JP7660246B1 - ダブルウィンドウで大便潜血を検出する金コロイド検出試験紙及びその使用 - Google Patents

ダブルウィンドウで大便潜血を検出する金コロイド検出試験紙及びその使用 Download PDF

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Abstract

【課題】ＨＯＯＫ現象の発生を遅らせ、金コロイド検出の精度向上ができる、大便潜血を検出する検出試験紙の提供
【解決手段】試薬ストリップは、ＰＶＣ基板と、サンプルパッド、マーキングパッド、硝酸セルロース膜、吸水パッドとを含み、
硝酸セルロース膜はマーキングパッドに近い側から左側の試薬ストリップにＴ１検出線とＣ品質管理線を順に設け、右側の試薬ストリップにＴ２検出線とＣ品質管理線を順に設け、
Ｔ１検出線とＴ２検出線にはマウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体がコーティングされ、マーキングパッドにはマウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体－金コロイド結合体が含まれ、
右側の試薬ストリップには処理液で処理したマウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体も含まれ、サンプルパッド上、又はＴ２検出線とマーキングパッド間の硝酸セルロース膜上にセットされている、ダブルウィンドウで大便潜血を検出する金コロイド検出試験紙
【選択図】なし

Description

本発明は、免疫検出の技術分野に関し、特にダブルウィンドウで大便潜血を検出する金コロイド検出試験紙及びその使用に関する。
消化管出血は複数の疾患に起因し、優性出血と劣性出血に分けられる。正常ヒト消化管２４時間の生理的出血量は０．６ｍＬである。消化管出血量が２ｍＬより大きければ、病理性出血に属する。臨床において一般的に使用される糞便潜血実験は、消化管出血、慢性胃腸管出血及び悪性腫瘍早期診断を検出する一般的なスクリーニング指標とする。糞便潜血実験は、消化管病変及び消化管悪性腫瘍の早期発見、早期診断、早期治療、及び患者生存確率と生活品質の向上に重要な意味を有する。
金コロイドによる糞便潜血の検査・測定は、快速で、操作が簡単などの利点があり、その感度は比較的に高く、最低１００ｎｇ／ｍＬのヘモグロビンを検査・測定でき、無症状、少量、持続、肉眼と顕微鏡下で見えない出血を正確に検査・測定でき、しかも薬物、鉄剤、動物の血、飲食制限などの妨害を受けない利点があり、特異性が強い。化学法に取って代わり、現在糞便潜血を測定する主要な方法となった。
金コロイド法による糞便潜血の検査・測定は主に二重抗体サンドイッチ法を試験原理とし、ヒトヘモグロビンポリクローナル抗体及びモノクローナル抗体に抗して金コロイドマーキングを行い、糞便中に存在するヒトヘモグロビンと特異的に結合し、金コロイドマーキング発色によりヒト糞便中のヘモグロビンを検査・測定する。しかし、検査方法の原理的限界のため、ＨＯＯＫ現象が起こりやすく、金コロイド法の結果が偽陰性となり、臨床的に正確な診断ができず、最適な治療のタイミングが遅れてしまう。次にアスファルトのような黒い便が臨床的に現れて、真っ赤な血や見かけが明らかに茶、褐色の異常な大便の場合、検査結果が陰性であれば、サンプルを何回も繰り返して希釈した後に再び検査を行う必要がある。臨床的に人工と時間のコストが増加する。また、ヘモグロビンは分解しやすいため、サンプルの保存温度が高すぎたり、時間がかかりすぎたりすると、測定を繰り返しても不正確な結果が出ることがある。
現在市販されているほとんどの大便潜血を検出する金コロイド検査キットは単ウィンドウ検査キットで、ヘモグロビン含有量＞５ｍｇ／ｍＬの時に結果が陰性又は弱陽性となる。したがって、金コロイドで大便潜血を検出するのは一定の制限があって、金コロイドで大便潜血を検出する正確さと操作の簡単で速い特徴に対して一定の負の影響をもたらしやすい。
本発明は上記の技術的課題を解決するために、従来の金コロイド検出試薬ストリップに検出ウィンドウを追加し、追加ウィンドウの検出試薬ストリップに処理液で処理されたマウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体を追加し、Ｔ２検出ラインの直前での中和作用を発揮し、ＨＯＯＫ現象の発生を遅らせ、金コロイド検出の精度を向上させることができる、ダブルウィンドウで大便潜血を検出する金コロイド検出試験紙及びその使用を提供することを目的とする。
本発明の目的は、以下の技術方法によって実現される。
第１の態様では、本発明は、左側試薬ストリップ及び右側試薬ストリップを含む、ダブルウィンドウで大便潜血を検出する金コロイド検出試験紙を提供する。上記試薬ストリップは、ＰＶＣ基板と、ＰＶＣ基板上に設けられた順次接続されたサンプルパッド、マーキングパッド、硝酸セルロース膜及び吸水パッドとを含む。硝酸セルロース膜は、マーキングパッドに近い側から、左側の試薬ストリップにＴ１検出線とＣ品質管理線を、右側の試薬ストリップにＴ２検出線とＣ品質管理線を順に設けた。Ｔ１検出線とＴ２検出線にはマウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体がコーティングされ、マーキングパッドにはマウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体－金コロイド結合体が含まれている。右側の試薬ストリップには処理液で処理されたマウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体も含まれており、これはＴ２検出線の直前での中和作用として、サンプルパッド上、又はＴ２検出線とマーキングパッドと間の硝酸セルロース膜上にセットされている。
本発明は、金コロイドイムノクロマトグラフィー、二重抗サンドイッチ法を基本原理とし、サンプル中にヘモグロビンが含まれている場合、サンプル添加後、ヘモグロビンは、マーキングパッド中のマウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体（マーキング用）－金コロイド結合体と結合し、抗原－抗体複合体を形成する。クロマトグラフィーが進行するにつれて、この複合体は硝酸セルロース膜にコーティングされたマウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体（コーティング用）に捕捉され、マウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体（コーティング用）－ヘモグロビン－マウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体（マーキング用）－金コロイド結合体を形成し、色は赤紫色で、色筋は明瞭で、肉眼で見ることができ、他の補助装置は必要なく、操作は簡単で便利である。
具体的には、高濃度の被検サンプルを左側試薬ストリップに添加した後、被検サンプルがマーキングパッドに流れると、ヘモグロビンはマウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体（マーキング用）－金コロイド結合体と結合して複合体を形成し、この複合体はＴ１検出線上のマウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体（コーティング用）と特異的に結合することができるが、サンプル中に過剰なヘモグロビンが含まれているため、複合体ヘモグロビン－マウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体（マーキング用）－金コロイド結合体と競合してＴ１検出線上の抗体と結合し、複合体とＴ１検出線上の抗体と結合することができず、Ｔ１検出線は弱い陽性又は陰性を示す。
高濃度の被検サンプルを左側試薬ストリップに添加した後、被検サンプルがマーキングパッドに流れると、ヘモグロビンとマウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体（マーキング用）－金コロイド結合体が結合して複合体ヘモグロビン－マウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体（マーキング用）－金コロイド結合体を形成し、クロマトグラフィーにより前方へ移動し続ける。過剰なヘモグロビンは、処理液で処理されたマウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体（コーティング用）でコーティングされた閉鎖線を通過するとき、それと結合し、移動を続けると、ヘモグロビン－マウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体（マーキング用）－金コロイド結合体がＴ２検出線上のマウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体（コーティング用）に特異的に結合して赤紫色のストリップを示す。また、高濃度の被検サンプルを右側の試薬ストリップに添加した後、被検サンプルがサンプルパッドを流れると、ヘモグロビンは処理液で処理されたマウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体（コーティング用）とまず結合し、クロマトグラフィーにより前方へ移動し続け、マーキングパッドを流れると、残りのヘモグロビンはマウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体（マーキング用）－金コロイド結合体と結合して複合体ヘモグロビン－マウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体（マーキング用）－金コロイド結合体を形成し、移動を続け、Ｔ２検出線上のマウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体（コーティング用）と特異的に結合し、赤紫色のストリップを示す。
本発明は検出線及び品質管理線の発色状況によってサンプルにヘモグロビンが含まれるか否かを判断することができ、二本の検出線の発色状況によって糞便サンプルにおけるヘモグロビンの濃度範囲を判断することもでき、左側反応領域にコーティングされたＴ１検出線は高感度であり、最低１００ｎｇ／ｍＬのヘモグロビンを検出することができ、右側反応領域にコーティングされたＴ２検出線は最低５００ｎｇ／ｍＬのヘモグロビンを検出することができる。ダブルウィンドウ検出により、ＨＯＯＫ現象の発生を遅延することができ、金コロイド検出の正確率を向上させる。
好ましくは、上記Ｔ１検出線にコーティングされたマウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体のコーティング濃度は１．０～２．０ｍｇ／ｍＬである。上記Ｔ２検出線にコーティングされたマウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体のコーティング濃度は１．０～２．０ｍｇ／ｍＬである。
好ましくは、上記処理液で処理されたマウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体は、Ｔ２検出線とマーキングパッドとの間の硝酸セルロース膜上では、抗体濃度は０．５～１．５ｍｇ／ｍＬであり、サンプルパッド上では、抗体濃度は０．０５～０．１ｍｇ／ｍＬである。
具体的には、Ｔ２検出線とマーキングパッドとの間の硝酸セルロース膜上では、上記処理液で処理されたマウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体の処理液における抗体濃度は０．５～１．５ｍｇ／ｍＬである。サンプルパッド上では、上記処理液で処理されたマウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体の処理液含有サンプルパッド溶液中の抗体濃度は、０．０５～０．１ｍｇ／ｍＬである。
好ましくは、上記処理液はショ糖、塩化ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム及びキレート剤を混合した後の水溶液であり、ｐＨを７．２～７．６に調整する。
好ましくは、上記処理液において、ショ糖の含有量は８～１５ｍｇ／ｍＬであり、塩化ナトリウムの含有量は５～１０ｇ／Ｌであり、リン酸水素二ナトリウムの含有量は０．５～３ｇ／Ｌであり、キレート剤の含有量は５～１０ｇ／Ｌである。上記キレート剤はアミノポリカルボン酸及びそのナトリウム塩のうちの一種である。
好ましくは、上記キレート剤は、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム、ヒドロキシエチルエチレンジアミン三酢酸（ＨＥＤＴＡ）、ヒドロキシエチルエチレンジアミン三酢酸ナトリウム塩、アミノ三酢酸（ＮＴＡ）、アミノ三酢酸ナトリウム塩のうちの一種である。
キレート剤を添加することにより、高濃度ヘモグロビンの検出率を向上させることができ、キレート剤は、処理液中の他の成分と組み合わせて、免疫反応系のイオン環境を調整することにより、タンパク質吸着及び免疫反応速度を向上させることができる。また、各成分の濃度及び処理液ｐＨを調整することにより、成分間の相乗性がより良くなり、特にキレート剤の濃度が処理液の処理効果に与える影響が大きく、本発明の限定範囲を超えるとヘモグロビンの検出率が低下する。
好ましくは、Ｃ品質管理線にヒツジ抗マウスＩｇＧがコーティングされ、コーティング濃度は０．５～２．０ｍｇ／ｍＬである。
好ましくは、上記マーキングパッドに、マウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体-金コロイド結合体及びマウスＩｇＧ-金コロイド結合体を含有する。上記マウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体-金コロイド結合体の濃度はＯＤ２０-ＯＤ６０である。上記Ｔ１検出線及び上記Ｔ２検出線にコーティングされたマウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体（コーティング用）と、処理液で処理されたマウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体（コーティング用）とは同じ抗原エピトープに対する抗体である。また、該抗体とマーキングパッドに含まれるマウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体（マーキング用）とは異なる抗原エピトープに対する抗体である。
処理液で処理されたマウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体は、検出線の前に過剰なヘモグロビンを捕捉し、過剰なヘモグロビンが競合して検出線上の抗体と結合して弱陽性又は偽陰性の結果を招くことを回避し、検出範囲の上限を高め、ＨＯＯＫ現象を遅らせる。
好ましくは、ＰＶＣ基板の中間に硝酸セルロース膜が設けられている。硝酸セルロース膜の両端部にそれぞれマーキングパッド及び吸水パッドを設け、マーキングパッド及び吸水パッドの一端底部側にそれぞれ接続し、マーキングパッド及び吸水パッドの他端底部側にそれぞれＰＶＣ基板を接続する。マーキングパッドとＰＶＣ基板との接続端部の上側にはサンプルパッドが設けられている。サンプルパッドの一端底部側はマーキングパッドの上側に接続され、他端底部側はＰＶＣ基板に接続される。
第２の態様において、本発明はさらに金コロイド検出試験紙のヘモグロビン検出における使用を提供し、被測定サンプルを左側試薬ストリップ及び右側試薬ストリップのサンプルパッドに添加し、Ｔ１検出線及びＴ２検出線の発色状況に基づき、ヘモグロビンの濃度範囲を判定する。
本発明における金コロイド検出試験紙はサンプルにヘモグロビンが含まれるか否かを検出することができ、検出線Ｔと品質制御線Ｃはいずれも赤色帯が現れると、サンプルにヘモグロビンが含まれると説明し、品質制御線Ｃのみが赤色帯が現れると、サンプルにヘモグロビンが含まれない又はサンプルにおけるヘモグロビンの含有量が検出値より低いと説明する。品質制御線Ｃに赤色の帯が現れない場合、該試験紙は失効すると説明する。左側反応領域にコーティングされたＴ１検出線は高感度であり、最低で１００ｎｇ／ｍＬのヘモグロビンを検出することができ、右側反応領域にコーティングされたＴ２検出線は最低で５００ｎｇ／ｍＬのヘモグロビンを検出することができる。
本発明における金コロイド検出試験紙はサンプルにおけるヘモグロビンの濃度範囲を検出することができ、サンプルを左側試薬ストリップと右側試薬ストリップのサンプルパッドに加え、二本の検出線の発色状況に基づき、ヘモグロビンの濃度範囲を判断することができる。
好ましくは、Ｔ１検出線が発色せず、Ｔ２検出線が発色しない場合、ヘモグロビン濃度＜１００ｎｇ／ｍＬであることが示唆される。Ｔ１検出線が発色し、Ｔ２検出線が発色しない場合、１００ｎｇ／ｍＬ≦ヘモグロビン濃度＜５００ｎｇ／ｍＬであることが示唆される。Ｔ１検出線が発色し、Ｔ２検出線が発色する場合、５００ｎｇ／ｍＬ≦ヘモグロビン濃度＜５ｍｇ／ｍＬであることが示唆される。Ｔ１検出線が発色せず、Ｔ２検出線が発色する場合、ヘモグロビン濃度≧５ｍｇ／ｍＬであることが示唆される。
より好ましくは、Ｔ１検出線が発色せず、Ｔ２検出線が発色しない場合、ヘモグロビン濃度＜１００ｎｇ／ｍＬであることが示唆される。Ｔ１検出線が発色し、Ｔ２検出線が発色しない場合、１００ｎｇ／ｍＬ≦ヘモグロビン濃度＜５００ｎｇ／ｍＬであることが示唆される。Ｔ１検出線が強く発色（Ｔ２検出線と比較して強い）し、Ｔ２検出線が弱く発色（Ｔ１検出線と比較して弱い）する場合、５００ｎｇ／ｍＬ≦ヘモグロビン濃度＜１００００ｎｇ／ｍＬであることが示唆される。Ｔ１検出線が強く発色し、Ｔ２検出線が強く発色する場合、ヘモグロビン濃度が１００００ｎｇ／ｍＬであることが示唆される。Ｔ１検出線が弱く発色（Ｔ２検出線と比較して弱い）し、Ｔ２検出線が強く発色（Ｔ１検出線と比較して強い）する場合、１００００ｎｇ／ｍＬ＜ヘモグロビン濃度＜５ｍｇ／ｍＬであることが示唆される。Ｔ１検出線が発色せず、Ｔ２検出線が発色する場合には、ヘモグロビン濃度範囲が≧５ｍｇ／ｍＬであることが示唆される。
従来技術と比較して、本発明は以下の有益な効果を有する。
（１）本発明は、既存の金コロイド検出試薬ストリップに検出ウィンドウを追加し、新たに追加されたウィンドウ内の検査試薬ストリップには、処理液で処理されたマウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体が追加されており、サンプル中に高濃度のヘモグロビンが含まれている場合、処理液で処理されたマウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体は過剰なヘモグロビンを中和することができ、その後、金コロイドヘモグロビン抗原抗体複合体が検査線上のヘモグロビン抗体と特異的に結合して陽性の結果を示し、ダブルウィンドウ検査により、ＨＯＯＫ現象の出現を遅らせ、金コロイド検査の精度を高めることができる。
（２）本発明は、定性から半定量までの迅速な検査を科学的客観的に実現し、高い感度を保証すると同時に、線形検査範囲の上限を高めることができ、検査試薬の精度を高めることができる。またサンプルの処理は１回で済み、希釈を何度も繰り返す必要がなく、時間と人件費を節約できる。
本発明の試験紙の検出結果を示す図である。
以下では、本発明の技術的態様を具体的な実施例を用いて説明するが、本発明の保護範囲はこれに限定されない。
（１）金コロイド検出試験紙の作製（右側の試薬ストリップ上、処理液で処理したマウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体を、Ｔ２検出線とマーキングパッドとの間の硝酸セルロース膜上に設け、閉鎖線とする）
１．１ コーティング
１．１．１、閉鎖線処理液の調製：ショ糖、塩化ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム及びキレート剤を混合した後に希釈し、処理液中のショ糖の含有量を８～１５ｍｇ／ｍＬ、塩化ナトリウムの含有量を５～１０ｇ／Ｌ、リン酸水素二ナトリウムの含有量を０．５～３ｇ／Ｌ、キレート剤の含有量を５～１０ｇ／Ｌとし、ｐＨを７．２～７．６に調整する。
１．１．２、Ｃ／Ｔ１／Ｔ２線コーティング用の溶液の調製：ヒツジ抗マウスＩｇＧ及びマウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体（コーティング用）をｐＨ７．２-７．６の１０ｍＭのＰＢＳで希釈し、コーティング濃度をそれぞれ０．５～２．０ｍｇ／ｍＬ、１．０～２．０ｍｇ／ｍＬ、１．０～２．０ｍｇ／ｍＬとする。
１．１．３、閉鎖線コーティング用の溶液の調製：マウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体（コーティング用）を閉鎖線処理液で希釈し、コーティング濃度を０．５～１．５ｍｇ／ｍＬとする。
１．１．４、左側試薬ストリップのコーティング：それぞれ調製したＣ／Ｔ１のコーティング溶液を１．０-１．２μＬ／ｃｍの速度で硝酸セルロース膜に噴霧し、それぞれＣ品質制御線とＴ１検出線とする。Ｃ品質制御線のコーティングサイズはＰＶＣ基板の一端底側縁から３４-３５ｍｍ、Ｔ１検出線のコーティングサイズはＰＶＣ基板の同端底側縁から２８-２９ｍｍの位置にする。その後、３７℃±２℃の乾燥機で１２-２４時間乾燥し、コーティングされた硝酸セルロース膜を得る。
１．１．５、右側試薬ストリップのコーティング：それぞれ調製したＣ／Ｔ２／閉鎖線コーティング用の溶液を１．０－１．２ μＬ／ｃｍの速度で硝酸セルロース膜に噴霧し、それぞれＣ品質制御線、Ｔ２検出線、及び閉鎖線とする。Ｃ品質管理線のコーティングサイズはＰＶＣ基板の一端底側縁から３４-３５ｍｍの位置とする。Ｔ２検出線のコーティングサイズは、ＰＶＣ基板の同端底側縁から２８-２９ｍｍの位置とする。閉鎖線のコーティングサイズは、ＰＶＣ基板の同端底側縁から２２-２３ｍｍの位置とする。その後、３７℃±２℃の電熱送風乾燥機で１２-２４時間乾燥し、コーティングされた硝酸セルロース膜を得る。
１．２ マーキング
１．２．１、金コロイドの調製：金コロイド粒子をマウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体（マーキング用）、マウスＩｇＧとそれぞれ混合し、マウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体（マーキング用）－金コロイド結合体とマウスＩｇＧ－金コロイド結合体にマーキングする。
１．２．２、マーキング溶液の調製：マウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体（マーキング用）－金コロイド結合体とマウスＩｇＧ－金コロイド結合体を、５０－５５ｇ／Ｌのショ糖、８－１５ｇ／ＬのＢＳＡ、６－９ｇ／Ｌのリン酸水素二ナトリウムを含む希釈液で希釈し、ＯＤ２０－ＯＤ６０とＯＤ１０－ＯＤ６０のマーキング溶液とする。
１．２．３、調製したマーキング溶液をポリエステル繊維フィルムに１．８～２．０μＬ／ｃｍの速度で処理し、３７℃±２℃の電熱送風乾燥機で１２～２４時間乾燥してマーキングパッドを得る。
１．３ サンプルパッド
１．３．１、サンプルパッド溶液の調製：濃度３－６ｇ／Ｌのカゼイン、４－７ｇ／Ｌのトリスヒドロキシメチルアミノメタン、０．１－０．４ｍＬ／ＬのＰｒｏｃｌｉｎ３００、３－８ｇ／ＬのＰＶＰ－１０、０．２－０．７ｍＬ／ＬのＴｗｅｅｎ２０の水溶液を配合し、ｐＨは７．２－７．６である。
１．３．２、サンプルパッドの調製：サンプルパッド溶液をガラス繊維の上に敷き、３７℃±２℃の電熱送風乾燥機に置き、１２～２４時間乾燥し、サンプルパッドを得る。
１．４ 組み立て
上記試薬ストリップの組み立て方法は、ＰＶＣ基板の中間に硝酸セルロース膜を設ける。硝酸セルロース膜の両端に、それぞれマーキングパッドと吸水パッドを設け、且つそれぞれマーキングパッドと吸水パッドの一端底側に接続する。マーキングパッド及び吸水パッドの他端底側は、それぞれＰＶＣ基板に接続されている。マーキングパッドとＰＶＣ基板との接続端部の上側にはサンプルパッドが設けられている。サンプルパッドは、一端底側がマーキングパッドの上側に接続され、他端底側がＰＶＣ基板に接続されている。左側試薬ストリップと右側試薬ストリップを所望の幅に切断して並列に組み立てると、ダブルウィンドウ検出の金コロイド検出試験紙を得る。
（２）金コロイド検出試験紙の作製（右側の試薬ストリップ上、処理液で処理したマウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体をサンプルパッド上に設置）
１．１ コーティング
１．１．１、Ｃ／Ｔ１／Ｔ２線のコーティング用溶液の調製：（１）の１．１．２と同じである。
１．１．２、左試薬ストリップのコーティング：（１）の１．１．４と同じである。
１．１．３、右側試薬ストリップのコーティング：それぞれ調製したＣ／Ｔ２コーティング用溶液を１．０-１．２μＬ／ｃｍの速度で硝酸セルロース膜に噴霧し、それぞれＣ品質制御線、Ｔ２検出線とする。Ｃ品質管理線のコーティングサイズはＰＶＣ基板の一端底側縁から３４-３５ｍｍの位置とする。Ｔ２検出線のコーティングサイズは、ＰＶＣ基板の同端底側縁から２８-２９ｍｍの位置とする。その後、３７℃±２℃の電熱送風乾燥機で１２-２４時間乾燥し、コーティングされた硝酸セルロース膜を得る。
１．２ マーキング
１．２．１、金コロイドの調製：（１）の１．２．１と同じである。
１．２．２、マーキング溶液の調製：（１）の１．２．２と同じである。
１．２．３、マーキングパッドを得る：（１）の１．２．３と同じである。
１．３ サンプルパッド
１．３．１、サンプルパッド溶液の調製：濃度が３－６ｇ／Ｌのカゼイン、４－７ｇ／Ｌのトリスヒドロキシメチルアミノメタン、０．１－０．４ｍＬ／ＬのＰｒｏｃｌｉｎ３００、３－８ｇ／ＬのＰＶＰ－１０、０．２－０．７ｍＬ／ＬのＴｗｅｅｎ２０、８～１５ｍｇ／ｍＬのショ糖、５～１０ｇ／Ｌの塩化ナトリウム、０．５～３ｇ／Ｌのリン酸水素二ナトリウム、５～１０ｇ／Ｌのキレート剤、０．０５～０．１ｍｇ／ｍＬのマウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体（コーティング用）を含む水溶液を調製し、ｐＨは７．２－７．６である。
１．３．２、サンプルパッドの調製：（１）の１．３．２と同じである。
１．４ 組み立て （１）の１．４と同じである。
実施例１
金コロイド検出用試験紙（右側試薬ストリップは閉鎖線を含む）の調製
１．１ コーティング
１．１．１、閉鎖線処理液の調製：まず精製水８０ｍＬを量り取って、次いでショ糖１ｇ、塩化ナトリウム０．８ｇ、リン酸水素二ナトリウム０．２ｇ、エチレンジアミン四酢酸１ｇを順次添加し、完全に溶解するまで攪拌した後、ｐＨを７．４に調整し、精製水を加えて１００ｍＬに定容する。
１．１．２、Ｃ／Ｔ１／Ｔ２線のコーティング用溶液の調製：ＰＨ７．４の１０ｍＭのＰＢＳでヒツジ抗マウスＩｇＧとマウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体（コーティング用）を希釈し、それぞれ１．０ｍｇ／ｍＬ、１．５ｍｇ／ｍＬ、１．５ｍｇ／ｍＬに調製する。
１．１．３、閉鎖線のコーティング用溶液の調製：マウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体（コーティング用）を閉鎖線処理液で希釈し、０．５ｍｇ／ｍＬに調製する。
１．１．４、左側試薬ストリップのコーティング：それぞれ調製したＣ／Ｔ１のコーティング溶液を１．０μＬ／ｃｍの速度で硝酸セルロース膜に噴霧し、それぞれＣ品質制御線とＴ１検出線とするＣ品質管理線のコーティングサイズはＰＶＣ基板の一端底側縁から３４．５ｍｍ、Ｔ１検出線のコーティングサイズはＰＶＣ基板の同端底側縁から２８．５ｍｍの位置とする。その後、３７℃±２℃の乾燥機で１６時間乾燥し、コーティングされた硝酸セルロース膜を得る。
１．１．５、右側試薬ストリップのコーティング：それぞれ調製したＣ／Ｔ２／閉鎖線コーティング溶液を１．０μＬ／ｃｍの速度で硝酸セルロース膜に噴霧し、それぞれＣ品質制御線、Ｔ２検出線、及び閉鎖線とする。Ｃ品質管理線のコーティングサイズはＰＶＣ基板の一端底側縁から３４．５ｍｍの位置とする。Ｔ２検出線のコーティングサイズはＰＶＣ基板の同端底側縁から２８．５ｍｍの位置とする。閉鎖線のコーティングサイズはＰＶＣ基板の同端底側縁から２２．５ｍｍの位置とする。その後、３７℃±２℃の電熱送風乾燥機で１６時間乾燥し、コーティングされた硝酸セルロース膜を得る。
１．２ マーキング
１．２．１、金コロイドの調製：金コロイド粒子に、マウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体（マーキング用）、マウスＩｇＧをそれぞれ比例混合し、マウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体（マーキング用）-金コロイド結合体とマウスＩｇＧ-金コロイド結合体としてマーキングし、紫外可視分光光度計で測定した吸光度がそれぞれＯＤ１２９．５及びＯＤ１３０．１である。
１．２．２、マーキング溶液の調製：マウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体（マーキング用）-金コロイド結合体及びマウスＩｇＧ-金コロイド結合体を、５０ｇ／Ｌのショ糖、１０ｇ／ＬのＢＳＡ及び７ｇ／Ｌのリン酸水素二ナトリウムを含む希釈液で希釈してＯＤ２０及びＯＤ１０のマーキング溶液とする。
１．２．３、調製したマーキング溶液を２．０μＬ／ｃｍの速度でポリエステルセルロースフィルムに処理し、３７℃±２℃の電熱送風乾燥機で１６時間乾燥してマーキングパッドを得る。
１．３ サンプルパッド
１．３．１、サンプルパッド溶液の調製：まず８０ｍＬの精製水を量り取り、続いて順に０．４ｇのカゼイン、０．４８ｇのトリスヒドロキシメチルアミノメタン、０．０１６ｍＬのＰｒｏｃｌｉｎ３００、０．５ｇのＰＶＰ－１０、０．０５ｍＬのＴｗｅｅｎ２０を加え、完全に溶解させた後にｐＨを７．４に調整し、最後に精製水で１００ｍＬに定容する。
１．３．２、サンプルパッドの調製：その後、サンプルパッド溶液３．５ｍＬを量り取り、１７ｍｍ＊３１ｍｍのガラス繊維上に敷き、３７℃±２℃の電熱送風乾燥機で１６時間乾燥し、サンプルパッドを得る。
１．４ 組み立て
吸水パッド、サンプルパッド、マーキングパッド、コーティングされた硝酸セルロース膜及びＰＶＣ基板を順に接続して組み立て、必要に応じて必要な幅に切断することにより、ダブルウィンドウ検出の金コロイド検出試験紙を得る。
実施例２ 金コロイド検出試験紙（右側の試薬ストリップに閉鎖線を含む）の調製
ステップ１．１．３が異なることを除いて、他は実施例１と同じである。
１．１．３、閉鎖線コーティング溶液の調製：調製濃度は１ｍｇ／ｍＬとする。
実施例３ 金コロイド検出試験紙（右側の試薬ストリップに閉鎖線を含む）の調製
ステップ１．１．３が異なることを除いて、他は実施例１と同じである。
１．１．３、閉鎖線コーティング溶液の調製：調製濃度は１．５ｍｇ／ｍＬとする。
実施例４ 金コロイド検出試験紙（右側の試薬ストリップに閉鎖線を含む）の調製
ステップ１．１．１が異なることを除いて（キレート剤は違う）、他は実施例１と同じである。
１．１．１、閉鎖線処理液の調製：まず精製水８０ｍＬを量り取り、次いでショ糖１ｇ、塩化ナトリウム０．８ｇ、リン酸水素二ナトリウム０．２ｇ、ヒドロキシエチルエチレンジアミン三酢酸１ｇを順次添加し、完全に溶解するまで攪拌した後、ｐＨを７．４に調整し、精製水を加えて１００ｍＬに定容する。
実施例５ 金コロイド検出試験紙（右側の試薬ストリップに閉鎖線を含む）の調製
ステップ１．１．１が異なることを除いて（キレート剤が異なる）、他は実施例１と同じである。
１．１．１、閉鎖線処理液の調製：まず精製水８０ｍＬを量り取り、次いでショ糖１ｇ、塩化ナトリウム０．８ｇ、リン酸水素二ナトリウム０．２ｇ、アミノ三酢酸１ｇを順次添加し、完全に溶解するまで攪拌した後、ｐＨを７．４に調整し、精製水を加えて１００ｍＬに定容する。
実施例６ 金コロイド検出試験紙（右側の試薬ストリップに閉鎖線を含む）の調製
ステップ１．１．１が異なることを除いて（キレート剤の添加量が異なる）、他は実施例１と同じである。
１．１．１、閉鎖線処理液の調製：まず精製水８０ｍＬを量り取り、次いでショ糖１ｇ、塩化ナトリウム０．８ｇ、リン酸水素二ナトリウム０．２ｇ、エチレンジアミン四酢酸０．８ｇを順次添加し、完全に溶解するまで攪拌した後、ｐＨを７．４に調整し、精製水を加えて１００ｍＬに定容する。
実施例７ 右側の試薬ストリップ上に、処理液で処理されたマウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体を、サンプルパッド上に設置する、すなわち金コロイド検出試験紙（すなわち、この時点で右側の試薬ストリップには閉鎖線が含まれていない）の作製
１．１ コーティング
１．１．１、Ｃ／Ｔ１／Ｔ２線コーティング溶液の調製：ＰＨ７．４の１０ｍＭのＰＢＳでヒツジ抗マウスＩｇＧとマウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体（コーティング用）を希釈し、それぞれ１．０ｍｇ／ｍＬ、１．５ｍｇ／ｍＬ、１．５ｍｇ／ｍＬに調製する。
１．１．２、左側の試薬ストリップのコーティング：それぞれ調製したＣ／Ｔ１のコーティング溶液を１．０μＬ／ｃｍの速度で硝酸セルロース膜に噴霧し、Ｃ品質管理線とＴ１検出線とする。Ｃ品質管理線のコーティングサイズはＰＶＣ基板の一端底側縁から３４．５ｍｍ、Ｔ１検出線のコーティングサイズはＰＶＣ基板の同端底側縁から２８．５ｍｍの位置とする。その後、３７℃±２℃の乾燥機で１２-２４時間乾燥し、コーティングされた硝酸セルロース膜を得る。
１．１．３、右側の試薬ストリップのコーティング：それぞれ調製したＣ／Ｔ２のコーティング溶液を１．０μＬ／ｃｍの速度で硝酸セルロース膜に噴霧し、Ｃ品質管理線とＴ２検出線とする。Ｃ品質管理線のコーティングサイズはＰＶＣ基板の一端底側縁から３４．５ｍｍ、Ｔ２検出線のコーティングサイズはＰＶＣ基板の同端底側縁から２８．５ｍｍの位置とする。その後、３７℃±２℃の乾燥機で１６時間乾燥し、コーティングされた硝酸セルロース膜を得る。
１．２ マーキング
１．２．１、金コロイドの調製：金コロイド粒子に、マウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体（マーキング用）、マウスＩｇＧをそれぞれ比例混合し、マウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体（マーキング用）-金コロイド結合体とマウスＩｇＧ-金コロイド結合体としてマーキングし、紫外可視分光光度計で測定した吸光度がそれぞれＯＤ１２９．５及びＯＤ１３０．１である。
１．２．２、マーキング溶液の調製：マウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体（マーキング用）-金コロイド結合体及びマウスＩｇＧ-金コロイド結合体を、５０ｇ／Ｌのショ糖、１０ｇ／ＬのＢＳＡ及び７ｇ／Ｌのリン酸水素二ナトリウムを含む希釈液で希釈してＯＤ２０及びＯＤ１０のマーキング溶液とする。
１．２．３、調製したマーキング溶液を２．０μＬ／ｃｍの速度でポリエステルセルロースフィルムに処理し、３７℃±２℃の電熱送風乾燥機で１６時間乾燥してマーキングパッドを得る。
１．３ サンプルパッド
１．３．１、サンプルパッド溶液の調製：まず８０ｍＬの精製水を量り取り、続いて順に０．４ｇのカゼイン、０．４８ｇのトリスヒドロキシメチルアミノメタン、０．０１６ｍＬのＰｒｏｃｌｉｎ３００、０．５ｇのＰＶＰ－１０、０．０５ｍＬのＴｗｅｅｎ２０、１ｇのショ糖、０．８ｇの塩化ナトリウム、０．２ｇのリン酸水素二ナトリウム、１ｇのエチレンジアミン四酢酸、１．０２ｍＬのマウス抗ヒトヘモグロビン抗体（コーティング用）（原濃度４．９ｍｇ／ｍＬ、サンプルパッド溶液における濃度含有量０．０５ｍｇ／ｍＬ）を加え、完全に溶解させた後にｐＨを７．４に調整し、精製水を加えて１００ｍＬに定容する。
１．３．２、サンプルパッドの調製：その後、溶液３．５ｍＬを量り取り、１７ｍｍ＊３１ｍｍのガラス繊維上に敷き、３７℃±２℃の電熱送風乾燥機で１６時間乾燥し、サンプルパッドを得る。
１．４ 組み立て
吸水パッド、サンプルパッド、マーキングパッド、コーティングされた硝酸セルロース膜及びＰＶＣ基板を順に接続して組み立て、必要に応じて必要な幅に切断することにより、ダブルウィンドウ検出の金コロイド検出試験紙を得る。
比較例１ 金コロイド検出試験紙（右側の試薬ストリップに閉鎖線を含む）の調製
ステップ１．１．３が異なることを除いて、他は実施例１と同じである。
１．１．３、閉鎖線コーティング溶液の調製：調製濃度は０．１ｍｇ／ｍＬとする。
比較例２ 金コロイド検出試験紙（右側の試薬ストリップに閉鎖線を含む）の調製
ステップ１．１．３が異なることを除いて、他は実施例１と同じである。
１．１．３、閉鎖線コーティング溶液の調製：調製濃度は２．０ｍｇ／ｍＬとする。
比較例３ 金コロイド検出試験紙（右側の試薬ストリップに閉鎖線を含む）の調製
ステップ１．１．１が異なること（キレート剤無添加）を除いて、他は実施例１と同じである。
１．１．１、閉鎖線処理液の調製：まず精製水８０ｍＬを量り取り、次いでショ糖１ｇ、塩化ナトリウム０．８ｇ、リン酸水素二ナトリウム０．２ｇを順次添加し、完全に溶解するまで攪拌した後、ｐＨを７．４に調整し、精製水を加えて１００ｍＬに定容する。
比較例４ 金コロイド検出試験紙（右側の試薬ストリップに閉鎖線を含む）の調製
ステップ１．１．１が異なること（キレート剤の添加量が多すぎること）を除いて、他は実施例１と同じである。
１．１．１、閉鎖線処理液の調製：まず精製水８０ｍＬを量り取り、次いでショ糖１ｇ、塩化ナトリウム０．８ｇ、リン酸水素二ナトリウム０．２ｇ、エチレンジアミン四酢酸１．２ｇを順次添加し、完全に溶解するまで攪拌した後、ｐＨを７．４に調整し、精製水を加えて１００ｍＬに定容する。
比較例５ 金コロイド検出試験紙（右側の試薬ストリップに閉鎖線を含む）の調製
ステップ１．１．１及びステップ１．１．３が異なることを除いて、他は実施例１と同じである。
ステップ１．１．１を削除する。ステップ１．１．３の閉鎖線処理液の調製：マウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体（コーティング用）を、ｐＨ７．４の１０ｍＭのＰＢＳ緩衝液（すなわちＣ／Ｔ１／Ｔ２線コーティング調製の溶液と同様）で希釈し、０．５ｍｇ／ｍＬに調製する。
実施例と比較例について性能試験を行い、それぞれ陰性コントロール、５０ｎｇ／ｍＬのヘモグロビン、１００ｎｇ／ｍＬのヘモグロビン、２００ｎｇ／ｍＬのヘモグロビン、５００ｎｇ／ｍＬのヘモグロビン、１μｇ／ｍＬのヘモグロビン、１０μｇ／ｍＬのヘモグロビン、１００μｇ／ｍＬのヘモグロビン、５ｍｇ／ｍＬのヘモグロビン、１０ｍｇ／ｍＬのヘモグロビン、５０ｍｇ／ｍＬのヘモグロビンを用いて試験を行い、それぞれの濃度設定を１０回繰り返し、結果を表１と表２に示す。発色結果の強弱を図１に示す。
[表１]
＊注：「＋」は検査結果が陽性であることを示す。「－」は検査結果が陰性であることを示す。１０（＋）は１０個の検査結果がすべて陽性であることを意味する。１０（－）は１０個の検査結果がすべて陰性であることを意味する。
[表２]
＊注：「＋」は検査結果が陽性であることを示す。「－」は検査結果が陰性であることを示す。１０（＋）は１０個の検査結果がすべて陽性であることを意味する。１０（－）は１０個の検査結果がすべて陰性であることを意味する。
結果分析：表１と表２に示したように、イムノクロマトグラフィー反応において、比較例１と比較例２は、閉鎖線の成分又は用量が適切でない場合、抗原と抗体の反応環境に影響し、抗原と抗体の結合に影響し、最終的に測定結果の正確性に影響することを示した。本発明の限定された濃度範囲内において、右側の試薬ストリップに含まれる処理液で処理されたマウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体は、ＨＯＯＫ現象の出現を遅らせることができ、金コロイド検査の精度を高めることができ、特に高濃度のサンプルに対して、正確に陽性結果を得ることができ、しかも何度も希釈して再測定する必要がなく、同時にダブルウィンドウの結果を結合して、ヘモグロビンの濃度含有量範囲を判断することができる。
また、閉鎖線処理液を処理することにより、実施例１及び比較例３の結果から、閉鎖線処理液にキレート剤を添加することにより高濃度ヘモグロビンの検出率を向上させることができ、キレート剤により免疫反応系中のイオン環境を調整し、タンパク質吸着及び免疫反応速度を向上させることができることがわかる。しかし、比較例４は、高濃度すぎるキレート剤がヘモグロビンとマウス抗ヒトモノクローナル抗体との結合に影響を与え、過剰のヘモグロビンを中和することができず、ＨＯＯＫ効果を遅延させることができないことを示している。また、比較例５は、閉鎖線処理液が通常のＰＢＳ成分であれば、高濃度ヘモグロビンのサンプルに対して検査の陰性結果が存在することを表明した。
臨床サンプルの検証
本発明は合計２６例の大便潜血陽性サンプルを収集し、第三者測定値試薬（上海透景診断科技有限公司－ヘモグロビン／トランスフェリン測定キット（フローサイトメトリー蛍光発光法））により測定値を確認し、測定結果を表３に示す。そのうち１１例のヘモグロビン濃度が１００－５００ｎｇ／ｍＬの陽性サンプル、９例のヘモグロビン濃度が５００ｎｇ／ｍＬ－５ｍｇ／ｍＬの陽性サンプル、６例のヘモグロビン濃度が＞５ｍｇ／ｍＬの高濃度陽性サンプルを含む。
［表３]
＊注：「＋」は検査結果が陽性であることを示す。「－」は検査結果が陰性であることを示す。
表３に示すように、臨床サンプルの測定結果から、実施例１は高い感度と精度を有し、特に高濃度のヘモグロビンサンプルについては、２本のＴ線の呈色結果からサンプル中のヘモグロビンの濃度範囲を同時に判定できることがわかった。比較例３及び比較例４について、処理液にキレート剤を添加しなく又はキレート剤の添加量が多すぎると、いずれも金コロイド試験紙の検出精度に影響を与える。
以上は本発明の好ましい実施例にすぎず、本発明の特許範囲を限定するものではなく、本発明の明細書を利用して行われる等価構造又は等価フロー変換、あるいは他の関連する技術分野での直接的又は間接的な使用も、同様に本発明の特許保護範囲に含まれる。

Claims (8)

  1. 左側試薬ストリップ及び右側試薬ストリップを含む、ダブルウィンドウで大便潜血を検出する金コロイド検出試験紙であって、
    前記左側試薬ストリップ及び前記右側試薬ストリップのそれぞれは、ＰＶＣ基板と、ＰＶＣ基板上に設けられた順次接続されたサンプルパッド、マーキングパッド、硝酸セルロース膜及び吸水パッドとを含み、
    硝酸セルロース膜はマーキングパッドに近い側から左側の試薬ストリップにＴ１検出線とＣ品質管理線を順に設け、右側の試薬ストリップにＴ２検出線とＣ品質管理線を順に設け、
    Ｔ１検出線とＴ２検出線にはマウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体がコーティングされ、マーキングパッドにはマウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体－金コロイド結合体が含まれており、
    右側の試薬ストリップには処理液で処理したマウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体も含まれており、サンプルパッド上、又はＴ２検出線とマーキングパッド間の硝酸セルロース膜上にセットされており、
    前記処理液はショ糖、塩化ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム及びキレート剤を混合した後の水溶液であり、
    前記処理液において、ショ糖の含有量は８～１５ｍｇ／ｍＬであり、塩化ナトリウムの含有量は５～１０ｇ／Ｌであり、リン酸水素二ナトリウムの含有量は０．５～３ｇ／Ｌであり、キレート剤の含有量は５～１０ｇ／Ｌであり、
    前記キレート剤はアミノポリカルボン酸及びそのナトリウム塩のうちの一種である、ことを特徴とするダブルウィンドウで大便潜血を検出する金コロイド検出試験紙。
  2. 前記Ｔ１検出線にコーティングされたマウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体のコーティング濃度は１．０～２．０ｍｇ／ｍＬであり、前記Ｔ２検出線にコーティングされたマウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体のコーティング濃度は１．０～２．０ｍｇ／ｍＬである、ことを特徴とする請求項１に記載のダブルウィンドウで大便潜血を検出する金コロイド検出試験紙。
  3. 前記処理液で処理されたマウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体は、Ｔ２検出線とマーキングパッドとの間の硝酸セルロース膜上では、抗体濃度が０．５～１．５ｍｇ／ｍＬであり、サンプルパッド上では、抗体濃度が０．０５～０．１ｍｇ／ｍＬである、ことを特徴とする請求項１に記載のダブルウィンドウで大便潜血を検出する金コロイド検出試験紙。
  4. 前記Ｃ品質管理線にヒツジ抗マウスＩｇＧがコーティングされ、コーティング濃度は０．５～２．０ｍｇ／ｍＬである、ことを特徴とする請求項１に記載のダブルウィンドウで大便潜血を検出する金コロイド検出試験紙。
  5. 前記マーキングパッドに、マウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体-金コロイド結合体及びマウスＩｇＧ-金コロイド結合体を含有し、前記マウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体-金コロイド結合体の濃度はＯＤ２０-ＯＤ６０であり、
    前記マウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体－金コロイド結合体における抗体と、右側試薬ストリップに含まれる処理液で処理された抗体と、Ｔ１検出線及びＴ２検出線にコーティングされた抗体とは、異なるマウス抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体である、ことを特徴とする請求項１～４のいずれか１項に記載のダブルウィンドウで大便潜血を検出する金コロイド検出試験紙。
  6. ＰＶＣ基板の中間に硝酸セルロース膜が設けられ、
    硝酸セルロース膜の両端部にそれぞれマーキングパッド及び吸水パッドを設け、且つマーキングパッド及び吸水パッドの一端底部側にそれぞれ接続し、マーキングパッド及び吸水パッドの他端底部側にそれぞれＰＶＣ基板を接続し、
    マーキングパッドとＰＶＣ基板との接続端部の上側にはサンプルパッドが設けられ、サンプルパッドの一端底部側はマーキングパッドの上側に接続され、他端底部側はＰＶＣ基板に接続される、ことを特徴とする請求項１～４のいずれか１項に記載のダブルウィンドウで大便潜血を検出する金コロイド検出試験紙。
  7. 請求項１～４のいずれか一項に記載の金コロイド検出試験紙のヘモグロビン検出における使用であって、
    被測定サンプルを左側試薬ストリップ及び右側試薬ストリップのサンプルパッドに添加し、Ｔ１検出線及びＴ２検出線の発色状況に基づき、ヘモグロビンの濃度範囲を判定する、ことを特徴とする使用。
  8. Ｔ１検出線が発色せず、Ｔ２検出線が発色しない場合、ヘモグロビン濃度＜１００ｎｇ／ｍＬであることが示唆され、
    Ｔ１検出線が発色し、Ｔ２検出線が発色しない場合、１００ｎｇ／ｍＬ≦ヘモグロビン濃度＜５００ｎｇ／ｍＬであることが示唆され、
    Ｔ１検出線が発色し、Ｔ２検出線が発色する場合、５００ｎｇ／ｍＬ≦ヘモグロビン濃度＜５ｍｇ／ｍＬであることが示唆され、
    Ｔ１検出線が発色せず、Ｔ２検出線が発色する場合、ヘモグロビン濃度が≧５ｍｇ／ｍＬであることが示唆される、ことを特徴とする請求項７に記載の使用。
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