出した：
Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅシステムを用いて、ヒトＬＲＲＣ４Ｃ（配列番号５に示すアミノ酸配列）プラスミドをＨｅｋ２９３細胞にトランスフェクトし、４８ｈ後にＧ４１８（８００μｇ／ｍＬ）を添加して１０～１４日間スクリーニングし、ＬＲＲＣ４Ｃを安定発現する細胞株を取得した。細胞を回収し、ＰＢＳ緩衝液で１回洗浄し、２％ＦＢＳを含むＰＢＳで１時間室温で閉鎖し、ハイブリドーマ細胞上清を加え、５０μｌ／ウェルとなる；直後に希釈Ｓｉｇｌｅｃ１５－ＥＣＤ－Ｆｃタンパク質（２μｇ／ｍｌ）を加え、５０μｌ／ウェル；陰性対照としてマウス由来のＩｇＧを使用した。細胞を４℃で５０分間インキュベートした後、０．２％ＦＢＳを含むＰＢＳバッファーで３回洗浄し、次に２％ＦＢＳを含むＰＢＳでＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８標識ヤギ抗ヒトＩｇＧで希釈し、光から保護して４℃で５０分間インキュベートし、０．２％ＦＢＳを含むＰＢＳバッファーで３回洗浄し；最後に２００μＬ ＰＢＳに細胞を再懸濁した。分析は、フローサイトメトリーで行った。ＦＩＴＣ蛍光強度を横座標、細胞数を縦座標とし、ブランク対照が座標軸の原点になるように電圧パラメータを調整し、各サンプルについて１０，０００細胞の平均蛍光測定値を記録した。ハイブリドーマ細胞上清がＬＲＲＣ４ＣへのＳｉｇｌｅｃ１５－ＥＣＤ－Ｆｃタンパク質結合を阻害する割合は、阻害率＝（陰性対照読み取り値－試験する上清読み取り値－ブランク対照読み取り値）／（陰性対照読み取り値－ブランク対照読み取り値）として計算した。
ヒトＬＲＲＣ４Ｃ全長アミノ酸配列如下（配列番号５）：
ＭＬＮＫＭＴＬＨＰＱＱＩＭＩＧＰＲＦＮＲＡＬＦＤＰＬＬＶＶＬＬＡＬＱＬＬＶＶＡＧＬＶＲＡＱＴＣＰＳＶＣＳＣＳＮＱＦＳＫＶＩＣＶＲＫＮＬＲＥＶＰＤＧＩＳＴＮＴＲＬＬＮＬＨＥＮＱＩＱＩＩＫＶＮＳＦＫＨＬＲＨＬＥＩＬＱＬＳＲＮＨＩＲＴＩＥＩＧＡＦＮＧＬＡＮＬＮＴＬＥＬＦＤＮＲＬＴＴＩＰＮＧＡＦＶＹＬＳＫＬＫＥＬＷＬＲＮＮＰＩＥＳＩＰＳＹＡＦＮＲＩＰＳＬＲＲＬＤＬＧＥＬＫＲＬＳＹＩＳＥＧＡＦＥＧＬＳＮＬＲＹＬＮＬＡＭＣＮＬＲＥＩＰＮＬＴＰＬＩＫＬＤＥＬＤＬＳＧＮＨＬＳＡＩＲＰＧＳＦＱＧＬＭＨＬＱＫＬＷＭＩＱＳＱＩＱＶＩＥＲＮＡＦＤＮＬＱＳＬＶＥＩＮＬＡＨＮＮＬＴＬＬＰＨＤＬＦＴＰＬＨＨＬＥＲＩＨＬＨＨＮＰＷＮＣＮＣＤＩＬＷＬＳＷＷＩＫＤＭＡＰＳＮＴＡＣＣＡＲＣＮＴＰＰＮＬＫＧＲＹＩＧＥＬＤＱＮＹＦＴＣＹＡＰＶＩＶＥＰＰＡＤＬＮＶＴＥＧＭＡＡＥＬＫＣＲＡＳＴＳＬＴＳＶＳＷＩＴＰＮＧＴＶＭＴＨＧＡＹＫＶＲＩＡＶＬＳＤＧＴＬＮＦＴＮＶＴＶＱＤＴＧＭＹＴＣＭＶＳＮＳＶＧＮＴＴＡＳＡＴＬＮＶＴＡＡＴＴＴＰＦＳＹＦＳＴＶＴＶＥＴＭＥＰＳＱＤＥＡＲＴＴＤＮＮＶＧＰＴＰＶＶＤＷＥＴＴＮＶＴＴＳＬＴＰＱＳＴＲＳＴＥＫＴＦＴＩＰＶＴＤＩＮＳＧＩＰＧＩＤＥＶＭＫＴＴＫＩＩＩＧＣＦＶＡＩＴＬＭＡＡＶＭＬＶＩＦＹＫＭＲＫＱＨＨＲＱＮＨＨＡＰＴＲＴＶＥＩＩＮＶＤＤＥＩＴＧＤＴＰＭＥＳＨＬＰＭＰＡＩＥＨＥＨＬＮＨＹＮＳＹＫＳＰＦＮＨＴＴＴＶＮＴＩＮＳＩＨＳＳＶＨＥＰＬＬＩＲＭＮＳＫＤＮＶＱＥＴＱＩ
実施例５、抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体の種間交差認識特性
抗体の種間認識特性を評価するために、精製モノクローナル抗体１－１５Ｄ１、１－７Ｆ４、１４Ａ７および１－１０Ｅ５をヒト、カニクイザルおよびネズミのＳｉｇｌｅｃ１５と交差認識するようテストした。酵素プレートにＨｉｓタグ付きヒト、カニクイザルおよびマウスＳｉｇｌｅｃ１５タンパク質をコートし、それぞれ５０００ｎｇ／ｍｌ、１６６６．７ｎｇ／ｍｌ、５５５．６ｎｇ／ｍｌ、１８５．２ｎｇ／ｍｌ、６１．７ｎｇ／ｍｌ、２０．６ｎｇ／ｍｌ、６．９ｎｇ／ｍｌ、２．３ｎｇ／ｍｌ、０．８ｎｇ／ｍｌ、０．２５ｎｇ／ｍｌおよび０．１ｎｇ／ｍｌの１－１５Ｄ１、１－７Ｆ４、１４Ａ７および１－１０Ｅ５抗体を添加し、ＥＬＩＳＡ法により試験した。その結果、１－１５Ｄ１、１－７Ｆ４、１４Ａ７および１－１０Ｅ５抗体はヒト（図３）およびサル（図４）のＳｉｇｌｅｃ１５タンパク質に結合した。１４Ａ７および１－１０Ｅ５抗体はヒトおよびサルＳｉｇｌｅｃ１５タンパク質だけでなくマウスＳｉｇｌｅｃ１５タンパク質にも結合した（図５）。各種Ｓｉｇｌｅｃ１５に対する親和性のＥＣ50値を表１および図３～図５に示す。
Figure 0007653532000005
実施例６、ヒトマウスキメラ抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体の製造、発現および精製
Ｔｒｉｚｏｌ法を用いて３×１０6から５×１０6のハイブリドーマ細胞からＴｏｔａｌ ＲＮＡを抽出し、ＧｏＳｃｒｉｐｔＴＭ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍの実験説明書に従ってｃＤＮＡに逆転写した。続いてマウス免疫グロブリンの重鎖および軽鎖可変領域（Ｖ－ｒｅｇｉｏｎ）の断片をＰＣＲにより増幅し、配列をシーケンシングした。クローン１－１０Ｅ５、１－７Ｆ４、１－１５Ｄ１、１４Ａ７の重鎖および軽鎖ＣＤＲ領域の最終配列（表２）および可変領域のアミノ酸配列が得られた。
Figure 0007653532000006
１－１５Ｄ１重鎖可変領域アミノ酸配列（配列番号２６）
ＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＴＹＶＭＨＷＶＫＱＫＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＹＮＤＮＴＫＹＮＥＫＦＫＧＫＡＴＬＴＳＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＧＳＧＹＤＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ
１－１５Ｄ１軽鎖可変領域アミノ酸配列（配列番号２７）
ＤＩＱＭＡＱＳＰＡＳＬＳＶＳＶＧＥＴＶＴＩＴＣＲＴＳＥＮＩＹＳＨＬＡＷＹＱＱＫＱＧＫＳＰＱＬＬＶＹＳＡＴＮＬＡＤＧＶＰＳＲＦＮＧＳＧＳＧＴＱＹＳＬＫＩＮＳＬＱＳＥＤＦＧＳＹＹＣＱＨＦＷＧＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
１－７Ｆ４重鎖可変領域アミノ酸配列（配列番号２８）
ＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＴＹＶＭＨＷＶＫＱＫＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＹＮＤＫＴＫＹＮＥＫＦＫＧＫＡＴＬＴＳＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＶＳＲＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＧＳＧＹＤＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ
１－７Ｆ４軽鎖可変領域アミノ酸配列（配列番号２９）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＡＳＬＳＶＳＶＧＥＴＶＴＩＴＣＲＡＳＥＮＩＹＳＨＬＡＷＹＱＱＫＱＧＫＳＰＱＬＬＩＹＳＡＴＮＬＡＤＧＶＰＳＲＦＮＧＳＧＳＧＴＱＹＳＬＫＩＮＳＬＱＳＥＤＦＧＳＹＹＣＱＨＦＷＧＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
１－１０Ｅ５重鎖可変領域アミノ酸配列（配列番号３０）ＤＶＫＬＶＥＳＧＧＧＬ ＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＶＶＳＧＬＴＦＳＲＹＴＭＳＷＶＲＱＴＰＥＫＲＬＥＷＶＡＴＩＳＳＧＧＮＳＴＹＹＰＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＡＫＤＴＬＹＬＱＭＳＳＬＫＳＥＤＴＡＭＹＹＣＴＮＹＧＹＦＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ
１－１０Ｅ５軽鎖可変領域アミノ酸配列（配列番号３１）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＡＳＬＳＡＳＶＧＥＴＶＴＩＴＣＲＡＳＥＮＩＹＳＦＬＡＷＹＱＱＫＱＧＫＳＰＱＬＬＶＹＮＡＫＴＬＡＥＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＱＦＳＬＫＩＮＳＬＱＰＥＤＦＧＳＹＹＣＱＨＨＹＤＲＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ
１４Ａ７重鎖可変領域アミノ酸配列（配列番号３２）
ＤＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＱＳＬＳＬＴＣＴＶＴＧＹＳＩＴＳＤＦＡＷＮＷＩＲＱＦＰＧＮＫＬＥＷＭＧＹＩＲＦＳＧＳＴＴＹＫＰＴＬＫＳＲＩＳＩＴＲＤＴＳＫＮＱＦＦＬＱＬＮＳＶＴＴＥＤＳＡＴＹＹＣＡＲＥＤＹＤＧＬＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＴＳ
１４Ａ７軽鎖可変領域アミノ酸配列（配列番号３３）
ＤＶＬＭＴＱＴＰＬＳＬＰＶＳＬＧＤＨＡＳＩＳＣＲＳＳＱＴＩＬＨＳＮＧＮＴＹＬＤＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
上記４種類のモノクローナル抗体をコードする遺伝子の可変領域の配列情報に基づき、抗体のアイソタイプがヒトＩｇＧ１であり、２９７位のアスパラギン（Ｎ）がアラニン（Ａ）に変異したヒト－マウスキメラ抗体発現ベクターを構築した（本願ではｈＩｇＧ１と称する）。軽鎖可変領域及び定常領域（κ）、重鎖可変領域及び定常領域を含むＤＮＡ断片を合成し、ｐＣＤＮＡ３．１発現ベクターに挿入して発現プラスミドとした。この真核生物発現ベクターをＨｅｋ２９３細胞に一過性に導入し、５～７日間培養した。遠心分離により細胞上清を採取し、採取した培養上清をＰｒｏｔｅｉｎＡカラムで精製し、それぞれ１－７Ｆ４－ＩｇＧ１、１－１５Ｄ１－ＩｇＧ１、１－１０Ｅ５－ＩｇＧ１、１４Ａ７－ＩｇＧ１と命名した目的抗体を取得した。
実施例７、Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質に対するキメラ抗体の親和性のＦｏｒｔｅＢｉｏによる測定
本実施例で選択した対照抗体は、中国特許出願公開ＣＮ１１００３５７６９ＡからのＣＤＲ領域の配列を有する抗体５Ｇ１２であり、これを実施例６に示すようにｈＩｇＧ１（Ｎ２９７Ａ変異を含む）に結合させて５Ｇ１２－ＩｇＧ１を製造した。対照抗体５Ｇ１２は、発明者の解析により推定されたＮｅｓｑｕｅｌ （ＮｅｘｔＣｕｒｅ）の抗Ｓｉｇｌｅｃ１５薬物抗体ＮＣ－３１８である。
この実験では、ＨＩＳ１Ｋバイオセンサー結合リガンド（Ｓｉｇｌｅ１５－ＥＣＤ－Ｈｉｓタンパク質）を使用し、その後、分析対象物を結合した。ヒトＳｉｇｌｅ１５－ＥＣＤ－Ｈｉｓタンパク質を５μｇ／ｍｌに希釈し、０．３ｎｍの結合応答閾値までバイオセンサーに固定化した。１２０秒のベースラインステップの後、０．０２％ＰＢＳＴバッファーで２倍勾配で希釈した抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体１－７Ｆ４－ＩｇＧ１、１－１５Ｄ１－ＩｇＧ１、１－１０Ｅ５－ＩｇＧ１分析物にそれぞれセンサーを浸漬し、初期抗体濃度を１００ｎＭとし、７段階の濃度勾配を設定した。リファレンス対照としてＨｕｍａｎ ＩｇＧ１（ｈＩｇＧ１）（Ｂ１０９８０１，Ｂａｉｙｉｎｇ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｌｔｄ．）を、アフィニティ解析アッセイのポジティブ対照として５Ｇ１２－ＩｇＧ１を使用した。リガンドを被分析物に１２０秒間結合させ、３００秒間解離させた生データを解析ソフトに取り込み、濃度ゼロ対照を減算し、リファレンスチャンネルを減算してボリューム効果を排除し、解析ソフト上で回帰して結合曲線から抗原と抗体の親和性データを算出した。その結果を表３に示す。候補の抗体は高い親和性で標的抗原を認識し、いずれも対照抗体５Ｇ１２よりも有意に低いＫＤ値であった。
Figure 0007653532000007
実施例８、抗Ｓｉｇｌｅｃ１５キメラ抗体のＳｉｇｌｅｃ１５を発現するＨｅｋ２９３細胞株への結合特性
細胞表面に発現したヒトＳｉｇｌｅｃ１５に結合する抗Ｓｉｇｌｅｃ１５キメラ抗体の能力を、ヒトＳｉｇｌｅｃ１５過剰発現細胞株Ｈｅｋ２９３を使用して評価した。ヒト－マウスキメラ抗体は、５Ｇ１２－ＩｇＧ１を陽性対照として、それぞれ１０，０００ｎｇ／ｍｌ、５，０００ｎｇ／ｍｌ、１，６６６．７ｎｇ／ｍｌ、５５５．６ｎｇ／ｍｌ．２、６１．７ｎｇ／ｍｌ、２０．６ｎｇ／ｍｌの濃度にＰＢＳバッファーで希釈した。抗体をＨｅｋ２９３－ｓｉｇｌｅｃ１５細胞と４℃で１時間インキュベートし、細胞をＰＢＳバッファーで３回洗浄し、続いてＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体で５０分間光から保護した氷上で標識し、細胞をＰＢＳバッファーで３回洗浄してフローサイトメトリーで細胞の蛍光強度を読み取った。図６に示すように、抗体１－１０Ｅ５－ＩｇＧ１、１－７Ｆ４－ＩｇＧ１および１－１５Ｄ１－ＩｇＧ１は、Ｈｅｋ２９３細胞株上に発現したＳｉｇｌｅｃ１５と用量依存的に結合でき、いずれも対照抗体５Ｇ１２より有意に強く結合した。
実施例９、抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体によるＳｉｇｌｅｃ１５を介したＴ細胞増殖抑制の逆転現象
本発明者らは、組換えキメラ抗体によるＳｉｇｌｅｃ１５を介したヒト全ＰＢＭＣ Ｔ細胞増殖の阻害の逆転を測定した。測定の当日に、凍結ＰＢＭＣを解凍し、ＲＰＭＩ完全培地で洗浄し、計数した。ＰＭＢＣ（３×１０5細胞／ウェル）を、抗ヒトＣＤ３抗体（ＯＫＴ３、５０ｎｇ／ｍＬ；ｅＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ）を予め含有させた９６ウェルプレートに接種した。次に、予め混合したＳｉｇｌｅｃ１５－ＥＣＤ－Ｆｃ融合タンパク質（５μｇ／ｍｌ）および試験する抗体（２０μｇ／ｍｌ）を、指定のウェルに添加した。ｈＩｇＧ１を陰性対照（アイソタイプ）として、５Ｇ１２－ＩｇＧ１をポジティブ対照として使用した。細胞を３７℃で７２時間インキュベートし、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ社製）を加えて細胞生存率を検出した。
結果として、図７に示すように、組み換え抗体１－１５Ｄ１－ＩｇＧ１、１－７Ｆ４－ＩｇＧ１および１－１０Ｅ５－ＩｇＧ１は、陰性対照抗体ｈＩｇＧ１と比較してＳｉｇｌｅｃ１５によるヒトＴ細胞の抑制を逆転し、いずれも対照抗体５Ｇ１２より優れていたことがわかる。
実施例１０、抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体によるＳｉｇｌｅｃ１５を介したＴ細胞によるＩＦＮ－γの分泌抑制の逆転現象
本実験では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－１５抗体の活性を特徴付けるために、ｉｎ ｖｉｔｒｏ免疫刺激アッセイで活性化後のヒト由来ＰＢＭＣから分泌されるＩＦＮ－γ量を検出することにより、ＰＢＭＣの活性化効果を評価した。ＰＢＭＣは、健康なヒトの混合末梢血から分離し、ＲＰＭＩ完全培地で洗浄し、計数した。全ＰＭＢＣ（３×１０5 ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ）を、抗ヒトＣＤ３抗体（ＯＫＴ３， ５０ｎｇ／ｍＬ; ｅＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ）を予め含有する９６－ｗｅｌｌプレートに接種した。次に、予め混合したＳｉｇｌｅｃ１５－ＥＣＤ－Ｆｃ融合タンパク質（５μｇ／ｍｌ）と２０μｇ／ｍｌの濃度で試験する抗体を、指示したウェルに添加した。ｈＩｇＧ１は陰性対照（アイソタイプ）として、５Ｇ１２－ＩｇＧ１はポジティブ対照として使用した。細胞を３７℃で２４時間インキュベートし、上清を遠心分離してＩＦＮ－γの遊離を検出した。
結果として、図８に示すように、組み換え抗体１－１５Ｄ１－ＩｇＧ１、１－７Ｆ４－ＩｇＧ１、１－１０Ｅ５－ＩｇＧ１は、Ｓｉｇｌｅｃ１５によるＴ細胞によるＩＦＮ－γ分泌抑制を有効に回復させ、いずれも対照抗体５Ｇ１２よりも有意に有効であることがわかった。
実施例１１、抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体のエピトープ分類
１－１５Ｄ１－ＩｇＧ１、１－７Ｆ４－ＩｇＧ１、１－１０Ｅ５－ＩｇＧ１、５Ｇ１２－ＩｇＧ１の抗原性エピトープ分類はＯｃｔｅｔ ｅｐｉｔｏｐｅ ｐａｉｒｉｎｇにより検出された。ヒトＳｉｇｌｅｃ１５－ＥＣＤ－Ｈｉｓタンパク質を５ｕｇ／ｍｌでＨＩＳ１Ｋセンサーにロードし、その後、一次抗体と二次抗体をそれぞれ曝露した。２次抗体の結合シグナルは、２つの抗体が同じエピトープを認識しているかどうかを判断するために使用され、データはＦｏｒｔｅＢｉｏのデータ解析ソフトウェア７．０を使って処理された。一次抗体結合後の二次抗体の追加結合（６０％～１００％）は、占有されていないエピトープ（非競合）を示し、一次抗体結合後の二次抗体の追加部分結合（１０％～６０％）は、部分的に占有されたエピトープ（部分競合）を示し、結合なし（１０％未満）は、阻害されたエピトープ（競合）を示した。その結果、１－７Ｆ４－ＩｇＧ１は１－１５Ｄ１－ＩｇＧ１と同じ認識エピトープを持ち、１－１０Ｅ５－ＩｇＧ１は１－７Ｆ４－ＩｇＧ１および１－１５Ｄ１－ＩｇＧ１と一部重なり、１－１０Ｅ５－ＩｇＧ１、１－７Ｆ４－ＩｇＧ１および１－１５Ｄ１－ＩｇＧ１は５Ｇ１２－ＩｇＧ１とは全く異なる認識エピトープを持っていたことが判明した。
上記の説明は例示的な実施形態に過ぎず、本願を実施するために必要な特徴の組み合わせを限定するものではない。また、提供されるタイトルは、本願の多様な実施形態を制限することを意図していない。例えば、「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ」、「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ」、「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ」という用語は、限定することを意図していない。さらに、特に断らない限り、カウントワード修飾語がない場合は複数形を含み、「または」、「或いは」は「および／または」を意味する。本明細書で特に定義しない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本願で言及される全ての開示および特許は、参照により本明細書に組み込まれる。本願の範囲および精神から逸脱することなく、本明細書に記載された方法および組成物の多くの修正および変形は、当業者には明らかである。本願は、特定の好ましい実施形態によって説明されるが、保護が主張される本願は、これらの特定の実施形態に不当に限定されるべきではないことが理解されねばならない。実際に、関連分野の当業者にとって明らかな、本願を実施するための記載された態様のそれらの複数の変形は、添付の特許請求の範囲に含まれることが意図されている。
本願は、２０２１年２月２５日に出願した中国特許出願２０２１１０２１１９９７．５号の優先権を主張し、その全内容が参照によりここに組み込まれ、あらゆる目的で使用される。

Claims (20)

  1. 抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体またはその抗原結合断片であって、
    前記抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体またはその抗原結合断片は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が、重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）、重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）および重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）を含み、前記軽鎖可変領域が、軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）、軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）および軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）を含み、
    前記重鎖可変領域が、配列番号６に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ１、配列番号７に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ２および配列番号８に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号９に示されるアミノ酸配列のＬＣＤＲ１、配列番号１０に示されるアミノ酸配列のＬＣＤＲ２、配列番号１１に示されるアミノ酸配列のＬＣＤＲ３を含み；または
    前記重鎖可変領域が、配列番号６に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ１、配列番号１２に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ２および配列番号８に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号１３に示されるアミノ酸配列のＬＣＤＲ１、配列番号１０に示されるアミノ酸配列のＬＣＤＲ２、配列番号１１に示されるアミノ酸配列のＬＣＤＲ３を含み、
    ここで、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３およびＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列がＫａｂａｔ定義に従う、
    抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体またはその抗原結合断片。
  2. 前記重鎖可変領域が、配列番号２６、もしくは２８に示されるアミノ酸配列、または、配列番号２６、もしくは２８に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する
    請求項１記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体またはその抗原結合断片。
  3. 前記軽鎖可変領域が、配列番号２７、もしくは２９に示されるアミノ酸配列、または、配列番号２７、もしくは２９に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する、
    請求項１記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体またはその抗原結合断片。
  4. 前記重鎖可変領域が、配列番号２６に示されるアミノ酸配列を有し、前記軽鎖可変領域が、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を有する；または
    前記重鎖可変領域が、配列番号２８に示されるアミノ酸配列を有し、前記軽鎖可変領域が、配列番号２９に示されるアミノ酸配列を有する、
    請求項１～３のいずれか一項記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体またはその抗原結合断片。
  5. 前記重鎖可変領域が、配列番号２６、または２８に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、前記軽鎖可変領域が、配列番号２７、または２９に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する、
    請求項１に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体またはその抗原結合断片。
  6. 前記重鎖可変領域が、配列番号２６に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、前記軽鎖可変領域が、配列番号２７に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し；または
    前記重鎖可変領域が、配列番号２８に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、前記軽鎖可変領域が、配列番号２９に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する、請求項５記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体またはその抗原結合断片。
  7. 前記抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体が、全長抗体、または単鎖抗体（ｓｃＦｖ）であり；および／または
    前記抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体の抗原結合断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、ＦｖまたはＦ（ａｂ'）2であり；および／または
    前記抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体が、マウス由来抗体、キメラ抗体、またはヒト化抗体であり；および／または
    前記抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体が、モノクローナル抗体であり；および／または
    前記抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４アイソタイプであり；および／または
    前記抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体が、κサブタイプまたはλサブタイプの軽鎖定常領域を含む、
    請求項１～６のいずれか一項記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体またはその抗原結合断片。
  8. 治療薬と複合する請求項１～７のいずれか一項記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体またはその抗原結合断片を含む、免疫薬物複合体。
  9. 前記治療薬が、抗腫瘍医薬である、
    請求項８記載の免疫薬物複合体。
  10. 請求項１～７のいずれか一項記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体もしくはその抗原結合断片または請求項８もしくは９記載の免疫薬物複合体と、薬理学的に許容される賦形剤、希釈剤または担体とを含む、医薬組成物。
  11. 個体における免疫応答の調節、Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質によるＰＢＭＣリンパ球増殖の阻害の逆転、Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質によるＰＢＭＣリンパ球からのＩＦＮ－γ分泌の阻害の逆転、個体における腫瘍細胞増殖の阻害またはＳｉｇｌｅｃ１５の異常発現に関連する過増殖性障害の治療に使用される、
    請求項１０記載の医薬組成物。
  12. 前記Ｓｉｇｌｅｃ１５の異常発現に関連する過増殖性障害が、Ｓｉｇｌｅｃ１５の異常発現に関連する腫瘍である、
    請求項１１記載の医薬組成物。
  13. 前記医薬組成物は、抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体と組み合わせて腫瘍を治療するために使用される、
    請求項１０～１２のいずれか一項記載の医薬組成物。
  14. 個体における免疫応答の調節、Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質によるＰＢＭＣリンパ球増殖の阻害の逆転、Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質によるＰＢＭＣリンパ球からのＩＦＮ－γ分泌の阻害の逆転、個体における腫瘍細胞増殖の阻害またはＳｉｇｌｅｃ１５の異常発現に関連する過増殖性障害を治療するための医薬の製造における、請求項１～７のいずれか一項記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体もしくはその抗原結合断片または請求項８もしくは９記載の免疫薬物複合体の使用。
  15. 前記Ｓｉｇｌｅｃ１５の異常発現に関連する過増殖性障害が、Ｓｉｇｌｅｃ１５の異常発現に関連する腫瘍である、
    請求項１４記載の使用。
  16. 前記医薬が、さらに、抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体を含む、
    請求項１４または１５記載の使用。
  17. 請求項１～７のいずれか一項記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体または抗原結合断片をコードする、単離ポリヌクレオチド。
  18. 請求項１～７のいずれか一項記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体または抗原結合断片をコードするポリヌクレオチドを含む、ベクター。
  19. 請求項１８記載のベクターを含む、単離宿主細胞。
  20. 請求項１～７のいずれか一項記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体またはその抗原結合断片の製造方法であって、
    請求項１９記載の宿主細胞を培養する工程を含み、任意に、前記方法は、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体またはその抗原結合断片を単離する工程をさらに含む、方法。
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