JPH01246225A - 膵炎治療剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〈産業上の利用分野〉 本発明は、スーパーオキシド・ディスムターゼ活性を有
するポリペプチド含有リボゾームを有効成分とする膵炎
治療剤に関する。

〈従来の技術〉 膵臓は、膵の９０％を占める外分泌Ｍｉ織とランゲルハ
ンス島を形成する内分泌組繊からなる。膵由来の酵素と
しては、トリプシン、キモトリプシン、エラスターゼ、
ロイシンアミノペプチダーゼなどの蛋白加水分解酵素、
α−１，４−グルコシド結合を加水分解するα−アミラ
ーゼ（以下、アミラーゼと略す）、中性脂肪をモノグリ
セリドと脂肪酸とに加水分解するリパーゼやその他コレ
ステロールエステラーゼ、ホスフォリパーゼなどが存在
する。またランゲルハンス島のＢ細胞からはインスリン
、Ａ細胞からは膵グルカゴンが分泌されており、膵臓は
種々のペプチドホルモンを分泌し、また他の種々のペプ
チドホルモンの影否を受けている。

このような膵臓に関する炎症について、マルセイユ分類
においては４型に区分され、急性と慢性を、さらにそれ
ぞれ２型に分け、象、性膵炎、再発性危、性膵炎、慢性
膵炎、慢性再発性膵炎に分類している。

しかしながら例えば我が国では急性膵炎と再発性急性膵
炎とを分離して考察する根拠が乏しいとしてこれらを急
性膵炎として分類されることがある・さらに再発性急性
膵炎に関して、外国においては、急性膵炎のうち特に象
、性症状を伴う発作を反復して繰り返す病型として分類
しているが、しかし我が国において症状が不安定で間欠
的に数次にわたってみられる場合に慢性再発性膵炎に分
類されることが多く、必ずしも明確に分類されているも
のではない。

このような膵炎の代表的なものは、胆石症かアルコール
の大量長期飲用に基づくが、さらに多くの病因が知られ
ており、例えば手術後膵炎、耳下腺膵炎、副甲状腺膵炎
、薬物性膵炎が挙げられ、特にステロイド剤、クロロチ
アジド、テトラサイクリンなどの薬物が薬物性膵炎を起
こすことが臨床的に知られており、このような膵炎の簡
便な診断法としては、膵炎とともに血中および尿中のリ
パーゼやアミラーゼの増加を指標とすることである。

またスーパーオキシド・ディスムターゼ活性を有するポ
リペプチドとしては、銅、亜鉛の原子を含むポリペプチ
ド（Ｃｕ、Ｚｎ−３ＯＤ）　、マンガンの原子を含むポ
リペプチド（Ｍｎ−３ＯＤ）、鉄の原子を含むポリペプ
チド（Ｆｅ−３ＯＤ）が広く動植物、微生物に存在して
いることがよく知られている〔アドバンス・イン・エン
ザイモロジ−（Ａｄｖ、Ｅｎｚｙｍｏｌ、）　４１．３
５〜９７頁（１９７４）　：ｌ　、このスーパーオキシ
ド・ディスムターゼ活性は、下記反応式に示す通り、ス
ーパーオキシドアニオンラジカル（ｏ　−２）に作用し
て生成物として過酸化水素（Ｈ２０□）と酸素分子とな
すものである。

２０−２＋２Ｈ”″　−一→０□＋Ｈ２０□またこのス
ーパーオキシド・ディスムターゼ活性を有するポリペプ
チドは、細胞や組織部位に有害なスーパーオキシドアニ
オンラジカルを除去するに有用であり、例えばリウマチ
関節炎の治療〔カレント・セラピュテインク・リサーチ
（Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ　Ｒｅｓ、
　）　２０．６２〜６９（１９７６）　：ｌや皮膚に対
する抗炎症剤〔特表昭６２−５０１０７２号公報〕とし
て用いられている。

〈発明が解決しようとする課題〉 しかしながらスーパーオキシド・ディスムターゼ活性を
有するポリペプチドが膵炎に対して有効に作用するか否
かについては、報告のないものであった。

く課題を解決するための手段〉 そこで本発明者らは、スーパーオキシド・ディスムター
ゼ活性を有するポリペプチドを、薬物によって膵臓に炎
症を惹起せしめた実験動物に投与した結果、膵炎の結果
を示すリパーゼ活性およびアミラーゼ活性の良好な低下
を示すものではないことを知った。

さらに鋭意研究した結果、スーパーオキシド・ディスム
ターゼ活性を有するポリペプチドをリボゾーム製剤とな
し、これを実験動物に投与した結果、全く意外にも、膵
炎の治療を示すリパーゼ活性およびアミラーゼ活性の良
好な低下を示すものであることを知った。

本発明は、上記の知見に基づいてなされたもので、スー
パーオキシド・ディスムターゼ活性を有するポリペプチ
ド含有リポゾームを有効成分とする膵炎治療剤である。

まず本発明におけるスーパーオキシド・ディスムターゼ
活性を有するポリペプチドとしては、スーパーオキシド
・ディスムターゼ活性を有するポリペプチドであれば何
ら限定されるものではなく、天然由来の抽出、精製によ
って得られたポリペプチドであってもよく、またこのよ
うな天然由来のポリペプチドを化学的合成または遺伝子
操作の手段を利用して得られたポリペプチドでもよく、
さらに天然由来のポリペプチドを化学的合成または遺伝
子操作の手段を利用して本来のスーパーオキシド・ディ
スムターゼ活性を維持し、かつ構成づプチドの一部を変
換せしめたムティン（ｍｕｔａｉｎＨＧｌｏｓｓａｒｙ
　ｏｆ　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ　ａｎｄ　Ｃｙｔｏｇｅｎｅ
ｔｉｃｓ、第４版、第３８１頁（１９７６））ポリペプ
チドであってもよい。

このようなスーパーオキシド・ディスムターゼ活性を有
するポリペプチドとしては、例えば酵母やウサギ、ウシ
、ウマ、ヒツジ、ニワトリ、サルやヒトなどの高等動物
の胎盤、肝臓や血液に広く分布する銅、亜鉛の原子を含
むポリペプチド（Ｃｕ、Ｚｎ−３ＯＤ；ダイマーで分子
置駒３２０００）、原核生物やミトコンドリアに分布す
るマンガンの原子を含むポリペプチド（Ｍｎ−３ＯＤ；
ダイマーで分子置駒４００００）、鉄の原子を含むポリ
ペプチド（Ｆｅ−３ＯＤ；ダイマーで分子置駒４０００
０）などが天然由来のポリペプチドとして挙げられ、特
に好ましくはウシ肝臓由来の天然ポリペプチド〔オルゴ
テイン；米国命名審議会（ｔｈｅ　Ｕｎｉｔｅｄ　５ｔ
ａｔｅｓ　Ａｄｏｐｔｅｄ　Ｎａｍｅ　Ｃｏｕｎｃｉｌ
）にて選定された一般名（ｎｏｎｐｒｏｐｒｉｅｔａｒ
ｙ　ｎａｍｅ）　；アメリカ医学会誌（Ｊ、Ａ、Ｍ、Ａ
、）１９６９年５月２６日日刊、第２０８巻第８号参照
〕、ヒト由来の天然ポリペプチド（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓ
ｔｒｙ、１９．２３１０−２３１６（１９８０）、ＦＥ
ＢＳＬｅｔｔｅｒｓ、１２０．５３−５５１９８０）　
）が挙げられる。さらにこれらのスーパーオキシド・デ
ィスムターゼ活性を存するポリペプチドは、例えばダイ
マーであるＣｕ、Ｚｎ−３ＯＤの少なくとも１５３個の
アミノ酸からなるヒト由来のスーパーオキシド・ディス
ムターゼ活性を有するポリペプチドに関して、ヒト肝臓
組織からＲＮＡを回収し、さらにポリ（Ａ）＋ＲＮＡを
回収後、遺伝子操作における常法に従ってｃ−ＤＮＡを
合成し、さらにこれを発現ベクターに組換えた後大腸菌
や酵母などの微生物に形質転換せしめ、この微生物を培
養して目的とするダイマーであるスーパーオキシド・デ
ィスムターゼ活性を有するポリペプチドを得てもよく、
特開昭６０−１３７２８６号公報、特開昭６１−１１１
６９０号公報、特開昭６１−１３９３９０号公報、特開
昭６２−１１５２７７号公報および特開昭６２−１３０
６８９号公報記載の遺伝子操作による方法を利用できる
。さらにこのような遺伝子操作によるヒトスーパーオキ
シド・ディスムターゼ活性を有するポリペプチドに関し
て、本来のスーパーオキシド・ディスムターゼ活性を維
持して構成ペプチドの一部を特異的に変換せしめたムテ
ィンポリペプチドであってもよく、例えば前記の如くし
て得られた発現ベクターに、部位特異的変異法、即ち天
然型ヒトスーパーオキシド・ディスムターゼ活性を有す
るポリペプチドのＤＮＡを有する閉環構造のプラスミド
ベクターにＢａｍ　Ｈｌをエチジュウムブロマイド存在
下遮光状態で作用させて開環構造となし、次いでエキソ
ヌクレアーゼ■を作用させ、変異せしめたい部分のアミ
ノ酸をコードする塩基配列を含むＤＮＡの一本鎖合成り
ＮＡを用意し、両者をアニールさせ、ｄＮＴＰの存在下
でＤＮＡポリメラーゼおよびＴ４リガーゼを作用させ、
合成りＮＡをプラスミドベクターに結合せしめて目的と
する遺伝子配列の特異的部位を変換せしめたヘクターが
得られ（Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎ　ｔａｌ　Ｍａｎｉｐｕｌ
ａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｇｅｎｅ　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ、
２９１−３０３（１９８３）　；アカデミツク・プレス
刊〕、これを遺伝子操作の常法により微生物に形質転換
せしめてダイマーのポリペプチドを発現せしめて得れば
よい。

このような遺伝子操作手段としては、例えば特開昭６２
−１３０６８４号公報が有効に引用できるもので、例え
ばダイマーであるＣｕ、Ｚｎ−３ＯＤのアミノ酸１５３
個からなるＮ末端アラニンを１位アミノ酸配列とする天
然ヒト型スーパーオキシド・ディスムターゼ活性を有す
るポリペプチドのムティンポリペプチドとして、６位お
よび１１１位のシスティン（Ｃｙｓ）の何れか一方また
は両方を他のアミノ酸に変換せしめるもので、特に１１
１位のシスティン（Ｃｙｓ）をセリン（Ｓｅｒ）　、チ
ロシン（Ｔｙｒ）、アラニン（Ａｌａ）　、フェニルア
ラニン（１”ｈｅ）　、トリプトファン（Ｔｒｐ）　、
アルギニン（Ａｒｇ）　、グリシン（Ｇｌｙ）　、プロ
リン（Ｐｒｏ）　、スレオニン（Ｔｈｒ）、ヒスチジン
（旧Ｓ）　％アスパラギン（Ａｓｎ）　、アスパラキン
酸（Ａｓｐ）　、ロイシン（Ｌｅｕ）　、バリン（Ｖａ
ｌ）、グルタミン（Ｇｉｎ）　、グルタミン酸（Ｇｌｕ
）、リジン（Ｌｓｙ）またはメチオニン（Ｍｅｔ）の何
れかに変換したＮ末端側が水素原子またはアセチル化さ
れたスーパーオキシド・ディスムターゼ活性を有するポ
リペプチドが挙げられ、これらのムティンポリペプチド
において、６位システィン（Ｃｙｓ）がそのままのアミ
ノ酸であるか、またはこのシスティン（Ｃｙｓ）をセリ
ン（Ｓｅｒ）　、アラニン（Ａｌａ）　、スレオニン（
Ｔｈｒ）などの中性アミノ酸に変換せしめ、かつ１１１
位システィン（Ｃｙｓ）をセリン（Ｓｅｒ）　、アラニ
ン（Ａｌａ）　、スレオニン（Ｔｈｒ）などの中性アミ
ノ酸に変換せしめたスーパーオキシド・デイスムターゼ
活性を有するポリペプチドが好ましい。

このような種々のスーパーオキシド・ディスムターゼ活
性を有する天然由来またはムティンポリペプチドは、さ
らに必要に応じて、例えば分子量４００〜１００００の
ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、
エチレンオキサイド−プロピレンオキサイドコポリマー
などのポリアルキレングリコール類を該ポリペプチド１
分子当り０．５〜５０個を直接的またはトリアジンなど
を介して間接的に結合せしめてポリエチレングリコール
誘導体となしてもよく、またアルブミン、スチレンマレ
イン酸やアシル化誘導体となしてもよく（特開昭６１−
２４９３８８号公報、特開昭６２−１１５２８０号公報
、メビオ（Ｍｅｂｉｏ）第５巻、第２号、第９１−９５
頁（１９８８）、「タンパク質ハイブリッド」稲田祐二
編１９８７．４．１、共立出版参照）、さらに無毒性の
可溶性塩となしてもよい。

またリポゾームは、内殻に水相を有する脂質２分子膜か
ら構成された閉鎖小胞と定義され、本発明のスーパーオ
キシド・ディスムターゼ活性を有するポリペプチド含有
リボゾームを得るに当たっては、従来から使用されてい
るリポゾームの調製法、例えばＢｉｏｃｈｉｍ、Ｂｉｏ
ｐｈｙｓ、Ａｃｔａ、　＋　１３５＋　６２４−６３８
（１９６７）　、米国特許第４２３５８７１号明細書記
載の方法、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、８．３４４（１
９６９）、Ｂｉｏｃｈｉｍ、ＢｉｏｐｈｙＳ、八ｃｔａ
、、４４３，６２９−６４３（１９７６）　　、　Ｐｒ
ｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵｓＡ、７６．１
４５（１９７９）　　、　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａ
ｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ。

７５．４１９４　（１９７８）、　Ｂｉｏｃｈｉｍ、Ｂ
ｉｏｐｈｙｓ、八ｃｔａ、、６０１，５５９（１９８０
）　、Ｂｉｏｃｈｉｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ａｃｔａ、、
５４２，１３７（１９７８）　、Ｂｉｏｃｈｉｍ、Ｂｉ
ｏｐｈｙｓ、Ａｃｔａ、、６４９，１２９（１９８１）
、Ｊ、Ｌｉｐｉｄ　　Ｒｅｓ、、２１，９８１（１９８
０）　　、　八ｎｎｕ、Ｒｅｖ、Ｂｉｏｐｈｙｓ。

Ｂｉｏｅｎｇ、、９，４６７（１９８０）、Ｂｉｏｃｈ
ｉｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ａｃｔａ、。

３９４．４８３（１９７５）　、Ｂｉｏｃｈｉｍ、Ｂｉ
ｏｐｈｙｓ、＾ｃｔａ、、６４６．１（１９８１）　、
Ｂｉｏｃｈｉｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ａｃｔａ、、７２８
，３３９（１９８３）　、Ｂｉｏｃｈｉｍ、Ｂｉｏｐｈ
ｙｓ、Ａｃｔａ、、７７０，１０９（１９８４）、Ｊ、
八ｍ、ｃｈｅｍ、ｓｏｃ、、１０６．１８９７（１９８
４）　　、　Ｂｉｏｃｈｉｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ａｃｔ
ａ、、８１７．１９３（１９８５）などに記載の種々の
方法が使用できるもので、多数のりボゾームがスモール
ユニラメラベヒクル（ＳＵＶ）、ラージユニラメラベヒ
クル（ＬＵＶ）、オリゴラメラベヒクル（ＲＥＶ）また
はマルチラメラベヒクル（ＭＬ■）、ステイブルプルリ
ラメラベヒクル（Ｓ　Ｐ　Ｌ■）などの種々の形態のも
のが形成され、これらいずれの形態のものも使用できる
。例えば天然または合成のリン脂質、好ましくは天然の
フォスファチジルコリンである卵レシチンや大豆レシチ
ンまたはこれらの水素添加レシチン、飽和合成レシチン
であるジミリストイルフォスファチジルコリン、ジパル
ミトイルフォスファチジルコリン、ジステアロイルフォ
スファチジルコリン、不飽和合成レシチンであるジオレ
オイルフォスファチジルコリン、ジリルオイルフォスフ
ァチジルコリンなどの合成フォスファチジルコリン（レ
シチン）などのリン脂質およびその混合物、或いはこれ
らのリン脂質とともにスフィンゴミエリン、フォスファ
チジルエタノールアミン、フォスファチジルグルセロー
ル、フォスファチジルセリン、フォスファチジン酸、セ
ラミドフォスフォリルエタノールアミンなどのリン月旨
質、コレステロールなどのステロール系安定化剤として
の脂質、さらにセチルアミン、ステアリルアミンなどの
りポゾームの陽電荷帯電化剤、ジアセチルフォスフェー
ト、フォスファチジルセリン、フォスファチジン酸など
の陰電荷帯電化剤を適宜選択使用してもよく、−般にリ
ン脂質：安定化剤：帯電化剤＝１００〜５０重量部：０
〜３０重量部二〇〜２０重量部の比率からなる脂質組成
物として調整使用すればよく、好ましくはリン脂質二安
定化剤：帯電化剤＝７５〜６０重量部：２０〜１５重量
部：１５〜１０重量部の比率からなる脂質組成物やリン
脂質：帯電化剤＝９０〜８５重量部：１０〜１５重量部
の比率からなる脂質組成物が挙げられ、さらに必要に応
じてトコフェロールやβ−カロチンなどの脂質安定化剤
を添加してもよい。

次いでこの脂質組成物は、揮発性の可溶性媒体、例えば
ジエチルエーテル、クロロホルム、メチレンクロライド
、酢酸エチル、石油エーテル、メタノールなどの単一ま
たは混合溶媒に溶解する。

さらにこの脂質組成物の溶液を用いてリボゾームを形成
するに当り、例えばこの脂質組成物の溶液を、一定の容
器、例えばナス型または丸底フラスコに加えた後、該媒
体を水浴中ロータリエバポレイターなどにより留去して
フラスコ内面に脂質組成物の薄層を形成せしめ、必要に
応じてさらに媒体を加えて再度留去する操作を数回行っ
てもよく、その後フラスコを真空ポンプなどの吸引装置
にて媒体を十分に減圧留去すればよい。次いでこれに、
スーパーオキシド・ディスムターゼ活性を有するポリペ
プチドを溶解した溶液、例えば０．０１〜１００ｍｇ／
ｍｌの注射用に適する水溶液または緩ｆＪｉ液を脂質組
成物１重量部当り５〜２００重量部加えればよい。この
際、スーパーオキシド・ディスムターゼ活性を有するポ
リペプチドの使用量としては、上記の脂質組成物１重量
部当り０．０１〜０．５重量部程度使用すればよい。こ
のようにしてスーパーオキシド・ディスムターゼ活性を
有するポリペプチドの溶液を添加した後、このフラスコ
を水浴中にて必要に応じて３５〜６０°Ｃに加熱し、撹
拌、懸濁してリボゾーム溶液を得た後これに、例えば１
０キロサイクルの超音波を１〜３０分間程度処理せしめ
て粒径を整えたりポゾームを形成すればよい。このよう
に超音波処理により、例えば５０〜５５０ｎｍ径の主と
してＭ　Ｌ　Ｖからなるスーパーオキシド・ディスムタ
ーゼ活性を有するポリペプチド含有リボゾームが得られ
る。

次いでこのようして得られたスーパーオキシド・ディス
ムターゼ活性を有するポリペプチド含有リボゾームを回
収、精製するに当り、例えば１００００〜２００００Ｇ
で１５〜６０分間遠心分離を行えばよい。

さらにこのスーパーオキシド・ディスムターゼ活性を有
するポリペプチド含有リボゾームは、さらに必要に応じ
て超遠心にて濃縮や膜濾過処理をしてもよく、またこれ
は適宜注射用製剤として製剤化すればよく、簡便には注
射用溶液に、このリボゾームを懸濁せしめた懸濁剤とす
るか、またはこのリボゾームの溶液を、適宜グルコース
、ショ糖、マンニトール、ソルビトールなどの糖類の凍
結安定化剤を０．５〜１０％濃度となるように添加して
、凍結乾燥してなる筋肉注射、皮下注射または静脈注射
用の用時懸濁用の製剤となせばよい。

この際、スーパーオキシド・ディスムターゼ活性を有す
るポリペプチドの濃度は、例えば１日１〜５回の０．１
〜２ｍｌ投与にて、０．０１〜１００ｍｇ／ｍｌの濃度
となるように調整してリボゾーム製剤となせばよい。ま
たこのリボゾーム製剤に、適宜、浸透圧調節剤、防腐剤
、ｐＨ調節剤を添加調整してもよい。さらにこのリボゾ
ームを坐剤用油性基剤、例えばオリーブ油、ラカッセイ
油、ゴマ油、大豆油、ナタネ油、ツハキ油、カカオ脂、
肝脂、羊毛脂、牛脂などの油脂類またはこれらの水素添
加油、アセチル化物や、これらに界面活性剤を乳化した
乳化物の単独または二種以上の混合物、または水性基剤
例えばグリセロゼラチン、プロピレングリコールなどの
基剤の単独または二種以上の混合物に加えて１〜２ｇの
坐剤製剤として調整してもよく、さらにその他、賦形剤
、滑沢剤、甘味剤、増粘剤、着色剤、香料などの常法の
製剤成分を適宜添加使用して顆粒剤、カプセル剤、シロ
フプ剤などの経口用製剤となしてもよい。

このようにして得られたスーパーオキシド・ディスムタ
ーゼ活性を有するポリペプチド含有リボゾームは、以下
の実施例に示す通り、特に薬物障害による膵炎の場合に
おけるリパーゼ活性およびアミラーゼ活性の上昇を極め
て良好に抑制維持せしめてなる膵炎治療剤として有用な
ものである。

〈実施例〉 次いで本発明の実施例を挙げて詳しく説明するが、本発
明はこれらにより何ら限定されるものではない。

実施例１ 〔スーパーオキシド・ディスムターゼ活性を有するポリ
ペプチド含有リボゾームの調整〕し一α−ジバルミトイ
ルフォスファチジルコリン（以下、Ｌ−ａ−ＤＰＰＣと
略す）７ｍＭ、：］レスチロール１ｍＭ、およびステア
リルアミン２ｍＭを含有するクロロホルム溶液を調整し
た。このクロロホルム溶液２５０ｍ１　（全体として上
記３種類の脂質を２．５ミリモル含有する）を、水流ポ
ンプで減圧下、溶媒を留去し、さらに完全に溶媒を留去
するために高性能（油回転）真空ポンプ（約数ミリトー
ル）で、３時間減圧処理し、脂質薄膜を調整した。次い
でこれに、特開昭６２−１３０６８４号公報記載の方法
にて調整したプラスミドｐｓＯＤ１４を保持したエシェ
リヒア・コリＤＨＩを培養して得た１１１位ＣｙｓをＳ
ｅｔに部位特異的変異せしめたヒト由来のＣｕ、Ｚｎ型
スーパーオキシド・ディスムターゼ活性を有するポリペ
プチド（以下５ＯＤ−１という）１００ｍｇ含有リン酸
緩衝液（４ｍＭ、ｐＨ７，２）１００ｍｌ　（ＳＯＤ−
１比活性３２００　ｕ／ｍｇ）を加え、この混合液を４
０°Ｃに加温し６分間脂質を分散せしめた。さらにこの
分散液を、ソニケーターで超音波照射処理した。

このようにして得た懸濁液を室温下、３時間放置後１５
℃で一晩放置した。その後、リボゾームへ封入保持され
なかった余分な５ＯＤ−１は、遠心分離（１２００Ｏｒ
ｐｍ、４°Ｃで６０分間）して分離除去した。

このようにして得られた５ＯＤ−１含有リポゾーム（以
下、Ｌ−３ＯＤ−１という）は、主として２０５〜５５
０　ｎｍ、平均約３４０〜３７００ｍ径で、該５ＯＤ−
１封入保持率８７％、５ＯＤ−１比活性３２００Ｕ／ｍ
ｇで、また５ＯＤ−１の回収率は８４％であった。

なお上記の各比率は、以下の方法にて求めた。

封入保持率（％）＝ この式において、ＳＯＤ全活性値は、測定試料液に１％
トリトンＸ−１００？ａ液を添加し、３７”Ｃ，３０分
間インキュベイジョンした後、活性測定をして求めた。

また上清ＳＯＤ活性値は、測定試料液を４°Ｃ１Ｃ１１
４０００ｒｐ約２００００Ｇ）で３０分間遠心分離した
後、その上清溶液の活性を求めた。

なおこれらのＳＯＤの活性測定は、ＮＢＴ法〔八ＮＡＬ
ＹＴＩＣＡＬ　　ＢＩＯＣＨＥＭＩＳＴＲＹ、４４，２
７６−２８７（１９７１））によって行った。

上記式において、蛋白定量は、ローリ−らの方法にて行
った。

また上記の５ＯＤ−１の代わりに、ヒト赤血球から抽出
したＣｕ、Ｚｎ型スーパーオキシド・ディスムターゼ（
ＤＥＶＥＬＯＰＭＥＮＴＳ　ＩＮ　ＢＩＯＣＨＥＭＩＳ
ＴＲＹ、Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｃ１１ｎｉｃ
ａｌ　Ａｓｐｅｃｔｓ　ｏｆ　５ｕｐｅｒｏｘｉｄｅ　
ａｎｄ　５ｕｐｅｒｏｘｉｄｅ　Ｄｉｓｍｕｔａｓｅ　
１１Ｂ＋３４８（１９８０）　；以下５ＯＤ−２という
〕を用いて、以下同様にして、スーパーオキシド・ディ
スムターゼ含有リポゾーム（以下、Ｌ−３ＯＤ−２とい
う）を調製した。

〔該リボゾーム製剤による膵炎治療剤〕実験方法１；４
−ヒドロキシアミノキノリン−１−オキサイド（４−Ｈ
ｙｄｒｏｘｙａｍｉｎｏｑｕｉｎｏｌｉｎｅ−１−ｏｘ
ｉｄｅ；以下、４−ＨＡＱＯと略す）を用いて誘発した
薬物性膵炎に対するＬ−３ＯＤ−１およびＬ−３ＯＤ−
２の作用、効果。

対象実験動物としてウィスター系ラット（雌）を１群５
〜７匹として用いた。

１群は、対照として無処置とした。

■群には、４−ＨＡＱＯ２０ｍｇ／ｋｇ体重を注射用蒸
留水に加えて静脈内投与した。

■群には、４−ＨＡＱＯ２０ｍｇ／ｋｇ体重を注射用蒸
留水に加えて静脈内投与し、Ｌ−５ＯＤ−１の１６ｍｇ
　（ＳＯＤ−１換算重量として）／ｋｇ体重を注射用蒸
留水に加えて腹腔内へ同時に投与し、さらに１２時間後
に再度Ｌ−５ＯＤ−１の同量を腹腔内投与した。

■群には、４−ＨＡＱＯ２０ｍｇ／ｋｇ体重を注射用蒸
留水に加えて静脈内投与し、Ｌ−３ＯＤ−２の１６ｍｇ
　（ＳＯＤ−２換算重量として）／ｋｇ体重を注射用蒸
留水に加えて腹腔内へ同時に投与し、さらに１２時間後
に再度Ｌ−３ＯＤ−２の同量を腹腔内投与した。

Ｖ群は、４−ＨＡＱＯ２０ｍｇ／ｋｇ体重を注射用蒸留
水に加えて静脈内投与し、リポゾーム化されていない５
ＯＤ−１の１６ｍｇ／ｋｇ体重を注射用蒸留水に加えて
腹腔内へ同時に投与し、さらに１２時間後に再度５ＯＤ
−１の同量を腹腔的投与した。

全群とも、４−ＨＡＱ○投与２４時間後に動物をエーテ
ル麻酔下にて腹部大動脈分子技より採血し、剖検を行っ
た。分離採取した血清については、膵障害の指標となる
リパーゼ活性〔ベーリンガー・マンハイム社製、オート
パックＬ　ｉ　ｐ　；Ｚｉｅｇｅｎｈｅｒｎ、Ｊ、、ｅ
ｔ　ａｌ、、Ｃｌ１ｎ、Ｃｈｅｍ、、２５．１０６７　
（１９７９）、Ｖｅｒｄｕｉｎ、Ｃ，Ａ、、ｅｔ　ａｌ
、、Ｃｌ１ｎ、Ｃｈｉｍ、、Ａｃｔａ、４６．１１＋（
１９７３）〕、アミラーゼ活性（第一化学社製、クリニ
メイトＡＭＹ−Ｃ、大川二部、「検査と技術」、第１２
巻、２２５頁（１９８４）、金井泉、金井正光編著、「
臨床検査法提要」、第２９版、第７７２頁（１９８３）
）の生化学検査を行った。その結果を、第１表に示す。

第１表 １）；平均値±ＳＤ ＊）；■群およびＶ群に対して危険率５％で有意差が認
められる。

以上の結果から、４−ＨＡＱＯの投与による血清中リパ
ーゼおよびアミラーゼの各活性値の上昇を示す膵炎症状
は、いずれもスーパーオキシド・ディスムターゼ活性を
有するポリペプチド含有リポゾームであるＬ−３ＯＤ−
１およびＬ−３ＯＤ−２の投与により有意に抑制された
。しかしながらリポゾーム化しなかったスーパーオキシ
ド・ディスムターゼ活性を有するポリペプチドの投与に
よっては、何らの抑制も有意には見られなかった。

〈発明の効果〉 以上のことから、本発明のスーパーオキシド・ディスム
ターゼ活性を有するポリペプチド含有リボゾームは、膵
炎における膵障害の指標となる各種の酵素活性の上昇を
有効に抑制せしめて膵炎を治療ないし膵障害を予防し得
るものであり、かつスーパーオキシド・ディスムターゼ
活性を有するポリペプチドが低毒性であることからも、
予防の範囲を含む有用な肝障害治療剤を提供できるもの
である。

手続補正書 ■、事件の表示 昭和６３年特許願第７３９４２号 ２、発明の名称 膵炎治療剤 ３、補正をする者 事件との関係　特許出願人 住所　静岡県田方郡大仁町三福６３２の１名称　東洋醸
造株式会社 代表者　高　１）哲　男（ほか１名） ４、代理人　〒１７０ 東京都豊島区北大塚２−２５−１ ５、補正命令の日付 ６、補正の対象 明細書の発明の詳細な説明の欄 ７、補正の内容 （１１明細書第３ページ下から５行目ないし３行目「膵
炎とともに・・・・することである。」とあるを「膵炎
とともに増加する血中および尿中のリパーゼやアミラー
ゼを指標とすることである。」と訂正する。

（２）明細書第１３ページ下から４行目「グリセロール
」とあるを「グリセロール」と訂正する。

（３）明細書第１７ページ上から９行目「ラカソセイ油
」とあるを「ラソカセイ油」と訂正する。

（４）明細書第１９ページ上から２行目「ミリトール」
とあるを「ミリメートル」と訂正する。

以上

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）スーパーオキシド・ディスムターゼ活性を有する
   ポリペプチド含有リポゾームを有効成分とする膵炎治療
   剤。
2. （２）スーパーオキシド・ディスムターゼ活性を有する
   ポリペプチドが、天然由来ポリペプチドである特許請求
   の範囲第１項記載の膵炎治療剤。
3. （３）スーパーオキシド・ディスムターゼ活性を有する
   ポリペプチドが、ムテインポリペプチドである特許請求
   の範囲第１項記載の膵炎治療剤。