JPH0148277B2 - - Google Patents
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- JPH0148277B2 JPH0148277B2 JP7127381A JP7127381A JPH0148277B2 JP H0148277 B2 JPH0148277 B2 JP H0148277B2 JP 7127381 A JP7127381 A JP 7127381A JP 7127381 A JP7127381 A JP 7127381A JP H0148277 B2 JPH0148277 B2 JP H0148277B2
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J13/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen having a carbon-to-carbon double bond from or to position 17
- C07J13/007—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen having a carbon-to-carbon double bond from or to position 17 with double bond in position 17 (20)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P33/00—Preparation of steroids
- C12P33/06—Hydroxylating
- C12P33/08—Hydroxylating at 11 position
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- Steroid Compounds (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は新規Δ1、４、17（20）−BNC化合物お
よびその製法に関し、更に詳しくは11位に酸素官
能基を有する17−置換ステロイド化合物およびそ
の製法に関する。 ステロイド化合物の11位を微生物を用いて酸化
することは知られており、文献にもその様なステ
ロイド酸化の例が多数記載されている。たとえ
ば、次に示す文献およびそこに引用された原報は
この点での参考になろう： F.Drawert“Biosynthese von Hydroxy−
Verbindungen”；Houben−Weyl“Methoden
der organischen Chemie”（1978）６／1d、378
〜388頁、 T.H.Stoudt、Adv.Appl.Microbiol.第２巻
（1960）190〜195頁、 Handbuch W.CharneyおよびH.L.Herzog
“Microbial Transformations of Steroids”
Academic Press（1967）New York、29頁。 これらには、多数例の微生物株、特にカビ
（fungi）に属するもの、種々のステロイド化合物
の微生物による11−ヒドロキシル化およびそれに
より得られる生成物が記載されている。 西ドイツ特許出願公開第2839033号には、就中、
微生物的方法による３−オキソ−４−プレグネン
−20−カルボン酸（Δ4−BNC）および３−オキ
ソ−１，４−プレグナジエン−20−カルボン酸
（Δ1，４−BNC）の11−ヒドロキシル化が開示
されている。ここで、該出発物質は栄養水溶液中
通気下に微生物培養により処理され、11−ヒドロ
キシル化に付される。この種類のBNC化合物は、
17位にあるα−プロピオン酸残基が飽和炭素結合
によりステロイド環構造に結合している点に特徴
を有している。 本発明は、17（20）位に二重結合を有する構造
類似BNC化合物を11位において酸素により官能
化することを目的とする。本発明の新規化合物
は、17（20）位に二重結合を有しているので、薬
理活性を有するステロイド化合物の製造に用いる
中間体として特に有用である。これら化合物は、
複数の反応中心、特に17（20）位に二重結合を有
しているので、ステロイド基を持つた既知の薬理
活性化合物を容易に変換しうる。 本発明の第１の要旨は、一般式： で示される新規△１、４、17（20）BNC化合物に
存する。 式（）中、Ａはβ−ヒドロキシ基を表わす
か、またはＡで置換されたステロイド基の11位の
炭素原子と共同してカルボニル基を形成する。Ｍ
は種々の定義を有するが、特にＭは水素を表わ
し、この場合、化合物（）は遊離酸となる。Ｍ
は、さらに塩形成基、すなわち陽イオンでありう
る。陽イオンとしては、金属陽イオン、特にアル
カリ金属および／またはアルカリ土類金属イオン
だけでなく、アンモニウムまたは有機陽イオンも
挙げられる。加えて、Ｍは、炭素数が好ましくは
20、特に10を越えない炭化水素基であつてもよ
い。特に、低級アルキル基、たとえばC1〜C5の
もの、就中、メチル基が好ましい。 本発明の他の要旨は、化合物（）の製法に存
し、該製法は11位に酸素を有しない構造類似
BNC化合物の11位を、自体既知の方法により、
水性栄養培地中、好気的条件下、11−ヒドロキシ
ル化能を有する微生物を用いてヒドロキシル化
し、要すれば生成物を化学変換処理に付して化合
物（）を得ることを特徴としている。 本発明方法で用いる出発物質は、次式： で示される。 ヨーロツパ特許出願第81100146.0号および第
81100145.2号には、17−Ｃ−側鎖ステロイド基質
を微生物的に側鎖減成して20−カルボキシ−プレ
グナ−１、４、17（20）−トリエン−３−オン
（Δ1、４、17（20）−BNC）を得ることが開示さ
れている。さらに、20−カルボン酸基を変化させ
て対応するカルボン酸エステルまたはカルボン酸
クロリドを得ることも開示されている。 これらの出発物質は、本発明に従い、微生物的
に酸化されて化合物（）に変換される。 高薬理活性を得るには、一般に11β−ヒドロキ
シまたは11−オキソ立体配置が望ましい。11位が
β−ヒドロキシル化されたステロイドを得るに
は、この様なヒドロキシ基を立体選択的に導入す
る微生物株を利用する。これら化学変換について
の参考文献としては、たとえばL.F.Fieser、M.
Fieser“Steroide”Verlag Chemie（Weinheim
1961）737頁以下およびそれに引用された原報J.
Am.Chem.Soc.第77巻4436頁（1955年）が挙げら
れる。 本発明で用いられる17（20）位にオレフイン性
二重結合を有するBNC出発物質では広範囲に11
位を選択的に酸化することができる。酸化生成物
の特定構造は選択した微生物によつて定まる。11
−オキソ化合物は直接酸化生成物として得ること
もできるが、先に得たβ−ヒドロキシ化合物を化
学的に酸化する別の製造工程により調製すること
も可能である。 微生物、特にカビ類の微生物による11位酸化
は、文献記載の培養条件に従つて行うことがで
き、これに関する文献としてはRehm
“Industrielle Mikrobiologie”Springer（1967）
518〜538頁およびこれに引用された原報を挙げる
ことができる。 11位非置換出発物質の変換は、たとえばこの種
の変換に適した既知の微生物を標準の組成を持つ
た水性栄養培地中、好気的条件において変換すべ
きBNC出発物質の存在下に培養することにより
行うことができる。 BNC出発物質としては、対応する遊離酸また
は栄養水溶液に溶解もしくは一部溶解しうるその
塩ないしは遊離酸のエステル、特にメチルエステ
ルなどを用いることができる。しかしながら、遊
離酸または栄養水溶液に少くとも一部溶解しうる
塩を用いることが好ましい。 微生物による変換は、引用文献に詳細に記述さ
れた自体既知の方法により行うことができる。従
つて、たとえば出発物質として選んだステロイド
化合物は、インキユベーシヨン期間の培養物に添
加することもまた選んだ微生物の接種前に栄養培
地へ加えることもできる。ステロイド化合物は単
独でまたは複数の混合物として用いることができ
る。培養物中のステロイド化合物の量は、約0.1
〜100ｇ/が好ましい。培養工程における変換す
べき出発物質の最適濃度は一般に菌株により異な
るが、適宜簡単な予備実験を行うことにより定め
ることができる。一般に、培地中のステロイド出
発物質濃度は、好ましくは50ｇ/を越えず。通
常25ｇ/を越えない。また、好ましくは１ｇ/
を越える量で使用する。 酸化反応に付する基質は、反応媒体に一度に加
えるのではなく、反応の進行に伴つて順次加える
のが好ましい。実施態様では酸化の進行に伴つて
出発物質を連続的に反応混合物に加えるのが好ま
しい。この様な方法により多くの場合、所望生成
物の収量を増すことができる。 培養は、通常の代謝しうる炭素源および微生物
が普通必要とする栄養および発育素を含有する栄
養培地中で行われる。微生物の生育にとつて特に
有用なものは、たとえばグルコース、フルクトー
ス、サツカロース、グリセリン、デンプン、デキ
ストリン、糖含有廃液などである。適当な窒素源
としては、アンモニウム塩、硝酸塩、ペプトン、
トウモロコシ汁、大豆粉、酒糟滓、魚粉などが挙
げられる。さらに、酵母エキスおよびビタミンの
様な発酵促進剤を加えることができる。栄養培地
は、これらに加えて好ましくは無機塩、たとえば
リン酸ナトリウム、カリウムまたはアンモニウム
を含有する。 出発物質は、既知の乳化剤、たとえば脂肪酸ソ
ルビタンエステルもしくはそのエチレンオキシド
付加物、ポリオキシエチレンモノラウリルエーテ
ル、脂肪酸エタノールアミドなどを用いて栄養培
地中に乳化させるのが好ましい。 使用する培地は、微生物育成開始前に加熱滅菌
しておく。冷却後、変換能のある微生物株の適当
な予備培養物を培地に接種し、25〜55℃、好まし
くは27〜30℃でインキユベートする。栄養溶液の
PHは４〜8.5が好ましい、培養物は、振とう、撹
拌または通気を行いながら、酸化反応が所望程度
進行するまでインキユベートする。酸化反応は、
基質、濃度および他の発酵条件にもよるが、通常
24〜160時間の範囲で行う。 この方法で得られた酸化生成物は、通常発酵液
中に蓄積されるが、既知の方法により反応混合物
から分離することができる。たとえば、酸化され
たBNC化合物は、有機溶媒により、要すれば交
換カラムを用いて抽出することにより反応生成物
から分離することができる。生成したBNC化合
物の分離については、ヨーロツパ特許出願公開第
004913号（1979年10月31日）に詳述されている。 ヒドロキシル化BNC化合物の分離は酸性領域
で発酵液から沈殿させるのが特に容易である。 分離された11位に酸素官能基を有するBNC化
合物は、再結晶により精製する。 化合物（）のうち特に重要な化合物は、11β
−ヒドロキシ−Δ1、４、17（20）−BNC、その塩
およびエステルである。本発明化合物のうち加え
て重要なものは、11−オキソ−Δ1、４、17（20）
−BNCおよび前述の酸の誘導体である。 本発明化合物は、17位置換基の変換および／ま
たは17（20）位二重結合への付加を行うための出
発物質として特に有用である。また、本発明化合
物は、たとえばプロゲステロン型薬理活性化合物
製造のための重要な中間体である。 本発明方法で用いる微生物としては、クルブラ
リア（Curvularia）やカニンガメラ
（Cunninghamella）属の11β−ヒドロキシ化能を
有する菌株、などが例示され、より具体的にはク
ルブラリア・ルナータ（Curvularia lunata）
NRRL2380、カニンガメラ・ブレークスレアナ
（Cunninghamella blakessleana）ATCC8688b、
カニンガメラ・ベルトレチア（Cunninghamella
bertholletiae）NRRL1378、カニンガメラ・ベル
チシラータ（Cunninghamella verticillata）
ATCC8983、カニンガメラ・エレガンス
（Cunninghamellaelegans）ATCC9245などを挙
げることが出来る。 これら微生物にとつて通常用いられている培養
条件下、適当な栄養培地中、通気しながら水中培
養を行う。次いで培養物中に上述の方法に従つて
基質を加え、基質変換が最大になるまで発酵させ
る。 基質の溶媒としては、たとえばメタノール、エ
タノール、グリコールモノメチルエーテル、ジメ
チルホルムアミド、ジメチルスルホキシドなどが
用いられる。 最適の基質濃度、基質添加時期および培養、醗
酵時間は、使用する基質の構造および使用する微
生物の種類に依存する。微生物によるステロイド
変換にとつて一般に必要なこれらの数値は、個々
に当業者にとつて明らかな予備実験を行うことに
より容易に決定することができる。 次に実施例を示し、本発明を具体的に説明す
る。 実施例 １ 11β−ヒドロキシ−Δ1、４、17（20）−BNCの
製造：− 次の組成を有する栄養溶液600mlを含む２−
エルレンマイヤ−フラスコ中でカニンガメラ・ブ
レークスレアナATCC8688a株を好気的に培養す
る： 0.15重量％ KH2PO4 0.20重量％ NaNO3 0.30重量％ ペプトン 0.50重量％ 酵母エキス 3.00重量％ グルコース PH5.8 培養物を振とう機（振とう速度140rpm）上、
30℃で48時間予備培養し、次いでTween80（ポリ
オキシエチレンソルビタンモノオレエート）0.1
重量％およびΔ1、４、17−BNC20％を含むΔ1，
４−BNC0.2重量％を加え、更に72時間培養す
る。変換生成物として11β−ヒドロキシ−Δ1、
４、17−BNCを収率55％（仕込みΔ1、４、17−
BNCに対して）で得た。 純生成物の調製は、この実施例および以下の実
施例において、次の手順で行つた。 微生物変換終了後、細胞を遠心分離（10000ｇ
×５分）により分離し、遠心液（１）をジクロ
ロメタン（２×１）により分液ロートを用いて
抽出する。分離した細胞塊も塩化メチレンまたは
THFで抽出する。有機抽出物を合し、ロータリ
エバポレータで減圧下に蒸発乾固する。シロツプ
状残渣（２ｇ）をメタノール／ジクロロメタン
（７：３）150mlに溶解し、陰イオン交換樹脂
Dowex1×２（25ml）を用い、次の方法で精製す
る： １ 不要の媒質成分、たとえば乳化剤をメタノー
ル／ジクロロメタン（７：３）混合溶媒（４×
25ml）で抽出して除去する。 ２ 濃塩酸12.3ｇ、ジクロロメタン30mlおよび水
4.8ｇにメタンを加えて250mlとして成る混合物
250mlでヒドロキシル化BNC−誘導体を溶離す
る。 溶離液を50mlに濃縮し、蒸留水150mlを加えて
ヒドロキシル化BNC−誘導体を沈殿させる。 水溶液をジクロロメタン（２×100ml）で抽出
し、得られた有機抽出物をロータリエバポレータ
で減圧下に蒸発乾固する。 残渣（２ｇ）とＮ〔（トリルスルホニル−４）〕−
Ｎ−メチルニトロソアミドをダルムシユタツト在
メルク社発行のインストラクシヨン・パンフレツ
ト７／230／4.5／266に従つて反応させてヒドロ
キシル化BNC−誘導体のメチルエステルを調製
する。 溶媒を除去した後、残渣をジクロロメタンに加
え（20mg/ml）、次の条件でプレパラテイブ液相ク
ロマトグラフイに付す： (a) カラム：デユポンカラム パートNo.899000001、充填材シリカゲル、
平均粒度7μ、カラム長250mm、外径25.4
mm (b) 溶離液：イソオクタン／イソプロパノール
（95：５） (c) 条件：50ml／分貫流、70bar、約313K (d) 検出：UV検出器、254ナノメータ 溶出フラクシヨンを種々の分析方法により以下
に記載する様に特性づけた。 実施例 ２ 11−オキソ−Δ1、４、17−BNCの製造：− 11β−ヒドロキシ−Δ1、４、17−BNC10mgを
無水塩化メチレン１mlに溶解し、これをピリジニ
ウムクロロクロメート10mgの無水塩化メチレン１
ml懸濁液にすばやく加える。懸濁液を室温で１時
間撹拌し、次いで短いシリカゲルカラム（溶離
液：CH2Cl2／CH3OH4：１）で過する。溶離
液を濃縮して結晶残渣８mgを得たが、該残渣は薄
層クロマトグラフイー分析によれば純物質であつ
た。 この化合物から実施例１の記載に従つてメチル
エステルを調製した。 両化合物の元素分析結果および構造データを第
１表に示す。 【表】
よびその製法に関し、更に詳しくは11位に酸素官
能基を有する17−置換ステロイド化合物およびそ
の製法に関する。 ステロイド化合物の11位を微生物を用いて酸化
することは知られており、文献にもその様なステ
ロイド酸化の例が多数記載されている。たとえ
ば、次に示す文献およびそこに引用された原報は
この点での参考になろう： F.Drawert“Biosynthese von Hydroxy−
Verbindungen”；Houben−Weyl“Methoden
der organischen Chemie”（1978）６／1d、378
〜388頁、 T.H.Stoudt、Adv.Appl.Microbiol.第２巻
（1960）190〜195頁、 Handbuch W.CharneyおよびH.L.Herzog
“Microbial Transformations of Steroids”
Academic Press（1967）New York、29頁。 これらには、多数例の微生物株、特にカビ
（fungi）に属するもの、種々のステロイド化合物
の微生物による11−ヒドロキシル化およびそれに
より得られる生成物が記載されている。 西ドイツ特許出願公開第2839033号には、就中、
微生物的方法による３−オキソ−４−プレグネン
−20−カルボン酸（Δ4−BNC）および３−オキ
ソ−１，４−プレグナジエン−20−カルボン酸
（Δ1，４−BNC）の11−ヒドロキシル化が開示
されている。ここで、該出発物質は栄養水溶液中
通気下に微生物培養により処理され、11−ヒドロ
キシル化に付される。この種類のBNC化合物は、
17位にあるα−プロピオン酸残基が飽和炭素結合
によりステロイド環構造に結合している点に特徴
を有している。 本発明は、17（20）位に二重結合を有する構造
類似BNC化合物を11位において酸素により官能
化することを目的とする。本発明の新規化合物
は、17（20）位に二重結合を有しているので、薬
理活性を有するステロイド化合物の製造に用いる
中間体として特に有用である。これら化合物は、
複数の反応中心、特に17（20）位に二重結合を有
しているので、ステロイド基を持つた既知の薬理
活性化合物を容易に変換しうる。 本発明の第１の要旨は、一般式： で示される新規△１、４、17（20）BNC化合物に
存する。 式（）中、Ａはβ−ヒドロキシ基を表わす
か、またはＡで置換されたステロイド基の11位の
炭素原子と共同してカルボニル基を形成する。Ｍ
は種々の定義を有するが、特にＭは水素を表わ
し、この場合、化合物（）は遊離酸となる。Ｍ
は、さらに塩形成基、すなわち陽イオンでありう
る。陽イオンとしては、金属陽イオン、特にアル
カリ金属および／またはアルカリ土類金属イオン
だけでなく、アンモニウムまたは有機陽イオンも
挙げられる。加えて、Ｍは、炭素数が好ましくは
20、特に10を越えない炭化水素基であつてもよ
い。特に、低級アルキル基、たとえばC1〜C5の
もの、就中、メチル基が好ましい。 本発明の他の要旨は、化合物（）の製法に存
し、該製法は11位に酸素を有しない構造類似
BNC化合物の11位を、自体既知の方法により、
水性栄養培地中、好気的条件下、11−ヒドロキシ
ル化能を有する微生物を用いてヒドロキシル化
し、要すれば生成物を化学変換処理に付して化合
物（）を得ることを特徴としている。 本発明方法で用いる出発物質は、次式： で示される。 ヨーロツパ特許出願第81100146.0号および第
81100145.2号には、17−Ｃ−側鎖ステロイド基質
を微生物的に側鎖減成して20−カルボキシ−プレ
グナ−１、４、17（20）−トリエン−３−オン
（Δ1、４、17（20）−BNC）を得ることが開示さ
れている。さらに、20−カルボン酸基を変化させ
て対応するカルボン酸エステルまたはカルボン酸
クロリドを得ることも開示されている。 これらの出発物質は、本発明に従い、微生物的
に酸化されて化合物（）に変換される。 高薬理活性を得るには、一般に11β−ヒドロキ
シまたは11−オキソ立体配置が望ましい。11位が
β−ヒドロキシル化されたステロイドを得るに
は、この様なヒドロキシ基を立体選択的に導入す
る微生物株を利用する。これら化学変換について
の参考文献としては、たとえばL.F.Fieser、M.
Fieser“Steroide”Verlag Chemie（Weinheim
1961）737頁以下およびそれに引用された原報J.
Am.Chem.Soc.第77巻4436頁（1955年）が挙げら
れる。 本発明で用いられる17（20）位にオレフイン性
二重結合を有するBNC出発物質では広範囲に11
位を選択的に酸化することができる。酸化生成物
の特定構造は選択した微生物によつて定まる。11
−オキソ化合物は直接酸化生成物として得ること
もできるが、先に得たβ−ヒドロキシ化合物を化
学的に酸化する別の製造工程により調製すること
も可能である。 微生物、特にカビ類の微生物による11位酸化
は、文献記載の培養条件に従つて行うことがで
き、これに関する文献としてはRehm
“Industrielle Mikrobiologie”Springer（1967）
518〜538頁およびこれに引用された原報を挙げる
ことができる。 11位非置換出発物質の変換は、たとえばこの種
の変換に適した既知の微生物を標準の組成を持つ
た水性栄養培地中、好気的条件において変換すべ
きBNC出発物質の存在下に培養することにより
行うことができる。 BNC出発物質としては、対応する遊離酸また
は栄養水溶液に溶解もしくは一部溶解しうるその
塩ないしは遊離酸のエステル、特にメチルエステ
ルなどを用いることができる。しかしながら、遊
離酸または栄養水溶液に少くとも一部溶解しうる
塩を用いることが好ましい。 微生物による変換は、引用文献に詳細に記述さ
れた自体既知の方法により行うことができる。従
つて、たとえば出発物質として選んだステロイド
化合物は、インキユベーシヨン期間の培養物に添
加することもまた選んだ微生物の接種前に栄養培
地へ加えることもできる。ステロイド化合物は単
独でまたは複数の混合物として用いることができ
る。培養物中のステロイド化合物の量は、約0.1
〜100ｇ/が好ましい。培養工程における変換す
べき出発物質の最適濃度は一般に菌株により異な
るが、適宜簡単な予備実験を行うことにより定め
ることができる。一般に、培地中のステロイド出
発物質濃度は、好ましくは50ｇ/を越えず。通
常25ｇ/を越えない。また、好ましくは１ｇ/
を越える量で使用する。 酸化反応に付する基質は、反応媒体に一度に加
えるのではなく、反応の進行に伴つて順次加える
のが好ましい。実施態様では酸化の進行に伴つて
出発物質を連続的に反応混合物に加えるのが好ま
しい。この様な方法により多くの場合、所望生成
物の収量を増すことができる。 培養は、通常の代謝しうる炭素源および微生物
が普通必要とする栄養および発育素を含有する栄
養培地中で行われる。微生物の生育にとつて特に
有用なものは、たとえばグルコース、フルクトー
ス、サツカロース、グリセリン、デンプン、デキ
ストリン、糖含有廃液などである。適当な窒素源
としては、アンモニウム塩、硝酸塩、ペプトン、
トウモロコシ汁、大豆粉、酒糟滓、魚粉などが挙
げられる。さらに、酵母エキスおよびビタミンの
様な発酵促進剤を加えることができる。栄養培地
は、これらに加えて好ましくは無機塩、たとえば
リン酸ナトリウム、カリウムまたはアンモニウム
を含有する。 出発物質は、既知の乳化剤、たとえば脂肪酸ソ
ルビタンエステルもしくはそのエチレンオキシド
付加物、ポリオキシエチレンモノラウリルエーテ
ル、脂肪酸エタノールアミドなどを用いて栄養培
地中に乳化させるのが好ましい。 使用する培地は、微生物育成開始前に加熱滅菌
しておく。冷却後、変換能のある微生物株の適当
な予備培養物を培地に接種し、25〜55℃、好まし
くは27〜30℃でインキユベートする。栄養溶液の
PHは４〜8.5が好ましい、培養物は、振とう、撹
拌または通気を行いながら、酸化反応が所望程度
進行するまでインキユベートする。酸化反応は、
基質、濃度および他の発酵条件にもよるが、通常
24〜160時間の範囲で行う。 この方法で得られた酸化生成物は、通常発酵液
中に蓄積されるが、既知の方法により反応混合物
から分離することができる。たとえば、酸化され
たBNC化合物は、有機溶媒により、要すれば交
換カラムを用いて抽出することにより反応生成物
から分離することができる。生成したBNC化合
物の分離については、ヨーロツパ特許出願公開第
004913号（1979年10月31日）に詳述されている。 ヒドロキシル化BNC化合物の分離は酸性領域
で発酵液から沈殿させるのが特に容易である。 分離された11位に酸素官能基を有するBNC化
合物は、再結晶により精製する。 化合物（）のうち特に重要な化合物は、11β
−ヒドロキシ−Δ1、４、17（20）−BNC、その塩
およびエステルである。本発明化合物のうち加え
て重要なものは、11−オキソ−Δ1、４、17（20）
−BNCおよび前述の酸の誘導体である。 本発明化合物は、17位置換基の変換および／ま
たは17（20）位二重結合への付加を行うための出
発物質として特に有用である。また、本発明化合
物は、たとえばプロゲステロン型薬理活性化合物
製造のための重要な中間体である。 本発明方法で用いる微生物としては、クルブラ
リア（Curvularia）やカニンガメラ
（Cunninghamella）属の11β−ヒドロキシ化能を
有する菌株、などが例示され、より具体的にはク
ルブラリア・ルナータ（Curvularia lunata）
NRRL2380、カニンガメラ・ブレークスレアナ
（Cunninghamella blakessleana）ATCC8688b、
カニンガメラ・ベルトレチア（Cunninghamella
bertholletiae）NRRL1378、カニンガメラ・ベル
チシラータ（Cunninghamella verticillata）
ATCC8983、カニンガメラ・エレガンス
（Cunninghamellaelegans）ATCC9245などを挙
げることが出来る。 これら微生物にとつて通常用いられている培養
条件下、適当な栄養培地中、通気しながら水中培
養を行う。次いで培養物中に上述の方法に従つて
基質を加え、基質変換が最大になるまで発酵させ
る。 基質の溶媒としては、たとえばメタノール、エ
タノール、グリコールモノメチルエーテル、ジメ
チルホルムアミド、ジメチルスルホキシドなどが
用いられる。 最適の基質濃度、基質添加時期および培養、醗
酵時間は、使用する基質の構造および使用する微
生物の種類に依存する。微生物によるステロイド
変換にとつて一般に必要なこれらの数値は、個々
に当業者にとつて明らかな予備実験を行うことに
より容易に決定することができる。 次に実施例を示し、本発明を具体的に説明す
る。 実施例 １ 11β−ヒドロキシ−Δ1、４、17（20）−BNCの
製造：− 次の組成を有する栄養溶液600mlを含む２−
エルレンマイヤ−フラスコ中でカニンガメラ・ブ
レークスレアナATCC8688a株を好気的に培養す
る： 0.15重量％ KH2PO4 0.20重量％ NaNO3 0.30重量％ ペプトン 0.50重量％ 酵母エキス 3.00重量％ グルコース PH5.8 培養物を振とう機（振とう速度140rpm）上、
30℃で48時間予備培養し、次いでTween80（ポリ
オキシエチレンソルビタンモノオレエート）0.1
重量％およびΔ1、４、17−BNC20％を含むΔ1，
４−BNC0.2重量％を加え、更に72時間培養す
る。変換生成物として11β−ヒドロキシ−Δ1、
４、17−BNCを収率55％（仕込みΔ1、４、17−
BNCに対して）で得た。 純生成物の調製は、この実施例および以下の実
施例において、次の手順で行つた。 微生物変換終了後、細胞を遠心分離（10000ｇ
×５分）により分離し、遠心液（１）をジクロ
ロメタン（２×１）により分液ロートを用いて
抽出する。分離した細胞塊も塩化メチレンまたは
THFで抽出する。有機抽出物を合し、ロータリ
エバポレータで減圧下に蒸発乾固する。シロツプ
状残渣（２ｇ）をメタノール／ジクロロメタン
（７：３）150mlに溶解し、陰イオン交換樹脂
Dowex1×２（25ml）を用い、次の方法で精製す
る： １ 不要の媒質成分、たとえば乳化剤をメタノー
ル／ジクロロメタン（７：３）混合溶媒（４×
25ml）で抽出して除去する。 ２ 濃塩酸12.3ｇ、ジクロロメタン30mlおよび水
4.8ｇにメタンを加えて250mlとして成る混合物
250mlでヒドロキシル化BNC−誘導体を溶離す
る。 溶離液を50mlに濃縮し、蒸留水150mlを加えて
ヒドロキシル化BNC−誘導体を沈殿させる。 水溶液をジクロロメタン（２×100ml）で抽出
し、得られた有機抽出物をロータリエバポレータ
で減圧下に蒸発乾固する。 残渣（２ｇ）とＮ〔（トリルスルホニル−４）〕−
Ｎ−メチルニトロソアミドをダルムシユタツト在
メルク社発行のインストラクシヨン・パンフレツ
ト７／230／4.5／266に従つて反応させてヒドロ
キシル化BNC−誘導体のメチルエステルを調製
する。 溶媒を除去した後、残渣をジクロロメタンに加
え（20mg/ml）、次の条件でプレパラテイブ液相ク
ロマトグラフイに付す： (a) カラム：デユポンカラム パートNo.899000001、充填材シリカゲル、
平均粒度7μ、カラム長250mm、外径25.4
mm (b) 溶離液：イソオクタン／イソプロパノール
（95：５） (c) 条件：50ml／分貫流、70bar、約313K (d) 検出：UV検出器、254ナノメータ 溶出フラクシヨンを種々の分析方法により以下
に記載する様に特性づけた。 実施例 ２ 11−オキソ−Δ1、４、17−BNCの製造：− 11β−ヒドロキシ−Δ1、４、17−BNC10mgを
無水塩化メチレン１mlに溶解し、これをピリジニ
ウムクロロクロメート10mgの無水塩化メチレン１
ml懸濁液にすばやく加える。懸濁液を室温で１時
間撹拌し、次いで短いシリカゲルカラム（溶離
液：CH2Cl2／CH3OH4：１）で過する。溶離
液を濃縮して結晶残渣８mgを得たが、該残渣は薄
層クロマトグラフイー分析によれば純物質であつ
た。 この化合物から実施例１の記載に従つてメチル
エステルを調製した。 両化合物の元素分析結果および構造データを第
１表に示す。 【表】
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 一般式： ［式中、Ａはβ−ヒドロキシまたはＡで置換され
た炭素原子と共にカルボニル基を表わし、Ｍは水
素、塩形成基または炭素数20を越えない炭化水素
基を表わす。］ で示される△１、４、17（20）−BNC化合物。 ２ 11β−ヒドロキシ−△１、４、17（20）−BNC
である特許請求の範囲第１項記載の化合物。 ３ 11−オキソ−△１、４、17（20）−BNCであ
る特許請求の範囲第１項記載の化合物。 ４ 11位に酸素を有しない構造類似BNC化合物
の11位を水性培地中、好気的条件下、11−ヒドロ
キシル化能を有する微生物を用いてヒドロキシル
化し、要すれば生成物を化学変換処理に付して 一般式： ［式中、Ａはβ−ヒドロキシまたはＡで置換され
た炭素原子と共にカルボニル基を表わし、Ｍは水
素、塩形成基または炭素数20を越えない炭化水素
基を表わす。］ で示される化合物を得ることを特徴とする△１、
４、17（20）−BNC化合物の製法。 ５ 一般式で示される11−ヒドロキシル化BNC
化合物を酸化して11−オキソ化合物を得る特許請
求の範囲第４項記載の製法。 ６ BNC遊離酸（Ｍ＝Ｈ）または水性培地に可
溶のその塩を11−ヒドロキシル化物に変換し、次
いで要すれば20位のカルボキシル基をエステル基
に変換する特許請求の範囲第４項または第５項記
載の製法。
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| AT253480A AT369032B (de) | 1980-05-12 | 1980-05-12 | Verfahren zur herstellung neuer delta17(20)-bnc -verbindungen |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS577496A JPS577496A (en) | 1982-01-14 |
| JPH0148277B2 true JPH0148277B2 (ja) | 1989-10-18 |
Family
ID=3536000
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7127381A Granted JPS577496A (en) | 1980-05-12 | 1981-05-11 | Novel delta 17(20)-bnc compound and manufacture |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0039894B1 (ja) |
| JP (1) | JPS577496A (ja) |
| AT (1) | AT369032B (ja) |
| DE (2) | DE3117541A1 (ja) |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3994933A (en) * | 1975-04-30 | 1976-11-30 | G. D. Searle & Co. | 3-Oxo-pregna-4,17(20)-dien-20-carboxylic acid and esters |
| DE2839033A1 (de) * | 1978-09-05 | 1980-03-13 | Schering Ag | 3-oxo-4-pregnen-20 alpha -carbonsaeure- derivate, ihre herstellung und verwendung |
-
1980
- 1980-05-12 AT AT253480A patent/AT369032B/de not_active IP Right Cessation
-
1981
- 1981-05-04 DE DE19813117541 patent/DE3117541A1/de not_active Withdrawn
- 1981-05-06 DE DE8181103423T patent/DE3165025D1/de not_active Expired
- 1981-05-06 EP EP19810103423 patent/EP0039894B1/de not_active Expired
- 1981-05-11 JP JP7127381A patent/JPS577496A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0039894B1 (de) | 1984-07-25 |
| DE3117541A1 (de) | 1982-06-16 |
| DE3165025D1 (en) | 1984-08-30 |
| AT369032B (de) | 1982-11-25 |
| EP0039894A1 (de) | 1981-11-18 |
| ATA253480A (de) | 1982-04-15 |
| JPS577496A (en) | 1982-01-14 |
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