JPH01294629A - ハロゲン化炭化水素により不安定生物混合物からプロセス化学薬品を抽出する方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、外因性または内因性の脂質可溶性化学薬品、
例えば、ウィルスの不活性化に用いる化学薬品を除去す
るために、生物混合物を有機アルコール及び／またはハ
ロゲン化炭化水素で抽出することにより生物混合物の加
工処理することに関する６本発明は、また、ウィルスに
関して常用対数で６よりも大きいウィルス不活性化の度
合を有し、かつ特定の生物血液蛋白に関する機能活性を
少なくとも４５％保持する蛋白含有血液製品に関する。

［従来の技術及び発明が解決しようとする課題］血液は
、Ｂ型肝炎ウィルス（ＨＢＶ）、非Ａ、非Ｂ型肝炎ウィ
ルス（ＮＡＮＢＨＶ）　、サイトメガロウィルス、及び
免疫欠損ウィルスを含むがそれらに限定されない種々の
異なるウィルスを各々含有し得る。これらのウィルスは
、ワクチンを製造する過程で並びに血液及び血液仔馬を
治療適用する前に不活性にすることが強く要望されてい
る。１１ｉ乳類の血液及び血液分層中のＨＢＶのような
ウィルスを、物理的（例えば、加熱、放射）及び化学的
（例えば、アルデヒド、有機溶媒、洗浄剤等）方法を用
いて不活性にしてきた。不活性化はウィルスを非感染性
及び非病原性にする。

哺乳類、特にヒトの血漿中のＢ型肝炎ウィルス（ＨＢＶ
）のようなウィルスを不活性にするために多くの試みが
されてきている。い（つかの国において、血漿を、肝炎
Ｂウィルスのたんばく様の部分に架橋するまたはウィル
スの核酸と相互作用するウィルス不活性化薬に接触させ
ることにより、血漿中のＢ型肝炎ウィルスの不活性化を
もたらすことが行なわれている０例えば、肝炎Ｂウィル
スをホルムアルデヒドのようなアルデヒドに接触させて
不活性にすることが知られている。

蛋白生物学においてウィルスを不活性にするために試さ
れてきた操作は以下のものを含む：（１）特定の抗体で
の中和 ［Ｅ、タボ−（Ｔａｂｏｒ）　、　Ｄ、　Ｌ、アロンマ
ン（Ａｒｏｎｓｏｎ）　、　Ｒ。

Ｊ、ゲレティー（Ｇｅｒｅｔｙ）による″Ｂ型肝炎免疫
グロブリンによる第■因子複合体からのＢ型肝炎ウィル
ス感染の除去”　、　Ｌａｎｃｅｔ、（１９８０年）、
２．６８−７０；Ｈ，Ｇ、Ｊ、プルメルホイス（Ｂｒｕ
ｍｍｅｌｈｕｉｓ）　、　Ｊ、オベル（Ｏｖｅｒ）　、
　Ｌ、　Ａ、デイヴイスホルスト（Ｄｕｉｖｉｓ−Ｖｏ
ｒｓｔＪらによる”人の血液の最適使用への貢献。（可
能性として）感染性血漿誘導体によるＢ型肝炎伝染の■
〉の減少”　、　Ｖｏｘ　Ｓａｎ　１（１９８３年）、
長、２０５−２１６］、 （２）紫外線照射じＵＶ”） （Ｊ、Ｗ、オリファント（Ｏｌｉｐｈａｎｔ）、　Ａ、
ホレンダー（Ｈｏｌｌａｅｎｄｅｒ）による”血清中の
病因物質である同種血清肝炎の紫外線照射による実験的
不活性”Ｐｕｂｌｉｃ　Ｈｅａｌｔｈ　Ｒｅ　、、（１
９４５年）、■、５９ｇ−６０２；Ｆ、０．マクカラム
（ＭａｃＣａｌｌｕｍ）による”同種血清肝炎”　、Ｐ
ｒｏｃ、Ｒｏ　、Ｓｏｃ、Ｍｅｄ、、（１９４６年）、
ｕ、６５５；Ｒ，ミニ−レイ（Ｍｕｒｒａｙ）、Ｊ、！
、オリファント（Ｏｌｉｐｈａｎｔ）、Ｊ、Ｔ、　　）
リップ（Ｔｒｉｐｐ）らによる“紫外線照射の黄痘を起
こす血漿への効果”、凹、（１９５５年）、庄、８−１
４］。

（３）β−プロピオラクトン（”ＢＰＬ”）及び紫外線
（ＵＶ）照射 ［Ｆ、Ｗ、ハートマン（Ｈａｒｔｍａｎ）　、　Ｇ、　
Ａ、ログリボ−（ＬｏＧｒｉｐｐｏ）による“血漿減菌
のためのβ−プロピオラクトンと紫外線照射との組み合
わせ“、Ｆ、Ｗ。

ハートマン、Ｇ、　Ａ、ログリボ−１Ｊ、　Ｇ、マテー
ル（Ｍａｔｅｅｒ）ら編集のＨｅ　ａｔｉｔｉｓ　Ｆｒ
ｏｎｔｉｅｒｓ、Ｈｅｎｒｈ剋」伽狙ユ担！１態国匝ｍ
匪畦凹、ボストン、リトル、Ｂｒｏｗｎ　＆　Ｇｏ、、
　（１９５７年）、４０７−４１６；Ｒ，コチチェツケ
（Ｋｏｔｉｔｓｃｈｋｅ）、Ｗ、ステエフアン（Ｓｔｅ
ｐｈａｎ）による”β−プロピオラクトン及び紫外線照
射の組合わせによる人の血漿中の凝血因子の取扱、フィ
ブリンの組織及び機能”Ｈ，シュロール（Ｓｃｈｒｏｅ
ｅｒ）、　Ｇ、ハック（Ｈａｕｃｋ）、　Ｆ、チメルマ
ン（Ｚｉｍａ＋ｅｒｍａｎ）ら編集のＢｌｕｔ　ｅｒｌ
ｎｎｕｎ　　ａｎｄ　　Ｍｉｋｒｏｚｉｒｋｕｌａｔｉ
ｏｎ　５ｔｕｔｔ　ａｒｔ：Ｖｅｒｌａ　、　（１９７
６年）、２２２−２２８； Ｇ、　Ａ、ログリボ−１Ｈ，ハヤシによる”人の血漿プ
ール中のＢ型肝炎抗原の紫外線照射を伴なうβ−プロピ
オラクトンの効能”　、Ｈｅｎｒ　　Ｆｏｒｄ　Ｈｏｓ
　、Ｍｅ虹ム、（１９７３年）、２１．１８１−Ｌａ６
゜Ｄ、ハインリヒ（Ｈｅｉｎｒｉｃｈ）　、　Ｈ，ペル
ソルド（Ｂｅｒｔｈｏｌｄ）による７低温減菌したプロ
トロピン複合体濃縮物の人への適用：臨床学的及び血清
学的研究“、第１３回血友病世界連合国際会議、テルア
ビブ、７月８日〜１３日、１９７９年；■、ステファン
　（Ｓｔｅｐｈａｎ）　、　Ａ、　Ｍ、プリンス（Ｐｒ
ｉｎｃｅ）による”第■因子複合体（ＰＰＳＢ）のβ−
プロピオラクトン（ｂ−ＰＬ）と紫外線（ＵＶ）照射と
の組み合わせ処理による効能’　、Ｈａｅｍｏｓｔａｓ
ｉｓ、（１９８１年）、■、６７；Ａ、　Ｍ、プリンス
、胃、ステファン、Ｂ、プロットマン（Ｂｒｏｔｍａｎ
）による”β−プロピオラクトン／紫外線照射：血液誘
導体中のウィルス不活性に関するその効果の論評”　、
Ｒｅｖ、Ｉｎｆｅｃｔ、Ｄｉｓ、、（１９８３年）、５
．９２−１０７；　Ｌステファン、Ａ、　Ｍ、プリンス
及びＲ，コチチェツケによる”低温減菌した人の血漿か
ら第■因子の濃縮”、匣ｎ劫ｌｌユＬユ堕堕、（１９８
３年）、ｕ、４９１１１ （４）液状製品への熱の適用 ［Ｓ、Ｓ、グリス（Ｇｅｌｌｉｓ）、　Ｊ、　Ｒ，二一
フェ（Ｎｅｅｆｅ）。

Ｊ、ストークス・ジュニア（Ｓｔａｋｅｓ　Ｊｒ、）ら
による”人血漿分画製品ＸＸＸＶＩに関する化学的、臨
床学的及び免疫学的研究、熱による正常な大血清アルブ
ミンの溶液中の同種血清肝炎ウィルスの不活性化”、Ｊ
、Ｃ１１ｎ、Ｉｎｖｅｓｔ、、（１９４８年）、記、２
３９−２４４゜Ｒ，ムーレイ、ｗ、　Ｃ，Ｌ、ジ−フェ
ンバッハ（Ｄｉｅｆｅｎｂａｃｈ）による　”同種血清
肝炎因子への熱の効果”、Ｐｒｏｃ、Ｓｏｃ、Ｅｘ　、
Ｂｉｏｌ、Ｍｅｄ、、（１９５３年）、鉦、２３０−２
３１　；Ｊ、２．ソウリヤー（Ｓｏｕｌｉｅｒ）　、　
Ｃ，ブラチックス（Ｂｉａｔｉｘ）、Ａ、Ｍ、　コーロ
ース（Ｃｏｕｒｏｕｃｅ）らによる”Ｂ型ウィルス肝炎
（ＳＨ肝炎）の予防”　、　Ａｍ、Ｊ、Ｄｉｓ、Ｃｈｉ
虹、（１９７２）、山、４２９−４３４゜Ｔ、シカタ、
Ｔ、カラサワ、Ｋ、アベらによる　“６０℃で１０時間
熱処理後の肝炎Ｂウィルスの不完全な不活性化”、Ｊ、
　Ｉｎｆｅｃｔ、　ＤＬｓ、　、　（１９７８年）、出
、２４２−２４４； Ｅ、タボ−１Ｒ，Ｊ、ゲレティーによる　”非Ａ１非Ｂ
型肝炎に関するチンパンジー動物モデル：新しい適用”
、■、ツムネス（Ｓｚｍｕｎｅｓｓ）　、　Ｈ，Ｊ、ア
ルタ−（Ａｌｔｅｒ）、Ｊ、Ｅ、メイナルド（Ｍａｙｎ
ａｒｄ）　Ｗ集の瓦炎ｌルス：１９８１　　　　シンポ
ジ　ム０、フィラデルフィア：フランクリン・インスチ
チュート・プレス（Ｔｈｅ　Ｆｒａｎｋｌｉｎ　Ｉｎ５
ｔｉｔｕｔｅ　Ｐｒｅｓｓ）、（１９８１年）、３０５
−３１７； Ｖｏｎ、Ｎ、ハイムバーガー（Ｈｅｉｍｂｕｒｇｅｒ）
　、　Ｈ，シュビン（Ｓｃｈｗｌｎｎ）　、　Ｐ、グラ
フ（Ｇｒａｔｚ）らによる”高精製かつ溶液中で加熱さ
れた第■因子濃縮物”、Ａｒｚｎｅｉｍ−Ｔｈｒｏｍｔ
ゾ旦ロＬニジ」４、（１９８１年）、虹、６１９；Ｅ、
タボ−１Ｇ、ムラノ、Ｐ、スノイ（Ｓｎｏｙ）らによる
”クエン酸塩で安定化した抗トロンビンｍ　中（７）　
加熱によるＢ型肝炎ウィルスの不活性化“、Ｔｈｒｏｍ
ｂ。

肚ム、（１９８１年）、銭、２３３−２３８；Ｄ、メナ
ッヘ（Ｍｅｎａｃｈｅ）　、　Ｄ、　Ｌ、アロンマン（
Ａｒｏｎｓｏｎ）による“プールした血漿製品のウィル
ス不純物の不活性化の計測”　、　Ｒ，Ｙ、トッド（Ｄ
ｏｄｄ）、Ｌ、　Ｆ、ベーカ−（Ｂａｋｅｒ）編集の感
染ウィルスの免疫及び血液の輸血の化学技術シンポジウ
ム第１７回年金会報、５月９〜１１日、１９８４年、ニ
ューヨーク、アラン、Ｒ，ロス（Ｌｏｓｓ）、（１９８
５年）、４０７−４２３、或は、乾燥状態において、Ｇ
、ドラナ（Ｄｏｌａｎａ）、Ｄ、テセ（Ｔｓｅ）　、Ｗ
、　トーマス（Ｔｈｏａ＋ａｓ）らの”血友病における
肝炎の危険の低減：加熱した第■因子の製造”　、Ｊ、
Ａｍｅｒ、Ｓｏｃ、Ｈｅｍａｔｏｌ、、　（１９８２年
）、並、（ＳｕｐｐＨ）、２１０２゜ Ｆ、　Ｒ，ホリンガー（Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ）、Ｇ、ド
ラナ、Ｗ、トーマスらの”人の抗血友病因子（ＡＨＦ）
濃縮物の加熱処理による肝炎Ｂウィルス（ＨＢＶ）及び
非Ａ、非Ｂ型肝炎因子の感染の低減”、Ｌ、Ｒ，オペル
ビー（Ｏｖｅｒｂｙ）　、　Ｆ−ダインハルト（Ｄｅｉ
ｎｈａｒｄｔ）、Ｊ、グイ血、ニューヨーク：　Ｍａｒ
ｃｅｌ　Ｄｅｋｋｅｒ、Ｉｎｃ、、（１９８３年）　２
４５−２４６； Ｆ、　Ｂ、ホリンガー、Ｇ、ドラナ、ｗ、トーマスらの
“人の第■因子濃縮物の熱処理による肝炎伝染の危険の
低減”　、Ｊ、Ｉｎｆｅｃｔ、Ｄｉｓ、、（１９８４ン
、１５０．２５０−２６２］。

（５）界面活性剤の添加を伴う脂質溶媒（Ａ、Ｍ、プリ
ンス、Ｂ、ホロビッツ（）Ｉｏｒｏｗｉｔｚ）、Ｂ、プ
ロットマンらの“Ｔｗｅｅｎ　８０及びエーテルへの暴
露によるＢ型肝炎及びハッチンソン（Ｈｕｔｃｈｉｎｓ
ｏｎ）累卵Ａ、非Ｂ型肝炎ウィルスの不活性化“、對）
Ｘ−鋒邸、（１９８４年）、４６１３６−４３；Ａ、　
Ｍ、プリンス、Ｂ、ホロビッツ及びＢ、プロットマンに
よる“トリ（ｎ−ブチル）燐酸塩及び塩素酸ナトリウム
への暴露による肝炎及びＨＴＬＶ−ＩＯウィルスの減菌
”、　Ｔｈｅ　Ｌａｎｃｅｔ、７０６−７１０．３月２
９日、１９８６年］、並びに 界面活性剤を添加しない脂質溶媒 ［Ｓ、Ｍ、　ファインストーン（Ｆｅｉｎｓｔｏｎｅ）
、　Ｋ、　Ｂ、ミハリク（Ｍｉｈａｌｉｋ）、Ｔ、カミ
ムラらによる“クロロホルムによるＢ型肝炎ウィルス及
び非Ａ、非Ｂ型肝炎の不活性化”、Ｉｎｆｅｃｔ、Ｉｍ
ｍｕｎｏｌ、　、（１９８３年）、４１．８１６−８２
１； Ｏ，Ｗ、ブラッドレイ、Ｊ、　Ｅ、メイナルド、Ｈ，ポ
ツパー（Ｐｏｐｐｅｒ）らによる“輸血後の非Ａ、非Ｂ
型肝炎：２つの別個の因子の天然化学的特性”、　Ｊ、
　Ｉｎｆｅｃｔ。

Ｄｌｇ、　、（１９８３年）４旦、２５４−２６５］。

特定の抗体による中和は抗体の入手可能性（今までのと
ころでは肝炎Ｂウィルスのみ）により制限され、（タボ
−らの上記Ｌａｎｃｅｔ、（１９８０年）、及びプルメ
ルホイス（Ｂｒｕｍｍｅｌｈｕｌｓ）らの上記−」見Ｉ
、（１９８３年））紫外線照射及び熱不活性化法の成功
は不定であり［Ｓ、Ｓ、ゲリス、　Ｊ、Ｒ，二一フエ、
Ｊ、ストークス・ジュニア、Ｌ、Ｅ、ストロング（Ｓｔ
ｒｏｎｇ）、Ｃ，Ａ、ジェーンウェイ（Ｊａｎｅｗａｙ
）　、Ｇ、スカッチャード（Ｓｃａｔｃｈａｒｄ）によ
る“人の血漿の分画製品に関する化学的、臨床学的及び
免疫学的研究−ＸＸＸＶＩ−熱により正常な人血清アル
ブミン溶液中の同種血清肝炎ウィルスの不活性化”、Ｊ
、Ｃｌ１ｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ、、（１９４７年）、鉦、
２３９−２４４；Ｎ、ハイムバーガー、Ｈ，シュビン、
Ｒ，マーラー（Ｍａｕｌｅｒ）による“肝炎の危険のな
い第■因子濃縮物：血友病Ａの処理の進歩”、“ＬＬＬ
Ｊ、！ユ加」−肚ヱ堕、（１９８０年）、■、１６５−
１７４゜Ｍ、コロンボ（Ｃｏｌｏｍｂｏ）、■、カーネ
リ（Ｃａｒｎｅｌｌｉ）、Ｃ，ガゼンゲル（Ｇａｚｅｎ
ｇｅｌ）、　Ｐ、Ｍ、マニュシー（Ｍａｎｎｕｃａｔ）
、Ｇ、　Ｆ、サビッジ（Ｓａｖｉｄｇｅ）　、Ｋ、シン
ブ（Ｓｃｈｉｍｐｆ）による”第■因子濃縮物の熱処理
による非Ａ、非Ｂ型肝炎の伝染”　、Ｌａｎｃｅｔ、（
１９８５年）、７月１〜４日； Ｆ、　Ｅ、ブレストン（Ｐｒｅｓｔｏｎ）　、　Ｃ，Ｒ
，Ｍ、ヘイ（Ｈａｙ）、Ｍ。

Ｓ、デワー（Ｄｅｗａｒ）、Ｍ、グリーブス（Ｇｒｅａ
ｖｅｓ）、　Ｄ。

Ｒ，トリガー（Ｔｒｌｇｅｒ）による“非Ａ、非Ｂ型肝
炎及び熱処理した第■因子濃縮物”、　Ｌａｎｃｅｔ、
（１９８５年）、７月、２１３゜ Ｃ，ロージオクス（Ｒｏｕｚｌｏｕｘ）、Ｓ、シャマレ
ット（Ｃｈａａ＋ａｒｅｔ）　、　Ｌ、モンタグニア（
Ｍｏｎｔａｇｎｉｅｒ）、■、カーネリ、Ｇ、ロランド
（Ｒｏｌｌａｎｄ）、Ｐ」、マニュシーによる“熱処理
した第■因子濃縮物で処理した血友病者におけるエイズ
ウィルスに対する抗体の不在”　、Ｌａｎｃｅｔ、（１
９８５年）、２月、２７１−２７２；Ｐ、Ｂ、Ａ、ケル
ノフ（Ｋｅｒｎｏｆｆ）　、　Ｅ、　Ｊ、ミラー（ＭＨ
ｌｅｒ）、Ｇ、　Ｆ、サビッジ（Ｓａｖｉｄｇｅ）、Ｓ
、　Ｊ、マシン（Ｍａｃｈｉｎ）、Ｍ、　Ｓ、デワー、
Ｆ、　Ｅ、ブレストン（Ｐｒｅｓｔｏｎ）による“湿式
加熱は第■因子濃縮物に一層安全か？”Ｌａｎｃｅｔ、
　１９８５．９月、７２１］　、そしてβ−プロピオラ
クトンは蛋白を化学的に変化させ、そしてその発癌性は
人々がそれを取扱うのを危険にする。

米国特許第４，４８１．１８９号及び第４．５４０．５
７３号は、有機溶媒／洗浄剤の組を用いて、血漿及び血
漿製品中に含まれまたは加えらえる肝炎ウィルス及び他
のウィルスの感染を数桁低減することを記載しており、
これらの米国特許を援用して記載の一部となす。

適当な温度及び接触時間の条件下での溶媒／洗浄剤処理
は、敏感な血漿蛋白の分子配座及び生物活性への影響は
無視できるが、脂質に含まれる蛋白を包囲しているウィ
ルスを有効に分解する。

ウィルスの分解及び弱毒化における有機溶媒及び洗浄剤
の独立の効果を、両方の存在により促進することができ
る。生物製品から洗浄剤並びに有機溶媒を除去すること
は、特に、もし特定の洗浄剤を用いるべき人またはいか
なる生態系が該製品に対して十分耐毒性でなければ必要
となり得る。

血液に適用されるウィルス不活性化試薬の他の例は、メ
ロシアニン、β−プロピオラクトン及びシスーブラチン
（ｃｉｓ−ｐｌａｔｉｎ）を含む。

膜蛋白複合体から脂質／洗浄剤混合ミセルの除去を達成
するのに用いる他の方法は、血漿製品及び他の生物製品
から該ミセルを除去するのに適用し得る。これらは、寸
法、浮遊密度、電荷、結合親和力、相分配及び溶媒分配
の差に基づくとされている（Ａ、ヘレニウス（Ｈｅｌｅ
ｎｉｕｓ）及びに、シノス（Ｓｉｎｏｕｓ）による“洗
浄剤による膜の可溶化”、虹匹動１」口旦曲ＩＬ」立ひ
よ（１９７５年）、川、２９−７９）。

全血血漿、血清、寒冷除去（ｃｒｙｏｄｅｐｌｅｔｅｄ
）血漿または輸血に直接用いる寒冷沈降物の例において
、ウィルスの減菌技術を実行することはこれまで強いて
実施されてきていない、熱減菌法は、望まない蛋白の変
性をもたらす、免疫中和は現時点でＢ型肝炎ウィルスに
限定される。β−プロピオラクトン／ＵＶ処理は、敏感
な凝結因子、例えば抗肝炎因子の破壊をもたらす、有機
溶媒／洗浄剤混合物は、輸血を意図する血漿の単一ユニ
ットまたは血漿プールに都合よく適用することができな
い試薬を除去するために高価かつ不都合な分画段階の実
行を必要とする。

ウィルス減菌血漿の製造における別の困難は、フィブリ
ノゲン、抗血友病因子または他の不安定な蛋白を損失せ
ずにバクテリアの減菌を維持する処理に続いて血漿を濾
過することにある。

こうして、ウィルスの減菌技術は全血血漿、血清、寒冷
沈降物、寒冷プール（ｃｒｙｏｐｏｏｒ）血漿に適用さ
れてきていないので、注入時のウィルス感染性は推定で
、Ｂ型肝炎に関して０．０５％そして非Ａ、非Ｂ型肝炎
伝染に関して３％残っている。

外因性化学薬剤は、生物混合物中にしばしば加えられて
、合成を刺激し、そこに含まれるウィルスを不活性にし
そして混合物中に存在する所望の成分を安定化又は精製
する。−船釣には、これらの化学薬剤を、所望の成分の
構造及び機能に別の影響を及ぼさないで除去するのが望
ましい。例えば、所定の所望の生物製品の合成は、細胞
培養においてホルボールエステルを培養液に導入して、
誘発または増進させることができる。例えば、メツヱレ
イン（ｍｅｚｅｒｅｉｎ）を用いて培養した白血球によ
ってγ−インターフェロン産生を誘発でき（Ｙ。

Ｋ、イップ（Ｙｉｐ）　、　Ｒ，Ｈ，Ｌ、バング（Ｐａ
ｎｇ）、Ｊ、０．オッペンハイム、Ｍ、　Ｓ、ナツシュ
バー（Ｎａｓｈｂａｒ）　、Ｄ、ヘンリフセン（Ｈｅｎ
ｒｉｋｓｅｎ）　、　Ｔ、ゼレベツキー・エフハルツ（
ＺｅｒｅｂｅｃｋｙＪ−Ｅｃｋｈａｒｄｔ）　、　Ｊ、
ビルセック（Ｖｉｌｃｅｋ）による“ジテルペンエステ
ルによる人工−インターフェロン産生の誘発”、　Ｉｎ
ｆｅｃｔ、ａｎｄ　Ｔｍｍｕｎ、、（１９８１年）、１
３１−１３９）、または、それを産生ずる細胞により腫
瘍壊死因子の分泌を増大することができる（Ｂ、Ｄ、ウ
ィリアムソン（Ｗｉｌｌｉａｍｓｏｎ）、Ｅ、Ａ、カー
スウェル（Ｃａｒｓｗｅｌｌ）、Ｂ、　Ｙ、ルピン（Ｒ
ｕｂｉｎ）　、　Ｊ。

Ｓ、ブレンダーガスト（Ｐｒｅｎｄｅｒｇａｓｔ）　、
　Ｈ，Ｊ、オールド（Ｏｌｄ）による“人のＢ細胞系に
より産生ずる人の腫瘍壊死因子二人インターフェロンと
の共力作用の細胞毒性相互作用”、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ
、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、。

唐μ、　（１９８３年）、任、５３９７−５４０１）。

ホルボールエステル化合物は発癌性があるので、人に用
いる前に、リンフ才力イン標本からホルボールエステル
を除去しなければならない。従来、ホルボールエステル
は沈降、クロマトグラフィー、またはモレキュラークラ
スクルージョン（ｍｅｌｅｃｕｌａｒ　ｅｘｃｌｕｓｉ
ｏｎ）法により除去されてきた（Ｂ、Ｙ、ルピン、Ｓ、
　Ｌ、アンダーソン、Ｓ、　Ａ、スリパン（Ｓｕｌｌｉ
ｖａｎ）、Ｂ、Ｄ、ウィリアムソン、Ｅ、　Ａ、カース
ウェル、Ｌ、　Ｊ、オールドによる“ＬｕｋＩｒ細胞系
からの人の腫瘍壊死因子の精製及び特性化”、均３匹工
熟■」組ムとム」勘、（１９８５年）、村、６６３７−
６６４１）。

また、プロセス化学薬品は血液蛋白のような生態ポリマ
ーの精製に用いられる。例えば、ポリエチレングリコー
ル４０００　（ＰＥＧ）は抗血友病因子の精製において
用いられ、そしてＰＥＧを除去する段階を採用しなけれ
ばならない。

ジメチルスルホキシドは、赤血球濃縮物に加えられて、
特に凍結に対して、それらを安定化しており、そしてジ
エチルへキシルフタレートはまた赤血球の保存安定性を
増すことが示されている。

［課題を解決するための手段］ 本発明の目的は、ウィルス不活性化溶媒及び／または洗
浄剤及び／またはホルボールエステルのような他のプロ
セス化学薬品を、所望の成分の性質を破壊せずに生物学
的材料から除去することである。この目的及び他の目的
は、脂質可溶性プロセス化学薬品、例えばウィルス不活
性化溶媒及び／または所定の洗浄剤及び／またはホルボ
ールエステルを、生物学的材料例えば不安定な生物学的
材料から、使用温度の水溶液中の溶解度が６０．６％の
有機アルコール及び／またはハロゲン原子例えば、Ｆ及
びＣ１を１種より多く含みそして、また、好ましくはエ
ーテル結合を含むハロゲン化炭化水素を用いて抽出する
本発明により提供される。

出願人は、全く驚（べきことに、プロセス化学薬品との
優れた溶媒和と不安定蛋白及び／または細胞との優れた
適合性とを組合わせる２つクラスの有機溶媒を見出すに
至った。これらの溶媒が”ＴＷＥＥＮ　８０”及び”Ｔ
ＲＩＴＯＮ　Ｘ−４５”のような非イオン洗浄剤を水溶
液から抽出できることは特に驚くべきことである。さら
に、それらを用いて、価値ある構成成分を損失させずに
、生物混合物の濾過性のような物理的特性を改善し得る
ことは驚くべきことである。

本発明は、ウィルス弱毒化溶媒を、かかる溶媒を加えた
生物学的材料から除去する方法に関する。本発明は、ま
た、所定のウィルス弱毒化洗浄剤を、かかる洗浄剤が溶
媒を伴いまたは伴わないで加えた生物学的材料から除去
することに関する。

本発明は、また、殺ウィルス薬を生物学的材料から除去
する方法に関する。

更に本発明は、安定剤として生物学的材料に加えられる
プロセス化学薬品を除去する方法に関する。更にまた、
本発明は、生物学的材料の精製に用いるプロセス化学薬
品を除去する方法に関する。

また、本発明は、殺ウィルス薬、例えばメロシアニンま
たはブソラリンが本発明によりに抽出されている、ウィ
ルスを減菌した細胞成分、例えば、赤血球または血小板
を製造する方法を示す。

加えて、本発明は、生物学的材料から、天然産の脂質及
び他の内因性脂質可溶性化合物、例えば発熱物質、また
は外因性脂質可溶性化合物、例えば“ＴＷＥＥＮ　８０
“、”ＴＲＩＴＯＮ　Ｘ−４５”及びＴＮＢＰを除去す
る方法に関し、かかる除去は上記材料の改善された特性
、例えば、濾過性、安定性をもたらし、またはウィルス
減菌試薬を一層有効にする。

本発明は、また、ホルボールエステルを誘導するリンホ
カインのような化学薬品誘導物質を生物学的材料から除
去する方法に関する。

更に、本発明は、溶媒、所定の洗浄剤、ホルボールエス
テルまたは他のプロセス化学薬品を、生物学的材料から
、水溶液中の溶解度が５０．６％の有機アルコール及び
／またはハロゲン原子を１種より多く含むハロゲン化炭
化水素を用いて１回または複数回抽出する方法に関する
。

本発明の方法は、脂質可溶性化学薬品、例えばウィルス
弱毒化試薬、例えば、溶媒及び／または洗浄剤を含む生
物学的材料を、使用温度における水溶液の溶解度が５０
．６％の有効量の有機アルコール及び／またはハロゲン
原子、例えばフッ素または塩素を１種より多く含む有効
量のハロゲン化炭化水素に接触させることを含む、得ら
れた混合物を撹拌し；その後沈降による層分離が起こり
、または遠心力により層分離を促進することができる。

本発明に従い有機アルコールを使用するときは、上層は
有機アルコール及び抽出したプロセス化学薬品を含み；
下層はプロセス化学薬品が比較的無くそして製品を含む
。本発明に従いハロゲン化炭化水素を使用するときは、
下層はハロゲン化炭化水素及びプロセス化学薬品を含み
；上層は、プロセス化学薬品が比較的無くそして製品を
含む。

本発明は、また、血漿、血清、寒冷沈降物及び寒冷除去
血漿からなる群から選ぶ蛋白含有血液製品に関し、血液
製品は以前にウィルス感染されそして上記ウィルスに関
してウィルス不活性化の度合が常用対数で６よりも大き
くなるように処理されてきており、血液製品は特定の生
物活性血液蛋白に関する棲能活性を少な（とも４５％維
持しておりそして脂質可溶性化学薬品を生理学的に許容
し得るレベル以下で有する。

更に、本発明は、血液細胞に加えたプロセス薬を細胞を
分解させずに除去することに関する。

本発明は、また、全血血漿、血清、寒冷除去血漿、寒冷
沈降物、ウィルス減菌全血血漿、ウィルス減菌血清、ウ
ィルス減菌低温除去血漿またはウィルス減菌寒冷沈降物
のような生物学的材料の２戸適性を改善する方法であっ
て、生物学的材料を使用温度における水溶液への溶解度
が５０．６％の有効量の有機アルコール及び／またはハ
ロゲンを１種より多く含む有効量のハロゲン化炭化水素
に接触させ、得られた混合物を撹拌しそして生物学的材
料と有機アルコール及び／またはハロゲン化炭化水素と
の層分離を成すことを含む上記方法を示す。

血液は、固形物（細胞、即ち、赤血球、白血球及び血小
板）及び液状物（血漿）よりできている、細胞はヘモグ
ロビンのような潜在的に有用な物質を含み、そしてそれ
らは誘発されて、インターフェロン、成長因子、及び他
の生物応答調゛製剤のような他の潜在的に価値ある物質
を作ることができる。血漿は、主に水、塩、脂質及び蛋
白から構成されている。蛋白は、フィブリノゲン、血清
グロブリン及び血清アルブミンと呼ばれるグループに分
割される６人の血漿中に見出される典型的な抗体（免疫
グロブリン）は、感染性肝炎、インフルエンザＨ等に対
して向けられる抗体を含む。

輸血は、疾病または出血に原因する貧血、血漿蛋白の損
失または循環容積の損失に原因するショック、血漿蛋白
の適当な水準が維持されていない疾病、例えば血友病、
の治療、及び受動免疫を付与するために用いられる。

全血は、投与の前に注意深く分類されそして交差試験さ
れなければならない、しかしながら、血漿は前免疫試験
を必要としない、所定の適用のために、血友病またはビ
レブランド病治療用の第■因子のように、血漿の適当な
仔馬だけが必要とされる。

所定の病気を持つと、血液の成分の内の１つまたは幾つ
か不足し得る。従って、適当な仔馬の投与で十分であり
、そして他の成分は患者に対して無駄に使われず；他の
仔馬を別の患者用に用いることができる。血液を成分に
分離すること及びそれらの結果としての仔馬は細胞及び
蛋白を濃縮することを可能にし、こうして濃縮物を処理
することを可能にする。血漿分質は全血よりずっと長い
期間保存することができそしてそれらを液体、凍結また
は乾燥状態で配達することができるということも極めて
重要である。最後に、それは全血として投与するのが安
全でない古い全血の血漿部分を血液銀行から回収するこ
とを可能にする。

血液中に見出される細胞は、赤血球、種々のタイプの白
血球、及び血小板を含む。細胞のタイプの分画け、遠心
分離を利用するが代表的であるが、ヒドロキシエチルス
ターチのような連銭状増強剤の添加による差別沈降、免
疫特異性に基づく分離等の他の形態を含み得る。

人の血漿中に見出される蛋白は、プレアルブミン、レチ
ノール結合蛋白、アルブミン、α−グロブリン、γ−グ
ロブリン（免疫血清グロブリン）、凝結蛋白（抗トロン
ビンＩＩＩ、プロトロンビン、プラスミノゲン、抗肝炎
因子（第■因子）、フィブリン−安定化因子−第雇因子
、フィブリノゲン）、免疫グロブリン（免疫グロブリン
Ｇ。

Ａ、Ｍ、Ｄ、及びＥ）、及び補足成分を含む。

記載されてきた血漿蛋白は、現在は、１００より多くあ
る。包括的なリストは、”血漿蛋白”、バットナム（Ｐ
ｕｔｎａＩ！ｌ）Ｆ、　Ｗ、編集、アカデミツク・プレ
ス、ニューヨーク（１９７５年）中に見出すことができ
る。

血液細胞仔馬中に見出される蛋白は、ヘモグロビン、フ
ィブロネクチン、フィブリノゲン、炭水化物及び蛋白代
謝の酵素、血小板由来成長因子等を含む。さらに、イン
ターフェロン及び成長因子のような他の蛋白の合成を生
じ得る。

誘発性白血球蛋白の包括的なリストは、スタンレイ・コ
ーエン（Ｓｔａｎｌｅｙ　Ｃｏｈｅｎ）、エドガー・ビ
ック（Ｅｄｇａｒ　Ｐｉｃｋ）　、　Ｊ、　Ｊ、オッペ
ンハイムによる”リンパ液運動の生物学”、アカデミツ
ク・プレス、ニューヨーク（１９７９年）に見出すこと
ができる。

血漿の分画は、−船釣に、エタノール、エーテル及びポ
リエチレングリコールのような有機溶媒を、低温且つ調
整されたｐＨ値で用いて、血漿蛋白を１またはそれより
多く含む特定の仔馬の沈降をもたらすことを含む。次い
で、上澄みを、それ自身、所望の分画度が達成されるま
で沈降等させることができる。もっと最近の分離はクロ
マトグラフィー法に基づく。血液分画の優れた概説は、
ルクーオスマー　　　　　・舌　、第３版、インターサ
イエンス出版社、第４巻、２５〜６２ページに現われて
いる。

低温エタノール分画法の主な成分は以下の通りである： 庄−Ｊｌ　　　　　　　　　　ｊ４ニーニー■　　　　
フィブリノゲン、低温不溶性グロブリン；第■因子；ブ
ロバージン ■及びＩＩＩ　　ＩｇＧ　、　ＩｇＭ　；　ＩｇＡ　；
フィプリノゲン；β−６脂肪蛋白；プロトロンビ ン；ブラスミノゲン；プラスミン抑 制因子；第Ｖ因子；第■因子；第■ 因子；第Ｘ因子；トロンビン；抗ト ロンビン；同種凝集素；セルロブラ スミン；補体Ｃ’１．Ｃ’３ ＩＶ−１α、−脂肪蛋白、セルロブラスミン；血漿抑制
因子；第■因子：ペブ チダーゼ１α−及びβ−グロブリン ＩＶ−４トランスフェリン；サイロキシン結合グロブリ
ン；血清エステラーゼ； α、−脂肪蛋白；アルブミン；アル カリ性リン酸酵素 ■　　　　アルブミン；α−グロブリンＶｌ　　　　　
α１−酸性糖蛋白；アルブミン上記分画分類表は、更に
進んだ分画のための基礎として働くことができる。例え
ば、９屑■及び■を更に分画して免疫血清グロブリン（
ＩＳＯ）を得ることができる。

別の分画分類表は、ＡＨＦ　（抗肝炎因子）及びフィブ
ロネクチンを含有する寒冷沈降物及び寒冷浮遊物に溶け
る冷凍血漿を用いることを含む、寒冷沈降物は、次いで
、フィブロネクチン及びＡＨＦに分画される。

ポリエチレングリコールは高純度ＡＨＦ及び非凝集ＩＳ
Ｏを製造するために用いられてきた。

肝炎Ｂ及び非Ａ、非Ｂの伝染に関して危険の高い製品は
、フィブリノゲン、ＡＨＦ、及びプロトロンビン複合体
、及び、全ての他の血液蛋白標本である（但し、低温殺
菌される理由より筋肉内注射用に調製した免疫血清グロ
ブリン、及びアルブミン溶液は除＜）。

本発明の方法は、前述の部分において議論したような血
液、血液細胞、血漿それらの血液仔馬、及び血液蛋白、
寒冷沈降物、寒冷除去血清を含む生物学的材料に適用で
き、より一般的には、生物細胞及び液体、例えば正常細
胞、癌細胞、培養成長した癌細胞からの浸出液、培養成
長した正常細胞からの浸出液、ハイブリドーマからの細
胞、遺伝子スプライシング製品、植物細胞濃縮物、植物
細胞懸濁物、動物組織エキス、植物組織のエキス及び微
生物に適用可能である。

本発明に用いる有機アルコールは、例えば、ヘキサノー
ル、ヘプタノール、１−オクタノール、２−オクタノー
ル、１−ノナノール、１−デカノール及びウンデカノー
ルを含むが、それらに限定されない。

本発明に用いるハロゲン化（例えば、フッ素、塩素、ヨ
ウ素、及び／または臭素）炭化水素は、１、２．２−ト
リフルオロトリクロロエタン、”　ＥＴ）ＩＲＡＮＥ″
　（エンフルラン（ｅｎｆｌｕｒａｎｅ）　；２−クロ
ロ−１，１，２−）リフルオロエチルジフルオロメチル
エーテル）、”ＦＯＲＡＮＥ”　（イソフルオラン（ｉ
ｓｏｆｌｕｏｒａｎｅ）　；　１−クロロ−２，２，２
−トリフルオロエチルジフルオロメチルエーテル）を含
むが、それらに限定されない。本発明に従い好ましいハ
ロゲン化炭化水素はフッ素、塩素及びエーテルを含む。

本発明に用いる好ましい溶媒は、使用温度で液状であり
、抽出される水溶液と不混和性であり、使用条件下で蛋
白及び細胞を変性させず、容易に除去され、非爆発性で
あり、そして使用条件下で生物溶液中に残る量で無毒で
ある。

有機アルコール及び／またはハロゲン化炭化水素は、使
用後、食用油、例えば、植物油で抽出することにより、
凍結乾燥することにより、またはダイアフィルトレージ
ラン（ｄｉａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ）若しくはゲルクラ
スクルージ式ン（ｇｅｌ　ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ）クロマ
トグラフィーのような他の標準技法によって除去するこ
とができる。

本発明に従い、複合体混合物を有機アルコールまたはハ
ロゲン化炭化水素により抽出することは混合物の脂質含
有量を減じる。これは混合物の安定性を改善でき、もし
ウィルス不活性化の前に用いるならば、直接または間接
にウィルスの安全に寄与し得る。

本発明の方法による除去のためのジまたはトリアルキル
フォスフェート、洗浄剤及び界面活性剤は米国特許第４
．５４０．５７３号及び４，４８１．１８９号に記載さ
れている。

溶媒、洗浄剤及び有機アルコールまたはハロゲン化炭化
水素の模範的範囲は以下の通りである：・溶媒　　　　
　　　、　　１０００〜２００００ｐｐｍ・洗浄剤　　
　　　　：　　１０００〜１１００００ｐｐ・有機アル
コールまた：　生物液の５〜５０はハロゲン化炭化水素
％　　　（重量％）上記各々に関する好ましい値は、ウ
ィルスの有効な不活性化並びに溶媒及び洗浄剤の定量抽
出に相応するできるだけ低い値である。

通常のそして好ましい抽出条件は以下の通りである： 通常温度二　　　　　〇℃〜３５℃ 好ましい温度：　　　周囲温度 通常の暴露時間：　　１０〜６０分 好ましい暴露時間＝　３０分 上記のような有機アルコール及び／またはハロゲン化炭
化水素を、抽出の目的のためカー（Ｋａｒｒ）往復板抽
出カラム（Ｃｈｅｍ−Ｐｒｏ　Ｃｏｐｒｐｏｒａｔｉｏ
ｎ）のような連続フロー抽出器中で用いることができる
。

本発明は、とりわけ、血液、赤血球、血小板、白血球、
血漿、血漿分屑等のような血液細胞及び蛋白含有組成物
であって、実質的に感染性ウィルスがなく、相当量の細
胞構造及び機能並びに酵素的にまたは生物活性な（変性
してない）蛋白をまだ保持し、プロセス化学薬品を除去
しそれで得られた組成物がプロセス化学薬品を生理学的
に許容し得るレベル以下で有するようにした組成物を生
成することを特に示す。

本発明に従って用いる生物液は、は乳類の血液、血漿、
血漿分屑、血液分画からの沈降物及び血液分画からの浮
遊物、血小板濃縮物、白血球濃縮物、及び白血球に乏し
い充填（ａ縮）赤血球、並びに、白血球からなる白血球
層を充填赤血球上に含む充填赤面球塊が入っている血小
板に富む血漿、血小板濃縮物及び血小板に乏しい血漿を
含む。また、インターフェロン、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ
）、リンフォトキシン（ＬＴ）並びに他の免疫モジュレ
ータ−及びリンフ才力インを製造できる果粒法、単球、
細胞、例えば、インタールキン−２（ｉｎｔｅｒｌｕｋ
ｉｎ−２）　（ＩＬ−２）、インタールキン−３、若し
くはＣ３Ｆ、またはそのような濃縮物若しくは懸濁物か
らの媒体の処理を意図する。

本発明の使用により少なくとも常用対数で６（６１ｏ　
ｇ）の程度にウィルスの不活性化が得られ、すなわち、
ウィルスが未処理の血漿中において１０６に希釈された
後でさえもウィルス活性を測定できるような濃度で存在
することの感染性調査により求められる程度に、血漿中
のウィルスが全体的に不活性化されている。感染性ウィ
ルスの例は以下の通りである：エイズウィルス（）ＩＴ
ＬＶ　ＩＩＩ　／ＬＡＶ）及びＢ型肝炎及び非Ｂ型、非
Ａ型（ＮＡＮＢ）肝炎ウィルス。本発明の過程の間に不
活性化される他のウィルスは、例えば、サイトメガロウ
ィルス、ＥＢウィルス、乳酸脱水素酵素ウィルス、ヘイ
ペス族ウィルス、ラブドウィルス、白血球ウィルス、ミ
クソウィルス、α−ウィルス、アルボウィルス（Ｂ族）
、パラミクソウィルス、アレナウィルス、コロナウィル
ス、ＨＴＬＶ　Ｉ及びＨＴＬＶ　ｎを含むレトロウィル
ス、並びに動物白血病ウィルスを含む。

本発明に従えば、蛋白含有組成物であって、特に、その
血漿または全血清がエイズウィルス、Ｂ型肝炎ウィルス
及び非Ａ非Ｂ型肝炎ウィルスのようなウィルスを常用対
数で６より大きいウィルス不活性の度合で有し、特定の
生物活性蛋白に関する機能活性を少なくとも４５％、好
ましくは少な（とも７５％、更に好ましくは少なくとも
８５％、−層さらに好ましくは少なくとも９５％、最も
好ましくは９８〜１００％保持し、そして脂質可溶性プ
ロセス化学薬品を生理学的に許容し得るレベル以下で有
するものを有する上記組成物を意図する。

本発明に従う（減菌）全血血漿、血漿、寒冷沈降物また
は寒冷除去血漿を、直接、患者、例えばは乳類、例えば
人に輸血できる。あるいは、本発明に従う（減菌）全血
血漿、血漿、寒冷沈降物または寒冷除去血漿を分画して
精製した血漿蛋白誘導体（直接、患者、例えば大患者に
輸血できるような誘導体）を製造できる。

本発明に従う（減菌）全血血漿、血漿は、また、細胞培
養にそして品質管理試薬として用いることができる。

更に、例えば、正常（非癌）細胞若しくは癌細胞、培養
成長した癌細胞若しくは正常細胞からの浸出液、遺伝子
スプライシングからのハイブリドーマ及び製品、植物細
胞濃縮物若しくは懸濁物、動物若しくは植物組織のエキ
ス、または微生物を含む非血液源を、本発明における生
物液として用いることができる。

ここに、本発明を以下の例を参照して説明するが、本発
明はそれらに限定されない。

［実施例〕 ＴＮＢＰ及び選択した非イオン洗浄剤を、食塩水から、
二つのアルコール、即ちｌ−ペンタノール及び２−オク
タノールにより、＠ＦＯＲＡＮＥ”により、及び比較目
的のみにもたらした大豆油により抽出する効率の結果。

全ての抽出媒体はＴＮＢＰを有効に除去することがわか
った。対照してみると、５％の１−ペンタノールにより
２８〜４２％の除去が達成されそして２０％の”ＦＯＲ
ＡＮＥ”により８７％の抽出が達成されたが、大豆油ま
たは一層長鎖のアルコールにより“ＴＷＥＥＮ”の抽出
は殆ど達成されなかった。

”ＴＲＩＴＯＮ″×４５の有効な抽出は両方の評価アル
コール及び”ＦＯＲＡＮＥ”によりもたらされ、大豆油
は最も有効でなかった。”ＴＲＩＴＯＮ“の親水性が増
加すると、１−ペンタノール、２−オクタノール及び大
豆油に関する抽出効率は衰える。また、ノンオキシツー
ル（ｎｏｎｏｘｙｎｏｌ）の結果は、大豆油に比べ、ア
ルコールと共に抽出効率を改善することを立証した。

結果を第１表に示す。

１工１ １％ＴＮＢＰ　　　　　　　　９９　　　９９　　　９
９９９　　　９７１％”ＴＩＩＩＥＥＮ　８０”　　　
２８−４２　０−１２　　８５８７　０−４１％”ＴＲ
ＩＴＯＮ　Ｘ４５”　　　９７　８３−９６　　９９９
９　　　３７１％”ＴＲＩＴＯＮ　Ｘ１１４”　　９１
　　　９４　　　９９９９　　　２５１％”ＴＲＩＴＯ
Ｎ　ＸＩＧＯ”　　９２　　　６０　　　９９９９　　
　　＜１１％Ｎｏｎｏｘｙｎｏｌ　　　　９２　　　４
９　　　　　　ＮＤ　　　　１１ＮＤ：データなし 第２表は、ＴＮＢＰ及び幾つかの洗浄剤の各々を、血漿
から抽出することに関するデータを示す。結果は、概し
て、食塩水からの抽出に関して測定した結果と一致する
。

厘」し表 ２％　ＴＮＢＰ　　　　　　　　　　　９８　　　　　
９８　　　９４　　９６１％”ＴＷＥＩ：Ｎ８０＠　　
　　　　７　　　　　２１　　　　ＮＤ　　　６６１％
”ＴＲＩＴＯＮ　　Ｘ４５”　　　　　８０　　　　　
６２　　　９１　　９９１％″ＴＲＩＴＯＮ　　Ｘ１１
４″　　　７５　　　　　３３　　　９６　　９６１％
”ＴＲＩＴＯＮ　　Ｘ１００”　　　　６５　　　　　
１９　　　９５　　９６ＮＤ：データなし 第３表にＡＨＦ濃縮物または血漿の抽出の際のＡＨＦ回
復に関するデータを示す、１−ペンタノールでのＡＨＦ
回復はおよそ１％であった。２−オクタノール及び”Ｆ
ＯＲＡＮＥ”による抽出の際の回復は、それぞれ、およ
そ９０％及び１００％であった。

５％　１−ペンタノール　　　　１　　　　２．２５　
　　　０．０２　　　　　　１２　　１．２６　　　Ｑ
、Ｏｌ　　　　１５％　２−オクタノール　　　　１　
　　　２．６５　　　　２．３５　　　　　８９２　　
１．２６　　１．１５　　９１ ５％”ＦＯＲＡＮＥ”　　　１　　２．６５　　２．６
９　　１０２２　　　　ＮＤ （１）　ＡＨＦ濃縮物 （２）血漿　　ＮＤ；データなし 去 抗凝結剤の存在下で献血した血液から採取した血漿を溶
媒または一対の溶媒／洗浄剤の添加により処理してウィ
ルスを不活性にする。４βの血漿を４つの容器に各々入
れた。ウィルスな弱毒化する有機溶媒を洗浄剤と一緒に
あるいは洗浄剤なしで添加しそして撹拌により分散した
。これらの例において、１の容器に２％のＴＮＢＰを入
れてそして３７℃で培養し、２番目の容器には１％のＴ
ＮＢＰ　（）ジ−ｎ−ブチルフォスフェート）及び１％
の”ＴＷＥＥＮ　１１０”を入れて３０℃で培養し、３
番目の容器には１％のＴＮＢＰ及び１％の”ＴＲＩＴＯ
Ｎ×４５”を入れそして３０℃で培養し、そして４番目
は対照試料であった。

４時間後、各々を２０％の”ＦＯＲＡＮＥ”で３０分間
抽出してそして上の水層を不安定凝結因子並びに残った
ＴＮＢＰ及び洗浄剤のレベルについて分析した。試験ウ
ィルス懸濁液の添加に続いてウィルスの死滅を別々の並
行実験で評化した。結果を下の第４表及び第５表に要約
する。

１土Ｉ ＶＳＶ　　　　　　　　　　　４．２　　　　　５．２
　　　　　　　５．２Ｓｉｎｄｂｉｓ　　ウィルス　　
　５．２　　　　　　　５．５　　　　　　　　　５．
５ＨＩＶ　　　　　　　　　　　３．６　　　　　３．
１”ＮＡＮＢＨＶ　　　　　　　　５．０ ＨＢＶ　　　　　　　　　　　６．０ 中は１５分後を表わす −は行なわなかったことを表わす １旦五 回復パーセント６ 第■因子　　　１０５　　　９９　　　　１０８第■因
子　　　　９５　　　９３　　　　　Ｌｏｔ第■因子　
　　　８１　　１０７　　　　　９２第■因子　　　　
８９　　１０１　　　　　８９第Ｘ因子　　　　９８　
　１０１　　　　　９７抗トロンビン　ＩＩＩ　　　　
　　　１００ＴＮＢＰ／洗浄剤　９／ｎａ　　１／＜１
００　　　１／＜１００（μｇ／ｍｌ） 傘は未処理との比較を表わす −は行なわなかったことを表わす ｎａは適用できないことを表わす 罠五■１ 血　　　　　ＡＨＦ　　を　むパか　ウ　ルス＼ゝ　　
に　いるＴＮＢＰ　　びゴＲＩＴＯＮ　ｘ４５”の人の
血漿から調製したＡＨＦ濃縮物を０．３％のＴＮＢＰ及
び１％の”ＴＲＩＴＯＮ　ｘ４５”で処理してウィルス
を不活性化した。処理に続き、溶液を室温で３０分間混
合しながら１０％（Ｗ／Ｖ）アルコールで１回抽出した
。水溶液中に存在する残ったＡＨＦ及び”ＴＲＩＴＯＮ
　ｘ４５”の量を測定し、そして抽出しない対照試料と
比べた。第６表及び第１図中にある結果は０．６％（Ｗ
／Ｖ）より小さい（または等しい）水に対する溶解度を
持つアルコールだけが”ＴＲＩＴＯＮ　Ｘ４５＠の優れ
た除去及びＡＨＦ凝血活性の優れた保持（〉６０％）を
もたらしたことを示す。

１互１ ｔｅｒｔ−７ミルアルコール　　　１２．５　　　　　
　　１　　　　　　　　９８１ミルアルコール　　　　
　　　　２．３　　　　　　１　　　　　　１００イソ
１ミル！ルコール　　　　　　　２．０　　　　　　　
１　　　　　　　１００ヘキサノール　　　　　　　　
　　　０．６　　　　　　６３　　　　　　　１００ヘ
プタノール　　　　　　　　　　　０．２　　　　　　
９８　　　　　　　　ｔｏ。

ｌ−オクタノール　　　　　　　　　０．０５　　　　
　９６　　　　　　　１００２−オクタノール　　　　
　　　　　０．０５　　　　　９３　　　　　　　１０
０１−ノナノール　　　　　　　　　＜０．０５　　　
　１００　　　　　　　１００１−デカノール　　　　
　　　　　＜０．０５　　　　１００　　　　　　　１
００ウンデカノール　　　　　　　　　＜０．０５　　
　　　９４　　　　　　　１００人の血漿から調製した
ＡＨＦ濃縮物を０．３％のＴＮＢＰと１％の”ＴＲＩＴ
ＯＮ　ｘ４５”かあるいは“ＴＷＥＥＮ　８０“かのい
ずれかとで処理してウィルスを不活性にした。処理に続
き、溶液を、室温で３０分間混合しながら５％（Ｗ／Ｖ
）のハロゲン化炭化水素で１回抽出した。水溶液中に存
在する残ったＡＨＦ、ＴＮＢＰ及び洗浄剤の量を測定し
、そして抽出しない対照試料と比較した。結果を第７表
に要約する。

１ユ１ １．２．２−）リフルオロ　　　　　　　９８　　　９
３　　　　　８　　　　　３トリクロロエタン ”ＦＯＲＡＮＥ”　　　　　　　　　　　１００　　　
９９　　　　９９　　　　８７Ｅｔｈｒａｎｅ　　　　
　　　　　　　　　１００　　　９９　　　　９９　　
　　　ｎａ’畠１パーフルオロデカリン　　　　　　　
　１０７　　　１４　　　　　０　　　　　０パーフル
オロへＮサン　　　　　　　　　９８　　　２７　　　
　　０　　　　　０パーフルオロトリブチルアミン　　
　　１１２　　　３１　　　　　０　　　　　３パ一フ
ルオロ環式エーテル　　　　　ｎａ　　　　ｎａ　　　
　　　Ｏｎａ（ａ）ｎａ：利用不可 人の全血を遠心分離して赤血球（ＲＢＣ）を含む下層を
燐酸緩衝生理食塩水で２度洗浄した。洗浄した血球を緩
衝生理食塩水中に希釈して最終濃度を３　Ｘ　１０’血
球／ｍＬにした。木簡性口内炎ウィルスを加え次いでメ
ロシアニン５４０を最終濃度４０μｇ／ｍＬにして加え
た。混合物を白色蛍光源に、およそ２．５　Ｘ　１０−
”Ｊ／ｓｅｃの強度で６０分間暴露した。反応の終りに
当たって、残ったウィルスの量を測定した。別に実施し
たサンプルを１０％の”ＦＯＲＡＮＥ”で抽出しそして
赤血球保持及びメロシアニン除去の度合を測定した。結
果を第８表に要約する。

１旦１ 初期ウィルス滴定量　　　　　　　　３．７最終ウィル
ス滴定量　　　　　　＜−０，５対照試料（光無し）３
．７ ウィルス死滅総量　　　　　　　　　　　　〉４．２前
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　３．０後　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　２．９保持％　　
　　　　　　　　９７％ 前　　　　　　　　　　　　　　　　　１．２２２後　
　　　　　　　　　　　　　　　　　０．２１５除去％
　　　　　　　　　　８３％ 叉」１１旦 単一供与体の寒冷沈降物１０単位を０．１Ｍ塩化ナトリ
ウム含有ｐ　Ｈ７，２の０．０２　ＭのトリスＨＣＩ中
に可溶化した。該１０単位をプールそして木簡性口内炎
ウィルス（ＶＳＶ）　、シンドビス（ｓｉｎｄｂｉｓ）
ウィルス、またはセンダイ（Ｓｅｎｄａｉ）ウィルスを
加えて殺ウイルス性作用をモニターした０部分標本を１
％ＴＮＢＰ及び１％”ＴＲＩＴＯＮ　Ｘ４５“で３０℃
にて６時間処理してウィルスを不活性化した。

反応に次いで、該プールを分割しそして１０％”ＦＯＲ
ＡＮＥ”かあるいは１０％”ＦＯＲＡＮＥ”及び５％ヘ
プタノールの混合物のいずれかで２回抽出した。抽出し
た寒冷沈降物を、減菌濾過しそして凍結乾燥して溶媒を
除去した。ウィルス死滅の度合及び残ったＴＮＢＰ％”
ＴＲＩＴＯＮ　ｘ４５”及びＡＨＦのレベルを測定した
。結果を第９表に示す。

１旦Ｉ Ａ、　ウィルス死滅　　　　　　　　　　　　Ｔ（：Ｉ
Ｄ５ｏ　（ｉｏｇ＋　ｏ）ＶＳＶ　　　５ｉｎｄｂｉｓ
　　　Ｓｅｎｄａｉ初期ウィルス滴定量　　４．０　　
　５．０　　　５．５最終ウィルス滴定量　＜−０，５
＜−０，５＜−０，５全ウィルス滴定量　　　　＞４．
５　　　　　＞５．５　　　　　＞６．ＯＢ、ＡＨＦ回
復及び試薬除去 ％　　　ＴＮＢＰ″ＴＲＩＴＯＮ　Ｘ−４５””ＦＯＲ
ＡＮＥ”　　　　　　９５　　９９．８８　　９６”Ｆ
ＯＲＡＮＥ”／ヘブクノール　　　　８０　　　　９９
．９９　　　　　＞９７血漿を、１０％”ＦＯＲＡＮＥ
”かあるいは１０％の２−オクタノールのいずれかで室
温にて３０分間抽出した。抽出終了に当たって、１２ｍ
Ｌ／分の流量をまだ許容する最小多孔度を求めるため、
血漿を、０．３〜０．７　ｋｇ／　ｃ＋ｏ″（５〜１０
ｐｓｉ）の窒素圧下で可変多孔度のパル（Ｐａｉｌ）４
７ａ＋ｗフィルターに通過させることを試みた。下の第
１Ｏ表に示した結果は、１０％”ＦＯＲＡＮＥ”かある
いは２−オクタノールのいずれかによる血漿の抽出が、
不安定蛋白活性をあまり損失せずに、血漿の濾過性を改
善することを示唆する。

１上旦Ｉ Ａ、濾過性 使用せず　　　　３ミクロン ”ＦＯＲＡＮＥ“　　　　＜０．４５ミクロン２−オク
タノール　　　　〈１．２ミクロンＢ、蛋白機能活性 ＡＨＦ　　　　　　９８　　　９５ 第■因子　　９９９９ 抗トロンビン　ＩＩＩ　　　１００　　　　　　１００
エンドトキシン６、４　ｎｇ／ｓｏ１を含むＡＨＦ濃縮
物を、機械的に振蕩しながら、１０％（ｖ／ｖ）の２−
オクタノールまたは”ＦＯＲＡＮＥ”で２４℃にて３０
分間抽出した。抽出物を遠心分離により分離した後１発
熱物質のレベルを、リムラス（Ｌｉｍｕｌｕｓ）変形細
胞溶解産物分析によりエンドトキシン０．０２５　ｎｇ
／■ｌの感度で求めた。これらの処理の結果を下の第１
１表に示す０発熱物質がない材料を抽出しそしてまた抽
出後に低レベルのエンドトキシンを加えた対照試料を含
めて、抽出それ自体が分析の信頼性に影響を及ぼさない
ことを示した。抽出後、もとのＡＨＦ活性の９０％より
多くが保持された。

抽出剤：　　　使用せず　２−オクタノール”ＦＯＲＡ
ＮＥ”エンドトキシン（ｎｇ／ｍｌ）　　　６．４　　
　　　　＜０．０２５　　　　　１．６除去％　　　　
　［０］　　　＞９９．６　　７５本発明を実施例によ
って説明してきたが、本発明はそれらに限定されず、本
発明の範囲を離れないで様々に改善しそして変え得ると
とががわかる。

４、　　　　の　　　ｔｔ　日 第１図は、本発明に従い、有機アルコールを用いるＡＨ
Ｆの保持及び”ＴＲＩＴＯＮ　Ｘ−４５”をプロットし
たグラフである。

Claims (20)

【特許請求の範囲】
1. （１）外因性または内因性の脂質可溶性化学薬品を、上
   記脂質可溶性化学薬品を含む生物学的材料から除去する
   方法であって、上記脂質可溶性化学薬品を含む上記生物
   学的材料を、使用温度における水溶液の溶解度が≦０．
   ６％の有効量の有機アルコール及び／またはハロゲンを
   一種より多く含む有効量のハロゲン化炭化水素に接触さ
   せ、得られた混合物を撹拌し、そして生物学的材料と有
   機アルコール及び／またはハロゲン化炭化水素との層分
   離を達成することを含む上記方法。
2. （２）ハロゲン化炭化水素が、また、エーテル結合を含
   む請求項１に記載の方法。
3. （３）内因性の脂質可溶性化学薬品が発熱物質である請
   求項１に記載の方法。
4. （４）有機アルコール及び／またはハロゲン化炭化水素
   を生物学的材料から沈降または遠心分離によって分離す
   る請求項１に記載の方法。
5. （５）有機アルコールを、ヘキサノール、ヘプタノール
   、１−オクタノール、２−オクタノール、１−ノナノー
   ル、１−デカノール及びウンデカノールからなる群から
   選ぶ請求項１に記載の方法。
6. （６）ハロゲン化炭化水素がフッ素、塩素及びエーテル
   を含む請求項２に記載の方法。
7. （７）ハロゲン化炭化水素を、イソフルオラン、１，２
   ，２−トリフルオロトリクロロエタン及び２−クロロ−
   １，１，２−トリフルオロエチルジフルオロメチルエー
   テルからなる群から選ぶ請求項１に記載の方法。
8. （８）生物学的材料を、全血血漿、血清、寒冷除去血漿
   または寒冷沈降物からなる群から選ぶ請求項１に記載の
   方法。
9. （９）生物学的材料が細胞である請求項１に記載の方法
   。
10. （１０）細胞が赤血球であり且つ外因性化学薬品がメロ
    シアニンである請求項９に記載の方法。
11. （１１）生物学的材料を、血漿、血清、寒冷沈降物、寒
    冷除去漿液、分屑 I 、分屑II、分屑III、分屑IV−１、
    分屑IV−４、分屑Ｖ、分屑VI、フィブロネクチン、抗血
    友病因子、プレアルブミン、レチノール結合蛋白、アル
    ブミン、α−グロブリン、β−グロブリン、γ−グロブ
    リン、抗トロンビンIII、プロトロンビン、プラスミノ
    ゲン、フィブリノゲン、第ＸIII因子、免疫グロブリン
    Ｇ、免疫グロブリンＭ、免疫グロブリンＤ及び免疫グロ
    ブリンＥ、プラスミン抑制因子、トロンビン、抗トロン
    ビン、第Ｖ因子、第VII因子、第VIII因子、第IX因子、
    第Ｘ因子、正常細胞、癌細胞、培養成長した癌細胞から
    の浸出液、培養成長した正常細胞からの浸出液、ハイブ
    リドーマからの細胞、遺伝子分裂製品、植物細胞濃縮物
    、植物細胞懸濁物、動物組織エキス、植物組織エキス、
    並びに微生物からなる群から選ぶ請求項１に記載の方法
    。
12. （１２）血漿、血清、寒冷沈降物及び寒冷除去血漿から
    なる群から選ぶ蛋白含有血液製品であって、ウィルス感
    染されそして上記ウィルスに対してウィルス不活性化の
    度合が常用対数で６よりも大きくなるように処理されお
    り、特定の生物学的活性血液蛋白に関する機能活性を少
    なくとも４５％保持しそして脂質可溶性プロセス化学薬
    品を生理学的に許容し得るレベル以下で有する上記血液
    製品。
13. （１３）特定の生物学的活性血液蛋白に関する機能活性
    を少なくとも７５％保持する請求項１２に記載の血液製
    品。
14. （１４）特定の生物学的活性血液蛋白に関する機能活性
    を少なくとも８５％の活性度で保持する請求項１２に記
    載の血液製品。
15. （１５）特定の生物学的活性血液蛋白に関する機能活性
    を少なくとも９５％保持する請求項１２に記載の血液製
    品。
16. （１６）特定の生物学的活性血液蛋白に関する機能活性
    を９８〜１００％保持する請求項１２に記載の血液製品
    。
17. （１７）血液細胞、癌細胞、非血液非癌細胞及びハイブ
    リドーマ細胞からなる群から選ぶ細胞を含む細胞含有組
    成物であって、ウィルス感染されそして上記ウィルスに
    対してウィルス不活性化の度合が常用対数で６よりも大
    きくなるように処理されており、脂質可溶プロセス化学
    薬品を生理学的に許容し得るレベル以下で有し且つ実質
    的な量の細胞性構造を保持することを含む上記組成物。
18. （１８）血液細胞を、赤血球、血小板及び白血球からな
    る群から選ぶ請求項１７に記載の組成物。
19. （１９）生物学的材料を、使用温度における水溶液の溶
    解度が≦０．６％の有効量の有機アルコール及び／また
    はハロゲンを一種より多く含む有効量のハロゲン化炭化
    水素に接触させ、得られた混合物を撹拌し、そして生物
    学的材料と有機アルコール及び／またはハロゲン化炭化
    水素との層分離を達成することを含む上記生物学的材料
    の濾過性を改善する方法。
20. （２０）生物学的材料を、全血血漿、血清、寒冷除去血
    漿または寒冷沈降物、ウィルス減菌全血血漿、ウィルス
    減菌血清、ウィルス減菌寒冷除去血漿及びウィルス減菌
    寒冷沈降物からなる群から選ぶ請求項１９に記載の方法
    。