JPH01294697A - 凝固因子２，７，９及び１０の濃厚物、その調製方法及び用途 - Google Patents
凝固因子２，７，９及び１０の濃厚物、その調製方法及び用途Info
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、ヒト又は動物の血漿或いはその分画からのい
わゆる「プロトロンビン複合体」と称される凝固因子、
すなわちビタミンＫに依存する因子ＩＩ、ＶＩＩ、ＩＸ
及びＸと称される一群の凝固因子の濃厚物ならびにその
調製方法及び用途に関するものである。
わゆる「プロトロンビン複合体」と称される凝固因子、
すなわちビタミンＫに依存する因子ＩＩ、ＶＩＩ、ＩＸ
及びＸと称される一群の凝固因子の濃厚物ならびにその
調製方法及び用途に関するものである。
多少の差こそあれ純粋な濃厚物状態にあるこれらの凝固
因子は、血液凝固障害の臨床診療及び実験室内診断のた
めの非経口的調製物の調製のための重要な物質であり、
又成る種の疾患のマーカーとしても役立ち得る。これら
の調製物は、先天的又は後天的な血液凝固欠損症をもつ
患者、急性出血、羊術前の出血予防、肝臓実質の損傷、
ビタミンに欠乏錠患者の場合に使用されるものである。
因子は、血液凝固障害の臨床診療及び実験室内診断のた
めの非経口的調製物の調製のための重要な物質であり、
又成る種の疾患のマーカーとしても役立ち得る。これら
の調製物は、先天的又は後天的な血液凝固欠損症をもつ
患者、急性出血、羊術前の出血予防、肝臓実質の損傷、
ビタミンに欠乏錠患者の場合に使用されるものである。
多Ｉ！類マトリ、クスに基づく吸着剤（例えばジエチル
アミノエチル−またはＤＥＡＲ化物）を用いたこれらの
凝固因子濃厚物の既存の調製方法には、次のようない（
つかの欠点がある。すなわち、多糖類マトリ、クスは細
菌汚染の可能性がきわめて高いものであり、これは吸着
剤の物理的および化学的特性に変化をもたらす原因とな
る。又、多￥１［粒子は、温度、圧力、塩分濃度といっ
た環境条件の変化に対し比較的弱く、そのため吸着剤の
体積が変化し、それに伴って望ましくないあらゆる影響
が出て（る、さらに、一方はヒドロキシアルキル／メタ
クリル酸エステル吸着剤、他方は多ＩＩ類イオン交換体
のさまざまなマトリ、クスのため、これらの物質につい
てのクロマトグラフィー分離の間の凝固因子（すなわち
、因子ＩＩ、ＶＩＩ、ＩＸ及びＸ）の挙動は、成る程度
異なっている。
アミノエチル−またはＤＥＡＲ化物）を用いたこれらの
凝固因子濃厚物の既存の調製方法には、次のようない（
つかの欠点がある。すなわち、多糖類マトリ、クスは細
菌汚染の可能性がきわめて高いものであり、これは吸着
剤の物理的および化学的特性に変化をもたらす原因とな
る。又、多￥１［粒子は、温度、圧力、塩分濃度といっ
た環境条件の変化に対し比較的弱く、そのため吸着剤の
体積が変化し、それに伴って望ましくないあらゆる影響
が出て（る、さらに、一方はヒドロキシアルキル／メタ
クリル酸エステル吸着剤、他方は多ＩＩ類イオン交換体
のさまざまなマトリ、クスのため、これらの物質につい
てのクロマトグラフィー分離の間の凝固因子（すなわち
、因子ＩＩ、ＶＩＩ、ＩＸ及びＸ）の挙動は、成る程度
異なっている。
本発明に基づく方法において用いられている既存の市販
調製物であるＤＥＡＥ−ヒドロキシエチル−メタクリル
酸エステル又はＤＥＡＲ−ヒドロキシエチルアクリル酸
エステルの粒子（例えば５ｅｐａｒｏｎＨＥ？ＩＡＤＢ
ＡＥ、 Ｔｅ５ｓｅｋ、 Ｐｒａｑｕｅ）の合成マトリ
、クスに基づ（吸着剤は、多Ｗ類吸着剤のもつ前述の欠
点を有していない。この合成マトリアクスは細菌汚染に
対して強く物理的及び化学的条件の変化により変質しな
い、これらの吸着剤は非常に安定しており、吸着特性の
変化なく長い間使用できる。成る種の場合には、自己賦
活化を阻止するため蛋白質分解酵素阻害剤（ベンズアミ
ジン）を付加してもよい０分離は、クロマトグラフカラ
ム装置を用いて行なってもよいし又バッチ方法を用いて
行なうこともできる。吸着剤粒度の選択は、分離法によ
って左右される。これらの吸着剤の有利な物理的及び化
学的特性は、目的とする生成物へ血漿画分が複合する可
能性を改善する。高圧に対する吸着剤の耐性のため、こ
の方法の個々の段階を精確に再現する可能性を有するの
で迅速かつ標準的な作業サイクル化を可能にし、分離プ
ロセスの自動化が確実となる。担体の性質から、加圧下
で液体を流すことができ、技術的操作の時間を限定し、
その行程を改善することができる。凝固因子は、多少の
差のある純化された濃厚物として調製されている場合に
は、安定化の後、低温殺菌してウィルスの不活性化をひ
きおこすことも可能である。
調製物であるＤＥＡＥ−ヒドロキシエチル−メタクリル
酸エステル又はＤＥＡＲ−ヒドロキシエチルアクリル酸
エステルの粒子（例えば５ｅｐａｒｏｎＨＥ？ＩＡＤＢ
ＡＥ、 Ｔｅ５ｓｅｋ、 Ｐｒａｑｕｅ）の合成マトリ
、クスに基づ（吸着剤は、多Ｗ類吸着剤のもつ前述の欠
点を有していない。この合成マトリアクスは細菌汚染に
対して強く物理的及び化学的条件の変化により変質しな
い、これらの吸着剤は非常に安定しており、吸着特性の
変化なく長い間使用できる。成る種の場合には、自己賦
活化を阻止するため蛋白質分解酵素阻害剤（ベンズアミ
ジン）を付加してもよい０分離は、クロマトグラフカラ
ム装置を用いて行なってもよいし又バッチ方法を用いて
行なうこともできる。吸着剤粒度の選択は、分離法によ
って左右される。これらの吸着剤の有利な物理的及び化
学的特性は、目的とする生成物へ血漿画分が複合する可
能性を改善する。高圧に対する吸着剤の耐性のため、こ
の方法の個々の段階を精確に再現する可能性を有するの
で迅速かつ標準的な作業サイクル化を可能にし、分離プ
ロセスの自動化が確実となる。担体の性質から、加圧下
で液体を流すことができ、技術的操作の時間を限定し、
その行程を改善することができる。凝固因子は、多少の
差のある純化された濃厚物として調製されている場合に
は、安定化の後、低温殺菌してウィルスの不活性化をひ
きおこすことも可能である。
本発明に従って調製された凝固因子■及びＸの濃厚物が
ヒト及び動物の炎症性疾患の検出及び診断のために用い
られうるという驚くべき観察がなされた０機能的に純粋
である凝固因子■、■及びＸは診断において広く用いら
れる。因子■及びＸの濃厚物は、因子■及び血漿や体液
中のその他の因子の定量的測定を改善するために用いる
ことができる０分離された因子の同等性検査は、機能的
すなわち凝固性、酵素及び免疫化学試験を用いて行なう
ことができる。
ヒト及び動物の炎症性疾患の検出及び診断のために用い
られうるという驚くべき観察がなされた０機能的に純粋
である凝固因子■、■及びＸは診断において広く用いら
れる。因子■及びＸの濃厚物は、因子■及び血漿や体液
中のその他の因子の定量的測定を改善するために用いる
ことができる０分離された因子の同等性検査は、機能的
すなわち凝固性、酵素及び免疫化学試験を用いて行なう
ことができる。
出願人は、因子■、■、■及びＸを含む生物学的物質を
ＤＥＡＥ−ヒドロキシエチル／メタクリル酸エステル重
合体のイオン交換体を主体とする吸着剤と接触させ、こ
れらを生理的食塩水濃度が０．３〜２．０モル／リット
ルで、かつ、ｐＨが７．２〜７．６の緩衝液で脱着させ
ることにより調製されるこれらの凝固因子の濃厚物の発
明について特許請求を行なう者である。
ＤＥＡＥ−ヒドロキシエチル／メタクリル酸エステル重
合体のイオン交換体を主体とする吸着剤と接触させ、こ
れらを生理的食塩水濃度が０．３〜２．０モル／リット
ルで、かつ、ｐＨが７．２〜７．６の緩衝液で脱着させ
ることにより調製されるこれらの凝固因子の濃厚物の発
明について特許請求を行なう者である。
ヒト又は動物の血漿又はその分画に由来するこれらの凝
固因子の濃厚物は、０．１モル／リットルの生理的食塩
水を含むｐＨ７，２〜７．６の緩衝液で平衡化されたＤ
ＢＡＥ−ヒドロキシエチル／メタクリル酸エステル重合
体担体吸着剤と出発原材料を接触させることにより調製
される。凝固因子の吸着の後、吸着されなかった蛋白質
は０．２モル／リットルの生理的食塩水を含む同じ緩衝
液で洗い流され、次に因子ＩＩ、ＶＩＩ、ＩＸ及びＸの
たん白質分画（機能的に純粋なもの又は混合物）の脱着
が行なわれる。
固因子の濃厚物は、０．１モル／リットルの生理的食塩
水を含むｐＨ７，２〜７．６の緩衝液で平衡化されたＤ
ＢＡＥ−ヒドロキシエチル／メタクリル酸エステル重合
体担体吸着剤と出発原材料を接触させることにより調製
される。凝固因子の吸着の後、吸着されなかった蛋白質
は０．２モル／リットルの生理的食塩水を含む同じ緩衝
液で洗い流され、次に因子ＩＩ、ＶＩＩ、ＩＸ及びＸの
たん白質分画（機能的に純粋なもの又は混合物）の脱着
が行なわれる。
この脱着は、初発緩衝液中の生理的食塩水グラジェント
を用いて達成される。生理的食塩水として０．０１モル
／リットルのクエン酸三ナトリウム及び塩化ナトリウム
を含むクエン酸緩衝液を、９Ｈ７，２〜７．６の緩衝液
として用いると有利である。
を用いて達成される。生理的食塩水として０．０１モル
／リットルのクエン酸三ナトリウム及び塩化ナトリウム
を含むクエン酸緩衝液を、９Ｈ７，２〜７．６の緩衝液
として用いると有利である。
凝固因子ＩＸの濃厚物を得るためには、脱着は、０．３
〜０．４モル／リットルの生理的食塩水を含む上述の緩
衝液を用いる溶離により行なわれ、凝固因子■＋Ｘの濃
厚物は０．４５〜０．５５モル／リットルの生理的食塩
水を含む緩衝液を用いる溶離により得られ、凝固因子Ｖ
ＩＩの濃厚物は０．７〜０．８モル／リットルの生理的
食塩水を含む緩衝液で溶離される。
〜０．４モル／リットルの生理的食塩水を含む上述の緩
衝液を用いる溶離により行なわれ、凝固因子■＋Ｘの濃
厚物は０．４５〜０．５５モル／リットルの生理的食塩
水を含む緩衝液を用いる溶離により得られ、凝固因子Ｖ
ＩＩの濃厚物は０．７〜０．８モル／リットルの生理的
食塩水を含む緩衝液で溶離される。
ホ乳動物の器官内で起こる炎症のプロセスには血管壁の
透過性の増大が生じ、これには生物学的に活性なペプチ
ドすなわちカイニンが関与するということが知られてい
る。血管壁の透過性の増大に関連して、体液中には血球
成分及び血液蛋白質成分の両方が現われる。これを主成
分として、例えば環内の蛋白質及び白血球の検出、乳汁
中のアルブミン、α１−抗トリプシンおよびいわゆる体
細胞の検出といった尿生殖器の及び乳腺の炎症のいくつ
かの間接的検出方法が確立されている。これらの方法は
、感度及び実験室内法の点からみていくつかの限界をも
つ、炎症性疾患の早期診断の重要性は、広く受は入れら
れた事実である。畜生において起こる乳腺炎（乳汁線の
炎症）は、大量かつ高品質の牛乳を恒常的に生産するこ
とに対する重大な障壁である。動物における疾病の確認
が遅れれば遅れるほど、必要な治療はむずかしく、長く
、かつ、費用のかかるものとなる。はとんどの場合集中
的な酪農条件の下での乳腺炎の発生を早期に、特定的に
かつできるかぎり簡単かつ高感度で検出し得ることは、
きわめて重要なことである。乳汁中の高濃度血漿蛋白質
は、又、出産の間及び産後の生理学的条件（出産後２０
日まで）の下で現われる。この期間に関与しない時間に
おいて乳生成器官内で血管壁の不安定化が現われた場合
、それはつねに病的プロセスの兆候である。量的には蛋
白質浸透率は乳腺炎の程度と正比例し、質的視点からみ
ると、分子量の低い蛋白質はより容易に浸透する。牛乳
中の血清アルブミン又はαｌ抗トリプシンの測定に基づ
く乳腺炎の検出が公表されている（Ｓａｎｄ−ｈｏｌｗ
ｉ Ｍその他、Ｊ、Ｄａｉｒｙ Ｒｅｓ。
透過性の増大が生じ、これには生物学的に活性なペプチ
ドすなわちカイニンが関与するということが知られてい
る。血管壁の透過性の増大に関連して、体液中には血球
成分及び血液蛋白質成分の両方が現われる。これを主成
分として、例えば環内の蛋白質及び白血球の検出、乳汁
中のアルブミン、α１−抗トリプシンおよびいわゆる体
細胞の検出といった尿生殖器の及び乳腺の炎症のいくつ
かの間接的検出方法が確立されている。これらの方法は
、感度及び実験室内法の点からみていくつかの限界をも
つ、炎症性疾患の早期診断の重要性は、広く受は入れら
れた事実である。畜生において起こる乳腺炎（乳汁線の
炎症）は、大量かつ高品質の牛乳を恒常的に生産するこ
とに対する重大な障壁である。動物における疾病の確認
が遅れれば遅れるほど、必要な治療はむずかしく、長く
、かつ、費用のかかるものとなる。はとんどの場合集中
的な酪農条件の下での乳腺炎の発生を早期に、特定的に
かつできるかぎり簡単かつ高感度で検出し得ることは、
きわめて重要なことである。乳汁中の高濃度血漿蛋白質
は、又、出産の間及び産後の生理学的条件（出産後２０
日まで）の下で現われる。この期間に関与しない時間に
おいて乳生成器官内で血管壁の不安定化が現われた場合
、それはつねに病的プロセスの兆候である。量的には蛋
白質浸透率は乳腺炎の程度と正比例し、質的視点からみ
ると、分子量の低い蛋白質はより容易に浸透する。牛乳
中の血清アルブミン又はαｌ抗トリプシンの測定に基づ
く乳腺炎の検出が公表されている（Ｓａｎｄ−ｈｏｌｗ
ｉ Ｍその他、Ｊ、Ｄａｉｒｙ Ｒｅｓ。
１９８４年、５１．１〜９ページ）。アルブミンは、色
素原試験による検出がむずかしく、α１−抗トリプシン
は色素原基質及びトリプシンを用いて検出できるが、こ
のプロセスにはいくつかの方法論上の問題点がある。
素原試験による検出がむずかしく、α１−抗トリプシン
は色素原基質及びトリプシンを用いて検出できるが、こ
のプロセスにはいくつかの方法論上の問題点がある。
本発明者らは、血漿プロ凝固剤（即ち■）が尿及び乳汁
内で腎臓及び乳腺の炎症過程のきわめて早期に現われる
ことを実証し、この観察に基づいてそれぞれの体液を予
じめ処理する必要なく、ホ乳動物の器官の炎症の検出な
らびにその程度の決定を行なうのに役立つ方法の開発に
成功した。この方法は一般に、診断用洗液を含む体液が
、病める器官と接触する全ての場合において用いること
のできるものである０本発明は又、ヒトの尿及び動物、
特にウシの乳汁中の体液分析の方法を用いた炎症性疾患
の検出又はその程度の決定方法にも関する。この方法は
、単一の段階又は２段階にてトロンボプラスチン、リン
脂質及びＣａ”＋イオンを含む溶液ならびに凝固因子■
及びＸの濃厚物を含むその他の溶液と調査中の体液試料
を接触させ、遊離されたトロンビンをその後、色素原基
質を用いて検出し、必要に応じて、例えば標準との比較
により又は分光測光といった機器分析を用いることによ
り、得られる着色の強さが定量的に測定されるという原
理に基づいている。
内で腎臓及び乳腺の炎症過程のきわめて早期に現われる
ことを実証し、この観察に基づいてそれぞれの体液を予
じめ処理する必要なく、ホ乳動物の器官の炎症の検出な
らびにその程度の決定を行なうのに役立つ方法の開発に
成功した。この方法は一般に、診断用洗液を含む体液が
、病める器官と接触する全ての場合において用いること
のできるものである０本発明は又、ヒトの尿及び動物、
特にウシの乳汁中の体液分析の方法を用いた炎症性疾患
の検出又はその程度の決定方法にも関する。この方法は
、単一の段階又は２段階にてトロンボプラスチン、リン
脂質及びＣａ”＋イオンを含む溶液ならびに凝固因子■
及びＸの濃厚物を含むその他の溶液と調査中の体液試料
を接触させ、遊離されたトロンビンをその後、色素原基
質を用いて検出し、必要に応じて、例えば標準との比較
により又は分光測光といった機器分析を用いることによ
り、得られる着色の強さが定量的に測定されるという原
理に基づいている。
本発明の発端は、血漿プロ凝結剤、すなわち凝固因子■
が器官の炎症の間に血流から体液すなわち尿、乳汁その
他の中に浸透する最初の血漿蛋白質の１つであるという
ことを当該発明者が発見したことにある０体液中のこの
プロ凝結剤の濃度は進行中の炎症の強さ及びサイズに正
比例する。因子■は組織トロンボプラスチン、Ｃａ”＋
イオン及びリン脂質と共に血液凝固活性化の次のような
いわゆる外因性経路を開始させる。
が器官の炎症の間に血流から体液すなわち尿、乳汁その
他の中に浸透する最初の血漿蛋白質の１つであるという
ことを当該発明者が発見したことにある０体液中のこの
プロ凝結剤の濃度は進行中の炎症の強さ及びサイズに正
比例する。因子■は組織トロンボプラスチン、Ｃａ”＋
イオン及びリン脂質と共に血液凝固活性化の次のような
いわゆる外因性経路を開始させる。
なお、■ａ％Ｘａ及びｎａはプロ酵素の活性型である。
因子■は、組織トロンボプラスチン、Ｃａ”＋及びリン
脂質を含む試薬（試薬１）の作用により因子■ａへと活
性化される。乳汁の中では、明らかにこの活性化にはそ
れ自体の成分すなわちＣａ”及びリン脂質も又関与して
いる。因子■及びＸの濃厚物を含む試薬（試薬２）を（
−度に又は段階的に）付加した後、因子Ｘは徐々に活性
化され因子Ｘａとなる「試薬２」の中にも又、器官の脈
管壁のシステムの均衡がくずされた対象物の体液の中に
も部分的に存在する補助因子（因子■）と共に、これは
因子■を因子１１ａ（トロンビン）すなわち蛋白質分解
酵素に変え、この蛋白質分解酵素は一定の条件下で適当
なペプチド色素原基質を開裂する、その開裂生成物は表
現度のある特徴的な着色を有し、これに基づいて感覚的
検出ならびに利用し得る装置を用いて定量的な測定も実
施することができるニ トロンビン＋Ｚ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｘ →Ｚ−
Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＯＲ＋ｐ−ニトロアニリンま
たは、 （Ａ）上式中、Ｘは、
例えば４−ジメチルアミノベンズアルデヒド（Ｂ）又は
４−ジメチルアミノシンナミックアルデヒドといった発
色団アルデヒドとアゾメチン結合により結合されたｐ−
フェニレンジアミンのＮ、Ｎ’−ビス誘導体又はｐ−ニ
トロアニリン（Ａ）の残基であり、Ｚはベンジルオキシ
カルボニル基である。
脂質を含む試薬（試薬１）の作用により因子■ａへと活
性化される。乳汁の中では、明らかにこの活性化にはそ
れ自体の成分すなわちＣａ”及びリン脂質も又関与して
いる。因子■及びＸの濃厚物を含む試薬（試薬２）を（
−度に又は段階的に）付加した後、因子Ｘは徐々に活性
化され因子Ｘａとなる「試薬２」の中にも又、器官の脈
管壁のシステムの均衡がくずされた対象物の体液の中に
も部分的に存在する補助因子（因子■）と共に、これは
因子■を因子１１ａ（トロンビン）すなわち蛋白質分解
酵素に変え、この蛋白質分解酵素は一定の条件下で適当
なペプチド色素原基質を開裂する、その開裂生成物は表
現度のある特徴的な着色を有し、これに基づいて感覚的
検出ならびに利用し得る装置を用いて定量的な測定も実
施することができるニ トロンビン＋Ｚ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｘ →Ｚ−
Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＯＲ＋ｐ−ニトロアニリンま
たは、 （Ａ）上式中、Ｘは、
例えば４−ジメチルアミノベンズアルデヒド（Ｂ）又は
４−ジメチルアミノシンナミックアルデヒドといった発
色団アルデヒドとアゾメチン結合により結合されたｐ−
フェニレンジアミンのＮ、Ｎ’−ビス誘導体又はｐ−ニ
トロアニリン（Ａ）の残基であり、Ｚはベンジルオキシ
カルボニル基である。
因子■及びＸの濃厚物を用いることにより、本発明に基
づく方法はきわめて感度の高いものとなっている。測定
のために用いられた機器から得られるか、又は着色標準
との比較により得られた値はその疾患の程度についての
情報を与えており、因子ＶＩＩのレベルは健康体の体液
において最低であり、器官に炎症をおこしている被験体
において高いということができる。量的な観点から言う
と、因子−のレベルは患者の臨床状態とよい相関性があ
り、この試験の感度が高いことから疾病の亜臨床的（無
症状の）状態もこの方法によって検出することができる
。因子■及びＸの濃厚物の代りに因子Ｘａのために合成
物及び因子Ｘの濃厚物を用いるという変法も可能である
が、この態様の感度がプロトｂンビン／トロンビンの変
換を介する因子ＶＩＩの決定感度に達することはない、
自動分析計といった必要な計装が使用できる状態にある
場合、大量の試料セットにおいて分光測光による定量的
測定を行なえる可能性がある０例えば、診断用ストリッ
プといった診断装置を用いる第２の変法は、実験室の（
計装上の）手段及び作業員の資格について多大な要求を
伴ない迅速な半定量的試験に適している。
づく方法はきわめて感度の高いものとなっている。測定
のために用いられた機器から得られるか、又は着色標準
との比較により得られた値はその疾患の程度についての
情報を与えており、因子ＶＩＩのレベルは健康体の体液
において最低であり、器官に炎症をおこしている被験体
において高いということができる。量的な観点から言う
と、因子−のレベルは患者の臨床状態とよい相関性があ
り、この試験の感度が高いことから疾病の亜臨床的（無
症状の）状態もこの方法によって検出することができる
。因子■及びＸの濃厚物の代りに因子Ｘａのために合成
物及び因子Ｘの濃厚物を用いるという変法も可能である
が、この態様の感度がプロトｂンビン／トロンビンの変
換を介する因子ＶＩＩの決定感度に達することはない、
自動分析計といった必要な計装が使用できる状態にある
場合、大量の試料セットにおいて分光測光による定量的
測定を行なえる可能性がある０例えば、診断用ストリッ
プといった診断装置を用いる第２の変法は、実験室の（
計装上の）手段及び作業員の資格について多大な要求を
伴ない迅速な半定量的試験に適している。
本発明に基づく方法の実施のための適当な色素原基質と
しては、式Ｚ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｘ （なお、
残基Ｘ及びＺは前述のとおりである）で示されるペプチ
ド誘導体を用いることができる０発色団（Ｘ）は、測定
方法又使用する計装方法に従って選定されるか、或いは
検出が溶液中で行なわれるか、又は実験室で用いられる
ことが一般に知られている不活性な有機又は無機物質に
基づいて適当な診断装置（乾式化学）を用いて行なわれ
る場合にはその態様に従って選定される。
しては、式Ｚ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｘ （なお、
残基Ｘ及びＺは前述のとおりである）で示されるペプチ
ド誘導体を用いることができる０発色団（Ｘ）は、測定
方法又使用する計装方法に従って選定されるか、或いは
検出が溶液中で行なわれるか、又は実験室で用いられる
ことが一般に知られている不活性な有機又は無機物質に
基づいて適当な診断装置（乾式化学）を用いて行なわれ
る場合にはその態様に従って選定される。
当然適切な品質を有する場合にかぎってではあるが、そ
の他の種類の基質を使用することも可能である。
の他の種類の基質を使用することも可能である。
本発明に基づ（方法はきわめて感度が高く特異性を有し
、例えば乳腺炎のような疾病は、臨床的症状が始まる前
にその助けを得て診断を下すことが可能である。従って
、予防的処置をより早く始めることができ、又疾病の持
続期間は短かくなり、そのため迅速な回復の可能性もＪ
り高くなる。このようにして多大な経済的損失に先手を
打つことができる。本発明の対象である試験を行なう最
も簡単で実際的な方法は、乳汁の試料をクエン酸ナトリ
ウム（３，８％、１＋９）内に入れ、必要な装置をもつ
実験室に運び込んだ後、直ちに分析するというものであ
る。試料を一１０°Ｃ以下に凍結し、一定数の試料がた
まった時点で解凍してこれらを合わせて分析することも
できる。乳汁については、また、試料採取のために吸収
性物質（祇）を用い、その試料を乾燥させて、そして溶
離してから後にそれを分析することも適切である。この
最後に記した試料調製方法は、遠隔の場所からでも中央
の研究所に試料を容易に搬入することを可能にする。
、例えば乳腺炎のような疾病は、臨床的症状が始まる前
にその助けを得て診断を下すことが可能である。従って
、予防的処置をより早く始めることができ、又疾病の持
続期間は短かくなり、そのため迅速な回復の可能性もＪ
り高くなる。このようにして多大な経済的損失に先手を
打つことができる。本発明の対象である試験を行なう最
も簡単で実際的な方法は、乳汁の試料をクエン酸ナトリ
ウム（３，８％、１＋９）内に入れ、必要な装置をもつ
実験室に運び込んだ後、直ちに分析するというものであ
る。試料を一１０°Ｃ以下に凍結し、一定数の試料がた
まった時点で解凍してこれらを合わせて分析することも
できる。乳汁については、また、試料採取のために吸収
性物質（祇）を用い、その試料を乾燥させて、そして溶
離してから後にそれを分析することも適切である。この
最後に記した試料調製方法は、遠隔の場所からでも中央
の研究所に試料を容易に搬入することを可能にする。
次に、この試料を一定の時間抽出し、同時に「試薬１」
を用いて活性化し、その後の手順は天然の乳汁分析によ
る場合と同じである。この方法を用いることにより、カ
ゼイン、脂質成分及び細胞質成分は吸収材上にとどまり
、因子■を含む溶離剤は澄んだ液体となる。
を用いて活性化し、その後の手順は天然の乳汁分析によ
る場合と同じである。この方法を用いることにより、カ
ゼイン、脂質成分及び細胞質成分は吸収材上にとどまり
、因子■を含む溶離剤は澄んだ液体となる。
以下に、実施例を用いて本発明をさらに具体的に説明す
る。これらの例は本発明を例示するもののその用途を制
限するものではない。
る。これらの例は本発明を例示するもののその用途を制
限するものではない。
■土
゛ ■ ■ ■ びＸの゛ −の１凝固因子提供
源として、ｐ）ｌが７．２〜７．６に調整されている正
常なヒト血漿（天然新鮮血漿）又はいわゆるに−血漿（
氷点沈殿物の無い血漿）を用いた。
源として、ｐ）ｌが７．２〜７．６に調整されている正
常なヒト血漿（天然新鮮血漿）又はいわゆるに−血漿（
氷点沈殿物の無い血漿）を用いた。
１０００ａｅ（７）血漿を、ｐ）１７．４（７）初発緩
衝液（０，１−Ｔニル／リットルの塩化ナトリウムを含
む０．０１モモルフリットルのクエン酸三ナトリウム）
により平衡化されたカラム内の叶＾Ｅ−ヒドロキシエチ
ルメタクリル酸エステルゲル（１００〜１５０ｄ）と接
触させた。
衝液（０，１−Ｔニル／リットルの塩化ナトリウムを含
む０．０１モモルフリットルのクエン酸三ナトリウム）
により平衡化されたカラム内の叶＾Ｅ−ヒドロキシエチ
ルメタクリル酸エステルゲル（１００〜１５０ｄ）と接
触させた。
吸着剤の粒度は８０ＪＨａから１００．ｎｅである。凝
固因子を吸着させた後、０．２モル／リットルの塩化ナ
トリウムを含む初発ａｍ液で洗浄することにより弱く結
合した蛋白質は除去された。洗浄後もイオン交換体上に
結合された状態にとどまっているその他の全ての蛋白質
の脱着は、初発緩衝液内の生理的食塩水の濃度の増大（
２，０モル／リットルまで）することにより行なわれた
。得られた溶離液中には、因子■、■、ＩＸ、Ｘ及び蛋
白質Ｃという「プロトロンビン複合体」の全ての因子が
局在化していた０分画を、次に補充療法に通した溶液に
加工した０粒度８０〜１１００Ｊ１で１．２〜１．３
ｍｖａｌ／ ｇのＤＥＡＥＩを含む吸着剤を用いること
により、上述の手順で正常なヒト血漿から前記「プロト
ロンビン複合体」成分含有量の６０〜９０％を分離させ
ることができる。これらの蛋白質は、得られた濃厚物の
主な蛋白質成分を示した。
固因子を吸着させた後、０．２モル／リットルの塩化ナ
トリウムを含む初発ａｍ液で洗浄することにより弱く結
合した蛋白質は除去された。洗浄後もイオン交換体上に
結合された状態にとどまっているその他の全ての蛋白質
の脱着は、初発緩衝液内の生理的食塩水の濃度の増大（
２，０モル／リットルまで）することにより行なわれた
。得られた溶離液中には、因子■、■、ＩＸ、Ｘ及び蛋
白質Ｃという「プロトロンビン複合体」の全ての因子が
局在化していた０分画を、次に補充療法に通した溶液に
加工した０粒度８０〜１１００Ｊ１で１．２〜１．３
ｍｖａｌ／ ｇのＤＥＡＥＩを含む吸着剤を用いること
により、上述の手順で正常なヒト血漿から前記「プロト
ロンビン複合体」成分含有量の６０〜９０％を分離させ
ることができる。これらの蛋白質は、得られた濃厚物の
主な蛋白質成分を示した。
吸着剤の再生は２．０モル／リットルの塩化ナトリウム
を含むクエン酸塩緩衝液を洗浄した後、蒸留水、次いで
初発緩衝液で洗浄し、次のイオン交換に用いた。
を含むクエン酸塩緩衝液を洗浄した後、蒸留水、次いで
初発緩衝液で洗浄し、次のイオン交換に用いた。
例１と同じ条件の下でＤＥＡＲ−ヒドロキシエチルメタ
クリル酸エステルのカラム内に１０００ｄのヒト血漿を
通過させた。０．２モル／リットルの生理的食塩水を含
むｐＨ７，４のクエン酸塩緩衝液によるバラストたん白
質の除去の後、ｐＨ７，４の初発緩衝液内の０．２〜０
．８モル／リットルの生理的食塩水の塩分勾配を用いて
溶離を実施した。溶離された蛋白質の吸光度を、２８０
ｎ−の記録光度計を用いて測定した。因子Ｘを含む分画
は０．３〜０．４モル／リットルの生理的食塩水濃度で
カラムから溶離され、０．４５〜０．５５モル／リット
ルの生理的食塩水濃度でカラムから因子■及びＸを含む
溶液が流出し、０、７〜０．８モル／リットルの生理的
食塩水濃度で機能的に純粋な因子■を含む分画がカラム
から溶離された。目的によっては、因子■及び■＋Ｘを
含む分画を１つの調製に溜め置くのが適当である場合も
ある。生理的食塩水濃度０．５モル／リットルにおいて
、因子■、■及びＸを含む分画が得られ、０．８モル／
リットルまでＮａＣ１’濃度を増大させた後、因子■が
局在化した状態の分画が溶離された。いずれの場合にお
いても、このプロセスはＰＨ７，４の初発緩衝液内で行
なわれる。得られた因子ＶＩＩの濃厚物は「プロトロン
ビン複合体」のその他の因子を含まず、因子■、■及び
Ｘの濃厚物は因子■を含まない、量的比率は例１と同様
である。
クリル酸エステルのカラム内に１０００ｄのヒト血漿を
通過させた。０．２モル／リットルの生理的食塩水を含
むｐＨ７，４のクエン酸塩緩衝液によるバラストたん白
質の除去の後、ｐＨ７，４の初発緩衝液内の０．２〜０
．８モル／リットルの生理的食塩水の塩分勾配を用いて
溶離を実施した。溶離された蛋白質の吸光度を、２８０
ｎ−の記録光度計を用いて測定した。因子Ｘを含む分画
は０．３〜０．４モル／リットルの生理的食塩水濃度で
カラムから溶離され、０．４５〜０．５５モル／リット
ルの生理的食塩水濃度でカラムから因子■及びＸを含む
溶液が流出し、０、７〜０．８モル／リットルの生理的
食塩水濃度で機能的に純粋な因子■を含む分画がカラム
から溶離された。目的によっては、因子■及び■＋Ｘを
含む分画を１つの調製に溜め置くのが適当である場合も
ある。生理的食塩水濃度０．５モル／リットルにおいて
、因子■、■及びＸを含む分画が得られ、０．８モル／
リットルまでＮａＣ１’濃度を増大させた後、因子■が
局在化した状態の分画が溶離された。いずれの場合にお
いても、このプロセスはＰＨ７，４の初発緩衝液内で行
なわれる。得られた因子ＶＩＩの濃厚物は「プロトロン
ビン複合体」のその他の因子を含まず、因子■、■及び
Ｘの濃厚物は因子■を含まない、量的比率は例１と同様
である。
劃」エ
ヘパリン−ヒドロキシエチルメタクリル酸エステル吸着
剤上での抗トロンビン■の分離により得られる分画には
、少量の因子ＩＸ、Ｘ及び蛋白質Ｃのほかに大量のプロ
トロンビンが含まれており、これは本発明に基づく方法
によって分離できた。
剤上での抗トロンビン■の分離により得られる分画には
、少量の因子ＩＸ、Ｘ及び蛋白質Ｃのほかに大量のプロ
トロンビンが含まれており、これは本発明に基づく方法
によって分離できた。
１０００ｄの洗浄用溶液を蒸留水で２倍の体積まで希釈
し、ｐＨ７，４で０．２モル／リットルの酢酸ナトリウ
ムで平衡化されたＤＥＡＲ−ヒドロキシエチルメタクリ
ル酸エステルのカラムを通してろ過した。
し、ｐＨ７，４で０．２モル／リットルの酢酸ナトリウ
ムで平衡化されたＤＥＡＲ−ヒドロキシエチルメタクリ
ル酸エステルのカラムを通してろ過した。
吸着し酢酸塩溶液（０，２モル／リットル）でカラムを
洗浄した後、例１と同様に緩衝液中の生理的食塩水を用
いて脱着が達成された。
洗浄した後、例１と同様に緩衝液中の生理的食塩水を用
いて脱着が達成された。
ｆ（（
プロトロンビンの調製のための原料としては、ヒトの血
漿の分画化の間に得られたエタノール分画■を用いた。
漿の分画化の間に得られたエタノール分画■を用いた。
湿潤沈殿物の形のこの分画を１００ｇ、０．１モル／リ
ットルの生理的食塩水を含むｐＨ７，４のクエン酸塩緩
衝液１リツトル（０，０１モル／ｌ）中で懸濁させた。
ットルの生理的食塩水を含むｐＨ７，４のクエン酸塩緩
衝液１リツトル（０，０１モル／ｌ）中で懸濁させた。
０〜４℃で２時間混合した後、この懸濁液を遠心分離し
、上澄み液は場合によってろ過した後側１又は２の血漿
と同じ方法で処理した。
、上澄み液は場合によってろ過した後側１又は２の血漿
と同じ方法で処理した。
■工
凝固因子ｆｉ縮物の供給源としてウシ血漿が用いられる
点を除いて、例２に従って分離を行なった。
点を除いて、例２に従って分離を行なった。
分離された因子■及びＸの濃厚物は、ウシの乳腺炎の検
出を可能にする乳汁内の因子ＶＩＩの識別、測定用の試
薬として用いられる。
出を可能にする乳汁内の因子ＶＩＩの識別、測定用の試
薬として用いられる。
■立見
牛乳試料（０，１〜１０ｄ）を２００ｐ７の試薬１＋２
（その調製方法は以下に記されている）と混合し、３７
℃で５分間または２５℃で１０分間保温した０次に−、
この混合物に対して基質（例えばＺ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−
Ａｒｇ−ｐ−ニトロアニリド、濃度０．３モル／リット
ル）を加え、開裂（スプリット）されたｐ−ニトロアニ
リンの量（１背当たりのΔＡｗａｙ）として分光光度計
を用いて加水分解速度を測定した。開裂したｐ−ニトロ
アニリンの量からトロンビンの活性度及び牛乳内の因子
ＶＩＩの濃度を示すことができる。
（その調製方法は以下に記されている）と混合し、３７
℃で５分間または２５℃で１０分間保温した０次に−、
この混合物に対して基質（例えばＺ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−
Ａｒｇ−ｐ−ニトロアニリド、濃度０．３モル／リット
ル）を加え、開裂（スプリット）されたｐ−ニトロアニ
リンの量（１背当たりのΔＡｗａｙ）として分光光度計
を用いて加水分解速度を測定した。開裂したｐ−ニトロ
アニリンの量からトロンビンの活性度及び牛乳内の因子
ＶＩＩの濃度を示すことができる。
跋ｌ工土ｌ
ＰＨ８，２０トリス緩衝液中の因子■及びＸの濃縮液（
０，０５モル／リットル）の５ｍを一４０℃より低い温
度で凍結し、保存し、解凍後に使用されるトロンボプラ
スチンの溶液（５ｄ）と混合した。
０，０５モル／リットル）の５ｍを一４０℃より低い温
度で凍結し、保存し、解凍後に使用されるトロンボプラ
スチンの溶液（５ｄ）と混合した。
因子■及びＸの凍結乾燥された濃縮物を、凍結乾燥され
たトロンボプラスチンと混合し均質化し錠剤化すること
もできる。試薬１＋２を用いて、乳汁の試料は、ＣａＣ
１！を含むＰＨ８，２０トリス緩衝液（０，００５モル
／リットル）で希釈された（１＋１００）。
たトロンボプラスチンと混合し均質化し錠剤化すること
もできる。試薬１＋２を用いて、乳汁の試料は、ＣａＣ
１！を含むＰＨ８，２０トリス緩衝液（０，００５モル
／リットル）で希釈された（１＋１００）。
ＩＬＬ工
乳汁の試料（０，１〜１０１１１）を２００１１１の試
薬ｌと５０ｍの試薬２（その調製方法は以下に記されて
いる）と混合し、３７℃で５分間、または２５°Ｃで１
０分間保温した。その後、この混合物に基質を加え、次
に、例６ａと同じ方法で処理した。
薬ｌと５０ｍの試薬２（その調製方法は以下に記されて
いる）と混合し、３７℃で５分間、または２５°Ｃで１
０分間保温した。その後、この混合物に基質を加え、次
に、例６ａと同じ方法で処理した。
拭１土
これは、ｏ、ｏｏｓモル／ｌの塩化カルシウムを含むｐ
Ｈ８，２のトリス緩衝液２ｄ（０，５モル／リットル）
と０．５ ｄのトロンボプラスチン溶液を（得られる混
合物が正常なヒト又はウシの血漿ＩＪ１１内に存在する
量の因子■を活性化するような濃度で）混合することに
より調製された。０．１〜１０ｊ１１の乳汁内の因子Ｖ
ＩＩの測定用として、上述の試薬が２００ｕ１用いられ
た。
Ｈ８，２のトリス緩衝液２ｄ（０，５モル／リットル）
と０．５ ｄのトロンボプラスチン溶液を（得られる混
合物が正常なヒト又はウシの血漿ＩＪ１１内に存在する
量の因子■を活性化するような濃度で）混合することに
より調製された。０．１〜１０ｊ１１の乳汁内の因子Ｖ
ＩＩの測定用として、上述の試薬が２００ｕ１用いられ
た。
跋ｉｆ
因子■とＸの濃厚物をｐＨ８，２のトリス緩衝液（０，
０５モル／Ｉｌ）内に溶解させ、ｌｄ当たりｃｃａ１０
〜１２ｎｋａｔの因子■と１〜２ ｎｋａｔの因子Ｘを
含むような容量で、０．１〜１０１１１の乳汁中の因子
ＶＩＩの測定のために用いた。
０５モル／Ｉｌ）内に溶解させ、ｌｄ当たりｃｃａ１０
〜１２ｎｋａｔの因子■と１〜２ ｎｋａｔの因子Ｘを
含むような容量で、０．１〜１０１１１の乳汁中の因子
ＶＩＩの測定のために用いた。
氾
乳汁の試料を、高い吸収能力をもつ材料（紙）内にとり
込ませ、乾燥させるという点を除いて例６ｂと同じ手順
に従った。因子■は、分析前に２０〜６０分間抽出し、
同時に試薬１により活性化した。
込ませ、乾燥させるという点を除いて例６ｂと同じ手順
に従った。因子■は、分析前に２０〜６０分間抽出し、
同時に試薬１により活性化した。
澄んだ活性化溶離剤を、試薬２を用いて分析した。
２０ｍ”の面積の紙は、試薬１の溶液２００〜４００Ｉ
で抽出した。試薬ｌ及び２の組成は例６ｂと同じであっ
た。
で抽出した。試薬ｌ及び２の組成は例６ｂと同じであっ
た。
劃」工
規定量の乳汁（又は予じめ希釈された乳汁）を、２５°
Ｃで１０分以内に乳汁内に存在する因子ＶＩＩの活性化
を完了するような量だけの適当の形（錠剤、凍結乾燥状
態）の試薬１を含む小さなびんの中にとり込んだ、この
時間の後（ただし−時間以内）、試薬混合物の中へ試薬
２、ｐＨ８，２の緩衝液、基質〔例えば、Ｚ−Ｇｌｙ−
Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｎｌ（−ＣＪａ−Ｎ＝ＣＨ−Ｃａｌｌ
ａ−Ｎ（ＣＨ３）り及び発色団（例えば、４−ジメチル
アミノシンナミックアルデヒドのようなアリルアルデヒ
ド、ｌｃ−あたり５０Ｊ１１の２１１１１１０１ ／
ｌ溶液）を含む診断用ストリップを漬けた。トロンビン
による加水分解生成物は、酸性にした後、発色団との反
応させると、強く着色された物質（青色）を与えた。こ
の着色の強さは乳汁中の因子ＶＩＩの量に正比例した０
着色標準との比較により半定量的に或いは屈折光度計を
用いた色の強さの測定によって定量的に評価が行なわれ
た。試薬１及び２の組成は例６ｂと同じであった。
Ｃで１０分以内に乳汁内に存在する因子ＶＩＩの活性化
を完了するような量だけの適当の形（錠剤、凍結乾燥状
態）の試薬１を含む小さなびんの中にとり込んだ、この
時間の後（ただし−時間以内）、試薬混合物の中へ試薬
２、ｐＨ８，２の緩衝液、基質〔例えば、Ｚ−Ｇｌｙ−
Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｎｌ（−ＣＪａ−Ｎ＝ＣＨ−Ｃａｌｌ
ａ−Ｎ（ＣＨ３）り及び発色団（例えば、４−ジメチル
アミノシンナミックアルデヒドのようなアリルアルデヒ
ド、ｌｃ−あたり５０Ｊ１１の２１１１１１０１ ／
ｌ溶液）を含む診断用ストリップを漬けた。トロンビン
による加水分解生成物は、酸性にした後、発色団との反
応させると、強く着色された物質（青色）を与えた。こ
の着色の強さは乳汁中の因子ＶＩＩの量に正比例した０
着色標準との比較により半定量的に或いは屈折光度計を
用いた色の強さの測定によって定量的に評価が行なわれ
た。試薬１及び２の組成は例６ｂと同じであった。
■ニ
ストリップには、基質、緩衝液、発色団及び酸性化試薬
の他に試薬１＋２も含まれているという点を除いて、例
８と同じ手順に従った０組成は例６ａと同じであった。
の他に試薬１＋２も含まれているという点を除いて、例
８と同じ手順に従った０組成は例６ａと同じであった。
■１立
試料としては、ヒトの尿又はその他の体液、場合によっ
ては病める器官を洗浄するために使用した溶液が用いら
れるという点を除いて、例６．８又は９と同じ手順に従
った。健康体においては尿中の因子ＶＩＩのレベルは最
低であり、増加は、洗浄が行なわれた尿生殖管、或いは
場合によっては器官の炎症プロセスの兆候であった。
ては病める器官を洗浄するために使用した溶液が用いら
れるという点を除いて、例６．８又は９と同じ手順に従
った。健康体においては尿中の因子ＶＩＩのレベルは最
低であり、増加は、洗浄が行なわれた尿生殖管、或いは
場合によっては器官の炎症プロセスの兆候であった。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、ジエチルアミノエチルヒドロキシエチル／メタクリ
ル酸エステル重合体イオン交換体を主体とする吸着剤と
凝固因子II、VII、IX及びＸを含有する生物学的物質を
接触させ、そしてｐＨが７．２〜７．６で、かつ、０．
３〜２．０モル／リットルの生理的食塩水を含む緩衝溶
離液を用いる脱着によって鋼製される、前記因子の濃厚
物。 ２、前記濃厚物中に、凝固因子II及びＸの濃厚物が含ま
れる場合、それらを トロンボプラスチン、リン脂質、 Ｃａ＾２＾＋イオン及び因子VIIの決定のための色素原
基質の存在下で用いることを特徴とする、請求項１記載
の濃厚物。 ３、前記濃厚物中に、凝固因子II及びＸの濃厚物が含ま
れる場合、それらをトロンボプラスチン、リン脂質Ｃａ
＾２＾＋イオン及びホ乳動物炎症性疾患の検出又はその
程度の決定のための色素原基質の存在下で使用すること
を特徴とする、請求項１記載の濃厚物。 ４、前記色素原基質として、次式 Ｚ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｘ （上式中、Ｘは、発色図アルデヒド、例えば４−ジメチ
ルアミノベンズアルデヒドまたは４−ジメチルアミノシ
ンナムアルデヒド、とアドメチン結合により結合したｐ
−ニトロアニリンまたはｐ−フェニレンジアミンのＮ，
Ｎ′−ビス誘導体残基を表しており、Ｚは、ベンジルオ
キシカルボニル基を表す）で示されるペプチド誘導体を
使用することを特徴とする請求項２または３記載の濃厚
物。 ５、出発原料を、ｐＨ７．２〜７．６の緩衝液及び０．
１モル／リットルの生理的食塩水で平衡化されたジエチ
ルアミノエチルヒドロキシエチル／メタクリル酸エステ
ル重合体を主体とする吸着剤と接触せしめ、次いで凝固
因子の吸着を終えた後０．２モル／リットルの生理的食
塩水を含む前記緩衝液で洗浄することによりバラスト蛋
白質を除去し、次いで０．３〜２．０モル／リットルの
濃度の生理的食塩水を含む緩衝液でその他のたん白質の
脱着が行なわれることを特徴とする請求項１記載の凝固
因子濃厚物の調製方法。 ６、前記、ｐＨ７．２〜７．６の値をもつ緩衝液として
、０．０１モル／リットルのクエン酸三ナトリウムと０
．１モル／リットルの塩化ナトリウムを含むクエン酸塩
緩衝液を使用することを特徴とする請求項５記載の方法
。 ７、前記、ｐＨ７．２〜７．６の溶液として、０．２モ
ル／リットルの酢酸ナトリウムを使用することを特徴と
する請求項５記載の方法。 ８、前記出発原料を、フロー・クロマトグラフカラム又
はバッチ方法のいずれかを用いて、吸着剤と接触せしめ
ることを特徴とする請求項５記載の方法。 ９、前記凝固因子IXの濃厚物を得る目的で、０．３〜０
．４モル／リットルの生理的食塩水を含む緩衝液を使用
して脱着を実施することを特徴とする請求項５記載の方
法。 １０、前記、凝固因子II及びＸの濃厚物を０．４５〜０
．５５モル／リットルの濃度の生理的食塩水を含む緩衝
液を用いる脱着により得ることを特徴とする請求項５記
載の方法。１１、前記凝固因子VIIを、０．７〜０．８
モル／リットルの濃度の生理的食塩水を含む緩衝液を用
いる溶離により得ることを特徴とする請求項５記載の方
法。 １２、ヒト及び動物の血漿、ヒトの血漿から単離された
血漿分画及び調製物などの生物学的物質中の凝固因子V
IIの測定方法ならびに体液分析によるホ乳動物炎症性疾
患の検出及び／又はその程度の決定の方法において、生
物学的物質の試料を、同時に又は段階的にトロンボプラ
スチン、リン脂質、凝固因子II及びＸの濃縮物、Ｃａ＾
２＾＋イオンならびに色素原基質と接触せしめ、次に、
必要に応じて、得られた着色を評価することを特徴とす
る方法。 １３、前記色素原基質として、次式 Ｚ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｘ （上式中、Ｘは、発色図アルデヒド、例えば４−ジメチ
ルアミノベンズアルデヒドまたは４−ジメチルアミノシ
ンナムアルデヒド、とアドメチン結合により結合したｐ
−ニトロアニリンまたはｐ−フェニレンジアミンのＮ，
Ｎ′−ビス誘導体残基を表しており、Ｚは、ベンジルオ
キシカルボニル基を表す）で示されるペプチド誘導体を
使用することを特徴とする請求項１２記載の方法。
Applications Claiming Priority (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS32488A CS275998B6 (en) | 1988-01-18 | 1988-01-18 | Preparation of coagulative factor concentrate from blood plasma |
| CS324-88 | 1988-01-18 | ||
| CS86988 | 1988-02-12 | ||
| CS869-88 | 1988-02-12 | ||
| CS2890-88 | 1988-04-28 | ||
| CS882890A CS289088A1 (en) | 1988-04-28 | 1988-04-28 | Method of coagulation factor's proof and/or extent determination |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01294697A true JPH01294697A (ja) | 1989-11-28 |
Family
ID=27179281
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1007888A Pending JPH01294697A (ja) | 1988-01-18 | 1989-01-18 | 凝固因子２，７，９及び１０の濃厚物、その調製方法及び用途 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5118614A (ja) |
| EP (1) | EP0325225A3 (ja) |
| JP (1) | JPH01294697A (ja) |
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| DK (1) | DK21789A (ja) |
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-
1989
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- 1989-01-17 US US07/297,753 patent/US5118614A/en not_active Expired - Fee Related
- 1989-01-18 DK DK021789A patent/DK21789A/da not_active Application Discontinuation
- 1989-01-18 JP JP1007888A patent/JPH01294697A/ja active Pending
- 1989-01-18 EP EP89100788A patent/EP0325225A3/en not_active Withdrawn
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Also Published As
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| US5118614A (en) | 1992-06-02 |
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