JPH01128798A - 細菌検査用器具 - Google Patents
細菌検査用器具Info
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- JPH01128798A JPH01128798A JP62287282A JP28728287A JPH01128798A JP H01128798 A JPH01128798 A JP H01128798A JP 62287282 A JP62287282 A JP 62287282A JP 28728287 A JP28728287 A JP 28728287A JP H01128798 A JPH01128798 A JP H01128798A
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Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
［産業上の利用分野コ
本発明は、細菌検査用器具に関する。
さらに詳しくは、本発明は、チトクロームオキシダーゼ
反応を利用した細菌検査用器具に関する。
反応を利用した細菌検査用器具に関する。
［従来の技術及びその聞届点］
チトクロームオキシダーゼ検査は、Ｎｅ１ｓｓｅｒｉａ
属の同定や腸内細菌（陰性）と非発酵菌（陽性）の鑑別
に用いられている。
属の同定や腸内細菌（陰性）と非発酵菌（陽性）の鑑別
に用いられている。
この検査は、細菌の酸化型チトクロームＣ（チトクロー
ムオキシダーゼによる酸化によって、還元型から生ずる
）が基質を酸化分解し、その呈色変化を観察する方法が
一般的である。
ムオキシダーゼによる酸化によって、還元型から生ずる
）が基質を酸化分解し、その呈色変化を観察する方法が
一般的である。
基質としては、テトラメチルパラフェニレンジアミン２
塩酸塩（Ｋｏｙａｃの試薬）、ジメチルパラフェニレン
ジアミン２塩酸塩（ＧｏｒｄｏｎとＭｃＬｅｏｄの試薬
）、パラアミノジメチルアニリン塩酸塩（またはシュウ
酸塩）とα−ナフトール（ＧａｂｙとＨａｄｌｅｙの試
薬）が知られており、反応が鋭敏であることから、特に
テトラメチルパラフェニレンジアミンが多用されている
。また基質の安定化のためにアスコルビン酸が用いられ
ている。
塩酸塩（Ｋｏｙａｃの試薬）、ジメチルパラフェニレン
ジアミン２塩酸塩（ＧｏｒｄｏｎとＭｃＬｅｏｄの試薬
）、パラアミノジメチルアニリン塩酸塩（またはシュウ
酸塩）とα−ナフトール（ＧａｂｙとＨａｄｌｅｙの試
薬）が知られており、反応が鋭敏であることから、特に
テトラメチルパラフェニレンジアミンが多用されている
。また基質の安定化のためにアスコルビン酸が用いられ
ている。
検査方法は、これらの基質を含む試薬溶液を濾紙上に滴
下して、そこにエーゼでコロニーを塗抹したり、当該試
薬溶液を浸み込ませた吸水性材料（ディスクや短冊）を
コロニーに接触させたりして、それらの発色を観察する
のが一般的である。
下して、そこにエーゼでコロニーを塗抹したり、当該試
薬溶液を浸み込ませた吸水性材料（ディスクや短冊）を
コロニーに接触させたりして、それらの発色を観察する
のが一般的である。
しかし、前者は試薬を調製したり、濾紙やエーゼ等の器
具を準備したりする手間を必要とするので望ましくなく
、また後者はコロニー塗抹の操作性が悪いという問題点
を有していた。
具を準備したりする手間を必要とするので望ましくなく
、また後者はコロニー塗抹の操作性が悪いという問題点
を有していた。
そこで本発明者らは、上記問題点を解決し、コロニー塗
抹操作と呈色観察が容易なチトクロームオキシダーゼ検
査器具を提供すべく研究を重ねた結果、基質を含む試薬
中にポリエチレングリコールを含めると操作性、反応性
が向上し、さらに試薬の担体への固着化、試薬の安定化
等が図れることを見出し、本発明を完成させた。
抹操作と呈色観察が容易なチトクロームオキシダーゼ検
査器具を提供すべく研究を重ねた結果、基質を含む試薬
中にポリエチレングリコールを含めると操作性、反応性
が向上し、さらに試薬の担体への固着化、試薬の安定化
等が図れることを見出し、本発明を完成させた。
［問題点を解決するための手段］
上記目的は以下の構成を白°する本発明により達成され
る。
る。
１）発色して細菌の同定が可能な基質および水溶性高分
子を含む試薬が担体に担持されてなる細菌検査用器具。
子を含む試薬が担体に担持されてなる細菌検査用器具。
２）基質が酸化型チトクロームＣにより酸化されて発色
する基質である第１項記載の器具。
する基質である第１項記載の器具。
３）基質がテトラメチルパラフェニレンジアミン、ジメ
チルパラフェニレンジアミン、パラアミノジメチルアニ
リンもしくはこれらの酸付加塩またはα−ナフトールで
ある第２項記載の器具。
チルパラフェニレンジアミン、パラアミノジメチルアニ
リンもしくはこれらの酸付加塩またはα−ナフトールで
ある第２項記載の器具。
４）水溶性高分子がポリアルキレングリコールである第
１項記載の器具。
１項記載の器具。
５）ポリアルキレングリコールがポリエチレングリコー
ルである第４項記載の器具。
ルである第４項記載の器具。
６）試薬が、さらにアスコルビン酸またはそのアルカリ
金属塩を含む第１項ないし第５項のいずれか１項に記載
の器具。
金属塩を含む第１項ないし第５項のいずれか１項に記載
の器具。
７）担体が、棒状体である第１項ないし第６項のいずれ
か１項に記載の器具。
か１項に記載の器具。
８）担体の一部または全部が吸水性材料の棒状体である
第１項ないし第７項のいずれか１項に記載の器具。
第１項ないし第７項のいずれか１項に記載の器具。
本発明の試薬は基質および水溶性高分子からなり、所望
によりさらにアスコルビン酸またはそのアルカリ金属塩
（例えばナトリウム、カリウム塩）を含む。
によりさらにアスコルビン酸またはそのアルカリ金属塩
（例えばナトリウム、カリウム塩）を含む。
基質としてはテトラメチルパラフェニレンジアミン、ジ
メチルパラフェニレンジアミン、バラアミノジメチルア
ニリンもしくはこれらの酸付加塩またはα−ナフトール
が使用される。酸付加塩を形成する酸としては、塩酸、
硫酸、シュウ酸等が好ましい。
メチルパラフェニレンジアミン、バラアミノジメチルア
ニリンもしくはこれらの酸付加塩またはα−ナフトール
が使用される。酸付加塩を形成する酸としては、塩酸、
硫酸、シュウ酸等が好ましい。
上記基質は、全試薬中、０．０１〜２０．Ｏｗ／ｖ％、
好ましくは０．５〜５．０ν／Ｖ％の範囲の割合で用い
られる。
好ましくは０．５〜５．０ν／Ｖ％の範囲の割合で用い
られる。
水溶性高分子は、全試薬中、０．０１〜５０．Ｏｗ／ｖ
％、好ましくは１．０〜２０．Ｏｗ／ｖ％の範囲の割合
で用いられる。水溶性高分子としては、ポリアルキレン
グリコール特にポリエチレングリコールが望ましく、ポ
リプロピレングリコール、ポリビニルアルコール等も好
適に用いられる。
％、好ましくは１．０〜２０．Ｏｗ／ｖ％の範囲の割合
で用いられる。水溶性高分子としては、ポリアルキレン
グリコール特にポリエチレングリコールが望ましく、ポ
リプロピレングリコール、ポリビニルアルコール等も好
適に用いられる。
アスコルビン酸またはそのアルカリ金属塩は、基質の安
定化のために用いられ、０．００１〜１０、Ｏｖ／ｖ％
、好ましくは０．０１−１．Ｏｗ／ｖ９６の範囲の割合
で用いられる。
定化のために用いられ、０．００１〜１０、Ｏｖ／ｖ％
、好ましくは０．０１−１．Ｏｗ／ｖ９６の範囲の割合
で用いられる。
これらの成分を含む試薬は、基質、水溶性高分子、アス
コルビン酸を、順に水に溶解して調製することができる
。
コルビン酸を、順に水に溶解して調製することができる
。
本発明で使用される担体は、特に限定されず、ディスク
や短冊でもよいが、特に、細い棒状担体や、その一端に
綿球のような繊維塊が付着した綿棒様の担体が望ましい
。これらは器具の作成が容易であり、検査の操作もきわ
めて容易だからである。
や短冊でもよいが、特に、細い棒状担体や、その一端に
綿球のような繊維塊が付着した綿棒様の担体が望ましい
。これらは器具の作成が容易であり、検査の操作もきわ
めて容易だからである。
棒状体の材料は、紙、木、プラスチック、金属等が好ま
しく、長さは３０〜２００ Ｉｌｌ、直径は０．３〜４
龍程度が望ましい。また、綿棒様の担体とする場合には
、綿球は上記棒状体の一端に、１〜２０ｍｍの長さで付
着していることが望ましい。
しく、長さは３０〜２００ Ｉｌｌ、直径は０．３〜４
龍程度が望ましい。また、綿棒様の担体とする場合には
、綿球は上記棒状体の一端に、１〜２０ｍｍの長さで付
着していることが望ましい。
棒状担体の場合には、その一部を上記のようにして得ら
れた試薬中に浸漬して浸み込ませ、その後引き上げてか
ら乾燥させることによって、作成することができる。
れた試薬中に浸漬して浸み込ませ、その後引き上げてか
ら乾燥させることによって、作成することができる。
綿棒様の担体とする場合には、綿球の部分を試薬中に浸
漬して浸み込ませ、その後は、綿棒なしの担体と同様に
して作成することができる。
漬して浸み込ませ、その後は、綿棒なしの担体と同様に
して作成することができる。
検査の際には、このようにして得られた検査器具中の試
薬付着面を、常法により形成されたコロニーと接触させ
、約３０秒〜１分間放置後の発色を観察する。
薬付着面を、常法により形成されたコロニーと接触させ
、約３０秒〜１分間放置後の発色を観察する。
発色の程度の観察によって、チトクロームオキシダーゼ
反応の判定を行なうことができる。即ち、紫色又はかっ
色になったものが陽性、発色しないものが陰性である。
反応の判定を行なうことができる。即ち、紫色又はかっ
色になったものが陽性、発色しないものが陰性である。
本発明の器具を用いた場合の発色は鮮明なので、陽性ま
たは陰性の判断が容易である。
たは陰性の判断が容易である。
実施例 １
テトラメチルパラフェニレンジアミン２塩酸塩（以下ｒ
ＴＭＰＤＪと略記する。）ｌｖ／ｖ％、アスコルビン酸
０．１ｗ／ｖ％およびポリエチレングリコール（以下ｒ
ＰＥＧＪと略記する。 ） １０ｗ／ｖ％を含む水溶液
である試薬を調製した。
ＴＭＰＤＪと略記する。）ｌｖ／ｖ％、アスコルビン酸
０．１ｗ／ｖ％およびポリエチレングリコール（以下ｒ
ＰＥＧＪと略記する。 ） １０ｗ／ｖ％を含む水溶液
である試薬を調製した。
１．５φＸ１４５ｍｍの棒状の紙軸担体の一端を上記試
薬に浸漬してから引き上げ、４０℃において１時間乾燥
させ検査器具を作成した。
薬に浸漬してから引き上げ、４０℃において１時間乾燥
させ検査器具を作成した。
乾燥後の試薬付着面には、変化は見られず、試薬の粉末
が析出するようなことはなかった。
が析出するようなことはなかった。
各種菌株をハートインフュージョン寒天培地に３７℃に
おいて１昼夜培養して形成させたコロニーに、上記器具
の試薬付着面を触れることによって、器具にコロニーを
塗布し、３０秒〜１分間放置後の紫色発色の程度により
チトクロームオキシダーゼ反応の判定を行なった。
おいて１昼夜培養して形成させたコロニーに、上記器具
の試薬付着面を触れることによって、器具にコロニーを
塗布し、３０秒〜１分間放置後の紫色発色の程度により
チトクロームオキシダーゼ反応の判定を行なった。
結果を第１表に示す。
比較例 １
試薬中にＰＥＧを含まなかったこと以外は実施例１と同
様にして器具を作成した。
様にして器具を作成した。
乾燥後の試薬付着面は、表面に試薬の粉末が析出し、そ
れに触れると容易にはがれた。
れに触れると容易にはがれた。
チトクロームオキシダーゼ検査は実施例１と同様に行な
った。
った。
結果を第１表に示す。
実施例 ２
■、５φＸＩ４５ｍ１の棒状の紙軸担体の一端に付着し
た３φＸ１５ｍｍの綿球に実施例１で得られた試薬を４
０μｍずつ含浸させ、４０℃において１時間乾燥させて
検査器具を作成した。
た３φＸ１５ｍｍの綿球に実施例１で得られた試薬を４
０μｍずつ含浸させ、４０℃において１時間乾燥させて
検査器具を作成した。
得られた器具の綿球は、固く締っており、はぐれ難かっ
た。また室温において６ケ月放置しても綿球には何の変
化もみられなかった。
た。また室温において６ケ月放置しても綿球には何の変
化もみられなかった。
検査操作は、実施例１と同様に行なった。
結果を第１表に示す。
比較例 ２
比較例１で得られた試薬を用いて、実施例２と同様に、
綿球付き検査器具を作成した。
綿球付き検査器具を作成した。
得られた器具の綿球は、乾燥後に綿繊維がほぐれやすか
った。また、室温において６ケ月放置したところ、綿球
の表面に黄色の斑点が出現した。
った。また、室温において６ケ月放置したところ、綿球
の表面に黄色の斑点が出現した。
この検査器具を用いて行なった検査の結果を第１表に示
す。
す。
第 ７１ 表
＋＋：陽性、均一発色 ＋；陽性、不均一発色−；陰性
、発色せずまたは薄い発色 第１表から明らかであるように、各種菌株に対する判定
結果は、ＰＥＧを含む場合のみ均一に発色し、判定が容
易であった。
、発色せずまたは薄い発色 第１表から明らかであるように、各種菌株に対する判定
結果は、ＰＥＧを含む場合のみ均一に発色し、判定が容
易であった。
［発明の効果コ
本発明によれば、基質の他に水溶性高分子を含む試薬が
担体に含浸されている細菌検査用器具が提供される。
担体に含浸されている細菌検査用器具が提供される。
本発明の検査用器具は、試薬中に水溶性高分子を含むこ
とによって、試薬が担体へ均一に付着保持され、担体が
綿などの繊維であっても、繊維がケバ立つことなく固着
化される。また試薬にアスコルビン酸を含ませることに
より基質の安定も図ることができ、本発明の器具を長期
間保存しても、担体に含浸されている試薬が変化するこ
ともない。
とによって、試薬が担体へ均一に付着保持され、担体が
綿などの繊維であっても、繊維がケバ立つことなく固着
化される。また試薬にアスコルビン酸を含ませることに
より基質の安定も図ることができ、本発明の器具を長期
間保存しても、担体に含浸されている試薬が変化するこ
ともない。
本発明の検査器具を用いた検査の呈色反応は、水溶性高
分子を試薬中に含まない場合と比べて、発色が均一で鮮
明であり、陽性・陰性の判定が非常に容易であった。
分子を試薬中に含まない場合と比べて、発色が均一で鮮
明であり、陽性・陰性の判定が非常に容易であった。
さらに、担体を、棒状体またはそれに綿球が付着したも
のとした場合には、担体がディスクや短冊である場合に
比べて、コロニー塗抹が容易で操作性が向上し、さらに
検査器具自体の作成も容易である。
のとした場合には、担体がディスクや短冊である場合に
比べて、コロニー塗抹が容易で操作性が向上し、さらに
検査器具自体の作成も容易である。
第１図および第２図は、本発明の細菌検査用器具の説明
図である。 １・・・試薬付着端部 ２・・・担 体３・・・
試薬付着綿球
図である。 １・・・試薬付着端部 ２・・・担 体３・・・
試薬付着綿球
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １）発色して細菌の同定が可能な基質および水溶性高分
子を含む試薬が担体に担持されてなる細菌検査用器具。 ２）基質が酸化型チトクロームＣにより酸化されて発色
する基質である特許請求の範囲第１項記載の器具。 ３）基質がテトラメチルパラフェニレンジアミン、ジメ
チルパラフェニレンジアミン、パラアミノジメチルアニ
リンもしくはこれらの酸付加塩またはα−ナフトールで
ある特許請求の範囲第２項記載の器具。 ４）水溶性高分子がポリアルキレングリコールである特
許請求の範囲第１項記載の器具。 ５）ポリアルキレングリコールがポリエチレングリコー
ルである特許請求の範囲第４項記載の器具。 ６）試薬が、さらにアスコルビン酸またはそのアルカリ
金属塩を含む特許請求の範囲第１項ないし第５項のいず
れか１項に記載の器具。 ７）担体が、棒状体である特許請求の範囲第１項ないし
第６項のいずれか１項に記載の器具。 ８）担体の一部または全部が吸水性材料の棒状体である
特許請求の範囲第１項ないし第７項のいずれか１項に記
載の器具。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62287282A JPH01128798A (ja) | 1987-11-16 | 1987-11-16 | 細菌検査用器具 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62287282A JPH01128798A (ja) | 1987-11-16 | 1987-11-16 | 細菌検査用器具 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01128798A true JPH01128798A (ja) | 1989-05-22 |
Family
ID=17715380
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62287282A Pending JPH01128798A (ja) | 1987-11-16 | 1987-11-16 | 細菌検査用器具 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH01128798A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2018207562A1 (ja) * | 2017-05-12 | 2018-11-15 | パナソニックＩｐマネジメント株式会社 | 試料がセルコスポラ属またはシュードセルコスポラ属の菌を含有しているかどうかを判定する方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61122569A (ja) * | 1984-11-19 | 1986-06-10 | マイルス・インコーポレーテッド | グルコースの半定量的測定法、それに用いる試験組成物及び試験具 |
| JPS62182652A (ja) * | 1985-06-20 | 1987-08-11 | Fuji Photo Film Co Ltd | 酵素活性測定用乾式分析要素 |
| JPS62228947A (ja) * | 1986-03-31 | 1987-10-07 | Fuji Photo Film Co Ltd | 染料前駆体が安定化された乾式分析要素 |
-
1987
- 1987-11-16 JP JP62287282A patent/JPH01128798A/ja active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61122569A (ja) * | 1984-11-19 | 1986-06-10 | マイルス・インコーポレーテッド | グルコースの半定量的測定法、それに用いる試験組成物及び試験具 |
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| JPS62228947A (ja) * | 1986-03-31 | 1987-10-07 | Fuji Photo Film Co Ltd | 染料前駆体が安定化された乾式分析要素 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2018207562A1 (ja) * | 2017-05-12 | 2018-11-15 | パナソニックＩｐマネジメント株式会社 | 試料がセルコスポラ属またはシュードセルコスポラ属の菌を含有しているかどうかを判定する方法 |
| CN110352249A (zh) * | 2017-05-12 | 2019-10-18 | 松下知识产权经营株式会社 | 试样是否含有尾孢菌属或者假尾孢菌属的菌的判定方法 |
| JPWO2018207562A1 (ja) * | 2017-05-12 | 2020-03-12 | パナソニックＩｐマネジメント株式会社 | 試料がセルコスポラ属またはシュードセルコスポラ属の菌を含有しているかどうかを判定する方法 |
| CN110352249B (zh) * | 2017-05-12 | 2023-10-24 | 松下知识产权经营株式会社 | 试样是否含有尾孢菌属或者假尾孢菌属的菌的判定方法 |
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