JPH01115902A - ヒアルロン酸の製造法 - Google Patents
ヒアルロン酸の製造法Info
- Publication number
- JPH01115902A JPH01115902A JP27319487A JP27319487A JPH01115902A JP H01115902 A JPH01115902 A JP H01115902A JP 27319487 A JP27319487 A JP 27319487A JP 27319487 A JP27319487 A JP 27319487A JP H01115902 A JPH01115902 A JP H01115902A
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- Japan
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- hyaluronic acid
- paste
- making
- protease
- followed
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- Pending
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- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は高分子のヒアルロン酸を高純度、かつ高収率で
製造する方法に関する。
製造する方法に関する。
（従来の技術とその問題点）
ヒアルロン酸は、アミノ糖とウロン酸から成る複雑な多
糖類の一種である。動物諸組織、特に間充組織に広く分
布し、硝子体、水様液、ヘソの緒、関節液、肋膜液、皮
膚、ニワトリの鶏冠（いわゆるトサカ）等に多く含まれ
、動物組織にあっては、遊離酸および塩としてゲル状を
なして細胞間、および繊維間を埋める結合物質である。
糖類の一種である。動物諸組織、特に間充組織に広く分
布し、硝子体、水様液、ヘソの緒、関節液、肋膜液、皮
膚、ニワトリの鶏冠（いわゆるトサカ）等に多く含まれ
、動物組織にあっては、遊離酸および塩としてゲル状を
なして細胞間、および繊維間を埋める結合物質である。
粘稠性、保水性、潤滑性等の性質を有するヒアルロン酸
は、医薬や化粧品基材として需要が多く、高粘度、高純
度のものが要求される。
は、医薬や化粧品基材として需要が多く、高粘度、高純
度のものが要求される。
従来、ヒアルロン酸を得るには、原料を水で抽出して得
た水溶液から塩化セチルピリジニウムで沈澱させ、塩化
す）リウム溶液に溶解して、さらにエタノールで再沈澱
する方法が基本的方法として知られている。
た水溶液から塩化セチルピリジニウムで沈澱させ、塩化
す）リウム溶液に溶解して、さらにエタノールで再沈澱
する方法が基本的方法として知られている。
収率良く品質の良いヒアルロン酸を大量に製造するため
には、原料を前処理する必要があることから、多くの方
法が提案されている。例えば、結合組織をその形状のま
ま約７０〜１３０℃に加熱処理した後に蛋白質分解酵素
処理し、常法により処理する方法（特公昭６０−９０４
２号公ｌ） 、鶏冠をその形状のまま、または裁断して
３５〜６５℃で加温後帯白質分解酵素処理を行い、以下
常法により処理する方法（特公昭６１−８０８３号公報
）、予め加熱処理したヒアルロン酸含有原料をペースト
化した後、プロテアーゼ処理する方法（特開昭６０−２
４１９４号公報）等がある。
には、原料を前処理する必要があることから、多くの方
法が提案されている。例えば、結合組織をその形状のま
ま約７０〜１３０℃に加熱処理した後に蛋白質分解酵素
処理し、常法により処理する方法（特公昭６０−９０４
２号公ｌ） 、鶏冠をその形状のまま、または裁断して
３５〜６５℃で加温後帯白質分解酵素処理を行い、以下
常法により処理する方法（特公昭６１−８０８３号公報
）、予め加熱処理したヒアルロン酸含有原料をペースト
化した後、プロテアーゼ処理する方法（特開昭６０−２
４１９４号公報）等がある。
これらの方法は、いずれも大量に製造する方法として簡
単で効率の良い方法であるが、原料および製造工程中に
混入するヒアルロニダーゼが、ヒアルロン酸の低分子化
に作用し、また、長時間の加熱により品質を低下する等
の問題があった。
単で効率の良い方法であるが、原料および製造工程中に
混入するヒアルロニダーゼが、ヒアルロン酸の低分子化
に作用し、また、長時間の加熱により品質を低下する等
の問題があった。
本発明は、このようなヒアルロニダーゼによる品質の低
下を防止し、収率の良いヒアルロン酸の製造法を提供す
ることを目的とする。
下を防止し、収率の良いヒアルロン酸の製造法を提供す
ることを目的とする。
（問題点を解決するための手段）
本発明のヒアルロン酸の製造法は、原料を急速冷凍し、
凍結状態のまま細断・ペースト化した後、高温で短時間
殺菌し急速冷却後、プロテアーゼ処理し、続いて常法に
より処理するすることを特徴とする。
凍結状態のまま細断・ペースト化した後、高温で短時間
殺菌し急速冷却後、プロテアーゼ処理し、続いて常法に
より処理するすることを特徴とする。
原料としては、ヒアルロン酸を多量に含む結合組織を用
いる。このような原料としては、鶏冠、皮膚、項靭帯、
関節液、―帯、血管壁、軟骨、硝子体等があげられ、特
に多量に入手が容易な鶏冠が好ましい。
いる。このような原料としては、鶏冠、皮膚、項靭帯、
関節液、―帯、血管壁、軟骨、硝子体等があげられ、特
に多量に入手が容易な鶏冠が好ましい。
原料は、採取後、直ちに急速冷凍する。原料は、採取し
て日数を経るにしたがってヒアルロニダーゼにより品質
低下を生ずるので、これを防止するためである。
て日数を経るにしたがってヒアルロニダーゼにより品質
低下を生ずるので、これを防止するためである。
凍結した原料は、解凍することな（、そのまま細断し、
ペースト化する。細断には、通常の方法を用いることが
でき、例えばミートチョッパー等で充分である。ペース
ト化には、ホモゲナイザー、超微粒粉砕機（スーパーマ
スコロイダー等）などを用い、必要に応じて水、または
フレーク状氷を加え流動性を保持する。ペーストの温度
上昇を抑えるため約１０℃以下で操作することが好まし
く、特に２℃以下におさえることが好ましい。細断・ペ
ースト化によってヒアルロン酸の抽出の効率化を図るこ
とができる。
ペースト化する。細断には、通常の方法を用いることが
でき、例えばミートチョッパー等で充分である。ペース
ト化には、ホモゲナイザー、超微粒粉砕機（スーパーマ
スコロイダー等）などを用い、必要に応じて水、または
フレーク状氷を加え流動性を保持する。ペーストの温度
上昇を抑えるため約１０℃以下で操作することが好まし
く、特に２℃以下におさえることが好ましい。細断・ペ
ースト化によってヒアルロン酸の抽出の効率化を図るこ
とができる。
次いで、ペーストを高温で短時間殺菌するが、温度は例
えば７０〜１４０℃で１秒〜１０分の短時間で処理する
ことが好ましい。高温で短時間殺菌した後は、急速冷却
する。この工程で、ヒアルロニダーゼは、完全に失活し
、以降の操作中での品質の低下を防止できる。しかも短
時間で処理するため、従来のような長時間加熱による品
質の低下は生じない。
えば７０〜１４０℃で１秒〜１０分の短時間で処理する
ことが好ましい。高温で短時間殺菌した後は、急速冷却
する。この工程で、ヒアルロニダーゼは、完全に失活し
、以降の操作中での品質の低下を防止できる。しかも短
時間で処理するため、従来のような長時間加熱による品
質の低下は生じない。
プロテアーゼ処理に用いる酵素としては、例えばパパイ
ン、フィシン、ブロメライン等の植物起源酵素、トリプ
シン、キモトリプシン等の動物起源酵素、プロリシン、
アクチナーゼ、アルカラーゼ、ニュートラーゼ等の微生
物起源酵素等があげられる。これらの酵素は一種のみを
単独で用いることもできるが、性質の異なる酵素を複数
種混合し併用するならば、１種の酵素で処理したり或い
は複数回にわたって複数種の酵素で処理する場合よりも
、処理時間の短縮を図ることができ、しかも純度および
収率が向上するので特に有利である。
ン、フィシン、ブロメライン等の植物起源酵素、トリプ
シン、キモトリプシン等の動物起源酵素、プロリシン、
アクチナーゼ、アルカラーゼ、ニュートラーゼ等の微生
物起源酵素等があげられる。これらの酵素は一種のみを
単独で用いることもできるが、性質の異なる酵素を複数
種混合し併用するならば、１種の酵素で処理したり或い
は複数回にわたって複数種の酵素で処理する場合よりも
、処理時間の短縮を図ることができ、しかも純度および
収率が向上するので特に有利である。
プロテアーゼ処理後は、常法により処理する。
例えば、遠心分離または濾過により、精製した後、上澄
み液または濾液に第４級アンモニウム塩（例えば塩化セ
チルピリジニウム）を添加する。得られた沈澱物を食塩
水等に再溶解し、エタノールを添加後、沈澱物を採取し
、乾燥する。
み液または濾液に第４級アンモニウム塩（例えば塩化セ
チルピリジニウム）を添加する。得られた沈澱物を食塩
水等に再溶解し、エタノールを添加後、沈澱物を採取し
、乾燥する。
（発明の効果）
本発明によれば、原料を凍結状態のまま細断・ペースト
化し、高温短時間殺菌し、プロテアーゼにより処理する
ことを特徴とするので、ヒアルロニダーゼによる品質低
下や、長時間加熱による品質低下を防止でき、品質や収
率の向上を図ることができると共に、処理時間を大幅に
短縮できる。
化し、高温短時間殺菌し、プロテアーゼにより処理する
ことを特徴とするので、ヒアルロニダーゼによる品質低
下や、長時間加熱による品質低下を防止でき、品質や収
率の向上を図ることができると共に、処理時間を大幅に
短縮できる。
（実施例）
実施例１
屠殺直後に採取した鶏冠を噴霧式冷凍装置を用い、液体
窒素で急速冷凍した。該冷凍鶏冠１ ｋｇを゛ミートチ
ョッパーにより細断した。これにフレーク状の氷２ ｋ
ｇを添加し、スーパーマスコロイダ−（増幸産業ａｌ製
）でペースト化した。得られたペーストを１３０℃にて
３秒間瞬間殺菌し、直ちに急速冷却した。水を２１加え
、ｐＨを７．０に調整し、プロテアーゼとして、アクチ
ナーゼＥ（科研製薬■製）３０曙を加え、５０℃で３時
間インキュベートした。次いで、得られた溶液を濾過し
、濾液を３゜２１得た。この濾液に５ （ｗ／ｖ）％塩
化セチルピリジニウム液６００ｉを加えた。生成した沈
澱物を濾取し、０．５Ｍの塩化ナトリウム溶液に再溶解
した。
窒素で急速冷凍した。該冷凍鶏冠１ ｋｇを゛ミートチ
ョッパーにより細断した。これにフレーク状の氷２ ｋ
ｇを添加し、スーパーマスコロイダ−（増幸産業ａｌ製
）でペースト化した。得られたペーストを１３０℃にて
３秒間瞬間殺菌し、直ちに急速冷却した。水を２１加え
、ｐＨを７．０に調整し、プロテアーゼとして、アクチ
ナーゼＥ（科研製薬■製）３０曙を加え、５０℃で３時
間インキュベートした。次いで、得られた溶液を濾過し
、濾液を３゜２１得た。この濾液に５ （ｗ／ｖ）％塩
化セチルピリジニウム液６００ｉを加えた。生成した沈
澱物を濾取し、０．５Ｍの塩化ナトリウム溶液に再溶解
した。
この溶液にエタノールを６０ （ｖ／ｖ）％になるよう
に添加し、生成した沈澱物を濾取し乾燥した。
に添加し、生成した沈澱物を濾取し乾燥した。
実施例２
実施例１と同様に処理して得られたペーストを用い、１
００℃にて３００秒間瞬殺菌し、直ちに急速冷却した。
００℃にて３００秒間瞬殺菌し、直ちに急速冷却した。
水を２β加え、ｐ Ｈを７．０に調整し、プロテアーゼ
として、アクチナーゼＥ １５ｍｇおよびニュートラー
ゼ０．５Ｌ （ノボインダストリー・ジャパン■製）０
．５ｍｌを添加し、５５℃で２時間インキュベートした
。次いで、得られた溶液を濾過し、実施例１と同様に処
理した。
として、アクチナーゼＥ １５ｍｇおよびニュートラー
ゼ０．５Ｌ （ノボインダストリー・ジャパン■製）０
．５ｍｌを添加し、５５℃で２時間インキュベートした
。次いで、得られた溶液を濾過し、実施例１と同様に処
理した。
比較例１
得られたペーストを１３０℃にて３秒間瞬間殺菌する代
わりに、６０℃にて３０分間殺菌した以外は、実施例１
と同様に処理してヒアルロン酸を得た。
わりに、６０℃にて３０分間殺菌した以外は、実施例１
と同様に処理してヒアルロン酸を得た。
この比較例では、ヒアルロニダーゼの失活が不充分であ
った。
った。
比較例２
冷凍鶏冠を緩慢解凍したものを原料として用いた以外は
、実施例１と同様に処理してヒアルロン酸を得た。
、実施例１と同様に処理してヒアルロン酸を得た。
比較例３
冷凍鶏冠１ ｋｇに水１１を加え、９５℃にて４５分間
加熱した。固形物を取り出し、ミンチにした後、水４１
を加え、ｐＨを７．０に調整した以外は、プロテアーゼ
処理以降は、実施例１と同様に処理してヒアルロン酸を
得た。
加熱した。固形物を取り出し、ミンチにした後、水４１
を加え、ｐＨを７．０に調整した以外は、プロテアーゼ
処理以降は、実施例１と同様に処理してヒアルロン酸を
得た。
実施例および比較例で得られたヒアルロン酸の収量、純
度、分子量を第１表に示す。
度、分子量を第１表に示す。
第１表
注 １）カルバゾール硫酸法で測定したウロン酸量に２
．０６を乗じて算出。
．０６を乗じて算出。
２）ウベローデ型粘度計を用いて測定した極限粘度から
算出。
算出。
実施例３
原料として急速冷凍した豚皮（１ｋｇ）を用い、加熱処
理条件を１００℃で３０秒、プロテアーゼ処理を水３２
添加後アルカラーゼ０．６Ｌ、ニュートラーゼ０．５Ｌ
（いずれもノボインダストリー・ジャパン■製）各ｌ
ｍｌを加え、５０℃で７時間インキュベート、とそれ
ぞれ変更した以外は、実施例１に準拠した一連の操作を
行って豚皮起源のヒアルロン酸を取得した。収量は３．
１ｇ、上記例と同様に測定した純度は８９．６％および
分子量は１７万であった。
理条件を１００℃で３０秒、プロテアーゼ処理を水３２
添加後アルカラーゼ０．６Ｌ、ニュートラーゼ０．５Ｌ
（いずれもノボインダストリー・ジャパン■製）各ｌ
ｍｌを加え、５０℃で７時間インキュベート、とそれ
ぞれ変更した以外は、実施例１に準拠した一連の操作を
行って豚皮起源のヒアルロン酸を取得した。収量は３．
１ｇ、上記例と同様に測定した純度は８９．６％および
分子量は１７万であった。
Claims (1)
- 原料を急速冷凍し、凍結状態のまま細断・ペースト化し
た後、高温で短時間殺菌し急速冷却後、プロテアーゼ処
理し、続いて常法により処理することを特徴とするヒア
ルロン酸の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP27319487A JPH01115902A (ja) | 1987-10-30 | 1987-10-30 | ヒアルロン酸の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP27319487A JPH01115902A (ja) | 1987-10-30 | 1987-10-30 | ヒアルロン酸の製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01115902A true JPH01115902A (ja) | 1989-05-09 |
Family
ID=17524412
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP27319487A Pending JPH01115902A (ja) | 1987-10-30 | 1987-10-30 | ヒアルロン酸の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH01115902A (ja) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5621093A (en) * | 1995-06-06 | 1997-04-15 | Anika Research, Inc. | Steam-sterilizing solid hyaluronic acid |
| JP2003048403A (ja) * | 2001-08-08 | 2003-02-18 | Toyota Motor Corp | 車両の車輪構造 |
| WO2012033189A1 (ja) | 2010-09-10 | 2012-03-15 | 参天製薬株式会社 | Ｐ２ｙ2受容体作動薬およびヒアルロン酸またはその塩を組み合わせたことを特徴とするドライアイ治療剤、ドライアイの治療方法、ならびにその使用 |
| WO2012176865A1 (ja) | 2011-06-23 | 2012-12-27 | 参天製薬株式会社 | ヒアルロン酸またはその塩およびプロピレングリコールを含有する点眼液 |
| CN105461825A (zh) * | 2015-12-24 | 2016-04-06 | 杭州嘉伟生物制品有限公司 | 一种提高医用透明质酸钠精制品收得率的方法 |
| JP2017019822A (ja) * | 2010-07-28 | 2017-01-26 | オルス、ファルマＨｏｒｕｓ Ｐｈａｒｍａ | ヒアルロン酸を含む局所用防腐剤無添加組成物 |
-
1987
- 1987-10-30 JP JP27319487A patent/JPH01115902A/ja active Pending
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5621093A (en) * | 1995-06-06 | 1997-04-15 | Anika Research, Inc. | Steam-sterilizing solid hyaluronic acid |
| JP2003048403A (ja) * | 2001-08-08 | 2003-02-18 | Toyota Motor Corp | 車両の車輪構造 |
| JP2017019822A (ja) * | 2010-07-28 | 2017-01-26 | オルス、ファルマＨｏｒｕｓ Ｐｈａｒｍａ | ヒアルロン酸を含む局所用防腐剤無添加組成物 |
| WO2012033189A1 (ja) | 2010-09-10 | 2012-03-15 | 参天製薬株式会社 | Ｐ２ｙ2受容体作動薬およびヒアルロン酸またはその塩を組み合わせたことを特徴とするドライアイ治療剤、ドライアイの治療方法、ならびにその使用 |
| US9006208B2 (en) | 2010-09-10 | 2015-04-14 | Santen Pharmaceutical Co., Ltd. | Agent for treatment of dry eye characterized by combining P2Y2 receptor agonist and hyaluronic acid or salt thereof, method for treating dry eye, and use of the P2Y2 receptor agonist and hyaluronic acid or salt thereof |
| WO2012176865A1 (ja) | 2011-06-23 | 2012-12-27 | 参天製薬株式会社 | ヒアルロン酸またはその塩およびプロピレングリコールを含有する点眼液 |
| CN105461825A (zh) * | 2015-12-24 | 2016-04-06 | 杭州嘉伟生物制品有限公司 | 一种提高医用透明质酸钠精制品收得率的方法 |
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