JPH0134204B2 - - Google Patents

Description

明細書 畜殺血液は価値ある成分、すなわち栄養価値お
よび食品の感触改善剤として有用にする機能上の
性質を有するタンパク質およびさらに求められて
いる鉄分補給剤であるヘム（heme）を含有する。 血液中のタンパク質の主要部を占めるヘモグロ
ビンはヘムの故に鉄の味を有する。従つて、ヘモ
グロビンを鉄を含有しないグロビンとヘム コン
セントレートとに、タンパク質およびヘムの機能
上の性質が保有されていてその生成物を高い価値
あるものとするようなやり方で分解する方法の開
発は関心を集めている。 良く知られているように、タンパク質は容易に
変性され、たとえば高PH（９〜10以上）で処理す
ると、そこでその機能上の性質を失なう。この変
性は０℃より低い低温で処理すると解消される。 ヘムが医薬として有用でありうるためには、す
なわち鉄が容易に吸収される形で存在しうるため
には、ヘムは生来の形で存在せねばならない。ヘ
モグロビン中において、ヘムは生来の形で存在
し、知られているようにその中から鉄が容易に吸
収される。 硫酸鉄のような慣用の鉄製剤からはその鉄分の
１部分だけが吸収される。これは食品中に存在す
る或る種の物質〔たとえばフイテート
（phytates）〕が吸収を妨害するからである。この
欠点はヘムをベースとする鉄には存在しない。 ヘムは重合して、難溶性の凝集体を形成する傾
向が強く、このような凝集体からの鉄は吸収され
えない。ヘモグロビンをヘムおよびグロビンに分
解し、アセトンまたはメチルエチルケトンで抽出
することによりヘムを分離する既知の方法は重合
したヘムを生成する。 本発明はヘモグロビンを分解すると得られるヘ
ムと血液物質との混合物からヘム コンセントレ
ートを採取する方法に関する。 ヘム、鉄ヘムは鉄とプロトポルフイリンとから
なり（たとえば、Textbook of Biochemistry.
West＆Todd，MacMillan Co.，1961.p533）、ヘ
モグロビンの非タンパク質部分を構成し、そして
ヘモグロビンに基づき3.8重量％に相当する量で
存在する。 原料物質として、ヘモグロビンをヘムとグロビ
ンとに分解することにより得られるヘム生成物を
用いると好ましい。 分解は種々の異なる方法で、たとえばヘモグロ
ビンを酸またはアルカリ性環境中で処理すること
により実施できる。 原材料は、たとえば全体血液、赤血球または別
の環境からのヘモグロビンを包含できる。 特に好適な原料物質はスウエーデン国特許第
7407882−５号およびスウエーデン国特許出願第
7513987−３号に記載の方法による分解されたヘ
ム生成物である。この方法に従い、ヘモグロビン
を少なくとも40容量％のエタノール含有量を有す
る水性エタノール溶液中で4.5より小さいPHにお
いて分解させる。かくして形成されたヘム生成物
の沈殿を分離する。残りのグロビン溶液は実質的
にヘムを含有しない。 この既知の生成物はヘム約10重量％を含有する
が、残りはその他の血液物質、ほとんど同様に主
としてタンパク質、よりなる。さらにまた、この
ヘム生成物は多分、リポプロテイン、リピド、ホ
スフアチジル化合物およびコレステロールのよう
な血液物質を含有する。 新しい方法に従い、約40重量％のヘム含有量を
有するヘム コンセントレートが得られる。その
組成は未知である。このヘム コンセントレート
は貧血症に対する医薬としておよび食品に対する
鉄補給剤として使用しようとするものである。 同時に採取される血液タンパク質、主としてグ
ロビンは食品および餌における用途が意図され
る。 本方法は技術的におよび経済的に、工業的規格
で実施できる。 本発明による方法に従い、上記ヘム原材料を脱
水剤、好ましくは低級アルコールまたはアルコー
ルの混合物および（または）ケトンおよびエステ
ルで処理する。この処理は ａ 少なくとも8.0、好ましくは9.0〜10.5のPHで、
または ｂ 式：

【式】

【式】

【式】 〔ここで、置換基は次の意味を有する： −Ｒ（Ｒは飽和または不飽和アルキルまたはア
リールまたはCH₃である）−Ｈ、 −Ｒ（Ｒ）_o，−COOH，−Ｒ（COOH）_o，−COOR，
−Ｒ（COOR）_o， −OH，−ROH，−Ｒ（OH）_o，−Ｒ（OH）_oＲ， −OR，−ROR，−Ｒ（OR）_o， −NH₂，−Ｒ（NH₂）_o，−NR₂，−RNR₂，−N₂R， −CN，−Ｒ（CN）_o， −Cl，−Ｒ（Cl）_o，−Ｆ，−Ｒ(F)_o，−Br，−Ｒ（B
r）
_o，−Ｊ，−Ｒ(J)_o， −NO₂，−Ｒ（NO₂）_o， −COR，−Ｒ（COR）_o，−Ｒ（COCOOH）_o，−Ｒ
（COCOOR）_o，−OCOR， −SH，−Ｒ（SH）_o，−SR，−Ｒ（SR）_o，−Ｓ−Ｓ
−，−Ｓ−CS−Ｓ−，−SO₂H，−SO₃H， −RNHCOOH，−RNHCOOR，−Ｒ（NH）_oＲ
（OH）_o，−Ｒ（NHCOR）_oCOOH，−Ｒ（NHCOR）_o
COOR， −NHCOOH，−NHCOOR，−Ｒ（NHCOOH）
_ｏ，−Ｒ（NHCOOR）_o，−Ｒ（NH₂）_o（COOH）_o， −Ｒ（NH₂）_o（COOR）_o，−Ｒ（COOH）_o
NHCOOH，−Ｒ（COOR）_oNHCOOR，−RN（Ｒ）
ROH， −Ｒ〓Ｒ（NH₂）_oOH〓_o， −CONH₂，−Ｒ（CONH₂）_o，−CONHNH₂，−
Ｒ（CONHNH₂）_o，−NHCONH₂，−Ｒ
（NHCONH₂）_o， −NHCOR，−RNHCOR，−CONHR，−
RCONHR，−CON₃，−Ｒ（CON₃）_o，−
RCOOHNHCORNH₂， −SO₂NHR，−SO₂RNHCOOR，−
CONHNHSO₂R，−RSO₂R， −NHNO₂，−RONO₂， −RClCOOH，−RClCOOR，−RFCOOH，−
RFCOOR，−RBrCOOH，−RBrCOOR， −RJCOOH，−RJCOOR， およびさらに、X₄およびX′、および（または）
X₅およびX₅′は＝Ｏ、＝NH、＝Ｓ、＝CHR（NO₂）
_ｏ，＝Ｎ（H₂PO₄）または＝CHRで置換（交替）さ
れることができ、そしてイミダゾリン化合物Ibに
ついては、さらにX₄およびX₄′および（または）
X₅およびX₅′、並びにイミダゾリン化合物Icにつ
いては、さらにX₂およびX₂′，X₄およびX₄′、お
よび（または）X₅およびX₅′はまた＝Ｏ、＝NH、
＝Ｓ、＝CHR（NO₂）_o，＝Ｎ（H₂PO₄）および＝
CHRにより置換されることができ、置換基式に
おいてｎは１〜５の数である〕の化合物、または アンセリン

【式】 カルノシン エルゴチオネイン

【式】 ヒスタミン イミダゾリル−CH₂CH₂NH₂ ヒスチドール イミダゾリル−CH₂CH₂OH ジメチルヒスタミン ヒスチジン

【式】 ピロカルピン

【式】 ピロシニン

【式】 チオールヒスチジン

【式】 ヘルサイニン

【式】 イミダゾリルグリシン〓イミダゾリル−CH
（NH₂）COOH〓 イミダゾリル乳酸（イミダゾリル−
CH₂CHOHCOOH） イミダゾリルプロピオン酸（イミダゾリル−
CH₂CH₂COOH） ウロカン酸（イミダゾリル−CH＝CHCOOH） ヒスタミン−チラミン
（HOC₆H₄CH₂CH₂NHCH₂CH₂−イミダゾリル） イミダゾリルアシド酸（イミダゾリル−
CH₂COOH） サルフアイミダゾール ビチミダゾール

【式】 チオールヒスタミン

【式】 のようないずれかその他の類似化合物の存在下
に、少なくとも6.0、好ましくは6.5〜8.5のPHでの
どちらかで行ない、その後、不溶血液物質を、た
とえば遠心分離または過により分離し、そして
ヘム コンセントレートを残りの溶液から、PHを
6.5より小さい値に低下させることにより沈殿さ
せ、次に採取する。 ヘモグロビンをヘムとグロビンとにアルカリ性
環境下に分解し、ヘムをたとえばアセトンまたは
メチルエチルケトンで抽出して、このやり方でグ
ロビンから分離することは従来から既知である。
この抽出は100％アセトン中で行ない、いづれか
その他の血液物質を付随しない純粋なヘムが生成
される。しかしながら、このヘムは重合されてお
り、溶解性に乏しいことが証明された（図２参
照）。 鉄ポルフイリンをヘモグロビンまたはグロビン
にPH８〜９で結合させることによりヘモグロビン
をベースとする鉄製剤を製造することはスウエー
デン国特許公報76−00020−７から既知である。 新しい方法による場合には、ヘム コンセント
レートを溶解した形に変え、一方残りの物質を不
溶解の形で存在させるようにして、ヘム コンセ
ントレートをいずれかその他の血液物質、すなわ
ち主としてタンパク質、から分離する。 適当な抽出剤はエタノール、メタノール、プロ
パノール、ブタノール、イソブタノール、エチレ
ングリコール、およびグリセロールである。エタ
ノールは毒性がないことから好適である。 抽出剤の量は40重量％以上、好ましくは60重量
％以上でなければならない。 PH値は式の化合物の存在下に、少なくとも
6.0、好ましくは6.5〜8.5でなければならない。別
法では、PHは少なくとも8.0、好ましくは9.0〜
10.5でなければならない。 タンパク質の変性を防止するために、温度は低
く、好ましくは−５℃より低く維持する。 温度はタンパク質の変性程度に影響するだけで
あつて、反応には影響しない。 ヘム／血液物質混合物から血液物質がヘム コ
ンセントレートと一緒に同時に抽出溶液中に溶解
するのを防止するために、血液物質、主としてグ
ロビン、は抽出前に沈殿させることができる。沈
殿は、たとえば混合物のPHをグロブリンの等電PH
範囲である７〜８の値に調整することにより、お
よび（または）種々の塩を加えることにより実施
できる。適当な塩は、たとえばNa，Ｋ，NH₄ク
ロリド、硫酸塩、クエン酸塩、リン酸塩、酒石酸
塩である。 この塩の添加はタンパク質に対する通常の塩析
作用を有するが、ヘム コンセントレートの溶解
に対し特別の作用は持たない。 塩の添加は主として、抽出をそこからグロビン
部分が事前に分離されていないヘム混合物に対し
行なう場合に問題になる。 さらにまた、アミノ酸、たとえばグリシン、グ
ルタミン、またはリジンのような分離を促進する
もう１つの助剤を加えることができる。 グリシンはその他の条件が同時に理想的である
場合に、ヘム コンセントレートの収率を約99％
まで増加させる効果を有する。例８を参照された
い。グリシンを添加しないと、収率は約93〜95％
に留まる。 不溶解物質は、たとえば遠心分離または過に
より分離する。 ヘム コンセントレートは残存溶液、すなわち
上澄液または液からPH値を6.5より小さく、好
ましくは4.0〜6.0に下げることにより沈殿させ
る。黒色、薄片状沈殿が次いで形成される。沈殿
はPH値が５より小である場合により定量的であ
る。 沈殿は温度に対しむしろ非依存性であるが、沈
殿をより定量的にうるために、およびコンセント
レートを注意深く処理するために、沈殿は０℃よ
り低い温度で実施すると好ましい。 PHは、たとえば0.1M HClで下げる。沈殿は、
たとえば遠心分離または過により、分離し、次
にエタノール、塩およびイミダゾールを含有しな
いように氷水で洗浄する。 沈殿はPHをたとえば８に上げることにより水に
溶解し、得られた溶液は凍結させ、そして凍結乾
燥させることができる。 抽出溶液からのヘムの収率は約90％に相当す
る。 ヘム コンセントレートの分離は10.5より小さ
いPHでそして０℃より低い温度で実施できるの
で、タンパク質は変性されずに、または部分的に
だけ変性した形で採取され、かくしてその機能上
の性質は保有される。食品との関連において、感
触改善性を有するタンパク質はその目的から重要
である。タンパク質は約９より低いPHで採取する
と特に満足なものである。 本発明による方法で得られるヘム コンセント
レートは通常、約35〜40％のヘム含有量を有する
が、特別の場合に、より低い（15％）およびまた
より高い（55％まで）ヘム含有量を有する。 このヘム コンセントレートは多分ヘムおよび
血液物質よりなる新しい化学物質である。血液物
質と称しているその中のタンパク質の組成は知ら
れていない。本ヘム コンセントレートは物理的
に、たとえばゲル過により、その成分に分離で
きない。明白なように、この化合物はヘムがヘモ
グロビンから分解される時に広く行なわれている
条件下に形成される。40容量％より多いエタノー
ル含有量および6.0より高いPH値を有する水性エ
タノール溶液中では、この化合物はその他の血液
物質を含有しない。溶解度が良好であることか
ら、これはこれらの条件下に溶解しないその他の
血液物質から容易に分離される。 イミダゾール、イミダゾリンまたはイミダゾリ
ジンのような式の化合物またはその誘導体の存
在はヘム コンセントレートの付着性の血液物質
からの分離を促進し、かくして定量的分離が７の
PH値ですでに実施できる。 ヘム コンセントレートの良好な溶解性はヘム
が重合されずに、生来の形で存在することを示し
ている。従つて、鉄はヘム コンセントレートか
ら吸収されることができ、そして食品の鉄補助剤
および貧血症に対する医薬として使用できる。 ヘム コンセントレートの溶解性 図２は異なるPH値におけるヘム コンセントレ
ートの溶解度を例示している。ヘム コンセント
レート１は本発明に従い製造された生成物を代表
するものである。 コンセントレートをタンパク質分解酵素で、た
とえばトリプシンで処理すると、コンセントレー
トはより小さい単位に分解し、溶解度は幾分改善
される。ヘム コンセントレート２はこれを明ら
かにしている。 比較のために、ヘミンについての溶解度曲線を
グラフに描いた（Nishida，Porphyrins and
Metalloporphyrins，Kevin M.Smith.1975，809
頁により作成した）。 前記したように、ヘム製剤は鉄の吸収が生じる
腸内に広く見られるPH値、7.5〜8.2より低いか、
または等しいPH値で溶解すべきである。 ヘム コンセントレートからの鉄の吸収 鉄の吸収は臨床実験の手段により測定した。 10人の被験者にアイソトープ⁵⁵Feで標識したヘ
ム コンセントレートの水溶液を投与した。比較
物質として、アイソトープ⁵⁹Feで標識した血液を
使用した。 吸収された鉄の量は放射能測定により決定し
た。結果を表に示す。 この結果はヘム コンセントレートからの鉄の
吸収が血液からの場合とほぼ同じ程度で、しばし
ば幾分高くさえあつたことを示している。これは
ヘム コンセントレートが鉄の吸収に関して必須
である、生来の形で存在するものと判断させうる
ことである。

【表】 例 １ −８℃の温度の96容量％エタノール４mlと1M
HCl0.8mlとの混合物を−５℃の温度の赤血球の
混合物2.2ｇに、撹拌し、冷却しながら滴下して
加えた。添加後に、PH値は3.1であり、温度は−
５℃であつた。氷水３mlおよび70容量％エタノー
ル中の0.5M NaOH1.8mlを撹拌し、冷却しなが
ら加えた；混合物の温度は−５℃であり、そして
PHは7.5であつた。５分後に、混合物に96容量％
エタノール10ml、70容量％エタノール10ml、グリ
シンの1M水溶液１mlおよび0.5M NaOH2.2mlを
撹拌し、そして冷却しながら加えた。混合物はこ
こで、67容量％のエタノールを含有し、PHは10.3
であり、そして温度は−５℃であつた。混合物を
3000xgで５分間遠心分離し、かくして赤色上澄
液38mlおよび帯褐赤色ペーストが得られた。上澄
液はヘム／mlの0.18mg（原料物質のヘム含有量の
61.5％）を含有した。ペーストは70容量％エタノ
ール10mlに−５℃の温度で混合し、PHを10.3に調
整し、次に混合物を上記のとおりに遠心分離し
た。この上澄液はヘム／mlの0.13mg（原料物質の
ヘム含有量の11.7％）を含有した。ペーストは上
記と同じやり方で３回処理し、かくしてヘム／ml
の0.06mg（原料物質のヘム含有量の5.4％）を得
た。ヘム コンセントレートの総収率は78.6％で
あつた。ペーストは褐色であり、乾燥状態で0.27
ｇであつた（タンパク質収率79.5％）。 前記赤血球の混合物は次の方法で得ることがで
きる。 凝固防止剤としてクエン酸ナトリウムを含む畜
殺血液を遠心分離により分離して、血漿と赤血球
のブロスとを得た。赤血球の混合物2.2ｇがタン
パク質0.34ｇ、塩化ナトリウム0.16ｇ、100％エ
タノール0.26ｇおよび水1.44ｇ、並びに血液中に
存在する可溶性物質を含有するように、塩化ナト
リウムおよびエタノールを赤血球ブロスに加え
た。タンパク質、主としてヘモグロビン、はエタ
ノールによる沈殿により測定した。この赤血球の
混合物はピリジン法により測定して、ヘミン11.1
mgを含有した。 例 ２ 例１と同じやり方で、PHは3.1に下げ、その後
に7.5に調整した。混合物は例１と同じやり方で
抽出したが、さらに70容量％エタノール中の2M
イミダゾール１mlを加えた。PHは8.4に調整した。
上澄液は原料物質のヘム含有量のそれぞれ79％、
12％および４％を含有した。ヘム コンセントレ
ートの総収率は95％であつた。ペーストは淡褐色
であり、原料物質のタンパク質含有量の85％を示
した。 例 ３ ＋１℃の温度の水２mlと1M HCl0.7mlとの混
合物を−８℃の温度の赤血球の混合物2.2ｇに撹
拌し、冷却しながら滴下して加えた。添加後のPH
は3.2であり、そして温度は−５℃であつた。96
容量％エタノール、４ml、70容量％エタノール10
ml、1Mグリシン水溶液１ml、70容量％エタノー
ル中の2Mイミダゾール１mlおよび70容量％エタ
ノール中の2M NaOH1.5mlを撹拌し、冷却しな
がら加えた；混合物の温度は−５℃であり、PHは
8.0であり、エタノール含有量は約56容量％であ
つた。例１と同様に、５分後に遠心分離し、原料
物質のヘム含有量の59％を含有する上澄液および
褐色ペーストを生成した。ペーストは各回、8.0
のPHにおいて、70容量％エタノール10mlで２回抽
出し、原料物質のヘム含有量のそれぞれ18％およ
び８％を含有する上澄液を生成した。ヘム コン
セントレートの総収率は85％であつた。ペースト
は褐色であり、そして原料物質のタンパク質含有
量の72％を示した。 例 ４ −10℃の温度の96容量％エタノール３mlと70容
量％エタノール中の0.5M NaOH0.35mlとの混合
物を−10℃の温度の赤血球の混合物2.2ｇに撹拌
し、冷却しながら滴下して加えた。添加後に、PH
は10.2であり、そして温度は−10℃であつた。氷
水２ml、50容量％エタノール３mlおよび1M
HCl0.15mlを−10℃の温度で加えた。この混合物
のPHはここで7.5であり、そして温度は−10℃で
あつた。96容量％エタノール５ml、70容量％エタ
ノール５mlおよび70容量％エタノール中の0.5M
NaOH2mlの混合物を−10℃の温度で加えた。こ
の混合物のPHは10.3であり、温度は−10℃であ
り、そしてエタノール含有量は約64容量％であつ
た。混合物を例１と同様に５分後に遠心分離し、
原料物質のヘム含有量の46％を含有する上澄液お
よび暗褐色のペーストを生成した。ペーストは各
回、10.3のPHおよび−10℃の温度で、65容量％エ
タノール10mlで２回抽出し、原料物質のヘム含有
量のそれぞれ14％および７％を含有する上澄液を
生成した。ヘム コンセントレートの総収率は67
％であつた。ペーストは褐色であり、そして原料
物質のタンパク質含有量の71％を示した。 例 ５ 例４と同じやり方で、赤血球混合物のPHを10.2
に上げ、温度は０℃に維持した。０℃の温度の氷
水1.5ml、50容量％エタノール３ml、70容量％エ
タノール中の2Mイミダゾール１mlおよび1M
HCl0.2mlの混合物を加えた。混合物のPHは8.2で
あり、そして温度は０℃であつた。その後で、０
℃の温度の96容量％エタノール５mlおよび70容量
％エタノール10mlの混合物を加えた。混合物のPH
は8.2であり、温度は０℃であり、そしてエタノ
ール含有量は66容量％であつた。混合物は例１と
同様に５分後に遠心分離し、原料物質のヘム含有
量の52％を含有する上澄液および暗褐色ペースト
を生成した。ペーストは各回8.2のPHおよび０℃
の温度で、65容量％エタノール10mlおよび70容量
％エタノール中の2Mイミダゾール0.2mlで２回抽
出し、原料物質のヘム含有量のそれぞれ28％およ
び12％を含有する上澄液を生成した。ヘム コン
セントレートの総収率は92％であつた。ペースト
は褐色であり、そして原料物質のタンパク質含有
量の85％を示した。 例 ６ ＋10℃の温度の水１mlおよび0.5M NaOH0.8
mlの混合物を、＋10℃の温度の赤血球の混合物2.2
ｇに撹拌しながら滴下して加えた。添加後のPHは
11.0であり、そして温度は＋10℃であつた。96容
量％エタノール４ml、70容量％エタノール中の
2Mイミダゾール１ml、30％クエン酸ナトリウム
水溶液１mlおよび1M HCl0.5mlを加えた。混合
物のPHは7.5であり、そして温度は＋10℃であつ
た。その後、96容量％エタノール３mlおよび70容
量％エタノール10mlを加えた。この混合物のPHは
7.5であり、温度は＋10℃であり、そしてエタノ
ール含有量は約64容量％であつた。混合物を例１
と同様に５分後に遠心分離し、そして原料物質の
ヘム含有量の53％を含有する上澄液および暗褐色
ペーストを生成した。ペーストは各回7.5のPHお
よび＋10℃の温度で、65容量％エタノール10mlお
よび70容量％エタノール中の2Mイミダゾール0.1
mlで２回抽出し、原料物質のヘム含有量ののそれ
ぞれ26％および13％を含有する上澄液を生成し
た。ヘム コンセントレートの総収率は92％であ
つた。ペーストは褐色であり、そして原料物質の
タンパク質含有量の74％を示した。 例 ７ −18℃の温度の96容量％エタノール5.5mlおよ
び1M HCl1.0mlの混合物を、−18℃の温度の赤血
球の混合物2.2ｇ、1Mグリシン水溶液0.1ml、70
容量％エタノール中の2Mイミダゾール0.1mlおよ
び50容量％エタノール２mlの混合物に、撹拌しそ
して冷却しながら滴下して加えた。添加後のPHは
3.0であり、そして温度は−18℃であつた。40％
硫酸アンモニウム３mlを撹拌しそして冷却しなが
ら加えた。５分後に、−18℃の温度の96容量％エ
タノール10ml、70容量％エタノール20mlおよび70
容量％エタノール中の0.5M NaOH4mlの混合物
を撹拌しそして冷却しながら加えた。添加後のPH
は7.5でありそして温度は−18℃であり、エタノ
ール含有量は約69容量％であつた。混合物を例１
のとおりに遠心分離した。ペーストを各回、7.5
のPHおよび−18℃の温度において、70容量％エタ
ノール20ml、1Mグリシン水溶液0.1mlおよび70容
量％エタノール中の2Mイミダゾール0.1mlで２回
抽出した。上澄液はそれぞれ、原料物質のヘム含
有量の69％、14％および５％を含有した。ヘム
コンセントレートの総収率は88％であつた。ペー
ストは淡褐色であり、そして原料物質のタンパク
質含有量の81％を示した。 例 ８ −５℃の温度の96容量％エタノール８mlおよび
1M HCl0.8mlの混合物を−５℃の温度の赤血球
混合物2.2ｇに撹拌し、そして冷却しながら滴下
して加えた。添加後のPHは3.1であり、そして温
度は−５℃であつた。50容量％エタノール中の
0.2M NaOH0.8mlおよび50容量％エタノール10
mlを加えた。PHは3.5でありそして温度は−５℃
であつた。混合物を9000xgで５分間遠心分離し、
かくして黄色上澄液および黒色ペーストを得た。
水８mlを7.5のPHで加えた後に上澄液から、乾燥
物質0.21ｇを含有する灰色のタンパク質沈殿を沈
殿させた。黒色ヘム ペーストを70容量％エタノ
ール30ml、1Mグリシン水溶液0.5ml、70容量％エ
タノール中の2Mイミダゾール0.5mlおよび70容量
％エタノール中の0.5M NaOH2.5mlの混合物と
混合した。PHは8.6であり、温度は−５℃であり、
そしてエタノール含有量は約70容量％であつた。
混合物を3000xgで５分間遠心分離し、原料物質
のヘム含有量の72％を含有する上澄液および褐色
ペーストを生成した。ペーストは各回、8.6のPH
および−５℃の温度で、70容量％エタノール30ml
および70容量％エタノール中の2Mイミダゾール
0.1mlで２回抽出し、原料物質のヘム含有量のそ
れぞれ19％および８％を含有する上澄液を生成し
た。ヘム コンセントレートの総収率は99％であ
つた。ペーストは帯灰褐色であり、そして乾燥物
として0.1ｇの重量を有した。総タンパク質収率
は91％であつた。 例 ９ ａ 例８と同じやり方で、黒色ヘム ペーストを
赤血球の混合物2.2ｇから出発して、分離した。
このペーストを50容量％エタノール30mlと混合
し、そしてPHを−１℃の温度で70容量％エタノ
ール中の0.5M NaOHにより8.5に調整した。
エタノール含有量は約50容量％であつた。混合
物は例８と同様に遠心分離し、原料物質のヘム
含有量の33％を含有する上澄液および暗褐色ペ
ーストを生成した。このペーストを各回、9.0
のPHおよび−１℃の温度において50容量％エタ
ノール30mlで３回抽出し、原料物質のヘム含有
量のそれぞれ24％、13％および９％を含有する
上澄液を生成した。ヘム コンセントレートの
総収率は79％であつた。ペーストは褐色であ
り、そして乾燥物として0.1ｇの重量を有した。
総タンパク質収率は91％であつた。 ｂ 例８と同じやり方で、赤血球の混合物2.2ｇ
から出発して、黒色ヘム ペーストを分離し
た。このペーストを40容量％エタノール30mlと
混合し、そしてPHを70容量％エタノール中の
0.5M NaOHで10.7に調整した。温度は−４℃
であり、そしてエタノール含有量は約40容量％
であつた。混合物を例８と同様に遠心分離し、
原料物質のヘム含有量の71％を含有する上澄液
および褐色ペーストを生成した。このペースト
を各回、10.7のPHおよび−４℃の温度におい
て、40容量％エタノール30mlで２回抽出し、原
料物質のヘム含有量のそれぞれ7.2％および4.8
％を含有する上澄液を生成した。ヘム コンセ
ントレートの総収率は83％であつた。ペースト
は淡褐色であり、そして乾燥物として0.08ｇの
重量を有した。総タンパク質収率は85％であつ
た。 例 10 例８と同じやり方で、赤血球の混合物2.2ｇか
ら出発して、黒色ヘム ペーストを分離した。こ
のペーストを60容量％エタノール20ml、70容量％
エタノール中の2Mイミダゾール0.2mlおよび硫酸
アンモニウムの40重量％水溶液１mlの混合物と混
合した。PHを70容量％エタノール中の0.5M
NaOHで6.8に調整した。温度は＋25℃であり、
そしてエタノール含有量は約60容量％であつた。
混合物を例８と同様に遠心分離し、原料物質のヘ
ム含有量の63％を含有する上澄液および帯褐赤色
ペーストを生成した。ペーストを各回、6.8のPH
および＋25℃の温度において、上記の量の60容量
％エタノール、イミダゾールおよび硫酸アンモニ
ウムで２回抽出し、原料物質のヘム含有量のそれ
ぞれ14％および８％を含有する上澄液を生成し
た。ヘム コンセントレートの総収率は85％であ
つた。ペーストは褐色であり、そして乾燥物とし
て0.07ｇの重量を有した。総タンパク質収率は83
％であつた。 例 11 例８と同じやり方で、赤血球の混合物2.2ｇか
ら出発して黒色ヘム ペーストを分離した。この
ペーストを96容量％エタノール30mlおよび1Mグ
リシン水溶液0.2mlの混合物と混合した。PHを70
容量％エタノール中の0.5M NaOHで10.4に調整
した。温度は−20℃であり、エタノール含有量は
約90容量％であつた。混合物を例８と同様に遠心
分離し、原料物質のヘム含有量の61％を含有する
上澄液および暗褐色ペーストを生成した。ペース
トを各回、10.4のPHおよび−20℃の温度におい
て、上記した量の90容量％エタノールおよびグリ
シンで２回抽出し、原料物質のヘム含有量のそれ
ぞれ20％および９％を含有する上澄液を得た。ヘ
ム コンセントレートの総収率は90％であつた。
ペーストは淡褐色であり、乾燥物として0.1ｇの
重量を有した。総タンパク質収率は91％であつ
た。 例 12 例８と同じやり方で、赤血球の混合物2.2ｇか
ら出発して、黒色ヘム ペーストを分離した。こ
のペーストを40容量％エタノール30mlおよび70容
量％エタノール中の2Mイミダゾール0.2mlの混合
物と混合した。PHを70容量％エタノール中の
0.5M NaOHで7.0に調整した。温度は−５℃で
あり、そしてエタノール含有量は約42容量％であ
つた。混合物を例８のとおり同様に遠心分離し、
原料物質のヘム含有量の58％を含有する上澄液お
よび暗赤色ペーストを生成した。ペーストを各
回、７のPHおよび−５℃の温度において、上記量
の70容量％エタノールおよびイミダゾールで２回
抽出し、原料物質のヘム含有量の、それぞれ26％
および５％を含有する上澄液を生成した。ヘム
コンセントレートの総収率は89％であつた。ペー
ストは淡褐色であり、そして乾燥物として0.1ｇ
の重量を有した。総タンパク質収率は91％であつ
た。 例 13 例８と同じやり方で、赤血球の混合物2.2ｇか
ら出発して、黒色ヘム ペーストを分離した。こ
のペーストを70容量％メタノール20mlおよび70容
量％エタノール中の2Mイミダゾール0.2mlの混合
物と混合した。PHを70容量％エタノール中0.5M
NaOHで8.5に調整した。温度は−５℃であり、
メタノール含有量は約60容量％であつた。混合物
は例８のとおりに遠心分離し、原料物質のヘム含
有量の67％を含有する上澄液および帯褐赤色ペー
ストを生成した。ペーストを各回、8.5のPHおよ
び−５℃の温度において、上記量の70容量％メタ
ノールおよびイミダゾールで２回抽出し、原料物
質のヘム含有量のそれぞれ18％および７％を含有
する上澄液を生成した。ヘム コンセントレート
の総収率は92％であつた。ペーストは淡褐色であ
り、そして乾燥物として0.1ｇの重量を有した。
総タンパク質収率は91％であつた。 例 14 例８と同じやり方で、赤血球の混合物2.2ｇか
ら出発して、黒色ヘム ペーストを分離した。ペ
ーストを70容量％プロパノール20mlおよび70容量
％エタノール中の2Mイミダゾール0.2mlの混合物
と混合した。PHを70容量％エタノール中の0.5M
NaOHで8.0に調整した。温度は−５℃であり、
プロパノール含有量は約60容量％であつた。混合
物を例８のとおりに遠心分離し、原料物質のヘム
含有量の66％を含有する上澄液および帯褐赤色ペ
ーストを生成した。ペーストを各回、8.0のPHお
よび−５℃の温度において、上記量の70容量％プ
ロパノールおよびイミダゾールで２回抽出し、原
料物質のヘム含有量のそれぞれ16％および９％を
含有する上澄液を生成した。ヘム コンセントレ
ートの総収率は91％であつた。ペーストは淡褐色
であり、乾燥物として0.1ｇの重量を有した。総
タンパク質収率は91％であつた。 例 15 例８と同じやり方で、赤血球の混合物2.2ｇか
ら出発して、黒色ペーストを分離した。ペースト
を70容量％イソプロパノール20ml、70容量％エタ
ノール中の2Mイミダゾール0.2mlおよび1Mグリ
シン0.2mlの混合物と混合した。PHを70容量％エ
タノール中の0.5M NaOHで7.5に調整した。温
度は−10℃であり、イソプロパノール含有量は約
60容量％であつた。混合物を例８と同様に遠心分
離し、原料物質のヘム含有量の69％を含有する上
澄液および帯褐赤色ペーストを生成した。ペース
トを各回、7.5のPHおよび−10℃の温度において、
上記量の70容量％イソプロパノールおよびイミダ
ゾールで２回抽出し、原料物質のヘム含有量のそ
れぞれ17％および９％を含有する上澄液を生成し
た。ヘム コンセントレートの総収率は95％であ
つた。ペーストは淡褐色であり、乾燥物として
0.1ｇの重量を有した。総タンパク質収率は91％
であつた。 例 16 例８と同じやり方で、赤血球の混合物2.2ｇか
ら出発して、黒色ヘム ペーストを分離した。こ
のペーストを70容量％エタノール20ml、70容量％
グリセリン７mlおよび70容量％エタノール中の
2Mイミダゾール0.2mlの混合物と混合した。PHを
70容量％エタノール中0.5M NaOHで8.0に調整
した。温度は−５℃であり、エタノール含有量は
約52容量％であり、そしてグリセリン含有量は約
17容量であつた。混合物を例８と同様に遠心分離
し、原料物質のヘム含有量の64％を含有する上澄
液および帯褐赤色ペーストを生成した。ペースト
を各回、8.0のPHおよび−５℃の温度において、
上記量の70容量％エタノール、70容量％グリセリ
ンおよびイミダゾールで２回抽出し、原料物質の
ヘム含有量のそれぞれ14％および７％を含有する
上澄液を生成した。ヘム含有量の総収率は85％で
あつた。ペーストは褐色であり、水で洗浄した後
の乾燥物として0.1ｇの重量を有した。総タンパ
ク質収率は91％であつた。 上記と同じやり方で、抽出をグリセリンの代り
に70容量％エチレングリコールを使用して実施し
た。上記と同じ結果であつた。 例 17 −８℃の温度の96容量％エタノール６mlおよび
1M HCl1mlの混合物を、＋0.5℃の温度の全血2.7
ｇに、撹拌しそして冷却しながら滴下して加え
た。添加後のPHは3.0でありそして温度は−５℃
であつた。その後で40％硫酸アンモニウム水溶液
２mlおよび−８℃の70容量％エタノール、1Mグ
リシン水溶液0.2mlおよび70容量％エタノール中
の2Mイミダゾール0.2mlの混合物を撹拌しそして
冷却しながら加えた。PHを70容量％エタノール中
の0.5M NaOHで8.0に調整した。温度は−８℃
でありそしてエタノール含有量は約65容量％であ
つた。混合物を例８のとおりに遠心分離し、原料
物質のヘム含有量の66％を含有する上澄液および
帯褐赤色ペーストを生成した。ペーストを各回、
8.0のPHおよび−８℃の温度において、上記量の
70容量％エタノール、硫酸アンモニウムおよびイ
ミダゾールで２回抽出し、原料物質のヘム含有量
のそれぞれ16％および７％を含有する上澄液を生
成した。ヘム コンセントレートの総収率は89％
であつた。ペーストは50容量％エタノールで洗浄
した後に帯灰褐色であり、そして総タンパク質含
有量の85％を示した。 例 18 赤血球の混合物22ｇから出発して、10.4のPH、
−５℃の温度において、そして70容量％エタノー
ルを用いてヘム ペーストを抽出した。0.38mgヘ
ム／mlのヘム含有量を有する199mlの第１回抽出
液は原料物質のヘム含有量の68.1％を示し、0.17
mgヘム／mlのヘム含有量を有する121mlの第２回
抽出液は18.6％のヘム含有量を示し、そして0.08
mgヘム／mlのヘム含有量を有する118mlの第３回
抽出液は8.5％のヘム含有量を示した。抽出液を
集め、−５℃の温度において0.1M HCl87mlで5.1
のPHに調整した。かくして形成された黒色薄片状
沈殿を3000xgで遠心分離して分離し、4.5ｇの重
量を有した。ペーストを各回15mlの氷水中で３回
洗浄し、氷水15mlに懸濁し、PHを0.2M NaOH3
mlで8.2に調整し、凍結させ、次に凍結乾燥させ
た。かくして36％のヘム含有量を有する黒色粉末
265mgを得た。ヘム コンセントレートの総収率
は86％であつた。 分析値： c46.17％、H5.30％、Cl10.53％、P2.8％、
Fe3.57％、N9.6％、K3.5％およびNa4.1％。 例 19 赤血球の混合物50ｇから出発して、8.2のPH、＋
１℃の温度で、そして60容量％エタノールおよび
70容量％エタノール中2Mのイミダゾール４mlを
使用してヘム ペーストを抽出した。0.32ヘム／
mlのヘム含有量を有する第１回抽出液は原料物質
のヘム含有量の62.8％を示し、第２回抽出液は
467ml、0.11mgヘム／ml、20.4％の相当するデー
タを有し、そして第３回抽出液は479ml、0.06mg
ヘム／ml、11.4％の相当するデータを有した。抽
出液を集め、＋１℃の温度で0.1M HCl240mlによ
り4.0のPHに酸性化した。沈殿を上記のとおりに
分離し、8.5ｇの重量を有した。ペーストは各回
25mlの氷水で３回洗浄し、氷水25ml中に懸濁し、
PHを8.5に調整し、懸濁液を凍結させ、次に凍結
乾燥させた。かくして、42％のヘム含有量を有す
る黒色粉末510mgを得た。ヘム コンセントレー
トの総収率は85％であつた。 例 20 例18と同じやり方で、３つの抽出液を得た。第
１回抽出液は別に5.1のPHに酸性化し、少量の沈
殿を生成した。この沈殿は凍結乾燥させた後に
17.7％のヘム含有量を有するヘム コンセントレ
ートを生成した。 分析量：C29.42％、H3.52％、Cl23.77％、P1.2
％、Fe2.28％、N8.8％、K13.4％および
Na15.7％。 例 21 例19と同じやり方で、１つの抽出液を得た。こ
の抽出液を別にPH4.0に酸性化し、黒色沈殿を生
成した。これを例19と同じやり方で分離し、洗浄
し、次に凍結乾燥させた。かくして得られたヘム
コンセントレートは55％のヘム含有量を有し
た。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ ヘモグロビンを分解すると得られるヘムと血
   液物質との混合物のヘムコンセントレートを製造
   する方法において、ヘムと血液物質との混合物を
   脱水剤として低級アルコールを用いて処理するこ
   と、この脱水処理をPH8.0以上で行なうこと、固
   体血液物質を分離すること、及びヘムコンセント
   レートを残りの溶液から採取することを特徴とす
   るヘムコンセントレートの製造方法。 ２ 脱水処理をPH9.0から10.7で行なう特許請求
   の範囲第１項の方法。 ３ ヘムと血液物質との混合物が、ヘモグロビン
   物質を分解すること及びグロビン溶液を既知のや
   り方で分離することにより得られるヘムペースト
   を含む特許請求の範囲第１項の方法。 ４ タンパク質の沈殿を安定化する助剤として、
   ナトリウム、カリウム又はアンモニウムのクロリ
   ド、硫酸塩、クエン酸塩又は酒石酸塩が脱水処理
   において加えられる特許請求の範囲第１〜３項の
   いずれか一項の方法。 ５ 低級アルコールがエタノール、メタノール、
   エチレングリコール、グリセロール、プロパノー
   ル、イソプロパノール、ブタノールまたはイソブ
   タノール、またはその混合物である、特許請求の
   範囲第１〜４項のいずれか一項の方法。 ６ 脱水処理を室温又は低温で行なう特許請求の
   範囲第１〜５項のいずれか一項の方法。 ７ 脱水温度が−５℃から−20℃である特許請求
   の範囲第１〜５項のいずれか一項の方法。 ８ 脱水剤がエタノールであり、それが混合物中
   に60から80容量％の濃度で存在する特許請求の範
   囲第１〜５項のいずれか一項の方法。