JPH01233370A - 総単クローンＩｇＧ測定用サンドウイツチ式イムノアツセイ - Google Patents
総単クローンＩｇＧ測定用サンドウイツチ式イムノアツセイInfo
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- JPH01233370A JPH01233370A JP1016545A JP1654589A JPH01233370A JP H01233370 A JPH01233370 A JP H01233370A JP 1016545 A JP1016545 A JP 1016545A JP 1654589 A JP1654589 A JP 1654589A JP H01233370 A JPH01233370 A JP H01233370A
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- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
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- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
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- G—PHYSICS
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔技術分野〕
本発明は腹水故、細胞培養媒質または精製ＩｇＧの検体
中の経本クローンＩｇＧ含有・量を、ＩｇＧ軽［１％な
抗体を用いたサンドウィッチ式イムノアッセイにより測
定することに関する。
中の経本クローンＩｇＧ含有・量を、ＩｇＧ軽［１％な
抗体を用いたサンドウィッチ式イムノアッセイにより測
定することに関する。
総革クローンＩｇＧを測定することは、商業用抗血清を
スクリーニングするため、および抗体生産用単クローン
細胞系統（七ルライン）をモニタリングするための品質
管理手段として重要である。
スクリーニングするため、および抗体生産用単クローン
細胞系統（七ルライン）をモニタリングするための品質
管理手段として重要である。
経本クローンＩｇＧ測定のための伝統的なイム／アッセ
イは、軽および重鎮抗体の両方を含む抗血清を用いてい
る。Ｂａｒａｎｄｕｎ ａｔ ａｌ、、 Ｐｒｏｔｉ−
ｄｓａ Ｂｉｏｌ、 Ｆｌｕｉｄｓ、 Ｐｒｏｏ、 Ｃ
ｏ１１ｏｑ、、Ｖｏｌｕｍｅ ２０．５７３（ｉ９７２
）は、抗に（カッパ）軽鎖ＩｇＧ抗体と抗ｒ（ガンマ）
ｍ鎖ＩｇＧ抗体の混合物を含む抗血清を用いた二重沈降
（ｄｏｕｂｌｅ ｌｉｖ＠ｐｒｅｏｉ−ｐｉｔａｔｉｏ
ｎ ）イムノアッセイを記載している。総革クローンＩ
ｇＧの測定に広く用いられているイムノアッセイは、抗
軽および抗重鎖ＩｇＧ抗体−の両者を共に捕捉および標
識抗体として含む多クローン抗血清を用いたサンドウィ
ッチ式イムノアッセイである。単クローンＩｇＧ量は検
輩叡のプロットから導かれる。
イは、軽および重鎮抗体の両方を含む抗血清を用いてい
る。Ｂａｒａｎｄｕｎ ａｔ ａｌ、、 Ｐｒｏｔｉ−
ｄｓａ Ｂｉｏｌ、 Ｆｌｕｉｄｓ、 Ｐｒｏｏ、 Ｃ
ｏ１１ｏｑ、、Ｖｏｌｕｍｅ ２０．５７３（ｉ９７２
）は、抗に（カッパ）軽鎖ＩｇＧ抗体と抗ｒ（ガンマ）
ｍ鎖ＩｇＧ抗体の混合物を含む抗血清を用いた二重沈降
（ｄｏｕｂｌｅ ｌｉｖ＠ｐｒｅｏｉ−ｐｉｔａｔｉｏ
ｎ ）イムノアッセイを記載している。総革クローンＩ
ｇＧの測定に広く用いられているイムノアッセイは、抗
軽および抗重鎖ＩｇＧ抗体−の両者を共に捕捉および標
識抗体として含む多クローン抗血清を用いたサンドウィ
ッチ式イムノアッセイである。単クローンＩｇＧ量は検
輩叡のプロットから導かれる。
サンドウィッチ式イムノアッセイは広く用いられてはい
るが、非実用的で欠点がある。ＩｇＧ重鎧はサブクラス
に分けらハる。サブクラスの数は動物権に依存する。一
つの単クローン細胞系統は一つのサブクラスのＩｇＧ重
鎖しか産生せず、またそれは細胞系統毎に異なり得る。
るが、非実用的で欠点がある。ＩｇＧ重鎧はサブクラス
に分けらハる。サブクラスの数は動物権に依存する。一
つの単クローン細胞系統は一つのサブクラスのＩｇＧ重
鎖しか産生せず、またそれは細胞系統毎に異なり得る。
一つのサブクラス九対する抗体は他のすべてのサブクラ
スと反応し得るが、その反応の程度はすべてのサブクラ
スについて同じとは限らない。多クローン抗血清は、各
サブクラスをほぼ同じ−」合で含むことから、どのサブ
クラスが存在していようと単クローンＩｇＧを含むいか
なる検体のアッセイにも用いることができる。しかしな
がら、各サブクラスはその多クローン抗血清に対し異な
る反応を呈し、また応答は検体毎に異なることになる。
スと反応し得るが、その反応の程度はすべてのサブクラ
スについて同じとは限らない。多クローン抗血清は、各
サブクラスをほぼ同じ−」合で含むことから、どのサブ
クラスが存在していようと単クローンＩｇＧを含むいか
なる検体のアッセイにも用いることができる。しかしな
がら、各サブクラスはその多クローン抗血清に対し異な
る反応を呈し、また応答は検体毎に異なることになる。
この応答差があるために、アッセイされるあらゆる単り
一一ンＩｇＧ検体の検量線を作成するのに異なるＭ’！
キャリブレータを用いる必要がある。このアッセイはう
まくいくとしても、個々の単クローン細胞系統に対し別
個のキャリブレータを必要とするため実用的でないＯ 伝統的なサンドウィッチ式イムノアッセイのもう一つの
欠点は腹水液検体中の総革クローンＩｇＧの測定には使
用できない点である。腹水液はおよそ５〜３０％の非％
異免疫グロブリンを含有し、その７０〜９５−は宿主荀
与のＩｇＧである。宿主ＩｇＧの重鎖は、唯一のサブク
ラスより成る単クローンＩＫＧのｉＬ如とは異なった反
応性を多クローン抗血清に対して示すサブクラス混合物
より構成されている。腹水液の検体毎に異なった＊ｆｔ
ｉ工ｇＣｈサブクラス混合物が含まれている。こうした
理由から、キャリブレータを全く利用できず、また伝統
的なサンドウィッチ式イムノアッセイを用いたのでは総
革クローンＩｇＣ）または総ＩｇＧ含量の測定を正しく
行うことはできない。現在のところ、腹水液検体中の総
ＩｇＧ含量の測定に利用できる方法はＨＰＬＣだけであ
る。
一一ンＩｇＧ検体の検量線を作成するのに異なるＭ’！
キャリブレータを用いる必要がある。このアッセイはう
まくいくとしても、個々の単クローン細胞系統に対し別
個のキャリブレータを必要とするため実用的でないＯ 伝統的なサンドウィッチ式イムノアッセイのもう一つの
欠点は腹水液検体中の総革クローンＩｇＧの測定には使
用できない点である。腹水液はおよそ５〜３０％の非％
異免疫グロブリンを含有し、その７０〜９５−は宿主荀
与のＩｇＧである。宿主ＩｇＧの重鎖は、唯一のサブク
ラスより成る単クローンＩＫＧのｉＬ如とは異なった反
応性を多クローン抗血清に対して示すサブクラス混合物
より構成されている。腹水液の検体毎に異なった＊ｆｔ
ｉ工ｇＣｈサブクラス混合物が含まれている。こうした
理由から、キャリブレータを全く利用できず、また伝統
的なサンドウィッチ式イムノアッセイを用いたのでは総
革クローンＩｇＣ）または総ＩｇＧ含量の測定を正しく
行うことはできない。現在のところ、腹水液検体中の総
ＩｇＧ含量の測定に利用できる方法はＨＰＬＣだけであ
る。
ヒト免疫グロブリンの軽鎖に％異な単クローン抗体が調
製されヒトの生物学約数体中の免疫グロブリンおよびＩ
ｇＧのサブポピユレーションについてのイムノアッセイ
に用いられている。
製されヒトの生物学約数体中の免疫グロブリンおよびＩ
ｇＧのサブポピユレーションについてのイムノアッセイ
に用いられている。
Ｌｏｖｅ ａｔ ｅＬ工、、 Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇ
ｙ、 Ｖｏｌ、 ４２％ ６ ４ ９（ｉ９８１
）およびＤＤ２４３１８４（ｉ９８７年２月２５日公表
）は、ヒト免疫グロブリン軽量Ｋ対する単クローン抗体
の調製、およびＢす／パ球細胞表面免疫グロブリンの検
出のためのそれらの使用を記載している。後者は更にこ
れら単クローン抗体を生物学的故体中の免疫グロブリン
の定量および定性分析に用いることをも記載している０
Ａｘｉａｋ ＠ｔ ａｌ、、 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａ１Ｍ＠ｔｈｏｄａ、 Ｖｏｌ
、 ９９．１４１（ｉ９８７）は、単クローン抗に軽鎖
ＩｇＧ抗体を用いてヒト尿および血清中の遊離に軽鎖免
疫グロブリン断片の有無を測定する抑制酵素結合イムノ
アッセイを記載している。まず検体をビオチニル化単ク
ローン抗Ｓ軽ｊＩＡＩｇＧ抗体とインキュベートし、次
いでアリフートのその混合物を固定されたｌ鎖とインキ
ュベートしそして固定されたに鎖に結合されたビオチニ
ル化抗体の量を測定するというものである。このアラ七
イの単クローン抗体は、遊離に鎮に対してのみ特異であ
る。著者によれば、抗に軽鎖ＩｇＧ抗体は、ｌ鎮が重鎮
に結合しているときはその抗体によりｇ識される結合部
位、は表われることがないから重鎮対合に軽鎖と反応す
ることはなく、またそれ故に総ＩｇＧを求めるためのイ
ムノアッセイに用いることはできない。
ｙ、 Ｖｏｌ、 ４２％ ６ ４ ９（ｉ９８１
）およびＤＤ２４３１８４（ｉ９８７年２月２５日公表
）は、ヒト免疫グロブリン軽量Ｋ対する単クローン抗体
の調製、およびＢす／パ球細胞表面免疫グロブリンの検
出のためのそれらの使用を記載している。後者は更にこ
れら単クローン抗体を生物学的故体中の免疫グロブリン
の定量および定性分析に用いることをも記載している０
Ａｘｉａｋ ＠ｔ ａｌ、、 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａ１Ｍ＠ｔｈｏｄａ、 Ｖｏｌ
、 ９９．１４１（ｉ９８７）は、単クローン抗に軽鎖
ＩｇＧ抗体を用いてヒト尿および血清中の遊離に軽鎖免
疫グロブリン断片の有無を測定する抑制酵素結合イムノ
アッセイを記載している。まず検体をビオチニル化単ク
ローン抗Ｓ軽ｊＩＡＩｇＧ抗体とインキュベートし、次
いでアリフートのその混合物を固定されたｌ鎖とインキ
ュベートしそして固定されたに鎖に結合されたビオチニ
ル化抗体の量を測定するというものである。このアラ七
イの単クローン抗体は、遊離に鎮に対してのみ特異であ
る。著者によれば、抗に軽鎖ＩｇＧ抗体は、ｌ鎮が重鎮
に結合しているときはその抗体によりｇ識される結合部
位、は表われることがないから重鎮対合に軽鎖と反応す
ることはなく、またそれ故に総ＩｇＧを求めるためのイ
ムノアッセイに用いることはできない。
Ｔｅｆｆ＠ｒｉａ等に対し１９８６年１０月２１日に交
付された米国特許第４，６１８，５８９号は、ヒト検体
中の総ＩｇＧまたはＩｇＧのサブポピユレーションを測
定するための、ＩｇＧ分子上の二つの区別される抗原性
結合部位１ｃ％異な単クローン抗体を用いる免疫沈降ア
ラ七イを開示している。このアラ七イは、測定可能な沈
降を形成するために１異なる結合部位に特異な二つの単
クローン抗体を必要とする。単クローン抗軽鎖ＩｇＧ抗
体だけを用いたのではこのような沈降は得られない。
付された米国特許第４，６１８，５８９号は、ヒト検体
中の総ＩｇＧまたはＩｇＧのサブポピユレーションを測
定するための、ＩｇＧ分子上の二つの区別される抗原性
結合部位１ｃ％異な単クローン抗体を用いる免疫沈降ア
ラ七イを開示している。このアラ七イは、測定可能な沈
降を形成するために１異なる結合部位に特異な二つの単
クローン抗体を必要とする。単クローン抗軽鎖ＩｇＧ抗
体だけを用いたのではこのような沈降は得られない。
細胞培養媒質、腹水漱および精製ＩｇＧ［対して行うこ
とができまた単一のキャリブレータしか必要としない経
本クローンＩ＆Ｇ含量測定の為の実用的なイムノアッセ
イが必要とされている。
とができまた単一のキャリブレータしか必要としない経
本クローンＩ＆Ｇ含量測定の為の実用的なイムノアッセ
イが必要とされている。
経年クローンＩｇＧ ｔ １１測定のための本発明のサ
ンドウィッチ式イムノアッセイは次の騙段階、すなわち
： （５Ｌ） 単クローンＩｇＧを含有する検体を（ｉ）
該単クローンＩｇｌＣ％’異な抗におよび抗λ（ラムダ
）軽鎖ＩｇＧ捕捉抗体、または（ｉ）該単クローンＩｇ
Ｇの起源である動物種における主たるＩｇＣ）軽鎖タイ
プ（ただし該ＩｇＧ軽鎖タイプは該動物種における総Ｉ
ｇＧの少くとも９５％を構成するものとする）に特異な
ＩＫＧ ？）１捉抗体 を有する支持体と接触させることＫより第一反応混合物
を形成し； ［有］）段階（ａ）で形成された捕捉抗体と単クローン
ＩｇＧの結合第一複合体を未結合単クローン工ｇＧから
分離し； （６） 前記第−複合体を、前記捕捉抗体と同じ対Ｉ
ｇＣ１１ｍタイプ特異性を有する少くとも一つのｌ！Ａ
Ｐ＆された抗軽鎖ＩｇＧ抗体と接触させることにより第
二反応混合物管形成し； （（ｉ） そのようにして形成された標識された抗体
と前記第一複合体の結合第二複合体を未結合の標識され
た抗体から分離し； （ｅ） 該第二複合体中の標識量ｆｔ測定し；そして
（ｆ） キャリブレータを用いて作成された検ｍｉか
ら総単クロー：、ｙ ＩｇＧ含泣を計算する段階よりな
る。
ンドウィッチ式イムノアッセイは次の騙段階、すなわち
： （５Ｌ） 単クローンＩｇＧを含有する検体を（ｉ）
該単クローンＩｇｌＣ％’異な抗におよび抗λ（ラムダ
）軽鎖ＩｇＧ捕捉抗体、または（ｉ）該単クローンＩｇ
Ｇの起源である動物種における主たるＩｇＣ）軽鎖タイ
プ（ただし該ＩｇＧ軽鎖タイプは該動物種における総Ｉ
ｇＧの少くとも９５％を構成するものとする）に特異な
ＩＫＧ ？）１捉抗体 を有する支持体と接触させることＫより第一反応混合物
を形成し； ［有］）段階（ａ）で形成された捕捉抗体と単クローン
ＩｇＧの結合第一複合体を未結合単クローン工ｇＧから
分離し； （６） 前記第−複合体を、前記捕捉抗体と同じ対Ｉ
ｇＣ１１ｍタイプ特異性を有する少くとも一つのｌ！Ａ
Ｐ＆された抗軽鎖ＩｇＧ抗体と接触させることにより第
二反応混合物管形成し； （（ｉ） そのようにして形成された標識された抗体
と前記第一複合体の結合第二複合体を未結合の標識され
た抗体から分離し； （ｅ） 該第二複合体中の標識量ｆｔ測定し；そして
（ｆ） キャリブレータを用いて作成された検ｍｉか
ら総単クロー：、ｙ ＩｇＧ含泣を計算する段階よりな
る。
本発明のサンドウィッチ式イムノアッセイは、単クロー
ンＩｇＧの検体中の庇単クローンＩｇＧ含固を便利な方
法で測定するのに有用である。これらの検体には、細胞
培養媒質、腹水猷および精製ｒｇＧが包含される。
ンＩｇＧの検体中の庇単クローンＩｇＧ含固を便利な方
法で測定するのに有用である。これらの検体には、細胞
培養媒質、腹水猷および精製ｒｇＧが包含される。
本発明の重要な特徴は、ｒｇＧｌ；ｌ釦に特異な抗体を
用いることである。ＩｇＣ）軽ｆｔＩＫは二つのサブク
ラス、すなわちｌおよびλ、しかないことから、検体中
の単クローンＩｇＧによる抗＠幀ＩｇＧ抗体に対する応
答はアッセイされる単クローンエｇＧの各検体について
類似することとなる。
用いることである。ＩｇＣ）軽ｆｔＩＫは二つのサブク
ラス、すなわちｌおよびλ、しかないことから、検体中
の単クローンＩｇＧによる抗＠幀ＩｇＧ抗体に対する応
答はアッセイされる単クローンエｇＧの各検体について
類似することとなる。
しかしながら、腹水ばの検体においては、宿主の寄与に
係るＩｇＧも測定されることとなる。
係るＩｇＧも測定されることとなる。
何故なら、本発明の尻軽ｇｌ ＩｇＧ抗体は単クローン
ＩｇＧおよび外来の（ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｎ ） Ｉ
ｇＧを識別しないからである。従って実際には、宿主寄
与ＩｇＧを含む腹水などといった検体の場合は、総Ｉｇ
Ｇ含量、すなわち単クローンＩｇＧおよび宿主寄与Ｉｇ
Ｇ％が測定されることになる。一般に、腹水敲検体中の
宿主寄与ＩｇＧは総ＩｇＣ）の３０チに？ｌＩたず、ま
たおよそ３−という低さであり得ることから、宿主寄与
ＩｇＣ）の測定は、通常、使用アッセイの正確さ水準内
にある。宿主寄与非工ｇ（）免疫グロブリンも検出され
る可能性があるがその量は有意ではないであろう。
ＩｇＧおよび外来の（ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｎ ） Ｉ
ｇＧを識別しないからである。従って実際には、宿主寄
与ＩｇＧを含む腹水などといった検体の場合は、総Ｉｇ
Ｇ含量、すなわち単クローンＩｇＧおよび宿主寄与Ｉｇ
Ｇ％が測定されることになる。一般に、腹水敲検体中の
宿主寄与ＩｇＧは総ＩｇＣ）の３０チに？ｌＩたず、ま
たおよそ３−という低さであり得ることから、宿主寄与
ＩｇＣ）の測定は、通常、使用アッセイの正確さ水準内
にある。宿主寄与非工ｇ（）免疫グロブリンも検出され
る可能性があるがその量は有意ではないであろう。
抗におよび抗λ軽鯛ＩｇＧ抗体は既知の方法により得る
ことができる。例えば、遊離に軽ｇ工ｇＧ断片は担腫瘍
マウスの尿から単離することができ、また免疫能を有す
る宿主、例えばウサギ中に接種してマウスｌ軽鎖ＩｇＧ
ＶＣ％異な循環抗体を産生させることができる。捕捉
抗体は検体中に含まれる単クローンＩｇＧＩＣ％異でな
ければならないから、その免疫原は単クローンエｇＧの
起源とするものと同じ動物種のものでなければならない
。適切な活性水準が達成されれば、血清を採取し直接使
用することができ、あるいは、血清から抗体を既知の方
法により単離し精製することができる。精製抗体は完全
な形で使用することができ、あるいは、酵素消化により
、例えばパパインまたははプシンを用いて断片化し、そ
れぞれ−価または二価の抗体断片を生産することができ
る。免疫血清から精製された完全な抗体が好ましい。あ
るいはまた、リンパ球を宿主動物から採取することがで
き、そしてこれらリンパ球を適宜の不死細胞、例えばミ
エローマ細胞、と融合すれば所望の単クローン抗体を分
泌し得るハイブリドーマ細胞が生産されることになる。
ことができる。例えば、遊離に軽ｇ工ｇＧ断片は担腫瘍
マウスの尿から単離することができ、また免疫能を有す
る宿主、例えばウサギ中に接種してマウスｌ軽鎖ＩｇＧ
ＶＣ％異な循環抗体を産生させることができる。捕捉
抗体は検体中に含まれる単クローンＩｇＧＩＣ％異でな
ければならないから、その免疫原は単クローンエｇＧの
起源とするものと同じ動物種のものでなければならない
。適切な活性水準が達成されれば、血清を採取し直接使
用することができ、あるいは、血清から抗体を既知の方
法により単離し精製することができる。精製抗体は完全
な形で使用することができ、あるいは、酵素消化により
、例えばパパインまたははプシンを用いて断片化し、そ
れぞれ−価または二価の抗体断片を生産することができ
る。免疫血清から精製された完全な抗体が好ましい。あ
るいはまた、リンパ球を宿主動物から採取することがで
き、そしてこれらリンパ球を適宜の不死細胞、例えばミ
エローマ細胞、と融合すれば所望の単クローン抗体を分
泌し得るハイブリドーマ細胞が生産されることになる。
これらの技術は当架者の熟知するところであり、−収約
な説明はムｙｓｒ ａｔ ａｌ、。
な説明はムｙｓｒ ａｔ ａｌ、。
Ｉｍｍｕｎｃｏｈｅｍｉｏａｌ Ｍ＠ｔｈｏｄｓ ｉｎ
ｔｈｅ ＢｉｏｌｏｇｉｅａｌＳｏｉｓｎｏａａ ：
Ｅｎｚｙｍｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔ＠ｉｎｓ、人
ｏａｄｓｍｉ。
ｔｈｅ ＢｉｏｌｏｇｉｅａｌＳｏｉｓｎｏａａ ：
Ｅｎｚｙｍｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔ＠ｉｎｓ、人
ｏａｄｓｍｉ。
Ｐｒ＠ｓｓ、 Ｌｏｎｄｏｎ 、 １９８０ ？ ｐａ
ｇｅＢ５−１７にみることができる。
ｇｅＢ５−１７にみることができる。
本発明の捕捉抗体は支持体に固定され、そして単クロー
ンＩｇＧを結合してそれを検体から除去する。捕捉抗体
はイムノメトリックアッセイに通常用（・られるいずれ
の支持体に固定してもよい。支持体は固体または液体で
あってよく、そしてポリスチレン類、ポリエチレン類、
ポリカーボネート類、パーフルオロカーボンポリマー、
ガラス、被ｍａｉ性粒子および様々なラテックス粒子を
包含する。ポリスチレン微量定量プレー上は將に好まし
い支持体である。
ンＩｇＧを結合してそれを検体から除去する。捕捉抗体
はイムノメトリックアッセイに通常用（・られるいずれ
の支持体に固定してもよい。支持体は固体または液体で
あってよく、そしてポリスチレン類、ポリエチレン類、
ポリカーボネート類、パーフルオロカーボンポリマー、
ガラス、被ｍａｉ性粒子および様々なラテックス粒子を
包含する。ポリスチレン微量定量プレー上は將に好まし
い支持体である。
標識された尻軽顔ＩｇＣ）抗体は、商業的に容易に入手
できるか、または−収約な接合（ｅｏｎｊｕｇａ−ｔｉ
ｏｎ ）技術によって調製することができる。検出可能
な標識であればいずれも本発明のイムノアッセイに利用
することができる。これらＫは、ラジオアイソトープ、
発光性物質、蛍光団および酵素が包含される。酵素が好
ましい。
できるか、または−収約な接合（ｅｏｎｊｕｇａ−ｔｉ
ｏｎ ）技術によって調製することができる。検出可能
な標識であればいずれも本発明のイムノアッセイに利用
することができる。これらＫは、ラジオアイソトープ、
発光性物質、蛍光団および酵素が包含される。酵素が好
ましい。
本発明のサンドウィッチ式イムノアッセイは、固定され
た尻軽鎮ＩｇＧ抗体を単クローンエｇ（）含有検体と接
触させて第一複合体を形成し次いでこの複合体を標識さ
れた尻軽鎖ＩｇＧ抗体と接触させることによって行われ
るヘテロジーニアスなサンドウィッチ式イムノアッセイ
である。
た尻軽鎮ＩｇＧ抗体を単クローンエｇ（）含有検体と接
触させて第一複合体を形成し次いでこの複合体を標識さ
れた尻軽鎖ＩｇＧ抗体と接触させることによって行われ
るヘテロジーニアスなサンドウィッチ式イムノアッセイ
である。
詳細には、単クローンＩｇＧ含有検体を抗ｔおよび抗２
軽ＩＩｇＧ捕捉抗体のうちの少くとも一方を有する支持
体と接触させそしてその反応混合物を、免疫複合体を実
質的に完全に形成させるのに十分な時間および温度で、
通常は大体５７”Ｃで１時間、インキュベートすること
によって第一反応混合物を形成する。単一の軽鎖タイプ
が単クローンＩｇＣ）の起源となる動物種における総Ｉ
ｇＧの少くとも９５１ｓを構成する場合、その単一の軽
鎖タイプに特異な抗体を用いることができる。ＩｇＣ）
におよびλ軽鎖の分布は生物種ごとに異なる。単クロー
ンＩｇＧ含有検体は唯一のＩｇＧ軽釦軽鎖プより成るこ
とからそのＩｇＧ軽鎖タイプがにまたはλであることの
確率は、その単クローンＩｇＧの起源となった動物種に
依存する・例えば、マウスＩｇＣｈはおよそ９５チがｔ
ｔｉｉ鎖であり、またウマＩｇＧは実質的に１００−が
λ軽鎖である。従って、マウス単クローンＩｇＧ含有検
体がに軽鎖だけから成る確率はおよそ９５％であり、そ
してウマ単クローンエｇＧ含有検体がλＩＰ１鎖から成
る確率は１００チである。（Ａｔａｓｓｉａｔ ａｌ、
、 Ｍｏｌ＊ａｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ：
Ａ Ｔｅｘｔｂｏｏｋ 。
軽ＩＩｇＧ捕捉抗体のうちの少くとも一方を有する支持
体と接触させそしてその反応混合物を、免疫複合体を実
質的に完全に形成させるのに十分な時間および温度で、
通常は大体５７”Ｃで１時間、インキュベートすること
によって第一反応混合物を形成する。単一の軽鎖タイプ
が単クローンＩｇＣ）の起源となる動物種における総Ｉ
ｇＧの少くとも９５１ｓを構成する場合、その単一の軽
鎖タイプに特異な抗体を用いることができる。ＩｇＣ）
におよびλ軽鎖の分布は生物種ごとに異なる。単クロー
ンＩｇＧ含有検体は唯一のＩｇＧ軽釦軽鎖プより成るこ
とからそのＩｇＧ軽鎖タイプがにまたはλであることの
確率は、その単クローンＩｇＧの起源となった動物種に
依存する・例えば、マウスＩｇＣｈはおよそ９５チがｔ
ｔｉｉ鎖であり、またウマＩｇＧは実質的に１００−が
λ軽鎖である。従って、マウス単クローンＩｇＧ含有検
体がに軽鎖だけから成る確率はおよそ９５％であり、そ
してウマ単クローンエｇＧ含有検体がλＩＰ１鎖から成
る確率は１００チである。（Ａｔａｓｓｉａｔ ａｌ、
、 Ｍｏｌ＊ａｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ：
Ａ Ｔｅｘｔｂｏｏｋ 。
Ｍａｒｃ＠ｌ Ｄ＠ｋｋｅｒ 、 Ｉｎｏ、、 Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ、 １９８４．１５５に−ジ）主たるＩｇＧ
軽釧タイプが存在しない生物種を起源とする単クローン
ＩＫＧ 、例えばと） ＩｇＣ）を含有する検体につい
ては、検体中に存在する単クローンＩｇＧが存在するＩ
ｇＧ軽鎖タイプの如何にかかわらず捕捉され測定される
ことを保証するために１抗におよび抗λ軽鎖ＩｇＧ抗体
の両方を使用する必要がある。
Ｙｏｒｋ、 １９８４．１５５に−ジ）主たるＩｇＧ
軽釧タイプが存在しない生物種を起源とする単クローン
ＩＫＧ 、例えばと） ＩｇＣ）を含有する検体につい
ては、検体中に存在する単クローンＩｇＧが存在するＩ
ｇＧ軽鎖タイプの如何にかかわらず捕捉され測定される
ことを保証するために１抗におよび抗λ軽鎖ＩｇＧ抗体
の両方を使用する必要がある。
第一複合体中の結合率クローンＩＫＧは任意の都合のよ
い手段、例えば濾過および遠心分離などＫより、未結含
率クローンＩｇＧから分離することができる。捕捉抗体
と単クローンＩｇＣ）の第１合体を有する支持体を次い
で標識された尻軽鎖ＩＫＧ抗体と接触させる。第二免疫
爆合体の形成を再び室温で約１時間で実質的に完結させ
る。ｒＡ識された尻軽鎖ＩｇＧ抗体と第一複合体のこの
第二接合体を次いで未結合の標識された抗体から分離す
る。
い手段、例えば濾過および遠心分離などＫより、未結含
率クローンＩｇＧから分離することができる。捕捉抗体
と単クローンＩｇＣ）の第１合体を有する支持体を次い
で標識された尻軽鎖ＩＫＧ抗体と接触させる。第二免疫
爆合体の形成を再び室温で約１時間で実質的に完結させ
る。ｒＡ識された尻軽鎖ＩｇＧ抗体と第一複合体のこの
第二接合体を次いで未結合の標識された抗体から分離す
る。
標識された抗体は、捕捉抗体のＵ鎮タイプに対する特異
性および単クローンＩｇＯの検体の採取源である動物種
にお番ブる主たる軽鎖タイプのｔｔ′ＪＲＫ応じて、単
一のＩｇＧ軽鎖に対して、あるいは両方のＩｇＣ）軽鎖
に対して特異的なものとすることができる。捕捉抗体が
単一のＩｇＧ軽栢タイプに特異である場合には、標識さ
れた抗体は両方のＩｇＧ軽鎖に対して、または同じ単一
の工（軽鎖タイプに対して特異なものとすることができ
る。単一のＩｇＧ＠鎖タイプに特異な捕捉抗体は、単一
のＩｇＧ軽鎖タイプが単クローンＩｇＧ含有検体の採取
源である動物種における総ＩｇＧの少くとも９５チを構
成する場合にのみ用いられることから、両方のＩｇＧ軽
鎖に特異な標識された尻軽鎖ｒｇＧ抗体の使用は経年ク
ローンＩｇＧ含量の測定にほとんど影響しないであろう
。捕捉抗体が両方のＩｇＧ Ｉｆ鎮に％異である場合に
は、標識された尻軽鎖ＩｇＣ）抗体は、両方のＩｇＧ軽
鎧に対してまたは一つのＩｇＧ軽鎖タイプに対して特異
なものとすることができる。例えば、マウス単クローン
ＩｇＧ含有検体中の経本クローンＩｇＧ測定のためのア
ラ七イにおいてその捕捉抗体が抗に軽鎖ＩｇＧ抗体だけ
である場合には、標識された尻軽鎖、ＩｇＧ抗体は、抗
に軽鎖１ｇ（）抗体、または抗ｌおよび抗λ軽鎖ＩｇＧ
抗体の混合物とすることができる。捕捉抗体が抗ｔおよ
び抗λ軽鎖ＩｇＧ抗体の両方である場合には、標識され
た尻軽鎖ＩｇＧ抗体は、抗におよび抗λ軽鎮ＩｇＧ抗体
の混合物、または好ましくは抗に軽鎖ＩｇＧ抗体、とす
ることができる。
性および単クローンＩｇＯの検体の採取源である動物種
にお番ブる主たる軽鎖タイプのｔｔ′ＪＲＫ応じて、単
一のＩｇＧ軽鎖に対して、あるいは両方のＩｇＣ）軽鎖
に対して特異的なものとすることができる。捕捉抗体が
単一のＩｇＧ軽栢タイプに特異である場合には、標識さ
れた抗体は両方のＩｇＧ軽鎖に対して、または同じ単一
の工（軽鎖タイプに対して特異なものとすることができ
る。単一のＩｇＧ＠鎖タイプに特異な捕捉抗体は、単一
のＩｇＧ軽鎖タイプが単クローンＩｇＧ含有検体の採取
源である動物種における総ＩｇＧの少くとも９５チを構
成する場合にのみ用いられることから、両方のＩｇＧ軽
鎖に特異な標識された尻軽鎖ｒｇＧ抗体の使用は経年ク
ローンＩｇＧ含量の測定にほとんど影響しないであろう
。捕捉抗体が両方のＩｇＧ Ｉｆ鎮に％異である場合に
は、標識された尻軽鎖ＩｇＣ）抗体は、両方のＩｇＧ軽
鎧に対してまたは一つのＩｇＧ軽鎖タイプに対して特異
なものとすることができる。例えば、マウス単クローン
ＩｇＧ含有検体中の経本クローンＩｇＧ測定のためのア
ラ七イにおいてその捕捉抗体が抗に軽鎖ＩｇＧ抗体だけ
である場合には、標識された尻軽鎖、ＩｇＧ抗体は、抗
に軽鎖１ｇ（）抗体、または抗ｌおよび抗λ軽鎖ＩｇＧ
抗体の混合物とすることができる。捕捉抗体が抗ｔおよ
び抗λ軽鎖ＩｇＧ抗体の両方である場合には、標識され
た尻軽鎖ＩｇＧ抗体は、抗におよび抗λ軽鎮ＩｇＧ抗体
の混合物、または好ましくは抗に軽鎖ＩｇＧ抗体、とす
ることができる。
第二複合体中の標Ｉｌ！（それは検体の総単クロー７１
１Ｇ含量の尺度である）を次いで測定するが、測定方法
は使用されたｔＩａ識に依存する。
１Ｇ含量の尺度である）を次いで測定するが、測定方法
は使用されたｔＩａ識に依存する。
例えば、標識がラジオアイソトープである場合には、測
定は放射能計数装置を用いて行われる。
定は放射能計数装置を用いて行われる。
標識が蛍光団である場合には、測定は蛍光分光光度計を
用いて行われる。標識の性質によっては適宜の基質を添
加してはじめて標識の測定が可能となる場合がある。例
えば、標識は、基質を有色Ｉ＆終終生動物直接変える酵
素であってもよい。
用いて行われる。標識の性質によっては適宜の基質を添
加してはじめて標識の測定が可能となる場合がある。例
えば、標識は、基質を有色Ｉ＆終終生動物直接変える酵
素であってもよい。
総革クローンＩｇＧはキャリブレータを用いることによ
り作成された検量線のプロットから計算することができ
る。本発明のキャリブレータは、同一生物種の異なる基
クローン細胞系統からの単クローンＩｇＧを含有する同
じタイプのいくつかの検体を同時にアッセイするのに、
単一のキャリブレータしか必要としな（・点で独特であ
る。更に、はじめてキャリブレータが脱水液のアッセイ
に利用可能となる。使用されるキャリブレータはアッセ
イされる検体のタイプに依存する。単クローンＩｇＧ含
有検体が細胞培養媒質である場合は、キャリブレータは
その検体中の培地と同じである新鮮な培地、またはＰＢ
Ｓで再水和されたプールされた凍結乾燥ＩｇＧである。
り作成された検量線のプロットから計算することができ
る。本発明のキャリブレータは、同一生物種の異なる基
クローン細胞系統からの単クローンＩｇＧを含有する同
じタイプのいくつかの検体を同時にアッセイするのに、
単一のキャリブレータしか必要としな（・点で独特であ
る。更に、はじめてキャリブレータが脱水液のアッセイ
に利用可能となる。使用されるキャリブレータはアッセ
イされる検体のタイプに依存する。単クローンＩｇＧ含
有検体が細胞培養媒質である場合は、キャリブレータは
その検体中の培地と同じである新鮮な培地、またはＰＢ
Ｓで再水和されたプールされた凍結乾燥ＩｇＧである。
新鮮な培地で再水和するのが好ましい。単クローンＩｇ
Ｇ含有検体が脱水液である場合には、キャリブレータは
、すべてのＩｇＧが除かれた腹水液で再水和されたプー
ルされた凍結乾燥ｒｇ（）である。ＩｇＧは、腹水液を
プロティン人クロマトグラフィーカラムに通すことＫよ
゛つて除去することができる。
Ｇ含有検体が脱水液である場合には、キャリブレータは
、すべてのＩｇＧが除かれた腹水液で再水和されたプー
ルされた凍結乾燥ｒｇ（）である。ＩｇＧは、腹水液を
プロティン人クロマトグラフィーカラムに通すことＫよ
゛つて除去することができる。
本発明のサンドウィッチ式イムノアッセイは、総革クロ
ーンＩｇＧ含量を測定するための伝統的なアッセイに比
べいくつかの長所を有している。
ーンＩｇＧ含量を測定するための伝統的なアッセイに比
べいくつかの長所を有している。
アッセイが尻軽１ｘｇｏ抗体を用いることから、重鎖サ
ブクラスによる応答差はない。単クローン細胞系統毎の
応答は類似しており、また一つのキャリブレータしか必
要でない。同じ運出で、本アッセイは、脱水液の検体中
の総革クローンＩｇＧの測定にも用いることができる。
ブクラスによる応答差はない。単クローン細胞系統毎の
応答は類似しており、また一つのキャリブレータしか必
要でない。同じ運出で、本アッセイは、脱水液の検体中
の総革クローンＩｇＧの測定にも用いることができる。
宿主寄与ＩｇＧの１頗サブクラスによる応答変動は本ア
ッセイの障害とならない。更に、都−のキャリブレータ
がいずれの腹水液検体にも使えることが分っている。腹
水液中の総革クローンＩｇＧ含量の測定は、生体内（ｉ
ｎ ｖｌｖｏ ）で増殖する細胞系統の抗体産住のモニ
タリングに特に重要である。
ッセイの障害とならない。更に、都−のキャリブレータ
がいずれの腹水液検体にも使えることが分っている。腹
水液中の総革クローンＩｇＧ含量の測定は、生体内（ｉ
ｎ ｖｌｖｏ ）で増殖する細胞系統の抗体産住のモニ
タリングに特に重要である。
次に実施例を挙げて本発明を説明１−る。
実施例
脱水液検体中の総ＩｇＧ を量の測定
平底９６ウ工ル式微量定量プレー） （Ｘｘｎｍｕｌｏ
ｎ２、Ｔｉｔｅｒｔ＠に社より入手可）をまず脱イオン
水で洗浄し、そして乾燥状態にプロットした（ ｂｌｏ
−ｔｔ＠ｄ ｄｒｙ ）。捕捉抗体、ヒツジ抗マウスに
軽鎖ＩｇＧ抗血清（Ｎｏｒｄｉａ社より入手町。カタロ
グ番号８ｈＡＭ／ＢＪ−Ｋ（８Ｄ＋ＨＤ） ／ ７ Ｓ
）を［１１Ｍ警炭酸塩緩衝猷（ｐＨ９，５）中で１２
２００に希釈し、そして１００ＩＩＬの抗体Ｍ／ｆｆｌ
を各ウェルに添加した。そのプレートを蔽い、３７℃で
２時間インキユベートシ、次いで４℃で一夜庁蔵した。
ｎ２、Ｔｉｔｅｒｔ＠に社より入手可）をまず脱イオン
水で洗浄し、そして乾燥状態にプロットした（ ｂｌｏ
−ｔｔ＠ｄ ｄｒｙ ）。捕捉抗体、ヒツジ抗マウスに
軽鎖ＩｇＧ抗血清（Ｎｏｒｄｉａ社より入手町。カタロ
グ番号８ｈＡＭ／ＢＪ−Ｋ（８Ｄ＋ＨＤ） ／ ７ Ｓ
）を［１１Ｍ警炭酸塩緩衝猷（ｐＨ９，５）中で１２
２００に希釈し、そして１００ＩＩＬの抗体Ｍ／ｆｆｌ
を各ウェルに添加した。そのプレートを蔽い、３７℃で
２時間インキユベートシ、次いで４℃で一夜庁蔵した。
そのプレートを次いで洗浄ａ！＆Ｍ （［１１５Ｍ塩化
ナトリウム、α０１ＭｔＡ酸二水累ナトリラム、α１チ
２−り００ア七ドアミド、（ｉ０５％ Ｔｒｉｔｏｎ
Ｘ−１００”ｐＨ７８）で十分洗浄して未結合捕捉抗
体をすべて除去し、そして乾燥状態にプロットした。
ナトリウム、α０１ＭｔＡ酸二水累ナトリラム、α１チ
２−り００ア七ドアミド、（ｉ０５％ Ｔｒｉｔｏｎ
Ｘ−１００”ｐＨ７８）で十分洗浄して未結合捕捉抗
体をすべて除去し、そして乾燥状態にプロットした。
２００μｔのブロッキングａ衝故（α１Ｍ重炭酸ナトリ
ウム、０．０５ ％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００ｓ
２．０容量チウマ血清；ｐＨ９，５）を各ウェルに添加
し、そのプレートを室温で１時間インキ二は一トし、次
いで前記洗浄緩衝液で十分洗浄した。
ウム、０．０５ ％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００ｓ
２．０容量チウマ血清；ｐＨ９，５）を各ウェルに添加
し、そのプレートを室温で１時間インキ二は一トし、次
いで前記洗浄緩衝液で十分洗浄した。
キャリブレータは、プールされ、凍結乾燥され、アフイ
ニテイ精製された！ウスＩｇＧ （Ｚｙｚｅｄ社より入
手可。カタログ番号０２−．６５０２ ）をＩｇＧの除
かれたマウス腹水液で再水和して５岬ＩｇＧ／−溶液と
することによって調製した。そのキャリブレータを希釈
用緩＠液（α５Ｍ塩化ナシリウム％０．０１Ｍ燐酸二水
素ナトリウム、α０５チＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００ｑ
２．０容量−ウ！血清；ｐ！（７，８）で希釈して第１
表に示される。＊ｇ希釈液ｔ−調製した。
ニテイ精製された！ウスＩｇＧ （Ｚｙｚｅｄ社より入
手可。カタログ番号０２−．６５０２ ）をＩｇＧの除
かれたマウス腹水液で再水和して５岬ＩｇＧ／−溶液と
することによって調製した。そのキャリブレータを希釈
用緩＠液（α５Ｍ塩化ナシリウム％０．０１Ｍ燐酸二水
素ナトリウム、α０５チＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００ｑ
２．０容量−ウ！血清；ｐ！（７，８）で希釈して第１
表に示される。＊ｇ希釈液ｔ−調製した。
１：１００ ５０
１：２００ ２５
１４００ １２．５
１：ｓｏｏ ｉ５
１：１ｉ０ ３．１２５
１ ：５２００ １５６３１：６４００
α７８１１：１２８００ ０
．５９１それぞれ、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ＨＣＧ
）、胎児性癌抗ｉ（ｃｇ人）およびフェニトイン（ＰＴ
Ｎ）に対する抗体を含有する単クローン腹水液検体であ
る三役体をＡｆＪ記キャリブレータと同様に希釈した。
α７８１１：１２８００ ０
．５９１それぞれ、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ＨＣＧ
）、胎児性癌抗ｉ（ｃｇ人）およびフェニトイン（ＰＴ
Ｎ）に対する抗体を含有する単クローン腹水液検体であ
る三役体をＡｆＪ記キャリブレータと同様に希釈した。
５０μＬアリコートのキャブレータおよび検体希釈液を
プレートの各ウェルｌＣ添加した。
プレートの各ウェルｌＣ添加した。
そのプレートを３７℃で１時間インキュｋｉトし、次い
で洗浄緩衝液で十分洗浄した。
で洗浄緩衝液で十分洗浄した。
標識された抗４＋！、ｌｒｇＧ抗体、ウサギ抗！ウスｌ
軽編ＩｇＧ西洋ワサビぼルオキシダーゼ接合体（Ｎｏｒ
ｄｉｏ社より入手可。カタログ番号ｓｈ人Ｍ／ＢＪ−Ｌ
（ｓｐ４−Ｈｐ） ／ｐｏ ）を希釈用ｄ！＃ｇで１：
２００希釈し、そして１００ｐｔを各ウェルに６加した
。
軽編ＩｇＧ西洋ワサビぼルオキシダーゼ接合体（Ｎｏｒ
ｄｉｏ社より入手可。カタログ番号ｓｈ人Ｍ／ＢＪ−Ｌ
（ｓｐ４−Ｈｐ） ／ｐｏ ）を希釈用ｄ！＃ｇで１：
２００希釈し、そして１００ｐｔを各ウェルに６加した
。
そのプレードを室温で１時間インキユヘートシ、次いで
洗浄Ｆｊｉｍで十分洗浄した。
洗浄Ｆｊｉｍで十分洗浄した。
イルオキシダーゼ基質人およびＢ （Ｋｉｒｋｅｇａａ
ｒｄａｎｄ Ｆ＠ｒｒｙ社より入手町。カタログ番号５
０−６４−〇〇）を１：１で混合し、モして１００．ｕ
ｔのこの混合物を各ウェルに添加した。そのプレートを
プレート振盪Ｒ装置き、そして２０分間の基質反応時間
の後、４１ＤｎＭでの谷ウェルの吸光度をＴｉｔ旬ｒｔ
ｅｋ Ｍｕｌｔｉｓｋａｎ ＭＣＣＦｌａｔｓ Ｒｅａ
ｄｅｒを用いて読み取った。
ｒｄａｎｄ Ｆ＠ｒｒｙ社より入手町。カタログ番号５
０−６４−〇〇）を１：１で混合し、モして１００．ｕ
ｔのこの混合物を各ウェルに添加した。そのプレートを
プレート振盪Ｒ装置き、そして２０分間の基質反応時間
の後、４１ＤｎＭでの谷ウェルの吸光度をＴｉｔ旬ｒｔ
ｅｋ Ｍｕｌｔｉｓｋａｎ ＭＣＣＦｌａｔｓ Ｒｅａ
ｄｅｒを用いて読み取った。
ＣＲＡ 、ＨＣＧおよびＰＴＮに対する単クローン抗体
を含有する腹水液検体の平均値軸ＩｇＧ含祉を１１＄１
．、そしてＨＰＬＣＫより測定された総ＩｇＧ＠量と比
較した。第２表に示されたデータは、本発明のサンドウ
ィッチ式イム／アッセイにより測定された総ＩｇＧ含盪
とＲＰＬＣＫより測定されたそれとの間の良好な相関を
示している。
を含有する腹水液検体の平均値軸ＩｇＧ含祉を１１＄１
．、そしてＨＰＬＣＫより測定された総ＩｇＧ＠量と比
較した。第２表に示されたデータは、本発明のサンドウ
ィッチ式イム／アッセイにより測定された総ＩｇＧ含盪
とＲＰＬＣＫより測定されたそれとの間の良好な相関を
示している。
ＣｇＡ ２．５ ２．３ＰＴＮ
６．６ ４．９以上、本発明を＃
＃［！ＩＫ説明したが、本発明はさらに次の実施態様に
よってこれを要約して示すことができる。
６．６ ４．９以上、本発明を＃
＃［！ＩＫ説明したが、本発明はさらに次の実施態様に
よってこれを要約して示すことができる。
１）次の椙段階、すなわち：
（ハ）） 単クローンＩＨＧを含有する検体を（ｉ）該
単クローンＩｇＧ Ｉｃ％異な抗におよび抗λ＠鎧Ｉｇ
Ｇ捕捉抗体、または （ｆｌ） 該巣クローンＩｇＧの起源である動物種に
おける主たるＩｇＧ軽鎖タイプ（ただし該ＩｇＧ軽鎖タ
イプは該動物種における総ＩｇＧの少くとも９５％を構
成するものとする）Ｋ特異なＩｇＧ捕捉抗体 を有する支持体と接触させることＫより第一反応混合物
を形成し； （ｂ） 段階（ハ））で形成された捕捉抗体と単クロ
ーンＩｇＧの結合第一複合体を未結含率クローンＩｇＧ
から分離し； （ａ） 前記第−複合体を、前記捕捉抗体と同じ対Ｉ
ｇＧＩＪ頗タイプ巧異性を有する少くとも一つの標識さ
れた抗１ｆ臘ＩｇＧ抗体と接触させることＫより第二反
応混合物を形成し；（（ｉ） そのようにして形成され
た標識された抗体と前記第一複合体の結合第二複合体を
未結合のｊｌＸａＲされた抗体から分離し；（・） 該
第二複倉体中の砿識盟を測定し；そして （ｆ） ＋ヤリプレータを用いて作成された検１線か
ら経本クローンＩｇＧ含盪を計算する段階より成る総革
クローンＩｇＣ）含量測定用サンドウィッチ式イムノア
ッセイ。
単クローンＩｇＧ Ｉｃ％異な抗におよび抗λ＠鎧Ｉｇ
Ｇ捕捉抗体、または （ｆｌ） 該巣クローンＩｇＧの起源である動物種に
おける主たるＩｇＧ軽鎖タイプ（ただし該ＩｇＧ軽鎖タ
イプは該動物種における総ＩｇＧの少くとも９５％を構
成するものとする）Ｋ特異なＩｇＧ捕捉抗体 を有する支持体と接触させることＫより第一反応混合物
を形成し； （ｂ） 段階（ハ））で形成された捕捉抗体と単クロ
ーンＩｇＧの結合第一複合体を未結含率クローンＩｇＧ
から分離し； （ａ） 前記第−複合体を、前記捕捉抗体と同じ対Ｉ
ｇＧＩＪ頗タイプ巧異性を有する少くとも一つの標識さ
れた抗１ｆ臘ＩｇＧ抗体と接触させることＫより第二反
応混合物を形成し；（（ｉ） そのようにして形成され
た標識された抗体と前記第一複合体の結合第二複合体を
未結合のｊｌＸａＲされた抗体から分離し；（・） 該
第二複倉体中の砿識盟を測定し；そして （ｆ） ＋ヤリプレータを用いて作成された検１線か
ら経本クローンＩｇＧ含盪を計算する段階より成る総革
クローンＩｇＣ）含量測定用サンドウィッチ式イムノア
ッセイ。
２）キャリブレータが新鮮な培地またはＰＢ８で再水相
されるプールされた凍結乾燥ＩｇＧである培地中の単ク
ローンＩｇＧ測定用の前項１）記載のサンドウィッチ式
イムノアッセイ。
されるプールされた凍結乾燥ＩｇＧである培地中の単ク
ローンＩｇＧ測定用の前項１）記載のサンドウィッチ式
イムノアッセイ。
３）キャリブレータがＩｇＧ不含腹水液で再水相される
プールされた凍結乾燥ＩｇＧである、腹水猷中の単クロ
ーンＩｇＧ ｍ走用の前項１）記載のサンドウィッチ式
イムノアッセイ。
プールされた凍結乾燥ＩｇＧである、腹水猷中の単クロ
ーンＩｇＧ ｍ走用の前項１）記載のサンドウィッチ式
イムノアッセイ。
４）標識された尻軽１１ＩｇＧ抗体が、単クローンＩｇ
Ｇ検体の起源である動物種における主たるｔｇＧ Ｑ鎖
タイプ（ただし該ＩｇＧ軽鎖タイプは該動物種における
総ＩｇＧの少くとも９５チを構成するものとする）Ｋ％
異である前項１）記載のサンドウィッチ式イムノアッセ
イ。
Ｇ検体の起源である動物種における主たるｔｇＧ Ｑ鎖
タイプ（ただし該ＩｇＧ軽鎖タイプは該動物種における
総ＩｇＧの少くとも９５チを構成するものとする）Ｋ％
異である前項１）記載のサンドウィッチ式イムノアッセ
イ。
５）支持体が固体である前項１）記載のサンドウィッチ
式イムノアッセイ。
式イムノアッセイ。
特許出願人 イー・アイ・デュポン・ド・ネモアース
・アンド・フン／々ニー 外２名
・アンド・フン／々ニー 外２名
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 次の諸段階、すなわち： （ａ）単クローンＩｇＧを含有する検体を （ｉ）該単クローンＩｇＧに特異な抗κおよび抗λ軽鎖
ＩｇＧ捕促抗体、または （ｉｉ）該単クローンＩｇＧの起源である動物種におけ
る主たるＩｇＧ軽鎖タイプ（ただし該ＩｇＧ軽鎖タイプ
は該動物種における総ＩｇＧの少くとも９５％を構成す
るものとする）に特 異なＩｇＧ捕促抗体 を有する支持体と接触させることにより第一反応混合物
を形成し； （ｂ）段階（ａ）で形成された捕捉抗体と単クローンＩ
ｇＧの結合第一複合体を未結合単クローンＩｇＧから分
離し； （ｃ）前記第一複合体を、前記捕捉抗体と同じ対ＩｇＧ
軽鎖タイプ特異性を有する少くとも一つの標識された抗
軽鎖ＩｇＧ抗体と接触させることにより第二反応混合物
を形成し； （ｄ）そのようにして形成された標識された抗体と前記
第一複合体の結合第二複合体を未結合の標識された抗体
から分離し； （ｅ）該第二複合体中の標識量を測定し；そして（ｆ）
キヤリブレータを用いて作成された検量線から総単クロ
ーンＩｇＧ含量を計算する 段階より成る総単クローンＩｇＧ含量測定用サンドウイ
ツチ式イムノアツセイ。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US07/150,292 US4983530A (en) | 1988-01-29 | 1988-01-29 | Sandwich immunoassay for determination of total monoclonal IGG |
| US150,292 | 1988-01-29 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01233370A true JPH01233370A (ja) | 1989-09-19 |
Family
ID=22533874
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1016545A Pending JPH01233370A (ja) | 1988-01-29 | 1989-01-27 | 総単クローンＩｇＧ測定用サンドウイツチ式イムノアツセイ |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4983530A (ja) |
| EP (1) | EP0328276A3 (ja) |
| JP (1) | JPH01233370A (ja) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6169085B1 (en) | 1995-03-10 | 2001-01-02 | G. D. Searle & Company | Sulfonylalkanoylamino hydroxyethylamino sulfonamide retroviral protease inhibitors |
| US5705500A (en) * | 1995-03-10 | 1998-01-06 | G.D. Searle & Co. | Sulfonylalkanoylamino hydroxyethylamino sulfonamide retroviral protease inhibitors |
| EP0862584B1 (en) * | 1995-11-03 | 2004-12-22 | The Binding Site Limited | Production of antibodies |
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