JPH01202291A - ダクチロサイクリンａおよびダクチロサイクリンｂ - Google Patents
ダクチロサイクリンａおよびダクチロサイクリンｂInfo
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- JPH01202291A JPH01202291A JP63327525A JP32752588A JPH01202291A JP H01202291 A JPH01202291 A JP H01202291A JP 63327525 A JP63327525 A JP 63327525A JP 32752588 A JP32752588 A JP 32752588A JP H01202291 A JPH01202291 A JP H01202291A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はダクチロサイクリン（ｄａｃｔｙｌｏｃｙｃｌ
ｉｎｅ ）Ａおよびデクチロサイクリン８１更に詳しく
は、ダクチロスポランギウム（Ｄａｃｔｙｌｏｓｐｏｒ
ａｎｇｉｕｍ ）属微生物（Ａ、Ｔ、ｃ、ｃ、ｋ・アメ
リカン・タイプ・カルチャー・コレクション）Ａ５３６
９３）の菌株の培養によって得られる抗生物質ＥＭＳ
５８６に含まれる新規で有用な両成分に関する。
ｉｎｅ ）Ａおよびデクチロサイクリン８１更に詳しく
は、ダクチロスポランギウム（Ｄａｃｔｙｌｏｓｐｏｒ
ａｎｇｉｕｍ ）属微生物（Ａ、Ｔ、ｃ、ｃ、ｋ・アメ
リカン・タイプ・カルチャー・コレクション）Ａ５３６
９３）の菌株の培養によって得られる抗生物質ＥＭＳ
５８６に含まれる新規で有用な両成分に関する。
本発明によれば、Ａ、Ｔ、Ｃ，Ｃ，に寄託しているダク
チロスポランギウム属微生物（Ａ、Ｔ、Ｃ，Ｃ，Ａ ５
３６９３）の菌株の培養により、抗生物質ＥＭＳ ５８
６が得られる。このＥＭＳ ５８６は、これを分析する
と、４つの成分で構成されることがわかった。これらの
成分の２つは、７−クロロ−４−ジメチルアミノ−８−
メトキシ−１，４，４ａ 、５．５ａ 、６゜１１．１
２ａ −オクタヒトｏ−３，４ａ、６．１０．１２゜
１２ａ−ヘキサヒドロキシ−６−メチル−１，１１−ジ
オキソ−２−ナフタセンカルボキサミド（以下、４ａ−
ヒドロキシ−８−メトキシ−ＣＴＣと称す）と、ＰＣＴ
出願公開第ＷＯ３７１００８３２号（１９８７年２月１
２日公開）に記載の化合物である。他の２つの成分はダ
クチロサイクリンＡおよびダクチロサイクリンＢであっ
て、これらはダラム陽性菌（テトラサイクリン−耐性菌
を含む）に対して活性を有する。
チロスポランギウム属微生物（Ａ、Ｔ、Ｃ，Ｃ，Ａ ５
３６９３）の菌株の培養により、抗生物質ＥＭＳ ５８
６が得られる。このＥＭＳ ５８６は、これを分析する
と、４つの成分で構成されることがわかった。これらの
成分の２つは、７−クロロ−４−ジメチルアミノ−８−
メトキシ−１，４，４ａ 、５．５ａ 、６゜１１．１
２ａ −オクタヒトｏ−３，４ａ、６．１０．１２゜
１２ａ−ヘキサヒドロキシ−６−メチル−１，１１−ジ
オキソ−２−ナフタセンカルボキサミド（以下、４ａ−
ヒドロキシ−８−メトキシ−ＣＴＣと称す）と、ＰＣＴ
出願公開第ＷＯ３７１００８３２号（１９８７年２月１
２日公開）に記載の化合物である。他の２つの成分はダ
クチロサイクリンＡおよびダクチロサイクリンＢであっ
て、これらはダラム陽性菌（テトラサイクリン−耐性菌
を含む）に対して活性を有する。
本発明に係るダクチロサイクリンＡおよびダクチロサイ
クリンＢの分析結果は、添付図面に示されている。
クリンＢの分析結果は、添付図面に示されている。
第１図は、ダクチロサイクリンＡの臭化カリウムの赤外
スペクトル、 第２Ａ〜Ｃ図は、ダクチロサイクリンＡの陽イオンモー
ドの速原子衝撃マススヘクト／Ｌ／ （ｆａｓｔａｔｏ
ｍ ｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒ
ｕｍ ）、第３Ａ〜Ｃ図は、ダクチロサイクリンＡの陰
イオンモードの速原子衝撃マススペクトル、第４Ａ、Ｂ
図は、ダクチロサイタリンＡのシュウチリウム置換メタ
ノール中の６７．５ＭＨｚ、 Ｃ−ＮＭＲスペクトル
、 第５図は、ダクチロサイクリンＡのシュウチリウム置換
メタノール中の４００ ＭＨｚ、 Ｈ−ＮＭＲスペクト
ル、 第６図は、ダクチロサイクリンＢの臭化カリウムの赤外
スペクトル、 第７Ａ〜Ｃ図は、ダクチロサイクリンＢの陽イオンモー
ドの速原子衝撃マススペクトル１、第８Ａ〜Ｃ図は、ダ
クチロサイクリンＢの陰イオンモードの速原子衝撃マス
スペクトル、および第９図は、ダクチロサイクリンＢの
シュウチリウム置換メタノール中の４００ＭＨｚ、’Ｈ
−ＮＭＲスペクトルである。
スペクトル、 第２Ａ〜Ｃ図は、ダクチロサイクリンＡの陽イオンモー
ドの速原子衝撃マススヘクト／Ｌ／ （ｆａｓｔａｔｏ
ｍ ｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒ
ｕｍ ）、第３Ａ〜Ｃ図は、ダクチロサイクリンＡの陰
イオンモードの速原子衝撃マススペクトル、第４Ａ、Ｂ
図は、ダクチロサイタリンＡのシュウチリウム置換メタ
ノール中の６７．５ＭＨｚ、 Ｃ−ＮＭＲスペクトル
、 第５図は、ダクチロサイクリンＡのシュウチリウム置換
メタノール中の４００ ＭＨｚ、 Ｈ−ＮＭＲスペクト
ル、 第６図は、ダクチロサイクリンＢの臭化カリウムの赤外
スペクトル、 第７Ａ〜Ｃ図は、ダクチロサイクリンＢの陽イオンモー
ドの速原子衝撃マススペクトル１、第８Ａ〜Ｃ図は、ダ
クチロサイクリンＢの陰イオンモードの速原子衝撃マス
スペクトル、および第９図は、ダクチロサイクリンＢの
シュウチリウム置換メタノール中の４００ＭＨｚ、’Ｈ
−ＮＭＲスペクトルである。
本発明において、抗生物質ＥＭＳ ５８６の製造に用い
る微生物は、沼地水に見られる腐葉物から単離したダク
チロスポランギウムの菌株である。
る微生物は、沼地水に見られる腐葉物から単離したダク
チロスポランギウムの菌株である。
この微生物の二次培養は、メリーランド州、ロックビル
のＡ、Ｔ、Ｃ，Ｃ，の永久保存コレクションから入手し
うる。この寄託番号は、Ａ、Ｔ、Ｃ，Ｃ，Ａ ５３６９
３である。この微生物以外に、該微生物の変異菌株（た
とえばＸ線、紫外線照射、遺伝操作またはナイトロジエ
ン・マスタードの使用によって得られる変異菌株）も使
用でき、これを培養することによりＥＭＳ ５８６を製
造する。
のＡ、Ｔ、Ｃ，Ｃ，の永久保存コレクションから入手し
うる。この寄託番号は、Ａ、Ｔ、Ｃ，Ｃ，Ａ ５３６９
３である。この微生物以外に、該微生物の変異菌株（た
とえばＸ線、紫外線照射、遺伝操作またはナイトロジエ
ン・マスタードの使用によって得られる変異菌株）も使
用でき、これを培養することによりＥＭＳ ５８６を製
造する。
腐葉物に存在するダクチロスポランギウム属微生物（Ａ
、Ｔ、Ｃ，Ｃ，悪５３６９３）を単離するには、先ず腐
葉物を殺菌希釈剤（たとえば０．０１％のゼラチンを含
有する緩衝食塩水）に懸濁し、７０℃で２０分間培養す
ることにより行うことができる。次いで懸濁液を栄養培
地に塗りつけ、シクロヘキシイミドを補給する。培地の
組成は、以下の通りである。
、Ｔ、Ｃ，Ｃ，悪５３６９３）を単離するには、先ず腐
葉物を殺菌希釈剤（たとえば０．０１％のゼラチンを含
有する緩衝食塩水）に懸濁し、７０℃で２０分間培養す
ることにより行うことができる。次いで懸濁液を栄養培
地に塗りつけ、シクロヘキシイミドを補給する。培地の
組成は、以下の通りである。
組成分 ＪＫ２Ｈ
ＰＯ４０，７ Ｋ Ｈ２Ｐ ０４ ０
．３Ｍｇ ＳＯ４・７ Ｈ２００，２１ ＦｅＳＯ４” ７ Ｈ２Ｏ０，Ｏｌ ＺｎＳＯ４” ７ Ｈ２Ｏ０，０２ ＭｎＣ６２・４ Ｈ２Ｏ２，００１５ 寒天 ２０米 コロイドキチン （１，２５％溶液） ４０ｍｆ
ｆ１蒸留水 ９６０ｄシク
ロヘキシイミド００．１ 往来〕 メツカー・Ｎ、 Ｓ、およびＴ、クロスのＪ、
Ａｐｐｌ。
ＰＯ４０，７ Ｋ Ｈ２Ｐ ０４ ０
．３Ｍｇ ＳＯ４・７ Ｈ２００，２１ ＦｅＳＯ４” ７ Ｈ２Ｏ０，Ｏｌ ＺｎＳＯ４” ７ Ｈ２Ｏ０，０２ ＭｎＣ６２・４ Ｈ２Ｏ２，００１５ 寒天 ２０米 コロイドキチン （１，２５％溶液） ４０ｍｆ
ｆ１蒸留水 ９６０ｄシク
ロヘキシイミド００．１ 往来〕 メツカー・Ｎ、 Ｓ、およびＴ、クロスのＪ、
Ａｐｐｌ。
Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、、５２ ： ２０９〜２１８頁、
１９８２年の記載に準じて製造する 未来）濾過殺菌を行い、予め１２１℃で３０分間殺菌し
た培地へ加える ２８℃で８日間の培養後、平板サンプルからダクチロス
ポランギウム属微生物（Ａ、Ｔ、Ｃ，Ｃ，Ａ ５３６９
３）のコロニーを単離し、下記組成からなる寒天培地に
移す。
１９８２年の記載に準じて製造する 未来）濾過殺菌を行い、予め１２１℃で３０分間殺菌し
た培地へ加える ２８℃で８日間の培養後、平板サンプルからダクチロス
ポランギウム属微生物（Ａ、Ｔ、Ｃ，Ｃ，Ａ ５３６９
３）のコロニーを単離し、下記組成からなる寒天培地に
移す。
組成分 Ｌグルコー
ス ｌ可溶スターチ
２４ビーフエキス
３トリプトン
５酵母エキス
５ＣａＣＯ３４ 水道水 １ｅ次に、
培地を１２１℃のオートクレーブで２０分間殺菌する。
ス ｌ可溶スターチ
２４ビーフエキス
３トリプトン
５酵母エキス
５ＣａＣＯ３４ 水道水 １ｅ次に、
培地を１２１℃のオートクレーブで２０分間殺菌する。
このダクチロスポランギウム属微生物（Ａ、Ｔ、Ｃ。
Ｃ，＆ ５３６９３ ）は、寒天表面の植物性菌糸から
直接、小さな指状の胞子のうの発生によって特徴づけら
れる。胞子のうは、リンゴ酸カルシウム寒天（ワックス
マン・Ｓ、Ａ、の「放射菌：最新情報の要約（Ｔｈｅ
Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ ： ａ Ｓｕｍｍａｒｙ
ｏｆ ＣｕｒｒｅｎｔＫｎｏｗｌｅｄｇｅ ） Ｊ
、ロナルド・プレス、ニュー Ｅｌ −り州、１９６７
年）および土壌抽出寒天（ワックスマン−Ｓ＝Ａ、の［
放射菌（Ｔｈｅ Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ ）］、
Ｖｏ１．ＩＩ、属および種の分類、同定および解説、ウ
ィリアムズ・アンド・ウィルキンズ・カンパニー、ボル
チモア州、１９６１年）で豊富に生産される。各胞子の
うば、運動能力のあるまっすぐＩＣｔ２／ｖり３〜４つ
の胞子を含有する。また培養によって、植物性菌糸の横
側に産生ずる球状体が得られる。これらの球状体の顕微
鏡試験によって、その中の無定形集団が胞子の中へ発育
しないことが明らかである。真性胞子はリンゴ酸カルシ
ウム寒天や土壌抽出寒天において優勢で、これらの媒地
に幾つかの球状体が見られる。
直接、小さな指状の胞子のうの発生によって特徴づけら
れる。胞子のうは、リンゴ酸カルシウム寒天（ワックス
マン・Ｓ、Ａ、の「放射菌：最新情報の要約（Ｔｈｅ
Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ ： ａ Ｓｕｍｍａｒｙ
ｏｆ ＣｕｒｒｅｎｔＫｎｏｗｌｅｄｇｅ ） Ｊ
、ロナルド・プレス、ニュー Ｅｌ −り州、１９６７
年）および土壌抽出寒天（ワックスマン−Ｓ＝Ａ、の［
放射菌（Ｔｈｅ Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ ）］、
Ｖｏ１．ＩＩ、属および種の分類、同定および解説、ウ
ィリアムズ・アンド・ウィルキンズ・カンパニー、ボル
チモア州、１９６１年）で豊富に生産される。各胞子の
うば、運動能力のあるまっすぐＩＣｔ２／ｖり３〜４つ
の胞子を含有する。また培養によって、植物性菌糸の横
側に産生ずる球状体が得られる。これらの球状体の顕微
鏡試験によって、その中の無定形集団が胞子の中へ発育
しないことが明らかである。真性胞子はリンゴ酸カルシ
ウム寒天や土壌抽出寒天において優勢で、これらの媒地
に幾つかの球状体が見られる。
全細胞の酸加水分解物は、メソ−ジアミノピメリン酸お
よびグリシンを含有し、これらは細胞壁から発生する。
よびグリシンを含有し、これらは細胞壁から発生する。
キシロースおよびアラビノースは、細胞壁の優勢な糖成
分である。この組成は、レチャバリアーおよびレチャバ
リアーのｒ ｒｎｔｅｒｎ。
分である。この組成は、レチャバリアーおよびレチャバ
リアーのｒ ｒｎｔｅｒｎ。
Ｊ、 ５ｙｓｔ、 Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ Ｊ 、 ２０
： ４３５〜４４３頁、１９７０年に記載の、タイプ
■細胞壁を示すものである。
： ４３５〜４４３頁、１９７０年に記載の、タイプ
■細胞壁を示すものである。
この形態学的特徴、すなわち、指状胞子のうおよび球状
体がタイプ■細胞壁に結合して産生ずることは、この微
生物がチーマン・Ｊ、、Ｈ，パガニおよびＧ、バレッタ
のｒ Ａｒｃｈｉｖ、 ｆｕｒ Ｍｉｋｒｏｂｉｏｌ、
Ｊ 。
体がタイプ■細胞壁に結合して産生ずることは、この微
生物がチーマン・Ｊ、、Ｈ，パガニおよびＧ、バレッタ
のｒ Ａｒｃｈｉｖ、 ｆｕｒ Ｍｉｋｒｏｂｉｏｌ、
Ｊ 。
５８：４２−５２頁、１９６７年に記載の属の解説に従
って、ダクチロスポランギウム属のアクチノプラーネス
（Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎａｃｅａｅ ）科の一員に分類
される。
って、ダクチロスポランギウム属のアクチノプラーネス
（Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎａｃｅａｅ ）科の一員に分類
される。
抗生物質ＥＭＳ ５８６は、ダクチロスポランギウム属
微生物（Ａ、Ｔ、Ｃ，Ｃ，Ａ ５３６９３ ）を、同化
性炭素源および同化性窒素源を含む水性栄養培地におい
て、好気性深部培養条件下で２８℃付近にて培養するこ
とにより製造することができる。所望の抗生物質の実質
的な生成が起るまで、通常約１２０〜１４４時間にわた
って発酵を行う。これは、プロティン合成の抑制、すな
わち、ペニシリンＧによる誘発に基づくβ−ラクタマー
ゼの再合成の抑制を判定するアッセイによって決定する
ことができる。また後に行う単離操作も、この方法で監
視することができる。
微生物（Ａ、Ｔ、Ｃ，Ｃ，Ａ ５３６９３ ）を、同化
性炭素源および同化性窒素源を含む水性栄養培地におい
て、好気性深部培養条件下で２８℃付近にて培養するこ
とにより製造することができる。所望の抗生物質の実質
的な生成が起るまで、通常約１２０〜１４４時間にわた
って発酵を行う。これは、プロティン合成の抑制、すな
わち、ペニシリンＧによる誘発に基づくβ−ラクタマー
ゼの再合成の抑制を判定するアッセイによって決定する
ことができる。また後に行う単離操作も、この方法で監
視することができる。
ダクチロサイクリンＡおよびダクチロサイクリンＢは、
通常の方法によって、ブロス上澄液および細胞群の両方
から、それらの遠心分離後に単離することができる。ブ
ロス上澄液から抗生物質を回収するため、ｐＨを約５に
調整し、次いで酢酸エチルで活性物を抽出する。この有
機抽出物を減圧濃縮して油状残渣とし、次いでこれをカ
チオンおよびアニオン交換樹脂で精製した後、向流遠心
クロマトグラフィーを行い、純粋なＥＭＳ５８６成分（
ダクチロサイクリンＡおよびダクチロサイクリンＢ）を
得る。なお、最初の樹脂収着工程でＢｉｏ−Ｒａｄ
ＡＧＭＰ −５０’カチオン交換樹脂（−一型）を用い
る。
通常の方法によって、ブロス上澄液および細胞群の両方
から、それらの遠心分離後に単離することができる。ブ
ロス上澄液から抗生物質を回収するため、ｐＨを約５に
調整し、次いで酢酸エチルで活性物を抽出する。この有
機抽出物を減圧濃縮して油状残渣とし、次いでこれをカ
チオンおよびアニオン交換樹脂で精製した後、向流遠心
クロマトグラフィーを行い、純粋なＥＭＳ５８６成分（
ダクチロサイクリンＡおよびダクチロサイクリンＢ）を
得る。なお、最初の樹脂収着工程でＢｉｏ−Ｒａｄ
ＡＧＭＰ −５０’カチオン交換樹脂（−一型）を用い
る。
注＊−） Ｂｉｏ −Ｒａｄ ＡＧＭＰ −５０：
キャリホルニア州、リッチモンド市のビオ−ラッド・ラ
ボ＋ ラドリーズの−ＣＨ２Ｎ （ＣＨ３）３ 基が結合し
た高分子網状スチレン−ジビニルベンゼン共重合体樹脂 このカチオン交換樹脂から、活性成分をピリジン／アセ
トニトリル／水で溶離する。次いで活性溶出液をアニオ
ン交換樹脂Ｂｉｏ−Ｒａｄ Ａ Ｇ Ｍ Ｐ −一米 １ （Ｃｌ 型） に収着せしめ、酢酸／アセトニトリ
ル／水で溶離する。次いで、５ｅｐｈａｄｅｘ Ｌ Ｈ
−２０門こてアセトニトリル／水／トリフルオロ酢酸を
用いるクロマトグラフィーに付し、ＥＭＳ５８６成分の
ダクチロサイクリンＡ１ダクチロサイクリンＢおよびダ
クチロサイクリンＣと、公知化合物の４ａ−ヒドロキシ
−８−メトキシ−ＣＴＣを分離する。
キャリホルニア州、リッチモンド市のビオ−ラッド・ラ
ボ＋ ラドリーズの−ＣＨ２Ｎ （ＣＨ３）３ 基が結合し
た高分子網状スチレン−ジビニルベンゼン共重合体樹脂 このカチオン交換樹脂から、活性成分をピリジン／アセ
トニトリル／水で溶離する。次いで活性溶出液をアニオ
ン交換樹脂Ｂｉｏ−Ｒａｄ Ａ Ｇ Ｍ Ｐ −一米 １ （Ｃｌ 型） に収着せしめ、酢酸／アセトニトリ
ル／水で溶離する。次いで、５ｅｐｈａｄｅｘ Ｌ Ｈ
−２０門こてアセトニトリル／水／トリフルオロ酢酸を
用いるクロマトグラフィーに付し、ＥＭＳ５８６成分の
ダクチロサイクリンＡ１ダクチロサイクリンＢおよびダ
クチロサイクリンＣと、公知化合物の４ａ−ヒドロキシ
−８−メトキシ−ＣＴＣを分離する。
往来） Ｂｉｏ−Ｒａｄ ＡＧＭＰ−１：キャリホ
／Ｌ／−ア州、リッチモンド市のビオ−ラッド・ラボラ
トリーズの−Ｓ０３基が結合した高分子網状スチレン−
ジビニルベンゼン共重合体樹脂 材） ５ｅｐｈａｄｅｘ Ｌ Ｈ−２０： スウェーデ
ン国、アブサラのファーマシア・ファイン・ケミカル・
ＡＢのアルキル化架橋型デキストランゲルビーズ 次に、下相のクロロホルム／メタノール／水で遠心性対
向流クロマトグラフィ、−を行い、新規化合物のダクチ
ロサイクリンＡ１ダクチロサイクリンＢおよびダクチロ
サイクリンＣを分離する。
／Ｌ／−ア州、リッチモンド市のビオ−ラッド・ラボラ
トリーズの−Ｓ０３基が結合した高分子網状スチレン−
ジビニルベンゼン共重合体樹脂 材） ５ｅｐｈａｄｅｘ Ｌ Ｈ−２０： スウェーデ
ン国、アブサラのファーマシア・ファイン・ケミカル・
ＡＢのアルキル化架橋型デキストランゲルビーズ 次に、下相のクロロホルム／メタノール／水で遠心性対
向流クロマトグラフィ、−を行い、新規化合物のダクチ
ロサイクリンＡ１ダクチロサイクリンＢおよびダクチロ
サイクリンＣを分離する。
またダクチロサイクリンＡ１ダクチロサイクリンＢおよ
びダクチロサイクリンＣは、細胞群のメタノールによる
抽出によっても得為ことができる。すなわち、メタノー
ル抽出物を減圧濃縮し、得られる水溶液をｐＨ５に調整
し、酢酸エチルで抽出して活性を回復せしめる。次いで
、上述のカチオンおよびアニオン交換樹脂におけるクロ
マトグラフィー、ＬＨ２０クロマトグラフィーおよび向
流遠心クロマトグラフィーによって、精製を行う。
びダクチロサイクリンＣは、細胞群のメタノールによる
抽出によっても得為ことができる。すなわち、メタノー
ル抽出物を減圧濃縮し、得られる水溶液をｐＨ５に調整
し、酢酸エチルで抽出して活性を回復せしめる。次いで
、上述のカチオンおよびアニオン交換樹脂におけるクロ
マトグラフィー、ＬＨ２０クロマトグラフィーおよび向
流遠心クロマトグラフィーによって、精製を行う。
ダクチロサイクリンＡおよびダクチロサイクリンＢは、
ダラム陽性菌（テトラサイクリン−耐性菌を含む）に対
して活性で、それぞれ、たとえばヒトなどの咽乳動物の
グラム陽性菌感染の治療に用いることができる。
ダラム陽性菌（テトラサイクリン−耐性菌を含む）に対
して活性で、それぞれ、たとえばヒトなどの咽乳動物の
グラム陽性菌感染の治療に用いることができる。
次に挙げる実施例は、本発明の具体例である。
実施例１
ダクチロサイクリンＡおよびダクチロサイクリンＢの製
造ニー 水道水中のオートミール２％およびトマトペースト２％
からなる斜面寒天に、ダクチロスポランギウム属微生物
（Ａ、Ｔ、Ｃ，Ｃ，五５３６９３ ）を播種し、２８℃
で１４日間培養する。得られる発育物ヲ用い、５００ｍ
Ｑのエルシンマイヤーフラスコ中で１００ｍＱ部の水性
培地を接種する。発芽培地の組成は、以下の通りである
。
造ニー 水道水中のオートミール２％およびトマトペースト２％
からなる斜面寒天に、ダクチロスポランギウム属微生物
（Ａ、Ｔ、Ｃ，Ｃ，五５３６９３ ）を播種し、２８℃
で１４日間培養する。得られる発育物ヲ用い、５００ｍ
Ｑのエルシンマイヤーフラスコ中で１００ｍＱ部の水性
培地を接種する。発芽培地の組成は、以下の通りである
。
組成分 −！＝ニブ
ルコース １可溶スタ
ーチ ２４ビーフエキス
３トリプトン
５酵母エキス
５ＣａＣＯ３４ 冷水道水（全体を１００１００Ｏ この培地の使用に先立ち、ｐＨ７，０に調整し、１２１
℃で３０分間殺菌する。
ルコース １可溶スタ
ーチ ２４ビーフエキス
３トリプトン
５酵母エキス
５ＣａＣＯ３４ 冷水道水（全体を１００１００Ｏ この培地の使用に先立ち、ｐＨ７，０に調整し、１２１
℃で３０分間殺菌する。
このように接種した発芽試験フラスコを回転振とう機に
て、２８℃で９６時間培養する。振とう機は２−インチ
偏心距離で回転速度３００ ｒｐｍ、にて作動させる。
て、２８℃で９６時間培養する。振とう機は２−インチ
偏心距離で回転速度３００ ｒｐｍ、にて作動させる。
２００ｍＱ、５００ｍｆｆ１のエルレンマイヤーフラス
コに入った新しい１００ｍＱ部の同培地に対し、発芽フ
ラスコから１％の移行を行う。接種したフラスコを、２
−インチ偏心距離、回転速度３００ｒｐｍで作動する回
転振とう機にて、２８℃で１４４時間培養する。β−ラ
クタマーゼなどの再プロティン合成の抑制を判定するア
ッセイによって、生活性の量を測定する。このアッセイ
において、被試験サンプル（２５０μｌ）を、殺菌チュ
ーブ内の２ｄのアンチビオティック・アッセイ・ブロス
（Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ Ａｓ５ａｙ Ｂｒｏｔｈ ）
（メリーランド州、カカイスビルのＢＢＬラボラトリ
ーズ）に加える。また、スクイブ・カルチュア・コレク
ション（５ｑｕｉｂｂ Ｃｕ１ｔｕｒｅ Ｃｏ１１ｅｃ
ｔｉｏｎ ）から入手したバチルス属すチェニホルミス
（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）Ｓ
Ｃ９２６２のＡｎｔｉｂｉｏｔｉｃ Ａｓ５ａｙ Ｂｒ
ｏｔｈに、０゜５ ＋ｎ（！の一夜培養物および１００
μｇのペニシリンＧ溶液（１００μｇ／ｍＱ）を加える
。３７℃で２．５時間培養後、色素生成性セファロスポ
リンである（６Ｒ−トランス）−３−［２−（２，４−
ジニトロフェニル）エチニル）−８−オ＋ソー７−Ｃ（
フェニルアセチル）アミノコ−５−チア−１−アザビシ
クロ［４，２，０］オクト−２−エン−２−カルボン酸
５０〜を５ｍＱのジメチルスルホキシドに溶解し、９５
ｍＱの５０ミリＭ−リン酸塩緩衝液（ｐＨ７，０）で希
釈した溶液３０μｇを加える。黄色からピンク色への急
な色変化は、誘発酵素β−ラクタマーゼによる色素生成
性セファロスポリンの加水分解を意味する。かかる色変
化の抑制は、本発明の抗生物質の生成の目安であり、こ
こに該抗生物質は酵素β−ラクタマーゼの生成を抑制す
るっ収穫時、フラスコの内容物をプールし、このプ＼ 一ルしたブロスを遠心分離して、約１６１の上澄液と５
．５ ｋｑの湿った細胞を得る。上澄液のｐＨを約５に
調整し、６．７ｅ部の酢酸エチルで３回抽出する。トー
タル５４４のブロス上澄液から得た抽出物をコンバイン
し、減圧濃縮して面状固体とする（３．４６ｇ）。固体
をアセトニトリル／水（１：１）７０ｍ（！に溶解し、
同溶剤中に詰めた２００〜４００メツシユのＡＧＭＰ−
５０樹脂（Ｈ＋型）のカラム（１，５Ｘ１３（７））に
適用する。カラムを１８０ｍ（！の溶剤で洗った後、抗
生物質をピリジン／アセトニトリル／水（８：４６：４
６）溶剤２１５ｍＱで溶離する。溶出液を、アセトニト
リル／水（１：１）中に詰めた１００〜２００メッシｊ
−のＡＧＭＰ−１樹脂（（Ｊ’−型）（７）力ｊム（１
，５ｘ１０口）に通す。最初に該樹脂を２２５ｍＱの同
溶剤で洗浄後、酢酸／アセトニトリル／水（２：４９：
４９）溶剤で抗生物質を溶離する。活性溶出液を減圧濃
縮して、褐色固体とする（０．２８．９）。
コに入った新しい１００ｍＱ部の同培地に対し、発芽フ
ラスコから１％の移行を行う。接種したフラスコを、２
−インチ偏心距離、回転速度３００ｒｐｍで作動する回
転振とう機にて、２８℃で１４４時間培養する。β−ラ
クタマーゼなどの再プロティン合成の抑制を判定するア
ッセイによって、生活性の量を測定する。このアッセイ
において、被試験サンプル（２５０μｌ）を、殺菌チュ
ーブ内の２ｄのアンチビオティック・アッセイ・ブロス
（Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ Ａｓ５ａｙ Ｂｒｏｔｈ ）
（メリーランド州、カカイスビルのＢＢＬラボラトリ
ーズ）に加える。また、スクイブ・カルチュア・コレク
ション（５ｑｕｉｂｂ Ｃｕ１ｔｕｒｅ Ｃｏ１１ｅｃ
ｔｉｏｎ ）から入手したバチルス属すチェニホルミス
（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）Ｓ
Ｃ９２６２のＡｎｔｉｂｉｏｔｉｃ Ａｓ５ａｙ Ｂｒ
ｏｔｈに、０゜５ ＋ｎ（！の一夜培養物および１００
μｇのペニシリンＧ溶液（１００μｇ／ｍＱ）を加える
。３７℃で２．５時間培養後、色素生成性セファロスポ
リンである（６Ｒ−トランス）−３−［２−（２，４−
ジニトロフェニル）エチニル）−８−オ＋ソー７−Ｃ（
フェニルアセチル）アミノコ−５−チア−１−アザビシ
クロ［４，２，０］オクト−２−エン−２−カルボン酸
５０〜を５ｍＱのジメチルスルホキシドに溶解し、９５
ｍＱの５０ミリＭ−リン酸塩緩衝液（ｐＨ７，０）で希
釈した溶液３０μｇを加える。黄色からピンク色への急
な色変化は、誘発酵素β−ラクタマーゼによる色素生成
性セファロスポリンの加水分解を意味する。かかる色変
化の抑制は、本発明の抗生物質の生成の目安であり、こ
こに該抗生物質は酵素β−ラクタマーゼの生成を抑制す
るっ収穫時、フラスコの内容物をプールし、このプ＼ 一ルしたブロスを遠心分離して、約１６１の上澄液と５
．５ ｋｑの湿った細胞を得る。上澄液のｐＨを約５に
調整し、６．７ｅ部の酢酸エチルで３回抽出する。トー
タル５４４のブロス上澄液から得た抽出物をコンバイン
し、減圧濃縮して面状固体とする（３．４６ｇ）。固体
をアセトニトリル／水（１：１）７０ｍ（！に溶解し、
同溶剤中に詰めた２００〜４００メツシユのＡＧＭＰ−
５０樹脂（Ｈ＋型）のカラム（１，５Ｘ１３（７））に
適用する。カラムを１８０ｍ（！の溶剤で洗った後、抗
生物質をピリジン／アセトニトリル／水（８：４６：４
６）溶剤２１５ｍＱで溶離する。溶出液を、アセトニト
リル／水（１：１）中に詰めた１００〜２００メッシｊ
−のＡＧＭＰ−１樹脂（（Ｊ’−型）（７）力ｊム（１
，５ｘ１０口）に通す。最初に該樹脂を２２５ｍＱの同
溶剤で洗浄後、酢酸／アセトニトリル／水（２：４９：
４９）溶剤で抗生物質を溶離する。活性溶出液を減圧濃
縮して、褐色固体とする（０．２８．９）。
０．１４．ｐ部の固体を２ｍｆｆ１のアセトニトリル／
水／トリフルオロ酢酸（６６：３３：０．１）に溶解し
、これを同溶剤混合物中に詰めたＳ ｅｐｈａｄｅｘ
ＬＨ−２０のカラム（２，５ｘ４（１＋ｓ）にてクロマ
トグラフィーに付す。最初の活性画分を集め、プールし
、減圧濃縮して３７Ｍ＋９のダクチロサイクリン複合体
を得る。溶離する第２活性ピークも集め、減圧濃縮して
７５〜の公知化合物である４ａ−ヒドロキシ−８−メト
キシ−ＣＴＣを得る。
水／トリフルオロ酢酸（６６：３３：０．１）に溶解し
、これを同溶剤混合物中に詰めたＳ ｅｐｈａｄｅｘ
ＬＨ−２０のカラム（２，５ｘ４（１＋ｓ）にてクロマ
トグラフィーに付す。最初の活性画分を集め、プールし
、減圧濃縮して３７Ｍ＋９のダクチロサイクリン複合体
を得る。溶離する第２活性ピークも集め、減圧濃縮して
７５〜の公知化合物である４ａ−ヒドロキシ−８−メト
キシ−ＣＴＣを得る。
上記で得たダ久チロサイクリン複合体（１１５’Ｚ ）
ヲ、クロロホルム／メタノール／水（７：１３：８）
の二相溶剤混合物４ｍＱに溶解し、これを分離抽出器（
Ｉｔｏ Ｍｕｌｔｉ −Ｌａｙｅｒ Ｃｏ１１５ｅｐａ
ｒａｔｏｒ−Ｅｘｔｒａｃｔｏｒ、Ｐ、Ｃ−インコーホ
１／イテツド、メリーランド州、ポトマツク）にて、同
溶剤系でクロマトグラフィーに付し、この場合分離抽出
器の作動は、３３０ｍＱ容量の多層テフロンチューブ（
内径１．６ ａｍ ）コイルを用い、８００ ｒｐｍで
行う。上相の移動と共に溶離を終える。５６５ｍ（！の
移動相を集めた後、下相を回収し、バイオアッセイに従
って両分をコンバインする。４つの活性ピークを回収す
る。３つはダクチロサイクリンＡ、ダクチロサイクリン
ＢおよびダクチロサイクリンＣで、４つ目は残った４ａ
−ヒドロキシ−８−メトキシ−ＣＴＣである。回収の順
番および量は、ダクチロサイクリンＣ（２，７＃、１１
０〜１１５ｍＱ）、ダクチロサイクリンＡ（２６，３Ｍ
９．１２５〜１５０ ｍＱ ）、４ａ−ヒドロキシ−８
−メトキシ−ＣＴＣ（１１＃、３５５〜４８５ｍｆｆ１
）およびダクチロサイクリンＢ（１３，７！Ｉｔｇ、７
８５〜８８５ｍ（りである。
ヲ、クロロホルム／メタノール／水（７：１３：８）
の二相溶剤混合物４ｍＱに溶解し、これを分離抽出器（
Ｉｔｏ Ｍｕｌｔｉ −Ｌａｙｅｒ Ｃｏ１１５ｅｐａ
ｒａｔｏｒ−Ｅｘｔｒａｃｔｏｒ、Ｐ、Ｃ−インコーホ
１／イテツド、メリーランド州、ポトマツク）にて、同
溶剤系でクロマトグラフィーに付し、この場合分離抽出
器の作動は、３３０ｍＱ容量の多層テフロンチューブ（
内径１．６ ａｍ ）コイルを用い、８００ ｒｐｍで
行う。上相の移動と共に溶離を終える。５６５ｍ（！の
移動相を集めた後、下相を回収し、バイオアッセイに従
って両分をコンバインする。４つの活性ピークを回収す
る。３つはダクチロサイクリンＡ、ダクチロサイクリン
ＢおよびダクチロサイクリンＣで、４つ目は残った４ａ
−ヒドロキシ−８−メトキシ−ＣＴＣである。回収の順
番および量は、ダクチロサイクリンＣ（２，７＃、１１
０〜１１５ｍＱ）、ダクチロサイクリンＡ（２６，３Ｍ
９．１２５〜１５０ ｍＱ ）、４ａ−ヒドロキシ−８
−メトキシ−ＣＴＣ（１１＃、３５５〜４８５ｍｆｆ１
）およびダクチロサイクリンＢ（１３，７！Ｉｔｇ、７
８５〜８８５ｍ（りである。
ダクチロサイクリンＡは、末端吸収以外に３６９（１６
０）、２６１（１７０）および２３８（２００）ｎｍに
メタノール中の紫外線吸収最大値（Ｅ”）を有する。吸
収最大値のシフトは、酸の添加時に検出することができ
ない。吸収最大値は、塩基の添加時に３８６（１５０）
、２７９（１７０）および２４３ （２１０） ｎｍに
移動する。
０）、２６１（１７０）および２３８（２００）ｎｍに
メタノール中の紫外線吸収最大値（Ｅ”）を有する。吸
収最大値のシフトは、酸の添加時に検出することができ
ない。吸収最大値は、塩基の添加時に３８６（１５０）
、２７９（１７０）および２４３ （２１０） ｎｍに
移動する。
ダクチロサイクリンＡの臭化カリウムの赤外スペクトル
を第１図に示す。ピークは１６７７．１６０９．１３８
４．１２４１．１２０４および１１３６１ に顕著であ
る。第２Ａ〜Ｃ図に、ジメチルスルホキシド／ジチオス
レイトール／ジチオエリスリトール／グリ、セロール（
以下、ＤＤＤＧと称す）における陽イオンモードの速原
子衝撃（ＦＡＢ）マススペクトルを示す。第３Ａ〜Ｃ図
に、ＤＤＤＧにおける陰イオンモードのＦＡＢマススペ
クトルを示す。Ｍ＋Ｈイオンの高分解質量測定により、
６９８．２２８２ダルトンの質量が得られる。第４Ａ、
Ｂ図にダクチロサイクリンＡのシュウチリウム置換メタ
ノール中の６７．５ＭＨｚ、 Ｃ−ＮＭＲスペクトル
、を示す。第５図にシュウチリウム置換メタノール中の
４００ ＭＨｚ、 Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。ダク
チロサイクリンＡはメタノール、アセトニトリル／水混
合物およびジメチルスルホキシドに可溶であるが、アセ
トニトリル、クロロホルム、ベンゼンまたは水には実質
的に溶解しない。
を第１図に示す。ピークは１６７７．１６０９．１３８
４．１２４１．１２０４および１１３６１ に顕著であ
る。第２Ａ〜Ｃ図に、ジメチルスルホキシド／ジチオス
レイトール／ジチオエリスリトール／グリ、セロール（
以下、ＤＤＤＧと称す）における陽イオンモードの速原
子衝撃（ＦＡＢ）マススペクトルを示す。第３Ａ〜Ｃ図
に、ＤＤＤＧにおける陰イオンモードのＦＡＢマススペ
クトルを示す。Ｍ＋Ｈイオンの高分解質量測定により、
６９８．２２８２ダルトンの質量が得られる。第４Ａ、
Ｂ図にダクチロサイクリンＡのシュウチリウム置換メタ
ノール中の６７．５ＭＨｚ、 Ｃ−ＮＭＲスペクトル
、を示す。第５図にシュウチリウム置換メタノール中の
４００ ＭＨｚ、 Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。ダク
チロサイクリンＡはメタノール、アセトニトリル／水混
合物およびジメチルスルホキシドに可溶であるが、アセ
トニトリル、クロロホルム、ベンゼンまたは水には実質
的に溶解しない。
ダクチロサイクリンＡは、逆相薄層平板（ウオットマン
（Ｗｈａｔｍａｎ ） Ｋ ＣＩＢ、２００μ）にて、
ジメチルホルムアミド／アセトニトリル／ｐＨ４，２緩
衝液（３：４：３）溶剤を用いるクロマトグラフィーに
付した場合、０．３３のＲｆ値を有する。緩衝液の組成
は、エチレンジアミンテトラ酢酸ジナトリウム塩０．５
ｍＭ 、クエン酸１５ｍＭ、クエン酸ナトリウム２０
ｍＭおよび硝酸カリウム５０ｍＭである。ダクチロサイ
クリンＡは、Ｗａｔｅｒｓ μＢ ｏｎｄａｐａｋフ
ェニルカラム（０，４５ｘ３０ｃｒｌＩ）にて流速１ｍ
ｌ！／分のＨＰＬＣでクロマトグラフィーに付した場合
、３．２８分の保留時間を有する。このシステムで、薄
層クロマトグラフィー分析の場合に記載した同じ溶剤を
用いる。
（Ｗｈａｔｍａｎ ） Ｋ ＣＩＢ、２００μ）にて、
ジメチルホルムアミド／アセトニトリル／ｐＨ４，２緩
衝液（３：４：３）溶剤を用いるクロマトグラフィーに
付した場合、０．３３のＲｆ値を有する。緩衝液の組成
は、エチレンジアミンテトラ酢酸ジナトリウム塩０．５
ｍＭ 、クエン酸１５ｍＭ、クエン酸ナトリウム２０
ｍＭおよび硝酸カリウム５０ｍＭである。ダクチロサイ
クリンＡは、Ｗａｔｅｒｓ μＢ ｏｎｄａｐａｋフ
ェニルカラム（０，４５ｘ３０ｃｒｌＩ）にて流速１ｍ
ｌ！／分のＨＰＬＣでクロマトグラフィーに付した場合
、３．２８分の保留時間を有する。このシステムで、薄
層クロマトグラフィー分析の場合に記載した同じ溶剤を
用いる。
ダクチロサイクリンＢは、末端吸収以外に３７３（１９
０）、２６２（２００）および２３８（２５０） ｎｍ
にメタノール中の紫外線吸収最大値＜ Ｅ １％）を有
する。酸の添加時の吸収最大値は３６８（１８０）、２
６１（２，２０）および２３８（２４０）ｎｍに移動す
る。塩基の添加時の吸収最大値は、３８５（１８０）、
２８１（２００）および２４３（２６０）ｎｍに移動す
る。ダクチロサイクリンＢの臭化カリウムの赤外スペク
トルを第６図に示す。ピークは１７２５．１６０６．１
５４６．１３８２．１２４０．１１０２および９９３α
に顕著である。第７Ａ〜Ｃ図に、ダクチロサイクリン
ＢのＤＤＤＧにおける陽イオンモー Ｉ’（７）Ｆ Ａ
Ｂマススペクトルを示す。第８Ａ〜Ｃ図に、ダクチロ
サイクリンＢのＤＤＤＧにおける陰イオンモードのＦＡ
Ｂマススペクトルを示ス。
０）、２６２（２００）および２３８（２５０） ｎｍ
にメタノール中の紫外線吸収最大値＜ Ｅ １％）を有
する。酸の添加時の吸収最大値は３６８（１８０）、２
６１（２，２０）および２３８（２４０）ｎｍに移動す
る。塩基の添加時の吸収最大値は、３８５（１８０）、
２８１（２００）および２４３（２６０）ｎｍに移動す
る。ダクチロサイクリンＢの臭化カリウムの赤外スペク
トルを第６図に示す。ピークは１７２５．１６０６．１
５４６．１３８２．１２４０．１１０２および９９３α
に顕著である。第７Ａ〜Ｃ図に、ダクチロサイクリン
ＢのＤＤＤＧにおける陽イオンモー Ｉ’（７）Ｆ Ａ
Ｂマススペクトルを示す。第８Ａ〜Ｃ図に、ダクチロ
サイクリンＢのＤＤＤＧにおける陰イオンモードのＦＡ
Ｂマススペクトルを示ス。
Ｍ＋Ｈイオンの高分解質量測定により、７１２．２１６
５ダルトンの質量が得られる。第９図にダクチロサイク
リンＢのシュウチリウム置換メタノール中の４００ Ｍ
Ｈｚ 、 ’Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。
５ダルトンの質量が得られる。第９図にダクチロサイク
リンＢのシュウチリウム置換メタノール中の４００ Ｍ
Ｈｚ 、 ’Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。
ダクチロサイクリンＢは、逆相薄層平板（Ｗｈａｔ−ｍ
ａｎ Ｋ ＣＩＢ、２００μ）にて、ジメチルホルムア
ミド／アセトニトリル／ｐＨ４，２緩衝液（３：４：３
）溶剤を用いるクロマトグラフィーに付した場合、０．
１１のＲｆ値を有する。緩衝液の組成は、エチレンジア
ミンテトラ酢酸ジナトリウム塩０．５ｍＭ、クエン酸１
５ｍＭ、クエン酸ナトリウム２０ ｍＭおよび硝酸カリ
ウム５０ｍＭである。
ａｎ Ｋ ＣＩＢ、２００μ）にて、ジメチルホルムア
ミド／アセトニトリル／ｐＨ４，２緩衝液（３：４：３
）溶剤を用いるクロマトグラフィーに付した場合、０．
１１のＲｆ値を有する。緩衝液の組成は、エチレンジア
ミンテトラ酢酸ジナトリウム塩０．５ｍＭ、クエン酸１
５ｍＭ、クエン酸ナトリウム２０ ｍＭおよび硝酸カリ
ウム５０ｍＭである。
ダクチロサイクリンＢは、Ｗａｔｅｒｓ ｐ Ｂｏｎｄ
ａｐａｋフェニルカラム（０，４５Ｘ３０α）にて流速
１ｍｆｆ１／分のＨＰＬＣでクロマトグラフィーに付し
た場合、４．８５分の保留時間を有する。このシステム
で、薄層クロマトグラフィー分析の場合に記載した同じ
溶剤を用いる。
ａｐａｋフェニルカラム（０，４５Ｘ３０α）にて流速
１ｍｆｆ１／分のＨＰＬＣでクロマトグラフィーに付し
た場合、４．８５分の保留時間を有する。このシステム
で、薄層クロマトグラフィー分析の場合に記載した同じ
溶剤を用いる。
ダクチロサイクリンＣは、末端吸収以外に３８１（１２
０）および２７５（１７０）ｎｍにメタノール中の紫外
線吸収最大値（Ｅ１％）を有する。
０）および２７５（１７０）ｎｍにメタノール中の紫外
線吸収最大値（Ｅ１％）を有する。
生物学的活性
本発明化合物の最小阻止濃度（以下、ＭＩＣと称す）を
測定するため、下記の方法を採用する。
測定するため、下記の方法を採用する。
すなわち、試験微生物を２０ｄのアンチビオティック・
アッセイ・ブロス（デイフコ）中で発育せしめるのに、
チューブ中のブロスに、斜面寒天ＢＨ１（デイフコ）か
らの輪状の生体を接種する。
アッセイ・ブロス（デイフコ）中で発育せしめるのに、
チューブ中のブロスに、斜面寒天ＢＨ１（デイフコ）か
らの輪状の生体を接種する。
接種したチューブを３７℃で１８〜２４時間培養する。
これらの培養物には、１０ コロニー形成単位（ＣＦＵ
）／ｍＱが含まれていることが推定される。培養物を１
００倍に希釈して、最終接種剤濃度１０７ＣＦＵを得る
。なお、希釈にはイースト・ビーフ・ブロス（Ｙｅａｓ
ｔ Ｂｅｅｆ Ｂｒｏｔｈ ） （デイフコ）を用いる
。試験化合物を適当な希釈剤に１０００μｐ／ｒｎＱの
濃度で溶解する。イースト・ビーフ・ブロス（デイフコ
）において２倍希釈を行い、１０００〜０．５μｇ／ｍ
Ｑの範囲とする。１．５ｍＱ部の各希釈液を個々のベト
１皿に入れ、これに１３．５ｍＭのに一１０寒天を加え
る。Ｋ−１０寒天は以下の通りである。
）／ｍＱが含まれていることが推定される。培養物を１
００倍に希釈して、最終接種剤濃度１０７ＣＦＵを得る
。なお、希釈にはイースト・ビーフ・ブロス（Ｙｅａｓ
ｔ Ｂｅｅｆ Ｂｒｏｔｈ ） （デイフコ）を用いる
。試験化合物を適当な希釈剤に１０００μｐ／ｒｎＱの
濃度で溶解する。イースト・ビーフ・ブロス（デイフコ
）において２倍希釈を行い、１０００〜０．５μｇ／ｍ
Ｑの範囲とする。１．５ｍＱ部の各希釈液を個々のベト
１皿に入れ、これに１３．５ｍＭのに一１０寒天を加え
る。Ｋ−１０寒天は以下の通りである。
組成分 Ｊビーフエキ
ス １．５イーストエキ
ス ３．０ペプトン
６．０デキストロース
１・０寒天
１５．０蒸留水（全体を１ｅに） 寒天中の最終薬物濃度は、１００〜０．０５μｙ／ｍ（
、の範囲となる。寒天のみを含有する微生物発育対照平
板を作成し、試験平板の前後に接種する。各平板の寒天
表面に、デンリイ・マルチポイント（Ｄｅｎｌｙ Ｍｕ
ｌｔｉｐｏｉｎｔ ）接種器で微生物を適用して、寒天
表面に約１０’ＣＦＵを配分する。
ス １．５イーストエキ
ス ３．０ペプトン
６．０デキストロース
１・０寒天
１５．０蒸留水（全体を１ｅに） 寒天中の最終薬物濃度は、１００〜０．０５μｙ／ｍ（
、の範囲となる。寒天のみを含有する微生物発育対照平
板を作成し、試験平板の前後に接種する。各平板の寒天
表面に、デンリイ・マルチポイント（Ｄｅｎｌｙ Ｍｕ
ｌｔｉｐｏｉｎｔ ）接種器で微生物を適用して、寒天
表面に約１０’ＣＦＵを配分する。
各平板を３７℃で１８時間培養し、ＭＩＣ値を測定する
。なお、ＭＩＣ値とは、微生物発育を阻止する化合物の
最小濃度である。
。なお、ＭＩＣ値とは、微生物発育を阻止する化合物の
最小濃度である。
本実験で選んだ試験微生物は、テトラサイクリン−感受
性菌株とテトラサイクリン−耐性菌株の対である。結果
を下記表１に示すが、これによると、本発明化合物とテ
トラサイクリン間で交叉耐性の無いことが認められる。
性菌株とテトラサイクリン−耐性菌株の対である。結果
を下記表１に示すが、これによると、本発明化合物とテ
トラサイクリン間で交叉耐性の無いことが認められる。
表１
テトラサ ダクチロサ ダクチロサ
（ＳＣ１００１６） １°０ ６．３ ３°１
（ＳＧＢ ４２） ０°２１°６３°１（ｓ６４５
）１００３・１３・１ （ＳＣ９０５２） （ｓｃ９ｏ８□）５０．３・１３・１ （ＳＣ９７□６）＞１００ ２５ ６・３注杓
これら微生物の全ては、ニューシャーシー州、プリンス
トンのイー・アール・スクイブ・アンド・サンズ・イン
コーホレイテッドのスクイブ・カルチュアー・コレクシ
ョンかう入手未来） ５ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ
ａｕｒｅｕｓ１来） ５ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃ
ｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ米米藁米） ５ｔ
未来ｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ
（ＳＧＢ ４２） ０°２１°６３°１（ｓ６４５
）１００３・１３・１ （ＳＣ９０５２） （ｓｃ９ｏ８□）５０．３・１３・１ （ＳＣ９７□６）＞１００ ２５ ６・３注杓
これら微生物の全ては、ニューシャーシー州、プリンス
トンのイー・アール・スクイブ・アンド・サンズ・イン
コーホレイテッドのスクイブ・カルチュアー・コレクシ
ョンかう入手未来） ５ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ
ａｕｒｅｕｓ１来） ５ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃ
ｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ米米藁米） ５ｔ
未来ｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ
第１図〜第５図は、ダクチロサイクリンＡの分析結果を
示すチャート、および第６図〜第９図はダクチロサイク
リンＢの分析結果を示すチャートである。 特許出願人 イー・アール・スクイブ・アンド・サン
ズ・インコーホレイテッド
示すチャート、および第６図〜第９図はダクチロサイク
リンＢの分析結果を示すチャートである。 特許出願人 イー・アール・スクイブ・アンド・サン
ズ・インコーホレイテッド
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、第１図に示す臭化カリウムの赤外スペクトル、第２
Ａ〜Ｃ図に示す陽イオンモードの速原子衝撃マススペク
トル、第３Ａ〜Ｃ図に示す陰イオンモードの速原子衝撃
マススペクトル、第４Ａ、Ｂ図に示す６７．５ＭＨｚ、
＾１＾３Ｃ−ＮＭＲスペクトル、および第５図に示す４
００ＭＨｚ、＾１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを有するダクチ
ロサイクリンＡ。 ２、第６図に示す臭化カリウムの赤外スペクトル、第７
Ａ〜Ｃ図に示す陽イオンモードの速原子衝撃マススペク
トル、第８Ａ〜Ｃ図に示す陰イオンモードの速原子衝撃
スペクトル、および第９図に示す４００ＭＨｚ、＾１Ｈ
−ＮＭＲスペクトルを有するグクチロサイクリンＢ。 ３、ダクチロスポランギウム属微生物（Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｃ
、Ｎｏ．５３６９３）を培養することを特徴とする第１
図に示す臭化カリウムの赤外スペクトル、第２Ａ〜Ｃ図
に示す陽イオンモードの速原子衝撃マススペクトル、第
３Ａ〜Ｃ図に示す陰イオンモードの速原子衝撃マススペ
クトル、第４Ａ、Ｂ図に示す６７．５ＭＨｚ、＾１＾３
Ｃ−ＮＭＲスペクトル、および第５図に示す４００ＭＨ
ｚ、＾１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを有するダクチロサイク
リンＡの製造法。 ４、ダクチロスポランギウム属微生物（Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｃ
、Ｎｏ．５３６９３）を培養することを特徴とする第６
図に示す臭化カリウムの赤外スペクトル、第７Ａ〜Ｃ図
に示す陽イオンモードの速原子衝撃マススペクトル、第
８Ａ〜Ｃ図に示す陰イオンモードの速原子衝撃スペクト
ル、および第９図に示す４００ＭＨｚ、＾１Ｈ−ＮＭＲ
スペクトルを有するダクチロサイクリンＢの製造法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US07/137,635 US5024839A (en) | 1987-12-24 | 1987-12-24 | Dactylocycline A and dactylocycline B |
| US137,635 | 1987-12-24 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01202291A true JPH01202291A (ja) | 1989-08-15 |
Family
ID=22478367
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63327525A Pending JPH01202291A (ja) | 1987-12-24 | 1988-12-24 | ダクチロサイクリンａおよびダクチロサイクリンｂ |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5024839A (ja) |
| EP (1) | EP0322717B1 (ja) |
| JP (1) | JPH01202291A (ja) |
| AT (1) | ATE87033T1 (ja) |
| CA (1) | CA1336695C (ja) |
| DE (1) | DE3879440T2 (ja) |
| ES (1) | ES2053697T3 (ja) |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1987000832A2 (en) * | 1985-08-08 | 1987-02-12 | Schering Corporation | Tetracycline antibiotics, their preparation, antibiotic compositions containing them, and microorganisms useful in their preparation |
-
1987
- 1987-12-24 US US07/137,635 patent/US5024839A/en not_active Expired - Lifetime
-
1988
- 1988-11-25 CA CA000584184A patent/CA1336695C/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-12-20 EP EP88121311A patent/EP0322717B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-12-20 ES ES88121311T patent/ES2053697T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1988-12-20 AT AT88121311T patent/ATE87033T1/de not_active IP Right Cessation
- 1988-12-20 DE DE8888121311T patent/DE3879440T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1988-12-24 JP JP63327525A patent/JPH01202291A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US5024839A (en) | 1991-06-18 |
| DE3879440T2 (de) | 1993-06-24 |
| ES2053697T3 (es) | 1994-08-01 |
| ATE87033T1 (de) | 1993-04-15 |
| EP0322717A3 (en) | 1990-08-22 |
| CA1336695C (en) | 1995-08-15 |
| EP0322717A2 (en) | 1989-07-05 |
| EP0322717B1 (en) | 1993-03-17 |
| DE3879440D1 (de) | 1993-04-22 |
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