JPH012597A - 乳酸測定用の試験片 - Google Patents

乳酸測定用の試験片

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JPH012597A
JPH012597A JP62-155513A JP15551387A JPH012597A JP H012597 A JPH012597 A JP H012597A JP 15551387 A JP15551387 A JP 15551387A JP H012597 A JPH012597 A JP H012597A
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JP
Japan
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lactic acid
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present
test
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JP62-155513A
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宇野 静夫
浅井 昇
昌庸 黒野
喜一 澤井
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Sanwa Kagaku Kenkyusho Co Ltd
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Sanwa Kagaku Kenkyusho Co Ltd
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 (産業上の利用分野) 本発明は乳酸測定用の試験片に係る。
本発明による試験片は体液例えば血清を試料とする乳酸
の臨床検査においてスクリーニングや緊急検査に利用さ
れる。
(従来の技術) 生体中の乳酸は′@質の嫌気分解系のtarP4産物で
あり、肝臓でグリコーゲンに再合成される物質である。
この乳酸の生成は、組織のピルビン醗瀾度と酸化還元状
態に支配されており、筋運動、ブドウ糖の摂取、糖新生
系の先天的lli害等の場合には、ピルビン酸の増加と
共に乳酸濃度が上昇し、又組織が低酸素状態でNADH
の酸化障害が認められる場合にはNADH/NAD比が
増加して体液中の乳酸濃度が更に上昇することになる。
従って、体液中殊に山中の乳I!taは粘質の中間代謝
を知るための一つの指標となっており、臨床生化学物質
検査の1検査項目になっている。
乳酸の定量法としては、従来から a)p−ヒドロキシジフェニル呈色法:乳酸を酸化して
アセトアルデヒドとなし、p−ヒトOキシジフェニルで
呈色させ、比色する方法、 b)ヨード滴定法: 乳酸を酸化して生成するアセトアルデヒドをNa H8
O3で捕捉し、ヨード滴定づる方法、C)検圧法 乳酸をKMn 04で酸化し、生成するCO2を検圧的
に求めて、標準値と照合する方法、d)UV法(W床法
) 乳酸脱水素酵素を作用させ、素外部での吸光泣測定を通
じて乳耐淵痩を求める方法 等が知られているが、一般には特異性の面から上記d)
の乳酸脱水素酵素を用いる方法が普及している( r 
C1inical Cl+eI!1istryJ第16
巻第299頁、1966年)。この酵素法について具体
的に述べれば乳酸と酸化型ニコチン酸アミドアデニンジ
ヌクレオチド(NAD” )とをアルカリ条件下におい
て、乳酸脱水素N素(LD)−1>の存在下に反応させ
、生成する還元型ニコチン酸アミドアデニンジヌクレA
チド(NADH)の吸光度を34011で測定し、その
分子吸光係数から乳i’l′a度を求めるものである。
尚、最近においては、乳ll!酸化酵素により乳酸を酸
化し、生成する過酸化水素を自体公知の呈色反応に導き
、その呈色度から乳酸a度を算出りる方法も提案されて
いる。
(発明が解決しようとする問題点) 上記の一般的酸素法、即ちNADHの吸光度測定を通じ
て乳12 &[Ijl[を求める方法は測定波長が34
0−暴である点に問題がある。即ち、測定機器が高価で
あるのみならず、3401程度の波長域であると、試料
が高じリルビン検体、乳び検体、溶血検体の場合にはビ
リルビン、乳び及びヘモグロビンが妨害物質として挙動
し、測定値に影響を及ぼすからである。
一方、乳酸の酵素反応により生成する過酸化水素を呈色
反応に導く上記方法は、上記の一般的酵素法の有してい
る上記欠陥を解消するために提案されたものであるが、
測定に熟練と長時間を要し、又高級な分光光度計を必要
とづる点に問題がある。
翻って、体液中の乳M測定には病態の迅速判断を行う臨
床的緊急性が要求される場合があり、又検体取扱いの面
からも緊悲性が要求される。即ち、前者に関しで、例え
ば糖尿病忌召に見られる乳酸アシド−シスは乳酸の過剰
生産と利用118害によって血中に乳酸が1ir積され
る代謝性アシド−シスであり、その発症は急激で、昏睡
に落人り、呼吸刺激症を呈するので、迅速に検査を行い
、乳酸アシド−シスであることが確認されれば、直ちに
そのための措置を講じねばならないのであるつ又後者に
関しては、血中の乳酸が極めて不安定であるために、採
血し、血清を得た後に直ちに測定を開始せねばならない
のである。これらの点を考慮する場合には、上述の従来
の乳酸測定法は必ずしも満足すべきものとは云えないの
である。
(発明の目的) 従って、本発明の目的は、測定操作での熟練の必要性や
、格別の器具及び分光光度針の必要性を廃し、簡単且つ
迅速に乳酸の測定、延いては定量的測定を可能ならしめ
ることにある。
(問題点を解決し、目的を達成する手段及び作用)本発
明によれば、上述の問題点は、乳1m酸化酵素と、ペル
オキシダーゼと、酸化発色試薬とを保持している吸収性
担体であることを特徴とする、乳酸測定用の試験片によ
り解決され、前述の目的が達成される。
本発明による試験片は、反応に必要とされる試薬を吸収
性担体が全て保持しており、従って、この試験片と標準
色調表とを準議しておけば、試験片に一定量の体液例え
ば血清を塗布し、数分間持ち、発色した色調を標準色調
表と肉眼で比色照合すれば検体中の乳酸濃度を定量測定
することができるのである。勿論、生成した有色色素に
応じた適切な波長の光源を有する反射率計を用いれば精
密測定も可能となる。
本発明による試験片による乳酸の測定原理は下記の通り
である。
乳酸酸化酵素 乳酸+02−−ウピルビン酸+8202ペルオキシダー
ゼ H202+DH2D+2H20 DH:色原体 D=有色色素 本発明による試験片において乳酸酸化酵素としては、乳
酸を酸化して過酸化水素を生成する酵素であれば、種類
や起源を問わず、例えばマイコバクテリウム・スメグマ
テイス(M ycobacter iumsaeg−a
tis )やペデイオコッカス属菌(p6dio−co
ccus  sp、 )等の1iatl起源のものも用
いることができる。
ペルオキシダーゼとしては植物起源のもの、例えば西洋
ワサビや大根から抽出されたものが好ましいが、動物又
は微生物起源のものであっても精製度が充分に高いもの
であれば使用に支障は生じない。酸化発色試薬としては
ペルオキシダーゼの存在下に過酸化水素と反応して有色
色素を生ずるものであれば何れの試薬でも用いることが
できる。
このような脂化発色試薬自体は公知であり、4−アミノ
アンチピリンとフェノール類の組合せ、4−7ミノアン
チビリンとアニリン類との組合せ、3−メチル−2−ベ
ンゾチアゾリンヒドラゾン(MOTH)、2.2°−ア
ジノージ(3−エチルベンゾチアゾリン−6−スルホン
till)、O−シアニジン、0−トリジン等を挙げる
ことができる。
尚、本発明ににる’tjt/験片にJJける吸収性担体
は必須担持物質である乳酸酸化酵素、ペルオキシダーゼ
及び酸化発色試薬の他に、必要に応じ2Iiil潤剤、
粘稠剤等の助剤を担持していることもできる。上記の必
須成分やこれらの助剤のvFJ媒として殊に酵素反応や
呈色反応において至適1)H条件(一般には5〜8)を
もたらVらのどして緩衝剤を用いることができ、例えば
vJrat21′fJ液、トリスU厨液、グツド緩衝液
等を挙げることができる。湿潤剤等としては生体起源の
物質も用い1するが、この」0合には乳酸を含有しない
ものであることが肝要である。
本発明による試験片は、乳酸酸化酵素、ペルオキシダー
ゼ及び酸化発色試薬並びに必要に応じ湿潤剤等を緩衝液
に溶解させ、この溶液を濾紙等の吸収性担体に含浸させ
、次いで乾燥させ、得られた試薬保持乾燥担体を切断し
て適宜の寸法のものとなすことにより、製造することが
できるが、実際には使用の便を向上させるために例えば
両面テープを用いて上記の試験片を合成樹脂フィルム製
ストリップ(帯状片)の一端に貼着させておく。
勿論、この試験片付きストリップは包装され、試験片の
汚染が阻止される。
(実施例等) 次に試験片の製造例及び試験例に関連して本発明を更に
詳細に説明する。
乳1lIn(ESn素1000単位と、へJLtオ*シ
l−ゼ20001g位と、4−アミノアンチピリン20
I1gと、N−エチル−N−(2−ヒドロキシ−3−ス
ルホプロピル) −m−t−ルイジン30g+(lに、
0.1M−燐酸1ナトリウム−燐rI2ナトリウム緩W
J液(p H7,0)を添加して全量を10sQ。
となし、混合して上記11%!i液に上記試薬を溶解さ
せた。
この反応性溶液を濾紙(ワットマン3 M M >に含
浸させ、この濾紙を室温下に暗所で乾燥させ、細断する
ことにより試験片を1また。
この試験片に乳酸を含有する検体としての体液例えば血
清を塗布して1〜2分放置すると、試験片は赤紫色に発
色する。従って、この呈色々調を、予め作成して置いた
標準色調表をと対比することによって検体中の乳酸濃度
を求めることができるる。
艶1」LL 製造例1と同様にして、但し反応性溶液の調製に際しτ
N=エチルーN−(2−ヒト0キシ−3−スルホプロピ
ル) −m−トルイジン301Qの代りにN−エチル−
N−(2−ヒドロキシ−3−スルホプロピル)−3,5
−ジメソキシアニリンのナトリウム塩3419を用いる
ことにより試験片を得た。
この試験片に乳酸含有検体を塗布すると、試験片は青緑
色に発色するので、予め作成しておいた標準色調表と照
合することにより検体の乳酸濃度を求めることができる
糺11工 製造例2と同様にして、但し反応性溶液の調製に際して
ポリエチレングリコール(平均分子發3000を1Q添
加することにより(反応性溶液の全量は10sQで変ら
ず)試験片を得た。
この試験片に乳酸含有検体を塗布すると、製造例2にお
ける試験片と同様に試験片は青緑色に呈色するので標準
色調表と照合することにより検体の乳酸濃度を求めるこ
とができる。
この試験片はそのm IIに際してポリエチレングリコ
ールを添加したことにより、製造例2による試験片より
もバックグラウンドに基く呈色の度合いが小さく、従っ
て測定精度が向上する。
尚、この試験片を対象として種々の既知濃度の乳vJ?
I準液を塗布し発色させ、各試験片における呈色度を反
射率計で測定した処、第1図に示される標準曲線が得ら
れた。
試験例(従来法との相関) 製造例3により得られた試験片を用いて測定する本発明
方法と、乳酸脱水素酵素を用いたNADHの生成量から
乳酸濃度を測定する従来法との相関関係を調べた結果は
第2図に示される通りであり、相関関係γ−0,991
、回帰式y−0,86χ+1.77であって両者は良好
な相関を示した。
(R明の効果) 本発明による試験片によれば、検体を試験片に塗布し、
数分間放置すれば試験片は乳酸の濃度に応じた度合の色
調に呈色するので、これを標準色調表と照合するだけで
検体中の乳酸濃度を測定することができる。従って、本
発明による試験片を用いれば、乳R’lA度の測定が極
めて簡単且つ迅速なものとなる。
本発明による試験片を用いた測定結果と従来法による測
定結果との相関が良好なので、本発明による試験片は実
用性においても優れている。
尚、本発明による試験片を、既に実用化されているケト
ン体(アセト酢酸、3−ヒドロキシ醋酸等)測定用の試
験片とを併用すれば、糖尿病等におけるアシド−シスを
容易に且つ迅速に判定する方法を確立することが可能で
ある。
【図面の簡単な説明】
第1図は本発明による試験片を種々濃度の標準乳酸液に
より発色させて呈色度を反射率として測定し、この反射
率と乳w1濃度との関係を示す標準曲線であり、第2図
は乳酸m度測定についての本発明による試験片を用いた
測定結果と従来法による測定結果との関係を示す相関図
である。

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1. (1)乳酸酸化酵素と、ペルオキシダーゼと、酸化発色
    試薬とを保持している吸収性担体であることを特徴とす
    る、乳酸測定用の試験片。
JP15551387A 1987-06-24 1987-06-24 Test specimen for measuring lactic acid Pending JPS642597A (en)

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