JPH01316328A - 老化防止、細胞賦活、老人病予防・治療のための薬剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、人間用又は動物用の新規な医薬に関するもの
であり、さらに詳しく言えば、生体の各器官、組織、細
胞の生物活性の低下に対する賦活、細胞の老化に対する
防止、あるいは細胞の機能低下、老化に起因する疾患即
ち老人病の予防・治療のために有効な薬剤に関する。さ
らに言えば、本発明は細胞の機能障害や老化の促進に関
与するフリーラジカルあるいは活性酸素を消去しうる作
用を有する新規な薬剤あるいは細胞の老化を進める有害
物質発生源である腸内細菌をコントロールする作用を有
する新規な薬剤に関する。

〔背景技術〕

老化を防止し、寿命延長させる古典的な手段として、適
切な食餌制限がラットやマウスを用いた実験で明らかに
されているが、近年、老化速度と酸素代謝が密接に関係
していることが解明されてきた。即ち酸素から生成する
より活性な分子種である活性酸素、具体的にスーパーオ
キシドアニオン（ＳＯＡ）ラジカル（フリーラジカル）
、過酸化水素（Ｈ２Ｏり、ヒドロキシラジカル（・０Ｈ
１７リーラジカル）、−重積酸素Ｃ０８）の４種の活性
酸素はその過酸化反応性による生体組織、細胞への傷害
作用が強く、老化促進現象の主要因とされている。

動脈硬化、脳血管障害（脳栓塞、脳梗塞）、脳卒中、心
筋梗塞、白内障、酸素中毒、放射線障害、虚血性消化管
病変（潰瘍）、呼吸器疾患、糖尿病、急性膵炎、火傷、
各種炎症、皮膚筋炎、リウマチ、川崎病、ベーチェット
病、クローン病、潰瘍性大腸炎、てんかん、農薬中毒、
発がん、がん転移などこの活性酸素が関与している疾患
は多種にわたる。さらに脳血管性痴呆、アルツハイマー
型老年痴呆、アルツハイマー病などの痴呆と活性酸素と
の関連も検討されており、また、心虚血、脳虚血、スト
レス、ショックなどに付随し、虚血後の血流再開により
活性酸素が発生し、過酸化脂質の生成による組織の壊死
など種々の傷害をもたらすことが、最近、注目されてき
ている。活性酸素の消去剤、抗酸化剤としてはビタミン
ＥあるいはビタミンＣ１ビタミンＢ２などの天然のビタ
ミン類が医療に頻用されているが、このうち、ビタミン
Ｂ２はグルタチオン還元酵素を触媒し、グルタチオンレ
ベルを高めることにより過酸化脂質生成を抑制すること
が知られている。

一方、近年、スーパーオキシドラジカル（０□″）に作
用しこれを消去する（Ｏｚ−−０２＋　Ｈｚ０２）抗酸
化酵素スーパーオキシドディスムターゼ（以下ＳＯＤと
略記する）が注目され、老化のフリーラジカル説を提唱
したバーマンをはじめとして多くの研究者により医療に
応用されつつある。

また、火傷、各種炎症、ベーチェット病、潰瘍等に適応
されている、特殊な処理を施したラン血液成分のソルコ
セリル■あるいは胎盤成分あるいは請帯血成分（たとえ
ばインタセリン［Ｆ］）などは細胞の増殖を促進させる
ことができるため、これらは生体・細胞賦活剤として重
用されている。

他方、男性ホルモンや甲状腺ホルモン（サイロキシン）
などの老化加速作用も近時明らかにされてきており、老
化促進を抑制する薬剤の探索は、緊急に解決されるべき
課題となっている。

〔発明の開示〕

本発明者らは、前記の１）過剰の活性酸素の不都合な作
用を抑制するような物質、２）　ＳＯＤの活性を増強す
る物質、又は　３）　　ＳＯＤの産生を促進するような
物質を生体成分の中に探索し、医薬として開発すること
を目的として、検討を進め　ｌこ　。

薬物として、特に、安全性の高い動物由来の各種ペプチ
ド類につき、老化モデルとして近年研究されてきた老化
促進マウス（５ｅｎｅｓｃｅｎｃｅａｃｃｅｌｅｒａｔ
ｅｄ　ｍｏｕｓｅ、以下ＳＡＭと略記する）を用いて、
老化を抑制しうる薬剤として有用な物質のスクリーニン
グを鋭意行った。その結果、本発明者らは血清胸腺因子
（Ｆａｃｔｅｕｒ　　ｔｈｙｍｉｑｕｅｓｅｒｉｑｕｅ
）として知られるノナペプチド（以下ＦＴＳと略記する
）およびその誘導体又はそれらの塩類が、ＳＡＭの各器
官におけるＳＯＤの活性を増加させ、また他の老化要因
・指標を改善し、更にタンパク質及びＤＮＡの量を増加
させることを見出した。

本発明は、かかる知見に基づいてなされたものである。

すなわち、本発明は、下記のアミノ酸配列を有するノナ
ペプチド ｐＧＩｕ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｇｉｎ−Ｇｌｙ−
Ｇｌｙ−５ｅｒ−Ａｓｎ又は、そのＣ末端のアスパラギ
ンのカルボキシル基におけるエステル又はアミドあるい
は、それらの薬学的に許容し得る塩を有効成分として含
有することを特徴とする老化防止剤、細胞賦活剤あるい
は老人病の予防・治療剤を提供するものである。

本発明において使用される前記のノナペプチドは、通常
ペプチド合成に慣用されている液相又は固相におけるペ
プチド合成法により、困難なく製造することができる（
これらの方法については、特開昭５４−１６４２５号公
報、ＵＳＰ、４３０１０６５を参照されたい）。あるい
はまた、遺伝子工学的、細胞工学的手法によっても調製
することができる。

本発明において使用される前記のノナペプチドのＣ末端
のアスパラギンのカルボキシル基におけるエステルは、
薬学的に許容し得るカルボン酸のエステル類であり、そ
の例としては、メチルエステル、エチルエステル、プロ
ビルエスチル、イソプロピルエステル、ｎ−ブチルエス
テル、イソブチルエステル、Ｌｅｒｔ−ブチルエステル
、ｎ−ペンチルエステル、インペンチルエステル、ネオ
ペンチルエステル、ｔｅｒｔ−ペンチルエステル、ｎ−
ヘキシルエステル、５ｅｃ−ヘキシルエステル、ヘプチ
ルエステル、オクチルエステル、５ｅｃ−オクチルエス
テル、ｔｅｒｔ−オクチルエステル、ノニルエステル、
デシルエステル、ウンデシルエステル、ドデシルエステ
ル、トリデシルエステル、テトラデシルエステル、ヘキ
サデシルエステル、オクタデシルエステル、ノナデシル
エステル、エイコシルエステル、シクロペンチルエステ
ル、シクロヘキシルエステル、シクロヘプチルエステル
、シクロオクチルエステル、アリルエステル、インプロ
ペニルエステル、ベンジルエステル、ｏ−１ｍ−１又は
ｐ−クロルベンジルエステル、ｏ−１ｍ−１又はｐ−フ
ルオルベンジルエステル、ｏ−１ｍ−１又はｐ−ブロム
ベンジルエステル、ｏ−１ｍ−１又はｐ−ヨードベンジ
ルエステル、０−１ｍ−１又はｐ−メチルベンジルエス
テル、ｏ−１ｍ−１又はｐ−エチルベンジルエステル、
ｏ−１ｍ−１又はｐ−イソプロピルベンジルエステル、
シンナミルエステル、アミノエチルエステル、０−１ｍ
−１又はｐ−アミノベンジルエステル、０−１ｍ−１又
はｐ−二トロベンジルエステル、０−１ｍ−１又はｐ−
メトキシベンジルエステル−、ｍ−、又はｐ−エトキシ
ベンジルエステル、ｏ−、ｍ−、又はｐ−アミノフェネ
チルエステル、α−フルフリルエステル、α−チエニル
メチルエステル、ａ−ピリジルメチルエステル、ａ−ピ
リジルエチルエステル、ピペリジノメチルエステル、α
〜ルビベリジルメチルエステルモルホリノエチルエステ
ル、α−モルホリニルメチルエステルなどがあげられる
。

また、本発明において使用される前記のノナペプチドの
Ｃ末端のアスパラギンのカルボキシル基におけるアミド
は、薬学的に許容し得るカルボン酸のアミド類であり、
その例としては、アミド、メチルアミド、エチルアミド
、グロピルアミド、イソプロピルアミド、ｎ−ブチルア
ミド、インブチルアミド、ｊｅｒｋ−ブチルアミド、ｎ
−ペンチルアミド、イソペンチルアミド、ネオペンチル
アミド、ｔｅｒｔ−ペンチルアミド％ｎーへキシルアミ
ド、ｓｅｃ−ヘプチルアミド、ヘプチルアミド、オクチ
ルアミド、ｓｅｃ−オクチルアミド、ｔｅｒｔ−オクチ
ルアミド、ノニルアミド、デシルアミド、ウンデシルア
ミド、ドデシルアミド、トリデシルアミド、テトラデシ
ルアミド、ヘキサデシルアミド、オクタデシルアミド、
ノナデシルアミド、エイコシルアミド、シクロペンチル
アミド、シクロへキシルアミド、シクロへブチルアミド
、シクロオクチルアミド、アリルアミド、インプロペニ
ルアミド、ベンジルアミＦ、ｏ−、ｍ−、又はｐ−クロ
ルベンジルアミＦ、ｏ−、ｍ−、又はｐ−フルオルベン
ジルアミド、ｏ−、ｍ−、又はｐ−ブロムベンジルアミ
ド、Ｏ−、ｍ−、又はｐ−ヨードベンジルアミド、ｏ−
、ｍ−、又はｐ−メチルベンジルアミド、ｏ−、ｍ−、
又はｐ−エチルベンジルアミド、ｏ−、ｍ−、又はｐ−
イソプロピルベンジルアミド、シンナミルアミド、アミ
ノエチルアミド、Ｏ　−　、ｍ　−　、又はｐ−アミノ
ベンジルアミド、ｏ−、ｍ−、又はｐ−ニトロベンジル
アミド％　Ｏ　　％　ｍ−％又はｐ−メトキシベンジル
アミド、ｏ−、ｍ　＋、又はｐ−エトキシベンジルアミ
ド、ｏ−、ｍ−、又はｐ−アミノ７エネチルアミド、σ
−フル７リルアミド、α−チエニルメチルアミド、α−
ピリジルメチルアミド、σーピリジルエチルアミド、ピ
ペリジノメチルアミド、ａ−ピペリジルメチルアミド、
モルホリノエチルアミド、α−モルホリニルメチルアミ
ド、メトキシカルボニル−（σーメルカプトメチル）メ
チルアミド、エトキシカルボニル−（α−メルカプトメ
チル）メチルアミドなどがあげられる。

また、前述の薬学的に許容し得る塩としては、前記のノ
ナペプチドのアミノ基における酸付加塩およびカルボキ
シル基における塩基塩があげられる。酸付加塩としては
、有機酸又は無機酸との各塩があげられ、それらの例と
しては、例えば、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、トリフル
オロ酢酸、酒石酸、フマル酸、りんご酸、マレイン酸、
しゅう酸、ナフトエ酸などのカルボン酸との塩、メタン
スルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフタレンスル
ホン酸などのスルホン酸との塩、塩酸、硫酸、硝酸、リ
ン酸などの無機酸との塩、があげられる。

上記の塩基塩としては、無機塩基との塩すなわち、アル
カリ金属塩、アルカリ土類金属塩、アンモニウム塩、あ
るいは有機塩基との塩すなわち、アミンとの塩があげら
れ、それらの例としては、リチウム塩、ナトリウム塩、
カリウム塩、カルシウム塩、アンモニウム塩、トリエチ
ルアミン塩、エタノールアミン塩、トリス塩、ジシクロ
ヘキシルアミン塩などがあげられる。

本発明に係る老化防止剤、細胞賦活剤、老人病予防・治
療剤は、その剤型に応じて通常慣用の製剤手段を用いて
調製される。すなわち、上記のノナペプチドならびにそ
のエステル又はアミド誘導体もしくはそれらの塩類から
選ばれた有効成分物質を、適宜、薬学的に許容し得る担
体、賦形剤、稀釈剤などを用いて、適当な剤型に調製す
る。剤型は外用、経口投与、非経口投与等々の投与経路
に適した種々の剤型とすることができる。

本発明に係る薬剤の効果は下記の如き実験により確認さ
れている。すなわち、生後９〜１０ケ月齢の外見１既に
顕著な老化兆候を示しているＳＡＭの雌マウスＳＡＭ　
−Ｐ（ｐｒｏｎｅ）および対照群としてＳＡＭ−Ｒ（ｒ
ｅｓｉｓｔａｎｔ）を定温定湿の飼育室で飼育し、照明
は調光タイマーにより、明暗サイクル（明期７：００〜
１９：００、晴朗１９：００〜７　：　００）を設定し
、行った。ＳＡＭ−ＰおよびＳＡＭ−Ｒは一群３匹ずつ
用い、生理食塩水に溶かした本発明の有効成分物質（Ｆ
ＴＳなど）を、Ｏｍｙ／　ｋｇｃ対照群）、０．１ｍｇ
／ｋｇ、１．０＋１ｇ／　ｋｙ　（０，１ｍＱ／　ｌｈ
体重）の３群に分け、毎日１回連続２１日間皮下投与し
た。

最終投与の１時間後に断頭し、直ちに脳、心臓、肝臓、
腎臓を摘出し、液体窒素で冷凍し、実験に使用するまで
一８０°Ｃに貯蔵した。各臓器のホモジネートを作製し
、老化指標と考えられるＳＯＤ活性（Ｍｎ　−ＳＯＤ活
性およびＣｕ、Ｚｎ−５ＯＤ活性）、マロンアルデヒド
（以下ＭＡＤと略記する。）量、モノアミンオキシダー
ゼ（以下ＭＡＯと略記する。）活性を測定した。ＭＡＤ
はＳＯＤとは反対に過酸化脂質生成を促進する作用があ
る。またＭＡＯは生体内の大部分の臓器中に含まれ、特
に肝臓、脳などに比較的高い酵素活性が認められ、主と
してミトコンドリア外膜中に存在しくＳｃｈｎａｉｔｍ
ａｎ、　Ｃ。

ｅｔ　ａｌ、　Ｊ、　Ｃｅ１１．　Ｂｉｏｌ、　３２．
７１９．１９６７）、基質の異化活性（ｃａｔａｂｏｌ
ｉｓｍ）、即ちドーパミン、ノルアドレナリンおよび５
−ヒドロキシトリプタミンなどモノアミンの酸化的脱ア
ミノ化を行わせる酵素である。従ってＭＡＯは老化促進
作用があるとされ、実際、老年性振戦では脳内のドーパ
ミン含量が減少することが知られ、また加齢とともに脳
内のノルアドレナリン量は低下すると報告されている（
加藤智信ほか、Ｇｅｒｉａｔ、Ｍｅｄ、。

２２、１１５６．１９８４）。

ＭＡＯ活性の測定は次のように行った。即ち肝ミトコン
ドリア画分より調製したＭＡＯ標本に、酵素反応基質と
して、〔目Ｃ〕フェネチルアミンを加え、生成する〔口
Ｃ）フェニルアセトアルデヒド（以下ＦＡＡと略記する
。）量によって、ＭＡＯ活性を表わした。なお、上記老
化に関連する因子の活性とともに各臓器のタンパク質量
、ＤＮＡ量なども同時に測定した。

腎臓Ｍｎ　−ＳＯＤ活性に対し、本発明の薬剤の顕著な
効果が示された。まず、対照群においてＳＡＭ−Ｒに比
してＳＡＭ　−Ｐの対照群の活性は低下していた　（０
，７１０±０．２５６より０　、２９７±０．１４２）
　。又、ＳＡＭ　−ＰおよびＳＡＭ　−ＲともにＦＴＳ
投与は用量依存的にＭｎ−３ＯＤ活性を増大させた。

さらに、脳においては５ＡＩＪ　−Ｐにおいて、ＦＴＳ
投与による酵素活性の増大の傾向がより見られｊこ　。

Ｃｕ、Ｚｎ−３ＯＤ活性については腎臓、脳において、
ＦＴＳの顕著なかつ用量依存的な効果が見られた。

脳では、ＦＴＳ投与マウスの酵素活性は対照群の２倍以
上に増大した。腎臓では、ＳＡＭ　−Ｒの対照群の１１
０．９６±２４．９２に対してＳＡＭ　−Ｐのそれは６
７．７６±４．２１に低下しており、ＦＴＳ投与により
酵素活性は顕著に増加した。

ＭＡＤについては、脳、腎臓においてＦＴＳ投与群では
対照群に比してその含量が減少した。脳では、ＦＴＳ　
Ｏ，１＋１１９／　７２９／日投与の方が１　、Ｏｍｙ
ｌ　ｋｇ７日投与よりも、ＭＡＤの減少の程度が大きか
った。

脳、腎臓ともＳＡＭ　−ＰでのＭＡＤ含量の低下が顕著
で、間接的に過酸化脂質を減少させることになる。

ＭＡＯ活性については、肝臓においてＳＡＭ　−Ｐ１７
）対照群のそれは（１７８７±３３３）生成ＰＡＡ　ｐ
ｍｏｆｆ／　ｒａｇタンパク／分であり、ＳＡＭ−Ｒの
対照群のそれ（３６３０±２０１）生成ＰＡＡ　ｐｍｏ
Ｉ２／　ｒａｇタンパク／分に比して、かなり増大して
おり、ＦＴＳ投与によりＭＡＯ活性は著明に減少した。

タンパク質含量はＦＴＳの投与により、ＳＡＭ−Ｒ。

ＳＡＭ−Ｐの肝臓および心臓で増加した。

ＤＮＡ含量については、肝臓でＳＡＭ　−Ｐの対照群の
それは、ＳＡＭ−Ｒの対照群のそれに比し有意に低下し
たが、ＦＴＳ　１．０１１９／　ｋｇ／日の投与で、Ｓ
ＡＭ−ＲのレベルにまでＤＮＡ含量が増加した。心臓、
腎臓においても若干のＤＮＡ含量の増加が見られｔ三。

ＲＮＡ含量については心臓、腎臓でＦＴＳ投与群で増加
の傾向が見られた。

他方ｌＯケ月齢のＳＡＭ−Ｐ、　ＳＡＭ−Ｒの雌マウス
肝ミトコンドリア画分より調製したＭＡＯ標本を用い、
ｉｎ　ｖｉｔｒｏでのＦＴＳの添加効果も検討した。

ＭＡＯ標品に種々の濃度のＦＴＳを加え、ｐｒｅ　１ｎ
ｃｕｂａ−ｔ　ｔｏｎを行い、ＭＡＯ活性を測定した。

ＳＡＭ　−Ｒに比べ、ＳＡＭ−ＰのＭＡＯ活性は増大し
ており、ＦＴＳを１ｎｖｉｔｒｏで加えると、！、２ｎ
Ｍ、　１２ｎＭ、　１２０ｎＭでＭＡＯ活性は抑制され
た。ｐｒｅｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ時間を１５分、３０分
、６０分と変えたところ、３０分以上でＭＡＯ活性の抑
制が顕著に見られた。

以上のＳＡＭを用いた実験事実から、本発明のＦＴＳ投
与は、酸素前を解消し老化抑制作用を有する生体中のＳ
ＯＤ活性を増加させること、またタンパク質およびＤＮ
Ａ、　ＲＮＡの含量の増加に見られるように組織、細胞
を活性化させることが明らかにされた。更に老化促進作
用があるＭＡＤの含量およびＭＡＯ活性を低下させるこ
とも明らかにされ、ＦＴＳは老化防止剤として価値ある
医薬、動物薬として適応されうる可能性が示された。

それ故活性酸素の発生、過酸化脂質の生成などを経てお
こる前記の各種疾患の予防・治療に本発明のＦＴＳを好
適に適応させることができる。

本発明に係る薬剤における有効成分物質の毒性を検討す
るため、マウスに対し、有効成分物質１００１９／７２
９を連日１４日間皮下投与したが外見的に何ら異常は見
られなかった。また、ラットに対し、有効成分物質３０
１１１？／Ｊ２９連日２１日間、皮下投与したが、外見
的にも血清生化学的にも、また病理解剖を行った結果で
も、何ら異常は見られなかった。このように、本発明に
係る薬剤は、きわめて毒性の少ない安全な薬剤であり、
長期間投与することが可能である。

本発明に係る薬剤を投与することができる対象動物とし
ては、例えばヒト及びウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ
、ウサギ、イヌ、ネコなどの家畜、ライオン、ゾウ、キ
リン、ウマ、ゴリラ、サル、チンパンジーなどの動物園
等で飼育されている哺乳類動物、マウス、ラット、モル
モットほか各種の実験動物、ニワトリなどの家禽類、ペ
ット用の鳥類、爬虫類、両種類、魚類などがあげられる
。その投与量はこれら動物の体重１に９あたり通常、０
．１μｇ〜５００ｍｇＺ日で、これらは、例えば、１日
１回〜６回に分割投与してもよく、また投与対象者の年
令、病状などにより適宜投与量を増減することができる
。その投与経路は特に限定されないが、静脈内、筋肉内
、皮肉、皮下に注射投与することもできる。

また軟膏剤を調製することにより、眼部、口腔内、鼻腔
内、皮膚などに塗布することができ、生薬やゼリー剤、
点眼剤、点鼻剤、鼻口腔吸収剤、エアロゾル剤、噴霧剤
、経口剤などとして投与することもできる。有効成分物
質の生体内での急速な分解あるいは不活性化を阻止する
ために、有効成分物質を適当な製剤成分、たとえば、ア
ルコール性、レシチンなどの油性、脂肪性の生理的に無
害な固体または液体材料あるいはそれらの懸濁物リポソ
ームなどを用いて製剤とし長時間活性が持続する製剤と
することもできる。

本発明に係る薬剤は、適応疾患ごとに異なるが、他の薬
剤、たとえばソルコセリル［Ｆ］、インタセリン■、ま
たウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ、ｔ−プラスミノ
ーゲン・アクチペーターなどの血栓溶解剤、イニブロー
ル、ＦＯＹ、　　トラネキサム酸、またニフェジピン、
ニカルジピンなどの各種カルシウム拮抗剤、アルドース
リダクターゼ阻害剤、各種ステロイド、ユビキノン、グ
ルタチオン、ビタミンＥ１　ビタミンＣ１ビタミンＢ２
ほか各種ビタミン剤、各種免疫調節剤、各種のｂｉｏｌ
ｏｇｉｃａｌ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｍｏｄｉｆｉｅｒと
ともに投与することができ、また、これらを製剤中に添
加し、合剤として臨床効果を高めることができる。

以下に実施例および実験例を記載し、本発明をより詳細
に説明するが、本発明はこれら各側によって限定される
ものではない。

実施例Ｉ　注射用バイアル製剤 ＦＴＳ−ＣＨｓＣＯＯＨ・２Ｈ２０（三井製薬工業社製
）　ｌ　ｍｇを蒸留水に溶解し、除菌口過し、バイアル
内に充てんし、凍結乾燥した。

実施例２　注射用アンプル製剤 ＦＴＳ−ＣＨｘＣＯＯＨ・２ＨｚＯ（三井製薬工業社製
）５ｍｇを生理食塩水に溶解し、除菌口過し、アンプル
内に充てんした。

実施例３　皮下注射用注射剤 ＦＴＳ−ＣＨ、Ｃ０ＯＨ・２Ｈ２０Ｃ三井製薬工業社製
）を単位投与量あたり２ｍｇを２％カルボキシメチルセ
ルロースＰＢＳ　（リン酸緩衝生理食塩水）溶液中に懸
濁し、大豆ホスファチドからなる　Ｌｉｐｏｍａｌ（Ｈ
ｕｈｔａｍａｋｉ　Ｏｙ／　Ｌａ１ｒａｓ　Ｐｈａｒｍ
ａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社製）あるいは静脈用水中油型乳
濁液である Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ（Ｃｕｔｔｅｒ　Ｌａｂｏｒａｔ
ｏｒｉｅｓ社製）と混合した。Ｌｉｐｏｍａｌを用いる
場合は、ＦＴＳ溶解ＰＢＳ溶液とＬｉｐｏｍａｌは等量
ずつ混ぜ合わせた。

Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄを用いる場合は、ＦＴＳ溶解ＰＢ
Ｓ溶液２．５ｍｆｆ、　Ｔｖｅｅｎ　８０（Ｓｉｇｍａ
　Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ社製）　Ｏ，１ｍＩ２及びＩｎｔ
ｒａｉｉｐｉｄ　４．６ｒｎＱを混ぜ合わせた。

実施例４　リポソーム製剤 リポソーム製剤には、電荷の異なる３種類があり、それ
らが、更に構造上から、４種類に分類される。

電荷は中性、陽性、陰性の３種であり、構造的には多重
層リポソーム（ＭＬＶ％　ｍｕｌｔｉｌａｍｅｌｌａｒ
ｖｅｓｉｃｌｅ）　、小さな一枚膜リポソーム（ＳＵＶ
。

ｓｍａｌｌ　ｕｎｉｌａｍｅｌｌａｒ　ｖｅｓｉｃ！ｅ
）、および大きな一枚膜リポソーム（ＬＵＶ、　ｌａｒ
ｇｅ　ｕｎｉｌａｍｅｌｌａｒｖｅｓ　ｉｃ　ｌｅ）、
更にＬＵＶに近似の構造を有しながら数枚膜のもの（Ｒ
ＥＶ、ｒｅｖｅｒｓｅ−ｐｈａｓｅ　ｅｖａｐｏｒａｔ
ｉｏｎｖｅｓｉｃｌｅ）の４種類が知られている。

■　ＦＴＳ封人中性電荷リポす−ム ホスファチジルコリン類、スフィンゴミエリン等のリン
脂質、およびコレステロールのクロロホルム溶液をモル
比２：１，４：１．あるいはｌ：１となるように混合し
、−旦溶媒を減圧留去しＩ；ものに、脂質量に対しｌ／
ｌｏｏ〜１／１０００当量のＦＴＳのＰＢＳ　（ＩＪン
酸緩衝生理食塩水）溶液を添加し、ＶＯｒｔｅＸ　ｍ１
ｘｅｒにて十分混和すると、ＭＬＶが得られた。

更に、リン脂質の相転移温度（Ｔｃ）以上で超音波処理
することによりＳＵｖが得られた。

得られたＳＵＶに塩化カルシウム水溶液を加え、３７°
Ｃで１時間インキュベートして融合させた後、ＥＤＴＡ
を添加し、３７℃で３０分間インキュベートしてＣａ＋
＋を除くと、ＬＵＶが得られた。

ＲＥＶの調製法は以下の通りである。すなわち脂質のク
ロロホルム溶液から溶媒を減圧留去した後、ジエチルエ
ーテルを適当量加えて充分に溶解したものに、ＦＴＳの
ＰＢＳ溶液を加え、超音波処理すると均一な単相の溶液
となった。得られた溶液を室温にて減圧濃縮した後、Ｐ
ＢＳ溶液を加え、Ｖｏｒｔｅｘ　　ｍ１ｘｅｒにて充分
に混和すると、ＲＥＶが得られた。

■　ＦＴＳ封入陽性電荷リポソーム 脂質の構成成分が異なるだけで、調製方法は上記中性電
荷リポソームの場合と同様である。

ホス７アチジルコリン類、スフィンゴミエリン等のリン
脂質、コレステロール、およびステアリルアミン等の陽
性電荷の高級脂肪族アミンをモル比で７：２：　ｌ又は
４：ｌ：ｌで混合して、脂質成分とし、同様の方法でＦ
ＴＳを封入した。

■　ＦＴＳ封人陰性電荷リポす−ム ホスファチジルコリン類、スフィンゴミエリン等のリン
脂質、コレステロールおよびジセチルホスフエート、ス
ルファチド等の陰性電荷の高級脂肪族エステル等をモル
比で７：２：ｌ又は４　：’ｌ　：　１で混合して、脂
質成分とし、同様の方法でＦＴＳを封入した。

実施例５　軟膏剤 ＦＴＳ−ＣＨ３Ｃ００Ｈ・２Ｈ２０（三井製薬工業社製
）２１１１９を精製水に溶解した。次に白色ワセリン２
５ｇ、ステアリルアルコール２０９、ＨＣＯ−６０４ｇ
およびモノステアリン酸グリセリン１ｇをとり、混和し
て予め調製したプロピレングリコール１２９、パラオキ
シ安息香酸メチル０．１９、バラオキシ安息香酸プロピ
ル０．１９の水溶液（ＦＴＳ含有）を加えて十分に混和
し、乳液とした後、冷却して固化するまで混和操作を続
けて調製した。

実施例６　坐　剤 ＦＴＳ−ＣＨｓＣＱＯＨ・２Ｈｔｏ（三井製薬工業社製
）１０１１９を予め加温したハード７アツトに分散し、
全量を２ｇとした。

実施例７　経鼻用カプセル剤 ＦＴＳ　Ｏ，０５１９を無菌条件下で２９．９５１９の
ミグジオル８１２中性油（ダイナマイトノーペル社製）
に溶解した。この溶液を常用の単位投与用投与器に充填
し、これを使用前に駆動カプセルに装着した。

実施例８　点鼻剤 蒸留水に以下の量のリン酸二水素ナトリウム、リン酸水
素二ナトリウム、塩化ナトリウム及びＥＤＴＡ−ジナト
リウム塩を室温にて溶解した。この溶液にＦＴＳを溶解
し、メンブランフィルタ−により濾過した。

Ｆ　Ｔ　Ｓ　　　　　　　　　　　　　０．１０ｍｇリ
ン酸−水素ナトリウム・２Ｈ２００，３０＋＋＋ｇリン
酸二水素ナトリウム・１２Ｈ，８１０，１０ｍｇ塩化ベ
ンザルコニウム　　　　　　　　０．１０１１１９エチ
レンジアミン四酢酸−ジナト リウム塩（ＥＤＴＡ）　　　　　　　　　　　　０．５
０ｍｇ塩化ナトリウム　　　　　　　　　　　４．５０
ｍｇ蒸　　留　　水　　　　　　　　　　　　　９８７
．６０＋＋＋９ｐＨ値　　　　　　　　　　５．０±０
．３実施例９　経鼻用スプレー製剤 ＦＴＳ−ＣＨ，Ｃ００Ｈ−２Ｈ２０（三井製薬工業社製
）２ｍｇをヒドロキシプロピルセルロース又はヒドロキ
シプロピルメチルセルロースに懸濁し、噴霧製剤機にて
スプレー用剤とした。

以下に、本発明の薬剤に関する薬理実験、毒性実験の例
を掲げる。

実験例１　老化指標の測定 生後９〜ＩＯケ月齢の外見１既に顕著な老化兆候を示し
ているＳＡＭの雌マウスＳＡＭ　−Ｐ（ｐｒｏｎｅ）お
よび対照群としてＳＡＭ−Ｒ（ｒｅｓｉｓｔａｎｔ）を
定温定湿の飼育室で飼育し、照明は調光タイマーにより
、明暗サイクル（明期７：００〜１９：００、晴朗１９
二〇θ〜７：００）を設定し、行った。ＳＡＭ−Ｐおよ
びＳＡＭ−Ｒは一群３匹ずつ用い、生理食塩水に溶かし
た本発明の有効成分物質（ＦＴＳなど）を、ＯｒＲｇ／
７２ｇ（対照群）　、Ｏ，１ｍｙ／ｋｇ、１．０１９／
　ｋｇｃＯ，ＬａＱ／１０９体重）の３群に分け、毎日
１回連続２１日間皮下投与した。最終投与の１時間後に
断頭し、直ちに脳、心臓、肝臓、腎臓を摘出し、液体窒
素で冷凍し、実験に使用するまで一８０°Ｃに貯蔵した
。

（１）ＳＯＤの活性測定 Ｇｅ１ｌｅｒらの方法（Ｂｒｕｃｅ　Ｌ、Ｇｅ１ｌｅｒ
　ａｎｄ　ＤｅｎｎｉｓＲ，Ｗｉｎｇｅ、　Ｍｅｔｈｏ
ｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、　１０５．１０５
゜１９８４）および今成らの方法（今成登志男ら、医学
のあゆみ、秒上（６）、　４９６．１９７７）に準じて
行った。

脳、腎臓それぞれ０．２９を、氷で冷却したｌＯｍＭＴ
ｒｉｓおよびｌ　ｍＭ　ＥＤＴＡを含む０．３２Ｍ庶糖
（ｓｕｃ−ｒｏｓｅＸ脳の場合）　、０．２５Ｍ　５ｕ
ｃｒｏｓｅ　（腎臓の場合）緩衝溶液を加え、氷冷しつ
つホモジナイザーで１０％のホモジネートを作製し、こ
れを３００Ｘ９．１５分間、４°Ｃで遠心分離し、前記
と同じ容量の緩衝溶液を沈澱に加えて、懸濁させ、再び
３００×９．１５分間、４°Ｃで遠心し、両者の上溝を
合わせて、１Ｘｌｏ’Ｘｙ、１５分間、４°Ｃで遠心し
た。この沈澱をＭｎ　−Ｓ００画分として、上溝をＣｕ
、　Ｚｎ−５ＯＤ画分として用いるため、さらに以下の
処理を行った。

沈澱を０．３Ｍ　５ｕｃｒｏｓｅ　ｂｕｆｆｅｒ　２．
０ｒｔｒＱに懸濁し、０．８ｙｒＱを用い、５０ｍＭ　
ＫＣＮ　０．１ｍαを加えて、３７℃で３０分間インキ
ュベートしてから、４°Ｃに冷却し、３　Ｍ　　Ｋ（４
０，１ｍＱを加えた。続いて２Ｘ　１０’×９．１０分
間遠心分離した。この上清をＭｎ−５ＯＤ画分として用
いた。

上記ｌＸ１０’Ｘ９．１５分間、４°Ｃで遠心して得た
上清Ｑ、１３ｍ１２に０．２ｍＱ　　１０％ソデイウム
ドデシルサルフエート（ＳＤＳ）を加えて、３７°Ｃ１
３０分間以上インキュベートしてから、４℃に冷却し、
３Ｍ　ＫＣＱ　Ｏ，１ｍ（２を加えた。４℃で３０分間
冷却して、２ＸｌＯ’Ｘ９．１０分間遠心し、その上清
をＣｕ、　Ｚｎ−３ＯＤ画分として用いた。

タンパク９ｍｇ／ｍＱ以上を含んだＭｎ　−ＳＯＤ画分
０．６ｍ（１、Ｃｕ、　Ｚｎ−３ＯＤ画分５μＱを用い
、それぞれに０．０５Ｍ　ＮａｘＣＯｓ緩衝液（ｐＨ１
０，３）　２．４ｍ（１，３ｍＭＸａｎｔｈｉ、ｎｅ−
Ｎａ　Ｏ，１ｍＱｓ　３０ｍＭ　ＥＤＴＡ−Ｎａ、　０
．１ｍＱｓＯ０１５％ＢＳＡ　Ｏ，１ｍＱ、　０．７５
ｍＭ　Ｎ１ｔｒｏｂｌｕｅ　Ｌｅｔｒａ−ｚｏｌｉｕｍ
　（ＮＢＴ）　０．１ｍＱ、キサンチンオキシダーゼ（
Ｘａｒ＋ｔｈｉｎｅ　０ｘｉｄａｓｅ（１ｕ／　ｍＱ）
）　５１ｔＱを加えて、２５°０１２０分間にインキュ
ベートしてから、６ｍ１２ＣｕＣＩ２．０．１ｍＱを加
え、５６０ｎｍ波長で吸光度を測った。試料を加えない
標品と試料を含んだ標品の吸光度の差によって、各々の
ＳＯＤ活性を計算した。結果を表１に示す。

（２）　ＭＤＡの測定 Ｕｃｈｉｙａｍａらの方法（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　Ｂ
ｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ。

８６、２７１．　１９７８）で行った。脳、腎臓それぞ
れ約０．１ｇに氷水で冷却した１、１５％Ｋ（Ｊを加え
て、ホモジナイザーで作製した１０％ホモジネート０．
５＋１ＩＩ２に、１％リン酸３ｍ１２．０．６％Ｔｈ１
ｏｂａｒｂｉｔｕｒｉｃａｃｉｄ　（ＴＢＡ）　ｌ　ｗ
ｒＱを加えて、十分に混ぜて、沸湯水中で４５分間イン
キュベートした。４°Ｃに冷却してから、ｎ　−ｂｕｔ
ｈａｎｏｌ　４ｍＱを加え、激しく振って、３００Ｘ９
．５分間、４℃で遠心した。次にｎ　−ｂｕｔｈａｎｏ
１画分を用い、５３５と５２０ｎｍでの吸光度の差をＴ
ＢＡ値として、検量曲線により、ＭＡＤの濃度を計算し
た。

１．１．３＋３−　ｔｅｔｒａｅｔｂｏｘｙ　ｐｒｏｐ
ａｎｅ　（ＴＥＰ）　８　μ（ｌに２Ｎ　ＨＣｆｆ２滴
および蒸留水を総容量１０ｍＱまで加えた。この濃度は
ＭＤＡ　　５ｍＭと等しく、標準品として標準曲線の作
成に用いた。結果を表２に示表２　　ＭＡＤ量 ＳＡＭ　　（ｉｇ／ｋｇ）　　　脳　　　腎臓０　　　
　　８．２３±２．４０　　　８．９３±０．１８ＳＡ
Ｍ−ＲＯ，１６，５２±０．８３　　　７．６７±１．
１１１．０　　　　　ｇ、５０±０．６０　　　８．０
５±１．３８０　　　　　６．８８±０．５６　　　８
．６９±０．６２ＳＡＭ−Ｐ　　　　Ｏ，１３，５６±
０．２４林　　８．３３±０．８２１．０　　　　４．
９２±０．１４＊　　　　６．９３±０．０６＊各群、
３匹（３検体）を用いた。

本：　Ｐ＜０．０５、　林：　Ｐ＜０．０１（３）　Ｍ
ＡＯ活性の測定 ＭＡＯの活性はラジオアイソトープを用いるＦｏｗｌｅ
ｒら（Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈｅｒ　Ｊ、Ｆｏｗｌｅｒ　ｅ
ｔ　ａｌ、　　Ｂｉｏ−ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｐｈａｒｍ
ａｃｏｌｏｇ）’＋　ｚａ、　３ｏａ３．１９７９）お
よび小畑ら（小畑俊男ら、目薬理詰、８５．　２３゜”
１９８５）の方法で行った。即ち、肝臓０．２９を用い
、氷で冷却した０、１Ｍリン酸ｂｕｆｆｅｒ　（Ｎａ、
ＰＯ，８０−７ｍＭ、　ＫＪＰＯａ　１９−１ｍＭ）で
１０％ホモジネートを作製した。続いて６００Ｘ９．２
０分間に４℃で遠心し、上清部分は１１１９タンパク／
１ＩＩ２を調製しＭＡＯ画分として用いた。ＭＡＯ画分
４０μＬ　（口Ｃ）Ｐｈｅｎｙｌ−ｅｔｈｙｌ−ａｍｉ
ｎｅ　ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ（ＰＥＡ）　（１，
６７ｎｍｏ（２／１Ｒα）１００μａを加えて、３７℃
、２０分間インキュベートし、２　Ｎ　ＨＣＱ　１００
μＱを加えて反応を停止させた。ＭＡＯによって生成さ
れた（”Ｃ）Ｐｈｅｎｙｌａｃｅｔａｌｄｅｈｙｄｅ（
ＰＡＡ）を抽出するために抽出液としてｔｏｌｕｅｎｅ
　２　ｍＱを加えて１０秒間激しく振盪させ、１２時間
ぐらい置いて、有機溶媒層１．ＯｍＱをバイアル瓶に採
取し、シンチレータ−８１１ＩＱを加えて５ｃｉｎｔｉ
ｌｌａｔｉｏｎ　ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒで反応生成
物中のｒｅｄｉｏ　ａｃｔｔＶｔｔｙを測定した。ＭＡ
Ｏ活性は生成された（”Ｃ）ＰＡＡ量で表示した。結果
を表３に示す。

（４）タンパク質、ＤＮＡおよびＲＮＡの定量肝臓、心
臓、腎臓それぞれに蒸留水を加えて１０％ホモジネート
を作製し、また同容量の１０％ＴＣＡを加えた。続いて
３．５００ｒ、ｐ、ｍ、　５分間遠心し、沈澱は更に５
％ＴＣＡで２回目に洗浄した。

この沈澱に１０倍の５％ＴＣＡを加えて、９５℃、２０
分間インキュベートした。３．５００ｒ、ｐ、ｍ、　　
５分間遠心した上清部分はＤＮＡ、　ＲＮＡ画分として
定量に用い、また沈澱は５％ＴＣＡで２回洗浄を行い、
１０倍の０．１Ｎ　ＮａＯＨを加えて、沸湯水中で２０
分間インキュベートし溶かして、タンパク質定量に用い
た。

（Ａ）タンパク質の測定 タンパクはＬｏｖｒｙらの方法（Ｏｌｉｖｅｒ　Ｈ，Ｌ
ｏｗｒｙｅｔ　ａｔ、　Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、
、　１９３．２６５．１９５１）で定量した。試料５μ
Ｑ１蒸留水９９５μＱ、　Ａ溶液（４％ＮａｔＣＯｓ　
：　０．２Ｎ　ＮａＯＨ：　２％Ｃｕ５Ｏ＊：　　４％
酒石酸カリウム、ナトリウム＝５０：　５０：　１　：
　ｌ）　４　ｍＱそれぞれを加えて、混ぜてｌＯ分間装
いて、Ｐｈｅ−ｎｏｌ　ｒｅａｇｅｎｔ（２倍に稀釈さ
せた）０．２ｔＱを加えてまた室温で３０分間装いて、
７００ｎｍで吸光度を測った。牛血清アルブミンを標準
品として使用し、標準曲線を作成した。

（Ｂ）　ＲＮＡの測定 ＲＮＡ、　ＤＮＡ画分０．２ｔＱを用い、蒸留水３．３
ｔＱ。

０．１％　０ｒｃｉｎｏｌ　ｒｅａｇｅｎｔ　（Ｏｒｃ
ｉｎｏｌを０．１％ＦｅＣＱ３濃塩酸溶液で溶かして、
０．１％にした。）　２．５ｔＱを加えて、沸湯水中で
２０分間インキュベートし、冷却後６８０ｎｍで吸光度
を測定した。

（Ｃ）　ＤＮＡの測定 ＲＮＡ５ＤＮＡ定量用試料０．５−を用い、蒸留水ｉ、
ｓｔｒｒＱＳｄｉｐｈｅｎｙｌａｍｉｎｅ　ｒｅａｇｅ
ｎｔ　（ｄｉｐｈｅｎｙｌａｍｉｎｓｌ　ｇ　：　ａｃ
ｅｔｉｃ　ａｃｉｄ　１００ｍａ：　ＨＣＱｏ、　１０
ｔａＱの割合で調製し、使用直前に１．６％ａｃｅｔａ
ｌｄｅｈｙｄｅ　１　ｒｔｒＱを加えた）４ｔＱを加え
て、６０℃で１時間インキュベートし、５９５ｎｍで吸
光度を測った。

ＲＮＡ、　ＤＮＡの標準品を別々に用いて、検量曲線を
作成した。

結果を表４にまとめて示す。

実験例２　毒性試験 ｄｄＹ系５週齢適齢マウス１群５匹に、有効成分物質５
０１ＩＩｇ／ｋｇ及び１００　ｒｔｒｇ／ｈｅをそれぞ
れ連日１４日間、皮下投与したが、何ら毒性は見られな
かった。

実験例３　毒性試験 ５週齢のウィスターラット１９１０匹に、有効成分物質
３０ｒａｇ／ｋｇを連日２１日間、皮下投与したが、何
ら毒性は見られなかった。

本発明において使用するノナペプチド（ＦＴＳ）は動物
由来のペプチドであり天然物質であるので、類似のアミ
ノ酸配列を持つＦＴＳ類縁体（アナローブ）と異なり、
生体においても全く無毒であり、抗原性、アナフラキシ
ーショツクなどの問題も存在しない。また、本発明の薬
剤は老化を促進する活性酸素の作用を防護するＳＯＤの
活性を増強し、また他の老化指標を改警することより抗
老化作用を有することが明らかにされ、老化防止剤、細
胞賦活剤、老人病予防・治療剤などとして動物に適応し
うる。従って、本発明に係る薬剤は、安全かつ有用な医
薬、動物薬として使用することができる。

特許出願人　三井東圧化学株式会社 特許出願人　三井製薬工業株式会社

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 下記のアミノ酸配列を有するノナペプチド ｐＧｌｕ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−
   Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ又は、そのＣ末端のアスパラギ
   ンのカルボキシル基におけるエステル、アミド又は、そ
   れらの薬学的に許容し得る塩を有効成分として含有する
   ことを特徴とする老化防止、細胞賦活、老人病の予防・
   治療のために使用する薬剤。