JPH01272509A - 微生物による植物ウィルス防除剤の製法 - Google Patents
微生物による植物ウィルス防除剤の製法Info
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- JPH01272509A JPH01272509A JP9806488A JP9806488A JPH01272509A JP H01272509 A JPH01272509 A JP H01272509A JP 9806488 A JP9806488 A JP 9806488A JP 9806488 A JP9806488 A JP 9806488A JP H01272509 A JPH01272509 A JP H01272509A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
[産業上の利用分野]
本発明はスエヒロタケ属(Schizo h!1um
>に属する担子菌によって生産される、抗植物ウィルス
作用物質の製法に関する0本剤は農業あるいは園芸の分
野においてウィルス病の防除を目的として広く利用する
ことができる。
>に属する担子菌によって生産される、抗植物ウィルス
作用物質の製法に関する0本剤は農業あるいは園芸の分
野においてウィルス病の防除を目的として広く利用する
ことができる。
[従来技術]
畑、水田あるいは各種施設で栽培されるタバコ、ピーマ
ン、トマト、キュウリ、スイカなどはタバコモザイクウ
ィルス(以下TMVという)、キュウリモザイクウィル
ス、キュウリ総理モザイクウィルス、ジャガイモYウィ
ルス等に罹病し、著しい被害を受けることが多い、これ
らの病原ウィルスは他作物、雑草、樹木、種苗、土壌中
などに存在し、乍業時の接触、昆虫の吸汗等によって伝
染する0作物におけるこれらウィルス病の防除対策とし
て、従来はウィルスの発生源の除去または低減、土壌消
毒あるいは殺虫剤によるウィルス媒介者の殺減など、間
接的防除技術が主として用いられてきた。
ン、トマト、キュウリ、スイカなどはタバコモザイクウ
ィルス(以下TMVという)、キュウリモザイクウィル
ス、キュウリ総理モザイクウィルス、ジャガイモYウィ
ルス等に罹病し、著しい被害を受けることが多い、これ
らの病原ウィルスは他作物、雑草、樹木、種苗、土壌中
などに存在し、乍業時の接触、昆虫の吸汗等によって伝
染する0作物におけるこれらウィルス病の防除対策とし
て、従来はウィルスの発生源の除去または低減、土壌消
毒あるいは殺虫剤によるウィルス媒介者の殺減など、間
接的防除技術が主として用いられてきた。
植物ウィルスの直接防除剤としてはアルギン酸ナトリウ
ム剤(特許第717594、農林水産省登録第1344
0)及びシイタケ菌糸木培養抽出物(特許第10120
14、農林水産省登録第15584)があるが、いずれ
も浸透移行性がないため、M物体の全面に漏れなく一様
に散布する必要があり、また畑での効果はあまり高くな
い、−方、最近、システミックな(見掛は上浸透移行性
の)効果を示す抗植物ウィルス物質として、オシロイバ
ナに含まれる蛋白質(特開昭6O−243100)が知
られている。しかし、本物質の生産は農業的手段又は植
物組織培養(特開昭6l−5790)によらねばならな
いことから、その生産性に関しては自ずと限界を有する
。
ム剤(特許第717594、農林水産省登録第1344
0)及びシイタケ菌糸木培養抽出物(特許第10120
14、農林水産省登録第15584)があるが、いずれ
も浸透移行性がないため、M物体の全面に漏れなく一様
に散布する必要があり、また畑での効果はあまり高くな
い、−方、最近、システミックな(見掛は上浸透移行性
の)効果を示す抗植物ウィルス物質として、オシロイバ
ナに含まれる蛋白質(特開昭6O−243100)が知
られている。しかし、本物質の生産は農業的手段又は植
物組織培養(特開昭6l−5790)によらねばならな
いことから、その生産性に関しては自ずと限界を有する
。
[発明が解決しようとする問題点]
本発明は、従来の市販の植物ウィルス防除剤に見られな
い浸透移行性の効果を示し、安全で有効な化学物質を、
微生物を用いる醗酵工業的手段によって安価に大量に提
供する事を目的とする。
い浸透移行性の効果を示し、安全で有効な化学物質を、
微生物を用いる醗酵工業的手段によって安価に大量に提
供する事を目的とする。
[問題点を解決するための手段]
本発明者らは、上記の目的を達成するために、多種の微
生物の代謝産物についてスクリー二〉グを行った結果、
スエヒロタケ属(Schiz。
生物の代謝産物についてスクリー二〉グを行った結果、
スエヒロタケ属(Schiz。
hyllum)に属する菌が培養物中に生産する高分子
多糖類が顕著な抗ウィルス活性を示すことを発見した。
多糖類が顕著な抗ウィルス活性を示すことを発見した。
本発明に使用するスエヒロタケ属に属する菌株としては
、天然のスエヒロタケより分離した苗株、あるいは公知
の保存菌株1例えばシゾフィラム、コミューン(Sch
izo h llum commune)IFO
4928、IFO6504、IFO6505,IFO3
0496゜IFO30749(IFOは財団法人・醗酵
研究所の略)等があるが、高分子多糖類の生産量が高い
シゾフィラム・コミューン(Schiz。
、天然のスエヒロタケより分離した苗株、あるいは公知
の保存菌株1例えばシゾフィラム、コミューン(Sch
izo h llum commune)IFO
4928、IFO6504、IFO6505,IFO3
0496゜IFO30749(IFOは財団法人・醗酵
研究所の略)等があるが、高分子多糖類の生産量が高い
シゾフィラム・コミューン(Schiz。
hvllum commune) JTS 30
01(R1研菌寄第9767号)が最も望ましい菌株で
ある。なお、JTS 3001菌株は、IFo 4
928菌株を親株として継代培養し、選抜により得られ
た高生産株である。
01(R1研菌寄第9767号)が最も望ましい菌株で
ある。なお、JTS 3001菌株は、IFo 4
928菌株を親株として継代培養し、選抜により得られ
た高生産株である。
これら菌株の培養物の培養P液あるいは菌体の熱水抽出
物をそのまま、あるいはその有効成分である多糖類を水
に溶解し、タバコ、トマト、ピーマンなどの茎葉に散布
あるいは地下部から吸収させることなどによって、TM
V等の3染発病を効病を効果的に防除することができる
。
物をそのまま、あるいはその有効成分である多糖類を水
に溶解し、タバコ、トマト、ピーマンなどの茎葉に散布
あるいは地下部から吸収させることなどによって、TM
V等の3染発病を効病を効果的に防除することができる
。
特にスエヒロタケ属に属する菌株の生産する抗ウイルス
活性物質は従来知られている多糖類と異なり、処理植物
体においてシステミックに発現することがら著効を示す
。
活性物質は従来知られている多糖類と異なり、処理植物
体においてシステミックに発現することがら著効を示す
。
本発明において使用する菌株は一般の担子菌培養用培地
を用いて、静置又は撹拌培養でき、その効果は有効成分
である高分子多糖類、特に分子量10万以下の酸性高分
子多1!頚の量に依存する。
を用いて、静置又は撹拌培養でき、その効果は有効成分
である高分子多糖類、特に分子量10万以下の酸性高分
子多1!頚の量に依存する。
本発明者らはこれらのことを実験的に確認し本発明を行
った。
った。
以下に、順を追って詳細に説明する。
本発明において、高分子多糖類は、高分子多糖類生産菌
を培養した後、培養物の液体区分(培養枦液)および菌
体区分から分離採取することによって得る事ができるが
、特に、培養r液から多く得られる。
を培養した後、培養物の液体区分(培養枦液)および菌
体区分から分離採取することによって得る事ができるが
、特に、培養r液から多く得られる。
培養培地としては面体がよく育つものであればいかなる
組成の培地でもよいが、一般の糸状菌用培地に酵母エキ
スなどを加えたものが好ましい。
組成の培地でもよいが、一般の糸状菌用培地に酵母エキ
スなどを加えたものが好ましい。
本発明において、グルコース、ペプトン、酵母エキス、
麦芽エキス、リン酸−カリウム、Hnマグネシウム及び
水道水からなる培地等で高分子多糖類生産菌を培養した
。
麦芽エキス、リン酸−カリウム、Hnマグネシウム及び
水道水からなる培地等で高分子多糖類生産菌を培養した
。
培養条件としては、例えば20−30°Cの静置培養で
十分であり、また高分子多糖類生産菌の生育が可能で高
分子多糖類を生産する条件であればいかなる条件でも良
いが、振盪培養又は通気撹拌培養が好ましい。
十分であり、また高分子多糖類生産菌の生育が可能で高
分子多糖類を生産する条件であればいかなる条件でも良
いが、振盪培養又は通気撹拌培養が好ましい。
高分子多糖類生産菌の培養物から遠心分離又は−過によ
り液体区分(培養ヂ液)及び菌体区分(菌体)を得、次
いで、これらから抗ウィルス活性を有する高分子多糖類
を採取する。培養r液から高分子多N類を採取するには
常法によればよく、例として、透析、限外−過、分別沈
澱、溶媒分画、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル?
過クロマトグラフィーなどの操作を単独あるいは適宜併
用すればよい、菌体から高分子多Wiを採取するには、
例えば熱水抽出を行い、その後は液体区分からの採取法
に準ずればよい。
り液体区分(培養ヂ液)及び菌体区分(菌体)を得、次
いで、これらから抗ウィルス活性を有する高分子多糖類
を採取する。培養r液から高分子多N類を採取するには
常法によればよく、例として、透析、限外−過、分別沈
澱、溶媒分画、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル?
過クロマトグラフィーなどの操作を単独あるいは適宜併
用すればよい、菌体から高分子多Wiを採取するには、
例えば熱水抽出を行い、その後は液体区分からの採取法
に準ずればよい。
有効成分は、透析により透析膜内に残り、フェノール・
硫酸反応及びカルバゾール・硫酸反応に陽性であり、ニ
ンヒドリン反応に陰性であることから、アミノ酸、タン
パク質及びアミノ糖を含まない高分子多糖類と考えられ
る。また、限外−過により分子量10万以上の多糖類と
それ以下の多糖類に分れる。これらをそれぞれフェノー
ル硫酸法により定量することができる。
硫酸反応及びカルバゾール・硫酸反応に陽性であり、ニ
ンヒドリン反応に陰性であることから、アミノ酸、タン
パク質及びアミノ糖を含まない高分子多糖類と考えられ
る。また、限外−過により分子量10万以上の多糖類と
それ以下の多糖類に分れる。これらをそれぞれフェノー
ル硫酸法により定量することができる。
両多柵類はいずれも植物ウィルス防除効果を示すが、シ
ステミックなく見掛上、浸透移行的)効果を示すのは分
子量10万以下の高分子多糖類である。
ステミックなく見掛上、浸透移行的)効果を示すのは分
子量10万以下の高分子多糖類である。
以下に実施例により本発明をさらに具体的に説明する。
実施例1
[菌の培養]
シゾフィラム・コミューン(Schizo hvll
um commune)JTS 3001菌株(微
工研菌寄第9767号)を、試験管内のバレイショ・ブ
ドウ糖・寒天培地(斜面、10m■)に接種し、24〜
28°Cで7日間培養し、保存菌株とした。この保存菌
株を、下記の培地100m1を入れた500m1・容三
角フラスコに接種し、25〜28°CC120Orpで
10日間、回転振盪培養した。
um commune)JTS 3001菌株(微
工研菌寄第9767号)を、試験管内のバレイショ・ブ
ドウ糖・寒天培地(斜面、10m■)に接種し、24〜
28°Cで7日間培養し、保存菌株とした。この保存菌
株を、下記の培地100m1を入れた500m1・容三
角フラスコに接種し、25〜28°CC120Orpで
10日間、回転振盪培養した。
培地ニゲルコース 50gペプトン
2g 酵母エキス 2g 麦芽エキス 10g KHλPO45g M g S o4. ・7H201g水道水
10100O 他の菌株も同様の方法で培養し、菌糸培養物を得た。こ
れらの菌糸培養物を60゛Cで15分加熱し、東洋r紙
No5cを用いて一過し培養P液を得た。
2g 酵母エキス 2g 麦芽エキス 10g KHλPO45g M g S o4. ・7H201g水道水
10100O 他の菌株も同様の方法で培養し、菌糸培養物を得た。こ
れらの菌糸培養物を60゛Cで15分加熱し、東洋r紙
No5cを用いて一過し培養P液を得た。
実施例2
実施例1において得られた各種菌株の培養P液及びその
水希釈液の抗ウィルス活性をTMVについて検定した。
水希釈液の抗ウィルス活性をTMVについて検定した。
検定にはウィルスを接種することによって局部病斑を生
ずるタバコ品種(キサンチ・エヌシー)を用いた。検定
用のタバコ植物は直径12cmの鉢で育成し、1試料に
っき2鉢、3葉ずつ計6葉を用いた。展開した葉の表又
は裏側の主脈を境とする生葉に被験液を絵箪で塗布し、
片側の生葉には対照として水を塗布した。試料処理1日
後、葉の表側全面にカーボランダムを振掛(す、純化T
Mv (0,06gg/ml)を塗抹接種した。ウィル
ス接種3−4日後、接種葉に現われた斑点の数を数え、
次式によって防除率を1出し、表1の結果を得た。
ずるタバコ品種(キサンチ・エヌシー)を用いた。検定
用のタバコ植物は直径12cmの鉢で育成し、1試料に
っき2鉢、3葉ずつ計6葉を用いた。展開した葉の表又
は裏側の主脈を境とする生葉に被験液を絵箪で塗布し、
片側の生葉には対照として水を塗布した。試料処理1日
後、葉の表側全面にカーボランダムを振掛(す、純化T
Mv (0,06gg/ml)を塗抹接種した。ウィル
ス接種3−4日後、接種葉に現われた斑点の数を数え、
次式によって防除率を1出し、表1の結果を得た。
防除率(X)=(1−(処理生葉の病斑数/対照生葉の
病斑数)) X100 (以下余白) 実施例 3 実施例2において最も強い効果を示したシゾフィラム・
コミューン JTS 3001m株の培養r液及びそ
の水希釈液の抗ウィルス活性を、TMVについて、さら
に詳細に検討した。方法は実施例2に従った。結果を表
2、表3にしめす。
病斑数)) X100 (以下余白) 実施例 3 実施例2において最も強い効果を示したシゾフィラム・
コミューン JTS 3001m株の培養r液及びそ
の水希釈液の抗ウィルス活性を、TMVについて、さら
に詳細に検討した。方法は実施例2に従った。結果を表
2、表3にしめす。
(以下余白)
表2に見られるように、葉裏処理した場合には全ての試
料が100%近い防除率を示した。
料が100%近い防除率を示した。
一方、表3に見られるように、葉裏処理でも効果が防除
率に現れるのみならず、主脈を境にして処理しなかった
生葉側にもその効果が及ぶことが°8められた。即ち、
葉に全く試料を塗布せずにウィルスを接種した場合に比
べて、試料を塗布した対照生葉の病斑の絶対数が減少す
る効果が認めら九な、この結果は、本発明における活性
物質がシステミックに効くことを示している。
率に現れるのみならず、主脈を境にして処理しなかった
生葉側にもその効果が及ぶことが°8められた。即ち、
葉に全く試料を塗布せずにウィルスを接種した場合に比
べて、試料を塗布した対照生葉の病斑の絶対数が減少す
る効果が認めら九な、この結果は、本発明における活性
物質がシステミックに効くことを示している。
実施例4
実施例1において得られたシゾフィラム・コミューン
JTS 3001菌株の培養r液に2倍量(V/V)
のエタノールを加えて1夜放置した、沈澱物を回収し、
水に溶解後、エタノールを加えて再沈澱させ、1夜放置
した。沈澱物を回収し水に再溶解してからアサヒバツク
G5−510に0S−320を直列につないだカラムを
装備した日本分析工業製LC−20型分取液体クロマト
グラフにかけ、0.1M酢酸アンモニウム溶液で溶出し
て、分子量10万以上の高分子多糖類5−1(約130
mg/?液100100Oと分子量10万以下の高分子
多糖類5−2(約260 m g /P?液00100
Oを得た。
JTS 3001菌株の培養r液に2倍量(V/V)
のエタノールを加えて1夜放置した、沈澱物を回収し、
水に溶解後、エタノールを加えて再沈澱させ、1夜放置
した。沈澱物を回収し水に再溶解してからアサヒバツク
G5−510に0S−320を直列につないだカラムを
装備した日本分析工業製LC−20型分取液体クロマト
グラフにかけ、0.1M酢酸アンモニウム溶液で溶出し
て、分子量10万以上の高分子多糖類5−1(約130
mg/?液100100Oと分子量10万以下の高分子
多糖類5−2(約260 m g /P?液00100
Oを得た。
実施例2と同じ方法で培養炉液、分子量10万以上の高
分子多糖類S−1及び分子量10万以下の高分子多糖類
S−2の検定を行った。
分子多糖類S−1及び分子量10万以下の高分子多糖類
S−2の検定を行った。
一方、播種後55日、草丈的45cmのタバコ(キサン
チ・エヌシー)の下葉5枚に培養?液及び培養?液から
得られる高分子多糖画分を散布し、散布1日後、その直
上値の3枚の葉に0.06μg / m 1のTMVを
塗抹接種した。無処理対照区には蒸溜水散布を行った。
チ・エヌシー)の下葉5枚に培養?液及び培養?液から
得られる高分子多糖画分を散布し、散布1日後、その直
上値の3枚の葉に0.06μg / m 1のTMVを
塗抹接種した。無処理対照区には蒸溜水散布を行った。
TMV接種3〜4日後に、接種葉に現れた病斑を数え、
実施例2に準じて防除率を算出した。結果を表4、表5
に示す表−4及び5で明らかなように、防除の効果が無
処理生葉に及ぶのみならず、タバコの一部の葉を培養?
液及び高分子多糖類S−2で処理すると、同一個体の無
処理の上位葉においても病斑数が減少することから、培
!F液とその中の高分子多糖類S−2の効果はシステミ
ックであると結論できる。また、検定の結果から培養?
液中のシステミックな効果物質は分子量10万以下の高
分子多糖類S−2であると考えられる。
実施例2に準じて防除率を算出した。結果を表4、表5
に示す表−4及び5で明らかなように、防除の効果が無
処理生葉に及ぶのみならず、タバコの一部の葉を培養?
液及び高分子多糖類S−2で処理すると、同一個体の無
処理の上位葉においても病斑数が減少することから、培
!F液とその中の高分子多糖類S−2の効果はシステミ
ックであると結論できる。また、検定の結果から培養?
液中のシステミックな効果物質は分子量10万以下の高
分子多糖類S−2であると考えられる。
実施例5
実施例1において得られたシゾフィラム・コミューンJ
TS 3001!ff株の培養?液を供試液とし、各
種植物を用いて、T M Vに対する抗ウィルス活性を
試験した。ウィルスは被検植物に対応する系統を用いた
。培養?液は水で適当な濃度に希釈して散布し、散布1
日後にウィルスを塗抹接種し、接種14日後に発病を調
査した。その結果を表−6に示す。
TS 3001!ff株の培養?液を供試液とし、各
種植物を用いて、T M Vに対する抗ウィルス活性を
試験した。ウィルスは被検植物に対応する系統を用いた
。培養?液は水で適当な濃度に希釈して散布し、散布1
日後にウィルスを塗抹接種し、接種14日後に発病を調
査した。その結果を表−6に示す。
これまでの実施例において認められた効果は、キサンチ
・エヌシーとTMVの組合わせだけでなく、その他の植
物とTMVとの組合わせにおいても認められた。
・エヌシーとTMVの組合わせだけでなく、その他の植
物とTMVとの組合わせにおいても認められた。
[発明の効果]
実施例によって示されたように、スエヒロタケ属から選
ばれた菌が生産する高分子多糖類は、高い植物ウィルス
防除効果を示し、その効果はシステミックであることが
明らかとなった。また、該高分子多糖類は菌を培養する
ことにより醗酵工業的に容易に生産できることが示され
た0本発明により従来にない、新しい抗植物ウィルス剤
の供給が可能となった。
ばれた菌が生産する高分子多糖類は、高い植物ウィルス
防除効果を示し、その効果はシステミックであることが
明らかとなった。また、該高分子多糖類は菌を培養する
ことにより醗酵工業的に容易に生産できることが示され
た0本発明により従来にない、新しい抗植物ウィルス剤
の供給が可能となった。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1、スエヒロタケ(¥Shizophyllum¥)属
から選ばれる菌を培養し、菌体又は培地中に植物ウイル
ス防除活性を有する物質を生成せしめ、これを採取する
ことを特徴とする植物ウイルス防除剤の製法。 2、スエヒロタケ属から選ばれる菌がシゾフィラム・コ
ミューン(¥Shizophyllu¥¥mcommu
ne¥)である第1項記載の植物ウイルス防除剤の製法
。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9806488A JPH01272509A (ja) | 1988-04-22 | 1988-04-22 | 微生物による植物ウィルス防除剤の製法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9806488A JPH01272509A (ja) | 1988-04-22 | 1988-04-22 | 微生物による植物ウィルス防除剤の製法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01272509A true JPH01272509A (ja) | 1989-10-31 |
Family
ID=14209899
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9806488A Pending JPH01272509A (ja) | 1988-04-22 | 1988-04-22 | 微生物による植物ウィルス防除剤の製法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH01272509A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2013065439A1 (ja) | 2011-11-01 | 2013-05-10 | 味の素株式会社 | 植物ウイルスの感染抑制剤およびそれを用いた植物ウイルス感染抑制方法 |
-
1988
- 1988-04-22 JP JP9806488A patent/JPH01272509A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2013065439A1 (ja) | 2011-11-01 | 2013-05-10 | 味の素株式会社 | 植物ウイルスの感染抑制剤およびそれを用いた植物ウイルス感染抑制方法 |
| US10617122B2 (en) | 2011-11-01 | 2020-04-14 | Ajinomoto Co., Inc. | Plant virus infection inhibitor and a method for inhibiting plant virus infection using the same |
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