JPH01206258A - 免疫検定器具及びそれを用いた検定方法 - Google Patents

免疫検定器具及びそれを用いた検定方法

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JPH01206258A
JPH01206258A JP63309196A JP30919688A JPH01206258A JP H01206258 A JPH01206258 A JP H01206258A JP 63309196 A JP63309196 A JP 63309196A JP 30919688 A JP30919688 A JP 30919688A JP H01206258 A JPH01206258 A JP H01206258A
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Hisanobu Niimura
寿信 新村
Sunao Takahashi
直 高橋
Mutsuo Kashiba
睦朗 加柴
Hiroshi Sakai
宏 酒井
Tokio Kano
時男 嘉納
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は免疫検定を行なうための器具、特に多種類の免
疫検定を同時に行なうための免疫検定器具と、これを用
いて免疫検定を行なう方法に関する。
〔従来の技術〕
免疫検定は、抗原抗体反応の高い特異性と検出感度を利
用することにより、抗原または抗体を同定または定量す
る方法である。この免疫検定を簡易且つ迅速に行なうた
めに、各種の器具が提案されている。最も単純な形態の
器具は、例えばストリップ状の支持体に一つの免疫検定
試薬（抗体または抗原）を担持させた試験片である。当
然ながら、このような試験片では一度に一種類の試験し
かできない。
これに対し、例えば組織適合性を判定するために行なわ
れる細胞のタイピングのような場合には、少なくとも８
０以上種類の免疫検定が必要とされる。
このような多種類の免疫検定を同時に行なうために、次
のような免疫検定器具が従来提案されている。
昭和６０年特許出願公表第５００７３２号（米国特許箱
４．５９１．５７０号）には、ガラス又はプラスチック
カバースリップ等の平坦な平面を有するプレート上に、
微小な抗体塗布領域を密に配列した免疫検定器具が開示
されている。この器具は、所定濃度に調製された複数の
種類の免疫検定試薬溶液（例えば抗体溶液）を、夫々直
径０．２５〜ｌ　ａｍの小点状に且つ一定の配列順序で
凹凸のないプレート表面ニ塗布し、プレート表面に吸着
または結合させることにより製造される。この免疫検定
器具を用いれば、多種類の免疫検定を一度に行なうこと
ができる。
即ち、免疫検定試薬として抗体を塗布した領域（免疫反
応領域）の全体を覆うように、検定対象物である細胞懸
濁液をプレートの全面に分注する。
これにより、個々の免疫反応領域では異なった抗原抗体
反応が同時に起こり、細胞表面抗原が抗体に選択的に結
合する。従って、各免疫反応領域における細胞付着の有
無、および付着した細胞数を検出することにより、組織
タイピングや細胞懸濁液中の各細胞の割合を決定するこ
とができる。
しかし、上記従来の免疫検定器具には次のような欠点が
ある。
第一は、微小な免疫反応領域を形成するのが困難なこと
である。即ち、プレート表面の所定の微小領域に免疫検
定試薬の溶液を滴下して塗布する際、プレート表面が平
坦で塗布すべき位置の目印がない。しかも、異なる免疫
検定試薬溶液を隣接した所定の微小領域に互いに混合し
ないように塗布しなければならず、この作業は極めて困
難で熟練を必要とする。また、免疫反応領域の面積を一
定に制御するのも困難である。
第二は、プレート表面に固定される免疫検定試薬の量を
制御するのが困難なことである。即ち、プレート表面に
固定される免疫検定試薬の量は、塗布する溶液の濃度お
よび試薬の種類、更にはプレートの材質等によって変化
する。このため、固定される免疫検定試薬の量を制御す
るためには試薬溶液の滴下量を増減することが有効であ
ると考えられる。ところが、滴下された試薬溶液は表面
張力によってのみプレートの所定面積上に保持されるこ
とになる。従って、所定面積上に保持され得る試薬溶液
の量はこの表面張力によって制限されることとなり、所
定面積当りの滴下量を増大することは殆ど不可能である
。この第二の欠点は、検体液を滴下する際にも同様に問
題となる。
第三は、使用時における欠点である。即ち、器具が平坦
な表面を有するプレートであるため、その上に添加され
た検体はプレートの全面に広がり、プレートの外に流れ
出てしまうことがある。検体が感染症患者の血液等であ
る場合、これは二次感染の危険をもたらす。また、複数
の検体を同一プレート上に添加すると、試料同士が混じ
り合ってしまうため、同一プレート上で複数の検体を分
析することはできない。
上記のような欠点がない従来例として、米国特許箱４．
１５４．７９５号に開示されたものが挙げられる。
この免疫検定器具は、平面上に同じ大きさのウェルを８
×１２マトリツクス状に配列したものである。
これを使用するに際しては、免疫検定試薬を各ウェルの
内壁に固定するか、又は各ウェル内に添加する。次いで
、各ウェルに検体を添加することにより、先に添加され
ている免疫検定試薬との間で特異的な抗原抗体反応を起
こさせ、サンプル中に存在する抗原または抗体を検出す
る。
このウェルタイプの免疫検定器具は、ウェルによって免
疫反応領域が明確に限定されているため上述したような
問題は問題は生じない。しかし、免疫検定の際に必要な
洗浄操作が極めて面倒である。即ち、上記の免疫検定で
はウェルの内壁に免疫検定試薬を固定する際、試薬を塗
布した後、過剰の試薬を除去するため洗浄を行なわなけ
ればならない。また、固定された免疫検定試薬に対する
非特異的吸着を防止するためにブロッキング剤が添加さ
れるが、この場合にも過剰なブロッキング剤を除去する
ために洗浄を必要とする。これらの洗浄に際しては、ピ
ペット等で洗浄液（緩衝溶液）を各ウェル内に出入れす
るといった面倒な操作を必要とするため、多くの労力と
時間を要する欠点がある。
〔発明が解決しようとする問題点〕
本発明は上記事情に鑑みてなされたもので、多種類の免
疫検定を同時に行なうために多種類の免疫反応領域を具
備した免疫検定器具であって、個々の免疫反応領域を容
易かつ高精度で形成でき、正確かつ安全な免疫検定を行
なうことができると共に、容易に洗浄できる免疫検定器
具を提供しようとするものである。また、この検定器具
を用いた免疫検定方法を提供する。
上記多種類の免疫検定を同時に行なうタイプの免疫検定
器具において、本発明が実現しようとする課題をより具
体的に列挙すれば次の通りである。
■　免疫反応領域が全て平坦で、容易に洗浄を行なえる
こと。
■　免疫反応領域を形成する際または免疫検定を行なう
際、免疫検定試薬溶液または検体を塗布すべき場所が容
易に確認できること ■　異なった免疫検定試薬または検体が、互いに混り合
わないこと。
■　免疫反応領域を形成する際、その面積を一定に制御
できること。
■　免疫検定試薬の溶液を滴下塗布して免疫反応領域を
形成する際、所定領域上に保持される試薬溶液の量を増
減できること。
■　免疫検定を行なう際、検体の外部への流出を防止で
きること。
【問題点を解決するための手段〕
本発明による免疫検定器具は、平坦な表面を宵するプレ
ート基板と、該プレート基板の表面に互いに近接して突
設された複数の突起と、隣接する突起の間に挟まれた平
面領域に免疫検定試薬を塗布固定して形成された複数の
免疫反応領域とを具備し、これら免疫反応領域は互いに
離間されて（することを特徴とするものである。
本発明による免疫検定方法は、上記の免疫検定器具を準
備する工程と、検体である細胞懸濁液の所定量を前記免
疫反応領域およびこれを限定する前記突起の側面に付着
させて保持することにより前記免疫反応領域に接触させ
る工程と、前記免疫−反応領域に固定されている免疫検
定試薬と前記検体液とを反応させ前記免疫検定試薬に細
胞を結合させる工程と、結合されなかった細胞を洗い流
す工程と、各免疫反応領域に結合された細胞を調べる工
程とを具備する。
上記の方法において、どの免疫反応領域に検体が結合さ
れたかを決定することにより、検体である細胞の表面に
おける特定の抗原の存在を定性的に決定することができ
る。また、各免疫反応領域に結合された細胞を定量する
ことにより、特定の抗原を有する細胞の割合を決定する
ことができる。
〔作用〕
本発明の免疫検定器具における各免疫反応領域はウェル
ではなく、プレート基板表面と同一またはより高いレベ
ルで平坦に形成されているから、免疫検定に必要な洗浄
操作が極めて容易である。
また、所定領域に免疫検定試薬の溶液を滴下塗布して免
疫反応領域を形成する際、あるいは検定時に検体を免疫
反応領域に滴下する際、前記突起によって滴下位置を明
確に把握できる。
一方、滴下された試薬溶液はプレート基板の表面に突設
された突起の側面にも付着して保持され、その保持力が
大きいから所定の平面領域外への流出が抑制される。こ
の作用は、異なった試薬溶液または検体液が近接する領
域に滴下されたときにも、これらが互いに混じりあうの
を防止する。また、一定の平面領域に対して滴下保持さ
せ得る試薬溶液または検体の量を増減することを可能と
し、免疫反応領域の面積を一定に制御することも可能と
する。加えて、検体の外部への流出を防止することをも
可能とするから、感染症患者の血液を検定する際の二次
感染の危険が減少する。
〔発明の実施例〕
以下、実施例により本発明を更に詳細に説明する。
まず、第１図Ａ−Ｃを参照し、本発明の一実施例になる
免疫検定器具を説明する。この実施例の器具の製造には
、第１図Ａに示す支持体１を用いる。該支持体は矩形の
プレート状基板２と、その表面に突設された直方体の小
突起３・・・からなっている。これら９個の小突起３・
・・はプレート状基板１と一体に形成されており、図示
のように３行４列のマトリックス状に配列されている。
この支持体１は、例えばガラスまたはプラスティックの
ように、抗体または抗原からなる免疫検定試薬を塗布固
定できる材質でできている。
一上記の支持体１を用いて免疫検定器具を製造するには
、第１図Ｂに示したように、各行に配列されている小突
起３の間に免疫検定試薬の溶液４を滴下し、塗布する。
このとき、滴下された溶液４はプレート基板１の表面の
みならず、両側の突起３の側面にも付着し、保持される
。溶液４を効果的に保持するために、各行における突起
３の間隔は１〜３關とするのが望ましい。また、各列に
おける突起３の間隔は、隣合う溶液４が混じり合うのを
回避するために、１〜１０ｍｍとするのが望ましい。な
お、突起３の高さは１〜５　ｍｍが適当である。
上記のようにしてプレート基板の所定領域に免疫検定試
薬の溶液を塗布、固定し、更に一定時間インキユベート
する。続いて、例えば燐酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）等
の緩衝液で洗浄し、過剰の免疫検定試薬を除去する。小
突起３がマトリックス状に配列されているため、このと
きの洗浄操作は容易に行なうことができる。次いで、非
特異的吸着を防止するためのブロッキング操作を行なう
。
即ち、牛血清アルブミン、卵白アルブミン、ゼラチン等
の蛋白質の溶液を第１図Ｂと同様にして塗布、固定する
。その後、洗浄により過剰のブロッキング剤を除去し、
乾燥する。これによって、第１図Ｃに示したように、免
疫反応領域５ａ〜５ｄ。
６ａ〜６ｄ、７ａ〜７ｄが形成された免疫検定器具を得
ることができる。
第１図Ｃの免疫検定器具を用いて免疫検定を行なうには
、第１図Ｂで説明したようにして、各免疫反応領域５ａ
　〜５ｄ、６ａ　〜６ｄ、７ａ　〜７ｄに検体を分注す
る。これにより、滴下された検体と先に固定された免疫
検定試薬との間で抗原抗体反応が起こり、検体中の成分
のうちで検定試薬に特異的に反応するものだけが免疫反
応領域に結合される。そこで、適当な緩衝液で洗浄して
非反応成分を除去し、各免疫反応領域に残存している成
分を分析することによって免疫検定を行なうことができ
る。なお、免疫検定試薬を固定せず、ブロッキング操作
のみを施した疑似反応領域を形成しておくことにより、
このときの洗浄が正しく行なわれているか否かを確認す
ることができる。即ち、この疑似反応領域にも同様に検
体の分注を行ない、該領域に検体成分が残存していない
場合、正しい洗浄操作がなされたこと・になる。
上実施例の免疫検定器具において、個々の免疫反応領域
５ａ　〜５ｄ、６ａ　〜６ｄ、７ａ　〜７ｄに固定すべ
き免疫検定試薬の種類は、検定の目的によって夫々異な
る。
例えば細胞のタイピングを目的とする場合、免疫反応領
域５ａ〜５ｄ、６ａ〜６ｄにタイピング上必要とされる
種類の抗体を免疫反応試薬として固定する。検体の細胞
懸濁液を滴下し、抗体と細胞表面に存在する抗原の間で
反応を生じさせ、洗浄を行なった後、各反応領域に付着
した細胞を目視または顕微鏡で観察することにより同程
すればよい。その場合、必要に応じて付着した細胞を染
色することにより、確実な同程が可能となる。
なお、第１図Ｃの免疫検定器具は次のような態様でも使
用できる。即ち、同一列の免疫反応領域（５ａ　〜７ａ
、５ｂ〜７ｂ、５ｃ　〜７ｃ、５ｄ　〜７ｄ）に同一の
抗体を固定しておく。そして、免疫反応領域５ａ〜５ｄ
には検体Ａを、免疫反応領域６８〜６ｄには検体Ｂを、
免疫反応領域７ａ〜７ｄには検体Ｃを夫々分注する。こ
れによって、三種類の検体Ａ、Ｂ、Ｃに関する４種類の
検査項目を一度に検定することができる。また、各行の
免疫反応領域（５ａ　〜５ｄ、６ａ　〜６ｄ、７ａ　〜
７ｄ）に同一の検体を分注すれば、同一検体に関する同
一の検査項目を３回同時に行ない、結果を確認すること
ができる。
なお、小突起３の個数を増大して免疫反応領域の数を増
やすことにより、同時に検定できる検査項目、検体数ま
たは検定回数を増大することができる。第２図にその一
例を示す。
第２図の実施例では、２３×６個の小突起３・・・がマ
トリックス状に形成されている。これらの小突起３・・
・は、２３行３列の二つのマトリックス群Ｉ。
Ｈに分離され、各群の間には小突起を形成しない分離帯
が設けられている。その結果、この実施例における免疫
反応領域５・・・は、２２行３列のマトリックス群１．
ＩＩを構成している。
また、第２図の実施例では個々の免疫反応領域５を指定
するために、各行にアルファベットの符号（１群ではＡ
−Ｃ，ＩＩ群ではＥ−Ｇ、分離帯にはＤ）が付され、ま
た各列には１〜２２の番号が付されている。従って、夫
々の免疫反応領域は一つのアルファベット及び一つの数
字の組合せによって指定される。
第１図および第２図の実施例では、何れも直方体の小突
起３・・・を形成しているが、小突起３・・・の形状は
種々の変形が可能である。その例を第３図〜第７図に示
す。
第３図Ａ、Ｂに示した小突起３ａでは、免疫検定試薬溶
液または検体液４が付着する側面を凹面とした。なお、
同図Ａは平面図、同図Ｂは正面図である。この実施例に
よると、検定試薬溶液や検体の保持性が向上するため、
これらの滴下量を増すことができる。また、免疫反応領
域の形状が円形に近くなるため顕微鏡の視野（円形）に
適合し、観察し易くなる等の利点が得られる。
第４図Ａ、Ｂの例では、一対の小突起３ｂ。
３ｂに挟まれた免疫反応領域となる部分５′を、プレー
ト基板２の表面レベルよりも高くした。この実施例では
、免疫反応領域が明確に区別されるため、その面積を一
定にすることができる。一方、エウルの場合と違って洗
浄作業も容易である等の利点を有している。
第５図Ａ、Ｂの実施例は、第３図および第４図に示した
二つの特徴を合せもつものである。従って、両者におけ
る利点を得ることができる。
第６図の実施例では、細い棒状の小突起３ｃを設けてい
る。この場合には、免疫反応領域の四隅に小突起３ｃを
設ける必要がある。
第７図Ａ、Ｂ、Ｃは、免疫反応領域を高密度に配列する
ことを可能とした実施例を示している。
第７図Ａは平面図であり、第７図Ｂは同図ＡのＢ−Ｂ線
に沿う断面図、第７図Ｃは右側面図である。
図示のように、この実施例では５縁状の突起３ｄ・・・
及びこれに直行する溝８・・・が形成されている。
その両者によって、免疫反応領域５・・・が区切られて
いる。免疫反応領域５・・・の平面レベルが、これらを
分離する領域（溝８）の平面レベルより高い点において
、この実施例は第４図の実施例と共通している。
次に、本発明による免疫検定方法の実施例を説明する。
実施例１　（Ｔ４／Ｔ８比の測定） この実施例ではＴ細胞性疾患（後天性免疫不全症候群；
以下ＡＩＤＳという）の診断のために、免疫検定により
Ｔ４細胞／Ｔ８細胞の比を測定する。Ｔ４細胞とはヘル
パーＴセルのようなＴ４抗原を有する細胞の総称であり
、Ｔ８細胞とはサプレッサーＴセル等のＴ８抗原を有す
る細胞の総称である。このＴ４／Ｔ８比は、ＡＩＤＳ患
者において激減することが知られている。
この実施例では第１図で説明した免疫検定器具を用いる
。その際、次のようにして免疫反応領域５ａ、５ｃ、６
ａ、６ｃ、７ａ、７ｃには抗Ｔ４モノクローナル抗体を
固定し、また免疫反応領域５ｂ、５ｄ、６ｂ、６ｄ、７
ｂ、７ｄには抗Ｔ８モノクローナル抗体を固定する。
まず、支持体１を充分に洗浄し、滅菌して乾燥した。次
に、免疫反応領域５ａ、５ｃ、６ａ。
６ｃ、７ａ、７ｃには抗Ｔ４モノクローナル抗体を、ま
た免疫反応領域５ｂ、５ｄ、６ｂ、６ｄ。
７ｂ、７ｄには抗Ｔ８モノクローナル抗体を夫々５μｇ
ずつ分注した。これを温室中に２時間放置した。次いで
、ＰＢＳ中に浸漬して洗浄した後、３％ゼラチン中に浸
漬し、室温で１時間放置した。
続いて、ゼラチンを除去した後にＰＢＳ中に浸漬して洗
浄した後、風乾することによりＡＩＤＳ診断用の免疫検
定器具を得た。　・ 上記で得た免疫検定器具を用れば、次のようにしてＴ４
／Ｔ８比の測定を行なうことができる。
検定は六つの検体Ａ−Ｆについて行なう。検体は、何れ
もヒトリンパ球の浮遊液である。各検体の５μｇを、隣
合うＴ４−免疫反応領域およびＴ−８免疫反応領域に分
注する。即ち、免疫反応５ａ、５ｂに検体Ａを、免疫反
応領域５ｃ、５ｄに検体Ｂを、免疫反応領域６ａ、６ｂ
に検体Ｃを、免疫反応領域６ｃ、６ｄに検体りを、免疫
反応領域７ａ、７ｂに検体Ｅを、免疫反応領域７ｃ。
７ｄに検体Ｆを、夫々分注する。温室中において室温で
３０分間放置することにより、夫々の免疫反応領域で特
異的な抗原抗体反応を行なわせる。続いて、器具をＰＢ
Ｓ中に浸漬して洗浄することにより、免疫反応領域に特
異的に結合しなかった細胞を洗い流す。各検体Ａ−Ｆに
ついて、Ｔ４−免疫反応領域に結合した細胞の数および
Ｔ８−免疫反応領域に結合した細胞の数を調べ、これに
基づいて各検体の７４／Ｔ８比を算出する。
上記のように、この実施例では六つの検体について同時
に測定ができ、処理能力が向上する。また、ＡＩＤＳ患
者の検体が器具の外に流失しないため、検査の安全性を
高めることができる。しかも、免疫検定試薬または検体
が相互に混ざり合うのを防止でき、正確な検定ができる
。
実施例２　（Ｔ／Ｂ比の測定） この実施例ではＴ細胞とＢｍｂの比（Ｔ／Ｂ比）を測定
する。Ｔ／Ｂ比は一般に値が決まっている（いわゆる正
常値）。従って、Ｔ／Ｂ比が正常値から大きくズしてい
たならば何等かの血液疾患が疑われる。例えばＴ／Ｂ比
が大であれば、Ｔ細胞が異常に増加するＡ　Ｔ　Ｌ　（
Ａｄｕｌｔ　Ｔ−ｃｅｌｌ　Ｌｅｕｃｅａ＋ｉａ）を疑
わうことができる。また、Ｔ／Ｂ比が小であれば、Ｂ細
胞系のガンを疑うことができる。
この実施例でも、第１図で説明間した免疫検定器具を用
いる。その際、次のようにして免疫反応領域５ａ、５ｃ
、６ａ、６ｃ、７ａ、７ｃには抗Ｔ細胞抗体を固定し、
また免疫反応領域５ｂ。
５ｄ、６ｂ、６ｄ、７ｂ、７ｄには抗Ｂ細胞抗体を固定
する。
まず、支持体１を充分に洗浄し、滅菌して乾燥した。次
に、免疫反応領域５ａ、５ｃ、６ａ。
６ｃ、７ａ、７ｃには抗Ｔ細胞抗体を、また免疫反応領
域５ｂ、５ｄ、６ｂ、６ｄ、７ｂ、７ｄには抗Ｂ細胞抗
体を夫々５μρずつ分注した。これを温室中に２時間放
置した。次いで、ＰＢＳ中に浸漬して洗浄した後、３％
ゼラチン中に浸漬し、室温で１時間放置した。続いて、
ゼラチンを除去した後にＰＢＳ中に浸漬して洗浄した後
、風乾することによりＴ／Ｂ比測定用の免疫検定器具を
得た。
検定は六つの検体Ａ−Ｆについて行なう。検体は、何れ
もヒトリンパ球の浮遊液である。各検体の５μｇを、隣
合うＴ細胞−免疫反応領域およびＢ細胞−免疫反応領域
に分注する。即ち、免疫反応５ａ、５ｂに検体Ａを、免
疫反応領域５ｃ。
５ｄに検体Ｂを、免疫反応領域６ａ、６ｂに検体Ｃを、
免疫反応領域６ｃ、６ｄに検体りを、免疫反応領域７ａ
、７ｂに検体Ｅを、免疫反応領域７ｃ、７ｄに検体Ｆを
、夫々分注する。温室中において室温で３０分間放置す
ることにより、夫々の免疫反応領域で特異的な抗原抗体
反応を行なわせる。続いて、器具をＰＢＳ中に浸漬して
洗浄することにより、免疫反応領域に特異的に結合しな
がった細胞を洗い流す。次に、支持体を５％ホルムアル
デヒド溶液に浸漬し、室温で３０分間インキュベートし
て細胞を固定する。続いてＰＢＳに浸漬して洗浄し、空
気乾燥させる。必要に応じ、ホルムアルデヒドによる固
定の後に、細胞を室温で３０分間イソシアン化フルオレ
セイン（ＰＢＳ中、０．０５ｍｇ／ｌｊ）で染色した後
、ＰＢＳで洗浄して空気乾燥する。顕微鏡により、各検
体Ａ−Ｆについて、Ｔ細胞−免疫反応領域に結合した細
胞の数およびＢ細胞−免疫反応領域に結合した細胞の数
をカウントし、または単位面積当りの細胞数をカウント
することにより、各検体のＴ／Ｂ比を算出する。
上記のように、この実施例においても、実施例１と同様
に六つの検体について同時にａｌｌ定かでき、処理能力
が向上する。また、検体が器具の外に流失しないため、
検査の安全性を高めることができる。しかも、免疫検定
試薬または検体が相互に混ざり合うのを防止でき、正確
な検定が可能となる。
実施例３　（ＨＬＡ抗原のタイピング）この実施例では
、第２図の免疫検定器具を用いてＨＬＡ抗原（Ｈｕｍａ
ｎ　Ｌｅｕｃｏｃｙｔｅ　Ａｎｔｌｇｅｎ）のタイピン
グを行なう。ＨＬＡ型と幾つかの疾患との間には強い相
関がみられることが知られている。
従って、被験者のＨＬＡ型を知ることによって特定の疾
病へのかかり易さを知ることができ、予防医学的な利益
が期待されている。また、ＨＬＡ抗原は臓器移植の成否
に強い影響を与えるため、ＨＬＡ抗原のタイピングは臓
器移植において極めて重要な意義を有してい名。
この実施例では、第２図の免疫反応領域群ＩをＭＨＣク
ラスＩ　（Ｍａｊｏｒ　Ｈｌｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉ
ｌｌｔｙＡｎｔｉｇｅｎ　Ｃ１ａｓｓ　Ｉ）に属するＨ
ＬＡ抗原の検定領域とし、免疫反応領域群■をＭＨＣク
ラスＩに属するＨＬＡ抗原の検定領域とした。
即ち、ＭＨＣクラスＩに属するＨＬＡ−Ａ列。
ＨＬＡ−Ｂ列、ＨＬＡ−Ｃ列の検定には、第２図におけ
るＡ行、Ｂ行および６行に配列された免疫反応領域を夫
々用いる。また、ＭＨＣクラス■に属するＨＬＡ−ＤＲ
列、ＨＬＡ−ＤＱ列、ＨＬＡ−ＤＰ列の検定には、第２
図におけるＥ行、Ｆ行およびＧ行に配列された免疫反応
領域を夫々用いる。
そのため、第２図におけるＡ行に配列される免疫反応領
域には、左端から順に、Ａ２．Ａ３゜Ａ９．ＡＩＯ，Ａ
２９．Ａ３２＋Ａ２５等のＨＬＡ抗原に対して特異的に
反応する抗ＨＬＡモノクローナル抗体を固定する。Ｂ行
に配列される免疫反応領域には、左端から順に、Ｂ７．
Ｂ８゜Ｂ１３．Ｂ１４＋Ｂ１８．Ｂ２７．Ｂ４０＋Ｂ７
゜ＢＷ４．ＢＷ６等のＨＬＡ抗原に対する抗ＨＬＡモノ
クローナル抗体を固定化する。６行に配列される免疫反
応領域には、左端から順に、ＣＷＩ。
ＣＷ２．ＣＷ３．ＣＷ４．ＣＷ５．ＣＷ６゜ＣＷ７．Ｃ
Ｗ８に対する抗血清を塗布する。Ｅ行に配列される免疫
反応領域には、左端から順に、ＤＲＩ、ＤＲ２，ＤＲ３
，ＤＲ４，ＤＲ５゜ＤＲ７，ＤＲ２＋ＤＲ４＋ＤＲＷ６
．ＤＲ４＋ＤＲ７，ＤＲＷ６＋ＤＲＷ８．ＤＲＷ８＋Ｄ
ＲＷ１２等に対する抗ＨＬＡモノクローナル抗体を固定
する。Ｆ行に配列される免疫反応領域には、左端から順
に、ＤＱＷＩ、ＤＱＷ３゜Ｄ　Ｑ　Ｗ　ａ等の夫々に対
する抗ＨＬＡモノクローチル抗体を固定する。
以下、上記免疫検定器具の製造と、これを用いたＨＬＡ
抗原のタイピングについて説明する。
まず、支持体１を充分に洗浄し、滅菌して乾燥した。次
に、上記で説明したＨＬＡ抗原同程のための抗体を１ｄ
ｇづつ、夫々の免疫反応領域に分注した後、これを温室
中に２時間放置する。次いで、ＰＢＳ中に浸漬して洗浄
した後、３％ゼラチン中に浸漬し、室温で１時間放置す
る。続いて、ゼラチンを除去した後にＰＢＳ中に浸漬し
て洗浄した後、風乾することにより上記のＨＬＡタイピ
ング用の免疫検定器具を得た。
上記で得た免疫検定器具を用れば、次のようにしてＨＬ
Ａのタイピングを行なうことができる。
検定は、ヒトリンパ球の浮遊液を用いて行なう。
この検体を全部の免疫反応領域に５μｇづつ分注する。
温室中において室温で３０分間放置することにより、夫
々の免疫反応領域で特異的な抗原抗体反応を行なわせる
。続いて、器具をＰＢＳ中に浸漬して洗浄することによ
り、免疫反応領域に特異的に結合しなかった細胞を洗い
流す。目視、顕微鏡または光電気検出装置により細胞が
付着した免疫反応領域を判定することにより、ＨＬＡタ
イピングを行なう。
上記のように、この実施例によれば、一つの検定器具だ
けで被験者のＨＬＡタイプを検査するために必要な全て
の免疫検定を行なうことができるため、処理能力が向上
する。また、個々の免疫反応領域に塗布する抗体の量が
少なくてすむため（１ａｇ）、高価な抗体を節約でき、
検査コストを低減することができる。また、内容が不明
の検体が器具外に流れ出るのを防止できるため、検査の
安全性を高めることができる。しかも、免疫検定試薬ま
たは検体が相互に混ざり合うのを防止でき、正確なＨＬ
Ａタイピングが可能となる。
〔発明の効果〕
以上詳述したように、を本発明によれば一つの免疫検定
器具で多数の免疫検定を同時に行なうことができ、検定
に必要な洗浄操作も容易である。
また、検体がプレート外に流出したり、混じり合ったり
するのを防止できるから、安全かつ正確に検定を行なう
ことができる等、顕著な効果を奏するものである。
【図面の簡単な説明】
第１図Ａ−Ｃは本発明による免疫検定器具の一実施例を
示す説明図、第２図は本発明による免疫検定器具の他の
実施例を示す平面図、第３図〜第７図は本発明による免
疫検定器具の更に別の実施例を示す図である。 １・・・支持体、２・・・プレート基板、３，３ａ〜３
ｄ・・・小突起、４・・・免疫検定試薬の溶液、５゜５
ａ　〜５ｄ、６ａ　〜６ｄ、７ａ　〜７ｄ−・・免疫反
応領域、８・・・溝 出願人代理人　弁理士　坪井　　淳 第１Ａ図 第１Ｂ図 第１０図 第２図 第３Ａ図　　　　　　　　第４Ａ図 第３８ｆｆｉ　　　　　　　　　　第４８図ら′ 第５Ｂ図 第７Ａ図　　　　　　　第７Ｃ図 第７Ｂ図

Claims (3)

    【特許請求の範囲】
  1. （１）平坦な表面を有するプレート基板と、該プレート
    基板の表面に互いに近接して突設された複数の突起と、
    隣接する突起の間に挟まれた平面領域に免疫検定試薬を
    塗布固定して形成された複数の免疫反応領域とを具備し
    、これら免疫反応領域は互いに離間されており、且つそ
    の表面レベルが前記プレート基板表面レベルよりも低く
    ないことを特徴とする免疫検定器具。
  2. （２）平坦な表面を有するプレート基板と、該プレート
    基板の表面に互いに近接して突設された複数の突起と、
    隣接する突起の間に挟まれた平面領域に免疫検定試薬を
    塗布固定して形成された複数の免疫反応領域とを具備し
    、これら免疫反応領域は互いに離間されている免疫検定
    器具を準備する工程と、検体である細胞懸濁液の所定量
    を前記免疫反応領域およびこれを限定する前記突起の側
    面に付着させて保持することにより、前記免疫反応領域
    に接触させる工程と、前記免疫反応領域に固定されてい
    る免疫検定試薬と前記検体液とを反応させ前記免疫検定
    試薬に細胞を結合させる工程と、結合されなかった細胞
    を洗い流す工程と、どの免疫反応領域に検体が結合され
    たかを決定することにより検体である細胞の表面におけ
    る特定の抗原の存在を定性的に決定する工程とを具備し
    たことを特徴とする免疫検定方法。
  3. （３）平坦な表面を有するプレート基板と、該プレート
    基板の表面に互いに近接して突設された複数の突起と、
    隣接する突起の間に挟まれた平面領域に免疫検定試薬を
    塗布固定して形成された複数の免疫反応領域とを具備し
    、これら免疫反応領域は互いに離間されている免疫検定
    器具を準備する工程と、検体である細胞懸濁液の所定量
    を前記免疫反応領域およびこれを限定する前記突起の側
    面に付着させて保持することにより前記免疫反応領域に
    接触させる工程と、前記免疫反応領域に固定されている
    免疫検定試薬と前記検体液とを反応させ前記免疫検定試
    薬に細胞を結合させる工程と、結合されなかった細胞を
    洗い流す工程と、各免疫反応領域に結合された細胞を定
    量することにより特定の抗原を有する細胞の割合を決定
    する工程とを具備したことを特徴とする免疫検定方法。
JP63309196A 1987-12-22 1988-12-07 免疫検定器具及びそれを用いた検定方法 Pending JPH01206258A (ja)

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