JPH0117105B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明はヒトおよび動物に対する医薬品として
用いられている抗生物質および他の抗菌剤の定性
的な検出および半定量的測定用の迅速な方法に関
する。以下、本明細書においてはこれらの医薬品
のすべては「抗菌剤」と称することとし、また抗
菌剤の定性的検出および半定量的測定は区別せず
「測定」と称することとする。本発明の適用範囲
は多方面にわたり、なかでも食物、点滴液、ワク
チン、輸血用の血液などの中に含まれる抗菌剤の
測定に有用である。たとえば受血者が過敏症とな
つている抗菌剤を供血者の血液が含んでいるかど
うかを確かめたり、抗菌剤治療などの間に体液
（たとえば血液）中の抗菌剤の存在およびその近
似的な濃度を測定したりするときに有用である。 抗菌剤の測定において一般的に用いられる方法
は、物理学的、化学的、生物化学的、免疫学的お
よび微生物学的な項目に分類できる。そのうち物
理学的、化学的および免疫学的な方法は特殊な実
験装置と操作が必要であり、迅速で機械的な測定
には向いていない。 抗菌剤の迅速で機械的な測定ができる公知方法
は、殆んど微生物学的な方法によつている。それ
によると少量の試料が菌を接種された培養ブロス
または培養寒天に加えられ、培養期間経過後の試
料の存在下における菌の増殖を観測している。試
料が抗菌剤を含んでいるときは増殖の阻害が観測
される。もつとも一般的用いられている増殖のパ
ラメーターはカルチヤーに含まれる菌細胞の増加
である。すなわちブロスにおいてカルチヤーの通
常の増殖は混濁度の増加を生ずるが、これは抗菌
剤が菌の増殖を抑制するに充分な濃度のときには
みられない。同様にプレート上でも混濁度は通常
の増殖により増加し、これに対して試料の周囲の
清浄化した帯域は、試料が抗菌剤が含有している
ことを示す。いくつかの試験方法では増殖に伴な
う他のパラメーターが用いられている。すなわ
ち、増殖したカルチヤー中の代謝産物の増加を適
当な代謝過程に特異的な呈色反応によつて算定す
ることができる。このような試験方法では、抗菌
剤の存在は呈色反応の減退から導びかれる。 抗菌剤の測定のためのすべての公知の微生物学
的な方法の欠点は、それらの培養に数時間を要す
るということであり、それがこの測定方法の有用
性を減じている。 ヨーロツパ、アメリカおよびその他の保健公共
機関や企業によつて、この試験に要する時間を減
縮するために多大な努力が払われている。最新の
方法はオランダの企業であるギストーブロカデス
（Gist−Brocades）によつて最近公表された、い
わゆるデルボ試験（Delvo Test）である。それ
によると最適条件下での培養時間が２時間30分〜
２時間45分必要である。この所要時間は菌体増殖
速度を基礎として予測される理論的な最小所要時
間にほぼ近いが、実際の目的にはまだ長すぎる。 β−ラクタマーゼと呼ばれる一連の酵素が、天
然および半合成ペニシリンならびに天然および半
合成セフアロスポリンのごときβ−ラクタム系抗
生物質（以下、BLAという）を劣化させて不活
性にするということが知られており、ミルク中の
BLAの測定にこの現象を利用するということは
すでに行なわれている。これらの方法によれば、
市販のβ−ラクタマーゼを被験用ミルクと共に培
養されていない被験用ミルクを前記の微生物学的
方法で分析し、２つの被験用ミルクの結果を比較
してBLAの存在の有無を知ることができる。こ
のように、この試験方法も同様に菌の増殖の阻害
を基礎にしており、すべてのそのような試験方法
と同じように長い培養期間が必要である。さらに
はこの方法はBLAの測定のみに限られるという
欠点がある。 菌増殖の阻害を基礎にした抗菌剤の測定に要す
る時間はその増殖の速度によつて決つてしまうの
で、測定時間の短縮を行なうにはこれら速度論的
な限定のない、すなわち菌増殖によらない新しい
方法が必要である。Ａ型ペニシリンを測定できる
生物学的方法は、ナオミ・ジク（Naomi Zyk）
が米国特許第3644177号明細書に開示している。
Ａ型ペニシリンはペニシリナーゼ（β−ラクタマ
ーゼ）に対して比較的抵抗力のあるペニシリンで
ある。その方法によるときには、生物学的物質、
代謝産物および食物などに含まれるＡ型ペニシリ
ンの含有量は、試料の存在下にヨウ素でペニシリ
ナーゼを部分的に不活性化し、つぎにその酵素の
残つている活性を加水分解によつて生ずるペニシ
ロ酸の生成により色が変化する指示薬を加え、酵
素の残つている活性をペニシリナーゼによつて減
少したペニシリンと接触させてはかることによつ
て「測定」される。この方法はＡ型ペニシリンの
測定のみにしか使用できないということに加え
て、酵素と基質の間の解離定数のために比較的感
度が低くなつている。そのため試料には比較的高
濃度のＡ型抗菌剤が必要となるかまたは長時間の
培養が必要となるという欠点を有している。 本発明の目的は、抗菌剤の測定において迅速、
高信頼性かつ実施が簡単で、しかも抗菌剤の化学
的性質に関係なく、いかなる抗菌剤でも測定しう
る方法を提供することにある。 本発明は、各種菌株がBLAの存在に応答して
多量のβ−ラクタマーゼを生産するという公知の
現象を応用している。この応答は迅速であり、か
つ完全に特異的である。すなわちこの応答はいか
なるBLAによつても生ずるが、他の公知物質で
はみられない。 本発明は試料中のBLAの測定方法に関するも
のであり、つぎの手順からなつている。 (1) β−ラクタマーゼ生産菌またはその菌胞子を
栄養体に接種し、 (2) 接種された培地に試料を加え、 (3) 前記菌または菌胞子によるβ−ラクタマーゼ
の生産が促進される条件下に培地を培養し、つ
いで (4) 生産されたβ−ラクタマーゼをデベロツプ
（develop）して分析することからなる。 本発明は、さらに１つの試料中に存在する
BLAと非BLA系抗菌剤の同時測定法にも応用で
きるものであり、その方法はつぎの手順からなつ
ている。 すなわち、 (1) β−ラクタマーゼ生産菌またはその菌胞子の
菌株を栄養培地に接種し、 (2) 前記試料を２回サンプリングし、一方に
BLAを加えた２つのサンプルを前記培地の２
つの異なる場所に加え、 (3) 前記菌または菌胞子によるβ−ラクタマーゼ
の生産が促進される条件下で培養し、 (4) 前記２つの異なる場所におけるβ−ラクタマ
ーゼをデベロツプして調べ、ついで (5) ２つの異なる場所におけるβ−ラクタマーゼ
のデベロツプメントを比較することからなる。 本発明による測定方法は、前記のごとくBLA
が存在するばあいのみ菌によつてβ−ラクタマー
ゼが生産されるということを基礎にしている。こ
の生産はBLAにおいてのみ特異的であり、した
がつて本発明の測定方法はつぎにあげるような問
に対して解答できるものである。 (1) 試料はBLAを含んでいるか？ (2) 試料は非BLA系抗菌剤を含んでいるか？ (3) 試料はBLAおよび非BLA系抗菌剤の両方を
含んでいるか？ デベロツプメントに適当な化学的もしくは生物
学的な方法を用いてもよい。デベロツプメントの
形態としては、呈色反応が好ましい。 デベロツプメントに用いる試薬としては、たと
えばβ−ラクタマーゼによつて劣化をうけやすい
BLA、たとえばペニシリンもしくはセフアロス
ポリンなどを用いることができる。そのような劣
化からたとえば酸などの分析可能な分解産物がえ
られる。たとえばベンジルペニシリン（ペニシリ
ンＧ）を用いるばあい、えられる分解産物はペニ
シロ酸であり、それを分析すればよい。そのばあ
いの分析法は、ペニシロ酸がデンプンなどのキヤ
リヤー分子に結合しているかまたは結合していな
いヨウ素の無色の錯体からヨウ素を遊離させる性
質を利用すればよい。 BLAによるβ−ラクタマーゼの生成は非常に
敏感でかつ迅速な反応であり、各BLA分子はそ
れぞれ500〜1000分子のオーダーでβ−ラクタマ
ーゼを生産する。そのため接種ずみの栄養培地へ
の試料の添加は、分単位の時間で充分である。本
発明によれば、たとえばチーズや肉などの固体の
食品中の抗菌剤の測定においては、一般に被験物
質を栄養培地に短時間接触させるだけで充分であ
り、わざわざ被験物質を調製したり抽出したりす
る必要がまつたくない。 本発明の方法を用いてBLAと他の抗菌剤を
別々に検出することができる。一般大衆の間にペ
ニシリンに対する過敏症（および他のβ−ラクタ
ム系抗生物質に対する交叉反応）が広がつている
ため、食料品や多くの医薬品（たとえば輸血用血
液、点滴液、ワクチンなど）の分野において、
BLA以外の抗菌剤中にBLAが含まれているか否
かを特異的に検出する方法はとくに重要である。
従来用いられている方法では、１回の操作で
BLAと非BLA抗菌剤を検出することができな
い。 本発明により測定できるBLAの例は、たとえ
ばベンジルペニシリン（ペニシリンＧ）、フエノ
キシメチルペニシリン（ペニシリンＶ）などの天
然ペニシリンおよびたとえばカルベニシリン、ア
ンピシリン、アモキシリン、オキサシリン、クロ
キサシリン、フルコキサシリン、メチシリンなど
のβ−ラクタマーゼに対して敏感であるかまたは
抵抗性である半合成ペニシリンならびにたとえば
セフアロチン、セフアロリジン、セフアレキシ
ン、カフアゾリンなどのセフアロスポリンさらに
はたとえばセフオキシチンなどのセフアミシンで
ある。 本発明の方法により測定できる非BLA型の抗
菌剤はテトラサイクリン、アミノグリコサイド、
クロラムフエニコール、サルフア剤、ニトロフラ
ンなどの抗菌剤があげられる。 もし試料が予想BLA濃度、すなわち1.0〜
1000nｇ／mlの範囲内で汚染されているときは、
一般にβ−ラクタマーゼの生成速度はBLAの濃
度に比例し、それゆえ特定時間後におけるβ−ラ
クタマーゼの生成レベルはBLAの濃度に比例す
る。β−ラクタマーゼを検出する高感度の方法は
数多く知られており、比較用のBLAの量を段階
的に変化させた一連の対照群の培養活性と試料の
培養活性を比較することにより、試料中のBLA
の量をほぼ定量的に推定することができる。 BLAの存在下にβ−ラクタマーゼを生産する
菌は種々知られている。たとえば、バチルス・セ
レウス（Bacillus cereus）（ATCC10876）や文
献などにみられるバチルス・セレウス569、バチ
ルス・リチエニフオルミス（Bacillus
licheniformis）749、スタフイロコツカス・アウ
レウス（Staph.aureus）菌株5974およびスタフイ
ロコツカス・アウレウス菌株13137、スタフイロ
コツカス・アルブス（Staph.albus）Ｊ−１およ
びスタフイロコツカス・アルブスＪ−３、シユー
ドモナス・ピオシアネア（Pseudomonas
pyocyanea）のアブラハム（Abraham）菌体な
どがあげられる。そのほか菌やそれらの詳細な説
明は、エヌ・シトリ（N.Citri）およびエム・ア
ール・ポロツク（M.R.Pollock）Adv.
Enzylmol.、28、237〜323（1966）にみられる
「β−ラクタマーゼの生化学および機能（The
biochemistry and function of β−
lactamase）」と題した総説の第６章第Ｄ節にみ
られる。 試料がBLAを含み他の抗菌剤を含まないばあ
い、前記生産菌はβ−ラクタマーゼを生産するこ
とによつてBLAが存在することを示す。したが
つてβ−ラクタマーゼの生菌は試料中にBLAが
存在することの証拠となる。 しかし、試料がBLAに加えて非BLA阻害物
質、すなわち前記生産菌を阻害するBLA以外の
物質（たとえば、テトラサイクリンやアミノグリ
コサイドなどの防腐剤や抗生物質）を含んでいる
ばあい、そうした阻害物質は前記生産菌を阻害し
て試料が置かれた場所のβ−ラクタマーゼの生産
を抑制する。ところで、BLAの量が多くてBLA
が充分拡散し、一方阻害物質の量が前記生産菌を
充分に阻害するほどのものではないばあい、試料
の設置場所の周囲にβ−ラクタマーゼの生産が認
められるであろう。したがつて、阻害物質と
BLAとの相対量比をあらかじめ決めて混合した
標準物のデベロツプメントと比較することによつ
て、阻害物質の定量的評価が可能である。 好ましい菌は、バチルス属のセレウスおよびバ
チルス属のリチエニフオルミスである。 試料は栄養培地に直接加えてもよいし、デイス
クに採取し、そのデイスクを加えてもよい。デイ
スクとしては２枚の標準紙を用い、一方は処理
せず、他方にはペニシリンなどの比較用のBLA
をあらかじめ浸み込ませておく。 本発明に用いることのできる栄養培地として
は、たとえば栄養アガー・プレート、栄養分を浸
み込ませた紙、液状栄養培地などがあげられる
が、それらのみに限定されるものではない。 つぎに本発明の測定方法を図面を用いて具体的
に説明するが、本発明はそれらのみに限定される
ものではない。 第１図は本発明の測定方法に用いられる試験装
置の一実施例の横断面図、第２図は培養の前に第
１図に示す位置に試料を加えた接種ずみの栄養ア
ガー・プレートの平面図、第３図および第４図は
本発明の測定方法によつて種々の試料を測定した
ときのパツドにおけるデベロツプメントの状態図
である。 第１図に示す本発明の測定方法に用いる試験装
置は、栄養アガー・プレート３を有するペトリ皿
１および蓋２からなつている。試験を行なうに
は、アガー・プレート３にBLAによつてβ−ラ
クタマーゼを生産する菌の菌株を接種し、ついで
アガー・プレート３の表面の異なる位置に試料デ
イスク４ａ，４ｂをのせる。水溶性デンプン、ヨ
ウ素およびヨウ化物の混合物の水溶液ならびにペ
ニシリンなどのβ−ラクタマーゼによつて迅速に
劣化されうるリン酸緩衝溶液を浸み込ませたパツ
ド６をプレート３にかぶせる。パツド６は後述す
るように１回目の培養が終つたのちにかぶせる。 第２図は１つの栄養培地を用いて２つの試験
（）、（）を同時に行なうときのデイスクの配
置を示す。図示したように各試験はそれぞれ２個
の試料デイスクを用いており、デイスク４ａ，５
ａは試験（）に用い、デイスク４ｂ，５ｂは試
験（）に用いる。デイスク４ａ，４ｂには、た
とえばベンジルペニシリンなどのBLAをまえも
つて浸み込ませておく。さらに、デイスク４ａ，
５ａには同じ試料を、同様にデイスク４ｂ，５ｂ
にも同じ試料を浸み込ませる。試験（）、（）
で測定する試料はそれぞれ異なるものを用いる。 各試験デイスクに必要なものを浸み込ませたの
ち、パツド６をかぶせていない状態でペトリ皿１
に蓋２をかぶせて37℃で40〜50分間培養を行な
う。この培養ののち、パツド６を第１図に示すよ
うにプレート３および各デイスクにかぶせる。パ
ツド６をかぶせたのち蓋２を再びかぶせ、さらに
５〜10分間培養する。BLAが含まれているデイ
スクには最初の培養によつてβ−ラクタマーゼが
生産され、このβ−ラクタマーゼが２度目の培養
によつてパツド６中のペニシリンを劣化する。こ
の現象は試料を浸み込ませるまえにBLAを浸み
込ませておいたデイスク４ａ，４ｂにおいては常
に起るが、デイスク５ａ，５ｂにおいては起つた
り起らなかつたりする。BLAが存在する部分で
発生するペニシロ酸は、青ないし黒色のデンプン
−ヨウ素錯体をその錯体中のヨウ素と結合するこ
とによつて脱色する。その結果パツド６のデイス
ク４ａ，４ｂをおおつた部分、さらにデイスク５
ａ，５ｂに浸み込ませた試料がBLAを含んでい
るばあいにはそのデイスクをおおつた部分が白色
部分となる。 デイスクに浸み込ませた試料がBLAと他の非
BLA系抗菌剤の混合物であるときは、白色部分
の内側に暗色中心がみられる。この現象はBLA
に特異的であり、また非BLA系抗菌剤の濃度が
圧倒的に高いばあいには起らない。この暗色中心
の直径は該非BLA系抗菌剤の量にほぼ比例して
いる。この現象がまつたく起らない、すなわち白
色部分が生じない状態は、非BLA系抗菌剤が大
過剰に存在するばあいに生ずる。 本発明の測定方法をつぎにあげる実施例によつ
てさらに詳しく説明するが、本発明はそれらの実
施例のみに限定されるものではない。 実施例 １ （ミルク中の抗生物質の試験法） 第１図および第２図に示される試験容器を用い
た。栄養アガー・プレート３に、本特許出願の優
先権主張の基礎となつている1980年３月27日提出
のイスラエル国特許出願第59723号の提出前にア
メリカ合衆国のアメリカン・タイプ・カルチユ
ア・コレクシヨン（American Type Culture
Collection）に寄託されていたバチルス・セレウ
ス（ATCC10876）を接種した。直径４mmの４枚
のデイスク４ａ，４ｂ，５ａ，５ｂを用い、その
うちデイスク４ａ，４ｂにベンジルペニシリンを
浸み込ませた。 パツド６は85mm径の紙製パツドを25ミリモ
ル／のヨウ素、125ミリモル／のヨウ化カリ
ウムおよび水溶性デンプンを２重量％含む水溶液
に浸して調製した。この含浸操作後、該パツドを
風乾したのち密閉した光の入らない容器中に乾燥
剤と共に保存した。前記４枚のデイスクを２組、
すなわちデイスク４ａ，５ａおよびデイスク４
ｂ，５ｂに分け、それぞれ異なる被験用のミルク
の試験に用いた。すなわち、デイスク４ａ，５ａ
の各プレートには第１の被験用のミルクを１滴浸
み込ませ、デイスク４ａ，５ａの各プレートには
第２の被験用のミルクを１滴浸み込ませた。蓋２
をかぶせて37℃で40分間培養した。この培養の間
に10万単位のベンジルペニシリンをPH6.8の0.1M
リン酸緩衝溶液５mlに溶かした溶液を調製した。
最初の培養が終了後、前記緩衝溶液に浸したパツ
ド６をアガー・プレート３にかぶせた。蓋２を再
びかぶせてさらに培養を５〜10分間行なつた。 第３図および第４図に、BLA含有ミルクＡ、
BLAも他の抗菌剤も含んでいないミルクＢ、
BLAと他の抗菌剤を共に含有しているミルクＣ
およびBLA以外の他の抗菌剤を含有しているミ
ルクＤについて測定した結果、パツド６に現われ
た徴候を示す。さらにその結果を第１表にまとめ
た。

【表】 この実施例からBLAとそれ以外の抗菌剤が１
回の試験で同時に、しかも45〜60分間で測定でき
ることがわかる。すなわち本発明の方法によると
きは、従来のもつとも迅速な試験方法の所要時間
をさらに約1/3にまで短縮することができる。 実施例 ２ （輸血用血液のスクリーニング） 通常の増殖阻害試験による血液銀行の保存血液
を機械的にスクリーニングして、そのうち７つの
献血血液サンプルがペニシリナーゼと共に培養し
ても排除されない抗菌活性を有していることがわ
かつた。したがつてこれらのサンプルがペニシリ
ナーゼに対して抵抗力を有するBLAを含んでい
るか否かを特異的に決定することが重要となる。
従来にはBLAと非BLA系の他の抗菌剤を区別で
きる簡便なスクリーニング法はない。 本発明の測定方法に基づく試験方法は、その問
題を解決したものであり、つぎのごとく行なつ
た。試験容器は実施例１と同様のものを用いた。
しかしながらこの実施例のばあいは試験用デイス
クは用いず、各被験用の血液を0.05mlずつ採取し
たほかは実施例１と同様にして菌を接種したアガ
ー・プレートに目立つスポツトとして置いた。つ
いで実施例１と同様に培養し、デベロツプした。
第２表にそれらの結果を示す。

【表】 既知の非BLA系抗菌剤の量の半定量的な推定
はつぎの方法によつて行なつた。ベンジルペニシ
リンなどのBLA0.1μｇ／mlに対し被験用抗菌剤
の量を段階的に変化させ、それぞれの混合物に基
づく結果から検量線をつくつた。未知量の抗菌剤
を含む試料に濃度が0.1μｇ／mlとなる量のBLA
を加え、菌を接種したアガー・プレートに実施例
２と同様にして加え、培養、デベロツプメントを
行なつた。えられた結果を検量線を用いて判断し
た。 所望ならば、この培養試験をプレート上でな
く、液体の培地中で行なうこともでき、そのばあ
い発生したβ−ラクタマーゼの確認は抗菌剤を浸
み込ませたパツドよりも抗菌剤の溶液を用いた方
がよい。 デンプン−ヨウ素錯体中のデンプンは他の色素
源錯体形成物、たとえばポリビニルアルコールな
どで置き換えることができる。そのような錯体形
成物は、もしそれらが本質的に阻害剤とならない
なら、菌を接種した培地に加えてもよい。 培養の時間および温度はかなり広い範囲で行な
いうる。すなわち培養装置が思いのままに使用で
きず、しかも時間のフアクターがはつきりしない
ときは、インダクシヨンおよびデベロツプメント
は室温で行なえばよい。たとえば20℃では、この
試験は約２時間を要する。逆にいえば、試験時間
は培養を高い温度で行なうことによつてかなり短
縮されうる。バチルス・セレウス菌株569に対す
る最適温度は43℃である。高い温度でよく発育
し、かつβ−ラクタマーゼを生産する突然変異株
をスクリーニングするか、または公知の好熱菌種
から培養可能なβ−ラクタマーゼ生産菌を変性せ
しめてうることは容易である。そのような菌を使
用することにより、インダクシヨンおよびデベロ
ツプメントに要する時間をさらに短縮することが
できる。 β−ラクタマーゼによるインダクシヨンの検出
は、酸が生成することによつてヨウ素が吸収され
ることに基づいた方法のみにかぎられない。たと
えば酸性の分解産物は培地のPHを下げるので適当
なPH指示薬を用いて色の変化をみればよい。PH指
示薬は、栄養培地に含ませておいてもよいし、パ
ツドに加えておいてもよいし、あるいはまた培地
に噴霧される基質溶液中に加えておいてもよい。 実施例 ３ （血液循環中のゲンタマイシンのモニタリン
グ） 使用した試薬および物質はつぎのとおりであつ
た。 (1) バチルス・リチエニフオルミス菌株749のカ
ルチヤーの対数層（logarithmic phase） (2) 実施例１と同様にして調製したパツドを切り
取つたデンプン−ヨウ素小片（３mm×３mm） (3) 実施例１と同様にして調製したベンジルペニ
シリン溶液とペニシリン含浸デイスク (4) 使い捨て式の微量滴定プレート (5) ゲンタマイシン試験用の検量線 ペニシリン含浸デイスクを水でぬらし、それに
綿棒を接触させた。つぎに栄養アガー・プレート
中のくぼみを該綿棒でふいた。このようにして調
製したくぼみ（ペニシリン ウエル（penicillin
well））は最高にインダクシヨンが起るのに充分
なペニシリンを含んでいた。 ゲンタマイシンを投与された患者たちの指先か
らそれぞれ50μの被験用血液を採血した。各被
験用血液を50μの菌のカルチヤーと共にペニシ
リン ウエルに加え、１回目の培養を37℃で35分
間行なつた。 デンプン−ヨウ素含浸小片をベンジルペニシリ
ン溶液に浸し、１回目の培養の終了後に該小片を
血液のカルチヤーの上にのせた。そのまま２回目
の培養を10分間行ない、各小片が完全に脱色され
る時間を記録した。 小片の脱色に必要な時間が、直接的に循環血液
中にゲンタマイシンの量に比例しているので、血
液中のゲンタマイシンの半定量的な推定が検量線
と比較することによりえられる。もし小片が10分
間以内に脱色されなければ、ゲンタマイシンが過
剰に含まれていると考えてよい。そのことは、そ
れぞれゲンタマイシンをまつたく含んでいない標
準被験用血液および既知量のゲンタマイシンを含
んでいる標準被験用血液によつて確認した。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の測定方法に用いられる試験装
置の一実施例の横断面図、第２図は培養のまえに
第１図に示す位置に試料デイスクを加えた接種ず
みの栄養アガー・プレートの平面図、第３図およ
び第４図は本発明の測定方法によつて種々の試料
を測定したときのパツドにおけるデベロツプメン
トの状態図である。 （図面の主要符号）、３：アガー・プレート、
４ａ，４ｂ，５ａ，５ｂ：試料デイスク、６：パ
ツド。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ (1) β−ラクタマーゼ生産菌またはその菌胞
   子を栄養培地に接種し、 (2) 接種された培地に試料を加え、 (3) 前記菌または菌胞子によるβ−ラクタマーゼ
   の生産が促進される条件下に培養し、ついで (4) 生産されたβ−ラクタマーゼをデベロツプし
   て調べる ことを特徴とする前記試料中のβ−ラクタム系抗
   生物質の測定方法。 ２ 前記菌がバチルス・セレウスである特許請求
   の範囲第１項記載の測定方法。 ３ 前記菌がバチルス・リチエニフオルミスであ
   る特許請求の範囲第１項記載の測定方法。 ４ 前記デベロツプはβ−ラクタマーゼによつて
   劣化を受けやすいペニシリンまたはセフアロスポ
   リンを用い、えられた分解産物を分析する特許請
   求の範囲第１項、第２項または第３項記載の測定
   方法。 ５ 前記分解産物がペニシロ酸であり、その分析
   にヨウ化ポリサツカライドを用いる特許請求の範
   囲第４項記載の測定方法。 ６ 前記分解産物が酸であり、その分析にPH指示
   薬を用いる特許請求の範囲第４項記載の測定方
   法。 ７ 試料中のβ−ラクタム系抗生物質の濃度を、
   比較用のβ−ラクタム系抗生物質の量を段階的に
   変化せしめた一連の対照群に基づくチヤートにお
   けるデベロツプメントと比較することにより推定
   する特許請求の範囲第１項、第２項、第３項、第
   ４項、第５項または第６項記載の測定方法。 ８ 前記試料を直接栄養培地に加える特許請求の
   範囲第１項、第２項、第３項、第４項、第５項、
   第６項または第７項記載の測定方法。 ９ 前記試料をサンプリングデイスクに採取し、
   該デイスクを栄養培地に加える特許請求の範囲第
   １項、第２項、第３項、第４項、第５項または第
   ６項記載の測定方法。 １０ (1) β−ラクタマーゼ生産菌またはその菌
   胞子の菌株を栄養培地に接種し、 (2) １つの試料から２回サンプリングし、一方に
   β−ラクタム系抗生物質を加えた２つのサンプ
   ルを前記培地の２つの異なる場所に加え、 (3) 前記菌または菌胞子によるβ−ラクタマーゼ
   の生産が促進される条件下に培養し、 (4) ２つの異なる場所におけるβ−ラクタマーゼ
   をデベロツプして調べ、ついで (5) ２つの異なる場所におけるβ−ラクタマーゼ
   のデベロツプを比較する ことを特徴とする前記試料中のβ−ラクタム系抗
   生物質と非β−ラクタム系抗生物質抗菌剤の同時
   測定方法。 １１ 前記菌がバチルス・セレウスである特許請
   求の範囲第１０項記載の測定方法。 １２ 前記菌がバチルス・リチエニフオルミスで
   ある特許請求の範囲第１０項記載の測定方法。 １３ 前記デベロツプはβ−ラクタマーゼによつ
   て劣化を受けやすいペニシリンまたはセフアロス
   ポリンを用い、えられた分解産物を分析する特許
   請求の範囲第１０項、第１１項または第１２項記
   載の測定方法。 １４ 前記分解産物がペニシロ酸であり、その分
   析にヨウ化ポリサツカライドを用いる特許請求の
   範囲第１３項記載の測定方法。 １５ 前記分解産物が酸であり、その分析にPH指
   示薬を用いる特許請求の範囲第１３項記載の測定
   方法。 １６ 試料中のβ−ラクタム系抗生物質の濃度
   を、比較用のβ−ラクタム系抗生物質の量を段階
   的に変化せしめた一連の対照群に基づくチヤート
   におけるデベロツプメントと比較することにより
   推定する特許請求の範囲第１０項、第１１項、第
   １２項、第１３項、第１４項または第１５項記載
   の測定方法。 １７ 試料中の公知の非β−ラクタム系抗生物質
   の抗菌剤の濃度を、既知量のβ−ラクタム系抗生
   物質で試験を行なうまえに前記試料を追加し、前
   記既知量と同量のβ−ラクタム系抗生物質と量を
   段階的に変化せしめた非β−ラクタム系抗生物質
   の抗菌剤との混合物からえられる結果に基づくチ
   ヤートにおけるデベロツプメントと比較すること
   により推定する特許請求の範囲第１０項、第１１
   項、第１２項、第１３項、第１４項、第１５項、
   第１６項または第１７項記載の測定方法。 １９ 前記試料をサンプリングデイスクに採取
   し、該デイスクを栄養培地に加える特許請求の範
   囲第１０項、第１１項、第１２項、第１３項、第
   １４項または第１５項記載の測定方法。