JPH01318958A - 乾式分析要素 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は生化学液及び生体液のような液体を分析するの
に用いる乾式分析要素に関する。

〔従来の技術〕

一般に生物化学の研究の領域において、緩衝剤としては
、１９６９年クラレりドン　プレス（０１ａｒｅｎｄｏ
ｎ　Ｐｒｅｓｓ　）　（オフスフオード）発行、Ｒ，Ｍ
、　Ｏ，ダウンン（Ｒ，Ｍ、　Ｏ，Ｄａｗｅｃｌｎ　）
　　ほか編、データ　フォア　バイオケミカル　リサー
チ（Ｄａｔａ　ｆｏｒ　Ｅｉｏａｈａｍｉｃａｌ　ｆｔ
ｅｓｅａｒｃｈ　）　！　２版、第４７６〜５０Ｂ頁に
記載されているような各種の無機化合物よシなるものが
使用されている。

しかしながら、それらの無機化合物よりなる緩衝剤は、
多層分析材料の試薬層において緩衝剤として使用するた
めには、緩衝作用を有するｐＨ領域の範囲、及び試薬層
に均一に分散して基質と試薬との反応を円滑に進行させ
、かつ反応によシ生成するアンモニアなどを効率よく遊
離させる機能、あるいは指示薬の発色若しくは変色など
を再現性良く発現させる機能において充分満足できると
は言い難い。

以上のような理由から多層分析材料の試薬層において作
用する緩衝剤としては、通常トリス（Ｔｒｌｍ　）　　
と呼ばれているトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタ
ンなどが一般的に用いられている。しかしながら、この
トリスは、ベーテス（Ｄａｔｅｓ　）ほか、アナリテカ
ル　ケミストリー（ムｎａｌｙｔｉａａｌ　Ｏｈｅｍｉ
ａｔｒｙ　）　　第５５巻、第１２８５頁（１９６０）
などに報告されているように空気中の炭酸ガスを吸収す
る傾向があるため、多層分析材料の保存性及び測定値の
精度などに問題がある。

このため、例えば、多層分析材料の一種である尿素窒素
分析用多層分析材料を開示した特開昭５２−３４８８号
公報、特願昭５６−１７６２７４号明細書及び特願昭５
６−１７６２７５号明細書の各々の実施例においては、
通常ピシン（Ｂｉｃｉｎｅ　）　　と呼ばれるＮ、Ｐａ
−ビス（２−ヒドロキシエチル）グリシンが用いられて
いる。

とのピシンは、一般にグツド（Ｇｏｏ（１）　　の緩衝
剤として知られておシ、バイオケミストリー（Ｂｉｏｃ
ｈｅｍｉｓｔｒｙ　）第５巻、第２号、第４６７〜４７
７頁（１９６６）に記載されている生物化学の研究にお
いて使用され得る有機化合物系の緩衝剤の１つである。

しかし、このビシンもまた、水、特に試薬層若しくは試
薬層に液体的に接触する層の支持構造体となる物質（バ
インダー）、例えば、ゼラチン、ポリアクリルアミドな
ど、そして基質分解性物質及び／又は指示薬などを含有
する水溶液に対する溶解性が低いとの欠点がある。

試薬層は、通常、そのような支持構造体と各種試薬を含
有する水溶液（又は水分散液）５Ｉ：透明支持体の表面
に塗布することによシ形成するが、そこに含有させる緩
衝剤の溶解性が充分でないと、試薬層の塗布操作時ある
いは、塗布層の乾燥時などにおいて緩衝剤の局部的な析
出などが発生し、均質な塗布層、すなわち均質な試薬層
の形成を妨げる結果となる。不均質な試薬層は、測定精
度を下げるなど、好ましくない影響を与えるため、その
ような不均質な試薬層の生成を防ぐ必要がある。この理
由から、多層分析材料を製造する工程において、塗布操
作を行うための試薬層形成用塗布溶液の濃度、温度、塗
布操作条件などを厳しく管理する必要があシ、多層分析
材料の製造上において大きな障害となる。

特開昭５９−１２５５５号では、上記の欠点を改良する
ために、１ａ−２−ヒドロキシエチルピペラジンーＮ′
−２−ヒドロキシプロ／くノー６−スルホン酸（）ｌ］
１ｎＰＰ８０　）塩及びＮ−２−ヒドロキシエチルピペ
ラジン二ｍ′−ｓ−プロ／くンスルホン酸（ＥｒＦ３　
）塩を用いることが開示されている。

〔発明が解決しようとする課題〕

しかしながら、１１１！！ＰＦ３０塩及び’ＡＰＰＥ３
塩は、本発明者らが実験した場合、保存安定性に嬢があ
った。

本発明の目的は、保存安定性が改良された緩衝剤を含有
する乾式分析要素を提供することにある。

〔課題を解決するための手段］ 本発明を概説すれば、本発明は乾式分析要素に関する発
明であって、液体試料中の活性成分を分析するための乾
式分析要素において、Ｍ−２−ヒドロキシエチルピペラ
ジン−Ｂ’−２−エタンスルホン酸又はその塩を含有し
ていることを特徴とする。

本発明者らは、公知の多数の緩衝剤を検討した結果、前
記の欠点を改善し、保存安定性を飛躍的に改良した乾式
分析要素を見出した。

すなわち、緩衝剤としてＮ−２−ヒドロキシエチルピペ
ラジン−Ｎ′−２−エタンスルホン酸（以下、）ＩＩＣ
ＰＫ８　　と略す）又はその塩を用いることによりｐａ
ｔｓ〜＆３に緩衝領域５ｃ有し、液体試料中のアナライ
）１一定量するための乾式分析要素を精度良く、保存安
定性に唆れたものにすることができた。

本発明に用いられるＨＩＰｍ１３又はその塩は分析要素
中に含有されていれば効果があるが、親水性の層に含有
させるのが最も効果的でめる。親水性の１−とは親水性
バインダー具体的にはゼラチン、寒天、デンプン、各種
の親水性ポリマー、親水性高分子等からなる層である。

該ＨＲＰ］ｌＣ８塩を含有させるには、分析要素を形成
するだめの各種試薬を含む液に、水浴液とした後、ある
いは直接ＨＫＰｊｌｉ１３を添加し、その後アルカリ性
物質を添加すればよい。

添加量は構成要素層の種類、使用する化合物の種類等に
より異なるが、概してバインダーとしてゼラチンを用い
る場合ゼラチン１２当プＨＥｉＰＥｉ日を１００〜６０
０ｑ、好ましくは１５０ｑ〜４００ｑの範囲で使用する
ことが望ましい。

親水性ポリマーをバインダーとして用いる場合は、親水
性ポリマー１２当りＨ元ＰＫ８を５０〜５００ＭＩ、好
ましくは１００〜３５０ｑの範囲で使用することが望ま
しい。

ＨＫＰＥＩ３のカウンターイオンはアルカリ性イオンで
あれば、いずれでも構わないが、ナトリウムイオンかカ
リウムイオンが好ましい。ｐＨは６５〜＆３の範囲が好
ましい。

本発明が適用できる分析要素としては液体試料を用いる
ものであればいかなる分析要素でも適用可能であるが特
に生化学分析でのクレアチニン、ＨＤＩＪ−コレステロ
ールカルシウム、コリンエステラーゼ活性、クレアチン
ホス７オキナーゼ活性のいずれかの定量用の乾式分析要
素の場合に好結果が得られる。

〔実施例〕

以下、実施列をもって本発明を具体的に説明するが、本
発明はこれら実施列に限定されない。

Ｑ分析素子−１ 透明な下塗シ済み厚さ約１８０／Ｊｍのポリエチレンテ
レフタレート支持体上に下記組成の層ヲ積層して、クレ
アチンホスホキナーゼ（ＯＰＫ）分析素子を作成した。

（試薬層） ゼラチン　　　　　　　　　　　２　ｔ５９７ｍ”トリ
トン！−１００（ロームアント５１−ス社）　　　　　
２．１ｒ／ｍ”１．２−ビス（ビニルスルホニル）エタ
ン　　０．０２ｔ／ｍ”へ５’−（４，４’−ビフェニ
レン）−ビス（２，５−ジフェニル−２１テトラゾリウ
ムクロリド）　　　　　１．０５Ｐ／ｍ”１１−２−ヒ
ドロキシエチルピペラジン−ｋｌ’−２−エタンスルホ
ン酸ナトリウム（ＨＩＰＩＩ！＋３−Ｎａ　）　　　　
６．９９７ｍ”牛血清アルブミン　　　　　　　　Ｌ６
ｔ／ｍエジアホエステラーゼ　　　　　１００００７ｍ
工（接着層） ビニルピロリドン／酢酸ビニル共重合体（重合比２　：
　８　）　　　　　　　　　　　　　ｔ２１７ｍ”（展
開層） ｐ紙原材料用繊維　　　　　　　９１７９７ｍ”ト　リ
　ト　ｙ　　Ｘ　−１００９，５９７ｍ”スチレン／グ
リシジルメタクリレート共重合体（重合比９：１）　　
　　　　　　　　　　２五２　ｔ　／ｎ＠”β−ニコチ
ン酸アミドアデニンジヌクレオチド酸化型（β−１１Ａ
Ｄ　　）　　　　　　　　　　２．８ｔ／ｍ”クレアチ
ンリン酸（ＯＦ　）　　　　　　１２９７ｍ”アデノシ
ン−５′−ニリンｒ１＆（ＡＤＩ’　）−カリウム塩１
８１／ｍ” グルコース　　　　　　　　　　　１．０？／ｍ”酢酸
マグネシウム　　　　　　　（Ｌ　７５１７ｍ”Ｎ−ア
セチル−Ｌ−システィン　　　　　　　α５１／ｍ”ア
デノシン−５′−一リン酸（ＡＭＰ）−２−ナトリウム
塩　　　　　　　　　　　　　　　　２．２？／ｍ”へ
キンキナーゼ　　　　　　　　６６００　ＴＪ／−２グ
ルコース−６リン酸脱水素酵素（０６ＰＤＨ）６０００
　Ｕ／ｙ工 ７スコルピン酸オキシダーゼ　　　　　　７６００　Ｕ
／ｍ”比較分析素子−２〜？ 分析素子−１においてＨＩＰＫ８−　Ｎａ　を用いル代
わシに第１表に示した物質を用いて、単位面積当シの量
以外は同様に調整した分析素子第１表 実施例１ 分析素子−１と比較分析素子−４４，５’ｉ　５℃、３
０℃及び４０℃の温度下で９８時間放置した後、ｃｐｘ
を４７５ｔＪ／Ｌ含む検体を滴下して、５℃保存の挙動
と比較し保存安定性を調べた。

結果を第２表に示す。

第２表　　保存安定性 （５℃での値を１００とした時の３０℃、４０℃での値
の１００からのずれ） 測定は、検体１０μＬを滴下した後、専用測定器を用い
て３７℃にインキュベートした後、比較分析素子、及び
分析素子の３分生から７分までの反射濃度の差を求めた
。この測定値を各々の素子の検量線で変換しＣＩＩＫ活
性を求めた。

第２表に示すように４０℃の保存条件下で、比較分析素
子の劣化度合が１０係程度もあるのに対し、ｎ１ｐｘｓ
を用いた分析素子１は４％以内の変動に留まる。これに
よシ、Ｈ１１ｉＰＢ８を用いた分析素子は保存安定性に
浸れることがわかる。

実施列２ 分析素子−１と比較分析素子−２，６，７，８，９にＯ
Ｐ　Ｋ　（１０００Ｕ　／　Ｌ　、　２００　Ｕ　／Ｌ
）を含む検体を滴下し、実施例１と同類にして、反射濃
度差を測定し、識別能を比較した。

結果を第３表に示す。

第３表 １０００１３／Ｉａと２００　Ｕ　／　Ｌでの反射濃度
差の差が大きい程高い識別能があることを示す。

第３表に示すようにＨＫＰ’Ｒ１３を含有する分析素子
−１が他の比較分析素子に比べて識別能に優れることが
わかる。

〔発明の効果〕

以上詳説したように本発明に用いられるＮ−２−ヒドロ
キシエチルピペラジ／−Ｍ’−２−エタンスルホン酸又
はその塩を含有させることによシ織別能と保存安定性に
愛ｎた乾式分析要素の製造が可能でるり、実用的に極め
て有効である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、液体試料中の活性成分を分析するための乾式分析要
   素において、Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ
   ′−２−エタンスルホン酸又はその塩を含有しているこ
   とを特徴とする乾式分析要素。 ２、該分析要素が、少なくとも１層の親水性層、及びそ
   の上方に多孔性展開層を有する多層構造のものである請
   求項１記載の乾式分析要素。 ３、該スルホン酸又はその塩が、該親水性層に含有され
   ている請求項２記載の乾式分析要素。