JP7843362B2 - ＩＬ２変異体－抗体Ｆｃブロック融合タンパク質の医薬組成物及びその使用 - Google Patents

ＩＬ２変異体－抗体Ｆｃブロック融合タンパク質の医薬組成物及びその使用

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Description

本発明は、薬物製剤分野に関し、具体的には、ＩＬ２変異体－抗体Ｆｃブロック融合タンパク質の医薬組成物及びその使用に関する。
インターロイキン２（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－２、ＩＬ２）は、最初にＴ細胞増殖因子（ＴＣＧＦ）として同定され、研究により、ＩＬ－２はその受容体に結合し、Ｔ細胞、ＮＫ細胞などの免疫細胞の増殖及び活性化を活性化することができると判明した。ＩＬ－２受容体は、ＩＬ－２Ｒαサブユニット（ＣＤ２５）、ＩＬ－２Ｒβサブユニット（ＣＤ１２２）及びＩＬ－２Ｒγサブユニット（ＣＤ１３２）を含み、異なるサブユニットの間では、高親和性受容体ＩＬ－２Ｒαβγ、中間親和性受容体ＩＬ－２Ｒβγ、低親和性受容体ＩＬ－２Ｒα又はＩＬ－２Ｒαβを含む異なる親和性の受容体複合体を形成することができる。異なる細胞で発現されるＩＬ－２Ｒサブユニットの種類は異なり、例えば、休止条件での従来のＴ細胞ＣＤ４＋Ｔ、ＣＤ８＋Ｔ表面は、一般的にＩＬ－２受容体β（ＩＬ－２Ｒβ、ＣＤ１２２）、ＩＬ－２受容体γ（ＩＬ－２Ｒγ、ＣＤ１３２）を発現し、ＩＬ－２受容体α（ＩＬ－２Ｒα、ＣＤ２５）をほとんど発現しないのに対し、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）は、ＩＬ－２Ｒβ、ＩＬ－２Ｒγの発現に加えて、ＩＬ－２Ｒαを構成的に高発現する。
現在、研究者は、ＩＬ２又はその変異体によって免疫細胞又は免疫細胞のある亜集団を活性化し、腫瘍又は自己免疫疾患を治療する。例えば、高用量のＩＬ２は悪性黒色腫又は転移性腎細胞癌の治療について承認されており、ＩＬ２ポリエチレングリコール薬物複合体ＮＫＴＲ－３５８は自己免疫疾患の臨床試験の開発について承認されている。新しいＩＬ２変異体を更に開発し、その安定性、生産性を向上する及び／又は特定の種類の受容体複合体への結合能力を変更することは、ＩＬ－２種類の薬物の開発にとって重要な意義を有する。同時に、ＩＬ２は高分子タンパク質に属し、溶液中で粒子や凝集などの安定性の問題が発生しやすい。従って、新規ＩＬ２変異体を得た後、当該新規ＩＬ２変異体に適した製剤システムを開発し、新規ＩＬ２変異体の溶液中での安定性を確保することは重要な意義を有する。
本発明は、医薬組成物及びその製造方法、凍結乾燥製剤及びその製造又は再溶解方法並びに上記再溶解方法により得られた再溶解溶液、対応する製薬的使用、自己免疫疾患を治療する方法並びに製品を提供する。
第１の態様において、本発明は、ＩＬ２変異体と抗体Ｆｃブロックとを含む融合タンパク質、緩衝液、浸透圧調整剤及び界面活性剤を含む医薬組成物であって、
好ましくは、上記ＩＬ２変異体は、野生型ＩＬ２と比較して、少なくともＹ３１Ｖ、Ａ７３Ｌ及びＨ７９Ｑ変異を含み、
好ましくは、上記ＩＬ２変異体は、Ｖ９１Ｒ変異、Ｈ１６Ｅ変異及びＤ２０Ａ変異のうちの１つ又は複数の変異を更に含み、例えば、Ｈ１６Ｅ変異及びＶ９１Ｒ変異を更に含み、
より好ましくは、上記ＩＬ２変異体は、配列番号３、８～１１の何れか１つに示される配列と比較して少なくとも８０％の同一性、例えば少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有する、医薬組成物を提供する。
上記野生型ＩＬ２のアミノ酸配列は配列番号２に示される。
幾つかの具体的な実施形態において、上記融合タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端へ順に、
（１）ＩＬ２変異体、リンカー（ｌｉｎｋｅｒ）及び抗体Ｆｃブロック、或いは
（２）抗体Ｆｃブロック、リンカー及びＩＬ２変異体を含み、
好ましくは、上記融合タンパク質は、抗体Ｆｃブロックの二量体化によりホモ二量体を形成し、
好ましくは、上記リンカーは、（Ｇ４Ｓ）ｎのアミノ酸配列を有し、ｎは、１、２、３、４、５又は６から選ばれ、
好ましくは、上記リンカーは、配列番号１２に示される配列と比較して少なくとも８０％の同一性、例えば少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、
好ましくは、上記抗体ＦｃブロックはＮ２９７Ｇ変異を含み、
好ましくは、上記抗体Ｆｃブロックは、配列番号１３に示される配列と比較して少なくとも８０％の同一性、例えば少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、
より好ましくは、上記融合タンパク質は、配列番号１４～１８に示される配列と比較して少なくとも８０％の同一性、例えば少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。
幾つかの具体的な実施形態において、上記野生型ＩＬ２は、配列番号１又は２に示されるアミノ酸配列を有する。
幾つかの具体的な実施形態において、上記融合タンパク質の濃度は、約１～５０ｍｇ／ｍＬであり、
例えば、上記融合タンパク質の濃度は、約１～４０ｍｇ／ｍＬ、１～３０ｍｇ／ｍＬ、１～２０ｍｇ／ｍＬ、１～１５ｍｇ／ｍＬ、１～１０ｍｇ／ｍＬ、５～５０ｍｇ／ｍＬ、５～４０ｍｇ／ｍＬ、５～３０ｍｇ／ｍＬ、５～２０ｍｇ／ｍＬ、５～１９ｍｇ／ｍＬ、５～１８ｍｇ／ｍＬ、５～１７ｍｇ／ｍＬ、５～１６ｍｇ／ｍＬ、５～１５ｍｇ／ｍＬ、５～１４ｍｇ／ｍＬ、５～１３ｍｇ／ｍＬ、５～１２ｍｇ／ｍＬ、５～１１ｍｇ／ｍＬ、５～１０ｍｇ／ｍＬ、５～９ｍｇ／ｍＬ、５～８ｍｇ／ｍＬ、５～６ｍｇ／ｍＬ、１０～５０ｍｇ／ｍＬ、１０～４０ｍｇ／ｍＬ、１０～３０ｍｇ／ｍＬ、１０～２０ｍｇ／ｍＬ、１０～１５ｍｇ／ｍＬ、２０～５０ｍｇ／ｍＬ、２０～４０ｍｇ／ｍＬ、２０～３０ｍｇ／ｍＬ、３０～５０ｍｇ／ｍＬ、３０～４０ｍｇ／ｍＬ、４０～５０ｍｇ／ｍＬであり、
例えば、上記融合タンパク質の濃度は、約１ｍｇ／ｍＬ、２ｍｇ／ｍＬ、３ｍｇ／ｍＬ、４ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ、６ｍｇ／ｍＬ、７ｍｇ／ｍＬ、８ｍｇ／ｍＬ、９ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、１１ｍｇ／ｍＬ、１２ｍｇ／ｍＬ、１３ｍｇ／ｍＬ、１４ｍｇ／ｍＬ、１５ｍｇ／ｍＬ、１６ｍｇ／ｍＬ、１７ｍｇ／ｍＬ、１８ｍｇ／ｍＬ、１９ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ、２１ｍｇ／ｍＬ、２２ｍｇ／ｍＬ、２３ｍｇ／ｍＬ、２４ｍｇ／ｍＬ、２５ｍｇ／ｍＬ、２６ｍｇ／ｍＬ、２７ｍｇ／ｍＬ、２８ｍｇ／ｍＬ、２９ｍｇ／ｍＬ、３０ｍｇ／ｍＬ、３１ｍｇ／ｍＬ、３２ｍｇ／ｍＬ、３３ｍｇ／ｍＬ、３４ｍｇ／ｍＬ、３５ｍｇ／ｍＬ、３６ｍｇ／ｍＬ、３７ｍｇ／ｍＬ、３８ｍｇ／ｍＬ、３９ｍｇ／ｍＬ、４０ｍｇ／ｍＬ、４１ｍｇ／ｍＬ、４２ｍｇ／ｍＬ、４３ｍｇ／ｍＬ、４４ｍｇ／ｍＬ、４５ｍｇ／ｍＬ、４６ｍｇ／ｍＬ、４７ｍｇ／ｍＬ、４８ｍｇ／ｍＬ、４９ｍｇ／ｍＬ又は５０ｍｇ／ｍＬであり、或いは、上記濃度値の間で構成された濃度の範囲値である。
好ましくは、上記融合タンパク質の濃度は、約２ｍｇ／ｍＬ又は５ｍｇ／ｍＬである。
幾つかの具体的な実施形態において、上記緩衝液は、酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液、クエン酸－クエン酸ナトリウム緩衝液、ヒスチジン－塩酸ヒスチジン、コハク酸－コハク酸ナトリウム、又はリン酸水素二ナトリウム－リン酸二水素ナトリウム緩衝液、好ましくは酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液から選ばれ、及び／又は、
上記緩衝液の濃度は、約１～１００ｍＭであり、
例えば、緩衝液の濃度は、約１～９０ｍＭ、１～８０ｍＭ、１～７０ｍＭ、１～６０ｍＭ、１～５０ｍＭ、１～４０ｍＭ、１～３０ｍＭ、１～２０ｍＭ、１～１０ｍＭ、１０～９０ｍＭ、１０～８０ｍＭ、１０～７０ｍＭ、１０～６０ｍＭ、１０～５０ｍＭ、１０～４０ｍＭ、１０～３０ｍＭ、１０～２０ｍＭ、２０～９０ｍＭ、２０～８０ｍＭ、２０～７０ｍＭ、２０～６０ｍＭ、２０～５０ｍＭ、２０～４０ｍＭ、２０～３０ｍＭ、３０～９０ｍＭ、３０～８０ｍＭ、３０～７０ｍＭ、３０～６０ｍＭ、３０～５０ｍＭ、３０～４０ｍＭ、４０～９０ｍＭ、４０～８０ｍＭ、４０～７０ｍＭ、４０～６０ｍＭ、４０～５０ｍＭ、５０～９０ｍＭ、５０～８０ｍＭ、５０～７０ｍＭ、５０～６０ｍＭ、６０～９０ｍＭ、６０～８０ｍＭ、６０～７０ｍＭ、７０～９０ｍＭ、８０～９０ｍＭであり、
例えば、緩衝液の濃度は、約１ｍＭ、５ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、３５ｍＭ、４０ｍＭ、４５ｍＭ、５０ｍＭ、５５ｍＭ、６０ｍＭ、６５ｍＭ、７０ｍＭ、７５ｍＭ、８０ｍＭ、８５ｍＭ、９０ｍＭ、９５ｍＭ又は１００ｍＭであり、或いは、上記濃度値の間で構成された濃度の範囲値であり、
好ましくは、上記緩衝液の濃度は、約２０ｍＭであり、及び／又は、
上記緩衝液のｐＨ値は、約４．５～８．０であり、
例えば、上記緩衝液のｐＨ値は、約４．５～７．５、４．５～７．０、４．５～６．５、４．５～６．０、４．５～５．５、４．５～５．０、５．０～８．０、５．０～７．５、５．０～７．０、５．０～６．５、５．０～６．０、５．０～５．５、５．５～８．０、６～７．５、６．５～７．５、７．０～７．５又は７．５～８．０であり、
例えば、上記緩衝液のｐＨ値は、約４．５、５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５又は８．０であり、或いは、上記ｐＨ値の間で構成されたｐＨの範囲値であり、
好ましくは、上記緩衝液のｐＨ値は、約５．５である。
幾つかの具体的な実施形態において、上記浸透圧調整剤は、塩、アミノ酸、糖若しくは糖アルコール又はそれらの組み合わせから選ばれ、好ましくは、上記塩は、塩化ナトリウム、塩化カリウム又は塩酸アルギニンから選ばれ、好ましくは、上記アミノ酸は、グリシン、アルギニン、ヒスチジン、グルタミン酸又はメチオニンから選ばれ、好ましくは、上記糖若しくは糖アルコールは、スクロース、トレハロース、マンニトール又はソルビトールから選ばれ、
好ましくは、上記浸透圧調整剤は、塩化ナトリウム、グリシン、塩酸アルギニン、スクロース、トレハロース、マンニトール又はソルビトールから選ばれ、より好ましくはスクロース又は塩酸アルギニンであり、
より好ましくは、上記糖若しくは糖アルコールの濃度は、約１～１５％ｗ／ｖであり、上記塩の濃度は、約５０～２００ｍＭであり、例えば、上記糖若しくは糖アルコールの濃度は、約１～１０％ｗ／ｖ、１～５％ｗ／ｖ又は５～１０％ｗ／ｖであり、例えば、上記糖若しくは糖アルコールの濃度は、約１％ｗ／ｖ、１．５％ｗ／ｖ、２％ｗ／ｖ、２．５％ｗ／ｖ、３％ｗ／ｖ、３．５％ｗ／ｖ、４％ｗ／ｖ、４．５％ｗ／ｖ、５％ｗ／ｖ、５．５％ｗ／ｖ、６％ｗ／ｖ、６．５％ｗ／ｖ、７％ｗ／ｖ、７．５％ｗ／ｖ、８％ｗ／ｖ、８．５％ｗ／ｖ、９％ｗ／ｖ、９．５％ｗ／ｖ、１０％ｗ／ｖ、１０．５％ｗ／ｖ、１１％ｗ／ｖ、１１．５％ｗ／ｖ、１２％ｗ／ｖ、１２．５％ｗ／ｖ、１３％ｗ／ｖ、１３．５％ｗ／ｖ、１４％ｗ／ｖ、１４．５％ｗ／ｖ、１５％ｗ／ｖであり、或いは、上記濃度値の間で構成された濃度の範囲値である。好ましくは４．５％ｗ／ｖ又は８％ｗ／ｖである。
より好ましくは、上記アミノ酸の濃度は、約１～１５％ｗ／ｖであり、例えば、上記アミノ酸の濃度は、約１～１０％ｗ／ｖ、１～５％ｗ／ｖ又は５～１０％ｗ／ｖであり、例えば、上記アミノ酸の濃度は、約１％ｗ／ｖ、１．５％ｗ／ｖ、２％ｗ／ｖ、２．５％ｗ／ｖ、３％ｗ／ｖ、３．５％ｗ／ｖ、４％ｗ／ｖ、４．５％ｗ／ｖ、５％ｗ／ｖ、５．５％ｗ／ｖ、６％ｗ／ｖ、６．５％ｗ／ｖ、７％ｗ／ｖ、７．５％ｗ／ｖ、８％ｗ／ｖ、８．５％ｗ／ｖ、９％ｗ／ｖ、９．５％ｗ／ｖ、１０％ｗ／ｖ、１０．５％ｗ／ｖ、１１％ｗ／ｖ、１１．５％ｗ／ｖ、１２％ｗ／ｖ、１２．５％ｗ／ｖ、１３％ｗ／ｖ、１３．５％ｗ／ｖ、１４％ｗ／ｖ、１４．５％ｗ／ｖ、１５％ｗ／ｖであり、或いは、上記濃度値の間で構成された濃度の範囲値である。好ましくは２％ｗ／ｖである。
より好ましくは、上記塩の濃度は、約５０～２００ｍＭであり、例えば、上記塩の濃度は、約５０～１５０ｍＭ、５０～１００ｍＭ又は１００～１５０ｍＭであり、例えば、上記塩の濃度は、約５０ｍＭ、６０ｍＭ、７０ｍＭ、８０ｍＭ、９０ｍＭ、１００ｍＭ、１１０ｍＭ、１２０ｍＭ、１３０ｍＭ、１４０ｍＭ、１５０ｍＭ、１６０ｍＭ、１７０ｍＭ、１８０ｍＭ、１９０ｍＭ又は２００ｍＭであり、或いは、上記濃度値の間で構成された濃度の範囲値である。好ましくは１４０ｍＭである。
より好ましくは、上記浸透圧調整剤は、スクロース又は塩酸アルギニンである。
幾つかの具体的な実施形態において、上記界面活性剤は、ポリソルベート－８０（ＰＳ－８０）、ポリソルベート２０（ＰＳ－２０）又はポロキサマーであり、及び／又は、
上記界面活性剤の濃度は、約０．０１～０．１％ｗ／ｖであり、例えば、０．０１％ｗ／ｖ～０．０５％ｗ／ｖ、０．０５％ｗ／ｖ～０．１％ｗ／ｖ、０．０２％ｗ／ｖ～０．０８％ｗ／ｖであり、例えば約０．０１％ｗ／ｖ、０．０２％ｗ／ｖ、０．０３％ｗ／ｖ、０．０４％ｗ／ｖ、０．０５％ｗ／ｖ、０．０６％ｗ／ｖ、０．０７％ｗ／ｖ、０．０８％ｗ／ｖ、０．０９％ｗ／ｖ又は１％ｗ／ｖであり、或いは、上記濃度値の間で構成された濃度の範囲値である。好ましくは、約０．０４％ｗ／ｖである。
幾つかの具体的な実施形態において、上記医薬組成物は、上記融合タンパク質、酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液、スクロース及びポリソルベート－８０を含み、好ましくは、上記医薬組成物は、約１～５０ｍｇ／ｍＬの上記融合タンパク質、約１～１００ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液、約１～１５％ｗ／ｖのスクロース及び約０．０１～０．１％ｗ／ｖのポリソルベート－８０を含み、ｐＨ値は、約４．５～６．０であり、
より好ましくは、上記医薬組成物は、約１～３０ｍｇ／ｍＬ、５～３０ｍｇ／ｍＬ、１０～３０ｍｇ／ｍＬ、１０～２５ｍｇ／ｍＬ、１０～２０ｍｇ／ｍＬ、１０～１５ｍｇ／ｍＬ、１５～２０ｍｇ／ｍＬ、１５～３０ｍｇ／ｍＬ又は２０～３０ｍｇ／ｍＬの上記融合タンパク質、約１０～５０ｍＭ又は１０～３０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液、約１～１５％ｗ／ｖ、１～１０％ｗ／ｖ、５～１５％ｗ／ｖ、５～１０％ｗ／ｖ又は１０～１５％ｗ／ｖのスクロース及び約０．０１～０．１％ｗ／ｖ、０．０２～０．０６％ｗ／ｖのポリソルベート－８０を含み、ｐＨ値は、約４．５～６．０又は４．５～５．５であり、
より好ましくは、上記医薬組成物は、約１～１０ｍｇ／ｍＬの上記融合タンパク質、約１０～３０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液、約５～１０％ｗ／ｖのスクロース及び約０．０１～０．１％ｗ／ｖのポリソルベート－８０を含み、ｐＨ値は、約４．５～６．０であり、
より好ましくは、上記医薬組成物は、約２ｍｇ／ｍＬ又は５ｍｇ／ｍＬの上記融合タンパク質、約２０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液、約８％ｗ／ｖのスクロース及び約０．０４％ｗ／ｖのポリソルベート－８０を含み、ｐＨは約５．５である。
幾つかの具体的な実施形態において、上記医薬組成物は、融合タンパク質、酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液、塩酸アルギニン及びポリソルベート－８０を含み、好ましくは、上記医薬組成物は、約１～５０ｍｇ／ｍＬの上記融合タンパク質、約１～１００ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液、約５０～２００ｍＭの塩酸アルギニン及び約０．０１～０．１％ｗ／ｖのポリソルベート－８０を含み、ｐＨ値は、約４．５～６．０であり、
より好ましくは、上記医薬組成物は、約１～３０ｍｇ／ｍＬ、５～３０ｍｇ／ｍＬ、１０～３０ｍｇ／ｍＬ、１０～２５ｍｇ／ｍＬ、１０～２０ｍｇ／ｍＬ、１０～１５ｍｇ／ｍＬ、１５～２０ｍｇ／ｍＬ、１５～３０ｍｇ／ｍＬ又は２０～３０ｍｇ／ｍＬの上記融合タンパク質、約１０～５０ｍＭ又は１０～３０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液、約５０～２００ｍＭ、５０～１５０ｍＭ、１００～１５０ｍＭの塩酸アルギニン及び約０．０１～０．１％ｗ／ｖ、０．０２～０．０６％ｗ／ｖのポリソルベート－８０を含み、ｐＨ値は、約４．５～６．０又は４．５～６．０であり、
より好ましくは、上記医薬組成物は、約１～１０ｍｇ／ｍＬの上記融合タンパク質、約１０～３０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液、約１２０～１５０ｍＭの塩酸アルギニン及び約０．０１～０．１％ｗ／ｖのポリソルベート－８０を含み、ｐＨ値は、約４．５～６．０である。
より好ましくは、上記医薬組成物は、約２ｍｇ／ｍＬ又は５ｍｇ／ｍＬの上記融合タンパク質、約２０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液、約１４０ｍＭの塩酸アルギニン及び約０．０４％ｗ／ｖ又は０．０６％ｗ／ｖのポリソルベート－８０を含み、ｐＨ値は約５．５である。
幾つかの具体的な実施形態において、上記医薬組成物は、静脈、筋肉内又は皮下注射液、好ましくは皮下注射液である。
第２の態様において、本発明は、上記医薬組成物の製造方法であって、上記方法が上記融合タンパク質を上記緩衝液、浸透圧調整剤及び界面活性剤と混合して調製するステップを含み、好ましくは、上記方法が上記融合タンパク質の原液を限外濾過濃縮により上記緩衝液に置換するステップを含む、方法を更に提供する。
第３の態様において、本発明は、上記医薬組成物を凍結乾燥した後に形成される、凍結乾燥製剤を更に提供する。
第４の態様において、本発明は、上記凍結乾燥製剤を製造する方法であって、上記医薬組成物を凍結乾燥するステップを含む、方法を更に提供する。
第５の態様において、本発明は、ＩＬ２変異体を含む抗体Ｆｃブロック融合タンパク質の再溶解溶液を製造する方法であって、上記凍結乾燥製剤を溶媒で再溶解させることを含み、好ましくは、上記溶媒が注射用水である、方法を更に提供する。
第６の態様において、本発明は、上記方法により製造された、ＩＬ２変異体を含む抗体Ｆｃブロック融合タンパク質の再溶解溶液を更に提供する。
第７の態様において、本発明は、自己免疫疾患又は増殖性疾患を治療するための薬物の製造における、上記医薬組成物、凍結乾燥製剤又は再溶解溶液の使用であって、
好ましくは、上記自己免疫疾患は、関節リウマチ、強直性脊椎炎、全身性エリテマトーデス、皮膚エリテマトーデス、ループス腎炎、ＩｇＡ腎症、シェーグレン症候群、多発性筋炎、皮膚筋炎、強皮症、乾癬、尋常性乾癬、円形脱毛症、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、炎症性腸疾患、潰瘍性結腸炎、クローン病、移植片対宿主病、臓器移植拒絶、自己免疫性肝炎、Ｉ型糖尿病、自己免疫性血管炎、湿疹又は喘息から選ばれ、
好ましくは、上記増殖性疾患は、新生物、固形腫瘍、血液腫瘍、悪性腹水又は悪性胸水から選ばれ、ここで、上記固形腫瘍は、良性又は悪性、原発性又は転移性であってもよく、上記悪性固形腫瘍は、癌又は肉腫、例えば、上皮細胞癌、内皮細胞癌、扁平上皮癌、奇形腫、肺腫瘍、パピローマウイルス誘導癌、腺癌、癌腫、黒色腫、血管肉腫、神経芽細胞腫、転移性肺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、乳癌、Ｍｅｒｋｅｌ細胞癌、卵巣癌、腎細胞癌、転移性腎臓癌、頭頸部癌、膀胱癌、非筋層浸潤性膀胱癌であってもよく、上記血液腫瘍は、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫、例えば、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、Ｔ細胞大顆粒リンパ球白血病から選ばれてもよい、
使用を更に提供する。
第８の態様において、本発明は、自己免疫疾患又は増殖性疾患を治療するための上記医薬組成物、凍結乾燥製剤又は再溶解溶液であって、
好ましくは、上記自己免疫疾患は、関節リウマチ、強直性脊椎炎、全身性エリテマトーデス、皮膚エリテマトーデス、ループス腎炎、ＩｇＡ腎症、シェーグレン症候群、多発性筋炎、皮膚筋炎、強皮症、乾癬、尋常性乾癬、円形脱毛症、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、炎症性腸疾患、潰瘍性結腸炎、クローン病、移植片対宿主病、臓器移植拒絶、自己免疫性肝炎、Ｉ型糖尿病、自己免疫性血管炎、湿疹又は喘息から選ばれ、
好ましくは、上記増殖性疾患は、新生物、固形腫瘍、血液腫瘍、悪性腹水又は悪性胸水から選ばれ、ここで、上記固形腫瘍は、良性又は悪性、原発性又は転移性であってもよく、上記悪性固形腫瘍は、癌又は肉腫、例えば、上皮細胞癌、内皮細胞癌、扁平上皮癌、奇形腫、肺腫瘍、パピローマウイルス誘導癌、腺癌、癌腫、黒色腫、血管肉腫、神経芽細胞腫、転移性肺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、乳癌、Ｍｅｒｋｅｌ細胞癌、卵巣癌、腎細胞癌、転移性腎臓癌、頭頸部癌、膀胱癌、非筋層浸潤性膀胱癌であってもよく、上記血液腫瘍は、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫、例えば、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、Ｔ細胞大顆粒リンパ球白血病から選ばれてもよい、
上記医薬組成物、凍結乾燥製剤又は再溶解溶液を更に提供する。
第９の態様において、本発明は、自己免疫疾患を治療する方法であって、ここで、上記方法は有効量の上記医薬組成物又は再溶解溶液を対象に投与することを含み、好ましくは、上記自己免疫疾患は、関節リウマチ、強直性脊椎炎、全身性エリテマトーデス、皮膚エリテマトーデス、ループス腎炎、ＩｇＡ腎症、シェーグレン症候群、多発性筋炎、皮膚筋炎、強皮症、乾癬、尋常性乾癬、円形脱毛症、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、炎症性腸疾患、潰瘍性結腸炎、クローン病、移植片対宿主病、臓器移植拒絶、自己免疫性肝炎、Ｉ型糖尿病、自己免疫性血管炎、湿疹又は喘息から選ばれる、
方法を更に提供する。
幾つかの具体的な実施形態において、上記有効量は、０．００１～１０ｍｐｋであり、例えば０．００１ｍｐｋ、０．００２ｍｐｋ、０．００３ｍｐｋ、０．００４ｍｐｋ、０．００５ｍｐｋ、０．００６ｍｐｋ、０．００７ｍｐｋ、０．００８ｍｐｋ、０．００９ｍｐｋ、０．０１ｍｐｋ、０．０２ｍｐｋ、０．０３ｍｐｋ、０．０４ｍｐｋ、０．０５ｍｐｋ、０．０６ｍｐｋ、０．０７ｍｐｋ、０．０８ｍｐｋ、０．０９ｍｐｋ、０．１ｍｐｋ、０．２ｍｐｋ、０．３ｍｐｋ、０．４ｍｐｋ、０．５ｍｐｋ、０．６ｍｐｋ、０．７ｍｐｋ、０．８ｍｐｋ、０．９ｍｐｋ、１ｍｐｋ、２ｍｐｋ、３ｍｐｋ、４ｍｐｋ、５ｍｐｋ、６ｍｐｋ、７ｍｐｋ、８ｍｐｋ、９ｍｐｋ又は１０ｍｐｋであり、或いは上記有効量の間で構成された有効量の範囲値である。
第１０の態様において、本発明は、増殖性疾患を治療する方法であって、ここで、上記方法は有効量の上記医薬組成物又は再溶解溶液を対象に投与することを含み、好ましくは、上記増殖性疾患は、新生物、固形腫瘍、血液腫瘍、悪性腹水又は悪性胸水から選ばれ、ここで、上記固形腫瘍は、良性又は悪性、原発性又は転移性であってもよく、上記悪性固形腫瘍は、癌又は肉腫、例えば、上皮細胞癌、内皮細胞癌、扁平上皮癌、奇形腫、肺腫瘍、パピローマウイルス誘導癌、腺癌、癌腫、黒色腫、血管肉腫、神経芽細胞腫、転移性肺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、乳癌、Ｍｅｒｋｅｌ細胞癌、卵巣癌、腎細胞癌、転移性腎臓癌、頭頸部癌、膀胱癌、非筋層浸潤性膀胱癌であってもよく、上記血液腫瘍は、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫、例えば、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、Ｔ細胞大顆粒リンパ球白血病から選ばれてもよい、
方法を更に提供する。
第１１の態様において、本発明は、上記医薬組成物、凍結乾燥製剤又は再溶解溶液を含有する容器を含む、製品を更に提供する。
用語の定義及び説明
本発明が別段定義されない限り、本発明に関連する科学用語及び技術用語は、当業者によって理解される意味を有する。
別段説明しない限り、本発明に記載の「ＩＬ２」又は「ＩＬ－２」という用語は、霊長類（例えば、ヒト）及びげっ歯類（例えば、マウス及びラット）などの哺乳動物、並びに家畜又は農業哺乳動物を含む、任意の脊椎動物に由来する任意の天然又は組換えＩＬ－２を指す。本発明に記載の「ＩＬ２」又は「ＩＬ－２」は、不完全にプロセシングされたＩＬ－２（例えば、Ｎ末端シグナルペプチドを含むＩＬ－２）、及び細胞内で完全にプロセシングされたＩＬ－２を生成する任意の形態を含む。本発明に記載の「ＩＬ２」又は「ＩＬ－２」は、剪断変異体又は対立遺伝子変異体などのＩＬ－２の天然変異体及び断片を更に含む。本発明に記載の「ＩＬ２」又は「ＩＬ－２」は、遺伝子工学によって人工的に改変されたＩＬ－２変異体などの非天然に存在する変異体を更に含む。
「野生型ＩＬ－２」は、ＩＬ－２変異体の各変異アミノ酸位置において野生型アミノ酸のＩＬ－２形態が保持されていること以外、他の点ではＩＬ－２変異体と同じである。例示的には、ＩＬ－２変異体が不完全にプロセシングされたＩＬ－２である場合、当該変異体の野生型形態は不完全にプロセシングされた成熟ＩＬ－２であり、ＩＬ－２変異体が完全にプロセシングされたＩＬ－２である場合、当該変異体の野生型形態は完全にプロセシングされたＩＬ－２であり、ＩＬ－２変異体がＩＬ－２の切断形態である場合、当該変異体の野生型形態は野生型配列を有する対応するＩＬ－２切断形態である。例示的には、本発明に記載の「野生型ＩＬ－２」は、以下に示されるアミノ酸配列を有することができる。
ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＦＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＸＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１）であり、ここで、１２５位のアミノ酸残基「Ｘ」はＣ、Ｓ、Ａ又はＶを表す。
本発明において、「変異」という用語は、アミノ酸の置換、欠失、挿入又はそれらの任意の組み合わせを含む。本発明に記載の「変異」は、部位特異的変異導入、ＰＣＲ、遺伝子合成などの方法を含むがこれらに限定されない、当該分野において公知の遺伝学的又は化学的方法を使用して生成することができる。
本発明に記載のＩＬ－２変異体の「変異部位」番号は、配列番号１に示される「野生型ＩＬ－２」の１位のアミノ酸残基Ａからカウントする。例示的には、本発明の「Ｙ３１変異」は、配列番号１に示される野生型ＩＬ－２の３１位のアミノ酸残基（Ｔｙｒ、Ｙ）で生じるＩＬ－２変異体の変異を指す。例示的には、本発明の「Ｙ３１Ｖ変異」は、配列番号１に示される野生型ＩＬ－２の３１位のアミノ酸残基がＹ（Ｔｙｒ）からＶ（Ｖａｌ）に変異するＩＬ－２変異体を指す。
本発明において、変異部位間に使用される「／」という用語は、「及び」の意味を表し、「／」前後の変異が同一のＩＬ－２変異体に同時に存在することを指す。例示的には、「Ｙ３１／Ａ７３／Ｈ７９」は、同一のＩＬ－２変異体がＹ３１部位、Ａ７３部位及びＨ７９部位で同時に変異することを指し、「Ｙ３１Ｖ／Ａ７３Ｌ／Ｈ７９Ｑ」は、同一のＩＬ－２変異体にＹ３１Ｖ、Ａ７３Ｌ及びＨ７９Ｑ変異が同時に存在することを指す。
本発明において、「融合タンパク質」（ｆｕｓｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ）という用語は、遺伝子組換え方法、化学的方法又は他の適切な方法によって２つ又は複数の遺伝子のコード領域を連結し、同一の調節配列の制御下で遺伝子組換えを発現させることによって得られるタンパク質産物を指す。本発明の融合タンパク質において、２つ又は複数の遺伝子のコード領域の間は、リンカーペプチドをコードする配列によって、１つ又は複数の位置で融合することができる。リンカーペプチドは、本発明の融合タンパク質を構築するために使用することができる。
本発明において、「リンカー（Ｌｉｎｋｅｒ）」という用語は、本発明において、ＩＬ－２を別のタンパク質分子又はタンパク質断片と連結して、タンパク質の正確なフォールディング及び安定性を保証するために使用されるペプチドを指す。上記の他の分子は、抗体Ｆｃブロックを含むが、これらに限定されない。本発明の「リンカー」は、好ましくは（ＧＧＧＧＳ）ｎであり、ここで、ｎは、０、１、２、３、４、５又は６であってもよい。
本発明において、「抗体Ｆｃブロック」という用語は、免疫グロブリンの鎖の定常領域、特に抗原結合活性を有さず、抗体分子がエフェクター分子又は細胞と相互作用する部位である免疫グロブリンの重鎖定常領域のカルボキシ末端又はその一部を指す。本発明に記載の「Ｆｃ」は、ヒト又は非ヒト哺乳動物由来の任意のＦｃ又はその変異体であってもよい。例えば、免疫グロブリンＦｃは、重鎖ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ＣＨ４の２つ又はそれ以上のドメインと免疫グロブリンヒンジ領域との組み合わせを含んでもよい。Ｆｃは、異なる種、好ましくはヒトの免疫グロブリンに由来することができる。重鎖定常領域のアミノ酸配列によって、免疫グロブリンは異なる種類に分けることができ、主にＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭという５種類の免疫グロブリンがある。そのうちの幾つかは、更に、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ－１、ＩｇＧ－２、ＩｇＧ－３、ＩｇＧ－４、ＩｇＡ－１及びＩｇＡ－２に分けることができる。「Ｆｃ」は、好ましくは、少なくとも１つの免疫グロブリンヒンジ領域、並びにＩｇＧのＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む。より好ましくは、ＩｇＧ１の１つのＣＨ２ドメイン、１つのＣＨ３ドメイン及び１つの免疫グロブリンヒンジ領域を含み、ヒンジ領域の開始アミノ酸位置が変動できる。別段説明しない限り、本発明に記載のＦｃ、定常領域又は抗体におけるアミノ酸残基は、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ、１９９１に記載される、ＥＵインデックスとも呼ばれるＥＵ番号付けシステムに従って番号付けられる。
本発明において、「医薬組成物」という用語は、１種又は複数種の本発明に記載のＩＬ－２変異体、融合タンパク質、核酸断片、ベクター又は宿主細胞を含む混合物を指す。上記混合物は、その薬学的に許容されるキャリア、希釈剤又はアジュバントを含むがこれらに限定されない、他の成分を更に含む。本発明に記載の医薬組成物は、生体への投与を促進し、活性成分の吸収を役立って生物活性を発揮させることを目的とする。
本発明において、「治療」という用語は、自己免疫疾患（例えば全身性エリテマトーデス）などの治療対象における望ましくない生理学的変化又は病変の進行を予防、緩和（減少）することを目的とする、外科手術又は薬物処置（ｓｕｒｇｉｃａｌ ｏｒ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）を指す。有益又は望ましい臨床結果には、症状の軽減、疾患程度の低下、安定した疾患状態（即ち、悪化しないこと）、疾患進行の遅延又は減速、疾患状態の改善又は緩和、及び寛解（部分的寛解でも全体的寛解でも）を含むが、これらに限定されず、検出可能か検出不能かを問わない。治療を必要とする対象には、すでに病症又は疾患を患っている対象、及び病症又は疾患を患いやすい対象、或いは病症又は疾患を予防すべき対象が含まれる。減速、軽減、低下、緩和、寛解などの用語に言及する場合、解消、消失、非発生などの状況も意味として含まれる。
本発明において、「対象」という用語は、本発明に記載の特定の疾患又は病症（例えば自己免疫疾患）の治療を受けている生体を指す。対象及び患者の実例は、ヒト、霊長類、ブタ、ヤギ、ウサギ、ハムスター、ネコ、イヌ、モルモット、ウシ又は他のウシ科ファミリーのメンバー、ヒツジ及びウマなどの、疾患又は病症の治療を受ける哺乳動物を含む。
本発明において、「有効量」という用語は、細胞、組織又は対象に単独で、又は別の治療剤と組み合わせて投与された場合に、疾患の病症又は当該疾患の進行を予防又は寛解するのに有効な治療剤の量を指す。「有効量」はまた、症状を寛解する、例えば、関連する医学的状態を治療、治癒、防止若しくは寛解する、又はそのような状態の速度増加を治療、治癒、防止若しくは寛解するのに十分な化合物の量を指す。活性成分を単独で個体に投与する場合、治療有効用量とは当該成分の量だけである。組み合わせが使用される場合、治療有効用量とは、組み合わせ投与、連続投与又は同時投与に関係なく、治療効果を生じさせる活性成分の組み合わせ用量を指す。
本発明において、「自己免疫疾患」という用語は、対象がそれ自体の細胞、組織及び／又は器官に対して免疫応答を起こすことによって引き起こされる細胞、組織及び／又は器官の損傷を特徴とする対象の病症を指す。例示的には、自身免疫疾患は、関節リウマチ、強直性脊椎炎、全身性エリテマトーデス、皮膚エリテマトーデス、ループス腎炎、ＩｇＡ腎症、シェーグレン症候群、多発性筋炎、皮膚筋炎、強皮症、乾癬、尋常性乾癬、円形脱毛症、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、炎症性腸疾患、潰瘍性結腸炎、クローン病、移植片対宿主病、臓器移植拒絶、自己免疫性肝炎、Ｉ型糖尿病、自己免疫性血管炎、湿疹又は喘息を含むが、これらに限定されない。
本発明において、「増殖性疾患」という用語は、細胞又は組織の成長が調節されず、及び／又は異常な成長によって引き起こされる、癌性であってもなくてもよい望ましくない病状又は疾患の病状の発生を指す。これは、新生物、固形腫瘍、血液腫瘍、悪性腹水又は悪性胸水を含むが、これらに限定されない。本発明において、「固形腫瘍」は、良性（ｂｅｎｉｇｎ）又は悪性（ｍａｌｉｇａｎｔ）、原発性（Ｐｒｉｍａｒｙ）又は移転性（ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ）であってもよく、悪性固形腫瘍は、癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ）又は肉腫（ｓａｒｃｏｍａｓ）であってもよい。例示的には、本発明において、「固形腫瘍」は、上皮細胞癌、内皮細胞癌、扁平上皮癌、奇形腫、肺腫瘍、パピローマウイルス誘導癌、腺癌、癌腫、黒色腫、血管肉腫、神経芽細胞腫、転移性肺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、乳癌、Ｍｅｒｋｅｌ細胞癌、卵巣癌、腎細胞癌、転移性腎臓癌、頭頸部癌、膀胱癌、非筋肉層浸潤性膀胱癌を含むが、これらに限定されない。例示的には、本発明において、「血液腫瘍」は、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫、例えばＢ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、Ｔ細胞大顆粒リンパ球白血病を含むが、これらに限定されない。
本発明において、「ＩＬ－２受容体αサブユニット」（ＩＬ－２Ｒα）という用語は「ＣＤ２５」とも呼ばれ、霊長類（例えば、ヒト）及びげっ歯類（例えば、マウス及びラット）などの哺乳動物を含む、任意の脊椎動物に由来する任意の天然ＩＬ－２受容体αサブユニット又はその変異体を指し、「全長」のプロセシングされていないＩＬ－２受容体αサブユニット及び細胞内でプロセシングされた任意の形態のＩＬ－２受容体αサブユニットを含み、剪断変異体又は対立遺伝子変異体などの天然に存在するＩＬ－２受容体αサブユニット変異体を更に含み、天然ＩＬ－２受容体αサブユニットに基づいて人工的に改変された変異体を更に含む。
本発明において、「ＩＬ－２受容体βサブユニット」（ＩＬ－２Ｒβ）という用語は「ＣＤ１２２」とも呼ばれ、霊長類（例えば、ヒト）及びげっ歯類（例えば、マウス及びラット）などの哺乳動物を含む、任意の脊椎動物に由来する任意の天然ＩＬ－２受容体βサブユニット又はその変異体を指し、「全長」のプロセシングされていないＩＬ－２受容体βサブユニット及び細胞内でプロセシングされた任意の形態のＩＬ－２受容体βサブユニットを含み、剪断変異体又は対立遺伝子変異体などの天然に存在するＩＬ－２受容体βサブユニット変異体を更に含み、天然ＩＬ－２受容体βサブユニットに基づいて人工的に改変された変異体を更に含む。
本発明において、「ＩＬ－２受容体γサブユニット」（ＩＬ－２Ｒγ）という用語は「ＣＤ１３２」とも呼ばれ、霊長類（例えば、ヒト）及びげっ歯類（例えば、マウス及びラット）などの哺乳動物を含む、任意の脊椎動物に由来する任意の天然ＩＬ－２受容体γサブユニット又はその変異体を指し、「全長」のプロセシングされていないＩＬ－２受容体γサブユニット及び細胞内でプロセシングされた任意の形態のＩＬ－２受容体γサブユニットを含み、剪断変異体又は対立遺伝子変異体などの天然に存在するＩＬ－２受容体γサブユニット変異体を更に含み、天然ＩＬ－２受容体γサブユニットに基づいて人工的に改変された変異体を更に含む。
本発明において、「Ｔｒｅｇ」という用語は「制御性Ｔ細胞」又は「Ｔ制御細胞」とも呼ばれ、他のＴ細胞の応答を阻害することができる特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞の種類を指す。Ｔｒｅｇは、ＩＬ－２受容体αサブユニット（ＣＤ２５）及び転写因子フォークヘッドボックスＰ３（Ｆｏｒｋｈｅａｄ ｂｏｘ ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐ３、ＦＯＸＰ３）を発現することを特徴とし、且つ抗原に対する末梢自己寛容の誘導及び維持において重要な役割を果たす。Ｔｒｅｇは、その機能と発達、及びその阻害特性の誘導を実現するために、ＩＬ－２を必要とする。
本明細書に使用されるように、「パーセント（％）配列一致性」及び「パーセント（％）配列同一性」という用語は交換可能であり、最大パーセント配列一致性を達成するために配列をアラインし、（必要に応じて）ギャップを導入した（例えば、最適なアラインメントのために、候補配列と参照配列の一方又は両方にギャップを導入することができ、比較の目的のために、非相同配列を無視することができる）後、候補配列のアミノ酸（又はヌクレオチド）残基が、参照配列のアミノ酸（又はヌクレオチド）残基と同一であるパーセントを指す。パーセント配列同一性を決定するという目的のために、当業者に周知の種々の方法でアラインメントを実現させることができ、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＡＬＩＧＮ又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＩｉ）ソフトウェアなどの公衆に取得可能なコンピュータソフトウェアを使用する。当業者は、比較される配列の全長範囲内に最大アラインメントを実現する必要がある任意のアルゴリズムを含み、測定アラインメントに用いられる適当なパラメータを決定することができる。例えば、候補配列との比較のためにアラインメントされた参照配列は、候補配列が候補配列の全長又は候補配列の連続的なアミノ酸（又はヌクレオチド）残基の選択された部分で５０％～１００％の配列同一性を呈することを示すことができる。比較の目的でアラインメントされた候補配列の長さは、例えば、参照配列の長さの少なくとも３０％（例えば、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は１００％）であってもよい。候補配列中の位置が、参照配列中の対応する位置と同じアミノ酸（又はヌクレオチド）残基によって占められている場合、これらの分子は、その位置において同一である。
マウス体重変化曲線：ＤＴＨモデルマウスにＣｓＡ、ＡＭＧ５９２及びＩＬ２－１－２注射液を投与した後の体重変化曲線であり、各群１０匹のマウスである。データポイントは群内動物の平均体重を表し、誤差線は標準誤差（ＳＥＭ）を表す。 マウス体重変化率曲線：ＤＴＨモデルマウスにＣｓＡ、ＡＭＧ５９２及びＩＬ２－１－２注射液を投与した後の体重変化率である。各群１０匹のマウスである。データポイントは群内動物の平均体重変化率を表し、誤差線は標準誤差（ＳＥＭ）を表す。 ＤＴＨモデルマウス耳片の厚さの変化曲線：ＤＴＨモデルマウスにＣｓＡ、ＡＭＧ５９２及びＩＬ２－１－２注射液を投与した後の耳片の厚さの変化曲線である。各群１０匹のマウスである。データポイントは群内平均耳片の厚さの変化値を表し、誤差線は標準誤差（ＳＥＭ）を表す。＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１：ｖｅｈｉｃｌｅ ｃｏｎｔｒｏｌ群との比較である。 ＤＴＨモデルマウスにＣｓＡ、ＡＭＧ５９２及びＩＬ２－１－２注射液を投与した後の耳片の厚さの変化率曲線である。各群１０匹のマウスである。データポイントは群内平均耳片の厚さの変化値を表し、誤差線は標準誤差（ＳＥＭ）を表す。＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１：ｖｅｈｉｃｌｅ ｃｏｎｔｒｏｌ群との比較である。
以下、具体的な実施例を参照しながら本発明を更に説明するが、本発明の利点及び特徴は説明と共により明らかになるであろう。実施例において具体的な条件が明記されていないものは、一般的な条件又はメーカーが推奨する条件に従う。使用される試薬又は機器において生産メーカーが明記されていないものは、何れも市場で入手できる一般的な製品である。
本発明の実施例は単に例示的なものであり、本発明の範囲を限定するものではない。本発明の精神及び範囲から逸脱することなく、本発明の技術案の詳細と形態を修正又は置換することができるが、これらの修正及び置換はすべて本発明の保護範囲内にあることを当業者は理解すべきである。
実施例１～５の説明について
１．限外濾過濃縮液の交換
特に説明しない限り、以下の実施例における限外濾過濃縮液の交換は、対応する限外濾過チューブにタンパク質原液を加え、遠心分離機を用いて限外濾過濃縮を行い、タンパク質が遮断され、タンパク質原液の緩衝液が限外濾過膜から通り抜けてタンパク質濃縮の目的を達成し、次に置換すべき目標溶液を加え、元のタンパク質原液の緩衝液が希釈され、限外濾過濃縮を継続し、濃縮完了後に置換すべき目標溶液を加え続け、限外濾過濃縮を継続し、液体の置換が完了するまで操作を繰り返すことを意味する。
２．英語の略語及びその意味
特に説明しない限り、下記の英語の略語は、以下の表に示す意味を有する。
３．実施例５に関するＩＬ２変異体融合タンパク質の結合活性検出方法
（１）コーティング：ｐＨ９．６の炭酸塩緩衝液（５０ｍＭのＮａ２ＣＯ３－ＮａＨＣＯ３、ｐＨ９．６）をコーティング液として選択し、ヒトＩＬ－２Ｒａｌｐｈａタンパク質（Ａｃｒｏ、ＩＬＡ－Ｈ５２Ｈ９）をコーティング液で０．５μｇ／ｍＬに希釈し、１００μＬ／ウェルでマイクロプレートリーダーに加え、２～８℃で一晩（＞１６ｈ）コーティングした。
（２）ブロッキング：プレートを洗浄した後、３％のＢＳＡを含有するＰＢＳを３００μＬ／ウェルで加え、３７℃で１ｈブロッキングした後、プレートを洗浄した。
（３）試料の希釈：２００ｎｇ／ｍＬを開始濃度としてＩＬ２変異体融合タンパク質を希釈した（詳しくは表２に示される）。
（４）１００μＬ／ウェルでＩＬ２変異体融合タンパク質の希釈試料を加え、３７℃で４０～８０ｍｉｎインキュベートした。
（５）洗浄後、１：１００００（ｖ／ｖ）で希釈したマウス抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ γ－ＨＲＰ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ、２０９－０３５－０９８）を１００μＬ／ウェルで加え、３７℃で４０～８０ｍｉｎインキュベートした。
（６）洗浄後、発色液ＴＭＢ（Ｔｈｅｒｍｏ、３４０２９）を１００μＬ／ウェルでマイクロプレートリーダーに加え、室温で暗所で５～９ｍｉｎ反応させた後、１００μＬ／ウェルで１Ｍの硫酸を加えて反応を停止させ、２ｍｉｎ以内にマイクロプレートリーダーを用いて読み取り、測定波長を４５０ｎｍとし、参照波長を６３０ｎｍとした。
（７）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓマイクロプレートリーダーに付属したソフトウェアＳｏｆｔＭａｘ Ｐｒｏ若しくはＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ又は同型分析ソフトウェアを用いて、４パラメータ回帰によって試供品及び対照品のＥＣ５０をそれぞれ計算した。下記の式によって、試供品の相対活性を計算した：試供品の相対結合活性（％）＝対照品ＥＣ５０／試供品ＥＣ５０×１００。試供品の相対活性が７０％～１３０％の範囲の間である場合、合格として判定した。
実施例１ ＩＬ２変異体融合タンパク質の製造及び精製
１．ＩＬ２変異体融合タンパク質の設計
（１）多種類のアルゴリズムを用いて、ＩＬ２の熱安定性を向上させる変異部位Ｙ３１Ｖ／Ａ７３Ｌ／Ｈ７９Ｑを設計した。
（２）多種類のアルゴリズムを用いて、ＩＬ２とＩＬ２受容体βγサブユニット複合体との相互作用を低下させる機能性変異部位Ｖ９１Ｒ、Ｈ１６Ｅ、Ｄ２０Ａ又はＨ１６Ｅ／Ｖ９１Ｒを設計した。
（３）上記の熱安定性変異と機能性変異とを組み合わせ、以下の組み合わせ変異をそれぞれ含むＩＬ２変異体を得た。
Ｙ３１Ｖ／Ａ７３Ｌ／Ｈ７９Ｑ／Ｖ９１Ｒ、
Ｙ３１Ｖ／Ａ７３Ｌ／Ｈ７９Ｑ／Ｈ１６Ｅ、
Ｙ３１Ｖ／Ａ７３Ｌ／Ｈ７９Ｑ／Ｄ２０Ａ、
Ｙ３１Ｖ／Ａ７３Ｌ／Ｈ７９Ｑ／Ｈ１６Ｅ／Ｖ９１Ｒ。
半減期を延長するために、リンカーを介してＩＬ２熱安定性変異体又は組み合わせ変異体をＦｃに更に連結し、融合タンパク質（以下、ＩＬ２変異体融合タンパク質と呼ばれる）を構成し、各要素及びその全体配列は表３に示される。
野生型ＩＬ２融合タンパク質（配列番号１９）と比較して、本発明に記載のＩＬ２変異体融合タンパク質は以下の特徴を有する。
（１）ＤＳＦ法により分析すると、野生型ＩＬ２融合タンパク質と比較して、熱安定性変異を含むＩＬ２変異体融合タンパク質のＴｍ値は何れも上昇した。ＩＬ２変異体１－リンカー－ＦｃのＴｍ値は約８～９℃上昇し、ＩＬ２変異体１－２－リンカー－ＦｃのＴｍ値は１２℃以上上昇し、ＩＬ２変異体１－３－リンカー－ＦｃのＴｍ値は８～９℃上昇し、ＩＬ２変異体１－４－リンカー－ＦｃのＴｍ値は約９～１０℃上昇し、ＩＬ２変異体１－５－リンカー－ＦｃのＴｍ値は約１１～１２℃上昇した。
（２）野生型ＩＬ２融合タンパク質と比較して、細胞表面のヒトＩＬ２受容体βγ二量体に対する機能性変異を含むＩＬ２変異体融合タンパク質の結合活性が阻害され、ＣＤ４＋ＣＤ２５－ＦｏｘＰ３－Ｔ細胞又はＣＤ８＋Ｔ細胞内のＳＴＡＴ５リン酸化レベルの活性化が顕著に低下し、Ｔｒｅｇ細胞増殖に対する影響は野生型ＩＬ２融合タンパク質と類似し、ＮＫ細胞に対する増殖レベルが顕著に低下した。
（３）野生型ＩＬ２融合タンパク質又はＦｃ－リンカー－ＩＬ２変異体６と比較して、ＩＬ２変異体１－２－リンカー－Ｆｃは薬効（ＤＴＨモデルマウス及びＧＶＨＤマウスモデル）においてより優れた治療効果が示され、薬物動態においてより高い曝露量及び生物学的利用能、並びにより長い半減期が示され、ここで皮下投与の表現がより明らかであった。
（４）ＩＬ２変異体１－２－リンカー－Ｆｃ（Ｙ３１Ｖ／Ａ７３Ｌ／Ｈ７９Ｑ／Ｖ９１Ｒ、配列番号１５）を後続のプロセス開発のために選択した。
２．ＩＬ２変異体融合タンパク質の発現
ＩＬ２変異体融合タンパク質は、ＣＨＯを宿主細胞として発現させ、ＯＰＭ－ＣＨＯ ＣＤ０６３培地（メーカー：ＯＰＭ、カタログ番号：Ｃ４８３２６０）で培養し、培養周期は１４日を超えず、反応器の制御パラメータを、ｐＨ６．８～７．２、溶存酸素（ＤＯ）２０％～８０％、回転速度７５ＲＰＭ～８０ＲＰＭ、初期培養温度３６．０℃～３７．０℃とし、６日目まで培養した場合に収穫まで培養温度を３４．０±０．５℃に低下させた。
３．ＩＬ２変異体融合タンパク質の精製
ＩＬ２変異体融合タンパク質の精製は、マルチステップクロマトグラフィー、濃縮及び濾過ユニット操作を用いて、ＩＬ２変異体融合タンパク質を順に精製した。発酵収穫液の上清はＰｒｏｔｅｉｎ Ａアフィニティークロマトグラフィー（ＡＴ ＰｒｏｔｅｉｎＡ Ｄｉａｍｏｎｄ Ｐｌｕｓ）により捕捉された。捕捉後のＩＬ２変異体融合タンパク質溶液を低ｐＨインキュベーションで処理して潜在的なウイルスを不活性化した。ＩＬ２変異体融合タンパク質溶液を中和した後、沈殿物を深層濾過によって除去した。次に、順に陽イオン交換クロマトグラフィー（Ｄｉａｍｏｎｄ Ｓ）を行ってＨＣＰ及び凝集物などの不純物を除去し、並びに陰イオン交換クロマトグラフィー（ＰＯＲＯＳ ５０ＨＱ）を行って、ＨＣＤ、ＨＣＰ及び脱落Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａなどの不純物を除去した。内因性と外因性の潜在的なウイルスを除去するためにナノ濾過膜パックによって濾過した。次に、限外濾過膜パックでＩＬ２変異体融合タンパク質溶液を濃縮し、緩衝液で置換した。最後に、添加物を加えて濃度を調整し、濾過し、ＩＬ２変異体融合タンパク質原液を得た。後続の実施例において、限外濾過濃縮液の交換処理により、原液を対応する製剤系に置換した。
実施例２～５ 実施例１におけるＩＬ２変異体１－２－リンカー－Ｆｃ（Ｖ９１Ｒ／Ｙ３１Ｖ／Ａ７３Ｌ／Ｈ７９Ｑ、配列番号１５）の安定性を維持する製剤処方の開発
実施例２ 緩衝系のスクリーニング
１．スクリーニング方法
（１）１２種類の異なる緩衝液処方系Ｆ１～Ｆ１２を設計し、具体的な処方系は表４に示される。（２）限外濾過濃縮液の交換処理により、実施例１で得られたＩＬ２変異体融合タンパク質原液をＦ１－Ｆ１２に置換し、タンパク質の濃度を２ｍｇ／ｍＬに調整した。（３）２５℃加速安定性試験及び４０℃加速安定性試験により、１２種類の緩衝系におけるＩＬ２変異体融合タンパク質の安定性を総合的に考察し、後続の添加物及び界面活性剤のスクリーニングのために最適な緩衝系をスクリーニングした。考察指標は、外観、ｐＨ値、タンパク質の濃度、純度（ＳＥＣ－ＨＰＬＣ）、ＣＥ－ＳＤＳ（ＮＲ）、ＣＥ－ＳＤＳ（Ｒ）、動的光散乱（ＤＬＳ）を含む。考察方法の詳細は表４に示された。
２．緩衝系のスクリーニング結果
緩衝系のスクリーニングの主な結果を以下にまとめて示された。
３．考察結果
（１）外観優劣順位：Ｆ１、Ｆ３＞Ｆ２、Ｆ７、Ｆ８、Ｆ９、Ｆ１１＞Ｆ１０、Ｆ１２＞Ｆ４、Ｆ５、Ｆ６。
（２）ｐＨ値：１２種類の緩衝系のｐＨ値が安定的であり、顕著な変化はなかった。
（３）タンパク質濃度優劣順位：Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３、Ｆ６、Ｆ７、Ｆ８、Ｆ９、Ｆ１１、Ｆ１２＞Ｆ５＞Ｆ４、Ｆ１０。
（４）ＤＬＳ優劣順位：Ｆ１、Ｆ５、Ｆ９＞Ｆ６、Ｆ７、Ｆ８＞Ｆ３、Ｆ４、Ｆ１０、Ｆ１１、Ｆ１２＞Ｆ２。
（５）ＳＥＣ－ＨＰＬＣ優劣順位：Ｆ２、Ｆ３、Ｆ５、Ｆ６、Ｆ７、Ｆ８、Ｆ９＞Ｆ４、Ｆ１０＞Ｆ１＞Ｆ１１、Ｆ１２。
（６）ＣＥ－ＳＤＳ（ＮＲ）優劣順位：Ｆ２、Ｆ３、Ｆ６＞Ｆ１、Ｆ５、Ｆ７、Ｆ８、Ｆ９＞Ｆ４、Ｆ１０＞Ｆ１１、Ｆ１２。
（７）ＣＥ－ＳＤＳ（Ｒ）優劣順位：Ｆ８、Ｆ９＞Ｆ３、Ｆ６＞Ｆ２、Ｆ７、Ｆ１０＞Ｆ１、Ｆ４、Ｆ５、Ｆ１１、Ｆ１２。
まとめ：２５℃加速安定性試験及び４０℃加速安定性試験で検出された各指標を総合すると、処方Ｆ３（２０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム、ｐＨ５．５）は他の処方よりも優れ、より良好な安定性を示したことから、Ｆ３は次の開発として選択された。
実施例３ 添加物のスクリーニング
１．スクリーニング方法
実施例２でスクリーニングされた最適な緩衝系（２０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム、ｐＨ５．５）に基づいて、７個の処方を設計し、塩化ナトリウム、グリシン、塩酸アルギニン、スクロース、トレハロース、マンニトール又はソルビトールの添加後のＩＬ２変異体融合タンパク質（ＩＬ２変異体融合タンパク質濃度が２ｍｇ／ｍＬである）の安定性を独立的に考察し、最適な製剤処方をスクリーニングして後続の界面活性剤のスクリーニングを行った。考察指標は、外観、ｐＨ値、濃度、ＳＥＣ－ＨＰＬＣ、ＤＬＳ、ＣＥ－ＳＤＳ（ＮＲ＆Ｒ）を含み、具体的な処方組成及び考察方法は表１５に示された。
２．添加物のスクリーニング結果
添加物のスクリーニングの主な結果を以下にまとめて示された。
３．考察結果
（１）外観優劣順位：Ｆ３－２＞Ｆ３－１＞Ｆ３－３＞Ｆ３－５＞Ｆ３－４、Ｆ３－６＞Ｆ３－７。
（２）ｐＨ値優劣順位：各群間でデータに顕著な差がなかった。
（３）濃度優劣順位：各群間でデータに顕著な差がなかった。
（４）ＤＬＳ優劣順位：Ｆ３－２＞Ｆ３－１＞Ｆ３－３、Ｆ３－４、Ｆ３－５、Ｆ３－６＞Ｆ３－７。
（５）ＳＥＣ－ＨＰＬＣ優劣順位：Ｆ３－１、Ｆ３－３、Ｆ３－４、Ｆ３－５、Ｆ３－６＞Ｆ３－７＞Ｆ３－２。
（６）ＣＥ－ＳＤＳ（Ｒ）優劣順位：Ｆ３－１、Ｆ３－３、Ｆ３－４、Ｆ３－５、Ｆ３－６＞Ｆ３－７＞Ｆ３－２。
（７）ＣＥ－ＳＤＳ（ＮＲ）優劣順位：Ｆ３－２、Ｆ３－３＞Ｆ３－４＞Ｆ３－５＞Ｆ３－７＞Ｆ３－６＞Ｆ３－１。
まとめ：外観の表現に基づいて、まず長期安定性２～８℃で外観に粒子が現れた群別Ｆ３－４、Ｆ３－５、Ｆ３－６及びＦ３－７を除外した。グリシンを含有するＦ３－１処方は、４０℃－４Ｗである場合、ＣＥ－ＳＤＳ（ＮＲ）により検出されたオリゴマーの含有量がＦ３－２及びＦ３－３よりも高く、ＩＬ－２タンパク質がＦ３－１処方においてより分解されやすいことを示した。Ｆ３－２のＳＥＣ－ＨＰＬＣ検出指標は他の群別と大きく異ならず、ＣＥ－ＳＤＳ（Ｒ）は４０℃－４Ｗである場合、他のピークの割合が比較的高いが、長期安定性２～８℃及び２５℃で他の群別と顕著な差がなかった。従って、安定性考察データを総合的に考慮すると、Ｆ３－２処方及びＦ３－３処方は他の処方よりも優れ、良好な安定性を示した。Ｆ３－２処方（１４０ｍＭの塩酸アルギニンを含む）及びＦ３－３処方（８％ｗ／ｖのスクロースを含む）を選択し、界面活性剤を加えた後の処方の安定性を更に考察した。
実施例４ 界面活性剤の考察
１．考察方法
Ｆ３－２処方及びＦ３－３処方に基づいて、界面活性剤ＰＳ－８０を加えた後の処方の安定性を考察した。処方状況の詳細は表２２に示された。考察方法の詳細は表２３に示された。考察指標は、外観、ｐＨ、タンパク質濃度、ＤＬＳ、ＳＥＣ－ＨＰＬＣ、ＣＥ－ＳＤＳ（ＮＲ＆Ｒ）、不溶性微粒子（ＭＦＩ）を含む。考察結果に基づいて、処方安定性の確認のために適切な製剤処方を選択した。
２．スクリーニング結果
主な結果を以下にまとめて示された。
３．考察結果
本実施例では、ｐＨ５．５酢酸系におけるタンパク質に対する界面活性剤であるポリソルベート８０（ＰＳ８０）の保護作用を考察した。結果に示されるように、タンパク質は、２０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム、１４０ｍＭの塩酸アルギニン、０．０４％又は０．０６％のＰＳ８０（ｗ／ｖ）の条件で、２ｍｇ／ｍＬ及び５ｍｇ／ｍＬの濃度で、高温、繰り返し凍結融解及び振とうに対して何れも良好な耐性を有し、タンパク質は、２０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム、８％のスクロース（ｗ／ｖ）、０．０４％のＰＳ８０（ｗ／ｖ）の条件で、２ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度で、高温、繰り返し凍結融解及び振とうに対しても良好な耐性を有する。各処方間で外観、ｐＨ、濃度、タンパク質粒径（ＤＬＳ）、ＳＥＣ－ＨＰＬＣ、ＣＥ（ＮＲ）に有意差がなく、処方Ｆ３－３－１は８％のスクロースを添加物として、塩酸アルギニンを使用した他の処方と比較して、４０℃－４Ｗである場合、タンパク質純度においてＣＥ－ＳＤＳ（Ｒ）の結果がより優れ、他のピークにおける比率は２．６８％であり、他の処方よりも４．２５％～５．０５％低かった。以上のことから、ＰＳ８０は、環境や製造過程におけるせん断力からタンパク質を効果的に保護し、タンパク質の凝集を防止することができる。
４．創薬性の研究
２０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム、ｐＨ５．２、８％のスクロース（ｗ／ｖ）、０．０２％のＰＳ８０（ｗ／ｖ）系における５ｍｇ／ｍＬのＩＬ－２変異体融合タンパク質の安定性を考察した。結果は、５ｍｇ／ｍＬのＩＬ２変異体融合タンパク質が創薬性研究の処方において良好な創薬性を有することを示し、詳細は表３２に示された。
５．結論
界面活性剤をスクリーニングする場合、他の処方と比較して、処方Ｆ３－３－１はＣＥ－ＳＤＳ（Ｒ）においてより優れた結果を示したことを考慮すると同時に、２ｍｇ／ｍＬ及び５ｍｇ／ｍＬは何れも低濃度タンパク質に属し、且つ５ｍｇ／ｍＬのＩＬ２変異体融合タンパク質はＦ３－３－１と類似する処方の創薬性研究において良好な安定性を示したことを考慮することから、５ｍｇ／ｍＬのＩＬ２変異体融合タンパク質、２０ｍＭの酢酸－酢酸塩、ｐＨ５．５、８％のスクロース（ｗ／ｖ）、０．０４％のＰＳ８０（ｗ／ｖ）を次の処方確認安定性研究の目的処方として選択した。
実施例５ 処方確認安定性
１．処方確認安定性方法
目的処方（５ｍｇ／ｍＬのＩＬ２変異体融合タンパク質、２０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム、ｐＨ５．５、８％のスクロース（ｗ／ｖ）、０．０４％のＰＳ８０（ｗ／ｖ））を選択し、処方確認安定性研究を行った。１ｍＬの液体製剤を２ｍＬのバイアル瓶に分注し、ゴム栓及びアルミプラスチック製キャップを用いて密閉包装システムを組み立て、それぞれ正置と逆置してその安定性を考察し、考察方法は表３３に示された。
２．処方確認安定性結果
処方確認安定性の主な結果を下記の表にまとめて示された。
３．処方確認安定性研究結論
２～８℃の低温で３ヶ月放置し、２５℃加速安定性を３ヶ月考察し、正置と逆置の試料は従来の検出指標、不溶性微粒子、純度、電荷異性体、活性などにおいて何れも顕著な変更がなく、且つ正置と逆置の試料の間で有意差がなかった。４０℃加速安定性を４週間考察すると、電荷変異体のメインピークは９．２％低下し、主に酸性ピーク値に近づく傾向があり、純度及び電荷変異体は顕著に変化した。
以上をまとめると、低温（２～８℃）のリアルタイム安定性及び２５℃加速試験の考察過程において、試料の従来の検出指標、不溶性微粒子、純度、電荷異性体、活性などは何れも顕著な変更がなく、各指標は何れも、品質基準の範囲内であり、ＩＬ２変異体融合タンパク質はこの処方において比較的良好な安定性を有することが示唆された。高温４０℃加速安定性の考察実験において、純度、電荷異性体において低下する傾向があり、本発明に示される製剤は高温に敏感であることが示唆された。
実施例６ ＤＴＨモデルマウス単剤薬力学におけるＩＬ２変異体融合タンパク質注射液の研究
本実施例は、ＫＬＨ誘発性遅延型過敏反応（ＤＴＨ）モデルマウスにおいてＩＬ２変異体融合タンパク質注射液の単剤薬効を評価し、ここで、ＩＬ２変異体融合タンパク質はＩＬ２変異体１－２－リンカー－Ｆｃ（Ｖ９１Ｒ／Ｙ３１Ｖ／Ａ７３Ｌ／Ｈ７９Ｑ）であり、以下にＩＬ２－１－２と呼ばれ、配列は配列番号１５に示された。陽性対照は、Ｆｃ－リンカー－ＩＬ２変異体６（Ｖ９１Ｋ）、即ちＡＭＧ５９２を用いて、配列は配列番号２０に示された。上記ＩＬ２－１－２及びＡＭＧ５９２の注射液処方は何れも、５ｍｇ／ｍＬのＩＬ２－１－２又はＡＭＧ５９２、２０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム、ｐＨ５．５、８％のスクロース（ｗ／ｖ）、０．０４％のＰＳ８０（ｗ／ｖ）であった。
６．１．動物の群分け
６～８週齢のＢＡＬＢ／ｃマウスを用い、各マウスの体重を秤量し、マウス体重に従ってＧ０～Ｇ７群の８つの実験群に各群１０匹ずつランダムに群分けし、群分け当日に投与を開始し、Ｄａｙ０と記し、ＩＬ２－１－２及びＡＭＧ５９２の各用量群は何れも、３日に１回皮下注射投与され、ＣｓＡは１日に１回腹腔内注射投与され、実験の終了時まで投与を継続した。
６．２．動物モデルの構築方法
６．２．１．試薬の調製
（１）３ｍｇ／ｍＬのＫＬＨ：凍結乾燥粉末を秤量し、ＰＢＳで３ｍｇ／ｍＬのＫＬＨ溶液に調製した。
（２）１ｍｇ／ｍＬのＫＬＨ乳剤：ＫＬＨ（３ｍｇ／ｍＬ）：ＩＦＡ：ＣＦＡの体積比が１：１：１であり、連通管注射器法により抗原を乳化し、抗原を十分に乳化させて粘稠な乳剤を形成することができる。
（３）１ｍｇ／ｍＬのＫＬＨ溶液：３ｍｇ／ｍＬのＫＬＨをＰＢＳで１ｍｇ／ｍＬに３倍希釈した。
６．２．２．ＤＴＨモデルのモデリング方法
ＢＡＬＢ／ｃマウスを取り、０日目に背部右寄りの２箇所に総量１００μＬ、濃度１ｍｇ／ｍＬのＫＬＨ乳剤（ＫＬＨ、ＩＦＡ、ＣＦＡの体積比を１：１：１として乳化する）を注射して感作させ、正常対照群には、ＫＬＨを含まない乳剤を等体積で注射し、５日目に各マウスの右耳皮内に濃度１ｍｇ／ｍＬのＫＬＨ溶液１０μＬを注射してマウスを刺激し、モデルマウスの局所皮膚組織に遅延型過敏反応症状を起こさせた。右耳局所のＫＬＨ注射前及び注射後２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ、９６ｈに、マイクロメーターを用いてマウス右耳の厚さを測定して、異なる処理群のマウスの局所遅延型過敏反応の程度を評価した。
６．３．群分け投与方法は表３５に示された
６．４．検出指標
６．４．１．体重の検出：群分け前に動物の体重を秤量し、動物を群分けした後、３日毎にマウスの体重を一回秤量し、ｇを単位とし、小数点後の第１位まで保持した。
６．４．２．マウス耳片の厚さの測定：
（１）刺激前、デジタル外径マイクロメーターを用いて各マウス右耳片の厚さを測定し、バックグラウンド値とした。
（２）刺激後、２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ、９６ｈにマウス耳片の厚さを測定した。
６．４．３．一般的な臨床観察：適応飼育期間及び実験期間に、週に少なくとも２回観察し、観察内容は、動物の精神状態、食事状況などを含むが、これらに限定されず、予想外の場合は実験記録ノート（紙）に記録する必要がある。
６．５．実験終了
６．５．１．投与間隔の期間に、動物の健康状態を観察することに注意すべきであり、以下の何れか１つ又は複数の状況が生じた場合、動物が正常状態に戻るまで投与を一時停止すべきである。
（１）動物の体重が薬物処理開始時の体重の８１％を下回った時点で投与を停止し、薬物処理開始時の体重の９０％に戻した場合に投与を継続した。
（２）投与後、動物の行動が遅延するか若しくは異常であり、或いは急性ストレス現象が発生した。
６．５．２．実験動物の人本主義の終点：実験過程において、動物状態に異常がある場合、動物の健康状態を評価し、治療を行うかどうか、実験を続行可能であるかどうか、或いは安楽死を実施するかどうかを決定した。
６．５．３．安楽死：マウス刺激後の９６ｈに、実験を終了するか、又は人本主義終点を実施する場合、過剰のＣＯ２を用いて動物を窒息させて安楽死させた。
６．６．統計学分析方法
測定及び観察の元データを記録する必要がある。元データに基づいて分析処理を行い、結果分析は平均数及び標準誤差（Ｍｅａｎ±ＳＥＭ）で表した。同時に、データに対して統計学的分析を行い、マウス耳片の厚さの変化をＴｗｏ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡで分析し、１０日目のマウスの体重をＯｎｅ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡで分析し、Ｐ＜０．０５が統計学的に有意であると考えられた。
６．７．結果及び検討
６．７．１．ＤＴＨモデルにおけるマウス体重に対するＩＬ２－１－２注射液の影響
薬物毒性を間接的に測定するための参照指標として実験動物の体重を用いた。ＣｓＡ、ＡＭＧ５９２及び異なる用量のＩＬ２－１－２を投与した後のマウスの体重及び体重変化率は図１、２及び表３６に示された。ＤＴＨモデルマウスに各治療薬物を３日に１回皮下注射投与し、実験期間中の観察において、マウス体重が変動し、ホルモン投与ＣｓＡ群のマウス体重の減少を除き、体重が１０％を超えて減少するマウスはなく、他の投与群ではマウスの体重が何れも増加する傾向を示した。全てのマウス状態は何れも異常がなく、他の発症又は死亡の現象がなく、１０ｍｇ／ｋｇのＣｓＡ、１ｍｇ／ｋｇのＡＭＧ５９２並びに０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ及び１ｍｇ／ｋｇのＩＬ２変異体１－２の用量での治療は、何れも許容可能であることが分かった。
６．７．２．ＩＬ２－１－２注射液のＤＴＨモデルマウス耳片の厚さの変化に対する影響
各治療群のＤＴＨモデルマウス耳片の厚さの変化は図３～４に示された。ＤＴＨモデルの発症はＫＬＨ刺激後４８ｈにピークに達し、モデル群マウスは、発症ピーク時に耳片の厚さの変化値が１５．７ｍｍ×１０－２であり、マウスの最初の耳片の厚さと比較して７４．１％増加し、モデル構築に成功し、ＩＬ２－１－２注射液は１、０．３、０．１及び０．０３ｍｇ／ｋｇ治療群においてマウス耳片の厚さが２．４５、４．０１、９．０９及び１２．２６ｍｍ×１０－２増加し、ＫＬＨ刺激前のマウス耳片と比較して１０．２％、２２．０％、４１．３％及び５３．６％変化した。陽性薬物ＣｓＡ １０ｍｇ／ｋｇ及びＡＭＧ５９２ １ｍｇ／ｋｇは、当該モデルに対しても明らかな治療作用を有し、溶媒対照群と比較して、一定の治療効果を示したが（Ｐ＜０．０００１）、両者の治療効果は０．３及び１ｍｇ／ｋｇのＩＬ２－１－２より低かった。以上のことから、ＩＬ２－１－２は、ＫＬＨ誘発性ＤＴＨモデルマウスにおいて明らかな治療効果を有した。
実施例７ ＢＡＬＢ／ｃマウスにおけるＩＬ２変異体融合タンパク質注射液の薬物動態研究
本実施例は、ＢＡＬＢ／ｃマウスにおいてＩＬ２変異体融合タンパク質注射液の薬物動態特性を評価し、ここで、ＩＬ２変異体融合タンパク質はＩＬ２変異体１－２－リンカー－Ｆｃ（Ｖ９１Ｒ／Ｙ３１Ｖ／Ａ７３Ｌ／Ｈ７９Ｑ）であり、以下にＩＬ２－１－２と呼ばれ、配列は配列番号１５に示された。陽性対照は、Ｆｃ－リンカー－ＩＬ２変異体６（Ｖ９１Ｋ）、即ちＡＭＧ５９２を用いて、配列は配列番号２０に示された。上記ＩＬ２－１－２及びＡＭＧ５９２の注射液処方は何れも、５ｍｇ／ｍＬのＩＬ２－１－２又はＡＭＧ５９２、２０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム、ｐＨ５．５、８％のスクロース（ｗ／ｖ）、０．０４％のＰＳ８０（ｗ／ｖ）であった。
７．１．動物の群分け
６～８週齢のＢＡＬＢ／ｃマウスを適性に飼育した後、各マウスの体重を秤量し、ＥＸＣＥＬを用いて乱数に基づくマウスの体重を元に、Ｇ１－Ｇ５群の５つの実験群に各群５匹ずつランダムに群分けし、群分け当日に投与を開始し、Ｄａｙ１と記した。
７．２．群分け投与方法は表３７に示された。
７．３．検出指標
７．３．１．体重の検出：群分け前に動物の体重を秤量し、動物の群分け後、採血前に体重を秤量し、ｇを単位とした。
７．３．２．フローサイトメトリーのマウス末梢血に対する免疫細胞分類
投与後の４日目に、マウスを安楽死させた後に心臓を穿刺し、末梢血を採取した。免疫細胞表面マーカー（ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ２５＋）及び核内因子（Ｆｏｘｐ３＋、Ｋｉ－６７＋）を蛍光タグ抗体で標識した。以下のＦＡＣＳ方法によって免疫細胞カウント及び群分け分析を行った。
（１）終了時にマウスを安楽死させた後、心臓を穿刺し、マウス末梢血をＥＤＴＡ－２Ｋ抗凝固チューブ内に採取した。抗凝固チューブを軽く反転させ、凝固を防止するために血液と抗凝固剤とを十分に混合した。（２）３００μＬの未凝固全血をフローチューブに移した。フローチューブに細胞表面マーカー（ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ２５＋）の抗体混合物を加え、室温で暗所で２０分間インキュベートした。（３）フローチューブに１ｍＬの溶解液を加えて赤血球を溶解し、室温で暗所で５分間インキュベートした。２０℃で、４００ｇ／ｒｃｆで６分間遠心分離し、上清を捨てた。（４）ステップ（３）を繰り返し、赤血球を再溶解させた。（５）４ｍＬの洗浄液（ＰＢＳ）で細胞を再懸濁させた。細胞懸濁液を濾過膜で濾過した後、新しいフローチューブに移した。（６）振とうしながら、フローチューブに５００μＬの固定液を１滴ずつ滴下し、４℃で暗所で一晩インキュベートした。（７）フローチューブに２ｍＬの膜貫通核液を加えて振とうし、４℃で、５００ｇ／ｒｃｆでフローチューブを５分間遠心分離し、上清を捨てた。（８）ステップ（７）を繰り返し、３ｍＬの膜貫通核液を用いて細胞を再度処理した。（９）フローチューブに核内因子（Ｆｏｘｐ３＋、Ｋｉ－６７＋）の抗体混合物を加え、４℃で暗所で４０分間インキュベートし、２０分間毎にフローチューブを１回振とうした。（１０）フローチューブに４ｍＬの洗浄液を加えて振とうし、４℃で、５００ｇ／ｒｃｆでフローチューブを５分間遠心分離し、上清を捨てて２００μＬのＰＢＳで細胞を再懸濁させた。（１１）室温で、カウント用微小球を少なくとも３０秒間ボルテックスして平衡化させた。フローチューブに５０μＬのカウント用微小球を加え、フローサイトメーターでＦＡＣＳ検出を行い、各フローチューブを機器に置く前に十分に振とうする必要がある。（１２）ＦＡＣＳ結果に基づて、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを用いて免疫細胞の種類を分析し、カウント用微小球の説明に従って細胞数を計算した。
７．３．３．一般的な臨床観察：適応飼育期間及び実験期間に、週に少なくとも２回観察し、観察内容は、動物の精神状態、食事状況などを含むが、これらに限定されず、予想外の場合は実験記録ノート（紙）に記録する必要がある。
７．４．実験終了
７．４．１．投与間隔の期間に、動物の健康状態の観察に注意する必要があり、以下の何れか１つ又は複数の状況が生じた場合、動物が正常状態に戻るまで投与を一時停止する必要がある。
（１）動物の体重が薬物処理開始時の体重の８１％を下回った時点で投与を停止し、薬物処理開始時の体重の９０％に戻した場合に投与を継続した。
（２）投与後、動物の行動が遅延するか若しくは異常であり、或いは急性ストレス現象が発生した。
７．４．２．実験動物の人本主義の終点：実験過程において、動物状態に異常がある場合、動物の健康状態を評価し、治療を行うかどうか、実験を続行可能であるかどうか、或いは安楽死を実施するかどうかを決定した。
７．４．３．安楽死：感作後２６日目の実験終了時に、過剰のＣＯ２を用いて動物を窒息させて安楽死させた。
７．５．統計学的分析方法
測定及び観察の元データを記録する必要がある。元データに基づいて分析処理を行い、結果分析は平均数及び標準誤差（Ｍｅａｎ±ＳＥＭ）で表した。
７．６．結果及び検討
７．６．１．ＩＬ２－１－２注射液のＢＡＬＢ／ｃマウス末梢血免疫細胞に対する影響
ＢＡＬＢ／ｃマウスは異なる用量のＩＬ２－１－２投与処理を受けた後、末梢血免疫細胞数が溶媒対照群マウスと比較して、その変化倍数が表３８に示された。ＩＬ２－１－２の皮下注射により、マウスＴｒｅｇ細胞増殖に対する顕著な促進作用が観察された。溶媒対照群と比較して、ＩＬ２－１－２又はＡＭＧ５９２の投与の３日後、Ｔｒｅｇ細胞を顕著に刺激した。０．１、０．３、１ｍｇ／ｋｇのＩＬ２－１－２の皮下投与後、マウス末梢血Ｔｒｅｇ細胞数の変化倍数は、それぞれ１３．７３、３５．２７及び１２．０５であった。１ｍｇ／ｋｇのＡＭＧ５９２投与群マウスのＴｒｅｇ細胞数の増加程度は１ｍｇ／ｋｇのＩＬ２－１－２投与群マウスより高いが、０．３ｍｇ／ｋｇ投与群マウスより低く、当該結果は、ＩＬ２－１－２が相対的低い用量でＴｒｅｇ細胞に対して良好な促進作用を有することを示した。Ｔｒｅｇ／ＣＤ４＋比率変化倍数は表３９に示された。実験では、ＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３細胞又はＣＤ３＋ＣＤ４－細胞が活性化されていないか、又は僅かに活性化されていることが観察された。
７．７．結論
結果は、ＩＬ２－１－２注射液の皮下注射によりＢＡＬＢ／ｃマウス末梢血におけるＴｒｅｇ細胞増殖が顕著に促進され、且つマウスが被験分子の投与量に対して明らかに耐性を有することを示した。
実施例８ ＳＤラットにおけるＩＬ２変異体融合タンパク質注射液の薬物動態研究
本実施例は、ＳＤラットにおいてＩＬ２変異体融合タンパク質注射液の薬物動態特性を評価し、ここで、ＩＬ２変異体融合タンパク質はＩＬ２変異体１－２－リンカー－Ｆｃ（Ｖ９１Ｒ／Ｙ３１Ｖ／Ａ７３Ｌ／Ｈ７９Ｑ）であり、以下にＩＬ２－１－２と呼ばれ、配列は配列番号１５に示された。上記ＩＬ２－１－２の注射液処方は何れも、５ｍｇ／ｍＬのＩＬ２－１－２、２０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム、ｐＨ５．５、８％のスクロース（ｗ／ｖ）、０．０４％のＰＳ８０（ｗ／ｖ）であった。
８．１．動物の群分け
６～８週齢のＳＤラットを適性に飼育した後、各群３匹の雄と３匹の雌で６個の実験群にランダムに配分した。群分け当日に投与を開始し（１日目と記し）、ＩＬ２－１－２注射液はそれぞれ、１日目、８日目、１５日目及び２２日目に皮下又は尾静脈注射により４回投与された。
８．２．群分け投与方法は表４０に示された。
８．３．観察指標
８．３．１．体重の監視
群分け後及び毎回投与前に動物の体重を秤量し、ｇを単位として記録した。
８．３．２．ラット末梢血における免疫細胞表現型フローサイトメトリー
１日目の投与前及び投与後４日目、１１日目及び２５日目に、ラット末梢血をそれぞれ採取した。免疫細胞表面マーカー（ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ２５＋）及び核内因子（Ｆｏｘｐ３＋、Ｋｉ－６７＋）を蛍光タグで標識した。免疫細胞数を、以下の蛍光活性化細胞選別方法（ＦＡＣＳ）により計算した。
（１）ラット頸静脈から全血を、ＥＤＴＡ－２Ｋを含有する抗凝固チューブに採取した。抗凝固チューブを軽く反転させ、凝固を防止するために血液と抗凝固剤とを十分に混合した。（２）３００μＬの未凝固全血をフローチューブに移した。フローチューブに細胞表面マーカー（ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ２５＋）の抗体混合物を加え、室温で暗所で２０分間インキュベートした。（３）フローチューブに１ｍＬの溶解液を加えて赤血球を溶解し、室温で暗所で５分間インキュベートした。２０℃で、４００ｇ／ｒｃｆでフローチューブを遠心分離し、上清を捨てた。（４）ステップ（３）を繰り返し、赤血球を再溶解させた。（５）４ｍＬの洗浄液（ＰＢＳ）で細胞を再懸濁させた。細胞懸濁液を濾過膜で濾過した後、新しいフローチューブに移した。（６）振とうしながら、フローチューブに５００μＬの固定液を１滴ずつ滴下し、４℃で暗所で一晩インキュベートした。（７）フローチューブに２ｍＬの膜貫通核液を加えて振とうし、４℃で、５００ｇ／ｒｃｆでフローチューブを５分間遠心分離し、上清を捨てた。（８）ステップ（７）を繰り返し、３ｍＬの膜貫通核液を用いて細胞を再度処理した。（９）フローチューブに核内因子（Ｆｏｘｐ３＋、Ｋｉ－６７＋）の抗体混合物を加え、４℃で暗所で４０分間インキュベートし、２０分間毎にフローチューブを１回振とうした。（１０）フローチューブに４ｍＬの洗浄液を加えて振とうし、４℃で、５００ｇ／ｒｃｆでフローチューブを５分間遠心分離し、上清を捨てて２００μＬのＰＢＳで細胞を再懸濁させた。（１１）室温で、カウント用微小球を少なくとも３０秒間ボルテックスして平衡化させた。フローチューブに５０μＬのカウント用微小球を加え、フローサイトメーターでＦＡＣＳ検出を行い、各フローチューブを機器に置く前に十分に振とうする必要がある。（１２）ＦＡＣＳ結果に基づて、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを用いて免疫細胞の種類を分析し、カウント用微小球の説明に従って細胞数を計算した。
８．３．３．一般的な臨床観察
適応飼育期間及び実験期間に、週に少なくとも２回臨床的に観察し、観察内容は、動物の健康状態、表現、日常活動、精神状態、食事状況などを含むが、これらに限定されない。予想外の場合は実験記録ノート（紙）に記録する必要がある。
８．４．実験終了
８．４．１．実験過程中及び投与間隔の期間に、動物の健康状態の観察に注意する必要がある。以下の何れか１つ又は複数の状況が生じた場合、動物が正常状態に戻るまで投与を一時停止する必要がある。
（１）動物の体重が薬物処理前の体重の８１％を下回った時点で投与を停止し、薬物処理前の体重の９０％に戻した場合に投与を継続した。
（２）投与後、動物の行動が遅延するか若しくは異常であり、或いは急性ストレス現象が発生した。
８．４．２．人本主義の終点
動物の健康状況を評価することによって、治療又は実験を続行するかどうか、或いは以下の何れか１つ又は複数の状況が生じた場合に安楽死を実施するかどうかを決定した。
（１）動物行動が異常又は麻痺である、
（２）動物の体重が群分け前の体重の２０％より低い、
（３）動物の体温が低すぎて、瀕死状態などにある。
８．４．３．安楽死
人本主義終点又は実験終了時に、過剰のＣＯ２を用いて動物を安楽死させた。
８．５．統計学的分析
結果分析は平均数及び標準誤差（Ｍｅａｎ±ＳＥＭ）で表した。
８．６．結果
８．６．１．ＩＬ２－１－２のラットＰＢＭＣ内の免疫細胞数及び比率に対する影響
ＩＬ２－１－２投与処理後の末梢血におけるＳＤラットの免疫細胞数の比率変化は表４１に示された。ＩＬ２－１－２は、皮下及び尾静脈を介してＳＤラット体内に注射した後、何れもＴｒｅｇ細胞の増幅を引き起こすことができる。対照と比較して、低用量のＩＬ２－１－２（０．００５ｍｇ／ｋｇの皮下注射又は０．００２ｍｇ／ｋｇの尾静脈注射）は、投与後４日目から２５日目にＴｒｅｇ細胞増幅を僅かに促進する作用を示した。中用量のＩＬ２－１－２（０．０５ｍｇ／ｋｇ）を皮下注射した後、ラット末梢血におけるＴｒｅｇ細胞数は、４日目にベースライン値の９．５５倍に増加し、２５日目にベースライン値の３．１６倍に維持された。高用量のＩＬ２－１－２（１ｍｇ／ｋｇ）を皮下注射した後、ラット末梢血におけるＴｒｅｇ細胞数は、１１日目にピーク値（ベースライン値の１３．８倍）に達し、２５日目にベースライン値の３．１８倍に減少した。高用量のＩＬ２－１－２（１ｍｇ／ｋｇ）を尾静脈注射した後、ラット末梢血におけるＴｒｅｇ細胞数は、４日目及び１１日目に、何れも顕著に増加し、それぞれベースライン値の２１．２５倍及び３０．１３倍であった。しかし、他の処理群と類似するように、Ｔｒｅｇ細胞数は、２５日目に同様にベースライン値の３．２６倍に減少した。この現象は、ラットへの複数回の投与後、体内に抗薬物抗体（ＡＤＡ）が産生されたことに起因する可能性があった。Ｔｒｅｇ細胞におけるＫｉ－６７＋細胞の増幅パターンも、Ｔｒｅｇ細胞数の増加傾向と一致した。
Ｔｒｅｇ／ＣＤ４＋細胞数の比率変化は表４２に示された。低用量（０．００５ｍｇ／ｋｇの皮下注射又は０．００２ｍｇ／ｋｇの尾静脈注射）及び中用量（０．０５ｍｇ／ｋｇの皮下注射）のＩＬ２－１－２は、ラット末梢血におけるＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３－細胞及びＣＤ３＋ＣＤ４－細胞数に対して、活性化作用を有しないか、又は僅かに有したが、高用量（１ｍｇ／ｋｇの皮下注射又は１ｍｇ／ｋｇの尾静脈注射）のＩＬ２－１－２は、上記細胞の増幅を僅かに活性化できることが観察された。
８．７．結論
以上の実験結果は、ＩＬ２－１－２のＳＤラット体内への皮下及び尾静脈注射が何れもＴｒｅｇ細胞の増殖を引き起こすことができ、且つＳＤラットが各用量のＩＬ２－１－２に対して何れも良好な耐性を有することを示した。

Claims (6)

  1. 医薬組成物であって、
    ＩＬ２変異体及び抗体Ｆｃブロックを含む融合タンパク質、緩衝液、浸透圧調整剤及び界面活性剤を含み、
    （１）前記融合タンパク質は、配列番号１５に記載のアミノ酸配列を有し、前記抗体Ｆｃブロックの二量体化によりホモ二量体を形成し、
    （２）前記緩衝液は、酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液であり、前記緩衝液の濃度は１～１００ｍＭであり、前記緩衝液のｐＨ値は４．５～６．０であり、
    （３）前記浸透圧調整剤はスクロースであり、前記スクロースの濃度は１～１５％ｗ／ｖであり、
    （４）前記界面活性剤は、ポリソルベート－８０であり、前記界面活性剤の濃度は０．０１～０．１％ｗ／ｖであり、ｐＨ値は４．５～６．０である、
    医薬組成物。
  2. 前記融合タンパク質の濃度は１～５０ｍｇ／ｍＬである、
    請求項１に記載の医薬組成物。
  3. 凍結乾燥製剤であって、
    請求項１又は２記載の医薬組成物を凍結乾燥した後に形成される、
    凍結乾燥製剤。
  4. 自己免疫疾患又は増殖性疾患を治療するための薬物の製造における、請求項１又は２記載の医薬組成物の使用であって、
    前記自己免疫疾患は、関節リウマチ、強直性脊椎炎、全身性エリテマトーデス、皮膚エリテマトーデス、ループス腎炎、ＩｇＡ腎症、シェーグレン症候群、多発性筋炎、皮膚筋炎、強皮症、乾癬、尋常性乾癬、円形脱毛症、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、炎症性腸疾患、潰瘍性結腸炎、クローン病、移植片対宿主病、臓器移植拒絶、自己免疫性肝炎、Ｉ型糖尿病、自己免疫性血管炎、湿疹又は喘息から選ばれ、
    前記増殖性疾患は、新生物、固形腫瘍、血液腫瘍、悪性腹水又は悪性胸水から選ばれ、ここで、前記固形腫瘍は、良性又は悪性、原発性又は転移性であってもよく、前記悪性固形腫瘍は、癌又は肉腫、例えば、上皮細胞癌、内皮細胞癌、扁平上皮癌、奇形腫、肺腫瘍、パピローマウイルス誘導癌、腺癌、癌腫、黒色腫、血管肉腫、神経芽細胞腫、転移性肺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、乳癌、Ｍｅｒｋｅｌ細胞癌、卵巣癌、腎細胞癌、転移性腎臓癌、頭頸部癌、膀胱癌、非筋層浸潤性膀胱癌であってもよく、前記血液腫瘍は、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫から選ばれてもよい、
    使用。
  5. 自己免疫疾患又は増殖性疾患を治療するための請求項１又は２記載の医薬組成物であって、
    前記自己免疫疾患は、関節リウマチ、強直性脊椎炎、全身性エリテマトーデス、皮膚エリテマトーデス、ループス腎炎、ＩｇＡ腎症、シェーグレン症候群、多発性筋炎、皮膚筋炎、強皮症、乾癬、尋常性乾癬、円形脱毛症、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、炎症性腸疾患、潰瘍性結腸炎、クローン病、移植片対宿主病、臓器移植拒絶、自己免疫性肝炎、Ｉ型糖尿病、自己免疫性血管炎、湿疹又は喘息から選ばれ、
    前記増殖性疾患は、新生物、固形腫瘍、血液腫瘍、悪性腹水又は悪性胸水から選ばれ、ここで、前記固形腫瘍は、良性又は悪性、原発性又は転移性であってもよく、前記悪性固形腫瘍は、癌又は肉腫、例えば、上皮細胞癌、内皮細胞癌、扁平上皮癌、奇形腫、肺腫瘍、パピローマウイルス誘導癌、腺癌、癌腫、黒色腫、血管肉腫、神経芽細胞腫、転移性肺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、乳癌、Ｍｅｒｋｅｌ細胞癌、卵巣癌、腎細胞癌、転移性腎臓癌、頭頸部癌、膀胱癌、非筋層浸潤性膀胱癌であってもよく、前記血液腫瘍は、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫から選ばれてもよい、
    医薬組成物。
  6. 請求項１又は２記載の医薬組成物を含有する容器を含む、
    製品。
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