JPH01199166A - 血中糖化ヘモグロビンの簡易精密分画測定法 - Google Patents
血中糖化ヘモグロビンの簡易精密分画測定法Info
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- JPH01199166A JPH01199166A JP2451288A JP2451288A JPH01199166A JP H01199166 A JPH01199166 A JP H01199166A JP 2451288 A JP2451288 A JP 2451288A JP 2451288 A JP2451288 A JP 2451288A JP H01199166 A JPH01199166 A JP H01199166A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、人の血液中に存在する糖化ヘモグロビンの筒
易精密分画測定法に関する。
易精密分画測定法に関する。
成人のヘモグロビンの糖化体、即ちＨｂＡ Ｓ画分は、
ヘモグロビン分子と糖及び糖誘導体分子が結合したもの
であり、この反応は赤血球の循環過程を通じて進行する
ので、その生成量は血中のＨ濃度を反映し、血糖値が高
いほど、またその期間が長いほど増加する。従って、Ｈ
ｂＡｌｃの量は、正常人の血液中より糖尿病患者の血液
中に多いことが知られている。
ヘモグロビン分子と糖及び糖誘導体分子が結合したもの
であり、この反応は赤血球の循環過程を通じて進行する
ので、その生成量は血中のＨ濃度を反映し、血糖値が高
いほど、またその期間が長いほど増加する。従って、Ｈ
ｂＡｌｃの量は、正常人の血液中より糖尿病患者の血液
中に多いことが知られている。
ＨｂＡ 、は３榎の成分、即ちＨｂＡｓ−、ＨｂＡｓｂ
及びＨｂＡ ＋ ｅからなり、この中で一番多く存在す
るのはＨｂＡｌ。である。１（ｂＡｌｃは、血液中のグ
ルコース量の経時的変化を反映する最も信頼できる指標
であることが知られており、糖尿病患者の血糖値管理の
経時的モニターとして極めて重要な意味をもつ。
及びＨｂＡ ＋ ｅからなり、この中で一番多く存在す
るのはＨｂＡｌ。である。１（ｂＡｌｃは、血液中のグ
ルコース量の経時的変化を反映する最も信頼できる指標
であることが知られており、糖尿病患者の血糖値管理の
経時的モニターとして極めて重要な意味をもつ。
従来の血中ヘモグロビンの簡易分画測定法としては、リ
ン酸塩でなる酸性塩及び塩基性塩を含み、その濃度比に
よりｐＨ７，０以下に調整され、かつ陽イオン濃度が０
．０３Ｍ〜０．０７Ｍの緩衝液からなる第１の溶離液と
、同じくリン酸塩でなる酸性塩及び塩基性塩を含み、そ
の濃度比によりＰＨ６，４〜７．７に調整され、かつ陽
イオン濃度が０．０８Ｍ〜０．１８Ｍの緩衝液からなる
第２の溶ａ液と、これらの溶離液と同じ塩類を含み、少
なくてもＰＨ，陽イオン濃度において前記第１のそれを
超えないカラム調整液とを用意し、該カラム調整液で平
衡化した弱酸性陽イオン交換樹脂（２００〜４００メツ
シユ）を充填してなるカラムに溶血血液を添加し、しか
る後、前記第１の溶離液を加えて）ＩｂＡｔ （ａ＋ｂ
）を溶出させ（第１画分とする）、次いで前記第２の溶
離液を加えて）ＩｂＡ 、、を溶出させて（第２画分と
する）、それぞれの溶出操作によって得られるそれぞれ
の画分について吸光度を測定しヘモグロビン濃度を求め
るか、又は前記第１の溶離液を単に予備洗浄に用い、第
２の溶離液による溶出液についてのみ吸光度を測定して
ヘモグロビン濃度を求めるという方法が知られている（
特開昭５６−９８６５８）。
ン酸塩でなる酸性塩及び塩基性塩を含み、その濃度比に
よりｐＨ７，０以下に調整され、かつ陽イオン濃度が０
．０３Ｍ〜０．０７Ｍの緩衝液からなる第１の溶離液と
、同じくリン酸塩でなる酸性塩及び塩基性塩を含み、そ
の濃度比によりＰＨ６，４〜７．７に調整され、かつ陽
イオン濃度が０．０８Ｍ〜０．１８Ｍの緩衝液からなる
第２の溶ａ液と、これらの溶離液と同じ塩類を含み、少
なくてもＰＨ，陽イオン濃度において前記第１のそれを
超えないカラム調整液とを用意し、該カラム調整液で平
衡化した弱酸性陽イオン交換樹脂（２００〜４００メツ
シユ）を充填してなるカラムに溶血血液を添加し、しか
る後、前記第１の溶離液を加えて）ＩｂＡｔ （ａ＋ｂ
）を溶出させ（第１画分とする）、次いで前記第２の溶
離液を加えて）ＩｂＡ 、、を溶出させて（第２画分と
する）、それぞれの溶出操作によって得られるそれぞれ
の画分について吸光度を測定しヘモグロビン濃度を求め
るか、又は前記第１の溶離液を単に予備洗浄に用い、第
２の溶離液による溶出液についてのみ吸光度を測定して
ヘモグロビン濃度を求めるという方法が知られている（
特開昭５６−９８６５８）。
しかし、この方法は第１画分と第２画分の分離が良くな
く、また溶出率も悪く溶離液を多量必要とするため、測
定時間が長いという問題点があり、このため第１画分と
第２画分の分離が良好で、しかも測定時間が短いＨｂＡ
ｌ−の測定方法の開発が望まれていた。
く、また溶出率も悪く溶離液を多量必要とするため、測
定時間が長いという問題点があり、このため第１画分と
第２画分の分離が良好で、しかも測定時間が短いＨｂＡ
ｌ−の測定方法の開発が望まれていた。
本発明方法の目的は、第１画分と第２画分の分離が良好
で、かつ測定時間が短い血中糖化ヘモグロビンの筒易精
密分画測定方法を提供することにある。即ち、平衡化緩
衝液のリン酸塩濃度と第１溶ｔａ液のｐＨ及びリン酸塩
濃度を種々変化させて実験を行なった結果、平衡化緩衝
液のリン酸塩濃度を高くし、第１溶離液のＰＨを上げて
リン酸塩濃度を低くするとき、特に緩衝液の陽イオン濃
度を０．０８Ｍ〜０．１２Ｍ、第１溶離液のｐ）ｌを７
．２〜７．５、陽イオン濃度を０．０１６Ｍ〜０．０２
７Ｍになるように調整するとき、第１画分と第２画分の
分離が良好であることを見出した。また、分離能が非常
に良いので、樹脂容量が１ｍＬの場合でも第１溶離液は
約４１１３！、、第２溶離液は約５ｍＬと少量であって
も分離され、測定時間が大幅に短縮できる測定方法を提
供することにある。
で、かつ測定時間が短い血中糖化ヘモグロビンの筒易精
密分画測定方法を提供することにある。即ち、平衡化緩
衝液のリン酸塩濃度と第１溶ｔａ液のｐＨ及びリン酸塩
濃度を種々変化させて実験を行なった結果、平衡化緩衝
液のリン酸塩濃度を高くし、第１溶離液のＰＨを上げて
リン酸塩濃度を低くするとき、特に緩衝液の陽イオン濃
度を０．０８Ｍ〜０．１２Ｍ、第１溶離液のｐ）ｌを７
．２〜７．５、陽イオン濃度を０．０１６Ｍ〜０．０２
７Ｍになるように調整するとき、第１画分と第２画分の
分離が良好であることを見出した。また、分離能が非常
に良いので、樹脂容量が１ｍＬの場合でも第１溶離液は
約４１１３！、、第２溶離液は約５ｍＬと少量であって
も分離され、測定時間が大幅に短縮できる測定方法を提
供することにある。
本発明は、リン酸塩でなる酸性塩及び塩基性塩を含み、
その濃度比によりｐＨ７，２〜７．５に￥Ａ整され、か
つ陽イオン濃度が０．０１６Ｍ〜０．０２７Ｍでリン酸
塩濃度が０．ＯＩＭ〜０．０１５Ｍの陰イオン性緩衝液
からなる第１の溶離液と、同じくリン酸塩でなる酸性塩
及び塩基性塩を含み、その濃度比によりｐＨ６，７に調
整され、かつリン酸塩濃度が０．０３０Ｍ〜０．０５０
Ｍで、それに食塩を加えてイオン濃度を調整し陽イオン
濃度が０．１０Ｍ〜０．１１Ｍの緩衝液からなる第２の
溶離液と、これらの溶離液と同じリン酸塩でなり、その
濃度比によりｐＨ６，５〜６．６に調整きれ、かつ陽イ
オン濃度が０、０８Ｍ〜０．１２Ｍ、好ましくは０．０
９３Ｍで、リン酸塩濃度が０．０６Ｍ〜０．０９Ｍ、好
ましくは０．０７Ｍであるカラム調整波とを用意し、該
カラム調整液で平衡化した弱酸性陽イオン交換樹脂を充
填してなるカラムに溶血血液を添加し、しかる後、前記
第１の溶離液を加えてＨｂＡ＋ （ａ＋ｂ）を溶出させ
、次いで前記第２の溶離液を加えて）ＩｂＡｔ−を溶出
させ、それぞれの）富山操作によって得られる溶出液に
ついて吸光度を測定してヘモグロビン濃度を求めること
を特徴とし、更に１００−２００メツシユ及び２００〜
４００メツシユの弱酸性陽イオン交換樹脂を約１：９−
約２：３（Ｖ／Ｖ）の割合で、好ましくは１：２（Ｖ／
Ｖ）の割合で混合することにより、分離能を低下させず
に溶出速度を速めることを特徴とする。
その濃度比によりｐＨ７，２〜７．５に￥Ａ整され、か
つ陽イオン濃度が０．０１６Ｍ〜０．０２７Ｍでリン酸
塩濃度が０．ＯＩＭ〜０．０１５Ｍの陰イオン性緩衝液
からなる第１の溶離液と、同じくリン酸塩でなる酸性塩
及び塩基性塩を含み、その濃度比によりｐＨ６，７に調
整され、かつリン酸塩濃度が０．０３０Ｍ〜０．０５０
Ｍで、それに食塩を加えてイオン濃度を調整し陽イオン
濃度が０．１０Ｍ〜０．１１Ｍの緩衝液からなる第２の
溶離液と、これらの溶離液と同じリン酸塩でなり、その
濃度比によりｐＨ６，５〜６．６に調整きれ、かつ陽イ
オン濃度が０、０８Ｍ〜０．１２Ｍ、好ましくは０．０
９３Ｍで、リン酸塩濃度が０．０６Ｍ〜０．０９Ｍ、好
ましくは０．０７Ｍであるカラム調整波とを用意し、該
カラム調整液で平衡化した弱酸性陽イオン交換樹脂を充
填してなるカラムに溶血血液を添加し、しかる後、前記
第１の溶離液を加えてＨｂＡ＋ （ａ＋ｂ）を溶出させ
、次いで前記第２の溶離液を加えて）ＩｂＡｔ−を溶出
させ、それぞれの）富山操作によって得られる溶出液に
ついて吸光度を測定してヘモグロビン濃度を求めること
を特徴とし、更に１００−２００メツシユ及び２００〜
４００メツシユの弱酸性陽イオン交換樹脂を約１：９−
約２：３（Ｖ／Ｖ）の割合で、好ましくは１：２（Ｖ／
Ｖ）の割合で混合することにより、分離能を低下させず
に溶出速度を速めることを特徴とする。
また、本発明は糖化ヘモグロビンの中でもＨｂＡ ｉ
ｃ値は、例えば糖尿病における血糖管理の指標として有
効であることに鑑み、前記第１の溶離液を単に予備洗浄
に用い、第２の溶離液による溶出液についてのみ吸光度
を測定してヘモグロビン濃度を求めることを特徴とする
。
ｃ値は、例えば糖尿病における血糖管理の指標として有
効であることに鑑み、前記第１の溶離液を単に予備洗浄
に用い、第２の溶離液による溶出液についてのみ吸光度
を測定してヘモグロビン濃度を求めることを特徴とする
。
弱酸性陽イオン交換樹脂としては室町化学社製（ＤＪａ
ＯマックＭＷＣ−１ヲ用い、１００−２００ メッシ
：Ｌ （Ｌｏｔ。
ＯマックＭＷＣ−１ヲ用い、１００−２００ メッシ
：Ｌ （Ｌｏｔ。
５４１５６）及び２００−４００メッシ：Ｌ （Ｌｏｔ
、５４１８６）を約Ｃ９（Ｖ／Ｖ）−約２：３（Ｖ／Ｖ
）の割合で混合し、好ましくは１：２（Ｖ／Ｖ）の割合
で混合し、カラム法により平衡化する。１００〜２００
メツシユ及び２００〜４００メツシユの割合が１：９以
下の場合は、流速が遅くなり測定時間が長くなる。また
、この割合が２：３以上の場合は、第１画分と第２画分
の分離が悪くなり、ＨｂＡｓｃのみの溶出が難しくなる
。
、５４１８６）を約Ｃ９（Ｖ／Ｖ）−約２：３（Ｖ／Ｖ
）の割合で混合し、好ましくは１：２（Ｖ／Ｖ）の割合
で混合し、カラム法により平衡化する。１００〜２００
メツシユ及び２００〜４００メツシユの割合が１：９以
下の場合は、流速が遅くなり測定時間が長くなる。また
、この割合が２：３以上の場合は、第１画分と第２画分
の分離が悪くなり、ＨｂＡｓｃのみの溶出が難しくなる
。
平衡化種（釘液としては、リン酸−水素ナトリウム（Ｈ
ａＨｚＰＯａ）及びリン酸二水素ナトリウム（Ｎａ２Ｈ
ＰＯ＋）を含む水溶液を用い、ｐＨ６，５−６，８、か
つ陽イオン濃度カ０．０８Ｍ−０．１２Ｍテ、リン酸塩
濃度力０．０６Ｍ〜０．０９Ｍになるように調整する。
ａＨｚＰＯａ）及びリン酸二水素ナトリウム（Ｎａ２Ｈ
ＰＯ＋）を含む水溶液を用い、ｐＨ６，５−６，８、か
つ陽イオン濃度カ０．０８Ｍ−０．１２Ｍテ、リン酸塩
濃度力０．０６Ｍ〜０．０９Ｍになるように調整する。
ＰＨが６．７以上ではＨｂＡ 、。
のみの分離が不可能となる。
第１溶離液は、ｐ）１７．２〜７．５、陽イオン濃度が
０．０１８Ｍ〜０．０２７Ｍで、リン酸塩濃度が０．Ｏ
ＩＭ〜０．０１５Ｍになるように調整する。
０．０１８Ｍ〜０．０２７Ｍで、リン酸塩濃度が０．Ｏ
ＩＭ〜０．０１５Ｍになるように調整する。
第２溶離液は、ｐＨ６，７、リン酸塩濃度が０．０３Ｍ
〜０．０５翼になるように調整し、更に食塩を加えてイ
オン濃度を調整する。食塩を用いるのは、リン酸塩だけ
でイオン濃度を調整すると、ＨｂＡｓが）容出しやす（
なってしまうためである〇 実施例１ 朋」Ｌ狡１」」乱立− 平衡化緩衝液で予め処理したムロマックＭＭＣ−１。
〜０．０５翼になるように調整し、更に食塩を加えてイ
オン濃度を調整する。食塩を用いるのは、リン酸塩だけ
でイオン濃度を調整すると、ＨｂＡｓが）容出しやす（
なってしまうためである〇 実施例１ 朋」Ｌ狡１」」乱立− 平衡化緩衝液で予め処理したムロマックＭＭＣ−１。
１００〜２００メツシユ１容、２００−４００メツシユ
２容の混合物０．９＋＋＋Ｉ！、ｔ−図１のカラムに充
填し、溶血血ｆｆ１ｏ。
２容の混合物０．９＋＋＋Ｉ！、ｔ−図１のカラムに充
填し、溶血血ｆｆ１ｏ。
μＬｆ−添加、第１溶離液４１１１Ｊ！、、次いで第２
溶離液５ＩＩＩＬを添加し流速を測定した。溶出時間は
第１溶離液１２分、第２溶離液１５分であり、分画も良
好であ）た。
溶離液５ＩＩＩＬを添加し流速を測定した。溶出時間は
第１溶離液１２分、第２溶離液１５分であり、分画も良
好であ）た。
実施例２
パ と １ の
・ムロマックＭＷＣ−１，１００−２００メツシユ１容
、２００〜４００メツシユ２容をリン酸塩（Ｎａ２）Ｉ
ｒＯ２−ＮａＨ２ＰＯ４）緩衝液０．０６Ｍ〜０．１０
Ｍ（陽イオン濃度０．０８）１〜０．１３５）１）、ｐ
Ｈ６，５で平衡化し、図１のカラムに０．９ｍＬ充填し
た。
・ムロマックＭＷＣ−１，１００−２００メツシユ１容
、２００〜４００メツシユ２容をリン酸塩（Ｎａ２）Ｉ
ｒＯ２−ＮａＨ２ＰＯ４）緩衝液０．０６Ｍ〜０．１０
Ｍ（陽イオン濃度０．０８）１〜０．１３５）１）、ｐ
Ｈ６，５で平衡化し、図１のカラムに０．９ｍＬ充填し
た。
第１溶離液としてリン酸塩（Ｎａ２ＨＰＯ４−ＮａＨ２
ＰＯ４）緩衝ｉｏ、ｏＩＭ〜０．０１５Ｍ（ｇＪイオン
濃度０．０１６Ｍ〜０．０２７Ｍ）、ｐ）Ｉ７．２〜７
．５を４＋ａＬ用いた。図２に第１画分の比率を示した
が、何れの第１ｉｆ鑓液を用いた場合にも、平衡化８１
回液として０．０７Ｍリン酸塩（Ｎａ２）ＩＰＯａ−Ｈ
ａＨｚＰＯａ）［［液（ｐＨ６，５）を用いた場合にお
いて、ＨＰＬＣによるＨｂＡ１．とＨｂＡ ｔ ｂの合
計値と一致する値が得られた。
ＰＯ４）緩衝ｉｏ、ｏＩＭ〜０．０１５Ｍ（ｇＪイオン
濃度０．０１６Ｍ〜０．０２７Ｍ）、ｐ）Ｉ７．２〜７
．５を４＋ａＬ用いた。図２に第１画分の比率を示した
が、何れの第１ｉｆ鑓液を用いた場合にも、平衡化８１
回液として０．０７Ｍリン酸塩（Ｎａ２）ＩＰＯａ−Ｈ
ａＨｚＰＯａ）［［液（ｐＨ６，５）を用いた場合にお
いて、ＨＰＬＣによるＨｂＡ１．とＨｂＡ ｔ ｂの合
計値と一致する値が得られた。
実施例３
２゛ の組 とＨｂＡ イ會
０．０７Ｍ〜０．０９Ｍリン酸塩（Ｎａ２ＨＰＯ４−Ｈ
ａＨｚＰＯａ）緩衝液（ｐ）１６．５）テ平衡化し？１
． ムｌ：ｌ マックＭＷＣ−１、１００−２００メツ
シュｌ容、２００−４００メツシユ２容の混合物０．９
ｍＬを図１のカラムに充填し、第１溶＃２１！としてリ
ン酸塩（Ｎａ２）ＩｒＯ２−ＨａＨｚＰＯａ） Ｗｌ
ａ液０．ＯＩＭ〜０．０１５Ｍ（ｐＨ７．２〜７．５）
を４ｍＪ−第２溶離液として０．０４Ｍリン酸塩（Ｎａ
２ＨＰＯ４−ＨａＨｚＰＯａ） ｉｉ ？ｔｆ液に０．
０２Ｍ〜０．０７Ｍノ食塩を加えた溶液５＋ａｌを用い
て、溶血血液を分画した場合の第２画分の比率を図３に
示した。第２画分の比率は、何れの平衡化条件において
も第２溶離液の食塩濃度の増加に伴りて上昇したが、食
塩０．０３Ｍ〜０．０６Ｍの範囲で）ＩｂＡ＋ｃ値が妥
当な値を示した。
ａＨｚＰＯａ）緩衝液（ｐ）１６．５）テ平衡化し？１
． ムｌ：ｌ マックＭＷＣ−１、１００−２００メツ
シュｌ容、２００−４００メツシユ２容の混合物０．９
ｍＬを図１のカラムに充填し、第１溶＃２１！としてリ
ン酸塩（Ｎａ２）ＩｒＯ２−ＨａＨｚＰＯａ） Ｗｌ
ａ液０．ＯＩＭ〜０．０１５Ｍ（ｐＨ７．２〜７．５）
を４ｍＪ−第２溶離液として０．０４Ｍリン酸塩（Ｎａ
２ＨＰＯ４−ＨａＨｚＰＯａ） ｉｉ ？ｔｆ液に０．
０２Ｍ〜０．０７Ｍノ食塩を加えた溶液５＋ａｌを用い
て、溶血血液を分画した場合の第２画分の比率を図３に
示した。第２画分の比率は、何れの平衡化条件において
も第２溶離液の食塩濃度の増加に伴りて上昇したが、食
塩０．０３Ｍ〜０．０６Ｍの範囲で）ＩｂＡ＋ｃ値が妥
当な値を示した。
実施例４
ヘモグロビンの 画像
０．０７Ｍリン酸塩（Ｎａ２）ＩＰＯ４−ＮａＨ２ＰＯ
４）緩衝液（ｐＨ６，５）で平衡化した樹脂０．９Ｊを
図１のカラムに充填、第１溶離液としてリン酸塩（Ｈａ
２ＨＰＯ４−ＮａＨ２ＰＯ４） ｆｌ ｉＵＵＯ３ＯＩ
Ｍ〜０．０１５Ｍ（ｐＨ７．２〜７．５）’ｔ ４ ｌ
ｌ１ｒｌ／、ｇ２ｉＷ離ｉとして０．０４Ｍリン酸塩（
Ｎａ２）ＩＰ０４−Ｈａ）１２ＰＯ４）緩衝液に０．０
５Ｍ〜０．０５５Ｍの食塩を加えた溶液５ｍＬを用いた
場合の溶血検体の分画像を図４に示した。何れの場合に
も第１画分（ＨｂＡｌ（−＋ｂ＞）と第２画分（ＨｂＡ
ｔｃ）の分離は良好であり、かつ第２画分には目的以外
のヘモグロビン分画の混入は殆ど認められなかった。
４）緩衝液（ｐＨ６，５）で平衡化した樹脂０．９Ｊを
図１のカラムに充填、第１溶離液としてリン酸塩（Ｈａ
２ＨＰＯ４−ＮａＨ２ＰＯ４） ｆｌ ｉＵＵＯ３ＯＩ
Ｍ〜０．０１５Ｍ（ｐＨ７．２〜７．５）’ｔ ４ ｌ
ｌ１ｒｌ／、ｇ２ｉＷ離ｉとして０．０４Ｍリン酸塩（
Ｎａ２）ＩＰ０４−Ｈａ）１２ＰＯ４）緩衝液に０．０
５Ｍ〜０．０５５Ｍの食塩を加えた溶液５ｍＬを用いた
場合の溶血検体の分画像を図４に示した。何れの場合に
も第１画分（ＨｂＡｌ（−＋ｂ＞）と第２画分（ＨｂＡ
ｔｃ）の分離は良好であり、かつ第２画分には目的以外
のヘモグロビン分画の混入は殆ど認められなかった。
第１図は、本発明方法で用いるミニカラムを示す。
第２図は、平衡化条件の異なる樹脂の第１溶離液による
分画を示す。第２図の左図は第１溶離液１０ｍＭ、右図
は１５ｍＭの場合を示す。 第３図は、第２溶ｓ液の食塩濃度と）ｌｂＡｌ。値との
関係を示す図である。第３図の左図、中央図、右図は、
それぞれ平衡化リン酸塩濃度が７０１１ＩＭ、８０ＩＩ
Ｍ、９０ｍＭの場合を示す。 第４図は、７０ｍＭリン酸塩平衡化樹脂によるクロマト
グラムを示す。 図１ ミニカラムの寸法 （単位ｍ＠） １．０ 図２ 平衡化条件の異なる樹脂の 第１溶Ｉｌ！を液による分画 吸光度（４１５止） 平衡化緩、樹液のリン酸塩濃度（ｐＨ６，５）１ｆｆ１
４ ７０ｍＭリン酸塩平衡化（Ｓ）脂によるクロマトグ
ラム第１溶離液 第２溶離液 吸光度（４１５ｎＩＩｌ） ｒ） ン１ｉ３ｊｆｉ
ｐＨ食塩Ｍ１溶１ｉｉＩＩ液 第２溶
離液手 続 補 正 書 （方式）％式％ １、事件の表示 昭和６３年特許９２４５１２号 ２、発明の名称 血中糖化ヘモグロビンの簡易精密分画測定法３、補正を
する者 事件との関係 特許出願人 住所 東京都千代田区岩本町２丁目２番３号昭和６３年
４月２６日（発送臼） ５、補正の対象 図面 ６、補正の内容 第３図を鮮明に描いたもの
分画を示す。第２図の左図は第１溶離液１０ｍＭ、右図
は１５ｍＭの場合を示す。 第３図は、第２溶ｓ液の食塩濃度と）ｌｂＡｌ。値との
関係を示す図である。第３図の左図、中央図、右図は、
それぞれ平衡化リン酸塩濃度が７０１１ＩＭ、８０ＩＩ
Ｍ、９０ｍＭの場合を示す。 第４図は、７０ｍＭリン酸塩平衡化樹脂によるクロマト
グラムを示す。 図１ ミニカラムの寸法 （単位ｍ＠） １．０ 図２ 平衡化条件の異なる樹脂の 第１溶Ｉｌ！を液による分画 吸光度（４１５止） 平衡化緩、樹液のリン酸塩濃度（ｐＨ６，５）１ｆｆ１
４ ７０ｍＭリン酸塩平衡化（Ｓ）脂によるクロマトグ
ラム第１溶離液 第２溶離液 吸光度（４１５ｎＩＩｌ） ｒ） ン１ｉ３ｊｆｉ
ｐＨ食塩Ｍ１溶１ｉｉＩＩ液 第２溶
離液手 続 補 正 書 （方式）％式％ １、事件の表示 昭和６３年特許９２４５１２号 ２、発明の名称 血中糖化ヘモグロビンの簡易精密分画測定法３、補正を
する者 事件との関係 特許出願人 住所 東京都千代田区岩本町２丁目２番３号昭和６３年
４月２６日（発送臼） ５、補正の対象 図面 ６、補正の内容 第３図を鮮明に描いたもの
Claims (2)
- （１）リン酸塩でなる酸性塩及び塩基性塩を含み、その
濃度比によりｐＨ７．２〜７．５に調整され、かつ陽イ
オン濃度が０．０１６Ｍ〜０．０２７Ｍの緩衝液からな
る第１の溶離液と、同じくリン酸塩でなる酸性塩及び塩
基性塩を含み、その濃度比によりｐＨ６．７に調整され
、かつリン酸塩濃度が０．０３０Ｍ〜０．０５０Ｍで、
それに食塩を加えイオン濃度を調整して陽イオン濃度が
０．１０Ｍ〜０．１１Ｍの緩衝液からなる第２の溶離液
と、これらの溶離液と同じリン酸塩でなり、その濃度比
によりｐＨ６．５〜６．６に調整され、かつ陽イオン濃
度が０．０８Ｍ〜０．１２Ｍのカラム調整液とを用意し
、該カラム調整液で平衡化した弱酸性陽イオン交換樹脂
を充填してなるカラムに溶血血液を添加し、しかる後、
前記第１の溶離液を加えてＨｂＡ＿１＿（＿ａ＿＋＿ｂ
＿）を溶出させ、次いで前記第２の溶離液を加えてＨｂ
Ａ＿１＿ｃを溶出させ、それぞれの溶出操作によって得
られる溶出液について吸光度を測定してヘモグロビン濃
度を求めることを特徴とする血中糖化ヘモグロビンの簡
易精密分画測定法。 - （２）リン酸塩でなる酸性塩及び塩基性塩を含み、その
濃度比によりｐＨ７．２〜７．５に調整され、かつ陽イ
オン濃度が０．０１６Ｍ〜０．０２７Ｍの緩衝液からな
る第１の溶離液と、同じくリン酸塩でなる酸性塩及び塩
基性塩を含み、その濃度比によりｐＨ６．７に調整され
、かつリン酸塩濃度が０．０３０Ｍ〜０．０５０Ｍで、
それに食塩を加えイオン濃度を調整して陽イオン濃度が
０．１０Ｍ〜０．１１Ｍの緩衝液からなる第２の溶離液
と、これらの溶離液と同じリン酸塩でなり、その濃度比
によりｐＨ６．５〜６．６に調整され、かつ陽イオン濃
度が０．０８Ｍ〜０．１２Ｍのカラム調整液とを用意し
、該カラム調整液で平衡化した弱酸性陽イオン交換樹脂
を充填してなるカラムに溶血血液を添加し、しかる後、
前記第１の溶離液を加えてＨｂＡ＿１＿（＿ａ＿＋＿ｂ
＿）などを除去する予備洗浄を行ない、次いで前記第２
の溶離液を加えてＨｂＡ＿１＿ｃを溶出させ、該第２の
溶離液による溶出操作によって得られる溶出液について
吸光度を測定してヘモグロビンＡ＿１＿ｃ濃度を求める
ことを特徴とする血中糖化ヘモグロビンの簡易精密分画
測定法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2451288A JPH01199166A (ja) | 1988-02-04 | 1988-02-04 | 血中糖化ヘモグロビンの簡易精密分画測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2451288A JPH01199166A (ja) | 1988-02-04 | 1988-02-04 | 血中糖化ヘモグロビンの簡易精密分画測定法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01199166A true JPH01199166A (ja) | 1989-08-10 |
Family
ID=12140225
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2451288A Pending JPH01199166A (ja) | 1988-02-04 | 1988-02-04 | 血中糖化ヘモグロビンの簡易精密分画測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH01199166A (ja) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS55101050A (en) * | 1979-01-26 | 1980-08-01 | Sogo Seibutsu Igaku Kenkyusho:Kk | Simple dispensation measuring method for hemoglobin glucoside in blood |
| JPS5698658A (en) * | 1980-01-11 | 1981-08-08 | Sogo Seibutsu Igaku Kenkyusho:Kk | Method of simple fractional determination of glucosidated hemoglobin in blood |
| JPS5872055A (ja) * | 1981-10-26 | 1983-04-28 | Sogo Seibutsu Igaku Kenkyusho:Kk | 血中ヘモグロビンａ↓１の簡易測定法 |
-
1988
- 1988-02-04 JP JP2451288A patent/JPH01199166A/ja active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS55101050A (en) * | 1979-01-26 | 1980-08-01 | Sogo Seibutsu Igaku Kenkyusho:Kk | Simple dispensation measuring method for hemoglobin glucoside in blood |
| JPS5698658A (en) * | 1980-01-11 | 1981-08-08 | Sogo Seibutsu Igaku Kenkyusho:Kk | Method of simple fractional determination of glucosidated hemoglobin in blood |
| JPS5872055A (ja) * | 1981-10-26 | 1983-04-28 | Sogo Seibutsu Igaku Kenkyusho:Kk | 血中ヘモグロビンａ↓１の簡易測定法 |
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