JP7717609B2 - 皮膚障害及び腸障害で使用するためのコラーゲン加水分解物 - Google Patents

Description

本発明は、炎症性皮膚障害及び腸障害及び／又は皮膚障害、及び炎症を伴う腸障害の治療における活性物質として使用するためのコラーゲン加水分解物に関する。

本発明は、コルチコステロイドの副作用、特に皮膚に対するそれらの副作用を軽減するための活性物質として使用するためのコラーゲン加水分解物にも関する。

アトピー性湿疹とも呼ばれる神経皮膚炎は、慢性皮膚障害であり、先進国では現在、成人の１～３％、及び子供の５～２０％に発症している。神経皮膚炎の発生率は、一般的に増加しており、そして２０世紀半ば以降、障害の発生率は４倍～６倍に増加している。障害の正確な原因はまだ完全には理解されていないが、現在の研究状況によれば、それは、遺伝的素因及び環境の影響の両方が役割を果たす自己免疫障害である。

神経皮膚炎は一般的に、皮膚バリア機能の障害の形で出現し、その特定の症状は特に、発赤、うろこ状、時々、しだれ性湿疹である。それらは、急性又は慢性のかゆみに関連しており、非常に激しい場合があり、夜中続くこともある。特に、かゆみは、影響を受ける個人の生活の質を著しく損なう可能性がある。神経皮膚炎の重症度は、ＳＣＯＲＡＤ（スコアリングアトピー性皮膚炎）指数に従って評価され得る。

現在まで、神経皮膚炎を完全に治すことはできなかったが、種々のアプローチが症状を治療するために利用できる。ここでの主要な焦点は、バリア機能を安定化し、そして刺激及びアレルゲンの浸潤に対する皮膚の感受性を低めるために、軟膏、クリーム又はローションによる局所治療の形での基本的なスキンケアにある。障害又は症状のより重度な症状の場合にこの手段はもはや十分でない場合、特にコルチコステロイドが抗炎症剤としての治療手段として使用される。コルチゾール効果を有するそれらの製剤は、日常の言葉でコルチゾンと呼ばれている。それらは通常、患部の皮膚領域に局所的に塗布されるが、コルチコステロイドの既知の副作用、特に皮膚への副作用（例えば、皮膚の萎縮、色素障害及び斑状出血）のために、短期間の塗布にのみ適している。

従って、副作用が少なく、コルチコステロイドの代わりに又はその追加で使用され得る、神経皮膚炎及び他の障害の治療のための活性物質が非常に必要とされる。

この問題を解決するために、本発明は、炎症性皮膚障害及び腸障害及び／又は皮膚障害、及び炎症を伴う腸障害の治療における活性物質として使用するためのコラーゲン加水分解物の使用を提供している。コラーゲン加水分解物の適切な有効性は、特に、コラーゲン加水分解物又はプラセボが神経皮膚炎を有する患者に投与された臨床研究から明らかになった。

コラーゲン加水分解物の種々の有利な効果、特に骨粗鬆症又は関節愁訴におけるコラーゲン加水分解物の使用は、比較的長い間、既に知られていた。皮膚の健康に対するコラーゲン加水分解物の陽性効果はまた、例えば国際特許出願ＷＯ２０１２／０６５７８２Ａ２に既に記載されている。それにもかかわらず、神経皮膚炎及び他の炎症性障害の治療におけるコラーゲン加水分解物の有効性は驚くべきものである。

食品としても使用される動物性出発物質の副産物としてのコラーゲン加水分解は、健康の観点から完全に無害な製品であり、既知の有害の副作用は存在しない。それは薬物としての法的な承認を必要とせず、そして特に、栄養補助食品の形で販売及び使用され得る。栄養補助食品として、処方箋なし（ＯＴＣ）の薬物として、又は処方薬として（特に、他の活性物質と組合して）コラーゲン加水分解物の使用は、本発明の範囲内に含まれる。

コラーゲン加水分解物は理想的には、経口投与される。コラーゲン加水分解物のペプチドは、１０，０００Ｄａまでの比効的高分子量であっても、少なくともある程度、腸に再吸収されることが知られている。１日の用量の場合、経口投与されるコラーゲン加水分解物の好ましい量は、２～１５ｇ、より好ましくは３～１０ｇである。神経皮膚炎の場合の腸性効果は、５ｇのコラーゲン加水分解物の毎日の用量で実証され得た。

図１は、研究期間中のコルチコステロイド及びスキンケア軟膏の使用に関する棒グラフを示す。

図２は、研究期間中の皮膚のｐＨ値の動きに関する棒グラフを示す。

図３は、研究期間中の「かゆみによる家事／用事の障害」の指標の変化に関する棒グラフを示す。

図４は、繊維芽細胞によるＩ型コラーゲン及びプロテオグリカンの生合成に関する棒グラフを示す。

図５は、軟膏細胞によるＩ型コラーゲン及びプロテオグリカンの生合成に関する棒グラフを示す。

図６は、骨芽細胞によるＩ型コラーゲン及びプロテオグリカンの生合成に関する棒グラフを示す。

本発明の好ましい実施形態によれば、コラーゲン加水分解物は、コルチコステロイドによる皮膚又は腸障害の治療に加えて、支持療法として使用される。コルチコステロイドを完全に省き、そしてさらに、症状を十分に緩和することはしばしば不可能であるが、コラーゲン加水分解物の投与は、少なくともコルチコステロイドの投与量を減らすことを可能にし、それ自体すでに、影響を受けた個人の副作用の大幅な改善をもたらす。

本発明に従ってコラーゲン加水分解物と一緒に使用され得るコルチコステロイドは、一般的に、特に軟膏の形で局所的に投与される。他方では、コルチコステロイドの経口投与もまた可能である。この後者の場合、本発明のさらなる実施形態によれば、コラーゲン加水分解物及びコルチコステロイドを含む組成物は、すなわち組合せ製剤の形で投与され得る。

コルチコステロイドは好ましくは、糖質コルチコイド、例えばヒドロコルチゾンである。「ほとんど効果がない」（クラスＩ）～「非常に効果的である」（クラスＩＶ）に分類される多数の糖質コルチコイドが知られている。

本発明の好ましい実施形態は、神経皮膚炎の治療において活性物質として使用するためのコラーゲン加水分解物に関する。コラーゲン加水分解物による治療又は支持療法が可能である、さらなる炎症性皮膚障害及び／又は炎症を伴う皮膚障害は、乾癬、酒さ、慢性そう痒症、にきび、蜂巣炎及び皮膚ポロシスである。

本発明はまた、炎症性腸障害及び／又は炎症を伴う腸障害の治療に使用するためのコラーゲン加水分解物も含む。腸壁が構造タンパク質としてコラーゲン繊維を含み、そして実際の体内と「外側領域」との間にバリアを表す限り、皮膚の炎症性障害と腸の炎症性障害との間には類似性が存在する。本発明の範囲内でコラーゲン加水分解物の使用を可能にするための腸障害は、特に、クローン病及び潰瘍性大腸炎である。それらは、それぞれ、糖質コルチコイドにより症候的に治療され得る慢性炎症性腸障害である。

本発明のさらなる側面は、コルチコステロイドの副作用、特に皮膚に対するそれらの副作用、例えば皮膚の萎縮、色素障害及び斑状出血を軽減するための活性物質として使用するためのコラーゲン加水分解物に関する。対応する情報はまた、すでに述べられた臨床研究においても見出され得、これについては、以下でさらに詳細に説明されるであろう。

コルチコステロイド（特に、糖質コルチコイド）の上記の副作用は、少なくとも部分的には、皮膚細胞（線維芽細胞）によるコラーゲン生合成の低下により引起される（例えば、Oikarinen et al., Journal of Investigative Dermatology 98 (1992) 220-225を参照のこと）。インビトロでの細胞試験は、驚くべきことには、コラーゲン生合成の低下が、コラーゲン加水分解物の存在によりほぼ完全に補償され得ることを見出した（以下を参照のこと）。

本発明に従って使用するためのコラーゲン加水分解物は典型的には、５００～１５，０００Ｄａ、好ましくは１，００～８，００Ｄａ、より好ましくは１，５００～５，０００Ｄａ、最も好ましくは１，８００～２，２００Ｄａの平均分子量を有する。それらのステートメントにおいては、特にゲル浸透クロマトグラフィーにより決定され得る重量平均分子量が常に意味される。

コラーゲン加水分解物は、好ましくは、コラーゲン含有出発物質の酵素的加水分解により生成される。特に、微生物又は植物起源のエンドペプチダーゼ又はエキソペプチダーゼが、この加水分解のために使用される。所望の分子量範囲のコラーゲン加水分解物は、ペプチダーゼ及び加水分解条件の適切な選択により生成され得る。

コラーゲン含有出発物質は、一般的に、脊椎動物、好ましくは哺乳類又は鳥類の皮膚又は骨、及び特にウシ又はブタの皮膚（それぞれ、ウシ皮又はブタ皮）から選択される。他方では、コラーゲン含有出発物質は、魚、特に冷水魚又は熱帯魚の皮膚、骨及び/又は鱗から選択され得る。

コラーゲン加水分解物は、それらの出発物質から一段階法で、又は中間段階のゼラチンにより生成され得；後者の場合、タイプＡ及びタイプＢの両ゼラチンが使用され得る。

コラーゲン加水分解物は、好ましくは、異なる特異性を有する少なくとも２つのエンドプロテアーゼ、特に少なくとも２つの異なるメタロプロテアーゼ及び／又はセリンプロテアーゼ、すなわちコラーゲン分子のアミノ酸配列を、特定アミノ酸の前後で切断するプロテアーゼの連続作用により生成される。メタロプロテアーゼ及び／又はセリンプロテアーゼは、微生物Bacillus subtilis、Bacillus licheniformis、Bacillus amyloliquefaciens、Aspergillus oryzae 及び Aspergillus melleus由来の酵素であることが好都合である。

適切なエンドプロテアーゼの選択により、特定分子量分布のコラーゲン加水分解物を得ることができるだけでなく、加水分解物に含まれるペプチドの末端でのアミノ酸のタイプもまた影響を受ける。この点で、例えば、コラーゲン加水分解物のＮ末端アミノ酸の少なくとも５０％が疎水性アミノ酸、特にアラニン、ロイシン及びイソロイシンであることが好ましい。

酵素的加水分解の代わりに、コラーゲン加水分解物は、本発明の範囲内での組換え遺伝子発現により生成され得る。特にウシ又はブタからの天然コラーゲン配列の使用により、及び遺伝子修飾された細胞（例えば、酵母、細菌又は植物細胞、特にタバコ）におけるその発現により、対応するコラーゲン含有材料の加水分解生成物と実質的に同一の生成物が生成され得る。ここでは、より狭い、又は正確に特定された分子量分布を得ることが可能である。

神経皮膚炎の治療におけるコラーゲン加水分解物の有効性は、以下に記載される臨床研究に基いてより詳細に説明されるであろう。

さらに、コルチコステロイドの副作用の軽減におけるコラーゲン加水分解物の有効性を実証するインビトロ細胞試験が記載されている。

１．臨床試験
１．１研究デザイン
臨床試験を、神経皮膚炎と診断された３０人の試験対象（男性１５人及び女性１５人）により実施し、神経皮膚炎の重症度は、ＳＣＯＲＡＤ指標によれば、全ての試験対象で１５～４０の範囲であった。この研究は、無作為化、二重盲検、プラセボ対照試験であり、すなわち試験対象は、それぞれ１５人の個人を含む治療グループ及びプラセボグループに分けられ、試験対象も治療スタッフも、個々の試験対象のグループ割り当てを認識していない。

治療グループ中の試験対象は、１２週の全研究期間中に５ｇのコラーゲン加水分解物を毎日投与された。これは、約２，０００Ｄａの平均分子量を有するウシコラーゲンの酵素加水分解により生成されたコラーゲン加水分解物である、出願人により配布された製品Verisol Ｂであった。Verisol Ｂについての製造方法は、ＷＯ２０１２／０６５７８２Ａ２号に記載される製造方法に実質的に対応している。

プラセボグループにおける試験対象は、コラーゲン加水分解物の代わりに５ｇのマルトデキストリンを毎日、投与され；コラーゲン加水分解物及びプラセボは、包装、食感又は味の点で違いはなかった。

研究中、試験対象は、症状を和らげるために、スキンケア軟膏（unguentum leniens）又はコルチコステロイド含有軟膏（トリアムシノロン アセトニド）を適用するかどうか、及び適用する量を自由に選択できた。個々の試験対象のためのスキンケア軟膏及びコルチコステロイドの使用を、研究期間中に測定した。

１．２スキンケア軟膏及びコルチコステロイドの使用
研究の注目すべき結果は、調査グループにおけるスキンケア軟膏及びコルチコステロイド含有軟膏の両方の使用が、プラセボグループにおいてよりも優位に少ないことである。これは、研究期間の最初の３分の１（４週間）及び５週目から１２週目までの期間の両方に当てはまり、そしていずれの場合も、コルチコステロイドの使用で特に顕著である。

図１は、棒グラフの形での対応する結果、すなわちコルチコステロイド含有軟膏及びスキンケア軟膏の両グループにおけるそれぞれの期間の平均使用量をグラムで示している。

この結果は、神経皮膚炎におけるコラーゲン加水分解物の有効性を示している。コルチコステロイド及びスキンケア軟膏の量は、試験対象により、必要に応じて自由に選択できるので、調査グループにおける必要量が少ないことは、一部の症状が経口投与されたコラーゲン加水分解物により直接緩和できた事実によってのみ説明され得る。

１．３皮膚のｐＨ値の測定
そのバリア機能について指標である、皮膚のｐＨ値は、研究の開始時、４週間後及び１２週間後、皮膚ｐＨメーター（Courage + Khazaka electronic GmbH）を用いて、全ての試験対象において測定された。測定は、上腕の領域、より具体的には、健康な皮膚領域及び病変により影響された皮膚領域の両方で実施された。

結果は、棒グラフの形で図２に示されている。

治療グループにおいては、病変のある皮膚領域のｐＨ値は、研究期間中、５．３～５．６の範囲で健康な皮膚のｐＨ値に近づく傾向がある。対照的に、プロセボグループにおいては、健康な皮膚及び病変を有する皮膚領域の両方のｐＨ値は、１２週間後、異常に上昇した。

この結果は、コラーゲン加水分解物の経口投与が、皮膚に対するコルチコステロイドの副作用を少なくとも部分的に打ち消すという結論を導く。

１．４経表皮水分損失及び皮膚水分
Tewameterを用いての経表皮水分損失（ＴＥＷＬ）及びCorneometer (両方ともCourage + Khazaka electronic GmbHから)を用いての皮膚水分の測定を、研究期間中に行った。両パラメーターは、ｐＨ値と同様に皮膚バリア機能の指標である。

治療グループとプラセボグループとの間の有意な差は、健康な皮膚領域でも病変により影響された皮膚領域でも、それらの２つのパラメーターの結果に見出されなかった。これは、プラセボグループにおいて使用されたコルチコステロイドのより多くの量、及びその作用にもかかわらず、コラーゲン加水分解物の効果に起因する可能性があるパラメーターの劣化は発生しなかったという結論に、間接的につながる。

１．５かゆみの評価
かゆみの評価を、「５Ｄそう痒症スケール」と呼ばれるモデルに従って、研究期間中、試験対象に対して行った。このモデルによれば、かゆみは、身体への局在化（分布）に関して、及びまた、かゆみの結果としての以下の生活領域の障害に関して、定量的に及び定性的に（期間、重症度及び傾向）の両方で評価される：睡眠; 自由時間/社会活動; 家事/用事; 仕事/学校。

評価基準「家事／用事の障害」については、プラセボグループとは対照的に、研究期間中に治療グループにおいて指標の有意な改善が見られた。対応する結果が図３の棒グラフに示されている（研究の開始時、４週間後、及び１２週間後の指標の平均値）。この結果は、かゆみの緩和におけるコラーゲン加水分解物の有効性の直接的反映である。

他の評価基準については、調査グループとプラセボグループとの間で種々の指標に有意な差は存在しなかった。しかしながら、より多くのコルチコステロイドがプラセボグループで使用された事実を考慮すると、この発見はまた、コルチコステロイドの効果がコラーゲン加水分解物により少なくとも部分的に置換される可能性があるという結果に間接的につながる。

２．インビトロ細胞試験
２．１繊維芽細胞による細胞試験
コルチコステロイドによる局所治療は、特に、真の副作用、例えば皮膚萎縮を伴うより長い治療期間と関連する。それらの副作用の主な原因は、線維芽細胞によるコラーゲンの生合成、及び／又は、他の重要なマトリックスタンパク質、例えばプロテオグリカンの生合成の低下である。

ヒト線維芽細胞を用いての細胞試験を実施し、糖質コルチコイドと組合してのコラーゲン加水分解物がマトリックスタンパク質の生合成に影響を及ぼすかどうかを調べた。上記に臨床試験と同じコラーゲン加水分解物（Verisol Ｂ）を、それらの試験に使用した。

初代ヒト線維芽細胞を、１０％のウシ胎児血清、２０ Ｕ / ｍｌのペニシリンストレプトマイシン、５０ μｇ / ｍｌのパトリシン、０．０５ ｍｇ / ｍｌのアスコルビン酸、０．１５ ｍｇ / ｍｌのグルタミンを補充されたＨＡＭのＦ１２培地において培養した。８０％の細胞のコンフルエンスに達した後、培地を、３つの異なるバッチで、０．５ ｍｇ / ｍｌのコラーゲン加水分解物、０．０５ ｍｇ / ｍｌの糖質コルチコイド（デキサメタゾン）又は両方の成分の組み合わせにより補充された新鮮な培地により置換した。対照バッチは、添加せずに、培地において、されに培養された。

さらに７日間の培養の後、線維芽細胞により合成された細胞外マトリックスタンパク質の量を測定し、Ｉ型コラーゲンは、「Sircol可溶性コラーゲンアッセイ」により測定され、そしてプロテオグリカンは、「グリコサミノグリカンアッセイBlyscan」（Biocolor Ltd, Great Britain）により測定され、いずれの場合も、製造元の指示に従った。

結果は、図４において棒グラフで示されており、ここで図４ＡはＩ型コラーゲンの生合成に関し、そして図４Ｂは、プロテオグリカンの生合成に関する。何れの場合も、８回の試験の平均値が、対照バッチに関連して指定されている。どちらかの場合も、コラーゲン及びプロテオグリカンの生合成は、予想通り、糖質グルコイドにより有意に低められることが最初にわかった。しかしながら、この低下は、コラーゲン加水分解物の追加補充により完全に補償され得る。コラーゲン加水分解物は、それ自体で生合成に対する穏やかな効果を有する。

それらの結果は、皮膚細胞におけるマトリックスタンパク質の生合成の低下により引起される、コルチコステロイドの副作用、例えば皮膚萎縮が、コラーゲン加水分解物の投与により低められ得ることをさらに示している。

２．２軟骨細胞による細胞試験
同じ細胞試験を、ヒト軟骨細胞（軟骨細胞）でも実施した。細胞の培養及びＩ型コラーゲン及びビプロテオグリカンの測定を、線維芽細胞を用いて上記試験と同様に実施したが、約４，０００Ｄａの平均分子量を有するウシ骨ゼラチンからのコラーゲン加水分解物を使用した。

結果は、図５の棒グラフに示され、図５ＡはＩ型コラーゲンの生合成を示し、そして図５Ｂはプロテオグリカンの生合成を示す。何れの場合も、３回の試験からの平均値が示される。ここでも、糖質コルチコイドにより引起される生合成の低下は、コラーゲン加水分解物の添加により、実質的に補償され得ることが分かっている。

２．３骨芽細胞による細胞試験
対応する試験をまた、ヒト骨芽細胞（骨細胞）により実施し；軟骨細部（４．０００Ｄａのコラーゲン加水分解物を含む）を用いた試験と同じ方法で、試験を実施し、Ｉ型コラーゲン及びプロテオグリカンを測定した。図６の棒グラフは、骨芽細胞の場合も、糖質コルチコイドによるＩ型コラーゲン（図６Ａ）及びプロテオグリカン（図６Ｂ）の生合成の低下が、コラーゲン加水分解物の添加により実質的に完全に補償され得ることを示す。

軟骨細胞及び骨芽細胞の結果は、コルチコステロイドと組合してのコラーゲン加水分解物の有利な効果が皮膚に限定されず、そして副作用の軽減が他の組織タイプにも期待できることを示している。

Claims (14)

1. 神経皮膚炎の治療のための医薬組成物であって、活性物質としてコラーゲン加水分解物を含有し、ここで前記医薬組成物が、コルチコステロイドによる神経皮膚炎の治療に加えての支持療法に用いられるものであり、前記コラーゲン加水分解物が１，５００～５，０００Ｄａの平均分子量を有する医薬組成物。
2. 前記コラーゲン加水分解物が、２～１５ｇの１日用量で経口投与される、請求項１に記載の医薬組成物。
3. 前記コラーゲン加水分解物が、３～１０ｇの１日の用量で経口投与される、請求項２に記載の医薬組成物。
4. 前記コラーゲン加水分解物の投与が、コルチコステロイドの投与量の低下を可能にする、請求項１～３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
5. 前記コルチコステロイドが局所的に塗布される、請求項１～４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
6. 前記コルチコステロイドが、コラーゲン加水分解物及びコルチコステロイドを含む組成物の形で経口投与される、請求項１～４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
7. 前記コルチコステロイドが、糖質コルチコイドである、請求項１～６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
8. 前記コラーゲン加水分解物が１，８００～２，２００Ｄａの平均分子量を有する、請求項１～７に記載の医薬組成物。
9. 前記コラーゲン加水分解物が、コラーゲン含有出発物質の酵素的加水分解により生成される、請求項１～８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
10. 前記コラーゲン含有出発物質が、脊椎動物の皮膚から選択される、請求項９に記載の医薬組成物。
11. 前記コラーゲン加水分解物が、異なる特異性を有する少なくとも２つのメタロプロテアーゼ及び／又はセリンプロテアーゼの連続的な作用によって生成される、請求項９又は１０に記載の医薬組成物。
12. 前記メタロプロテアーゼ及び／又はセリンプロテアーゼが、微生物Bacillus subtilis、Bacillus licheniformis、Bacillus amyloliquefaciens、Aspergillus oryzae 及びAspergillus melleusが産生する酵素から選択される、請求項１１に記載の医薬組成物。
13. 前記コラーゲン加水分解物のＮ末端アミノ酸の少なくとも５０％が、疎水性アミノ酸である、請求項１～１２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
14. 前記コラーゲン加水分解物が、組換え遺伝子発現により生成されたコラーゲンから調製される、請求項１～８のいずれか１項に記載の医薬組成物。