JPH0145352B2 - - Google Patents
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- JPH0145352B2 JPH0145352B2 JP57217653A JP21765382A JPH0145352B2 JP H0145352 B2 JPH0145352 B2 JP H0145352B2 JP 57217653 A JP57217653 A JP 57217653A JP 21765382 A JP21765382 A JP 21765382A JP H0145352 B2 JPH0145352 B2 JP H0145352B2
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- lactobacillus
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- italicus
- maltose
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
- C12P7/56—Lactic acid
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/225—Lactobacillus
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- Chemical & Material Sciences (AREA)
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- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
本発明は新菌種ラクトバチルス・イタリカスに
関する。さらに、詳しくは本発明は下記の菌学的
性質を有することを特徴とするラクトバチルス・
イタリカス (1) グラム陽性 (2) 無胞子 (3) 運動性なし (4) 桿菌 (5) 嫌気性ないし通性好気性 (6) カタラーゼ陰性 (7) 生育至適温度28〜32℃ (8) 生育至適PH 5.4〜5.8 (9) グルコース及びマルトースのみを資化して
DL−乳酸、エタノール及び炭酸ガスを生成す
る。 に関する。 本新菌種は乳酸生産菌として有用である。 本発明者らは有用な乳酸生産菌を探索すべく
種々検討した結果、イタリアの菓子パンであるパ
ネトーネのパン種から分離した菌種が既知の乳酸
菌のいずれにも該当しない新菌種であることを見
い出し、該菌種をラクトバチルス・イタリカス
(Laftobacillus italicus)と命名した。 本発明の新菌種の具体例としては、ラクトバチ
ルス・イタリカスTL−1(微工研条寄第189号)
およびSH−150(微工研条寄第190号)があげられ
る。 以下にラクトバチルス・イタリカスTL−1お
よびSH−150の菌学的性質を示す。 () ラクトバチルス・イタリカスTL−1の菌
学的性質 A 形態的性質 ML培地※ において(0.8〜1.0)×(2〜7)
μの桿菌で単一または連鎖状に存在する。胞
子は形成せず、非運動性、グラム陽性であ
る。 ※ ML培地 ペプトン 12.5g 酵母エキス 12.5g リン酸一水素カリウム 250mg リン酸二水素カリウム 250mg 硫酸マグネシウム 100mg 硫酸マンガン 5.0mg 硫酸第一鉄 5.0mg システイン塩酸塩 300mg ツイーン80 300mg 酢酸ナトリウム 10g ブドウ糖 10g 麦芽糖 10g 水 1000ml 1N又は6NHClでPH5.6に調整した培地 B 培養的性質 (1) ML寒※※ 天平 板培養 30℃、2日培養で約1mmまたはそれ以下の直
径の円形、平滑、全縁、隆起状、半透明の乳
白色のコロニーを形成する。 ※※ ML寒天培地 ML培地にさらに寒天20gが添加されている
培地。 (2) ML培地液体培養 中程度の濁度で表面には生育せず、毛房状の
沈殿を生じる。 (3) ML寒天穿刺培養 穿刺に沿つて一様に生育、表面にも生育す
る。 C 生理的性質 (1) 生育温度 至適28〜32℃ 範囲15〜38℃ (2) 生育PH 至適5.4〜5.8 範囲4.2〜6.5 (3) 酸素に対する態度通気鎌気性、好気的にも
生育するがCO2カス下の方が生育良好であ
る。 (4) 生育必須物質上記ML培地中、不飽和脂肪
酸の要求性はない。 (5) 糖から酸及びガスの生成 グルコース及びマルトースから酸及びガスを
生成する。 アラビノース、キシロース、リボース、フ
ラクトース、マンノース、ガラクトースシユ
クロース、ラクトース、メリビオースサリシ
ンからは酸及びガスも生成しない。 (6) 炭素源の資化性 グルコース及びマルトースを質化する。 マルトースがグルコースより旺盛に資化さ
れる。 アラビノース、キシロース、ガラクトー
ス、酢酸、クエン酸、グルコン酸、プロピオ
ン酸を単一炭素源として資化できない。 (7) ゼラチンを液化しない。 (8) リトマスミルク:不変 (9) 硝酸塩を還元しない。 (10) 脱窒反応応陰性 (11) ウレアーゼ:陰性 (12) カタラーゼ:陰性 (13) オキシダーゼ:陰性 (14) インドールを生成しない (15) 硫化水素を生成しない (16) でん粉を加水分解しない (17) VP反応:陰性 (18) グルコース及びマルトースからの生成物
DL−乳酸とエタノール (ほゞ1:0.4〜0.6の比率) () ラクトバチルス・イタリカスSH−150上記
ラクトバチルス・イタリカスTL−1の菌学的
性質において、Cの(4)の生育必須物質の項で、
“上記ML培地中不飽和脂肪酸を要求する”と
いう性質以外はラクトバチルス・イタリカス
TL−1の菌学的性質と同じである。 上記の如く、TL−1菌及びSH−150菌はグラ
ム陽性、無胞子、通気嫌気性、カタラーゼ陰性の
桿菌であり、グルコース及びマルトースから乳酸
とアルコールを生成する故、ヘテロ発酵型のラク
トバチルス属と考えられる。 これらの菌は、グルコースとマルトースからの
み酸とガスを生成すること、通常のラクトバチル
ス属細菌はPH6.5〜7.0でも生育しうるが、本菌の
至適PHは5.4〜5.8にあること、ヘテロ発酵型のラ
クトバチルスは一般にグルコン酸を資化できるが
本菌は資化できないことなどから、本菌はバージ
ーズ・マニユアル (Bergey's Manual)8版記載のラクトバチル
ス属細菌のいずれとも異なる。 また、本菌はラクトバチルス・サンフランシス
コ(Lactobacillus sanfrancisco)と類以性は高
いが、ラクトバチルス・サンフランシスコはグル
コースを殆んど資化しないこと、マルトースから
乳酸と酢酸を生成すること、生育に新鮮酵母エキ
スを必要とすることなどの点においては本菌と明
らかに異なる。 上記の理由から本発明者らはTL−1菌及びSH
−150菌を新菌種と見做し、ラクトバチルス・イ
タリカス(Lactobacillus italicus)と命名した。 尚、ラクトバチルス・イタリカスTL−1及び
SH−150の菌学的性質および新菌種として命命し
た準処について、以下に示す。 同定実験の方法は、長谷川武治編著「微生物の
分類と同定」学会出版センター(1975)によつ
た。また、分類、同定の基準として、バーギーズ
マニユアルオブデイターミナテイブバクテリオロ
ジー、第8版(1974)を、ラクトバチルス・サン
フランシスコについては、Appl.Microbiol.21、
459−465(1971)を参考にした。 次に本菌の培地法について説明する。 培地は固形培地および液体培地が目的に応じて
使用できる。ラクトバチルス・イタリカスの分離
または菌体の培養には前述のML培地が最適であ
る。 炭素源としては、グルコースとマルトースおよ
びそれらを含有する天然物例えばでん粉加水分解
液や小麦粉などが使用できる。酢酸、クエン酸な
ど有機酸の添加は生育の促進に有効である。 窒素源としては、有機窒素含有物が望ましく酵
母エキス、ペプトン、肉エキス、カゼイン、コー
ン・スチープ、リカー、トマトジユースなどが使
用できる。硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウ
ム、リン酸アンモニウムなどの添加は生育の促進
に有効である。また、リン酸およびカリウム、ナ
トリウム、マグネシウム、マンガン、鉄、亜鉛、
モリブテンなどの金属イオンも生育の促進に有効
である。シスチン、システイン、グルタチオン、
アスコルビン酸などは酸素分圧を低下させる物質
として有効である。菌株によつて不飽和脂肪酸を
要求するものがあり、オレイン酸、ツイーン80、
レシチンなどの添加が必要である。培養温度は15
〜38℃、好ましくは28〜32℃、PHは4〜7、好ま
しくは5.4〜5.8であり、本菌はやゝ嫌気的であ
り、二酸化炭素の存在が一般に有効である。二酸
化炭素:空気の混合比は25〜95容量パーセントが
適している。 実施例 1 パネトーネ種0.3gを減菌生理食塩水10mlに懸
濁し、これを生理食塩水にて段階希釈を行い、
ML寒天上に0.1mlずつ塗布する。 これをBBL社ガスパツク嫌気培養システムを
利用し、CO2下ガスにおいて、30℃で2日間培養
する。該菌は、直径約1mmまたは、そ以下の半透
明で乳白色のコロニーとして出現する。コロニー
を平板から捨い、ML寒天に移し、30℃で1〜2
日間培養し、2種類のパネトーネから合計179株
を単離した。これらの株は、互いに極くわずかに
相違する点があるが、ほとんど類似した性状を示
し、同一種とみなしてよい。 そこで不飽和脂肪酸の要求性の有無からラクト
パチルス・イタリカスTL−1(要求なし)及び
SH−150(要求性あり)を選択した。なお、パネ
トーネ種の中の細菌数は約7×108/gであつた。 実施例 2 酵母エキス3g/L、ペプトン5g/L、
KH2PO40.25g/L、K2HPO40.25g/L、
MgSO4・7H2O0.1g/L、MnSO4・4H2O5.0
mg/L、FeSO4、7H2O5.0mg/L、システイン塩
酸塩300mg/L3ツイーン80 300mg/L(初発PH5.6)
を基礎培地とし、第1表に示すような炭素化合物
を添加し、その20mlを太型試験管に入れ120℃、
15分間オートクレープ殺菌を行なう。ML寒天培
養から集めたラクトバチルス・イタリカスTL−
1およびSH−150をそれぞれ約108/mlになるよ
うに上記培地に接種し、30℃で静置培養を行なつ
た。菌の生育量(濁度、OD660)は第1表に示す
とおりであつた。
関する。さらに、詳しくは本発明は下記の菌学的
性質を有することを特徴とするラクトバチルス・
イタリカス (1) グラム陽性 (2) 無胞子 (3) 運動性なし (4) 桿菌 (5) 嫌気性ないし通性好気性 (6) カタラーゼ陰性 (7) 生育至適温度28〜32℃ (8) 生育至適PH 5.4〜5.8 (9) グルコース及びマルトースのみを資化して
DL−乳酸、エタノール及び炭酸ガスを生成す
る。 に関する。 本新菌種は乳酸生産菌として有用である。 本発明者らは有用な乳酸生産菌を探索すべく
種々検討した結果、イタリアの菓子パンであるパ
ネトーネのパン種から分離した菌種が既知の乳酸
菌のいずれにも該当しない新菌種であることを見
い出し、該菌種をラクトバチルス・イタリカス
(Laftobacillus italicus)と命名した。 本発明の新菌種の具体例としては、ラクトバチ
ルス・イタリカスTL−1(微工研条寄第189号)
およびSH−150(微工研条寄第190号)があげられ
る。 以下にラクトバチルス・イタリカスTL−1お
よびSH−150の菌学的性質を示す。 () ラクトバチルス・イタリカスTL−1の菌
学的性質 A 形態的性質 ML培地※ において(0.8〜1.0)×(2〜7)
μの桿菌で単一または連鎖状に存在する。胞
子は形成せず、非運動性、グラム陽性であ
る。 ※ ML培地 ペプトン 12.5g 酵母エキス 12.5g リン酸一水素カリウム 250mg リン酸二水素カリウム 250mg 硫酸マグネシウム 100mg 硫酸マンガン 5.0mg 硫酸第一鉄 5.0mg システイン塩酸塩 300mg ツイーン80 300mg 酢酸ナトリウム 10g ブドウ糖 10g 麦芽糖 10g 水 1000ml 1N又は6NHClでPH5.6に調整した培地 B 培養的性質 (1) ML寒※※ 天平 板培養 30℃、2日培養で約1mmまたはそれ以下の直
径の円形、平滑、全縁、隆起状、半透明の乳
白色のコロニーを形成する。 ※※ ML寒天培地 ML培地にさらに寒天20gが添加されている
培地。 (2) ML培地液体培養 中程度の濁度で表面には生育せず、毛房状の
沈殿を生じる。 (3) ML寒天穿刺培養 穿刺に沿つて一様に生育、表面にも生育す
る。 C 生理的性質 (1) 生育温度 至適28〜32℃ 範囲15〜38℃ (2) 生育PH 至適5.4〜5.8 範囲4.2〜6.5 (3) 酸素に対する態度通気鎌気性、好気的にも
生育するがCO2カス下の方が生育良好であ
る。 (4) 生育必須物質上記ML培地中、不飽和脂肪
酸の要求性はない。 (5) 糖から酸及びガスの生成 グルコース及びマルトースから酸及びガスを
生成する。 アラビノース、キシロース、リボース、フ
ラクトース、マンノース、ガラクトースシユ
クロース、ラクトース、メリビオースサリシ
ンからは酸及びガスも生成しない。 (6) 炭素源の資化性 グルコース及びマルトースを質化する。 マルトースがグルコースより旺盛に資化さ
れる。 アラビノース、キシロース、ガラクトー
ス、酢酸、クエン酸、グルコン酸、プロピオ
ン酸を単一炭素源として資化できない。 (7) ゼラチンを液化しない。 (8) リトマスミルク:不変 (9) 硝酸塩を還元しない。 (10) 脱窒反応応陰性 (11) ウレアーゼ:陰性 (12) カタラーゼ:陰性 (13) オキシダーゼ:陰性 (14) インドールを生成しない (15) 硫化水素を生成しない (16) でん粉を加水分解しない (17) VP反応:陰性 (18) グルコース及びマルトースからの生成物
DL−乳酸とエタノール (ほゞ1:0.4〜0.6の比率) () ラクトバチルス・イタリカスSH−150上記
ラクトバチルス・イタリカスTL−1の菌学的
性質において、Cの(4)の生育必須物質の項で、
“上記ML培地中不飽和脂肪酸を要求する”と
いう性質以外はラクトバチルス・イタリカス
TL−1の菌学的性質と同じである。 上記の如く、TL−1菌及びSH−150菌はグラ
ム陽性、無胞子、通気嫌気性、カタラーゼ陰性の
桿菌であり、グルコース及びマルトースから乳酸
とアルコールを生成する故、ヘテロ発酵型のラク
トバチルス属と考えられる。 これらの菌は、グルコースとマルトースからの
み酸とガスを生成すること、通常のラクトバチル
ス属細菌はPH6.5〜7.0でも生育しうるが、本菌の
至適PHは5.4〜5.8にあること、ヘテロ発酵型のラ
クトバチルスは一般にグルコン酸を資化できるが
本菌は資化できないことなどから、本菌はバージ
ーズ・マニユアル (Bergey's Manual)8版記載のラクトバチル
ス属細菌のいずれとも異なる。 また、本菌はラクトバチルス・サンフランシス
コ(Lactobacillus sanfrancisco)と類以性は高
いが、ラクトバチルス・サンフランシスコはグル
コースを殆んど資化しないこと、マルトースから
乳酸と酢酸を生成すること、生育に新鮮酵母エキ
スを必要とすることなどの点においては本菌と明
らかに異なる。 上記の理由から本発明者らはTL−1菌及びSH
−150菌を新菌種と見做し、ラクトバチルス・イ
タリカス(Lactobacillus italicus)と命名した。 尚、ラクトバチルス・イタリカスTL−1及び
SH−150の菌学的性質および新菌種として命命し
た準処について、以下に示す。 同定実験の方法は、長谷川武治編著「微生物の
分類と同定」学会出版センター(1975)によつ
た。また、分類、同定の基準として、バーギーズ
マニユアルオブデイターミナテイブバクテリオロ
ジー、第8版(1974)を、ラクトバチルス・サン
フランシスコについては、Appl.Microbiol.21、
459−465(1971)を参考にした。 次に本菌の培地法について説明する。 培地は固形培地および液体培地が目的に応じて
使用できる。ラクトバチルス・イタリカスの分離
または菌体の培養には前述のML培地が最適であ
る。 炭素源としては、グルコースとマルトースおよ
びそれらを含有する天然物例えばでん粉加水分解
液や小麦粉などが使用できる。酢酸、クエン酸な
ど有機酸の添加は生育の促進に有効である。 窒素源としては、有機窒素含有物が望ましく酵
母エキス、ペプトン、肉エキス、カゼイン、コー
ン・スチープ、リカー、トマトジユースなどが使
用できる。硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウ
ム、リン酸アンモニウムなどの添加は生育の促進
に有効である。また、リン酸およびカリウム、ナ
トリウム、マグネシウム、マンガン、鉄、亜鉛、
モリブテンなどの金属イオンも生育の促進に有効
である。シスチン、システイン、グルタチオン、
アスコルビン酸などは酸素分圧を低下させる物質
として有効である。菌株によつて不飽和脂肪酸を
要求するものがあり、オレイン酸、ツイーン80、
レシチンなどの添加が必要である。培養温度は15
〜38℃、好ましくは28〜32℃、PHは4〜7、好ま
しくは5.4〜5.8であり、本菌はやゝ嫌気的であ
り、二酸化炭素の存在が一般に有効である。二酸
化炭素:空気の混合比は25〜95容量パーセントが
適している。 実施例 1 パネトーネ種0.3gを減菌生理食塩水10mlに懸
濁し、これを生理食塩水にて段階希釈を行い、
ML寒天上に0.1mlずつ塗布する。 これをBBL社ガスパツク嫌気培養システムを
利用し、CO2下ガスにおいて、30℃で2日間培養
する。該菌は、直径約1mmまたは、そ以下の半透
明で乳白色のコロニーとして出現する。コロニー
を平板から捨い、ML寒天に移し、30℃で1〜2
日間培養し、2種類のパネトーネから合計179株
を単離した。これらの株は、互いに極くわずかに
相違する点があるが、ほとんど類似した性状を示
し、同一種とみなしてよい。 そこで不飽和脂肪酸の要求性の有無からラクト
パチルス・イタリカスTL−1(要求なし)及び
SH−150(要求性あり)を選択した。なお、パネ
トーネ種の中の細菌数は約7×108/gであつた。 実施例 2 酵母エキス3g/L、ペプトン5g/L、
KH2PO40.25g/L、K2HPO40.25g/L、
MgSO4・7H2O0.1g/L、MnSO4・4H2O5.0
mg/L、FeSO4、7H2O5.0mg/L、システイン塩
酸塩300mg/L3ツイーン80 300mg/L(初発PH5.6)
を基礎培地とし、第1表に示すような炭素化合物
を添加し、その20mlを太型試験管に入れ120℃、
15分間オートクレープ殺菌を行なう。ML寒天培
養から集めたラクトバチルス・イタリカスTL−
1およびSH−150をそれぞれ約108/mlになるよ
うに上記培地に接種し、30℃で静置培養を行なつ
た。菌の生育量(濁度、OD660)は第1表に示す
とおりであつた。
【表】
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1 下記の菌学的性質を有することを特徴とする
ラクトバチルス・イタリカス (1) グラム陽性 (2) 無胞子 (3) 運動性なし (4) 桿菌 (5) 嫌気性ないし通性好気性 (6) カタラーゼ陰性 (7) 生育至適温度28〜32℃ (8) 生育至適PH 5.4〜5.8 (9) グルコース及びマルトースのみを資化して
DL−乳酸、エタノール及び炭酸ガスを生成す
る。
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57217653A JPS59106291A (ja) | 1982-12-11 | 1982-12-11 | 新菌種 |
| EP83307542A EP0113215B1 (en) | 1982-12-11 | 1983-12-12 | Microorganisms of the species lactobacillus italicus, processes for their preparation and their use in the production of lactic acid |
| DE8383307542T DE3378057D1 (en) | 1982-12-11 | 1983-12-12 | Microorganisms of the species lactobacillus italicus, processes for their preparation and their use in the production of lactic acid |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57217653A JPS59106291A (ja) | 1982-12-11 | 1982-12-11 | 新菌種 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59106291A JPS59106291A (ja) | 1984-06-19 |
| JPH0145352B2 true JPH0145352B2 (ja) | 1989-10-03 |
Family
ID=16707618
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57217653A Granted JPS59106291A (ja) | 1982-12-11 | 1982-12-11 | 新菌種 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0113215B1 (ja) |
| JP (1) | JPS59106291A (ja) |
| DE (1) | DE3378057D1 (ja) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61181333A (ja) * | 1985-02-06 | 1986-08-14 | 敷島製パン株式会社 | 生地改良剤 |
| US4758345A (en) * | 1986-02-28 | 1988-07-19 | The United States Of America As Represented By The United States Department Of Energy | Anaerobic microbial dissolution of lead and production of organic acids |
| JP2824821B2 (ja) * | 1993-11-04 | 1998-11-18 | カルピス株式会社 | 乳酸菌及び発酵乳製品 |
| FR2715166B1 (fr) * | 1994-01-18 | 1996-04-26 | Orstom | Souches bactériennes phylogénétiquement proches du genre Lactobacillus et du genre Bacillus, procédé de culture et applications. |
| JP2992945B2 (ja) * | 1994-03-11 | 1999-12-20 | カルピス株式会社 | ラクトバチルス・アシドフィルス乳酸菌 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR1300250A (fr) * | 1961-06-20 | 1962-08-03 | Melle Usines Sa | Procédé d'extraction d'acides organiques de fermentation |
| US3891773A (en) * | 1971-02-26 | 1975-06-24 | Us Agriculture | Culture of sour dough bacteria |
| US4264448A (en) * | 1978-11-27 | 1981-04-28 | Bodenrader B J | Method for bacteriological treatment of manure and high bod industrial wastes |
-
1982
- 1982-12-11 JP JP57217653A patent/JPS59106291A/ja active Granted
-
1983
- 1983-12-12 DE DE8383307542T patent/DE3378057D1/de not_active Expired
- 1983-12-12 EP EP83307542A patent/EP0113215B1/en not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0113215A2 (en) | 1984-07-11 |
| EP0113215A3 (en) | 1986-06-11 |
| DE3378057D1 (en) | 1988-10-27 |
| JPS59106291A (ja) | 1984-06-19 |
| EP0113215B1 (en) | 1988-09-21 |
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