JPH02104532A - 免疫変調活性を示す薬剤組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は精漿から抽出した、低分子量（約１０００）の
ペプチド分画を活性成分として含む、免疫変調活性を示
す薬剤組成物に関する。

以下、簡単にＳＰＩと呼ぶこの分画は既に文献に、再構
成系（無細胞）や各種組織の細胞から分離した核におけ
るＲＮＡ及びＤＮＡ合成に抑制作用を示すものとして記
載されている（Ａｒｃｈｉｖｅｓ　　ｏｆ　　Ａｎｄｒ
−ｏｌｏｇｙ　　１９８４．１３．２６１〜２６７）。

さらに治療上、このＳＰＩは白肉症や老化関連疾患の治
療に有効であることが証明されている。

さて驚くべきことに、このＳＰＩが生体外及び生体内に
おいて免疫変調活性、特に免疫抑制活性を示すため、治
療に役立つことが見いだされた。

新薬が免疫系と相互作用して、器官や組織の移植の拒絶
反応を調節し、そしてウィルス性の疾患、自己免疫反応
による疾患やある種の腫よう性疾患を治療するのに十分
な治療手段になることは自明な、強く求められている必
要条件である。

この機能は、ヒトの免疫生成能力系は非常に複雑で、ま
だ十分には解明されていない事実によって阻害されてい
る。現在、２種類の免疫があることが認められている。

（＋）抗体（Ｂ−細胞画分）によって媒介される体液免
疫。

（ｉｉ）特定細胞（Ｔ−細胞画分）によって媒介される
細胞免疫。

腫よう転移における病原性微生物製剤や細胞などの異物
に向けられる抗体及び特定細胞はいずれも生体を有効に
防御する。

ところが、免疫系の複合性は、多重効果、時には対照的
な効果を決定できるコミュニケーションを調節する複雑
な網糸の存在によるものである。この調節機構は生体の
要求に応じて、免疫生成性細胞の分裂又は分化を増進又
は抑制できる可溶性媒介物質を使用することによって免
疫反応を大きく増進又は抑制することができる。この可
溶性媒介物質は調節Ｔ細胞（ヘルパー／サプレッサー）
によって産生ずる。

これから明らかなように、それぞれヘルパー細胞又はサ
プレッサー細胞から誘導される一種類の可溶性媒介物質
を用いると、免疫反応を増進又は抑制することができる
。即ち、これはこのような物質を分離するさいに非常に
重要である。

ＳＰＩ因子の生物学的特性を調べている過程で、この因
子が免疫抑制活性のインデックスである、ヒトのリンパ
球転移に抑制作用を示したことが認められた。既に記載
されている方法（Ｊｏｕｒｎａｌ　　ｏｆ　　Ｉｍｍｕ
−ｎｏｌｏｇｙ　　１９７９．１２２．１６５８〜１６
６２）、即ちプラスチック製の試験管（３０Ｘ１１５ｍ
ｍ）でヘパリンを加えた血液１０　ｍ　ｌをハングの平
衡生理塩水溶液（ＨＢＳＳ）２０ｍｌで希釈して得たヒ
トの単核末梢血球を用いて実験を行った。１５　ｍ　ｌ
のＦｉｃｏｌｌ−Ｕｒｏｖｉｓｏｎグラデイエンドを断
層化してから、試験管を界面で３０分間４００　ｇ　で
遠心分離した。界面から回収した細胞をＨＢＳＳで３回
洗浄し、２゜５ｘｌＯ’細胞／　ｍ　＋の濃度でＨＥＰ
ＥＳ　（２０ｍＭ）、ペニシリン（１００ＩＵ／ｍｌ）
、ストレプトマイシン（１００ｍｃｇ／ｍｌ）及び１０
％のＡＢ血清と共にＲＰＭ１１６４０媒地に懸濁させた
。

丸底の組織培養ミクロプレート上５Ｘ１０’細胞から’
４Ｊ量培養系でにλｆｆＪ、Ｅ、等に従って０．２ｍｃ
ｉの最終濃度（予め投与量：反応曲線から求めた最適以
下の濃度）で高純度のＰ　１４　Ａを用いてリンパ球を
転移させた。調湿雰囲気中３７℃で７２時間培養した細
胞を最後の１６時間で３Ｈ−チミジンにより標識化し、
培養し、そしてシンチレーション計数器で放射能を測定
した。

下記のように精製した、ＳＰＩ因子を異なる投与量で時
間ゼロにおいて培養物に加えた。次の表に示すように、
ＳＰＩ因子は投与量に依存して、リンパ球転移の抑制を
誘導した。

実験中、細胞の成育力及び媒地中の細胞数を測定するこ
とによってＳＰＩの細胞に及ぼす考えられるすべての毒
性作用を調べた。細胞の成育力はすべての媒地で９０％
以上であり、ＳＰＩ含有サンプルの細胞損失は１０％以
下であることが認められたが、ＳＰＩ最大濃度（２４ｍ
　ｃ　ｇ　／媒地）の媒地では僅かであった。

生体外における免疫抑制活性は生体内実験でも確認され
た。

精液因子ＳＰＩによるリンパ球転移の抑制ＳＰＩ投与量
　　ｃｐｍＸｌｏ−’ （ｍ　ｃ　ｇ／媒地） ０．７５　　　３．５±０．２ １．５　　　　３．１±０．　１ ６　　　　　　１．１±０．２ 以上の結果から、この物質は、免疫反応の抑制が必要な
あらゆる病状に臨床的に使用できることがわかる。免疫
反応の抑制が必要な病状には、次のようなものがある。

Ａ、サプレッサー細胞活性の不足 例えば、（ｉ）枯草熱などのＩｇＥによるアレルギー性
疾患、（ｉｉ）白血病や形質細胞腫などのリンパ球クロ
ンの増殖によるある種の悪性疾患。

例えば、全身紅斑性狼そう、リュウマヂ性間接炎や自己
免疫反応による溶血性貧血などのある種の自己免疫反応
による疾患。

Ｃ０器官及び組織の移植 この場合、前記の場合と異なり、免疫反応を正常に戻す
ことが目的ではなく（というのは、免疫反応にとって正
常とは、移植片に対して拒絶反応を示すことであるから
）、免疫反応の移植片に対する悪影響を減らすことによ
って耐性を誘導することが目的である。そのかわり、骨
髄移植の場合には、この物質は移植片対受容体疾病（Ｇ
ＶＨＤ−ｇ　ｒ　ａ　ｆ　ｔｖｅｒｓｕｓ　　ｈｏｓｔ
　　ｄｉｓｅａｓｅ）を抑制する機能を発揮する。

Ｄ、免疫攻撃性を示す、ある種の感染性疾患代表的な症
例は慢性肝炎である。さらに、感染性疾患のなかで、後
天性免疫不全症候群など（Ａ　Ｉ　ＤＳ／ＨＩ　Ｖ）に
効果があると仮説することができる。事実、ＡＩＤＳウ
ィルスはホストのヘルパー細胞に侵入し、これら細胞が
刺激されると、増殖する。ヘルパー細胞の増殖を抑制す
る、本発明物質を投与すると、増殖ウィルスの数が減少
し、循環、即ち他の細胞に侵入して、病状を悪化させる
ウィルスのヘルパー細胞への役人／細胞増殖〜ウィルス
増殖／新ウィルスの発生からなる循環を断ち切る。

考えられる治療法では、ＳＰ！因子は、例えば”Ｒｅｍ
ｉｎｇｔｏｎ’ｓ　　Ｐｈａｒ　−ｍａｃｅｕｔｉｃａ
ｌ　　　５ｃｉｅｎｃｅｓＨａｎｄｂｏｏｋ＠　、Ｈａ
ｃｋ　　　Ｐｕｂ。

ＣＯｌ、ニューヨーク、米国などに記載されている方法
及び処方を用いて調製できる適当な薬剤組成物の形で経
ロ的／非経ロ的に患者に投与するのが有利である。これ
ら製剤の例には、使用前に、場合によっては調節された
放出形態で、適当な溶剤で再構成すべき親液化粉末を含
むカプセル、錠剤、瓶又はアンプルがある。

投与量及び処方は適用ケース及び症状に応じて変わるこ
とは自明である。即ち、原則的には、１回の投与につき
、非経口投与の場合には、ｌ−１０００μｇ　／　ｋ　
ｇ　、そして経口投与の場合には、ｌＯ〜１０００μｇ
　／　ｋ　ｇあれば十分であるが、有効成分のさらに精
製できる可能性やその低い毒性を考えるなら、投与量を
加減できる可能性があるので、このような加減を先験的
に排除してはならない。

ＳＰ！因子は既に記載されているが、以下に、−例とし
て、その抽出及び特性化について述べるが、この実施例
は本発明を限定するものではない。

実施例 ＋２℃、８０００　　ｘ　　ｇで３０分間精液（射精時
から一８０℃で保存した゛）全体を遠心分離して、牛の
精漿を得る。多孔度が５０ｍ未満（カットオフ：１０，
０００ダルトン）のろ過膜により限外ろ過を＋２℃で行
う。

精漿１００　ｍ　ｌに相当する量の親液化限外ろ過液を
最小容量の氷酢酸で抽出してから、＋２℃、９５００　
　ｘ　　ｇで３０分間遠心分離する。ペルオキシダーゼ
を含まない、低温のジエチルニーデル９容量に上澄み液
を一滴づつ、激しく撹はんしながら混合する。形成した
析出物をブラフネル漏斗で低温のエチルエーテルを用い
て十分洗浄し、ポンプ乾燥し、そして親液化する。次に
上記と同じ条件で、酢酸で抽出し、ジエチルエーテルで
析出し、析出物をエーテル洗浄し、真空蒸発し、水で可
溶化し、そして親液化する。

このようにして得られた原料物質を小容量可溶化し、酢
酸０．１Ｍ用いるセファデックス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ）
Ｇ　−１５（φ２．６Ｘ１００ｃｍのカラム、流量：６
０ｍ１／時間）でゲルろ過することによって分離する。

空容量のカラムの１．６〜１．９倍のカラムから溶離し
た、酸性分画は高いＤＮＡ及びＲＮＡ合成を抑制する活
性を示す。

親液化及び中性化後、酢酸０．１Ｍで平衡化したパイオ
ーゲル（Ｂｉｏ−Ｇｅｌ）Ｐ　−２（φ１゜６Ｘ１１０
ｃｍのカラム、流量：２２ｍ１／時間）でゲルろ過して
、この分画を分離する。この遅延分画はほぼすべての抑
制作用を示す。

親液化後、４％酢酸かｐＨ２のトリフルオロ酢酸を用い
るリクロソルブ（Ｌｉｃｈｒｏｓｏｒｂ）ＲＰ−１８力
ラムＣ７μｍ、１０Ｘ２５０　（ｈ）ＩＩｍ）で高性能
液体クロマトグラフィーによって活性分画をさらに精製
する。

酸性の遅延分画は報告された試験において活性を示す。

この分画は、セファデックスＧ−１０（φ１．８Ｘ１８
０ｃｍのカラム、流量：４０ｍ１／時間）で水を用いて
さらに精製することができる。

得られた分画の特性は次の通りである。

アミノ酸残基：末端がＮのピログルタミン酸、アラニン
（第ニアミノ 酸？）、グルタミン酸又は グルタミン、アスパラギン 酸又はアスパラギン（末端 Ｃ？）、セリン、グリシン、 トレオニン。

この分画は生体外において、ＤＮＡ重合及びＲＮＡ転移
を抑制する。

この分画はＤＮＡ二重螺旋を結合し、安定化する。

この分画は耐熱性及び耐酸変性である。

この分画はトリプシンに対して耐性である。

この分画はプロナーゼ及びピログルタミン酸アミノペプ
チダーゼに対して感受性を示す。

代１ノ、４９理士高野武和賀

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. （１）精漿から抽出した、低分子量のペプチド分画を有
   効成分として含む、免疫変調活性を示す組成物。
2. （２）経口投与又は非経口投与に好適な、特許請求の範
   囲第１項に記載の薬剤組成物。
3. （３）活性成分１〜１０００μｇ／ｋｇの投与量で投与
   するのに好適な、特許請求の範囲第１項又は第２項に記
   載の組成物。
4. （４）精漿から抽出した、低分子量のペプチド分画を使
   用して製造した、免疫変調活性を示す薬剤。