JPH01319499A

JPH01319499A - 核酸分離装置

Info

Publication number: JPH01319499A
Application number: JP11357489A
Authority: JP
Inventors: Hansruedi Dr Kiefer; ハンスルエディ　キーフェー
Original assignee: F Hoffmann La Roche AG
Current assignee: F Hoffmann La Roche AG
Priority date: 1988-05-06
Filing date: 1989-05-02
Publication date: 1989-12-25
Also published as: DK222289A; EP0340609A2; EP0340609A3; DK222289D0

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】［産業上の利用分野］本発明は、細胞或いは組織抽出物から沈澱工程により核
酸を分離するための装置であり、必要なら洗浄サイクル
をともなう沈澱反応をおこなうための試験管と、溶媒及
び試薬等の供給と放出のために試験管に接続される液体
導管と、供給と放出を制御するための導管内のバルブと
、試験管を動かすための装置とを有する装置に関する。

［従来の技術］核酸の分離の既知の方法は二段階システムに基づき、そ
れらの段階は第一に混合されそれから分離されねばなら
ない。通常は遠心分離が分離のため達成される。そのた
め、核酸の分離のための装置は従来技術による遠心分離
器である。

新しい方法（スイス特許出願Ｎｏ、　１５７３　／　８
７　、１９８７年４月２４日）は、適正に処理された細
胞或いは組織抽出物から水溶性ケトンで核酸を沈（殿さ
せる事を含んでいる。

［発明が解決しようとする課題］本発明の目的は、新規な沈澱方法が達成され得る核酸分
離用装置を提供する事である。

［課題を解決するための手段］この課題のために本発明によれば、前文に参照される種
類の装置は、沈澱した核酸を濾過して取り除くための導
管がフィルターを介して試験管に接続される事を特徴と
する。

好適実施例によれば、同じ試験管のグループは対応する
導管とバルブとフィルターとを備えている。本発明のそ
の他の実施例によれば、試験管を移動させる装置は棚を
有しその棚内に試験管は配置され又その棚は試験管が傾
けられ得るように回転可能につりさげられでいる。

［実施例１第１図では、装置は大区画２と小区画３とよりなるハｉ
クジング１を有している。二つの区画はそれぞれ前部に
カバー４，５をそれぞれ有し、それらのカバーを通して
それらは特に前部から接近可能である。大区画２は又フ
ラップ７を通して接近可能な底棚６を有している。

区画２の内側に棚８が在り、棚８は試験管を収容するた
めに使用され又二つの向き合う地点で回転可能につりさ
げられ、それによりそれは軸線９の回りに傾けられ得る
。傾き移動はフレーム８の破線と矢印１０により示され
る。棚８の構造は第３図に完全に示される。

底棚は多数のバルブ１１．１２等を有し、それらの機能
は第２図から明らかになるだろう。底棚６と区画２の底
部分との間には開口２４が在り、開口２４を介して接続
導管はバルブから棚へ通じている。これらの接続導管は
明瞭化のために第１図から省略されている。

それらは第２図から概略形態に於いて明らかになるであ
ろうし、又棚８の傾き移動を許容するのに充分な長さと
柔軟性を有するようにそれらは装置を介して捕えられる
。導管の通路は基本的にはポリテトラフルオルエチレン
製であるが、このことば重要ではなく専門家により要求
されるよう改造できる。

小区画３は制御電子装置（図示されず）を収容するよう
にされ又制御並びに表示装置２６を有する壁２５を有し
ている。区画３の底には貯蔵容器２７を挿入するための
収容装置が在り、貯蔵容器２７は達成されるべき沈澱工
程に必要とされる試薬と洗浄液体とを収容する。ホース
（図示されず）はこれらの容器２７から区画３の内側の
ポンプ（第２図のモータービユレット）を経てバルブ１
１．１２等に通じる。

区画３は、バルブと棚８駆動モーターとのための基本的
に従来技術の電子制御回路即ち完全な分離工程のための
シーケンス制御システムを有している。

第２図は、液体導管とその他の装置の基本要素へのそれ
らの接続との関連する配置を示す。付属するフィルター
３２ａ　−３２１を伴う十二本の試験管３１ａ−３１は
ここでは破線で示される棚８内に配置されている。試験
管は三つのグループに分けられ、それらの各々は四本の
試験管と四つのフィルターとを有している。

試験管３１ａとフィルター３２ａとよりなる組み合わせ
は導管を介してバルブ１８ａに接続される。同じ事が組
み合わせ３１ｂ、３２ｂ等に適用される。バルブグルー
プ１８ａ　−１８ｄは共通の導管１９と入口バルブ１５
どを介してモータービユレット２２の出口に接続される
。導管１９は又バルブ１８ａ　−１８ｄを出口バルブ３
３を介して放出導管３６へ接続する。バルブグループ１
８ｅ　−１８ｈは同様に共通導管２０を介して、一方で
は人口バルブ１６を介してモータービユレット２２の出
口に接続され、又出口バルブ３４を介して放出導管３６
へ接続される。バルブグループ１８ａ−１８１は共通導
管２１と人口バルブ１７とを介してモータービユレット
２２に接続され、又出口バルブ３５を介して放出導管３
６へ接続される。この形式のバルブ組み合わせにより、
複数のグループにより又個別にの両方で、液体を試験管
に供給し又試験管から液体を放出する事が可能となる。

モータービユレット２２の入口は入口バルブ１１１２）
１３．１４を介して試薬及び洗浄液体用貯蔵容器に接続
されている。モータービユレット２２と入口バルブ１５
−１７との間の接続導管は又バルブ２３を介して放出導
管３６へ接続されている。このバルブ２３はバルブ１５
−１７のうちの一つが開いている限り循環式に閉鎖され
る。一方バルブ２３は三つのバルブ１５−１７の全てが
閉じている時開く。この事の目的は、モータービユレッ
トが閉鎖されたバルブに対して作動しないようにする事
である。バルブ２３はこうして安全弁の機能を有する。

導管３７−３９は父上から試験管３１を通じ、又バルブ
４０−４２を介して窒素用圧力導管４３へ接続される。

バルブ４０が開く時窒素は圧力が加わって試験管に送ら
れ、それによりそれらの中身が組み合わされたフィルタ
ーを介して絞り出される。同じことがバルブ４１又は４
２が開く時試験管のその他のグループに適用される。絞
り出された中身はバルブ１８を経て導管１９．２０．２
１まで通過しそれからバルブ３３．３４．３５を経て放
出導管３６まで通過する。

ビユレット２２の出口はバルブ劇を介して窒素圧力導管
に接続される。バルブ４４はビユレットがその出口に於
いて圧力を発生していない時常に開く。このようにして
、バルブ１５−１７への供給導管は常に窒素雰囲気下に
在る。ビユレット２２のプランジャーが進んだ時バルブ
Ｍは閉鎖される。貯蔵容器からバルブの組み合わせを経
ての試験管までの液体の移動のシーケンス並びに試験管
から放出導管までの液体の移動のシーケンスは第２図か
ら最も明瞭になるであろう。動作は次のようである。

個々の試験管３１は棚８内に配置され、それによりそれ
らは緊密な封止関係で対応するフィルターに接続される
。それらはそれから細胞或いは組織抽出物で満たされ、
又もし要求されるなら第一の試薬も加えられる。それら
の頭部開口はＮ　素圧力導管へ通じる導管に緊密な封止
関係で接続される。総ての試験管が満たされる時、動作
のシーケンスのためのプログラムがスイッチを入れられ
る。プログラムの開始時にモータービユレット２２のプ
ランジャーはその前進位置に在り、液体が取り込まれる
のを可能にする。バルブ１１は制御システムからの命令
時に開き、ケトン・水混合体を収容する貯蔵容器の一つ
から来る導管を制御する。同時にビユレット２２は取り
入れ動作を開始し５０ｍ１の量のケトン、水混合体を取
り入れる。

取り入れ動作の完了に際し、バルブは切り換えられバル
ブ１５は開口する。同時にバルブ１８ａは開口し一方パ
ルブ３３は閉鎖される。ビユレットはそれから取り入れ
られた液体を噴出する指令を受け、取り入れられた液体
はバルブ１５．１８ａを経てフィルター３２ａを経て試
験管３１ａまで通過する。バルブ１８ａはそれから閉鎖
され又間物の動作はバルブ１８ｂと共に繰り返される。

試験管３１ａ　−３１ｄが満たされるまで手順はその他
のバルブと同様である。試験管３１ｅ　−３１ｈは同様
にバルブ１６と共に並びに続いて起こるバルブ１８ｅ　
−１８ｈの開口と共に操作される。

総ての試験管が満たされた時、混合物は室温での棚８の
規則的な傾き移動により完全に混合される。核酸の沈澱
に充分な時間が経過した後、棚の移動は停止されバルブ
３３　、３４．３５は開かれる。同時にバルブ１８と窒
素を導入するバルブ４０−４２が開かれる。窒素は総て
の液体をフィルター３２を通して滲み出させ、液体は放
出導管３６へ通過する。

沈澱された核酸はフィルター３２に止まる。滲み出し動
作の後、バルブ１８．３３−３５．４０−４２は再び閉
鎖され、バルブ１２．　Ｉｓ、　１８ａが開かれる。ア
ルコール・水混合物がそれからバルブ１２を介してビユ
レットにより取り入れられ、バルブ１５．１８ａを介し
て試験管３１ａ内に押し込まれる。同様に手順がその他
の試験管に適用される。このような方法で沈澱された核
酸が洗浄される。洗浄動作は何回も繰り返されても良く
、必要なら他の洗浄液体で行われる。このような方法で
水の中で分解され得る純粋な核酸がフィルター内に得ら
れる。

棚８は第３図に詳細に示される。それは、側部４５．４
６と底横断部材４７と頭部横断部材４８とで作られるフ
レームより成る。スタッド４９は二つの側部に設けられ
軸線６を形成しその軸線の回りで棚が、既に述べたよう
に傾けられる。

矢印５０で示されるように、頭部横断部材は垂直方向に
調整可能である。レバー機構（示されず）が調整のため
に使用される。垂直方向の目的は以下に詳細に説明され
る。

十三の同一な容器５１は互いに等しい距離で底横断部材
に設けられ、各々の場合に二つの半分５２゜５３より構
成され、それらは共にねじどめされ管状接続部５４を介
して横断部材４７に接続される。容器５１はフィルター
３２を収容するため使用される。頭部にそれらは開口５
５を有し、その開口は試験管３１の先端を収容する。導
管５４は横断部材の底部でホースに接続され、ホースは
バルブ１８に通じる。

この場合、試験管３１は適切な容量の商用の使い捨て注
射器よりなる。第３図に示される様に、異なるサイズの
注射器を使用する事が可能である。

十三の円筒状ホルダー５６が容器５１と試験管３１とに
関し同軸上に頭部横断部材に設けられている。ストッパ
ー５７はキャップスクリュー５８によりホルダーにねじ
どめされ、試験管３１を閉鎖する。

第３図の左手の側の二つの変形物から明らかになるよう
に、ストッパー５７は異なるサイズの試験管を閉鎖する
ために異なる高さにある。

横断部材４８の垂直方向の調節可能性は試験管の開口と
閉鎖に使用される。第３図の左手部分は、横断部材を上
昇位置に移動させる事により達成される開口状態を示し
ている。図面の右手半分は、横断部材４８がその最低位
置に在る閉鎖状態を示している。

バルブ４０　、４１　、４２に通じる接続ホース６０は
ストッパー５７と共に個々のホルダー５６まで延在して
いる。既に述べたように、窒素はこれらのバルブを介し
て送られ、試験管の内容物を滲み出させる。

ホルダーの内側でホース６０は、ストッパー５７を通っ
て延びる適当な導管（示されず）内に通じる。

【図面の簡単な説明】

第１図は装置の概略斜視図、第２図は第１図に示された
装置の環路線図、第３図は試験管機の概略斜視図。１・・・ハウジング、２・・・大区画、３・・・小区画
、６・・・底棚、８・・・棚、９・・・軸線、１１・・
・バルブ、１２・・・バルブ、１９・・・導管、２２・
・・ビユレット、２４・・・開口、２７・・・貯蔵容器
、３１・・・試験管、３２・・・フィルター、３５・・
・出口バルブ、３６・・・放出導管、４７・・・底横断
部材、４８・・・頭部横断部材、５１・・・容器、５６
・・・ホルダー、５７・・・ストッパー、６０・・・接
続ホース。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）細胞又は組織抽出物から沈澱工程により核酸を分
離する装置であり、必要により洗浄サイクルをともなう
沈澱反応をおこなうための試験管と、溶媒の供給と放出
のために試験管に接続される液体導管と、供給と放出を
制御するための導管内のバルブと、試験管を移動させる
装置とを有する分離装置に於いて、フィルター（３２ａ
−３２ｌ）が設けられそのフィルターを介して沈澱した
核酸を濾し取るための導管（１９、２０、２１）が試験
管（３１ａ−３１ｌ）に接続される事を特徴とする、分
離装置。
（２）特許請求の範囲第１項による装置にして、同一の
試験管の一つのグループは対応する導管とバルブとフィ
ルターとを備えている事を特徴とする、分離装置。
（３）特許請求の範囲第１項による装置にして、試験管
を移動させる装置は棚（８）を有し、棚の中に試験管が
配置され、棚は試験管が傾けられ得るように回転可能に
つりさげられる事を特徴とする、分離装置。