JPH01174389A - メラニン生成抑制物質の製造方法とそれを含有する色白剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、メラニン生成抑制物質の製造方法とそれを含
有する色白剤、更に詳しくは、温血動物由来の株化細胞
を増殖させ、得られる該細胞を破砕し、この破砕物から
新規メラニン生成抑制物質を製造する方法、および有効
成分として新規メラニン生成抑制物質を含有する色白剤
に関する。

［従来の技術］ メラニンは、皮膚に存在していて、紫外線の悪影響から
身体を守る重要な役目を担っているとともに医学上並び
に美容上重要な因子である。メラニンの合成は皮膚組織
で行なわれることが知られており、メラニン量の過剰は
色黒とされ、また、その不均一な分布は、シミ（肝斑）
、ソバカス（雀卵斑）とされ、いずれも美容上の欠陥で
ある。

従来、皮膚のメラニン量を低減し、色白の美しい肌にす
るためには、主にタイロシネース（ｔｙｒ。

５ｉｎａｓｅ：チロシナーゼとも言う）の酵素活性抑制
剤、例えばビタミンＣ１グルタチオン、システィンなど
が利用されてぃ−る。

しかしながら、これらタイロシネースの酵素活性抑制剤
は、安定性か悪く、生きた細胞に対して色白効果が不充
分である。一方、ハイドロキノン、ＭＢＥＨ（モノベン
ジル　エーテル　オブ　ハイドロキノン：　ｍｏｎｏｂ
ｅｎｚｙｌ　ｅｔｈｅｒ　ｏｆ　ｈｙｄｒｏｑｕｉｎｏ
ｎｅ）なども利用きれているが、これらは強い色白作用
を有するも、皮膚本来の生理機能を損ない、白斑、色素
異常、かぶれなどの副作用を引き起こす欠点がある。

［発明が解決しようとする問題点］ 本発明者等は、これら欠点の改善を目ざして、タイロシ
ネースの酵素活性の直接的抑制とは関係なく生きた細胞
の機能を利用してメラニン生成を抑制し色白効果を発揮
する物質の探索を続けてきた。その結果、温血動物由来
の継代維持可能な細胞（この細胞を、本明細書では株化
細胞と言う）を生体外で増殖させるが、またはヒト以外
の温血動物体液の供給を受けながら増殖させ、得られる
該細胞を破砕し、次いでこの破砕物から、タイロシネー
スの酵素活性を実質的に抑制せず、色素細胞でのメラニ
ン生成抑制活性およびドーパ（ｄｏｐａ　）反応抑制活
性を示す新規メラニン生成抑制物質を採取しうろことを
見いだし、本発明を完成した。

また、この新規メラニンの生成抑制物質を有効成分とし
て含有せしめた色白剤が、メラニン生成を抑制し、色白
効果を発揮することを見出し本発明を完成した。

本発明のメラニン生成抑制物質の製造方法で使用する温
血動物由来の株化細胞は、生体外またはヒト以外の温血
動物体液の供給を受けながら容易に増殖し得て、しかも
本発明のメラニン生成抑制物質を産生しうるものであれ
ばよく、例えば、大日本製薬株式会社から市販され、ま
たはＡＴＣＣから分譲を受けることのできる温血動物由
来の各種株化細胞が適宜選択できる。

例えば、Ａ−３７５、Ｃ−３２、Ｃ−３２ＴＧ、　Ｇ−
３６１、ＷＭ−１１５、シＭ−２６６−４、ｃｌｏｎｅ
Ｍ−３、Ｄ、１７８、ＦＦ、ＲＰＭ１１８４６、）Ｉｓ
２９４Ｔ、Ｈｓ６９５Ｔ、ＨＴ−１４４、Ｍａｌｍｅ−
３Ｍ、ＲＰＭＩ−７９５１、ＳＫ−ＭＥＬ−１、ＳＫ−
ＭＥＬ−５、ＳＫ−ＭＥＬ−２８などのメラノーマ（ｍ
ｅｌａｎｏｍａ）由来の株化細胞、Ｂｅｃ　ＩＩ　、　
Ｂｒ１７、ＥＢ−３、ＦＯ１Ｌ１２１０、ＣＣＲＦ−Ｃ
ＥＭ、ＨＬ−６０、ＭＯＬＴ−３、ｌＮ−９、ＫＧ−１
、Ｒａｊｉ、　　Ｋ−５６２、Ｄａｕｄｉ、　　Ｎａｍ
ａｌｖａｓ　　Ｒａｍｏｓ、　　ＢＣ３Ａ。

Ａ２０、Ｃ１４９８、Ｐ３８８Ｄ　ｉ、ＷＲ１９Ｌ、　
ＢＣ３Ａ、　Ｐ８１５などの白血病由来の株化細胞や、
また、正常な細胞を採取し、これを各種ウィルス、薬剤
、放射線などで処理し、株化細胞にした細胞などを有利
に用いることができる。

また、これら株化細胞のメラニン生成抑制物質産生能を
有する遺伝子を、例えばポリエチレングリコールやセン
ダイウィルスなどを利用する細胞融合の手段、ＤＮＡリ
ガーゼ、制限酵素（ヌクレアーゼ）、ＤＮＡポリメラー
ゼなどの酵素を利用する遺伝子組換えの手段などによっ
て処理し、その増殖速度を高めたり、細胞当りのメラニ
ン生成抑制物質産生能を高めたりして使用してもよく、
本明細書に記載している株化細胞のみに限定されるもの
ではない。

これら株化細胞を増殖きせる方法は、生体外（ｉｎ　ｖ
ｉｔｒｏ）で増殖させても、ヒト以外の温、進動物体液
の供給を受けながら増殖きせてもよい。

とりわけ、ヒト以外の温血動物体内に直接移植するが、
または拡散チャンバー内へ接種して、その温血動物の体
液の供給を受けながら増殖きせる方が望ましい。

即ち、生体外（ｉｎ　ｖｉｔｒｏ）で増殖させる場合と
は違って、高価な血清などを含む栄養培地が不要、また
は大幅に節約出来るばかりでなく、細胞増殖中の維持管
理も極めて容易であり、その上、得られた細胞から誘導
生成されるメラニン生成抑制物質量が多い特徴を有して
いる。

ヒト以外の瀉血動物を利用する方法は、株化細胞を、ヒ
ト以外の温血動物体内に移植し、あるいをすれば、瀉血
動物から供給される栄養物を含有する体液を利用してそ
の細胞が容易に増殖しうるのである。

更に、生体外（ｉｎ　ｖｉｔｒｏ）で増殖きせる場合と
比較して、この細胞の増殖が安定であること、その増殖
速度が大きいこと、得られる細胞量が多いこと、更には
、細胞当りのメラニン生成抑制物質の収量が著しく増加
することも大きな特徴である。

本発明で使用するヒト以外の温血動物は、メラ・ニン生
成抑制物質産生能を有する株化細胞が増殖し得るもので
あればよく、例えばニワトリ、ハトなどの鳥類、イヌ、
ネコ、サル、ウサギ、ヤギ、ブタ、ウマ、ウシ、モルモ
ット、ラット、ヌードラット、ハムスター、マウス、ヌ
ードマウス、などの哺乳類が使用できる。

これらのヒト以外の温血動物に異種動物由来の株化細胞
を移植すると好ましくない免疫反応を起こすおそれがあ
るので、その反応をできるだけ抑えるため、使用する動
物はできるだけ幼若な状態、即ち卵、胚、胎児、または
新生期、幼少期のものの方が好ましい。

また、これら動物に例えば２００乃至６００レム程度の
エックス線若しくはガンマ線を照射するが、または抗血
清若しくは免疫抑制剤などを注射するなどの前処理をほ
どこして、免疫反応を弱めて移植してもよい。

使用する動物がヌードマウスあるいはヌードラットの場
合には、成長したものであっても免疫反応が弱いので、
これらの前処理を必要とすることもなく、異種動物由来
の株化細胞が移植でき、急速に増殖できるので特に好都
合である。

株化細胞を移植する動物体内の部位は、移植した細胞が
増殖しうる部位であればよく、例えば、尿液腔、静脈、
腹腔、皮下など自由に選ばれる。

また、ヒト以外の瀉血動物体内に株化細胞を移植するこ
となく、該動物細胞の通過を阻止し得る多孔性の濾過膜
、例えば孔径約１０−７乃至１０−’ｍを有するメンブ
ランフィルタ−１限外濾過膜またはフォローファイバー
などを設けた公知の各種形状、大１１の拡散チャンバー
を動物体内、例えば腹腔内に埋設して、動物体からの栄
養物を含む体液の供給を受けつつ、そのチャンバー内で
前述の株化細胞を何れも増殖きせることかできる。

また必要に応じて、このチャンバー内の栄養物を含む溶
液を動物体内の体液と接続し、潅流きせるようにしたチ
ャンバーを、例えば動物体表に取付け、チャンバー内の
株化細胞の増殖状態をその表面に設けた窓を通じて透視
できるようにすることも、また、このチャンバ一部分の
みを着脱交換できるようにして動物を屠殺せずにその動
物の寿命−杯株化細胞を増殖きせて、動物個体当りの細
胞生産量を更に高めることもでざる。

これらの拡散チャンバーを利用する方法は、株化細胞が
動物細胞と直接接触しないのて、株化細胞のみが容易に
採取できるだけでなく、好ましくない免疫反応を起こす
心配も少ないので、免疫反応を抑制する前処置の必要も
なく、各種温血動物を自由に利用できる特徴を有してい
る。

移植した動物の維持管理は、その動物の通常の飼育管理
を続ければよく、移植後といえども特別の取扱いは何等
必要としないので好都合である。

株化細胞を増殖きせるための期間は通常１乃至１０週の
期間で目的を達成することができる。このようにして得
られる株化細胞数は動物個体当り約１０７乃至１０１２
個、またはそれ以上に達することも見出した。

換言すれば、動物生体内で増殖きせて得られる株化細胞
数は、移植した株化細胞数の動物個体当り約１０２乃至
１０’倍、またはそれ以上にも達し、生体外の栄養培地
に接種して増殖きせる場合の約１０１乃至１０６倍、ま
たはそれ以上にも達して、メラニン生成抑制物質の製造
のために極めて好都合である。

上述のように増殖きせた株化細胞からメラニン生成抑制
物質を調製する方法は、例えば、株化細胞を摩砕法、超
音波法、凍結融解法などにより破砕し、この破砕物を遠
心分離法、膜濾過法などにより不溶物を除去し、この上
清または濾液を、例えば、濃縮、乾燥などを行うことに
よって容易に精製分離し、採取することができる。

更に高度の精製を必要とする場合には、例えば、イオン
交換体への吸着−溶出、ゲル濾過、電気泳動、イオン交
換クロマトグラフィー、高速度液体クロマトグラフィー
、カラムクロマトグラフィーなど公知の方法を組合せれ
ば、最高純度のメラニン生成抑制物質を採取することも
可能である。

このようにして精製し、製造されたメラニン生成抑制物
質は、 ａ）作用 タイロシネースの酵素活性を実質的に抑制せず、色素細
胞でのメラニン生成抑制活性およびドーパ反応抑制活性
を示す ｂ）分子量 ゲル濾過法で１００乃至５００ Ｃ）紫外線吸収スペクトル 特徴的な極大吸収はない ｄ）熱安定性 １００℃５分間安定、６００℃２時間で色素細胞でのメ
ラニン生成抑制活性を失う ｅ）　ｐＨ安定性 ｐＨ２，０またはｐＨ１１，０で４℃１６時間安定ｆ）
溶剤に対する溶解性 水、メタノールに可溶 ｇ）物質の色 水溶液で無色乃至淡黄色 の性質を有する新規なメラニン生成抑制物質であること
が判明した。

なお、本明細書でいう各種活性は、次の通り定義する。

タイロシネースの酵素活性は、「プリティシュ・ジャー
ナル・オブ・ダーマトロジ−（Ｂｒｉｔｉｓｈ　Ｊｏｕ
ｒｎａｌ　ｏｆ　Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ）」、第１０
３巻、第６２５乃至６３３頁（１９８０年）に記載され
ている方法に準じて測定する。

色素細胞でのメラニン生成抑制活性は、「キャンサー帝
リサーチ（Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ）　Ｊ　、
第４２巻、第１１９４乃至２００２頁（１９８２年）に
記載されている方法に準じて測定する。

即ち、１０％牛脂児血清を含むイーグルＭＥ）Ｉ培地１
０ｍ１に４Ｘ１０’個のマウスメラノーマ由来細胞Ｂ−
１６を懸濁し、２５ｃｍ２培養用ルー瓶にて５％ＣＯ２
存在下、３７℃で培養する。本培養液を、０日目および
３日目にメラニン生成抑制試験用標品を含む培地で交換
し、５日間培養する。細胞を０．８ｗ／ｖＸ食塩を含有
する燐酸緩衝液（ｐＨ７，２）で洗浄後、トリプシン及
びＥＤＴＡ含有溶液を使用τ、て刈ＩＩＩさせ、濾過法
により細胞を回収する。濾紙上に回収′された細胞は、
乾燥後、デンシトメーターにより５００量ｍにおける反
射光を測定し、反射吸光度（黒色度）を求める。

上記方法により、処理区の吸光度がコントロールの吸光
度の１７２量に減じる時の処理区のメラニン生成抑制活
性を１単位と定義する。

ドーパ反応抑制活性は、「日本皮膚科学会雑誌」第８７
巻、第１３号、第８８３乃至９０１頁（昭和５２年）に
記マウス 載きれている方法に準じて判定した。即ちソｒ「弓−ノ
ーマ由来細胞Ｂ−１６を、前記方法に準じて本発明のメ
ラニン生成抑制物質を加えて５日間培養し、白色化させ
た後、培養液を捨て、１０ｖ／ｖ％ホルマリンで固定化
し、次いで、０．１ｖ／ｖ％ドーパ（Ｌ型）含有０．１
Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ７，３）に浸漬して３７℃３時間維
持し、顕微鏡下で観察し、メラニン生成による該細胞の
黒化が起こらない場合をドーパ反応抑制活性を示すと判
定する。

本発明のメラニン生成抑制物質は、安全性が高く、安定
性良好なメラニン生成抑制物質であるの１で、これを含
有せしめた色白剤として、注射剤、内服剤、外用剤、浴
用剤などの医薬品、乳液、バック、クリームなどの化粧
品などに利用きれ、シミ、ソバカス、日焼けなど色素沈
着症の予防、治療に高い色白効果を発揮する。

以下、本発明を実験で詳細に説明する。

実　験　１．　メラニン生成抑制物質の製造方法新生児
のハムスターに、ウサギから公知の方法で調製した抗血
清を注射して、ハムスターの免疫反応を弱めた後、その
皮下にヒトメラノーマ由来株化細胞Ｇ−３６１を移植し
、その後通常の方法で３週間飼盲した。皮下に生じた腫
瘤を摘出し、この腫瘤に４倍量の水を加えてホモゲナイ
ザーにかけ、遠心分離し、この濾液の濃縮物を、ＤＥＡ
Ｅ−Ｓｅｐｈａｃｅｌ（スエーデン国、ファルマシア社
、製造）によるイオンクロマトグラフィーにかけ、１０
１１Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ６，８）でメラニン生成抑制活
性物質を含有する両分を採取、濃縮し、更に、トヨパー
ル１ｔＷ４０（東京都、東ソー株式会社）によるゲル濾
過クロマトグラフィーにかけ、分子量１００乃至５００
のメラニン生成抑制活性画分を採取し、濃縮、凍結乾燥
して、固状のメラニン生成抑制物質を得た。

本品の色素細胞でのメラニン生成抑制活性は、固形物ｍ
ｇ当り約４．２単位であり、使用した株化細胞１００ｇ
当り約６５０単位の収量であった。

本品を用いて、その性質を調査したところ、次の通りで
あった。

ａ）作用 タイロシネースの酵素活性を実質的に抑制せず、色素細
胞でのメラニン生成抑制活性およびドーパ反応抑制活性
を示す ｂ）分子量 ゲル濾過法で１００乃至５００ Ｃ）紫外線吸収スペクトル 特徴的な極大吸収はない ｄ）熱安定性 １００℃５分間安定、６００℃２時間で色素細胞でのメ
ラニン生成抑制活性を失う ｅ）　ｐＨ安定性 ｐＨ２，０またはｐＨ１１，０で４℃１６時間安時間安
定剤に対する溶解性 水、メタノールに可溶 ｇ）物質の色 水溶液で無色乃至淡黄色 以上の結果から、本発明のメラニン生成抑制物質は、従
来知られているビタミンＣ１グルタチオン、システィン
などのタイロシネースの酵素活性抑制剤とは、明らかに
違った性質を有する新規なメラニン生成抑制物質である
。

実　験　２．　メラニン生成抑制効果の比較色素細胞の
メラニン生成抑制活性の測定方法に準じて、実験１の方
法で調製したメラニン生成抑制物質を１単位または３単
位ずつ使用し、各種メラノーマ由来の株化細胞、すなわ
ち、マウスメラノーマ由来細胞Ｂ−１６、ハムスターメ
ラノーマ由来細胞ＲＰＭ１１１３４６およびヒトメラノ
ーマ由来Ｍａ１ｍｓ−３Ｍを用いてメラニン生成抑制効
果を比較した。

対照区としては、メラニン生成抑制物質の無添加または
本物質の６００℃２時間処理したものを添加した区を設
けた。

メラニン生成抑制物質を添加した区は、対照区と比較し
て、その使用量に比例していずれも強いメラニン生成抑
制効果を示し、高い色白効果を発揮することが判明した
。

なお、タイロシネースの酵素活性抑制剤であるビタミン
Ｃ１グルタチオンおよびシスティンでは、本試験で、メ
ラニン抑制効果を示ざなかった。

実　験　３．　急性毒性試験 生後２０日のマウスを使用して、実験１の方法で得たメ
ラニン生成抑制物質の急性毒性を試験したところ、メラ
ニン生成抑制物質の毒性は極めて低く、腹腔内に注射し
た時のＬＤｓｏは、色素細胞でのメラニン生成抑制活性
で５，０００単位以上であることが判明した。

以上の実験から明らかなように、本発明のメラニン生成
抑制物質は、種を越えて強いメラニン生成抑制効果、即
ち、高い色白効果を発揮し、その有効量から見てその安
全性が極めて高い。

本発明のメラニン生成抑制物質を含有する色白剤は、成
人１日当りメラニン生成抑制物質用量として、０．００
１乃至１０，０００単位であり、好ましくは、筋肉注射
などの全身使用の場合には０．００１乃至１００単位、
内服剤などの経口使用の場合には、０．０１乃至１，０
００単位、外用剤、浴用剤、更には、乳液、クリームな
ど化粧品などの経皮または経粘皮使用の場合には、０．
１乃至１０，０００単位であるが、この量は用法、症状
などに応じて適宜増減することができる。

シミ、ソバカス、日焼けなどの局所性並びにアジソニス
ム（ａｄｄ　１ｓｏｎ　ｉｓｉ　）などの全身性色素沈
着症を予防または治療するため、メラニン生成抑制物質
単体の、または必要に応じて、メラニン生成抑制物質と
任意の材料、例えば生理活性物質、栄養剤、基材、賦形
剤などを併用した色白剤は、医薬品、化粧品などその目
的に応じて、または、使用形態に応じてその形状を自由
に選択できる。

例えば、注射剤は液剤または用量に注射用蒸留水などで
溶解して使用する凍結乾燥注射剤として、経口剤は、液
剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、錠剤などとして、経皮
剤は、液剤、乳液、クリーム、軟膏、およびクリームな
どを片面に塗ったパップ剤などの外用剤、また、浴用剤
、更には、化粧水、乳液、バック、クリームなどの化粧
品などとして用いることがで伊る。また、経皮使用方法
を採用する際には、メラニン生成抑制効果を高めるため
、イオン導入によってメラニン生成抑制物質の皮膚組織
への浸透を促進することも、必要ならば支持電解質を併
用してそのイオン導入の効果を高めることも有利に実施
できる。

また、必要に応じて、メラニン生成抑制物質とともに、
ビタミンＣ１ビタミンＥ１グルタチオン、システィン、
麹酸、胎盤エキス、グルコサミン誘導体、感光素２０１
号（岡山市、株式会社日本感光色素研究所製造）、コロ
イド硫黄、ハイドロキノン誘導体などの１種または２種
以上とを併用して、メラニン生成を抑制し、色白効果を
更に高めることも適宜選択できる。更には、サンスクリ
ーン剤を併用して、本則の色白効果を高めることも随意
である。

次に、本発明のメラニン生成抑制物質の製造方法につい
て、実施例Ａを述べる。

実施例Ａ−１ ヒト白血病由来の株化細胞Ｎａｎ＋ａｌｖａを、牛胎児
血清２０％を含むイーグルＭＥＭ培地（ｐＨ７，４）に
接種し、３７℃で常法に従い生体外（ｉｎ　ｖｉｔｒｏ
）に浮部培養した。

その培養後、細胞を遠心分離して採取し、これをホモゲ
ナイザーにかけ、膜濾過、イオン交換クロマトグラフィ
ー、ゲル濾過クロマトグラフィーにかけて精製し、濃縮
し、更に加熱殺菌、精密濾過して、メラニン生成抑制物
質含有液を得た。

氷晶の色素細胞でのメラニン生成抑制活性は、固形物ｍ
ｇ当り約０．６単位であり、使用した株化細胞１００ｇ
当り約５０単位の収量であった。

氷晶は、色白剤として、注射剤、経口剤、外用剤、浴用
剤などの医薬品、乳液、バック、クリ−ムなどの化粧品
などに利用され、シミ、ソバカス、日焼けなどの局所性
並びにアジソニスムなどの全身性色素沈着症の予防、治
療に高い色白効果を発揮する。

実施例Ａ−２ ハムスターの皮下にハムスターメラノーマ由来の株化細
胞ＲＰＭ１１８４６を移植し、その後通常の方法で飼育
した。皮下に生じた腫瘤を摘出し、実験１の方法に準じ
て、ホモゲナイザーにかけ、膜濾過、イオン交換クロマ
トグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィーにかけて精
製し、濃縮し、更に加熱殺菌、精密濾過、減圧乾燥して
、固状のメラニン生成抑制物質を得た。

氷晶の色素細胞でのメラニン生成抑制活性は、固形物ｍ
ｇ当り約３．２単位であり、使用した株化細胞１００ｇ
当り約２６０単位の収量であった。

氷晶は、実施例Ａ−１の場合と同様に色白剤として、医
薬品、化粧品などに利用され、局所性または全身性色素
沈着症の予防、治療に高い色白効果を発揮する。

実施例Ａ−３ 成長したヌードマウスの腹腔内に、ヒトメラノーマ由来
の株化細胞ＳＫ−ＭＥＬ−１を移植し、通常の方法で４
週間飼育した。腹腔内で増殖した腫瘍を採取し、実施例
Ａ−１と同様に処理して、メラニン生成抑制物質含有液
を得た。

氷晶の色素細胞でのメラニン生成抑制活性は、固形物ｍ
ｇ当り約４．１単位であり、使用した株化細胞１００ｇ
当り約４６０単位の収量であった。

氷晶は、実施例Ａ−１の場合と同様に、色白剤として、
医薬品、化粧品などに利用され、色素沈着症の予防、治
療に高い色白効果を発揮する。

実施例Ａ−４ 孔径０．５ミクロンのメンブランフィルタ−を設けた内
容量的１０＋ａｌのプラスチック製円筒型拡散チャンバ
ー内に、マウスメラノーマ由来の株化細胞Ｃ１ｏｎｅＭ
−３を接種し、生理食塩水を入れ、これを成長したラッ
トの腹腔内に埋設した。そのラットを通常の方法で４週
間飼育した後、その拡散チャンバーを取り出し増殖した
株化細胞を採取し、実施例Ａ−２と同様に処理して、固
状のメラニン生成抑制物質を得た。

氷晶の色素細胞でのメラニン生成抑制活性は、固形物ｍ
ｇ当り約３．３単位であり、使用した株化細胞１００ｇ
当り約２７０単位の収量であった。

氷晶は、実施例Ａ−２の場合と同様に、色白剤として、
医薬品、化粧品などに利用きれ、色素沈着症の予防、治
療に高い色白効果を発揮する。

次に、有効成分として、メラニン生成抑制物質を含有す
る色白剤について、実施例Ｂを述べる。

本色白剤に用いるメラニン生成抑制物質は、温血動物由
来の株化細胞から採取されたものが好ましい例として利
用できる。

実施例Ｂ−１注　射　剤 実験１の方法で調製したメラニン生成抑制物質１重量部
を２００重量部の生理食塩水に溶解し、常法に従って、
精製濾過し、この濾液を滅菌したガラス容器に２ｍｌず
つ充填して凍結乾燥し、これを密栓して凍結乾燥注射剤
を製造した。

氷晶は、用量に注射用無菌水で溶解して使用する。

氷晶は、シミ、ソバカス、日焼けなどの局所性並びにア
ジソニスムなどの全身性の色素沈着症の予防用、治療用
色白剤として有利に利用できる。

実施例Ｂ−２経　口　剤（錠剤） 実験１の方法で得たメラニン生成抑制物質３重量部を、
マルトース８２重量部、コーンスターチ６１重量部、シ
ョ糖脂肪酸エステル４重量部と均一に混合し、常法に従
って打錠して、１錠１５０＋ａｇの錠剤を製造した。

氷晶は、実施例Ｂ−１の場合と同様に色素沈着症の予防
用、治療用色白剤として有利に利用できる。

実施例Ｂ−３経　口　剤（カプセル剤）実施例Ａ−２の
方法で得たメラニン生成抑制物質１重量部、マルトース
１４７重量部、ショ糖脂肪酸エステル２重量部とを均一
に混合し、顆粒成形機にかけて顆粒とした後、常法に従
って、ゼラチンカプセルに封入して、１力プセル１５０
ｍｇ入のカプセル剤を製造した。

氷晶は、実施例Ｂ−１の場合と同様に色素沈着症の予防
用、治療用色白剤として有利に利用できる。

実施例Ｂ−４外　用　剤（軟膏） 実施例Ａ−２の方法で得たメラニン生成抑制物質５゜０
重量部をグリセリン１０．０重量部と均一に混合し、こ
の混合物を、ワセリン５０．０重量部、木ロウ１０．０
重量部、ラノリン１０．０重量部、ゴマ油１４．５重量
部およびハツカ油０．５重量部の混合物に加えて、更に
均一に混和して軟膏を製造した。

氷晶は、実施例Ｂ−２の場合と同様に色素沈着症の治療
用色白剤として、更には日焼は予防用色白剤などとして
も有利に利用できる。

実施例Ｂ−５外　用　剤（乳剤） 実施例Ａ−１の方法で得たメラニン生成抑制物質５゜０
重量部を、常法に従って、流動パラフィン１２．０重量
部、ラノリン４．０重量部、オレイン酸３．５重量部、
トリエタノールアミン１．０重量部、およびオクチルド
デシルミリステート３．０重量部とを均一に混合し、こ
れに防腐剤、香料の適量および精製水７１．５重量部に
加え、ホモゲナイザーにかけ、乳剤を製造した。

氷晶は、実施例Ｂ−４の場合と同様に、色素沈着症の予
防用、治療用色白剤として有利に利用できる。

実施例Ｂ−６外　用　剤（ローション剤）実施例Ａ−３
の方法で得たメラニン竺成抑制物質２゜０重量部を、常
法に従って、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油１．０重
量部、エタノール１５．０重量部、クエン酸０．１重量
部、クエン酸ナトリウム０．３重量部、１．３−ブチレ
ングリコール４．０重量部、ピロリドンカルボン酸ナト
リウム０．５重量部、防腐剤、香料の適量および精製水
７７．０重量部に均一に混合し、ローション剤を製造し
た。

氷晶は、実施例Ｂ−５の場合と同様にシミ、ソバカス、
日焼けなど色素沈着症の予防用、治療用色白剤として有
利に利用できる。

実施例Ｂ−７浴　用　剤 実施例Ａ−４の方法で得たメラニン生成抑制物質１重量
部を、エタノール８０重量部、精製水１９重量部および
着色量、香料の適量と混合し、浴用剤を製造した。

氷晶は、入浴用の湯に１００乃至１０．０００倍に希釈
して利用し、局所性または全身性色素沈着症の予防用、
治療用に好適である。また、氷晶は、入浴用の湯の場合
と同様に洗顔用水、化粧水などに希釈して利用しても色
白効果を発揮することがで営る。

実施例Ｂ−８化　粧　品（乳液） ポリオキシエチレンペヘニルエーデル０．５重量部、テ
トラオレイン酸ポリオキシエチレンソルビトール１．０
重量部、親油型モノステアリン酸グリセリン１，０重量
部、ステアリン酸０．５重量部、ベヘニルアルコール０
．５重量部、アボガド油１．０重量部、およびビタミン
Ｅ１防腐剤、香料の適量を、常法に従って加熱溶解し、
これに、実験１の方法で得たメラニン生成抑制物質１．
０重量部、１．３−ブチレングリコール５．０重量部、
カルボキシビニルポリマー０．１重量部および精製水８
５．３重量部を加え、ホモゲナイザーにかけ乳液を製造
した。

氷晶は、シミ、ソバカス、日焼けなどの色素沈着症の予
防用、治療用色白剤として有利に利用できる。

実施例Ｂ−９化　粧　品（パック） 実施例Ａ−３の方法で得たメラニン生成抑制物質２゜０
重量部を、常法に従って、ステアリン酸５重量部、ポリ
オキシエチレン硬化ヒマシ油０．５重量部、グリセリン
４．０重量部ポリビニルアルコール１５．０重量部、エ
タノール１０．０重量部、および精製水６７．０重量部
に均一に混合し、パックを製造した。

氷晶は、実施例Ｂ−８の場合と同様に色素沈着症の予防
用、治療用色白剤として有利に利用できる。

実施例Ｂ−１０化　粧　品（クリーム）モノステアリン
酸ポリオキシエチレングリコール２重量部、自己乳化型
モノステアリン酸グリセリン５重量部、ステアリン酸５
重量部、ベヘニルアルコール１重量部、流動パラフィン
１重量部、トリオクタン酸グリセリル１０重量部、およ
び防腐剤、香料の適量を、常法に従って加熱溶解し、こ
れに実施例Ａ−４の方法で得たメラニン生成抑制物質２
重量部、１．３−ブチレングリコール５重量部および精
製水７５重量部を加え、示モゲナイザーにかけフリーム
を製造した。

本島には、実施例Ｂ−８の場合と同様に、色素沈着症の
予防用、治療用色白剤として有利に利用できる。

Ｌ発明の効果］ 本文で述べたごとく、本発明は、タイロシネースの酵素
活性を実質的に抑制せず、色素細胞でのメラニン生成抑
制活性およびドーパ反応抑制活性を示す新規なメラニン
生成抑制物質の製造方法、および、有効成分としてその
メラニン生成抑制物質を含有する色白剤を確立するもの
である。

また、本メラニン生成抑制物質は、強いメラニン生成抑
制を示し、高い色白効果を発揮することから、シミ、ソ
バカス、日焼けなどの局所性並びにアジソニスムなどの
全身性色素沈着症の予防用、または、治療用色白剤とし
て、注射剤、経口剤、外用剤、浴用剤など医薬品並びに
乳液、パック、クリームなど化粧品などに利用して、高
い色白効果を発揮する。

更に、本メラニン生成抑制物質は、有効量からみて安全
性が極めて高く安心して利用できるとともに、熱、ｐＨ
に対して安定性が高く加熱殺菌、長期保存も容易であり
、工業的生産、利用にとって極めて有利な条件を備えて
おり、医薬品、化粧品などの分野における工業的意義は
きわめて大きい。

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. （１）温血動物由来の株化細胞を生体外で増殖させるか
   、またはヒト以外の温血動物体液の供給を受けながら増
   殖させ、得られる該細胞を破砕し、次いでこの破砕物か
   ら、タイロシネースの酵素活性を実質的に抑制せず、色
   素細胞でのメラニン生成抑制活性およびドーパ反応抑制
   活性を示す物質を採取することを特徴とするメラニン生
   成抑制物質の製造方法。
2. （２）温血動物由来の株化細胞が、温血動物のメラノー
   マ由来または白血病由来の株化細胞であることを特徴と
   する特許請求の範囲第（１）項記載のメラニン生成抑制
   物質の製造方法。
3. （３）メラニン生成抑制物質が ａ）作用 タイロシネースの酵素活性を実質的に抑制せず、色素細
   胞でのメラニン生成抑制活性およびドーパ反応抑制活性
   を示す ｂ）分子量 ゲル濾過法で１００乃至５００ ｃ）紫外線吸収スペクトル 特徴的な極大吸収はない ｄ）熱安定性 １００℃５分間安定、６００℃２時間で色素細胞でのメ
   ラニン生成抑制活性を失う ｅ）ｐＨ安定性 ｐＨ２．０またはｐＨ１１．０で４℃１６時間安定 ｆ）溶剤に対する溶解性 水、メタノールに可溶 ｇ）物質の色 水溶液で無色乃至淡黄色の性質を有していることを特徴
   とする特許請求の範囲第（１）項または第（２）項記載
   のメラニン生成抑制物質の製造方法。
4. （４）有効成分として、 ａ）作用 タイロシネースの酵素活性を実質的に抑制せず、色素細
   胞でのメラニン生成抑制活性およびドーパ反応抑制活性
   を示す ｂ）分子量 ゲル濾過法で１００乃至５００ ｃ）紫外線吸収スペクトル 特徴的な極大吸収はない ｄ）熱安定性 １００℃５分間安定、６００℃２時間で色素細胞でのメ
   ラニン生成抑制活性を失う ｅ）ｐＨ安定性 ｐＨ２．０またはｐＨ１１．０で４℃１６時間安定ｆ）
   溶剤に対する溶解性 水、メタノールに可溶 ｇ）物質の色 水溶液で無色乃至淡黄色 の性質を有しているメラニン生成抑制物質を含有せしめ
   た色白剤。
5. （５）メラニン生成抑制物質が、温血動物由来の株化細
   胞から採取されたものであることを特徴とする特許請求
   の範囲第（４）項記載の色白剤。
6. （６）色白剤が医薬品または化粧品であることを特徴と
   する特許請求の範囲第（４）項または第（５）項記載の
   色白剤。