JPH01149718A - 脳血液関門を通過し易いリポゾーム製剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はβ−ガラクトシダーゼの包埋担体として各種ｐ
−アミノフェニルＩＩ！誘導体から調製したリポゾーム
を使用して成るβ−ガラクトシダーゼ含有の、脳血液関
門を通過し易いリポゾーム製剤に関する。

本発明の製剤を腹腔内注射によって投与すれば、血液中
から脳のオリゴデンドログリア細胞にβ−ガラクトシダ
ーゼを補給することができる。リポゾームはリン脂質も
しくはある種の糖脂質を主体として形成されているもの
であって、これはリン脂質溶液を水に懸濁させ、これを
超音波処理することによって生ずる内抱を持った２層膜
または多層膜である。

さて、β−ガラクトシダーゼのような酵素（エンチーム
）は高分子化合物であるがため、これを脳のオリゴデン
ドログリア細胞に到達させようとしても脳血液関門と呼
ばれる障壁によってその侵入が阻止される。従って、従
来酵素類は脳の疾病治療目的から全て限外されていた。

しかるに本発明による新規形態のβ−ガラクトシダーゼ
含有リポゾーム製剤はこれを腹腔内注射によって投与す
れば上述の困難が全く排除されるので、これは脳疾患例
えば脳白質変性症殊に小児に起り易いヒト（人）クラッ
ペ（Ｋｒａｂｂｅ）病の治療に一新機軸を開いたものと
して翳療上極めて有用なものである。

そもそも、クラツバ病は先天代謝異常によって起る脳の
変性疾患の一つであって、これは中枢神経のオリゴデン
ドロダリア細胞中に中性糖脂質のガラクトセレブロシド
が異常に蓄積している疾患であり、これはβ−ガラクト
シダーゼの欠損によって起った現象である。この欠損β
−ガラクトシダーゼの補給は本発明の製剤の投与によっ
て可能となった。

本発明の完成に到るまでに行った種々の動物実験に使用
したリポゾームは直井氏等の方法に従ってレシチン：コ
レステロール：サルファチド（７：　２　：　１．　ｖ
／ｖ）または各種ｐ−アミノフェニル糖誘導体（マンノ
ース、フコース、ガラクトース）を用いて調製した。

これらのリポゾームにて包埋するβ−ガラクトシダーゼ
としてはジャック・ビーン、アスパーギルス・オリーザ
、チャロニア・ランプス、ボビン０リバー（Ｊａｃｋ　
ｂｅａｎ、　Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　０１ｉｚａｅ　
Ｃｈａｒｏ−ｎｉａ　Ｌｕｍｐｕｓ、　Ｂｏｖｉｎｅ　
Ｌｉｖｅｒ）等を用いた。これらの実験用供動物として
は普通のマウス（はっがねずみ）および特にクラツバ病
のモデル動物であるツウイチェル・マウスＣＴｗｉｔｃ
ｈｅｒ　ｍｏｕｓｅンを使用し、それらのマウス抜根神
経節細胞の培養はキム（Ｋｉｍ）氏等の方法によって行
った。

また脂質の分析は、レディーン（Ｌｅｄｅｅｎ）氏等の
方法に従い、糖脂の薄層クロマト法またはガスクロマド
法によって行った。

これらは後で述べる動物実験の具体的結果から綜合的に
次のようにのべることができる。

（イ）ツウイチェル・マウスについてはその大脳以外の
組織にもガラクトセレブロシードの蓄積が起っている。

ヒト（人）クラツバ病においても、腎について分析する
と対照におけるよりも２〜３倍のガラクトセレプロシー
ドの蓄積が認められた。

（Ｅｌ）　　リポゾームを用いてのマウスのクラッペ病
治療にはホラ貝（チャロニア・ランプス）由来のβ−ガ
ラクトシダーゼがガラクトセレブロシードの過剰蓄積を
解消させるのに最も有効であることが判明した。

（ハ）ホラ貝由来のβ−ガラクトシダーゼをサルファチ
ド含有リポゾームにて包埋すると肝臓および肺臓の組織
中にも有意なβ−ガラクトシダーゼ活性の上昇が認めら
れた。

（ニ）　３Ｈ−ガラクトセレブロシドをリポソ゛−ムで
ラベルしてツウイチェル・マウスに投与し、２日後にそ
の各臓器組織の放射活性を測定したところ、肝臓および
肺臓では正常対照の４０〜６０倍の上昇が認められ、こ
れによって、ガラクトセレブロシードの蓄積を軽減させ
うることか判明した。

（ネ）β−ガラクトシダーゼが脳血液関門を効率よく通
過するための包埋用リポゾームとしてはマンノース含有
リポゾームが他の糖類含有リポゾームよりも有効である
ことが判明した。

以下、本発明で行った動物実験を具体的に説明する。

（ａ）その第１実験ではツウイチェル・マウスと、普通
のマウスとの各組織に３Ｈ−ガラクトセレブロシード含
有リポゾームの２０Ｘ１０３ｃｐ重量を腹腔内注射し、
２日経過後に、リポゾームにて包埋したβ−ガラクトセ
レプロシードをこれらのマウスの半数だけに更に補給投
与し、以後２４時間および４８時間経過してこれらマウ
スの各臓器組織内の３Ｈ−ガラクトセレプロシードの蓄
積および崩壊の程度を測定観察した。但しこの実験に使
用したリポゾームはいずれも直井氏等の方法に従ってサ
ルファタイドを用いて調製したものである。　この実験
結果を次の第１表に示す。

この表かられかるように、ツウイチェル・マウスの組織
内の蓄積３Ｈ−ガラクトセレブロシードの放射活性度は
対照の普通マウスの肝臓および肺臓の相当する放射活性
度の４０〜６０倍であり、これらの値は４８時間後には
該エンチーム含有リポゾームを注射投与したマウスにつ
いては６５〜８５％に減少した。

この事実はマウスの組織に外部からエンチームを補給す
ることによって組織内に蓄積したガラクトセレプロシー
ドが崩壊されることを示すものと理解できる。但し、こ
の場合脳細胞内のガラクトセレプロシードの崩壊は全く
起らないことが注目されるが、これは使用したリポゾー
ムがサルファタイドの使用によって調製したものであり
、これが脳血液関門を通過し得なかったことに帰因する
ことが次に示す第２実験（ｂ）の結果から理解できる。

（ｂ）この第２実験ではそれに使用したリポゾームは各
種ｐ−アミノフェニルｆＰｍ導体として、相当するマン
ノース誘導体を用いて調製したものであり、このリポゾ
ームにて包埋した３Ｈ−ガラクトセレブロシードを注射
によって投与した後、そのマウスの脳細胞および肝臓細
胞をクレンデノン氏等の方法に従う細胞分画によって得
た各区分について、１２時間、２４時間、４８時間およ
び９６時間経過毎に放射活性度の分布を測定した。

その結果を次の第２表に示す。

第　　　２　　　表 脳 この表で括弧内の数値は各細胞分画区分における放射活
性度によるガラクトセレプロシードの分布割合（％）を
示すものである。かくてミトコンドリアおよびリゾソム
ス分画区分の放射活性は脳組織では１０〜３０％、また
肝臓組織では１０〜４０％であり、これらのピークは注
射後１２〜２４時間内に認められる。

（ｃ）第３実験では先ずホラ貝由来のβ−ガラクトシダ
ーゼだけを普通マウスに腹腔内注射によって投与した後
の経過時間（直後、３時間、１２時間および２４時間後
）に、このマウスの各臓器中のモレプロシードβ−ガラ
クトシダーゼ活性度を測定した。その結果を添付の第１
図のＡに示す。

他方また、前記のβ−ガラクトシダーゼを、直井氏にそ
の他方法に従ってレシチン、コレステロールおよびスル
ファタイドを用いて調製したリポゾームにて包埋したも
のを、前記と同様な方法で投与して、同様な方法で測定
したマウスの各臓器中のセレブロシードβ−ガラクトシ
ダーゼ活性度を添付の第１図のＢに示す。

この第１図かられかるように、Ａではすべての臓器中で
の活性度は殆んど不変であるが、Ｂでは注射後２４時間
以内では肝臓、肺臓および腎臓においては可成りの活性
度の上昇が認められ、それらは３日間（７２時間）保持
した。しかし脳ではＡ、Ｂ、いずれの場合でも活性度の
変化が殆んど認められなかった。これは該β−ガラクト
シダーゼはこれをサルファタイド含有リポゾーム中に包
埋して投与しても脳血液関門を通過することが不可能で
あることを示すものであると理解できる。

（ｄ）第４実験ではサルファタイドの代りにマンノース
、フコース（Ｌ−型）、ガラクトースおよびフコース（
Ｄ−型）をそれぞれ使用して調製した４種類のリポゾー
ムの各々に３Ｈ−ガラクトセレプロシードを包埋させた
ものを普通のマウスの組織に注射投与した後、１２時間
、２４時間、４８時間および７２時間それぞれ経過して
、（Ａ）脳、（Ｂ）肝臓、（Ｃ）腎臓および（Ｄ）肺臓
の放射活性度を測定した。その結果を添付の第２図およ
び第３図に示す。

この図の（Ａ）かられかるように、マンノース含有リポ
ゾームを使用したものの脳組織における活性度は他の臓
器（Ｂ）　、（Ｃ）および（Ｄ）におけるいずれの活性
度よりも特に顕著に大きく、またその活性度は血管の上
皮細胞の中にも認識された。

このように糖含有リポゾームにて包埋されたβ−ガラク
トシダーゼのような高分子量のエンチームでも脳血液関
門をよく通過し得ることが判明したので、本発明による
酵素、殊にβ−ガラクトシダーゼ含有リポゾームは脳白
質変性症すなわちクラツバ病の治療薬としての用途が大
いに期待される。

【図面の簡単な説明】

第１図、第２図および第３図はマウス臓器内における酵
素の含有量の時間的変化を示す線グラフである。

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. （１）ｐ−アミノフェニル糖誘導体を用いて調製した脳
   血液関門を通過し易いリポゾーム製剤。
2. （２）ｐ−アミノフェニル糖誘導体を用いて調製したリ
   ポゾームがβ−ガラクトシダーゼ含有リポゾームである
   特許請求の範囲（１）に記載のリポゾーム製剤。
3. （３）ｐ−アミノフェニル糖誘導体として相当するｐ−
   アミノフェニルマンノース誘導体を用いて調製した特許
   請求の範囲（１）または（２）に記載のリポゾーム製剤
   。
4. （４）β−ガラクトシダーゼとしてホラ貝（ｃｈａｒｏ
   −ｎｉａｌｕｍｐｕｓ）由来のβ−ガラクトシダーゼを
   含有した特許請求の範囲（１）、（２）または（３）に
   記載のリポゾーム製剤。