JP7724374B2 - 葉たばこからネオフィタジエンを単離精製する方法、ネオフィタジエン組成物、非燃焼加熱型香味吸引器、非燃焼非加熱型香味吸引器及び燃焼型香味吸引器、並びにそれらの製造方法 - Google Patents

Description

本発明は、葉たばこからネオフィタジエンを単離精製する方法、ネオフィタジエン組成物、非燃焼加熱型香味吸引器、非燃焼非加熱型香味吸引器及び燃焼型香味吸引器、並びにそれらの製造方法に関する。

ネオフィタジエンは葉たばこに含まれるテルペノイド化合物であり、タバコ植物の特徴的な香気と相関があることから、香気品質の発現に重要な成分として着目されてきた。ネオフィタジエンを含む精油が抗炎症作用を有することは知られていたが（非特許文献１）、近年、ネオフィタジエン単体で抗炎症作用を発揮することが明らかになり着目されている（非特許文献２）。

ネオフィタジエンを含むものとして、植物体ではたばこの他に藻類が知られている（非特許文献２）。ネオフィタジエンは植物に含まれるクロロフィルａ及びｂの一部がルーメン内で加水分解によって遊離したフィトールに由来することが報告されており、ネオフィタジエンを含む牧草を飼料とした牛の牛乳や牛肉からネオフィタジエンが検出されることも報告されている（非特許文献３）。

ネオフィタジエンの単体を手に入れる手法としては、主に合成反応が用いられている。合成反応では、まずクロロフィルをアルカリ条件下で加水分解することでフィトールが生成する。生成したフィトールに濃硫酸を加え、１７０℃で加熱することで、脱離反応が生じ、ネオフィタジエンが生成する（特許文献１）。

一方、ネオフィタジエンを植物体等の混合物から分離する場合は、他の物質を含むような精油として精製されており、ネオフィタジエン単体の単離精製に関する報告は少ない。例えば、非特許文献４には、たばこからネオフィタジエンを単離精製するプロセスとして、黄色種のたばこからヘキサン溶媒で抽出した後、ケイ酸カラムクロマトグラフィーを用いてヘキサン層を溶出させ、アセトンに溶媒置換し、飽和炭化水素を結晶化させて除いた後、アルミナクロマトグラフィーを使用して溶出させる方法が記載されている。

特表２０１２－５２９８９３号公報

Adeosun TE, Ogunwande IA, Avoseh ON, Raji IP, Lawal OA. Composition and Anti-inflammatory Activity of Essential Oil of Jatropha curcas. Nat Prod Commun. 2017 Mar;12(3):439-440. PMID: 30549905. Bhardwaj, M., Sali, V.K., Mani, S. et al. Neophytadiene from Turbinaria ornata Suppresses LPS-Induced Inflammatory Response in RAW 264.7 Macrophages and Sprague Dawley Rats. Inflammation 43, 937-950 (2020) 放牧飼養による生産乳の揮発性成分の特徴と乳中揮発性成分をマーカーとしたトレーサビリティの確立に関する研究, 上田靖子, 北海道大学, 博士（農学）乙第6987号(2016) Flue-cured Tobacco. II. Neophytadiene

しかしながら、非特許文献４に記載の方法ではネオフィタジエンを高収率かつ高純度で単離精製することができず、ネオフィタジエンの有効利用拡大を考慮すると、葉たばこからネオフィタジエンを高収率かつ高純度で単離精製可能な方法を開発することが望まれる。

本発明は、葉たばこからネオフィタジエンを高収率かつ高純度で単離精製可能な方法、該方法により得られるネオフィタジエン組成物、該ネオフィタジエン組成物を含む非燃焼加熱型香味吸引器、非燃焼非加熱型香味吸引器及び燃焼型香味吸引器を提供することを目的とする。

本発明は以下の実施態様を含む。

［１］葉たばこからネオフィタジエンを単離精製する方法であって、
葉たばこに非プロトン性溶媒を添加して抽出操作を行い、抽出残渣を除去して抽出液（Ａ１）を得る工程と、
前記抽出液（Ａ１）に酸性の水溶液を添加して液液抽出を行い、水層を除去して抽出液（Ｂ１）を得る工程と、
前記抽出液（Ｂ１）にプロトン性溶媒を添加して液液抽出を行い、プロトン性溶媒の層を除去して抽出液（Ｃ１）を得る工程と、
前記抽出液（Ｃ１）の溶媒を除去して乾固物（Ｄ１）を得る工程と、
前記乾固物（Ｄ１）にプロトン性溶媒を添加して前記乾固物（Ｄ１）を溶解させ、溶液（Ｅ１）を得る工程と、
前記溶液（Ｅ１）中に生成した沈殿物を除去して上澄み液（Ｆ１）を得る工程と、
前記上澄み液（Ｆ１）の溶媒を非プロトン性溶媒に置換して溶液（Ｇ１）を得る工程と、
順相系高速液体クロマトグラフィーにより、前記溶液（Ｇ１）からネオフィタジエンを単離精製する工程と、
を含む、方法。

［２］葉たばこからネオフィタジエンを単離精製する方法であって、
葉たばこに非プロトン性溶媒を添加して抽出操作を行い、抽出残渣を除去して抽出液（Ａ２）を得る工程と、
前記抽出液（Ａ２）に酸性の水溶液を添加して液液抽出を行い、水層を除去して抽出液（Ｂ２）を得る工程と、
前記抽出液（Ｂ２）の溶媒を除去して乾固物（Ｃ２）を得る工程と、
前記乾固物（Ｃ２）にプロトン性溶媒を添加して前記乾固物（Ｃ２）を溶解させ、溶液（Ｄ２）を得る工程と、
前記溶液（Ｄ２）中に生成した沈殿物を除去して上澄み液（Ｅ２）を得る工程と、
前記上澄み液（Ｅ２）に非プロトン性溶媒を添加して液液抽出を行い、プロトン性溶媒の層を除去して溶液（Ｆ２）を得る工程と、
順相系高速液体クロマトグラフィーにより、前記溶液（Ｆ２）からネオフィタジエンを単離精製する工程と、
を含む、方法。

［３］前記酸性の水溶液のｐＨが３以下である、［１］又は［２］に記載の方法。

［４］前記非プロトン性溶媒が、ヘキサン、ヘプタン及び酢酸エチルからなる群から選択される少なくとも一種の溶媒である、［１］から［３］のいずれかに記載の方法。

［５］前記プロトン性溶媒がメタノールである、［１］から［４］のいずれかに記載の方法。

［６］前記葉たばこが、黄色種及びバーレー種の少なくとも一方である、［１］から［５］のいずれかに記載の方法。

［７］前記溶液（Ｇ１）を得る工程が、前記上澄み液（Ｆ１）に非プロトン性溶媒を添加して液液抽出を行い、プロトン性溶媒の層を除去して前記溶液（Ｇ１）を得る工程である、［１］に記載の方法。

［８］前記溶液（Ｇ１）を得る工程が、前記上澄み液（Ｆ１）の溶媒を除去した後、非プロトン性溶媒を添加して前記溶液（Ｇ１）を得る工程である、［１］に記載の方法。

［９］前記単離精製により得られるネオフィタジエン組成物が、ネオフィタジエンを９５質量％以上含む、［１］から［８］のいずれかに記載の方法。

［１０］［１］から［９］のいずれかに記載の方法により、葉たばこからネオフィタジエンを単離精製してネオフィタジエン組成物を得る工程と、
前記ネオフィタジエン組成物を基材に添加する工程と、
前記基材を含む非燃焼加熱型香味吸引器を製造する工程と、
を含む、非燃焼加熱型香味吸引器の製造方法。

［１１］［１］から［９］のいずれかに記載の方法により、葉たばこからネオフィタジエンを単離精製してネオフィタジエン組成物を得る工程と、
前記ネオフィタジエン組成物を基材に添加する工程と、
前記基材を含む非燃焼非加熱型香味吸引器を製造する工程と、
を含む、非燃焼非加熱型香味吸引器の製造方法。

［１２］［１］から［９］のいずれかに記載の方法により、葉たばこからネオフィタジエンを単離精製してネオフィタジエン組成物を得る工程と、
前記ネオフィタジエン組成物を基材に添加する工程と、
前記基材を含む燃焼型香味吸引器を製造する工程と、
を含む、燃焼型香味吸引器の製造方法。

［１３］［１］から［９］のいずれかに記載の方法により、葉たばこからネオフィタジエンを単離精製して得られる、ネオフィタジエンを９５質量％以上含むネオフィタジエン組成物。

［１４］［１３］に記載のネオフィタジエン組成物を含む、非燃焼加熱型香味吸引器。

［１５］［１３］に記載のネオフィタジエン組成物を含む、非燃焼非加熱型香味吸引器。

［１６］［１３］に記載のネオフィタジエン組成物を含む、燃焼型香味吸引器。

本発明によれば、葉たばこからネオフィタジエンを高収率かつ高純度で単離精製可能な方法、該方法により得られるネオフィタジエン組成物、該ネオフィタジエン組成物を含む非燃焼加熱型香味吸引器、非燃焼非加熱型香味吸引器及び燃焼型香味吸引器を提供することができる。

本発明の第１の実施形態に係る方法の一例を示すフローチャートである。 本発明の第２の実施形態に係る方法の一例を示すフローチャートである。 本実施形態に係る非燃焼加熱型香味吸引器の一例を示す模式図である。 本実施形態に係る非燃焼加熱型香味吸引システムの一例を示す模式図である。 本実施形態に係る非燃焼非加熱型香味吸引器の一例を示す模式図である。 本実施形態に係る非燃焼非加熱型香味吸引器のたばこカプセルの一例を示す模式図である。 本実施形態に係る非燃焼非加熱型香味吸引器の電源ユニットの一例を示す模式図である。 本実施形態に係る非燃焼非加熱型香味吸引器のカートリッジの一例を示す模式図である。 本実施形態に係る非燃焼非加熱型香味吸引器のカートリッジの一例を示す模式図である。 本実施形態に係る燃焼型香味吸引器の一例を示す模式図である。 参考例２における、ｎ－ヘキサン溶液のＧＣ／ＭＳによる分析で得られたトータルイオンクロマトグラムである。 参考例２における、酢酸エチル溶液のＧＣ／ＭＳによる分析で得られたトータルイオンクロマトグラムである。 参考例２における、エタノール溶液のＧＣ／ＭＳによる分析で得られたトータルイオンクロマトグラムである。 参考例２における、メタノール溶液のＧＣ／ＭＳによる分析で得られたトータルイオンクロマトグラムである。 実施例１の工程Ｂ１で得られた溶液をＧＣ／ＭＳ分析して得られたトータルイオンクロマトグラムである。 実施例１の工程Ｃ１で得られたヘキサン溶液をＧＣ／ＭＳ分析して得られたトータルイオンクロマトグラムである。 実施例１の工程Ｃ１で得られたメタノール溶液をＧＣ／ＭＳ分析して得られたトータルイオンクロマトグラムである。 実施例１の工程Ｆ１で得られた上澄み液をＧＣ／ＭＳ分析して得られたトータルイオンクロマトグラムである。 実施例１の工程Ｈ１により、ＨＰＬＣでネオフィタジエンを分画したクロマトグラムである。 実施例１で得られたネオフィタジエン組成物の溶液をＧＣ／ＭＳ分析して得られたトータルイオンクロマトグラムである。

［葉たばこからネオフィタジエンを単離精製する方法］
＜第１の実施形態＞
本実施形態に係る葉たばこからネオフィタジエンを単離精製する方法は、以下の工程を含む。
葉たばこに非プロトン性溶媒を添加して抽出操作を行い、抽出残渣を除去して抽出液（Ａ１）を得る工程（以下、工程Ａ１ともいう。）；
前記抽出液（Ａ１）に酸性の水溶液を添加して液液抽出を行い、水層を除去して抽出液（Ｂ１）を得る工程（以下、工程Ｂ１ともいう。）；
前記抽出液（Ｂ１）にプロトン性溶媒を添加して液液抽出を行い、プロトン性溶媒の層を除去して抽出液（Ｃ１）を得る工程（以下、工程Ｃ１ともいう。）；
前記抽出液（Ｃ１）の溶媒を除去して乾固物（Ｄ１）を得る工程（以下、工程Ｄ１ともいう。）；
前記乾固物（Ｄ１）にプロトン性溶媒を添加して前記乾固物（Ｄ１）を溶解させ、溶液（Ｅ１）を得る工程（以下、工程Ｅ１ともいう。）；
前記溶液（Ｅ１）中に生成した沈殿物を除去して上澄み液（Ｆ１）を得る工程（以下、工程Ｆ１ともいう。）；
前記上澄み液（Ｆ１）の溶媒を非プロトン性溶媒に置換して溶液（Ｇ１）を得る工程（以下、工程Ｇ１ともいう。）；及び
順相系高速液体クロマトグラフィーにより、前記溶液（Ｇ１）からネオフィタジエンを単離精製する工程（以下、工程Ｈ１ともいう。）。

本実施形態に係る方法は、前記工程Ａ１～Ｈ１を含むことで、葉たばこからネオフィタジエンを高収率かつ高純度で単離精製することができる。通常順相系高速液体クロマトグラフィーでは、ネオフィタジエンとニコチンを完全に分離することはできないため、ネオフィタジエンを高収率かつ高純度で単離精製することは困難である。しかし、本実施形態に係る方法では、特に、工程Ａ１により葉たばこから得られる抽出液に対して、最初に工程Ｂ１を実施し、酸性の水溶液の添加及び水層除去を行うことで、前記抽出液に含まれる、ニコチンを主成分とするアルカロイド類を分離する。これにより、最初にニコチン等が除去されるため、単離精製されるネオフィタジエンの収率及び純度を効率的に向上させることができる。さらに、工程Ｄ１により抽出液（Ｃ１）の溶媒を敢えて除去して乾固物（Ｄ１）を得た後、工程Ｅ１によりプロトン性溶媒を添加して前記乾固物（Ｄ１）を再度溶解させ、得られる溶液（Ｅ１）中に生成した沈殿物（高級炭化水素）を工程Ｆ１により除去することで、高級炭化水素を効率的に分離できる。これにより、単離精製されるネオフィタジエンの収率及び純度をより効率的に向上させることができる。以下、工程Ａ１～Ｈ１の詳細について説明するが、本実施形態に係る方法は工程Ａ１～Ｈ１以外の他の工程を含んでもよい。本実施形態に係る方法の一例のフローチャートを図１に示す。

（工程Ａ１）
本工程では、葉たばこに非プロトン性溶媒を添加して抽出操作を行い、抽出残渣を除去して抽出液（Ａ１）を得る。本工程により、葉たばこに含まれるネオフィタジエンを含む有効成分を抽出液（Ａ１）中に抽出することができる。

葉たばこの種類としては特に限定されないが、例えば黄色種、バーレー種、オリエント種、在来種、その他のニコチアナ－タバカム系品種、ニコチアナ－ルスチカ系品種等が挙げられる。これらの葉たばこの品種は一種を用いてもよく、二種以上を併用してもよい。これらの中でも、ネオフィタジエンを多く含む観点から、黄色種及びバーレー種からなる群から選択される少なくとも一種の葉たばこが好ましく、黄色種がより好ましい。葉たばこの形態としては特に限定されないが、抽出効率向上の観点から、細粉状の葉たばこであることが好ましい。なお、葉たばことして、葉たばこの膨化工程から不要物として排出される固形物や、葉たばこの原料工場から排出される葉たばこ細粉を利用してもよい。

抽出溶媒である非プロトン性溶媒としては、ネオフィタジエンをより選択的に抽出できる観点から、ヘキサン、ヘプタン及び酢酸エチルからなる群から選択される少なくとも一種の溶媒であることが好ましく、ヘキサンがより好ましい。非プロトン性溶媒の添加量としては、葉たばこ１００質量部に対して非プロトン性溶媒５００～２０００質量部であることが好ましく、７５０～１２５０質量部であることがより好ましい。抽出操作は葉たばこを含む非プロトン性溶媒を撹拌等することで行うことができる。抽出温度は１５～４０℃であることが好ましく、抽出時間は１～６時間であることが好ましい。抽出残渣の除去は、例えばステンレス製メッシュを用いて抽出液（Ａ１）と抽出残渣とを分離することで行うことができる。

（工程Ｂ１）
本工程では、前記工程Ａ１により得られた抽出液（Ａ１）に酸性の水溶液を添加して液液抽出を行い、水層を除去して抽出液（Ｂ１）を得る。本工程により、ニコチンを主成分とするアルカロイド類は水層に移行し、ネオフィタジエン等の葉たばこの疎水性有効成分は有機層に留まるため、ニコチンを主成分とするアルカロイド類を選択的に分離除去することができる。

本実施形態において、酸性の水溶液とはｐＨが７未満の水溶液を示す。酸性の水溶液は、例えば硫酸、塩酸等のｐＨ調整剤を含む水溶液であることができる。酸性の水溶液のｐＨは、ニコチンを代表とするアルカロイド類が水層により移行しやすくなる観点から、３以下であることが好ましく、１～３であることがより好ましい。なお、本明細書において水溶液のｐＨはｐＨメーター（例えば商品名：卓上型ｐＨメーター、ＨＯＲＩＢＡ製）にて測定される値である。

酸性の水溶液の添加量としては、酸性の水溶液のｐＨにもよるが、抽出液（Ａ１）と酸性の水溶液との体積比（抽出液（Ａ１）：酸性の水溶液）が５０～５００：１００であることが好ましく、２００～４００：１００であることがより好ましい。液液抽出操作は混合液を振とう等することで行うことができる。抽出温度は１５～４０℃であることが好ましく、抽出時間は０．５～３時間であることが好ましい。また、液液抽出を行う際に混合液に塩化ナトリウム等の塩を添加してもよい。水層を分離除去して得られる抽出液（Ｂ１）に無水硫酸ナトリウム等の乾燥剤を添加して、抽出液（Ｂ１）内の脱水操作を行ってもよい。

（工程Ｃ１）
本工程では、前記工程Ｂ１により得られた抽出液（Ｂ１）にプロトン性溶媒を添加して液液抽出を行い、プロトン性溶媒の層を除去して抽出液（Ｃ１）を得る。本工程により、センブラトリエンジオール（ＣＢＴ）を主成分とする葉たばこの葉面樹脂成分はプロトン性溶媒の層に、ネオフィタジエンや高級炭化水素は非プロトン性溶媒の層にそれぞれ移行するため、ＣＢＴを主成分とする葉たばこの葉面樹脂成分を選択的に分離除去することができる。

プロトン性溶媒としては、ＣＢＴを主成分とする葉たばこの葉面樹脂成分をより選択的に抽出除去できる観点から、メタノールが好ましい。プロトン性溶媒の添加量としては、抽出液（Ｂ１）とプロトン性溶媒との体積比（抽出液（Ｂ１）：プロトン性溶媒）が１００：１５～１００であることが好ましく、１００：４０～６０であることがより好ましい。液液抽出操作は混合液を振とう等することで行うことができる。抽出温度は１５～４０℃であることが好ましく、抽出時間は３～８時間であることが好ましい。また、ＣＢＴを主成分とする葉たばこの葉面樹脂成分をさらに除去する観点から、本工程を２回以上繰り返し行ってもよい。

（工程Ｄ１）
本工程では、前記工程Ｃ１により得られた抽出液（Ｃ１）の溶媒を除去して、乾固物（Ｄ１）を得る。抽出液（Ｃ１）の溶媒（非プロトン性溶媒）を除去する方法としては特に限定されないが、例えば減圧下で抽出液（Ｃ１）から溶媒を除去することができる。

（工程Ｅ１）
本工程では、前記工程Ｄ１により得られた乾固物（Ｄ１）にプロトン性溶媒を添加して、前記乾固物（Ｄ１）を溶解させ、溶液（Ｅ１）を得る。プロトン性溶媒としては、高級炭化水素が溶解しにくく、ネオフィタジエンが溶解しやすい観点から、メタノールが好ましい。プロトン性溶媒の添加量としては、乾固物（Ｄ１）１００質量部に対してプロトン性溶媒７５０～２５００質量部であることが好ましく、１０００～１５００質量部であることがより好ましい。乾固物（Ｄ１）をプロトン性溶媒に溶解させる方法としては、特に限定されないが、例えば溶液を超音波にかけることで乾固物（Ｄ１）を分散、溶解させることができる。なお、乾固物（Ｄ１）はプロトン性溶媒中に完全に溶解する必要はなく、少なくとも一部が溶解すればよい。

（工程Ｆ１）
本工程では、前記工程Ｅ１により得られた溶液（Ｅ１）中に生成した沈殿物を除去して、上澄み液（Ｆ１）を得る。本工程により、沈殿物として高級炭化水素を選択的に分離除去することができる。沈殿物は溶液（Ｅ１）を静置することで生成させることができる。静置は例えば０～３０℃で１～１２時間行うことができる。

（工程Ｇ１）
本工程では、前記工程Ｆ１により得られた上澄み液（Ｆ１）の溶媒を非プロトン性溶媒に置換して溶液（Ｇ１）を得る。本工程は、上澄み液（Ｆ１）の溶媒（プロトン性溶媒）を非プロトン性溶媒に置換できればその方法は特に限定されないが、例えば上澄み液（Ｆ１）に非プロトン性溶媒を添加して液液抽出を行い、プロトン性溶媒の層を除去することで、溶液（Ｇ１）を得ることができる。また、上澄み液（Ｆ１）の溶媒を除去した後、非プロトン性溶媒を添加して溶液（Ｇ１）を得てもよい。

（工程Ｈ１）
本工程では、順相系高速液体クロマトグラフィー（順相系ＨＰＬＣ）により、前記工程Ｇ１により得られた溶液（Ｇ１）からネオフィタジエンを単離精製する。ＨＰＬＣとしては特に限定されないが、例えば市販品では、１２６０ Ｉｎｆｉｎｉｔｙ（商品名、アジレント・テクノロジー社製）を用いることができる。前記ＨＰＬＣを用いる場合、例えば以下の条件で分離操作を行うことができる。
・カラム：ＹＭＣ社製 ＹＭＣ－Ｐａｃｋ ＳＩＬ／Ｓ－５μｍ／１２ｎｍ
・移動相：Ｈｅｘ（２ｍｉｎ）→Ｈｅｘ：ＡｃＯＥｔ（９５：５）（１ｍｉｎ）→Ｈｅｘ（１２ｍｉｎ）
・流量：７ｍＬ／ｍｉｎ
・検出器：ダイオードアレイ検出器（２２０ｎｍ）
・サンプル注入量：５００μＬ

上記条件で分離後、２２０ｎｍで検出されるシグナルをフラクションコレクターに分画し、分画したフラクションを回収し、得られたサンプルを濃縮、乾固することで、ネオフィタジエンを単離精製することができる。本実施形態に係る方法ではネオフィタジエンを高収率で得ることができ、かつ、単離精製により得られるネオフィタジエン組成物は、ネオフィタジエンを９５質量％以上含む。

＜第２の実施形態＞
本実施形態に係る葉たばこからネオフィタジエンを単離精製する方法は、以下の工程を含む。
葉たばこに非プロトン性溶媒を添加して抽出操作を行い、抽出残渣を除去して抽出液（Ａ２）を得る工程（以下、工程Ａ２ともいう。）；
前記抽出液（Ａ２）に酸性の水溶液を添加して液液抽出を行い、水層を除去して抽出液（Ｂ２）を得る工程（以下、工程Ｂ２ともいう。）；
前記抽出液（Ｂ２）の溶媒を除去して乾固物（Ｃ２）を得る工程（以下、工程Ｃ２ともいう。）；
前記乾固物（Ｃ２）にプロトン性溶媒を添加して前記乾固物（Ｃ２）を溶解させ、溶液（Ｄ２）を得る工程（以下、工程Ｄ２ともいう。）；
前記溶液（Ｄ２）中に生成した沈殿物を除去して上澄み液（Ｅ２）を得る工程（以下、工程Ｅ２ともいう。）；
前記上澄み液（Ｅ２）に非プロトン性溶媒を添加して液液抽出を行い、プロトン性溶媒の層を除去して溶液（Ｆ２）を得る工程（以下、工程Ｆ２ともいう。）；
順相系高速液体クロマトグラフィーにより、前記溶液（Ｆ２）からネオフィタジエンを単離精製する工程（以下、工程Ｇ２ともいう。）。

本実施形態に係る方法は、前記工程Ａ２～Ｇ２を含むことで、葉たばこからネオフィタジエンを高純度で単離精製することができる。本実施形態に係る方法では、特に、工程Ａ２により葉たばこから得られる抽出液に対して、最初に工程Ｂ２を実施し、酸性の水溶液の添加及び水層除去を行うことで、前記抽出液に含まれる、ニコチンを主成分とするアルカロイド類を分離する。これにより、最初にニコチン等が除去されるため、単離精製されるネオフィタジエンの収率及び純度を効率的に向上させることができる。さらに、工程Ｃ２により抽出液（Ｂ２）の溶媒を敢えて除去して乾固物（Ｃ２）を得た後、工程Ｄ２によりプロトン性溶媒を添加して前記乾固物（Ｃ２）を再度溶解させ、得られる溶液（Ｄ２）中に生成した沈殿物（高級炭化水素）を工程Ｅ２により除去することで、高級炭化水素を効率的に分離できる。これにより、単離精製されるネオフィタジエンの収率及び純度をより効率的に向上させることができる。以下、工程Ａ２～Ｇ２の詳細について説明するが、本実施形態に係る方法は工程Ａ２～Ｇ２以外の他の工程を含んでもよい。本実施形態に係る方法の一例のフローチャートを図２に示す。

（工程Ａ２、Ｂ２）
工程Ａ２、Ｂ２は、第１の実施形態における工程Ａ１、Ｂ１と同様に実施することができる。

（工程Ｃ２）
本工程では、前記工程Ｂ２で得られた抽出液（Ｂ２）の溶媒を除去して乾固物（Ｃ２）を得る。抽出液（Ｂ２）の溶媒（非プロトン性溶媒）を除去する方法としては特に限定されないが、例えば減圧下で抽出液（Ｂ２）から溶媒を除去することができる。

（工程Ｄ２）
本工程では、前記工程Ｃ２で得られた乾固物（Ｃ２）にプロトン性溶媒を添加して、前記乾固物（Ｃ２）を溶解させ、溶液（Ｄ２）を得る。プロトン性溶媒としては、高級炭化水素が溶解しにくく、ネオフィタジエンが溶解しやすい観点から、メタノールが好ましい。プロトン性溶媒の添加量としては、乾固物（Ｃ２）１００質量部に対してプロトン性溶媒５００～２５００質量部であることが好ましく、７５０～１５００質量部であることがより好ましい。乾固物（Ｃ２）をプロトン性溶媒に溶解させる方法としては、特に限定されないが、例えば溶液を超音波にかけることで乾固物（Ｃ２）を分散、溶解させることができる。なお、乾固物（Ｃ２）はプロトン性溶媒中に完全に溶解する必要はなく、少なくとも一部が溶解すればよい。

（工程Ｅ２）
本工程では、前記工程Ｄ２で得られた溶液（Ｄ２）中に生成した沈殿物を除去して上澄み液（Ｅ２）を得る。本工程により、沈殿物として高級炭化水素を選択的に分離除去することができる。沈殿物は溶液（Ｄ２）を静置することで生成させることができる。静置は例えば１５～４０℃で３～８時間行うことができる。

（工程Ｆ２）
本工程では、前記工程Ｅ２で得られた上澄み液（Ｅ２）に非プロトン性溶媒を添加して液液抽出を行い、プロトン性溶媒の層を除去して溶液（Ｆ２）を得る。本工程により、センブラトリエンジオール（ＣＢＴ）を主成分とする葉たばこの葉面樹脂成分はプロトン性溶媒の層に、ネオフィタジエンは非プロトン性溶媒の層にそれぞれ移行するため、ＣＢＴを主成分とする葉たばこの葉面樹脂成分を選択的に分離除去することができる。

非プロトン性溶媒としては、ネオフィタジエンをより選択的に抽出できる観点から、ヘキサン、ヘプタン及び酢酸エチルからなる群から選択される少なくとも一種の溶媒であることが好ましく、ヘキサンがより好ましい。非プロトン性溶媒の添加量としては、上澄み液（Ｅ２）と非プロトン性溶媒との体積比（上澄み液（Ｅ２）：非プロトン性溶媒）が１５～１００：１００であることが好ましく、４０～６０：１００であることがより好ましい。液液抽出操作は混合液を振とう等することで行うことができる。抽出温度は０～３０℃であることが好ましく、抽出時間は３～１２時間であることが好ましい。また、ＣＢＴを主成分とする葉たばこの葉面樹脂成分をさらに除去する観点から、本工程を２回以上繰り返し行ってもよい。

（工程Ｇ２）
工程Ｇ２は、第１の実施形態における工程Ｈ１と同様に実施することができる。本実施形態に係る方法では、第１の実施形態と同様に、ネオフィタジエンを高収率で得ることができ、かつ、単離精製により得られるネオフィタジエン組成物は、ネオフィタジエンを９５質量％以上含む。

［ネオフィタジエン組成物］
本実施形態に係るネオフィタジエン組成物は、前述した本実施形態に係る葉たばこからネオフィタジエンを単離精製する方法より得られ、ネオフィタジエンを９５質量％以上含む。該ネオフィタジエン組成物は、ネオフィタジエンを９７質量％以上含むことが好ましく、９９質量％以上含むことがより好ましい。なお、ネオフィタジエン組成物中のネオフィタジエンの含有量（純度）は、ＧＣにより測定される値である。また、本実施形態に係る方法で得られるネオフィタジエン組成物に含まれるネオフィタジエン以外の成分は、主に葉たばこ由来の種々の成分であり、これらは微量しか含まれないため同定は困難である。

［非燃焼加熱型香味吸引器及びその製造方法］
本実施形態に係る非燃焼加熱型香味吸引器の製造方法は、本実施形態に係る方法により、葉たばこからネオフィタジエンを単離精製してネオフィタジエン組成物を得る工程と、前記ネオフィタジエン組成物を基材に添加する工程と、前記基材を含む非燃焼加熱型香味吸引器を製造する工程と、を含む。また、本実施形態に係る非燃焼加熱型香味吸引器は、本実施形態に係るネオフィタジエン組成物を含む。本実施形態に係る非燃焼加熱型香味吸引器の製造方法は、本実施形態に係る方法によりネオフィタジエン組成物を得るため、効率よく葉たばこからネオフィタジエンを単離精製でき、効率よく良好な香味を提供可能な非燃焼加熱型香味吸引器を製造できる。また、本実施形態に係る非燃焼加熱型香味吸引器は、本実施形態に係る方法により得られるネオフィタジエン組成物を含むため、良好な香味を提供できる。

（基材）
本実施形態に係る非燃焼加熱型香味吸引器の製造方法において、ネオフィタジエン組成物を添加する基材としては、たばこ材料が挙げられる。たばこ材料としては、たばこシート、たばこ刻、巻紙、多糖類シート等が挙げられる。

（１）たばこシート
たばこシートは、熟成済たばこ葉などを含む組成物を、成形して得られるシートである。たばこシートに使用される熟成済たばこ葉は、特に限定されないが、例えば、除骨され、ラミナと中骨に分離されたものを挙げることができる。熟成済たばこ葉とは、キュアリング等の処理および倉庫等での長期保管を経たたばこ葉をいう。本実施形態において「シート」とは、略平行な１対の主面と側面を有する材料をいう。たばこシートは、抄造法、キャスト法、圧延法等の公知の方法で成形することができる。このような方法で成形された各種たばこシートについては、「たばこの事典、たばこ総合研究センター、２００９．３．３１」に詳細が開示されている。たばこシートに本実施形態に係るネオフィタジエン組成物を添加する態様は限定されない。

例えば、本実施形態に係るネオフィタジエン組成物を溶媒に溶解して溶液状のたばこ用香味剤を調製して、これを完成したたばこシートに噴霧するまたは含浸させてもよいし、たばこシートを成形する際に本実施形態に係るネオフィタジエン組成物を添加してもよい。例えば、抄造法では、熟成済たばこ葉から水溶性成分を抽出して水抽出物と残渣に分離し、繊維化された残渣とパルプの混合物を抄紙し、抄紙したシートに水抽出物の濃縮液を添加する工程を経るが、水抽出物に本実施形態に係るネオフィタジエン組成物を添加することができる。キャスト法では、水とパルプとバインダーと熟成済たばこの粉砕物を混合して混合物とし、これをキャストする工程を経るが、この混合物に本実施形態に係るネオフィタジエン組成物を添加することができる。圧延法では、水とパルプとバインダーと熟成済たばこの粉砕物を混合して混合物とし、これを複数の圧延ローラーに投入して圧延する工程を経るが、この混合物に本実施形態に係るネオフィタジエン組成物を添加することができる。

さらに、国際公開第２０１４／１０４０７８号に記載されているように、熟成済たばこの粉砕物とバインダーを混合して混合物とし、当該混合物を不織布によって挟み、当該積層物を熱溶着によって一定形状に成形することで、不織布状のたばこシートを得ることができる。この方法においては、前記混合物に本実施形態に係るネオフィタジエン組成物を添加することができる。

たばこシートはエアロゾル生成基材を含んでいてもよい。エアロゾル生成基材の種類は、特に限定されず、用途に応じて種々の天然物からの抽出物質またはそれらの構成成分を選択することができる。エアロゾル生成基材の具体例としては、グリセリン、プロピレングリコール、ソルビトール、キシリトール、エリスリトール等の多価アルコール、トリアセチン、１，３－ブタンジオール、およびこれらの混合物を挙げることができる。エアロゾル生成基材の含有量は、たばこ製品で利用される形態により様々な量に調整することができる。例えば、たばこシートにエアロゾル生成基材が含まれる場合、その含有量は、良好な香味を得るという観点から、たばこシートの全質量に対して、通常５質量％以上であり、好ましくは１０質量％以上であり、より好ましくは１５質量％以上であり、また、通常５０質量％以下であり、好ましくは４０質量％以下であり、より好ましくは２５質量％以下である。

（２）たばこ刻
たばこ刻として、熟成済たばこ葉を所定の大きさに刻んだもの、前述のたばこシートを所定の大きさに刻んだもの、またはこれらを混合したものを挙げることができる。その大きさは限定されず、一例として、幅０．５～２．０ｍｍ、長さ３～１０ｍｍのものが挙げられる。このような大きさのたばこ刻は、後述する被充填物に充填する態様において好ましい。この他に、たばこ刻として、加工済たばこ葉を、幅を０．５～２．０ｍｍ、長さを前述のたばこ刻よりも長く、好ましくは巻紙と同程度の長さとなるように刻んだ、ストランドタイプ刻を挙げることができる。本実施形態に係るネオフィタジエン組成物は、たばこ刻に添加されてもよいし、裁刻前の原料に添加されてもよい。

たばこ刻は前記エアロゾル生成基材を含んでいてもよい。たばこ刻中にエアロゾル生成基材が含まれる場合、その含有量は、十分な量のエアロゾルを生成させるとともに、良好な香味を得るという観点から、たばこ刻の質量に対して、通常５質量％以上であり、好ましくは１０質量％以上であり、より好ましくは１５質量％以上であり、また、通常５０質量％以下であり、好ましくは４０質量％以下であり、より好ましくは２５質量％以下である。

（３）巻紙
本実施形態に係るネオフィタジエン組成物を溶媒に溶解して溶液状のたばこ用香味剤を調製して、これを巻紙に噴霧、含浸させる等によって、該ネオフィタジエン組成物を含む巻紙を調製できる。巻紙としては、例えば、パルプが主成分のものを挙げることができる。パルプとしては、針葉樹パルプや広葉樹パルプなどの木材パルプで抄造される以外にも、亜麻パルプ、大麻パルプ、サイザル麻パルプ、エスパルトなど一般的にたばこ物品用の巻紙に使用される非木材パルプを混抄して製造して得たものでもよい。これらのパルプは、単独の種類で用いてもよく、複数の種類を任意の割合で組み合わせて用いてもよい。また、巻紙は一枚で構成されていてもよいが、複数枚以上で構成されていてもよい。巻紙は、たばこ刻み等のたばこ原料を巻装する態様で使用されてもよく、また、この巻装された部材を冷却部材やフィルター部材等の他の部材と共に巻装する材料（例えば、チップペーパー）として用いることもできる。パルプとしては、クラフト蒸解法、酸性・中性・アルカリ亜硫酸塩蒸解法、ソーダ塩蒸解法等による化学パルプ、グランドパルプ、ケミグランドパルプ、サーモメカニカルパルプ等を使用できる。

（４）多糖類シート
多糖類シートとは多糖類を主成分とするシートであり、本実施形態に係るネオフィタジエン組成物を多糖類シートに含有させることができる。本実施形態に係るネオフィタジエン組成物を含有する多糖類シートを用いた非燃焼加熱型香味吸引器は、良好な香味を放出させることができる。多糖類としては、カラギーナン、寒天、ゲランガム、タマリンドガム、サイリウムシードガム、コンニャクグルコマンナン、カラギーナン、ローカストビーンガム、グアーガム、寒天、キサンタンガム、ゲランガム、タマリンドガム、タラガム、コンニャクグルコマンナン、デンプン、カシアガム。およびサイリウムシードガム等が挙げられる。

本実施形態に係るネオフィタジエン組成物を含有する多糖類シートは、非燃焼加熱型香味吸引器、および後述する非燃焼非加熱型香味吸引器、燃焼型香味吸引器に用いることができる。燃焼型香味吸引器の態様においては、例えば特許５４８１５７４号に開示されているような多糖類シートを用いることができる。本態様において、本実施形態に係るネオフィタジエン組成物の含有量は当該シートに対して０．０１～３０質量％とすることができる。当該多糖類シートは、多糖類と水とを混合、加熱して多糖類の水溶液を調製し、当該水溶液に香料と乳化剤を加えて混練・乳化させる方法で調製できる。乳化剤としては公知のものを使用できる。

非燃焼加熱型香味吸引器の態様においては、ＰＣＴ／ＪＰ２０１９／２０１３６に記載されているような多糖類シートを用いることができる。本態様においては、多糖類として寒天を用いることが特に好ましい。寒天の含有量は、当該シートに対して好ましくは１０～５０質量％、より好ましくは１５～４５質量％である。また、当該多糖類シートにおける本実施形態に係るネオフィタジエン組成物は、当該シートに対して０．０１～３０質量％とすることができる。

本態様においては、糖および糖アルコールからなる群より選択される糖類化合物を用いることが好ましい。「糖」としては、例えば、グルコース、スクロース、フルクトース、キシロース、ガラクトース、マンノース、マルトース、トレハロース、ラクトース、ラフィノースが挙げられる。「糖アルコール」としては、糖のカルボニル基を水酸基に還元して得られるアルコールであるソルビトールが挙げられる。当化合物の含有量は、寒天に対して、好ましくは１０質量％以上、より好ましくは１０～５００質量％、さらに好ましくは１０～３００質量％、よりさらに好ましくは１０～２００質量％である。また、本態様においては乳化剤を用いることが好ましい。乳化剤としては公知のものを使用でき、その含有量は寒天の質量に対して、好ましくは０．５～１０質量％、より好ましくは１．０～８．０質量％である。

本態様における多糖類シートは、寒天、糖類化合物、香料、および乳化剤を含む原料を水中で混錬して原料スラリーを調製し、原料スラリーを基材上に伸展させ、乾燥させることにより製造することができる。

（非燃焼加熱型香味吸引器）
本実施形態において、「香味吸引器」とは使用者が香味を吸引するための物品をいう。香味吸引器は、燃焼によって香味を発生させる「燃焼型香味吸引器」と、燃焼させずに香味を発生させる「非燃焼型香味吸引器」に大別される。さらに、非燃焼型香味吸引器は、加熱によって香味を発生させる「非燃焼加熱型香味吸引器」と、加熱せずに香味を発生させる「非燃焼非加熱型香味吸引器」に大別される。また、エアロゾルを発生させるためのデバイス（加熱装置または霧化装置等）と、非燃焼加熱型香味吸引器との組合せを、特に非燃焼加熱型香味吸引システムともいう。

図３に本実施形態に係る非燃焼加熱型香味吸引器の一態様を示す。図３に示すように、非燃焼加熱型香味吸引器２０は、たばこロッド部２０Ａと、周上に穿孔を有する筒状の冷却部２０Ｂと、フィルター部２０Ｃと、を備える。非燃焼加熱型香味吸引器２０は、これ以外の部材を有していてもよい。非燃焼加熱型香味吸引器２０の軸方向の長さは限定されないが、４０～９０ｍｍであることが好ましく、５０～７５ｍｍであることがより好ましく、５０～６０ｍｍ以下であることがさらに好ましい。また、非燃焼加熱型香味吸引器２０の周の長さは１６～２５ｍｍであることが好ましく、２０～２４ｍｍであることがより好ましく、２１～２３ｍｍであることがさらに好ましい。例えば、たばこロッド部２０Ａの長さは２０ｍｍ、冷却部２０Ｂの長さは２０ｍｍ、フィルター部２０Ｃの長さは７ｍｍである態様を挙げることができる。これら個々の部材長さは、製造適性、要求品質等に応じて、適宜変更できる。図３には、第１セグメント２５を配置した態様を示すが、これを配置せずに、冷却部２０Ｂの下流側に第２セグメント２６のみを配置してもよい。

（１）たばこロッド部２０Ａ
たばこロッド部２０Ａには、たばこ充填物２１として、本実施形態に係るネオフィタジエン組成物を含むたばこ刻またはたばこシートを用いることができる。たばこ充填物２１を巻紙２２内に充填する方法は特に限定されないが、例えばたばこ充填物２１を巻紙２２で包んでもよく、筒状の巻紙２２内にたばこ充填物２１を充填してもよい。たばこの形状が矩形状のように長手方向を有する場合、当該長手方向が巻紙２２内でそれぞれ不特定の方向となるように充填されていてもよく、たばこロッド部２０Ａの軸方向に整列またはこれに直交する方向に整列させて充填されていてもよい。また、巻紙２２として、前述の本実施形態に係るネオフィタジエン組成物を含む巻紙を用いることもできる。たばこロッド部２０Ａが加熱されることにより、たばこ充填物２１に含まれるたばこ成分、エアロゾル生成基材および水が気化し、吸引に供される。

（２）冷却部２０Ｂ
冷却部２０Ｂは筒状部材で構成されることが好ましい。筒状部材は例えば厚紙を円筒状に加工した紙管２３であってもよい。また、冷却部２０Ｂは、チャネルを形成するために、しわ付けされ、次いでひだ付け、ギャザー付け、または折畳まれた薄い材料のシートによって形成されてもよい。このような材料として、例えば、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリ塩化ビニル、ポリエチレンテレフタレート、ポリ乳酸、酢酸セルロース、およびアルミニウム箔から構成される群から選択されたシート材料を用いることができる。冷却部２０Ｂの全表面積は冷却効率を考慮して適宜調製されるが、例えば、３００～１０００ｍｍ^２／ｍｍとすることができる。冷却部２０Ｂには、好ましくは穿孔２４が設けられる。穿孔２４の存在により、吸引時に外気が冷却部２０Ｂ内に導入される。これにより、たばこロッド部２０Ａが加熱されることで生成したエアロゾル気化成分が外気と接触し、その温度が低下するため液化し、エアロゾルが形成される。穿孔２４の径（差し渡し長さ）は特に限定されないが、例えば０．５～１．５ｍｍであってもよい。穿孔２４の数は特に限定されず、１つでも２つ以上でもよい。例えば穿孔２４は冷却部２０Ｂの周上に複数設けられていてもよい。

冷却部２０Ｂは、その軸方向の長さが例えば７～２８ｍｍのロッド形状とすることができる。例えば、冷却部２０Ｂの軸方向の長さは１８ｍｍとすることができる。冷却部２０Ｂは、その軸方向断面形状として実質的に円形であり、直径を５～１０ｍｍとすることができる。例えば、冷却部の直径は、約７ｍｍとすることができる。

（３）フィルター部２０Ｃ
フィルター部２０Ｃの構成は特に限定されないが、単数または複数の充填層から構成されてよい。充填層の外側は一枚または複数枚の巻紙で巻装されてよい。フィルター部２０Ｃの通気抵抗は、フィルター部２０Ｃに充填される充填物の量、材料等により適宜変更することができる。例えば、充填物が酢酸セルロース繊維である場合、フィルター部２０Ｃに充填される酢酸セルロース繊維の量を増加させれば、通気抵抗を増加させることができる。充填物が酢酸セルロース繊維である場合、酢酸セルロース繊維の充填密度は０．１３～０．１８ｇ／ｃｍ^３であることができる。前記通気抵抗は通気抵抗測定器（商品名：ＳＯＤＩＭＡＸ、ＳＯＤＩＭ製）により測定される値である。

フィルター部２０Ｃの周の長さは特に限定されないが、１６～２５ｍｍであることが好ましく、２０～２４ｍｍであることがより好ましく、２１～２３ｍｍであることがさらに好ましい。フィルター部２０Ｃの軸方向（図３の水平方向）の長さは４～１０ｍｍで選択可能であり、その通気抵抗が１５～６０ｍｍＨ_２Ｏ／ｓｅｇとなるように選択される。フィルター部２０Ｃの軸方向の長さは５～９ｍｍが好ましく、６～８ｍｍがより好ましい。フィルター部２０Ｃの断面の形状は特に限定されないが、例えば円形、楕円形、多角形等であることができる。またフィルター部２０Ｃには香料を含んだ破壊性カプセル、香料ビーズ、香料を直接添加していてもよい。

フィルター部２０Ｃは第１セグメント２５としてセンターホール部を備えていてもよい。センターホール部は１つまたは複数の中空部を有する第１充填層２５ａと、当該充填層を覆うインナープラグラッパー（内側巻紙）２５ｂとで構成される。センターホール部は、マウスピース部の強度を高める機能を有する。センターホール部はインナープラグラッパー２５ｂを持たず、熱成型によってその形が保たれていてもよい。第１充填層２５ａは、例えば酢酸セルロース繊維が高密度で充填されトリアセチンを含む可塑剤が酢酸セルロース質量に対して、６～２０質量％添加されて硬化された内径φ５．０～φ１．０ｍｍのロッドとすることができる。第１充填層２５ａは繊維の充填密度が高いため、吸引時は、空気やエアロゾルは中空部のみを流れることになり、第１充填層２５ａ内はほとんど流れない。センターホール部の第１の充填層２５ａが繊維充填層であることから、使用時の外側からの触り心地は、使用者に違和感を生じさせることが少ない。フィルター部２０Ｃは第２セグメント２６を備えていてもよい。第２セグメント２６は第２充填層２６ａと当該充填層を覆うインナープラグラッパー（内側巻紙）２６ｂとで構成される。

第１セグメント２５と第２セグメント２６とはアウタープラグラッパー（外側巻紙）２７で接続されている。アウタープラグラッパー２７は、例えば円筒状の紙であることができる。また、たばこロッド部２０Ａと、冷却部２０Ｂと、接続済みの第１セグメント２５と第２セグメント２６とは、マウスピースライニングペーパー２８により接続されている。これらの接続は、例えばマウスピースライニングペーパー２８の内側面に酢酸ビニル系糊等の糊を塗り、前記３つの部材を巻くことで接続することができる。これらの部材は複数のライニングペーパーで複数回に分けて接続されていてもよい。

（非燃焼加熱型香味吸引システム）
本実施形態に係る非燃焼加熱型香味吸引システムの一例を図４に示す。図４中、非燃焼加熱型香味吸引システムは、非燃焼加熱型香味吸引器２０と、たばこロッド部２０Ａを外側から加熱する加熱デバイス１０とを備える。

加熱デバイス１０は、ボディ１１と、ヒーター１２と、金属管１３と、電池ユニット１４と、制御ユニット１５とを備える。ボディ１１は筒状の凹部１６を有し、これに挿入されるたばこロッド部２０Ａと対応する位置に、ヒーター１２と金属管１３が配置されている。ヒーター１３は電気抵抗によるヒーターであることができ、温度制御を行う制御ユニット１５からの指示により電池ユニット１４より電力が供給され、ヒーター１２の加熱が行われる。ヒーター１２から発せられた熱は、熱伝導度の高い金属管１３を通じてたばこロッド部２０Ａへ伝えられる。図４には、加熱デバイス１０はたばこロッド部２０Ａを外側から加熱する態様を示したが、内側から加熱するものであってもよい。加熱デバイス１０による加熱温度は特に限定されないが、４００℃以下であることが好ましく、１５０～４００℃であることがより好ましく、２００～３５０℃であることがさらに好ましい。加熱温度とは加熱デバイス１０のヒーター１２の温度を示す。

［非燃焼非加熱型香味吸引器及びその製造方法］
本実施形態に係る非燃焼非加熱型香味吸引器の製造方法は、本実施形態に係る方法により、葉たばこからネオフィタジエンを単離精製してネオフィタジエン組成物を得る工程と、前記ネオフィタジエン組成物を基材に添加する工程と、前記基材を含む非燃焼非加熱型香味吸引器を製造する工程と、を含む。また、本実施形態に係る非燃焼非加熱型香味吸引器は、本実施形態に係るネオフィタジエン組成物を含む。本実施形態に係る非燃焼非加熱型香味吸引器の製造方法は、本実施形態に係る方法によりネオフィタジエン組成物を得るため、効率よく葉たばこからネオフィタジエンを単離精製でき、効率よく良好な香味を提供可能な非燃焼非加熱型香味吸引器を製造できる。また、本実施形態に係る非燃焼非加熱型香味吸引器は、本実施形態に係る方法により得られるネオフィタジエン組成物を含むため、良好な香味を提供できる。

本実施形態に係る非燃焼非加熱型香味吸引器の製造方法における、ネオフィタジエン組成物を基材に添加する方法は、前述した非燃焼加熱型香味吸引器の製造方法と同様であることができる。

図５は、本実施形態に係る非燃焼非加熱型香味吸引器の一態様を示す。非燃焼非加熱型香味吸引器３０は、電源ユニット３０Ｄと、カートリッジ３０Ｅと、たばこカプセル３０Ｆとを有する。非燃焼非加熱型香味吸引器３０は、非吸口端ｕ（上流）から吸口端ｄ（下流）へ向かって延びる形状を有する。カートリッジ３０Ｅは、電源ユニット３０Ｄに対して着脱可能である。また、たばこカプセル３０Ｆは、カートリッジ３０Ｅに対して着脱可能である。

（１）たばこカプセル
図６はたばこカプセル３０Ｆの一例を示す。図６に示すように、たばこカプセル３０Ｆは、たばこロッド部であり、香味源３００を内部に有する。香味源３００は、本実施形態に係るネオフィタジエン組成物を含むたばこ材料を含む。たばこカプセル３０Ｆは、カートリッジ３０Ｅに接続される。具体的には、たばこカプセル３０Ｆの一部は、カートリッジ３０Ｅ内に収容される。

たばこカプセル３０Ｆは、香味源３００を収容する収容体３１０と、メッシュ体３２０と、不織布３３０と、キャップ３４０とを有する。後述する霧化部２２０によって霧化されたエアロゾルは、メッシュ体３２０を通じて収容体３１０内に導入され、香味源３００に接触することでエアロゾルに香味が付与される。その後、エアロゾルは不織布３３０を通じて使用者に吸引される。このように、非燃焼非加熱型香味吸引器３０では、香味源３００を加熱せずにエアロゾルに香味を付与できる。また、香味源３００からは実質的にエアロゾルは発生しない。

エアロゾルの流れ方向において、たばこカプセル３０Ｆ（収容体３１０）の長さは４０ｍｍ以下であることが好ましく、２５ｍｍ以下であることがより好ましい。また、エアロゾルの流れ方向において、前記長さは１ｍｍ以上であることが好ましく、５ｍｍ以上であることがより好ましい。エアロゾルの流れ方向と直交する方向において、たばこカプセル３０Ｆ（収容体３１０）の収容体３１０の最大長さは２０ｍｍ以下であることが好ましく、１０ｍｍ以下であることがより好ましい。また、エアロゾルの流れ方向と直交する方向において、たばこカプセル３０Ｆ（収容体３１０）の最大長さは１ｍｍ以上であることが好ましく、３ｍｍ以上であることがより好ましい。

たばこを含む香味源３００は、エアロゾルに香味を付与する原料片によって構成される。原料片のサイズの下限は、０．２～１．２ｍｍであることが好ましく、０．２～０．７ｍｍであることがより好ましい。香味源３００を構成する原料片のサイズが小さいほど、比表面積が増大するため、香味成分が放出されやすい。香味源３００を構成する原料片としては、本実施形態に係るネオフィタジエン組成物を含む刻みたばこ、または本実施形態に係るネオフィタジエン組成物を含むたばこ材料を粒状に成形した成形体等を用いることができる。香味源３００は、たばこ以外の植物（例えば、ミント、ハーブ等）やメントールなどの香料を含んでいてもよい。さらに、たばこを含む香味源３００は呈味料を含んでいてもよい。呈味料としては、例えば、甘味、酸味、塩味、旨味、苦味、渋味、こく味、辛味、えぐ味、収れん味などを呈する素材が挙げられる。甘味を呈する素材は、例えば、糖類、糖アルコール、甘味料などが挙げられる。糖類は、例えば、単糖類、二糖類、オリゴ糖、多糖類などが挙げられる。甘味料は、例えば、天然甘味料、合成甘味料などが挙げられる。

前記原料片は、例えば、ＪＩＳ Ｚ ８８０１に準拠したステンレス篩を用いて、ＪＩＳ Ｚ ８８１５に準拠する篩分けによって得られる。例えば、０．７１ｍｍの目開きを有するステンレス篩を用いて、乾燥式かつ機械式振とう法によって２０分間に亘って原料片を篩分けによって、０．７１ｍｍの目開きを有するステンレス篩を通過する原料片を得る。続いて、０．２１２ｍｍの目開きを有するステンレス篩を用いて、乾燥式かつ機械式振とう法によって２０分間に亘って原料片を篩分けによって、０．２１２ｍｍの目開きを有するステンレス篩を通過する原料片を取り除く。すなわち、香味源３００を構成する原料片は、上限を規定するステンレス篩（目開き＝０．７１ｍｍ）を通過し、下限を規定するステンレス篩（目開き＝０．２１２ｍｍ）を通過しない原料片である。したがって、香味源３００を構成する原料片のサイズの下限は、下限を規定するステンレス篩の目開きによって定義される。また、香味源３００を構成する原料片のサイズの上限は、上限を規定するステンレス篩の目開きによって定義される。

収容体３１０に収容される香味源３００の充填量は、良好な香味の観点から、３００ｍｇ以上であることが好ましく、３５０ｍｇ以上であることがより好ましい。

（２）電源ユニット
電源ユニット３０Ｄの一例を図７に示す。電源ユニット３０Ｄは、電池１１０を有する。電池１１０は、使い捨てタイプの電池であってもよく、充電タイプの電池であってもよい。電池１１０の出力電圧の初期値は、１．２Ｖ以上４．２Ｖ以下の範囲であることが好ましい。また、電池１１０の電池容量は、１００ｍＡｈ以上１０００ｍＡｈ以下の範囲であることが好ましい。

（３）カートリッジ
カートリッジ３０Ｅの一例を図８、９に示す。図８はカートリッジ３０Ｅの一例の断面図を、図９はその内部構造を示す図である。カートリッジ３０Ｅは、リザーバ２１０と、霧化部２２０と、流路形成体２３０と、外枠体２４０と、エンドキャップ２５０とを有する。カートリッジ３０Ｅは、エアロゾル流路として、霧化部２２０よりも下流側に配置された第１流路２００Ｘを有する。

リザーバ２１０は、エアロゾル源２００を貯留する。リザーバ２１０は、エアロゾルの流れ方向（非吸口端から吸口端（上流から下流）へ向かう方向）に直交する断面において流路形成体２３０の周囲に位置する。リザーバ２１０は、流路形成体２３０と外枠体２４０との間の空隙内に位置する。リザーバ２１０は、例えば、樹脂ウェブや綿等の多孔体によって構成される。また、リザーバ２１０は、液体のエアロゾル源２００を収容するタンクによって構成されていてもよい。エアロゾル源２００としては、例えばグリセリン、プロピレングリコール等が挙げられる。

霧化部２２０は、電池１１０から供給される電力によって燃焼を伴わずにエアロゾル源２００を霧化する。霧化部２２０は、所定ピッチで巻き回された電熱線（コイル）によって構成されている。霧化部２２０は、１．０～３．０Ωの範囲の抵抗値を有する電熱線によって構成されていることが好ましい。所定ピッチは、電熱線が接触しない値以上であり、またより小さい値であることが好ましい。所定ピッチは、例えば、０．４０ｍｍ以下であることが好ましい。所定ピッチは、エアロゾル源２００の霧化を安定させるために一定であることが好ましい。所定ピッチとは、互いに隣接する電熱線の中心の間隔である。

流路形成体２３０は、エアロゾルの流れ方向に沿って延びる第１流路２００Ｘを形成する筒状形状を有する。外枠体２４０は、流路形成体２３０を収容する筒状形状を有する。外枠体２４０は、エンドキャップ２５０よりも下流側に延びるとともに、たばこカプセル３０Ｆの一部を収容する。エンドキャップ２５０は、流路形成体２３０と外枠体２４０との間の空隙を下流側から塞ぐキャップである。エンドキャップ２５０は、リザーバ２１０に貯留されるエアロゾル源２００がたばこカプセル３０Ｆ側に漏れる事態を抑制する。

［燃焼型香味吸引器及びその製造方法］
本実施形態に係る燃焼型香味吸引器の製造方法は、本実施形態に係る方法により、葉たばこからネオフィタジエンを単離精製してネオフィタジエン組成物を得る工程と、前記ネオフィタジエン組成物を基材に添加する工程と、前記基材を含む燃焼型香味吸引器を製造する工程と、を含む。また、本実施形態に係る燃焼型香味吸引器は、本実施形態に係るネオフィタジエン組成物を含む。本実施形態に係る燃焼型香味吸引器の製造方法は、本実施形態に係る方法によりネオフィタジエン組成物を得るため、効率よく葉たばこからネオフィタジエンを単離精製でき、効率よく良好な香味を提供可能な燃焼型香味吸引器を製造できる。また、本実施形態に係る燃焼型香味吸引器は、本実施形態に係る方法により得られるネオフィタジエン組成物を含むため、良好な香味を提供できる。

本実施形態に係る燃焼型香味吸引器の製造方法における、ネオフィタジエン組成物を基材に添加する方法は、前述した非燃焼加熱型香味吸引器の製造方法と同様であることができる。

本実施形態に係る燃焼型香味吸引器の一例を図１０に示す。図１０に示されるように、燃焼型香味吸引器４００は、たばこ含有セグメント４０１と、たばこ含有セグメント４０１に隣接して設けられたフィルターセグメント４０２とを含む。たばこ含有セグメント４０１は、本実施形態に係るネオフィタジエン組成物を含むたばこ材料を含むたばこ充填物４０３と、たばこ充填物４０３の周囲を巻いた巻紙４０４とを含む。前述したように、巻紙４０４が本実施形態に係るネオフィタジエン組成物を含んでいてもよい。フィルターセグメント４０２は、一般的なフィルターとしての機能を有していれば特に制限されず、例えば、合成繊維からなるトウ（単に「トウ」とも称する）や、紙等の材料を円柱状に加工したものを用いることができる。たばこ含有セグメント４０１とフィルターセグメント４０２とは、たばこ含有セグメント４０１及びフィルターセグメント４０２上に巻かれたチップペーパー部材４０５によって連結されている。チップペーパー部材４０５は、その外周の一部に通気孔を有していてもよい。通気孔の数は１つでも複数でもよく、例えば１０～４０個形成されていることができる。通気孔の数が複数の場合、通気孔は例えばチップペーパー部材４０５の外周部に一列に並んで環状に配置されることができる。複数の通気孔は、略一定の間隔で配置されることができる。通気孔を設けることによって、吸引時に通気孔からフィルターセグメント４０２内に空気が取り込まれる。主流煙を通気孔からの外気によって薄めることで、所望のタール値の製品設計を行うことができる。

使用者は、たばこ含有セグメント４０１の先端に着火して、フィルターセグメント４０２の吸口端を口でくわえて吸引することで、たばこの香味を楽しむことができる。なお、フィルターセグメント４０２の数は１つに限らず、例えば異なる機能を有するフィルターセグメントを複数連結して配置してもよい。

以下、本実施形態の具体例について説明するが、本発明はこれらに限定されない。

［参考例１］（葉たばこの品種検討）
黄色種またはバーレー種の葉たばこ細粉を２００ｇ秤量し、２５００ｍｌ容の密閉ステンレス容器に投入した。次に、ヘキサン（富士フィルム和光純薬製、高速液体クロマトグラフ用）を２０００ｍｌ加えた後、４０℃の温浴中で密閉撹拌しながら３時間抽出した。抽出後、目開き２５０μｍのステンレス製メッシュを用いてヘキサン溶液と抽出残渣を分離したところ、約１５００ｍｌのヘキサン溶液を得た。予め０．１質量％硫酸水溶液を調製し、該０．１質量％硫酸水溶液と、先に得られたヘキサン溶液とを、硫酸水溶液：ヘキサン溶液＝１：３の溶液比率（体積比）で混合し、更に食塩２００ｇを添加して十分に分液ロート内で振とうし、液液抽出操作を行った。この時、下層の硫酸水溶液にはニコチンを代表とする成分が移行し、上層の有機層には葉たばこの疎水性有効成分が移行した。十分な静置の後、有機層を取り出し、無水硫酸ナトリウムを２００ｇ加えて撹拌し、有機層内の脱水操作を行った。ろ紙濾過により不溶物を取り除いた。更にロータリーエバポレーター（日本ビュッヒ製）を用いて減圧下でヘキサンを取り除き、黄色種からは５．１６ｇ（収率２．５８％）、バーレー種からは５．４ｇ（収率２．７％）の乾固物を得た。各乾固物をヘキサン溶媒に溶解し、得られた溶液を以下に示す条件でＧＣ／ＭＳ分析した。

質量分析計付きガスクロマトグラフィー（ＧＣ／ＭＳ）
装置：アジレント・テクノロジー製 ７８９０Ａ／５９７５Ｃ ＧＣ／ＭＳＤ
＜ＧＣ条件＞
カラム：ＨＰ－５ＭＳ（アジレント・テクノロジー製）
内径０．２５ｍｍ×長さ３０ｍ、膜厚０．２５μｍ
注入量：１μｌ
注入モード：スプリット（１０：１）
注入口温度：２７０℃
セプタムパージ流量：５ｍｌ／分
キャリアガス：ヘリウム（Ｈｅ）
カラム流量：１ｍｌ／分（定流量モード）
オーブン温度：４０℃（３分）－４℃／分－２８０℃（２０分）
トランスファーライン温度：２８０℃
＜ＭＳ条件＞
溶媒待ち時間：４分
イオン化法：電子衝撃イオン化法（ＥＩ法）、７０ｅＶ
イオン源温度：２３０℃
四重極温度：１５０℃
測定モード：スキャン
ＭＳスキャン範囲：ｍ／ｚ２６～４５０
スレッショルド：５０
サンプリングレート：２

前記ＧＣ／ＭＳによる分析で得られたトータルイオンクロマトグラムから、ネオフィタジエンのＭＳパターンに含まれるシングルイオン（ｍ／ｚ＝６８）を抽出し、それぞれのピーク面積値を比較したところ、黄色種のネオフィタジエンピーク面積値はバーレー種のものより約１．４倍大きいことが確認された。これより、葉たばことして黄色種、バーレー種のいずれも有用であるが、ネオフィタジエン収量が多い観点から黄色種がより好ましいことが分かった。

［参考例２］（抽出溶媒の検討）
１００ｍｌ容器のスクリュー管に葉たばこ細粉を５ｇ量り取り、有機溶媒（ｎ－ヘキサン、酢酸エチル、エタノール、又はメタノール）５０ｍｌを加えよく混合した後、常温下で一昼夜静置した。混合液を濾紙ろ過した抽出液に無水硫酸ナトリウムを少量添加し脱水後、再度濾紙ろ過を行い、有機溶媒を減圧除去した。得られた乾固物の濃度が４質量％となるように、乾固物を抽出で用いた溶媒と同じ溶媒に溶解し、該溶液を参考例１に示す条件でＧＣ／ＭＳ分析した。ｎ－ヘキサン、酢酸エチル、エタノール、及びメタノール溶液のＧＣ／ＭＳによる分析で得られたトータルイオンクロマトグラムを図１１～１４に示す。

図１１～１４のクロマトグラムより、各溶媒で抽出した場合、ネオフィタジエン（保持時間３８．９分）が葉たばこ細粉から抽出されていることが分かった。更に、酢酸エチル、エタノール及びメタノールを用いた抽出では、ネオフィタジエンの精製に不要な成分（保持時間３８分以前）のピークが存在していることが確認された。これより、前記４種の溶媒の中でも、前記不要成分のピークを極力含まないヘキサンが抽出溶媒としてより適していることが分かった。

［実施例１］
（工程Ａ１）
黄色種の葉たばこ細粉を２００ｇ秤量し、２５００ｍｌ容の密閉ステンレス容器に投入した。次に、ヘキサン（富士フィルム和光純薬製、高速液体クロマトグラフ用）を２０００ｍｌ加えた後、４０℃の温浴中で密閉撹拌しながら３時間抽出した。抽出後、目開き２５０μｍのステンレス製メッシュを用いてヘキサン溶液と抽出残渣を分離したところ、約１５００ｍｌのヘキサン溶液を得た。

（工程Ｂ１）
予め０．１質量％硫酸水溶液を調製し、該０．１質量％硫酸水溶液と、先に得られたヘキサン溶液とを、硫酸水溶液：ヘキサン溶液＝１：３の溶液比率（体積比）で混合し、５００ｍｌの混合液を得た。更に食塩２００ｇを添加して十分に分液ロート内で振とうし、液液抽出操作を行った。この時、下層の硫酸水溶液にはニコチンを代表とする成分が移行し、上層の有機層には葉たばこの疎水性有効成分が移行する。十分な静置の後、有機層を取り出し、無水硫酸ナトリウムを約２００ｇ加えて撹拌し、有機層内の脱水操作を行った。ろ紙濾過により不溶物を取り除いた。得られた溶液を参考例１に示す条件でＧＣ／ＭＳ分析した。結果を図１５に示す。図１５に示されるクロマトグラムより、ネオフィタジエン（保持時間３８．９分）の存在、及び前記液液抽出操作によってニコチン（保持時間２４．６分）を代表とするアルカロイド類が除去できることが確認された。

（工程Ｃ１）
上記で得られた有機層（ヘキサン層）に混合比が有機層：メタノール＝２：１（体積比）となるようにメタノールを加え、よく混合した後、冷蔵庫（４度）にて一晩静置し、液液抽出操作を行った。この時、下層のメタノール溶液にはＣＢＴをはじめとするタバコの葉面樹脂成分が移行し、上層のヘキサン溶液にはネオフィタジエンや高級炭化水素類が移行する。抽出操作で得られたヘキサン溶液、メタノール溶液を、参考例１に示す条件でＧＣ／ＭＳ分析した。ヘキサン溶液の結果を図１６に、メタノール溶液の結果を図１７にそれぞれ示す。図１６、１７に示されるクロマトグラムより、本工程によりＣＢＴが選択的に除去されることが確認された。

（工程Ｄ１、Ｅ１及びＦ１）
上記で得られたヘキサン溶液からロータリーエバポレーター（日本ビュッヒ製）を用いて減圧下でヘキサンを取り除き、３．１５ｇの乾固物（収率１．５８％）を得た。該乾固物にメタノールを３００ｍＬ加え、超音波にかけながら乾固物をメタノールに分散、溶解させた。得られた溶液を冷蔵庫（４℃）にて１時間静置した後、沈殿物を除く上澄み液を回収した。該上澄み液を参考例１に示す条件でＧＣ／ＭＳ分析した。結果を図１８に示す。本工程により高級炭化水素類が選択的に除去されることが確認された。

（工程Ｇ１及びＨ１）
上記で得られた上澄み液からロータリーエバポレーター（日本ビュッヒ製）を使用して減圧下でメタノールを取り除いた。得られた乾固物（１．４９ｇ）に対してヘキサン（１５ｍＬ）を添加して溶解させた。得られた溶液から、順相系ＨＰＬＣを用いてネオフィタジエンを単離精製した。ＨＰＬＣとしては１２６０ Ｉｎｆｉｎｉｔｙ（商品名、アジレント・テクノロジー社製）を用いた。ＨＰＬＣの分離条件は以下の通りである。
・カラム：ＹＭＣ社製 ＹＭＣ－Ｐａｃｋ ＳＩＬ／Ｓ－５μｍ／１２ｎｍ
・移動相：Ｈｅｘ（２ｍｉｎ）→Ｈｅｘ：ＡｃＯＥｔ（９５：５）（１ｍｉｎ）→Ｈｅｘ（１２ｍｉｎ）
・流量：７ｍＬ／ｍｉｎ
・検出器：ダイオードアレイ検出器（２２０ｎｍ）
・サンプル注入量：５００μＬ

上記条件で分離後、２２０ｎｍで検出されるシグナルをフラクションコレクターに分画した。分画したフラクションは図１９の破線内に示される部分である。該フラクションを回収し、得られたサンプルを濃縮、乾固することで、無色透明のネオフィタジエン組成物を得た。ＧＣ／ＭＳによる分析で得られたトータルイオンクロマトグラムから、ネオフィタジエンの収率は６５．０％であり、葉たばこから高収率でネオフィタジエンを単離精製できることが確認された。また、得られたネオフィタジエン組成物をメタノールに溶解し、参考例１に示す条件でＧＣ／ＭＳ分析した。結果を図２０に示す。純度を算出すると、ネオフィタジエン組成物の純度は９９．８３％であり、本実施形態に係る方法により高純度でネオフィタジエンを単離精製できることが確認された。

［実施例２］
実施例１で得られたネオフィタジエン組成物（アルコール製剤）を、たばこシート刻に対して１０００質量ｐｐｍ加香した。得られた加香済シート刻を乾燥し、外部加熱型の非燃焼加熱型香味吸引器のたばこロッド部に充填し、評価した。未加香シート刻についても同様に外部加熱型の非燃焼加熱型香味吸引器のたばこロッド部に充填し、評価した。その結果、未加香シート刻より加香済シート刻の方が、たばこ本来の重要香気がよりよく発現されていた。

［実施例３］
実施例１で得られたネオフィタジエン組成物（アルコール製剤）を、たばこ刻に対して５００質量ｐｐｍ加香した。得られた加香済たばこ刻を乾燥し、燃焼型香味吸引器のたばこ含有セグメントに充填し、評価した。未加香たばこ刻についても同様に燃焼型香味吸引器のたばこ含有セグメントに充填し、評価した。その結果、未加香たばこ刻より加香済たばこ刻の方が、たばこ本来の重要香気がよりよく発現されていた。

１０ 加熱装置
１１ ボディ
１２ ヒーター
１３ 金属管
１４ 電池ユニット
１５ 制御ユニット
１６ 凹部
１７ 通気穴
２０ 非燃焼加熱型香味吸引器
２０Ａ たばこロッド部
２０Ｂ 冷却部
２０Ｃ フィルター部
２１ たばこ充填物
２２ 巻紙
２３ 紙管
２４ 穿孔
２５ 第１セグメント
２５ａ 第１充填層
２５ｂ インナープラグラッパー
２６ 第２セグメント
２６ａ 第２充填層
２６ｂ インナープラグラッパー
２７ アウタープラグラッパー
２８ ライニングペーパー
３０ 非燃焼非加熱型香味吸引器
３０Ｄ 電源ユニット
３０Ｅ カートリッジ
３０Ｆ たばこカプセル
ｕ 非吸口端
ｄ 吸口端
１１０ 電池
２００ エアロゾル源
２１０ リザーバ
２２０ 霧化部
２３０ 流路形成体
２４０ 外枠体２４０
２５０ エンドキャップ
２００Ｘ 第１流路
３００ 香味源
３１０ 収容体
３２０ メッシュ体
３３０ 不織布
３４０ キャップ
４００ 燃焼型香味吸引器
４０１ たばこ含有セグメント
４０２ フィルターセグメント
４０３ たばこ充填物
４０４ 巻紙
４０５ チップペーパー部材

Claims (12)

1. 葉たばこからネオフィタジエンを単離精製する方法であって、
   葉たばこに非プロトン性溶媒を添加して抽出操作を行い、抽出残渣を除去して抽出液（Ａ１）を得る工程と、
   前記抽出液（Ａ１）に酸性の水溶液を添加して液液抽出を行い、水層を除去して抽出液（Ｂ１）を得る工程と、
   前記抽出液（Ｂ１）にプロトン性溶媒を添加して液液抽出を行い、プロトン性溶媒の層を除去して抽出液（Ｃ１）を得る工程と、
   前記抽出液（Ｃ１）の溶媒を除去して乾固物（Ｄ１）を得る工程と、
   前記乾固物（Ｄ１）にプロトン性溶媒を添加して前記乾固物（Ｄ１）を溶解させ、溶液（Ｅ１）を得る工程と、
   前記溶液（Ｅ１）中に生成した沈殿物を除去して上澄み液（Ｆ１）を得る工程と、
   前記上澄み液（Ｆ１）の溶媒を非プロトン性溶媒に置換して溶液（Ｇ１）を得る工程と、
   順相系高速液体クロマトグラフィーにより、前記溶液（Ｇ１）からネオフィタジエンを単離精製する工程と、
   を含む、方法。
2. 葉たばこからネオフィタジエンを単離精製する方法であって、
   葉たばこに非プロトン性溶媒を添加して抽出操作を行い、抽出残渣を除去して抽出液（Ａ２）を得る工程と、
   前記抽出液（Ａ２）に酸性の水溶液を添加して液液抽出を行い、水層を除去して抽出液（Ｂ２）を得る工程と、
   前記抽出液（Ｂ２）の溶媒を除去して乾固物（Ｃ２）を得る工程と、
   前記乾固物（Ｃ２）にプロトン性溶媒を添加して前記乾固物（Ｃ２）を溶解させ、溶液（Ｄ２）を得る工程と、
   前記溶液（Ｄ２）中に生成した沈殿物を除去して上澄み液（Ｅ２）を得る工程と、
   前記上澄み液（Ｅ２）に非プロトン性溶媒を添加して液液抽出を行い、プロトン性溶媒の層を除去して溶液（Ｆ２）を得る工程と、
   順相系高速液体クロマトグラフィーにより、前記溶液（Ｆ２）からネオフィタジエンを単離精製する工程と、
   を含む、方法。
3. 前記酸性の水溶液のｐＨが３以下である、請求項１又は２に記載の方法。
4. 前記非プロトン性溶媒が、ヘキサン、ヘプタン及び酢酸エチルからなる群から選択される少なくとも一種の溶媒である、請求項１又は２に記載の方法。
5. 前記プロトン性溶媒がメタノールである、請求項１又は２に記載の方法。
6. 前記葉たばこが、黄色種及びバーレー種の少なくとも一方である、請求項１又は２に記載の方法。
7. 前記溶液（Ｇ１）を得る工程が、前記上澄み液（Ｆ１）に非プロトン性溶媒を添加して液液抽出を行い、プロトン性溶媒の層を除去して前記溶液（Ｇ１）を得る工程である、請求項１に記載の方法。
8. 前記溶液（Ｇ１）を得る工程が、前記上澄み液（Ｆ１）の溶媒を除去した後、非プロトン性溶媒を添加して前記溶液（Ｇ１）を得る工程である、請求項１に記載の方法。
9. 前記単離精製により得られるネオフィタジエン組成物が、ネオフィタジエンを９５質量％以上含む、請求項１又は２に記載の方法。
10. 請求項１又は２に記載の方法により、葉たばこからネオフィタジエンを単離精製してネオフィタジエン組成物を得る工程と、
    前記ネオフィタジエン組成物を基材に添加する工程と、
    前記基材を含む非燃焼加熱型香味吸引器を製造する工程と、
    を含む、非燃焼加熱型香味吸引器の製造方法。
11. 請求項１又は２に記載の方法により、葉たばこからネオフィタジエンを単離精製してネオフィタジエン組成物を得る工程と、
    前記ネオフィタジエン組成物を基材に添加する工程と、
    前記基材を含む非燃焼非加熱型香味吸引器を製造する工程と、
    を含む、非燃焼非加熱型香味吸引器の製造方法。
12. 請求項１又は２に記載の方法により、葉たばこからネオフィタジエンを単離精製してネオフィタジエン組成物を得る工程と、
    前記ネオフィタジエン組成物を基材に添加する工程と、
    前記基材を含む燃焼型香味吸引器を製造する工程と、
    を含む、燃焼型香味吸引器の製造方法。