JPH01501000A - 酵素含有殺菌剤組成物、並びにこの組成物を含む歯科及び創傷治療用品 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 酵素含有殺菌剤組成物、並びにこの組成物を含む歯科及び創傷治療用品 本発明は、水性環境下かつ酸素及び基質存在下において過酸化水素を形成しうる 少なくとも一種の酵素をペルオキシダーゼ及びチオシアネートと共に含有したタ イプの殺菌剤組成物に関する。

本発明の殺菌剤組成物は一般的応用が可能であるが、組成物は主として歯肉炎及 び歯周症の予防及び治療用組成物を製造するために開発されかつ試験されている ので、本発明はこの問題を解決するために以下で更に詳細に説明されている。

多少なりともタンパク質及び炭水化物物質を含む細菌コーティングとして歯表面 上に沈着した歯プラーク、上皮細胞及び食物残渣もしくは刺激物残渣が虫歯、歯 石、歯肉炎及びω周症の原因を協同でなしていることは、一般的に認められてい る。ある種の細菌は摂取食物又は刺激物の炭水化物から数種の強付着性炭水化物 （デキストラン類）を合成するが、特にスクロースはデキストラン類形成の主成 分をなしている。プラーク中の細菌は、摂取食物又は刺激物中に存在する又はそ れらから得られる特に分解性の単及び三糖類の醗酵分解及び反応に基づき、有８ １酸類、特に乳酸及び酢酸を産生ずる。得られる有機酸類は、カルシウム及びホ スフェートを遊離させることによって、エナメル質しかる後歯髄を攻撃かつ脱無 機質化するが、このことは虫歯の突発及び進行を意味している。歯石は、カルシ ウム及びホスフェートを蓄積させる傾向のある歯プラークの無機質化の原因をな している。

歯プラークが例えば歯のブラッシングによって規則的に除去されない場合には、 カルシウム及びホスフェートの蓄積は細菌を包埋するヒドロキシアパタイト（ｈ ｙｄｒｏｘｙａｐａｔｉｔｅ）の密着性及び耐摩耗性網状組織が歯表面上で生成 する段階に達するようになる。ヒドロキシアパタイトが総歯石物質の８０％を占 める進行中の歯石は更に増大する傾向を有しているが、その理由は歯石中の細菌 が通常の歯ブラッシングでは除去できなくなるからである。

歯石及び歯肉炎間の臨床的相互関係は既に長い間にわたって知られており、この 相互関係は数回にわたり証明されてきた。同様に、無治療の歯肉炎は時の経過に 従い歯周症に進行することも知られている。歯石は歯のブラッシングが困難な歯 の領域で典型的に生じる。この関係では、歯の隙間に面した歯の表面が特に重要 である。歯の隙間に沈着した歯石は、そこから更に歯及び歯肉の隙間にまで広が り、しかる後歯肉下の歯石は歯の隙間から歯の他の領域にまで広がるようになる 。更に進行した段階になると、歯石は歯肉及び歯頚部間の広い領域で生じ、細菌 により生成する有機酸が歯のみならず歯肉背後に位置する骨構造までをも脱無機 質化してしまう。

様々な方法は、プラークの形成を制限及び抑制するためにこれまで行われてきた 試みに基づいていた。これらは、主として、歯表面にプラークを付着させるデキ ストランゲルの形成を妨げるか、増殖阻害的もしくは殺菌的に作用し及びある場 合においてその場で産生される化合物の利用により細菌の増殖を妨げるかのいず れかからなる。

デキストランの形成を防止するための幾つかの方法が示された。許諾された西独 特許第１，４６７．８０９号明細書によれば、リン酸とスクロース、グルコース 又はラクトースとのエステル類のカルシウム、ナトリウム又はマグネシウム塩は 虫歯抑制歯科衛生剤として作用することができる。これらの化合物は障害を起こ させると言われており、そのことによって細菌によるスクロースからのデキスト ランゲル形成を抑制している。しかしながら、その方法は、プラークが除去困難 であってかつ細菌が低分子量炭水化物と自由に接近しうろことを付着食物残渣が 高確率で現実化している歯の隙間における細菌コーティングに関して、意図した 効果を有していない。しかも、その方法は既に生じた歯石に対して何らの効果も 有しておらず、その結果この方法は歯肉炎及び歯周症の抑制に関してさほど適さ ないことから留保される。

米国特許第３．７３３，３９９号明細書によれば、虫歯の前段階としての歯プラ ークの形成は、三糖類スクロースを２種の七ツマー１即ち無水グルコース及びフ ルクトースに分解するインベルターゼにより抑制されると述べられている。プラ ーク中に形成されるデキストランゲルは細菌によりスクロースから合成されるだ けであると言われており、インベルターゼの効果は細菌にとって利用可能なスク ロース量を減少させることにあるのであろう。

乳酸デヒドロゲナーゼと一緒のインベルターゼの使用は、米国特許第４，２５５ ，４１４号明細書によれば、同様に抗虫歯効果を有すると言われている。しかし ながら、例えばストレプトコツカス属（Ｓｔ　ｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）変異株 のようなう食原性の細菌はスクロースを無水グルコース及びフルクトースに分解 するインベルターゼ様酵素を自ら形成するものの、上記細菌は自己の酵素及び歯 科衛生剤と共に利用されるインベルターゼから得られる無水グルコースからデキ ストランゲルを形成しているらしいことが知られている。更には、摂取食物がス クロースの代わりにデンプン又はラクトースのような炭化水素類を含有している 場合にも歯プラークは形成され、しかも歯科衛生剤中に含まれているインベルタ ーゼはこれらの場合のプラーク形成に関して何らかの作用を有していると期待し えないことが知られている。結局、インベルタ−ゼは既に形成されたプラーク及 び歯石に対しては何らの作用も有さず、したがってインベルターゼは抑制に関し てわずかに重要性があるにすぎず、歯肉炎及び歯周症の治療については重要性か ない。

プラーク中で生成したデキストランゲルは、受諾された西独特許出願第１，９５ ５．９５６号明細書において、デキストラナーゼにより分解させることが提案さ れている。オーストリア特許第３１８，８１５号明細書によれば、しかしながら 、デキストラナーゼは単に可溶性デキストランを分解しうるだけで、プラーク中 には分解されえない不溶性デキストランが一部存在していることが見出された。

米国特許第４，１５４．８１５号明細書によれば、歯プラークはプロテアーゼ、 カルボヒドラーゼ及び／又はリパーゼと共に亜鉛を用いることによって抑制され ている。亜鉛はプラーク構造及びプラークの無機質化の妨害によって作用するこ とが判明しているが、一方酵素はプラーク高密度化高重合組成物を分解する。上 記特許明細書中に記載された臨床実験では亜鉛及びプロテアーゼが歯表面上のプ ラーク量を減少させうろことを証明しているが、実験報告は歯の隙間及び歯石に 関する効果について何も述べていない。

テンマーク特許出願第５５０４／７８号明細書は錠剤形又は粉末形の虫歯抑制歯 科衛生剤について開示しており、この薬剤は活性成分としてリゾチームのみを含 有している。この文献は適用されるリゾチームのタイプを詳細に説明していない 。

米国特許第３，９８５，８６９号明細書によれば、卵白リゾチームのみならずス トレプトミセス・アルバス（ＳｔｒｅｐｔＯｍｙｃｅｓ　ａｌｂｕｓ）、ストレ プトミセス・グリセウス（ｓｔｒｅｐｔｏｅｙｃｅｓ　ｇｒｉｓｅｕｓ）又はフ ラボバクテリウム（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｉ）属株から得られる酵素であ ってもストレプトコッカス及びラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉ　ｌ　１ｕ ｓ）属のう素片性細菌を溶解させることはできない。しかしながら、上記文献に よると、４種の異なるストレプトミセス株はう素片性ストレプトコッカス及びラ クトバチルスを攻撃しつる細胞溶解酵素を産生ずることができる。ところが、知 られているように、例えば口内用又は創傷治療用の薬剤にストレプトミセスから 産生される酵素を用いることについてはやや慎重な態度があるが、その理由は様 々なストレプトミセス株はその存在がかかる薬剤にとって望ましいものではなく かつストレプトミセス株から入手可能な望ましい酵素からの除去が困難な物質を も産生じているからである。したがって、例えば長期にわたり定期的に用いられ る歯科衛生剤が例えば耐性獲得に関与すると思われる口内の微生物叢バランスに 関して妨害する抗生物質を含有していることは、一般的に望ましくないのである 。

受諾された西独特許出願第２．０２７．０１９号及び並行米国特許第４，１５０ ．１１３号明細書は、基質の酸化的分解によって過酸化水素を遊離させるオキシ ドレダクターゼを追加した歯科衛生剤について扱っている。

これは虫歯抑制効果を得るためであると述べられている。

ＭＷとしで作用するグルコースは例えばデンプン又は三糖類を含んだ口内で食物 残渣から得られると言われているが、その理由は歯磨剤自体が問題の多又は三糖 類からグルコースを生成させるカルボヒドラーゼを含有していることがあるため である。しかしながら、得られる効果が上記文献中で有望である実験によれば、 反生理的高濃度のスクロースが酵素添加直前に加えられていたが、望ましい程度 まで細菌増殖を阻害又は抑制するために十分な濃度の過酸化水素が、実際問題と してより日常的に食物が摂取されている関係から判断し、薬剤を使用することに よって得られるということは非現実的であると考えねばならない。

米国特許第４，４７６．１０８号明細書では、過酸化水素の殺菌効力はペルオキ シダーゼと、反応により高段菌活性ａＭラジカルを生成する電子供与性分子との 添加によって増強すると述べている。西洋ワサビペルオキシダーゼが好ましいペ ルオキシダーゼであり、−刃型子供与体は以下に列挙された有機分子である；フ ェニルエチルアミン、チロシン、トリプトファン、安息香酸、サリチル酸、ヒド ロキノン、デヒドロフェニルアラニン、ワニリン及びｐ−アミノ安息香酸。過酸 化水素の存在は、問題の殺菌剤が過酸化水素、過酸化ナトリウム、過酸化メチル 又は過酸化エチル成分を含有している場合に得られる。

欧州特許出願第１３３，７３６号は抗菌活性のある歯磨剤組成物に関し、使用時 における次亜チオシアネート（Ｏ５ＣＮ−）の形成に基づいている。問題の薬剤 は酸化可能な基質及びこの基質に特異的なオキシドレダクターゼ系を含有してい るが、後者の系は過酸化水素を水性環境中酸素存在下で発生させ、しかる後この 過酸化水素は薬剤中に更に含まれているチオシアネートとの反応によりラクトー スペルオキシダーゼの影響下において次亜チオシアネートを生成させる。典型的 態様において、薬剤は酸化可能な基質として例えばグルコースを含有しているが 、これは過酸化水素の形成条件下でグルコースオキシダーゼにより酸化され、し かる後この過酸化水素は例えばチオシアン酸カリウムの形で加えられるチオシア ネート（ＳＣＮ−）と反応して、ラクトペルオキシダーゼにより静菌性の次亜チ オシアネート（ＯＳＣＮ−）を生成させる。

薬剤は虫歯の抑制に用いられることが提案されており、その目的のために静菌活 性自体が有利な効果を発現している。しかしながら、歯肉炎及び歯周症の予防及 び治療用としては殺菌活性は不十分であるが、その理由は歯の隙間及び歯肉ポケ ットにおける細菌プラークが次亜チオシアネートの抑制効力の低下により増殖し 続けるためである。

したがって、次亜チオシアネート形成系は歯肉炎及び歯周症の進行に対して限ら れた効果しか発揮しないと推測され、それによる適正な抑制はほとんど得ること ができない。

歯肉炎及び歯周症の有効な抑制及び治療は、歯の間及び歯肉ポケット中に存在す る細菌を死滅させることによってのみ得ることができる。デキストランの形成を 防止するか又は含まれる細菌を弱化もしくは可能であれば死滅させるかのいずれ かによる上記のプラーク形成抑制方法はいずれも歯の間及び歯肉ポケット中に存 在するプラークに対する適切な実質的効果について何も証明しておらず、一方こ こに言及される本発明の主たる目的は実際には虫歯の抑制にもある。

以上のことから、特に細菌が歯肉炎又は歯周症を引き起こす口内領域において高 細菌死滅率を確保しうる殺菌剤組成物についての必要性が存在する。

驚くべきことに、歯肉炎及び歯周症の発生及び進行の原因をなしていると考えら れるタイプの細菌は、上記したように細胞壁分解酵素リゾチームにより直接溶解 されかつ死滅されることができないものの、次亜チオシアネート（Ｏ５ＣＮ−） で非常に高い程度にまで弱化せしめられな後、上記酵素により破壊され死滅せし められることが、ここに見出されたのであった。

水性環境下でかつ酸素及び酵素用基質の存在下で過酸化水素を生成し７うる少な くとも一種の酵素とペルオキシダーゼ及びチオシアネートとを含有した本発明の 殺菌剤組成物に関してこの認謀を活用しており、本発明の組成物はそれが更にリ ゾチームを含有していることを特徴とする。

本発明の殺菌剤組成物が、例えば歯肉炎又は歯周症の予防又は治療に際し、歯の 隙間及び歯肉ポケット中に適用された場合、過酸化水素形成酵素は酵素用基質と して作用する物質を含んだ食物残渣及び刺激物残渣と接触するようになる。この 場合に過酸化水素のＲ落下においての上記物質の酸化を伴うが、この過酸化水素 は組成物中に含まれているペルオキシダーゼ及び天然ペルオキシダーゼの影響に よりチオシアネートと反応して、その結果次亜チオシアネート（Ｏ５ＣＮ−）を 生成する。この物質は、組成物中に含まれかつ次亜チオシアネートで弱化されて いないならば細菌を分解しえないであろうリゾチームに細菌が感受性をもって殺 されてしまう方法により、存在する望ましくない細菌に対して影響を与える。

本発明による組成物の好ましい態様は、過酸化水素形成酵素がグルコースオキシ ダーゼであることを特徴とする 特に組成物が歯科衛生関係で使用される場合には、口内に存在するスクロース又 はラクトースがグルコースオキシダーゼ用基質として機能するグルコースの形成 下で分解されるように、それは更にインベルターゼ、ラクターゼ又は双方を含有 していることが適切である。これは、過酸化水素の適切な形成、ひいては次亜チ オシアネートの形成のみならず、上記の望ましくない三糖類の除去をも得るため である。

しかしながら、組成物は歯科衛生用に用いられる場合であってもその中に基質を 含有することができ、この場合において過酸化水素の形成は口内に自然に存在し て過酸化水素形成酵素用基質として作用する物質の量によって制限されない。

グルコースオキシダーゼを含有する本発明の組成物が特に創傷治療用に用いられ る場合には、それは更にグルコースオキシダーゼ用基質としてグルコース又はグ ルコース形成用物質混合物を含有しかつグルコースオキシダーゼが活性であるよ うな最小値を超えない水含有量を有していることが好都合である。

細菌を弱化させかつそれらをリゾチームで死滅させるための次亜チオシアネート を生成させる反応は、組成物が例えば血液又はリンパ液の形での水と接触するよ うな場合のみに生じることから、組成物は使用時まで安定である。組成物はグル コースを含有していなくともよいが、しかしながらそのような場合には、それは グルコース含有又は形成剤と一緒に使用される。

本発明の組成物が創傷治療用として用いられる場合には、別の過酸化水素形成酵 素としてそれがアミノ酸オキシダーゼであってもよく、その際に血液及びリンパ 液中に存在するアミノ酸は基質として作用する。

組成物の好ましい態様において、組成物の一成分をなしかつチオシアネート及び 過酸化水素からの次亜チオシアネートの形成を行うペルオキシダーゼはラクトペ ルオキシダーゼ、ミエロペルオキシダーゼ又は西洋ワサビペルオキシダーゼであ り、これら酵素のすべてはＥ、Ｃ。

１．１７．１．７　（ＩＵＰＡＣ）に分類される。

前記のように、具体的な興味は組成物を歯科衛生剤として適用することであって 、本発明は更に口内の微生物叢に影響を与えることなく歯の隙間及び歯肉ポケッ トにおける細菌の選択的高死滅率を確保するうえで特に適した歯科衛生用品に関 する。ちなみに、口内の総微生物叢に与える全般的影響は望ましいものではない 。

本発明の歯科衛生用品は特に歯肉炎及び歯周症予防及び治療用の爪楊枝、デンタ ルフロス（ｔｏｏｔｈ　ｔｈｒｅａｄ）又は小型ブラシの形であり、それらが上 記本発明の組成物で含浸されていることを特徴とする。

例えば爪楊枝への含浸は、それらを過酸化水素形成酵素、ペルオキシダーゼ、チ オシアネート、リゾチーム及び自体公知の酵素用安定化剤の溶液で湿潤させ、し がる後湿潤爪楊枝を例えば凍結乾燥のように乾燥させることによって行うことが できる。

一方、歯磨剤はブラシ、デンタルフロス又は爪楊枝等で歯の隙間及び歯肉ポケッ トに加えられるように適合せしめられた溶液又は懸濁液の形であり、かかる溶液 は好ましくは通常の安定化剤及び保存剤と共に過酸化水素形成酵素、ペルオキシ ダーゼ、チオシアネート及びリゾチームを含有している。

実験により、本発明の組成物の殺菌効果は、含浸爪楊枝によって加えられた組成 物成分が比較的少量であっても顕著な殺菌効果をそれにより与え得るほど十分に 高いことを証明した。

例えば爪楊枝による歯肉炎及び歯周症の治療又は予防のために組成物が歯肉ポケ ット及び歯の隙間に局所的に適用されることがたとえ本発明の具体的特徴であっ ても、本組成物は、その使用は劣った局所用品を提供するにすぎない歯磨剤のよ うな他の歯科衛生剤中でも有利に用いられる。

なお、本発明の組成物は意図した効果を高めるために他の薬剤と組合せることも 明らかに可能である。例えば、ＥＤＴＡは細胞壁中にある量のカルシウム化合物 を含む細菌に対して組成物の効果を高めることができる。

殺菌剤組成物が創傷治療用として用いられる場合には、被覆用物質ｊよそれで含 浸せしめられるか、又は組成物は創傷治癒用粉末成分を構成していてもよい。

殺菌剤組成物がたとえ歯の保護又は創傷治療のためのその使用に関して主にこれ まで記載されてきたとしても、宿主生物にとって寛大であって限定された作用期 間を有しかつ抗生物質使用時のような微生物耐性株出現の危険性を伴わない有効 な殺菌活性が望まれる場合であれば、主として組成物は他のケースでも一般的に 適用可能である。この点に関し、本発明の組成物はかかる酵素の使用により製造 されることが強調されるが、そのすべてが食物間使用に承認されている。

問題の殺菌剤組成物の成分間の量的比率は、広範囲で変更可能である。個々の成 分が無毒性であると考えられねばならないという事実から、過剰用量が不利な副 作用を引き起こすという危険性はなく、これは特に、生成する次亜チオンアネー トの最大量が口内の関係箇所に残留する食物及び刺激物残渣の量によって決定さ れるような過酸化水素生成酵素用の基質を内部に含有していない歯科衛生剤にあ てはまる。

有効性が立証された本発明の様々な製品の量的組成は、下記例から明らかになる であろう。

例中で使用される酵素及びその量単位について更に特徴付けるため、以下に留意 されねばならない。

ラクターゼ；β−ガラクトシダーゼ（Ｅ、Ｃ，３，２゜１．２３）は、２０℃か つｐＨ６，５で５．０％ラクトース６ｍｌからグルコースｌｌｌ１ｇを１分間で 生成する酵素量として定義される単位り、Ｕ、（ラクトース単位。

Ｌａｃｔｏｓｅ　Ｌｌｎｉｔ）で示されている。

インベルターゼ：β−フルクトフラノシダーゼ（Ｅ、Ｃ。

３．２．１．２６）は、２０℃かつｐＨ４，７で５．４％スクロース６ｍｌから 転化糖１ｍｇを５分間で生成する酵素量として定義されるＳ、Ｕ、（サムデ一単 位。

Ｓｕｍｎｅｒ　ｔｌｎｊｔ）で示されている。

グルコースオキシダーゼはＥ、Ｃ，１，１，３，４，に分類され、ジャーナル・ アグリカルチュラル・アンド・フード・ケミストリー （Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ’　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　ａｎｄ　ＦｏｏｄＣｈ ｅｌＩｉｓｔｒｙ）、第１５３巻、第１号。

第７２７頁、１９５３年においてデー・スコツト（Ｄ、５ｃｏｔＬ）により定義 された単位ＧＯＵ　（グルコースオキシダーゼ単位。

ｇｌｕｃｏｓｅ　ｏｘｉｄａｓｅ　ｕｎｉｔ）で示されている。

ラクトペルオキシダーゼはＥ、Ｃ，１，１７，１，７゜に分類され、反応Ｈ２Ｏ ２＋５ＣＮ−−Ｈ２０＋０ＳＣＮ−を触媒する機能を問題の組成物中で有してい る。この酵素はジェイーエス・シンドラ−（Ｊ、Ｓ、５ｈｉｎｄｌｅｒ）及びダ ブル・ジー・パーズリ−（Ｖ、Ｇ、Ｂａｒｄｓｌｅｙ）により定義されたＡＢＴ Ｓ単位で示されている：　〔バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサ ーチ串コミュニケーションズ（ＢｉｏｃｈｅｔｓｉｃａＩ　ａｎｄ　Ｂｊｏｐｈ ｙｓｊｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈ　Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ）　、第６７巻 。

第１３０７頁、１９７５年〕 リゾチームはムラミダーゼとも呼ばれるＮ−アセチルムラミルヒドロラーゼ（Ｅ 、Ｃ，３，２，１゜１７）である。この酵素は細胞壁からＮ−アセチルグルコサ ミン及びＮ−アセチルムラミン酸を分解させる。リゾチーム活性はミクロコツカ ス・リソジエチクス （Ｍｆｃｒｏｃｏｃｃｕｓ　Ｉｙｓｏｄｉｅｔｊｃｕｓ）の溶解によって測定さ れる。しかしながら、明確な活性標準は測定が困難であることから、使用リゾチ ーム量は下記例において絶対値で示されている。使用される物質は純度９９％で あって、卵白から抽出された。

例１ １ｍ１につき下記成分を含有する溶液を、ｐＨ６，０のＮ　ａ　ＨＰ　０４／　 Ｎ　ａ　Ｈ２Ｐ　０４１０〜２００ｍＭ含有水性緩衝液中で製造した： インベルターゼ　９００　ＳＵ グルコースオキシダーゼ　４５　ＧＯＵＮａＳＣＮ　０．０５ｍｍｏｌ ラクトペルオキシダーゼ　２８　ＡＢＴＳ単位リゾチーム　０．０３ｇ ＥＤＴＡナトリウム　０．０５ｍｍｏｌこのようにして得ら卦だ組成物の殺菌効 果を試験するために、基質存在下でストレプトコッカス、ラクトバチルス、バク テロイデス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）　、フラボバクテリウム及びフッバクテ リウム（ＦｕｓｏｂａｃｔｅｒｊｕｌＮ）属の様々な微生物を好ましい増殖培地 中で別々に培養した。微生物が１０〜１０７細胞／ｍｌの細胞密度で平衡的増殖 するようになった時点で、上記溶液を５０〜２００μｌ／１０ｍ１培養物の量で 培養物に加えた。同時に、最終的に０ＳＣＮ−を生じる反応を開始させるために スクロースを０．　１〜１９６の量で加えた。

次いで、細菌培養物を２５．３７．４０又は４５℃の温度で３日間インキュベー トしたが、その間培養物を毎日検査した。

いずれのケースにおいても細菌の増殖は増殖培養物１０ｍ１につき溶液５０μｍ のみの添加で停止することが判明した。

例２ １ｍ１につき下記成分含有する溶液を、ｐＨ６，０のリン酸緩衝液中で製造した ： インベルターゼ　９００　ＳＵ グルコースオキシダーゼ　４５　ＧＯＵＮａＳＣＮ　Ｏ，０５ｍｍｏｌ ラクトペルオキシダーゼ　２８　ＡＢＴＳ単位リゾチーム　０．０３ｇ マンニトール　０．０２ｇ ＥＤＴＡナトリウム　０．０５ｍｍｏｌ爪揚技の刺爪楊枝をこの溶液に浸漬し、 溶液５〜７μｍを各爪楊枝に付着させた。

次いで、爪楊枝を凍結乾燥させた。

こうして含浸された爪楊枝の殺菌効果を試験するために、ストレプトコツカス属 及びラクトバチルス属の異なる株の細菌１０５個を寒天プレート上でインキュベ ートした。本発明の組成物で含浸された爪楊枝をスクロース含有寒天プレート中 に押し倒し、しかる後６日間インキュベートしたが、増殖は毎日観察した。試験 は２５℃、４０℃及び特に３７℃でのインキュベートにより実施した。透明ゾー ンが爪楊枝の周囲で形成されたが、爪楊枝から５〜１５ｍｍの領域では全く細菌 増殖がなかった。

この透明ゾーンの大きさは、使用された細菌の種類に依存していた。いずれの場 合においても、６日間の増殖後でさえ細菌コロニーは透明ゾーン内で観察されな かったが、このことはこのゾーンにおける細菌が生理学的に弱化したばかりでは なくて死滅せしめられたことを意味している。

試験は、爪楊枝が２０℃で３か月間気密パッケージ中で貯蔵された後、含浸爪楊 枝の殺菌効果についても実施された。この爪楊枝の殺菌効果は全く不変のままで 維持されていたようであり、したがってこのことは本発明の殺菌剤組成物が実用 に際して十分な貯蔵安定性を有しているという結論を導き出している。

比較目的で、リゾチーム成分のないこと以外は上記と同じ溶液で同様の方法によ り爪楊枝に含浸させた。試験により、寒天プレート上における上記爪楊枝の殺菌 効果に関する結果が得られたが、リゾチーム存在時に得られる効果と比較して著 しく低い殺菌効果を示していた。

更に比較を行う目的で、酵素及びＮａ５ＣＮのない上記量のリゾチーム及びＥＤ ＴＡの水性緩衝液で爪楊枝に含浸させた。この後者の爪楊枝では、実施された試 験によると、有意の殺菌活性が何ら立証されなかった。

例３ 下記成分含有の含浸デンタルフロス用溶液の調製：インベルターゼ　３００００ 　ＳＵ ラクターゼ　２３０００　ＬＵ グルコースオキシダーゼ　１０００　ＧＯＵＮａＳＣＮ　５ｍｍｏｌ ラクトペルオキシダーゼ　９４０　ＡＢＴＳ単位リゾチーム　１．５ｇ カルボキシメチルセルロース　０．５ｇイノシトール　１．７５ｇ ＥＤＴＡナトリウム　５ｍｍｏｌ Ｎａ２ＨＰＯ４ｐＨ６，５まで 蒸溜水　全量　１００ｍ１まで 例４ 下記成分含有の含浸デンタルフロス用溶液の調製コインベルターゼ　９００００ 　ＳＵ ラクターゼ　７００００　ＬＵ グルコースオキシダーゼ　４５００　ＧＯＵＮａ　ＳＣＮ　５ｍｍｏ　１ ラクトペルオキシダーゼ　９４０　ＡＢＴＳ単位ＥＤＴＡナトリウム　５ｍｍｏ 　ｌ Ｎａ２ＨＰＯ４ｐＨ６，０まで 着色剤及び芳香剤 蒸溜水　全量　１００ｍ１まで 例５ 爪楊枝、デンタルフロス又は小型ブラシか使用直前に浸漬されるための水溶液を 、下記成分から調製した：インベルターゼ　１８００　ＳＵ ラクターゼ　１４００　ＬＵ グルコースオキシダーゼ　８０　ＧＯＵＮａＳＣＮ　Ｏ，１ｍｍｏｌ ｍｍ上ペルオキシダーゼ　５６　ＡＢＴＳ単位リゾチーム　６０ｍｇ グリセロール　２０ｇ ＥＤＴＡ　Ｏ，１ｍｍｏｌ Ｎ　ａ　２　ＨＰ　Ｏ４１）　Ｈ６、０まで着色剤及び芳香剤 蒸溜水　全量　１００ｍ１まで 使用時にかかる溶液は歯肉ポケット及び歯頚部表面において存在する唾液により 約３倍に希釈されるであろうと計算される。組成物中に上記具体値の約１／４ま て含まれる成分の濃度で、所望の静菌活性を得るためには全く十分であろう。

例６ 例５の場合と同様の水溶液を調製したが、但しインベルターゼ、着色剤及び芳香 剤は含有させない。ガーゼ布を溶液で浸漬し、しかる後減圧乾燥させた。得られ た創傷被覆用物質は、創傷治療用粉末にとり普通の成分以外に約２型皿９６のグ ルコースを含有したかかる創傷治療用粉末と併用するために適していた。

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. １．水性環境下でかつ酸素及び酵素用基質の存在下で過酸化水素を生成しうる少 なくとも一種の酵素をペルオキシダーゼ及びチオシアネートと共に含有した殺菌 剤組成物であって、 それが更にリゾチームを含有していることを特徴とする組成物。
2. ２．過酸化水素形成酵素がグルコースオキシダーゼである、請求項１に記載の組 成物。
3. ３．インベルターゼ、ラクターゼ又は双方を更に含有している、特に歯科保護用 の請求項２に記載の組成物。
4. ４．グルコースオキシダーゼ用基質としてグルコース又はグルコース形成用物質 混合物を更に含有しかつグルコースオキシダーゼが活性であるような最小値以下 の水含有量を有している、特に創傷治療用の請求項２に記載の組成物。
5. ５．過酸化水素形成酵素がアミノ酸オキシダーゼである、特に創傷治療用の請求 項１に記載の組成物。
6. ６．ペルオキシダーゼがＥ．Ｃ．１．１７．１．７．に分類されるラクトペルオ キシダーゼ、ミエロペルオキシダーゼ及び西洋ワサビペルオキシダーゼの中から 選択される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
7. ７．特に歯肉炎及び歯周症の抑制及び治療用の爪楊枝、デンタルフロス又は小型 ブラシの形の歯磨用品であって、 それらが請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物で含浸されていることを特 徴とする歯磨用品。
8. ８．特に歯肉炎及び歯周症の抑制及び治療用であってかつ歯の隙間及び歯肉ポケ ットに適用されるために適合せしめられた溶液又は懸濁液の形の歯磨剤であって 、それが請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物の水性溶液であることを特 徴とする歯磨剤。
9. ９．請求項４又は５に記載の組成物で含浸された被覆用物質であることを特徴と する創傷治療用品。
10. １０．請求項４又は５に記載の組成物を含有した創傷治療用粉末であることを特 徴とする創傷治療用品。